Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / En el presente estudio se compararon los partidores kinetoplastídicos (121-122) y nucleares (Tc1-Tc2), en la detección de Trypanosoma cruzi (T. cruzi) en el binomio madre-recién nacido (RN). Se analizó una muestra de 40 madres chagásicas crónicas y sus RN, procedentes de Provincia de Choapa, Región de Coquimbo, de quienes se extrajo sangre periférica en pre-parto y de cordón umbilical al momento del parto, respectivamente. Las madres se seleccionaron según resultados serológicos para enfermedad de Chagas realizados en el primer trimestre del embarazo mediante Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) y ELISA IgG. Se conformaron grupos de estudio en base a los resultados de PCR kinetoplastídico (PCRk) aplicado a las madres previo al parto y se aplicó PCR con partidores nucleares (PCRn) a la totalidad de madres y RN, con el fin de determinar la utilidad de estos últimos en la pesquisa de T. cruzi. Los resultados fueron analizados mediante la prueba de Mc Nemar de muestras asociadas a través del programa SRSS. Se observó que en el 82,5% de las muestras correspondientes a madres con parasitemia positiva o negativa al pre-parto con PCRk, PCRn fue positivo. Considerando sólo las madres negativas a PCRk, PCRn detectó positividad en el 65% de los casos. En los 40 RN en estudio, PCRk fue positivo en el 7,5% de los casos, mientras que PCRn lo fue en el 50%. Dos casos congénitos, confirmados mediante serología convencional antes del año de vida, fueron positivos para ambos partidores (Indice de sensibilidad PCRk y PCRn 100%; índice de especificidad PCRk 100% y PCRn 50%). Estos resultados nos permiten concluir que los partidores nucleares Tc1-Tc2, detectan en el 42,5% de la sangre de cordón de RN, hijos de madres chagásicas, una banda de 166 pb que podría corresponder a trazas de ADN de T. cruzi, evidencia que debe ser confirmada por técnicas de secuenciación y/o PCR Tiempo Real. Se concluye además, que la parasitemia materna, no sería un factor relevante en la transmisión congénita de T. cruzi, puesto que de 20 madres con parasitemia evidente antes del parto, sólo en dos casos se confirmó la transmisión. En ausencia de diagnóstico parasitológico directo en el RN, la técnica de PCR es una alternativa para el diagnóstico de Chagas congénito, no obstante, este estudio confirma que el estudio serológico posterior a los 8 meses de vida en los hijos de madres chagásicas, es la estrategia más recomendable y factible de llevar a cabo en los centros asistenciales de la zona endémica de nuestro país / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1080445, 1100768 y proyecto 06/2009 Regón Valona de Bruselas-Bélgica

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas existe desde tiempos remotos en el continente americano y constituye un problema de salud pública en países latinoamericanos. En los últimos años, la emigración masiva de personas de América Latina a otras partes del mundo ha hecho que la enfermedad se convierta en un problema mundial. El protozoo flagelado Trypanosoma cruzi, corresponde al agente etiológico de esta zoonosis, que desde el punto de vista médico veterinario, afecta a animales de hábitos intra y peridomiciliarios, los cuales son un factor de mantenimiento en la transmisión vectorial. En Chile, el área de endemia de la enfermedad se extiende desde el paralelo 18° LS por el norte, hasta el paralelo 34,5º LS por el sur. La Secretaría Regional Ministerial (SEREMI) de Salud de la Región Metropolitana aplica el Programa de Control del Triatoma infestans, vector intradomiciliario del parásito de mayor importancia epidemiológica en Chile; gracias a este programa se detectó en viviendas de comunas rurales de Calera de Tango y Til Til, la presencia reiterada de ejemplares adultos de este insecto. Por ello, esta investigación planteó como objetivo principal pesquisar infección chagásica en los integrantes de estos grupos familiares y sus perros mascota. De un total de 269 personas examinadas, (159 de la comuna de Calera de Tango y 110 de Til Til), fueron confirmados cuatro casos provenientes de Til Til serológicamente positivos a T. cruzi que correspondieron a personas adultas del género masculino, cuyas edades fluctuaron entre los 33 y los 73 años. Además, fue detectada infección por T. cruzi en dos perros provenientes de esta misma comuna. Sin embargo, no existió relación de positividad a T. cruzi entre integrantes de estos grupos familiares y los perros positivos detectados / Financiado por el Instituto de Salud Pública de Chile y la Secretaría Regional Ministerial de Salud Región Metropolitana

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas es una de las zoonosis parasitarias más importantes en América Latina, causando graves problemas de salud y pérdidas económicas considerables, por su característica de enfermedad limitante e invalidante. El agente responsable es el protozoo Trypanosoma cruzi, transmitido por vía vectorial, transfusional, accidentes de laboratorio, transplante de órganos, congénita y oral. A nivel general, las iniciativas frente a esta enfermedad se centran en el control y eliminación del vector, junto con vigilancia en bancos de sangre. La existencia de medidas de control de estos mecanismos de transmisión, ha permitido, que en nuestro país, la transmisión congénita cobre especial relevancia. Se estudió la infección chagásica en el binomio madre/recién nacido, cuyos partos ocurrieron entre los años 2005- 2008 en la Provincia de Choapa. De un total de 3.285 gestantes registradas, se detectaron 124 madres serológicamente positivas a la infección por Trypanosoma cruzi (3,8%). En 64 de sus hijos, se completaron satisfactoriamente los estudios serológicos y parasitológicos para detectar infección congénita, lo que ocurrió en dos de ellos (3,1%). Los perros evaluados en este estudio no presentaron infección por Trypanosoma cruzi / Financiamiento: Proyectos DI SAL 05/17 y Fondecyt 1080445

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas o tripanosomiasis americana tiene como agente biológico el parásito hemoflagelado Trypanosoma cruzi. Esta enfermedad posee un carácter endémico en América Latina y se estima un promedio de 10-15 millones de personas infectadas y 75-90 millones en riesgo de contraer la enfermedad. T. cruzi posee un ciclo de vida indirecto y se presenta en tres formas celulares; epimastigote, forma extracelular replicativa y no infectiva, presente en los vectores triatominos; tripomastigote, forma no replicativa e infectiva, que se encuentra tanto en el vector como en hospederos mamíferos y finalmente, la forma amastigote, intracelular replicativa, presente en hospederos mamíferos. Trypanosoma cruzi es capaz de sobrevivir frente al daño oxidativo del DNA producido por especies reactivas de oxígeno y nitrógeno (ROS/RNS) del hospedero mamífero. Este daño podría ser reparado mediante la actividad de la endonucleasa APE1 de la vía de escisión de bases (BER). Sin embargo, sólo hemos identificado APE1 de T.cruzi (TcAP1) en la forma epimastigota del parásito, pero no se ha detectado en las formas tripomastigotes o amastigotes. NL1 de T. cruzi (NL1Tc) es una endonucleasa retrotransposónica de la familia AP que podría realizar la misma función que cumple TcAP1 en epimastigotes, pero en tripomastigotes y amastigotes de T. cruzi. Se clonó el gen que codifica para NL1Tc y se confirmó su pertinencia por secuenciación. Por otra parte, se generó la proteína recombinante NL1Tc y por modelamiento en 3D por homología se confirmó corresponde a una endonucleasa. La proteína recombinante purificada se empleó para producir un anticuerpo policlonal específico, el cual se utilizó posteriormente para la identificación de NL1Tc en homogeneizados de las distintas formas celulares del parásito y evidenciar su grado de expresión en epimastigotes de la cepa Dm28c tratados con H2O2 200 μM. Se concluye que la proteína NL1Tc se expresa en las tres formas celulares de T. cruzi, y en las condiciones experimentales empleadas, no se observa sobreexpresión de NL1Tc frente a estrés oxidativo, sin embargo no se descarta su participación en la reparación del DNA / Financiamiento: Proyecto Bicentenario Anillo ACT-29, Proyecto Bicentenario Anillo ACT-112, Proyecto RED-07, Proyecto Fondecyt 1090124

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La enfermedad de Chagas congénita es causada por el parásito hemoflagelado Trypanosoma cruzi (T. cruzi) que alcanza al feto atravesando la barrera placentaria. Los mecanismos de infección e invasión tisular del parásito T. cruzi son poco conocidos. La invasión celular de T. cruzi induce la activación de vías de transducción de señales, las que se cuentan las vías PLC- (Fosfolipasa C-) y ERK1/2 (Señal extracelular regulada por quinasas) MAPK (Proteína quinasa activada por mitógenos) en el hospedero. La activación de estas vías se relaciona con la infectividad del parásito. Para estudiar la participación de estas vías de transducción de señales en la infección tisular, se incubaron explantes de vellosidades coriónicas humanas sanas en presencia y ausencia del parásito y en presencia y ausencia de inhibidores específicos de cada una de las vías. La infección exitosa de los explantes de vellosidades coriónicas humanas fue determinada por detección del parásito mediante PCR. Los efectos de la infección del parásito respecto a la modulación de las vías de transducción de señales se determinaron mediante métodos de Western Blot e inmunofluorescencia. Bajas concentraciones de T. cruzi inducen la activación de las vías de transducción de señales PLC- y ERK1/2 MAPK. Altas concentraciones de parásitos activan a la vía PLC- e inhiben a la vía ERK1/2 MAPK. Ninguno de los inhibidores de las vías de transducción de señales fue capaz de impedir la infección ex vivo de las vellosidades coriónicas humanas con T. cruzi. Se concluye que ambas vías de transducción de señales son parte de una compleja “estrategia” de invasión celular de T. cruzi / Proyectos Bicentenario Anillo 112 y FONDECYT 11080166

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Ratones de la cepa ACA fueron experimentalmente infectados con 2.000 trypomastigotes sanguíneos de la cepa Tulahuén o de la cepa Munantá de Trypanosoma cruzi para evaluar prepatencia, niveles de parasitemia, mortalidad acumulada y establecer su eventual correlación con el número de peudoquistes y la magnitud del daño inflamatorio, en el tejido cardiaco de los ratones así infectados. Mientras los ratones infectados con la cepa Tulahuén mostraron una prepatencia sanguínea de cinco días, con un nivel máximo de parasitemia de sólo 14,8 x 105 ± 2,21 x 105 parásitos/mL alcanzado a los 11 días y 100% de mortalidad acumulada a los 21 días post infección, los ratones infectados con la cepa Munantá mostraron una prepatencia de siete días, un nivel máximo de parasitemia de 41,57 x 105 ± 2,61 x 105 parásitos/mL (p < 0,001), alcanzado a los 17 días y 75% de sobrevida más allá de los seis meses de infección (p < 0,0002). El número de pseudoquistes y la magnitud del daño tisular observado en los ratones infectados con la cepa Munantá no fueron diferentes de lo obtenido en los ratones infectados con la cepa Tulahuén durante los primeros 15 días de infección. Sin embargo mientras en los ratones infectados con la cepa Tulahuén se observó un aumento significativo en el número de pseudoquistes (p < 0,01) y en la magnitud del infiltrado inflamatorio mononuclear y del daño tisular (p < 0,05) a los 19 días de infección, los ratones infectados con la cepa Munantá, mostraron no sólo una disminución en el número de peseudoquistes y de células inflamatorias mononucleares, sino también una lenta reparación del daño tisular

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Trypanosoma cruzi, agente etiológico de la enfermedad de Chagas o tripanosomiasis americana, es un parásito intracelular obligatorio que causa una infección crónica debilitante en humanos. En el presente trabajo, en un modelo experimental, se infectaron tres grupos de ratones machos de las cepas A.Sw, Balb/c y CF1, de 10 semanas de edad, con 2.000 tripomastigotes sanguíneos del clon Dm28c de T. cruzi. Se evaluó la evolución de la infección en términos de prepatencia, valores de parasitemia, mortalidad y un estudio histopatológico. Los resultados obtenidos indicarían la existencia de un componente genético en la evolución de la infección con T.cruzi, ya que la mortalidad alcanzada por el grupo de ratones de la cepa Balb/c fue un 100%, sin embargo sólo fue de un 10% en el caso de la cepa A.Sw y 0% de mortalidad para la cepa CF1. Respecto a los promedios alcanzados en las parasitemias en el día de su máximo nivel para cada grupo, se observó que el mayor valor fue evidenciado por los animales Balb/c con 2x106 parásitos/mL, un valor de 1,1x106 parásitos/mL para CF1 y el menor valor de 6,2x105 observado en los ratones A.Sw. A nivel histopatológico, según los cortes realizados, sólo se encontraron seudoquistes al día 14 p.i. en corazón en las tres cepas y en el caso de la cepa Balb/c en tejido muscular. La mayor cantidad de parásitos intracelulares, inflamación y daño se observó en las muestras de los animales Balb/c

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El objetivo de esta memoria de título fue evaluar el nivel de conocimiento sobre enfermedad de Chagas en equipos de salud de un área endémica de Chile, antes y después de una intervención educativa. Se diseñó una encuesta ad hoc y se estableció como criterio de aprobación en ambos tests, el 60% de respuestas correctas. De 166 miembros de equipos de salud encuestados en el pre-test, 89,16% rindió el post-test. El rango de aprobación del pre-test varió entre el 11,6% y 28,89%, mientras que en el posttest varió entre 68,75% y 89,66% (p=0,0001). Según la profesión de los encuestados, los porcentajes de aprobación del pre y post-test fueron de 13,98% y 66,20% (técnicos en salud); 14,29% y 85,71% (tecnólogos médicos); 19,35% y 83,87% (médicos); 27,27% y 90% (matronas); y 41,18% y 100% (enfermeras), respectivamente (p=0,0001). Los porcentajes globales de aprobación antes y después de la intervención educativa fueron del 19,28% y 77,70%, respectivamente (chi2=107,27). Según los resultados obtenidos en el pre-test, los miembros de los equipos de salud del área endémica encuestados, no poseen los conocimientos necesarios sobre enfermedad de Chagas. No obstante, el estudio evidenció una relación estadísticamente significativa entre la intervención educativa y la adquisición de nuevos conocimientos (post-test), lo que permite concluir que la formación sobre esta parasitosis es necesaria y debe ser continua, más aún cuando existe rotación de profesionales en centros asistenciales que concentran la población de infectados por Trypanosoma cruzi / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1100768 y Fondecyt 1120382

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Las medidas tomadas por la Organización Panamericana de la Salud (OPS), destinadas al control de la transmisión vectorial de Trypanosoma cruzi, además de distintas medidas tomadas en la región, permitieron la disminución de la prevalencia de la infección a nivel continental. En el caso chileno, se confirmó el control de esta transmisión en el año 1999, tomando importancia en la última década vías como la transmisión vertical y la transfusional. Dentro de este marco, se desarrolla un plan piloto en la Provincia del Choapa (IV Región de Chile) destinado, entre otros objetivos, a estimar la incidencia de la transmisión congénita en esta área endémica. Entre los años 2005 – 2009, existió una pérdida de pacientes debido a su traslado a un hospital fuera de la Provincia por diagnóstico de parto prematuro (menor a 37 semanas de gestación) El grupo en estudio estuvo conformado por 132 mujeres que habitan las localidades de Los Vilos, Illapel, Salamanca y Canela, y sus hijos prematuros. Para determinar la presencia o ausencia de la infección chagásica, se revisaron los antecedentes de estas mujeres en los hospitales de la Provincia, optándose por la toma de muestra para serología convencional (ELISA e IFI IgG) en los casos sin información. A su vez, en los hijos de las madres confirmadas como chagásicas, se realizó estudios serológicos y la reacción de polimerasa en cadena (PCR) para determinar su condición, además de una revisión de los antecedentes del parto y periodo neonatal, siendo uno de los antecedentes evaluados el APGAR. El grupo control, conformado por 147 mujeres, son pacientes que fueron parte del plan piloto junto con sus hijos, los cuales tuvieron partos a término. La comparación de ambos grupos, mediante un análisis estadístico, permitió conocer si existen diferencias en la incidencia de la infección congénita por T. cruzi entre el grupo de estudio (parto pretérmino) y el grupo control (parto a término). De las 132 mujeres evaluadas, se logró determinar su condición en 88 (66,6%), siendo 7 los casos con serología positiva a T.cruzi (7,9%). Respecto a sus hijos, en 4 se logró descartar la infección, mientras 1 fue confirmado como positivo, lo que dio una tasa de infección congénita de un 14,28%. Al realizar la comparación con el grupo control, cuya tasa de infección congénita fue de un 4,1%, se determinó que no existían diferencias significativas entre ambas. 124 recién nacidos prematuros presentaron APGAR entre 8 y 10 (86,7%), considerado un buen pronóstico de salud neonatal, mientras 4 tuvieron un puntaje menor a 3 (2%), falleciendo 3 en el periodo neonatal. Mediante el presente estudio, se logró recopilar la información de estas pacientes y sus hijos, permitiendo una mayor precisión en los resultados del plan piloto. A su vez, se inició el tratamiento en las mujeres positivas, además del caso congénito confirmado. Desde el año 2011 se está realizando una vigilancia epidemiológica que incluye la transmisión congénita en su protocolo, lo cual permitirá un mayor control de esta vía de infección, considerada un problema de Salud Pública a nivel mundial

Memoria para optar al Titulo Profesional de Médico Veterinario / Se inocularon 18 ratones de la cepa Balb/c con 2000 tripomastigotes del clon Dm28c de Trypanosoma cruzi, los cuales se sacrificaron a los 7, 21 y 60 días post infección, para posteriormente estudiar cerebro, corazón, hígado, riñón, intestino y músculo esquelético a través de la técnica de reacción en cadena de la polimerasa (PCR), lo que permitió detectar el DNA de T. cruzi y por otro lado se realizó un estudio histopatológico para determinar la presencia de lesiones tisulares y pseudoquistes de T. cruzi en los tejidos antes mencionados. Los resultados mostraron que los niveles de parasitemias fueron bajos durante el transcurso de la infección. Se determinó que durante la fase aguda lo más relevante fueron los procesos inflamatorios, los que no se relacionaron a la presencia de nidos de amastigotes, a diferencia de la fase crónica inicial, donde la gran presencia de pseudoquistes fue lo primordial en el estudio histopatológico, para luego desaparecer en la mayoría de los órganos durante la fase crónica propiamente tal. Respecto al daño tisular encontrado, se observó que el órgano más afectado desde el inicio de la infección fue hígado, lo cual podría estar presuntamente relacionado con la muerte de los ratones durante la fase crónica inicial. Si bien durante la fase crónica fue posible encontrar daño tisular en diferentes grados, no se pudo determinar la presencia de pseudoquistes en la mayoría de los tejidos, a diferencia de la PCR que demostró la presencia de T. cruzi en todos los órganos estudiados, mostrando con esto el alto nivel de sensibilidad de la técnica