Trypanosoma cruzi, agente causador da Doença de Chagas, é um protozoário intracelular obrigatório. Vários estudos foram realizados visando a caracterização de moléculas de 85-90 kDa, presentes na superfície do parasita bem como de seus possíveis receptores nas células do hospedeiro vertebrado. Um membro da superfamília das gp85/trans-sialidases (Tc85-11), expresso somente na superfície das formas intectivas tripomastigotas e que adere em laminina e em células, foi clonado e caracterizado em nosso laboratório. Peptídeo J, fragmento de Tc85-11 não implicado em adesão a laminina, que contém o motivo conservado na superfamília, com seqüência VTVXNVFLYNR, aqui denominado \"domínio FLY\", foi identificado como sendo responsável pela adesão da porção carboxi-terminal da proteína em células epiteliais e, adicionado ao meio de cultura, promoveu aumento do número de células infectadas por T.cruzi. Seu receptor foi descrito como CK18 (Magdesian et al., 2001). Dando continuidade a esse estudo, em nosso laboratório caracterizamos a porção amino-terminal de CK18 como a região da interação com \"domínio FLY\" e identificamos o provável sítio de ligação, localizado entre os 15 aminoácidos iniciais da proteína. Adicionalmente, com o intuito de determinar a função do \"domínio FLY\", caracterizamos o peptídeo J como molécula extremamente adesiva, interagindo com a superfície de células epiteliais, matriz extracelular e promovendo interação entre tripomastigotas e ECM, possivelmente por meio de interações hidrofóbicas não dependentes de sua estrutura tridimensional adotada na proteína nativa. \"Domínio FLY\" foi caracterizado, ainda, como possível modulador da infecção por tripomastigotas já que, da mesma forma que estimula a invasão quando adicionado ao meio de cultura (Magdesian et al., 2001), promove secreção de proteínas imunorelacionadas com CK18 e ligantes de proteína A para o sobrenadante celular. Esse sobrenadante é capaz de in vitro inibir o processo infectivo do parasita em cerca de 40%. / Trypanosoma cruzi the causative agent of Chagas´ disease is an obligatory intracellular parasite in the mammalian host. Altrough the mechanism of trypomastigotes invasion of host cells has been intensively studied, a final and integrate picture of the process remains elusive. Members of the gp85/trans-sialidase superfamily have been implicated in the parasite-host interaction, with Tc85 family (85 kDa glycoproteins) implicated in the adhesion step. Our laboratory showed that Tc85-11, one member of Tc85 family, is a multi-adhesive molecule, with binding sites located at the amino- and carboxi-portions of the protein. The conserved \"FLY domain\" (peptide J) is present in all members of the family, binds to cytokeratin 18 (CK18) and enhances T. cruzi invasion (Magdesian et al., 2001). Herein, we localized the binding site of \"FLY domain\" on the amino-portion of CK18 and demonstrated an increase of trypomastigotes adhesion to extracellular matrix upon FLY treatment. The \"FLY domain\" can modulate T. cruzi infection in vitro and apparently is responsible for inducing the secretion of molecules by the host that inhibit trypomastigote invasion.

A modulação das respostas imunológicas frente à administração de substâncias farmacologicamente ativas em modelos experimentais infectados por Trypanossoma cruzi tem contribuído de maneira importante nas investigações de novas terapias para a doença de Chagas. O presente estudo teve como objetivo avaliar um possível efeito sinérgico imunoestimulatório subseqüente à administração de sulfato de zinco e DHEA durante o curso da infecção. O DHEA tem sido amplamente estudado e possui ação comprovada no direcionamento da resposta imune Th1, sendo muito efetivo para diferentes patógenos tais como vírus, bactérias e protozoários. O zinco é considerado um oligoelemento de extrema importância para a manutenção das funções imunes. Age como um inibidor da apoptose celular além de coordenar a seleção fisiológica de células intra-tímicas. Durante a fase aguda da infecção, zinco e DHEA apresentaram atividade estimulatória sobre a imunidade do hospedeiro, potencializando a resposta imune gerada contra o parasita. Comprovamos também a ação sinérgica de DHEA e zinco, através dos parâmetros analisados tais como parasitemia sangüínea e tecidual, além de fatores imunológicos como aumento nas concentrações de NO, IFN-?, IL-12, e número de macrófagos. Este efeito imuno-modulador durante a fase aguda da infecção chagásica pode contribuir para a prevenção dos danos teciduais observados na fase crônica da doença. / The modulation of the immune responses as well as the administration of pharmacologically active substances in infected T. cruzi experimental models has contributed to important investigations of new therapies in the treatment of Chagas\' disease. However, the use of antiparasitary drugs in the chronic indeterminate or in the cardiac chronic phases of Chagas disease is still a controversial issue. This study has as objectives to evaluate a possible synergic immunostimulatory effect after the administration of zinc and DHEA during the course of the infection. A bulk of evidences has been presented confirming the effectiveness action of DHEA on the Th1 immune response against a wide range of pathogens such like viruses, bacteria and protozoans. Zinc is considered an oligoelement of essential importance in the maintenance of the immune functions, as well as inhibiting cell apoptosis besides the function of coordinate the physiological selection of thymic T cells. During the acute phase of infection, zinc and DHEA displayed enhanced stimulatory activity on host\'s immune response. A synergistic action of zinc and DHEA was also observed through the evaluations of distinct parameters such as blood and tissue parasitism, number of macrophages and NO levels as well as elevated concentrations of some immunological interleukins such as IFN-? and IL-12. This work also demonstrates that the enhanced immunostimulatory effect observed during the acute phase certainly contributes in the prevention of tissue damage that normally occurs during the late chronic phase.

A Doença de Chagas é uma protozoose causada pelo parasita hemoflagelado Trypanosoma cruzi. Classificada pela Organização Mundial de Saúde como extremante negligenciada, essa doença é endêmica em 21 países da América Latina, entretanto podem ser encontrados, ainda, casos nos EUA, Canadá, Europa e Japão devido a movimentos migratórios. Segundo estimativa da Organização Mundial da Saúde, no ano de 2012 havia de 8 a 10 milhões de pessoas infectadas mundialmente e cerca de 25 milhões de pessoas sob risco de contrair a doença de Chagas, ainda sim, havia a ocorrência de 56 mil novos casos da doença e cerca de 12 mil mortes por ano, recorrente de complicações da doença. Diante destes números, essa parasitose se apresenta com um sério problema de saúde pública mundial. A terapêutica antichagásica disponível apresenta apenas dois fármacos o Nifurtimox e o Benznidazol, que atuam somente na fase aguda da doença e provocam sérios efeitos adversos, sendo necessária a busca por novos fármacos eficazes contra o parasita. Os métodos modernos de planejamento de fármacos antiparasitários envolvem a seleção de vias metabólicas específicas a serem bloqueadas, nesse contexto se encontram diferentes proteases, enzimas envolvidas em processos essenciais para a sobrevivência do parasita, entre elas a cruzaína, principal cisteíno-protease do T. cruzi, a qual é responsável pela sobrevivência, replicação celular e invasão do parasita à célula hospedeira, se apresentando como um excelente alvo bioquímico na pesquisa de novos agentes antichagásicos. Partindo do estudo do nitrofural (5-nitro-2-furfurilidenossemicarbazona), antibacteriano também conhecido por sua ação inibitória da cruzaína, adotamos-o como protótipo na pesquisa de fármaco contra a doença. No presente trabalho, utilizou-se o bioisosterismo como estratégia de modificação molecular no planejamento de compostos antichagásicos, inibidores da cruzaína. Foram sintetizados 27 derivados sulfonil-hidrazônicos, para os quais foi determinada a pureza por CLAE e caracterizados por faixa de fusão, espectroscopia no UV e RMN 1H e RMN 13C. Os compostos sintetizados foram avaliados frente às formas celulares epimastigota do T. cruzi, apresentando atividade inibitória de crescimento celular entre 20 e 100% a 100 µM. Nos ensaios frente a cruzaína, os derivados nitrados se mostraram ativos com IC50 em torno de 100 µM. Visto os resultados, podemos sugerir que o grupo nitro presente em alguns compostos pode ser o responsável pela atividade tripanomicida. Face a indicação de toxicidade do grupo nitro, os derivados não nitrados, Ie, IIf e IIIe, podem ser considerados promissores, visto sua atividade intermediária como tripanomicida, entre 45 e 60% à 100 µM, sendo que o composto IIf também apresentou atividade inibidora da cruzaína, 23,4% à 100 µM, podendo assim serem utilizados como ponto de partida na busca de eficazes agentes antichagásicos. / Chagas disease, a protozoonosis caused by the hemoflagellate parasite Trypanosoma cruzi, is classified as an extremely neglected disease by World Health Organization. It is an endemic disease in 21 countries on Latin America and cases in the USA, Canada, Europe and Japan were also reported as a consequence of migratory activity. In the last five years, it is estimated that around 8 to 10 million people worldwide were affect by this disease, with nearly 12,000 deaths due to disease complications and approximately 25 million people being at risk of contracting it. Chagas disease is therefore a worldwide public health problem. There are only two available antichagasic therapeutic drugs, nifurtimox and benznidazol, which act only in the acute phase of the disease and cause serious adverse effects, making it necessary to search novel, more effective drugs against this parasite. The newer methods of antiparasitic drug design involve the selection of specific metabolic pathways to be blocked. Many proteases, enzymes involved in essential processes to the survival of the parasite, such as cruzain, are thought of as potential therapeutic targets. Cruzain, the major cysteine protease of T. cruzi, is responsible for cellular replication, survival and invasion of the host cell, being an excellent biochemical target for the drug discovery of new antichagasic agents. Starting from the knowledge of nitrofural (5-nitro-2-furaldehyde semicarbazone) as an antibacterial agent and as a known cruzain inhibitor, we used it as a template for the search of new drugs against Chagas disease. In the present work, bioisosteric modifications were used as a strategy to design new compounds as potential cruzain inhibitors. 27 sulfonilhydrazones derivatives were synthesized, had their purity assessed by HPLC and were characterized through their melting point, UV spectroscopy and NMR 1H and 13C. The synthesized compounds were evaluated against epimastigote strains of T. cruzi, showing inhibitory activity on cellular growth between 20 and 100% at 100 µM. In the cruzain enzymatic assays, the nitro derivatives showed activity around 50% of inhibition at 100 µM, and IC50 around 100 µM. By the results, we can suggest that the presence of the nitro group in some compounds should be responsible for triponocidal activity. Given the known toxicity of nitro compounds, the derivatives without the nitro goup, Ie, IIf and IIIe, may be considered promising given their intermediate inhibitory activity on cruzain, among 45% and 60% at 100 µM. The coumpound IIf also showed 23,4% inhibitory activity at 100 µM. Therefore, these compounds could be employed as starting points on the search of new effective antichagasic agents.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-08-12T12:09:18Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Mestrado Lucianna PPGIT (Biblioteca).pdf: 1648880 bytes, checksum: 302834b98cb331c5e4d57aefa0fd3ce9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-12T12:09:18Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Dissertação Mestrado Lucianna PPGIT (Biblioteca).pdf: 1648880 bytes, checksum: 302834b98cb331c5e4d57aefa0fd3ce9 (MD5) Previous issue date: 2015-02-26 / FACEPE / A doença de Chagas, causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi, é uma infecção parasitária sistêmica, que afeta cerca de 10 milhões de pessoas e causa, em média, cerca de 14.000 mortes por ano, além da estimativa de que 25 milhões de pessoas estão em risco de adquirir a doença. No Brasil, o Benznidazol (BZD) é o único fármaco utilizado para o tratamento durante a fase aguda, enquanto que, durante a fase crônica da doença, o mesmo mostra-se com atividade limitada. Dessa forma, o desenvolvimento de fármacos para o tratamento da doença de Chagas se faz necessário. Sabendo-se que o T. cruzi é susceptível às tiossemicarbazonas e seus bioisósteros, essas classes de compostos têm se mostrado promissoras para o desenvolvimento de drogas tripanocidas. Baseado em relatos na literatura de potentes tiossemicarbazonas tripanocidas, elegeu-se o composto protótipo (Composto 1i - página 21) deste trabalho, onde planejou-se por meio da estratégia de bioisosterismo, a síntese de inéditas aril-4-tiazolinonas, no intuito de obter compostos mais potentes e menos tóxicos. Além disso, de estabelecer a relação estrutura-atividade anti-T. cruzi, através da inserção de substituintes diversos nas posições N3 e C5 do anel heterociclo. Os compostos foram obtidos em duas etapas, sendo a primeira a obtenção das tiossemicarbazonas (Int 1-3), com rendimentos que variaram de 68% a 81%, e a segunda etapa, a reação destas (Int 1-3) com ésteres e ácidos halogenados para obtenção dos compostos cíclicos (LR 01-18) os quais apresentaram rendimentos de 23% a 97%. Todas as moléculas foram caracterizadas quimicamente por Ressonância Magnética Nuclear de Prótons (¹H-RMN) e Carbono (¹³CRMN) e Infravermelho (IV). A atividade tripanocida foi determinada em amastigostas e tripomastigotas da cepa Tulahuen e a toxicidade foi estimada em fibroblastos L929. Após realização dos ensaios biológicos, foi possível identificar os compostos LR-05, LR-07 e LR- 08 como agentes tripanocidas com potência superior ao BZD (21.90 μM), com valores de 13.27 μM, 12.20 μM e 2.46 μM, respectivamente. O composto LR-08 foi cerca de nove vezes mais potente que o BZD e possui como característica estrutural uma metila em N3 e outra metila em C5. Constatou-se que a funcionalização da tiossemicarbazona em tiazolinona foi benéfica, resultando em três compostos mais ativos (LR-07, LR-08 e LR-16) que os seus intermediários (Int 2-3). De maneira geral, foi possível identificar tiazolinonas mais ativas, para às formas evolutivas tripomastigota e amastigota, quando comparado ao BZD. / Chagas disease, caused by Trypanosoma cruzi protozoan, is a systemic parasitic infection that affects about 10 million people and causes on average about 14,000 deaths for year in addition to the estimated 25 million people are at risk acquiring the disease. In Brazil, Benznidazole (BZD) is the only drug used for the treatment during the acute phase, whereas during the chronic phase of the disease, shows the same with limited activity. Thus, the development of drugs for the treatment of Chagas disease is required. Knowing that the Trypanosoma cruzi is susceptible to thiosemicarbazone and its bioisosters, these classes of compounds have shown promise for the development of trypanocidal drugs. Based on reports in the powerful thiosemicarbazones trypanocides literature, was elected the prototype compound (Compound 1i - page 21) of this work, which was planned by bioisosterism strategy, the synthesis of aryl-4-thiazolinones unpublished, in order to more potent and less toxic compounds. Furthermore, to establish the relation structure-anti-T activity. cruzi, by inserting in the various substituents N3 and C5 positions of the heterocycle ring. The compounds were obtained in two steps, the first being the obtaining of thiosemicarbazone (Int 1-3), with yields ranging from 68% to 81% and the second step, the reaction of these (Int 1-3) with esters and halogenated acids to obtain the cyclic compound (LR 01-18) showed that yields of 23% to 97%. All molecules were chemically characterized by Proton Nuclear Magnetic Resonance (¹H-NMR) and carbon (¹³C-NMR) and Infrared (IR). The trypanocidal activity was determined in amastigostas and trypomastigotes of the Tulahuen strain and toxicity was estimated in L929 fibroblasts. After performing biological assays it was possible to identify compounds LR-05, LR-07 and LR-08 as trypanocidal agents with superior power to BZD (21.90 mM), with values of 13.27 uM, 12.20 uM and 2.46 uM, respectively. The LR- 08 compound was about nine times more potent than the BZD and has as structural feature in one methyl and one methyl N3 C5. It was found that functionalization of thiosemicarbazone was beneficial in thiazolinone, resulting in three more active compounds (LR-07, LR-08 and LR-16) their intermediaries (Int 2-3). In general, it was possible to identify more active thiazolinones to the amastigote and trypomastigote forms evolutionary compared to the BZD.

Orientador: Sergio de Albuquerque / Tese (doutorado) - Universidade de Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T01:42:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GoncalvesNeto_JanainaFernanda_D.pdf: 2661740 bytes, checksum: bc0d1d7738531b1803d33f5dc69032d4 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Dados da literatura relataram a importância da suplementação ou da ausência de determinados micronutrientes no comportamento de uma infecção. Assim como, durante a gestação, a concentração de Zinco (Zn) no plasma materno diminui devido a diversas alterações fisiológicas, aumento da absorção e transferência fetal. Entretanto, a avaliação da suplementação de micronutrientes durante a infecção chagásica pouco tem sido discutida. Diante dos benefícios proporcionados por meio da suplementação de Zn sobre algumas doenças infecciosas e durante a gestação, foram objetivos do presente trabalho: determinar as concentrações plasmáticas e teciduais de Zn, avaliar os efeitos da suplementação desse micronutriente durante a gestação de camundongos infectados por Trypanosoma cruzi e os efeitos in vitro em cultura de células. Foram utilizados camundongos Swiss prenhas e não prenhas, infectadas com duas cepas distintas de T. cruzi. Esses animais foram suplementados com 20mg/Kg de sulfato de zinco durante 7 dias (cepa Y) e 14 dias (cepa Bolívia). Após a suplementação diversos parâmetros foram avaliados: parasitemia, peso materno, peso e tamanho dos fetos, desenvolvimento dos filhotes após o nascimento, as concentrações plasmáticas e teciduais de Zn, taxa de mortalidade, aspectos histopatológicos e os efeitos in vitro em cultura de células. De acordo com os resultados obtidos, foi observado que as fêmeas infectadas que receberam suplementação de Zn apresentaram redução da parasitemia; não alterou o peso das fêmeas, da prole, das placentas; não alterou o comprimento dos fetos e dos neonatos, o peso dos neonatos e a taxa de mortalidade. Histologicamente, a suplementação diminuiu a quantidade de ninhos nos tecidos avaliados de fêmeas infectadas com a cepa Bolívia e diminuiu a quantidade de infiltrados inflamatórios. A dosagem de zinco plasmático e tecidual demonstrou que a suplementação aumentou a concentração de zinco no plasma e nos tecidos dos animais infectados. Em relação à avaliação in vitro do Sulfato de Zinco, foi verificado que as concentrações utilizadas foram citotóxicas, porém apresentaram potencial tripanocida sobre as formas intracelulares de T. cruzi. Sendo assim, a suplementação de zinco durante a prenhez em camundongos infectados com T. cruzi, proporcionou resultados benéficos na concentração plasmática, desta forma, melhorando o desenvolvimento fetal e auxiliando no controle da carga parasitária / Abstract: A bulk of information concerning the relevance of supplementation and absence of certain nutrients in the modulation of the infection is available in the literature. Several physiological alterations can severely compromise plasmatic zinc levels during gestation, which is characterized by low zinc levels due to enhanced absorption of micronutrients and fetal transference. The benefits of zinc supplementation during the course of infectious diseases and during pregnancy are well known facts. Few data can be found concerning the effects of zinc supplementation during chagasic infection. The objectives of this work were to evaluate the plasmatic and tecidual concentration of zinc, the possible beneficial effects of zinc supplementation in pregnant and infected Mus musculus not only regarding to control maternal parasite levels but also to reduce fetal damage, and to evaluate the in vitro effects in cell culture. Pregnant and non pregnant Swiss mice were i.p. infected with two different T. cruzi strains (Bolivia and Y strains). Animals were daily supplied with 20mg/Kg of zinc sulphate during 7 days for Y strain and 14 days for Bolívia. Several parameters were evaluated: parasitemia, maternal weight, fetal size and weight, development of the litter after birth, plasmatic and tecidual concentration of Zn, mortality rate, hystopathology, and the effects of Zn supplementation on cell culture. Pregnant and infected females supplemented with Zn displayed reduced parasitemia, did not enhance body weight, bigger litters and placental size and weight. The presence of this micronutrient did not alter the length of fetuses and neonates, as well its weight and mortality rate. The hystopathological observation for Bolivia strain, showed reduced number of amastigote burdens in all evaluated organs and low inflammatory infiltrate. Plasmatic and tecidual zinc concentration were elevated in all animals supplemented with zinc. The in vitro observations of T. cruzi amastigote forms in the presence of zinc sulphate revealed a potential tripanocidal effect but also a citotoxic effect on cell culture. We concluded that zinc supplementation during pregnancy of infected mice in some way triggered a stimulatory immune modulation, leading to a better fetal development, reduced mortality rate and control of blood and tecidual parasite burdens / Doutorado / Protozoologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Sergio de Albuquerque / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T18:20:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fonseca_Colete_D.pdf: 8963134 bytes, checksum: 5c87b9a9e775419f00846bbde3c8c3b3 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Estudos histopatológicos e funcionais tem demonstrado inúmeras alterações teciduais em diferentes órgãos promovidas pelas infecções causadas por T. cruzi. Essas alterações estão associadas direta ou indiretamente às características morfológicas das cepas, como formas finas e largas existentes entre as diferentes sub-populações, bem como à interação parasita-hospedeiro. As cepas possuem capacidade de determinar lesões e tropismo tissular diferenciado. Sendo assim, o trabalho em questão teve como objetivo verificar as alterações morfológicas, morfométricas e bioquímicas desencadeadas pelo parasitismo nos tecidos de machos e fêmeas de Mus musculus infectados com 2 x104 formas tripomastigotas da cepa MC de T. cruzi, isolada de Cerdocyon thousazarae por RIBEIRO e BARRETO, 1968. Para a realização desse trabalho, utilizou-se quatro grupos: controle (macho e fêmea) e infectados (macho e fêmea). No pico parasitêmico, ocorrido no 10° dia pós-infecção, foi colhido o sangue desses animais para a análise dos parâmetros bioquímicos (glicose, uréia, creatinina, aspartato-transaminase-TGO, alanina-transaminase-TGP e glutamiltransferase-GGT) e em seguida, esses animais foram mortos e seus órgãos coletados e preparados para a análise histopatológica. Dos resultados obtidos, os parâmetros bioquímicos mostraram alterações dos níveis de glicose no plasma, caracterizando uma hipoglicemia mais acentuada nos machos do que nas fêmeas infectadas com relação aos grupos controle. Valores aumentados de uréia e creatinina foram significativos somente para os machos infectados. Com relação ao TGO, TGP e GGT, valores aumentados também foram observados nos grupos infectados, onde os machos apresentaram maiores níveis desses parâmetros. Essas alterações estão, provavelmente, associadas a parasitemia, a qual foi maior nos machos do que nas fêmeas. O mesmo foi observado com relação à análise histológica e histométrica dos animais infectados. Os machos apresentaram maior parasitismo tecidual e alterações nos valores médios dos parâmetros nucleares quando comparado com o grupo das fêmeas infectadas. Diante desses resultados foi possível concluir que a cepa MC de T. cruzi apresentou características morfológicas intermediárias, evidenciando um tropismo mais acentuado para musculatura cardíaca, fígado e baço, dentre os órgãos avaliados. Sendo assim, as alterações dos parâmetros bioquímicos e histopatológicas observadas possivelmente estão relacionadas com o dimorfismo sexual e características inerentes da cepa em questão / Abstract: Several tecidual alterations have been observed through hystopathological and functional studies in organs, from distinct experimental models infected with different strains of Trypanosma cruzi. Peculiar tecidual tropism, as well as, the ability to cause characteristic lesions in different organs are linked to the type of T. cruzi strains, which are responsible for the wide range of alterations showed during the development of Chagas'disease. The objectives of this work was to verify the morphological and morphometrical alterations, and some biochemical parameters (glucosis, urea, creatinin, aspartate-transaminase-TGO, alanine-transaminase- TGP and glutamiltransferase ¿ GGT). Male and female Mus musculus were infected with 2 x 104 blood trypomastigotes of the MC strain of T.cruzi isolated from Cerdocyon thousazarae (Ribeiro e Barreto, 1968). Animals were divided in four groups: infected males and females and control males and females. On the day of the peak of parasitemia (10° day after infection) animals were killed, blood was collected by heart punch and organs were harvested. Reduced levels of glucosis were observed in both infected groups, with an enhanced drop for infected males in comparison with infected females. Elevated levels of urea and creatinine were found only in infected males. Concerning to TGO, TGP and GGT, infected males also displayed higher serum values when compared to infected females. The hystopathological and histometrical analysis of the organs from infected animals revealed an enhanced tecidual parasitism for males, with bigger amastigote burdens, as well as its nuclear parameters. According to these data we conclude that MC strain of T.cruzi displays an intermediate morphological profile with an accentuated tropism for heart, liver and spleen tissues among all other studied organs. The hystopathological and biochemical data here presented indicate that, the intrinsic features of this strain are directly associated with sexual dimorphism in which steroid hormones certainly play a major role in directing the host's immune response towards a more effective resistance of females to infection / Doutorado / Parasitologia / Doutor em Parasitologia

Orientador: Sergio de Albuquerque / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T20:18:22Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Burgos_ValdeliceOliveira_D.pdf: 11304585 bytes, checksum: 032afa1c33cbed6073d88d23bc7f4788 (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: A avaliação fisiológica dos hospedeiros infectados pelo Trypanosoma cruzi sugere um desequilíbrio homeostático. A infecção pode estar relacionadas com a cepa, morfologia e inóculo do agente infectante ou mesmo fatores inerentes ao hospedeiro vertebrado, como características imunológicas, genéticas, nutricionais e ainda hormonais. Este trabalho teve como objetivo analisar duas cepas RAL e RC de T. cruzi verificando a patologia com a mesma linhagem genética o Linhagem 1. Os animais experimentais foram os camundongos Balb/c; infectados com 2 x 104 formas tripomastigotas das duas cepas. A cepa RAL foi originalmente isolada de triatomíneo Triatoma infestans, proveniente de Santa Rosa do Viterbo ¿ SP e a cepa RC isolada a partir da infecção natural do cachorro-do-mato Cerdocyon thous azarae, capturado na cidade de Cássia dos Coqueiros, no Estado de São Paulo. Para a avaliação bioquímica e histopatológica foram inoculados o protozoário T. cruzi em camundongos fêmeas e machos coletando-se o sangue e retirando-se o pâncreas e fígado nos respectivos dias 1.º (grupo controle), 6.º, 9.º, 12.º e 14.º. Após a inoculação foram analisados: peso, parasitemia, glicose, fosfatase alcalina, proteínas totais, uréia, creatinina, aspartato-transaminase (AST ou TGO), colesterol e triglicerídeos. Houve diminuição do peso, variação da parasitemia de acordo com o dia, reduzida taxa de glicose sangüínea bem como de todos os outros parâmetros bioquímicos já mencionados, exceto uréia. Verificou-se que a cepa RAL foi mais virulenta que a cepa RC, machos mais susceptíveis à infecção, pois houve maior parasitemia nesse grupo de camundongo. Os dois grupos apresentaram acentuadas alterações bioquímicas e histológicas. Na análise histológica, os tecido hepático e pancreático estavam acentuadamente desorganizados, com aparecimento granulomatoso e infiltrados celulares e presença de formas amastigotas ou ninhos de amastigotas. Os resultados encontrados nos camundongos inoculados pelas cepas RAL e RC de T.cruzi mostraram alguns parâmetros similares, outros alterados mesmo sendo de semelhante linhagem genética / Abstract: The physiologic evaluations of infected hosts by Trypanosoma cruzi undergo a homeostatic imbalance, which may be related to the parasite strain factors as well as to the morphology and inoculation of the T. cruzi infective agent or also to the inherent factors of a vertebrate host such as immunologic, genetic, nutritional and hormonal characteristics. This work aimed to analyze two strains from T. cruzi - RAL and RC - checking this protozoan pathology with the same phylogenetic line (Zidodema 1). The guinea pigs were Balb/c mice infected with 2 x 104 forms from tripoamastigotes of the two strains. Primarily, RAL strain was isolated from Trachoma infestans triatomineum, came from Santa Rosa do Viterbo /SP and RC strain was isolated from a bushdog natural infection -Cerdocyon thous azarae- caught in Cássia dos Coqueiros /SP. For a biochemical and histopathological evaluation T. cruzi was inoculated in female and male mice, collecting blood and removing their pancreas and livers at the 1st ?control group? 6th, 9th, 12th and 14th days respectively. After the inoculation, weight, parasitic index, glucose, alkaline phosphatise, total proteins, urea, creatinine, aspartate-transaminase (AST or TGO), cholesterol and triglycerides were analyzed. There were weight reduction, parasitic index variation according to the specific day, blood glucose rate diminished as well as all the biochemical parameters already mentioned, except urea. It was verified that RAL strain was more virulent than RC one because the males were more susceptible to the infection, since there was a great parasitic index in this group, in both strains. Biochemical and histological changes were more emphatic in both groups. In histological evaluation, the hepatic and pancreatic tissues were stressed disorganized, appearing granulomatous formations, infiltrated cellular and the presence of amastigotes. The finding results in mice inoculated by RAL and RC strains from T. cruzi presented some parameters so similar and others were changed although the genetic line was the same / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Orientador: Sandra Cecilia Botelho Costa / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-09T01:45:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcon_GlauciaEliseteBarbosa_D.pdf: 1525115 bytes, checksum: 32cd34f59e0339dac228f175c23fb443 (MD5) Previous issue date: 2007 / Doutorado / Ciencias Basicas / Doutor em Clínica Médica

Os surtos de doença de Chagas aguda estão relacionados ao consumo de comidas e bebidas contaminadas por fezes de triatomíneos contendo tripomastigotas de T. cruzi, tornando assim a infecção oral uma importante via de transmissão. Ambas as infecções vetoriais e orais desencadeiam importantes manifestações cardíacas nos hospedeiros e que estão relacionadas a uma desregulada resposta imune. O objetivo deste estudo foi avaliar a parasitemia sanguínea durante a fase aguda da infecção, a produção de macrófagos peritoneais, alterações nas sub-populações de linfócitos CD4+/CD8+, citocinas Th1 e Th2, concentração de nitrito e a histopatologia cardíaca. Um grupo de ratos Wistar foi intraperitonealmente infectados com 1X105 com cepa Y de tripomastigotas sanguíneos de T. cruzi e outro grupo de ratos Wistar foi infectado oralmente com 8X105 de tripomastigotas metacíclicos da mesma cepa. A infecção intraperitoneal desencadeou um aumento estatístico no aumento do número de parasitas, macrófagos peritoneais, proliferação de células T CD4+ e CD8+, aumento na concentração de NO, IL-12 e elevado foco inflamatório cardíaco quando comparado à infecção oral. Entretanto nossos resultados demonstraram que a infecção oral pode levar a uma doença sistêmica e que as diferentes vias de inoculação promovem respostas imunes distintas. / Acute Chagas disease outbreaks are related to the consumption of food or drink contaminated by triatomine feces containing trypomastigotes of T. cruzi, thus making oral infection an important route of transmission. Both vectorial and oral infections trigger important cardiac manifestations in the host that are related to a dysregulated immune response. The aims of this work were to evaluate the number of blood trypomastigotes during the acute phase of infection, peritoneal macrophages, possible alterations of lymphocyte CD4+/CD8+ sub-populations, Th1 and Th2 cytokines, nitrite concentrations and cardiac histopathology. One group of male Wistar rats was intraperitoneally infected with 1X105 blood trypomastigotes of the T. cruzi Y strain, and another group of Wistar rats was orally infected with 8X105 metacyclic trypomastigotes of the same strain. The intraperitoneal infection triggered statistically enhanced parasite numbers, peritoneal macrophage numbers, proliferation of CD4+ and CD8+ T cells, increased concentrations of NO and IL-12 and elevated cardiac inflammatory foci when compared to the oral infection. Therefore, our results demonstrate that oral infection can lead to systemic disease and that the different inoculation routes promoted distinct immune responses.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-07T11:28:15Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Liliane da Rocha Siriano - 2007.pdf: 877827 bytes, checksum: 8765f8f6633957232e187ede114c38fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-07T12:13:25Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Liliane da Rocha Siriano - 2007.pdf: 877827 bytes, checksum: 8765f8f6633957232e187ede114c38fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-07T12:13:25Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Liliane da Rocha Siriano - 2007.pdf: 877827 bytes, checksum: 8765f8f6633957232e187ede114c38fa (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2007-12-03 / The sensitivity of the technique of hemoculture was studied in 152 women infected by Trypanosoma cruzi in the chronic phase of Chagas disease, 101 pregnant and 51 non pregnant (control group). Serologic tests were positive for two or three serologic tests of different principles in all women. According to gestational age, 25 patients were under 21 weeks of gestation, 55 between 21 and 30 weeks of gestation and 21 were over 30. The pregnant women had average age of 29.2 years (from 17 to 44 years) and the control group the mean age was 34.1 years (from 18 to 49 years). Higher positivity was observed in the group of pregnant, 60.4% (61/101) compared with the control group: 29.4% (15/51). Been made seven tubes for each hemoculture held for a total of 1.064 tubes that were examined monthly, until the 150th day, a total of 5.320 tests conducted microscopic. It examined the profile of parasitemia by the number of tubes positive, in the pregnant group, the parasitemia was low in 39,6% of the tubes, average at 22,8%, and high in 37,6%. In the control group, the parasitemia was low at 70.6 %, average at 15.7 % and 13.7 % high.For naturalness most (87) were from the state of Bahia, 50 women of Goiás and 15 of other states. These results show that the technique of hemoculture identified significant differences (p <0.001) in parasitemia in pregnant in relation to the control group. This increase due to pregnancy could well encourage an increased risk of congenital transmission. Also, it could be an indication of specific treatment after pregnancy. / A sensibilidade da técnica de hemocultura foi estudada em 152 mulheres infectadas pelo Trypanosoma cruzi na fase crônica da doença de Chagas, sendo 101 gestantes e 51 não gestantes (grupo controle). Os testes sorológicos foram positivos por dois ou três testes sorológicos de princípios diferentes em todas as mulheres. Segundo a idade gestacional, 25 pacientes estavam com menos de 21 semanas de gestação, 55 entre a 21ª e 30ª semanas de gestação e 21, estavam com mais de 30. As gestantes tinham idade média de 29,3 anos (de 17 a 44 anos) e no grupo controle a média de idade foi de 34,1 anos (de 18 a 49 anos). Maior positividade foi observada no grupo das gestantes, 60.4% (61/101) em relação com o grupo controle: 29.4% (15/51). Foram realizados sete tubos para cada hemocultura realizada perfazendo um total de 1.064 tubos que foram examinados mensalmente, até no 150o dia, num total de 5.320 exames microscópicos realizados. Foi analisado o perfil de parasitemia pelo número de tubos positivos: no grupo das grávidas, a parasitemia foi baixa em 39,6 % dos tubos, média em 22,8%, e alta em 37,6%. No grupo controle, a parasitemia foi baixa em 70,6%, média em 15,7% e em 13,7% alta. Em relação à naturalidade a maioria (87) era proveniente do estado da Bahia, 50 eram de Goiás e 15 de outros estados. Estes resultados demonstram que a técnica de hemocultura permitiu detectar diferenças significativas (p< 0,001) quanto a parasitemia, em gestantes em relação ao grupo controle. Este aumento devido à gestação poderia favorecer assim um maior risco de transmissão congênita. Outrossim, poderia ser uma indicação de tratamento específico após a gravidez.