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Ocorrência de Leishmania chagasi e outros tripanosomatídeos em cães de Cuiabá, Mato Grosso: avaliação clínica e uso de diferentes métodos de diagnóstico laboratorialAlmeida, Arleana do Bom Parto Ferreira de January 2012 (has links)
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Previous issue date: 2014-05-06 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Nacional de Infectologia Evandro Chagas. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Na cidade de Cuiabá, o conhecimento de aspectos da leishmaniose visceral canina (LVC) é ainda muito escasso, apesar de casos humanos serem relatados nessa cidade. Este estudo objetivou avaliar clinicamente e por diferentes métodos laboratoriais cães domésticos domiciliados em áreas urbana e rural, no município de Cuiabá, Mato Grosso. Os animais foram selecionados por meio de busca ativa em cinco bairros e por demanda espontânea durante atendimento no hospital veterinário da UFMT. Os cães foram avaliados por ferramentas sorológicas, parasitológicas e moleculares, empregando diferentes amostras biológicas. Dos 430 cães obtidos por busca ativa, 95 (22,1%) foram reatores pela imunofluorescência indireta. Esse dado foi considerado para análise dos fatores de risco e, tanto aspectos relacionados ao hábito dos animais (livre acesso à rua e função de guarda), assim como do ambiente (rural e presença de plantações) foram considerados como fatores de risco importantes para a aquisição da infecção canina. A cultura parasitológica, utilizando amostras dos 430 cães oriundos do inquérito epidemiológico e 52 do atendimento no HOVET-UFMT, permitiu o isolamento de L. chagasi em 54 (11,2%) cães
A pele intacta foi a melhor amostra biológica de isolamento do parasito em cães sintomáticos, porém nos cães assintomáticos, a melhor amostra para isolamento foi a medula óssea. Por PCR, utilizando apenas os cães da busca ativa, DNA de L. chagasi foi detectada em diferentes amostras biológicas, diagnosticando 63 (14,6%) dos cães. O aspirado de linfonodo foi a melhor amostra para diagnosticar leishmaniose, pela PCR, independente do status clínico dos animais. O protozoário Trypanosoma caninum foi isolado exclusivamente de pele integra em 14 cães, demonstrando a presença desta espécie pela primeira vez em Cuiabá. Nossos resultados sugerem que a infecção por esse parasito, possa ser transitória e curse sem sinais clínicos específicos. Além de T. caninum, a infecção por T. cruzi em um cão foi também descrita na cidade de Cuiabá. Os resultados apresentados neste estudo contribuem para o conhecimento de aspectos da LVC em Cuiabá. Esta cidade possui características propícias para a instalação da leishmaniose visceral, sendo necessária inclusão de ações educacionais e sanitárias. Com relação ao diagnóstico canino, enfatizamos que a utilização de diferentes amostras clínicas, associadas a diferentes técnicas laboratoriais, proporcionam um diagnóstico acurado da LVC e auxiliam o diagnóstico diferencial com outros agentes que estejam circulando nesses animais. A infecção por L. chagasi, T. caninum e T. cruzi diagnosticados em cães domiciliados em Cuiabá demonstram a sobreposição de tais agentes, constituindo dados importantes para a vigilância epidemiológica nessa região / In Cuiabá, knowledge of aspects of canine visceral leishmaniasis (CVL) is still very scarce,
although human cases ar
e reported. This study e
valuat
ed clinically and by l
aboratory
methods
,
domestic dogs
from
urban and rural areas in the city. The animals were selected
through active search in the five boroughs and spontaneous demand for care at the
veterinary
hospital
(
UFMT
). The animals were
ev
aluated by serological, parasitological and molecular
approach, using
different biological samples. Of the 430 dogs
from active search,
95 (22.1%)
were reactive
in
indirect immunofluorescence. These data were considered for analysis of risk
factors and bot
h aspects related to the habit of animals (free street access and guard
function
)
.
T
he environment (rural and presence of
agricultural activities
) were considered important risk
factors for acquisition of canine infect
ion. The parasitological culture,
from
430 dogs from an
epidemiological survey and 52
treated
at HOVET
-
UFMT, allowed the isolation of
L. chagasi
in 54 (11.2%) dogs. Intact skin was the best biological sample isolation of the parasite in
symptomatic dogs, however,
in asymptomatic dogs, the best
biological
sample for isolation
was bone marrow.
For PCR, DNA
L. chagasi
was detected in 63 (14.6%) animals, using
different biological samples from dogs search active.
The lymph node aspirate was the best
biological
sample
to diagnose leishmaniasis by PC
R, regardless of the clinical status of the
animals. The protozoan
Trypanosoma caninum
was isolated exclusively
intact
skin in 14
dogs, demonstrating the presence of this species for the first time in Cuiabá. Our results
suggest that infection
by
T. caninu
m
can
be transient and curse without specific clinical signs.
Besides
T. caninum
,
infection with
T. cruzi
in a dog was also reported in the city of Cuiabá.
The results presented in this study contribute to the knowledge of aspects of LVC in Cuiabá
.
This ci
ty has favorable characteristics for the installation of visceral leishmaniasis,
necessitating the inclusion of education and health actions.
Regarding the diagnosis canine,
we emphasize that the use of different clinical samples associated with different
laboratory
techniques, provide an accurate diagnosis of CVL and
assist
the differential diagnosis with
other agents that are circulating in these animals. Infection with
L. chagasi
,
T. caninum
and
T.
cruzi
diagnosed in pet dogs in Cuiabá demonstrate the ov
erlap of these agents, providing
important data for epidemiological surveillance in the region.
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Caracterização da proteína TcRRM2 de Trypanosoma cruzi: envolvimento na regulação da expressão gênica e resposta a estresseMartins, Sharon de Toledo January 2012 (has links)
Submitted by Karin Goebel (karing@fiocruz.br) on 2014-11-26T11:59:33Z
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Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Carlos Chagas. Curitiba, PR, Brasil / Trypanosoma cruzi, o agente etiológico da doença de Chagas, é um organismoamplamente estudado devido a sua importância médica e também por possuircaracterísticas peculiares que o tornam um bom modelo de estudo para questõesbiológicas básicas. A repressão de RNAs mensageiros em grânulos citoplasmáticoscompostos de complexos mRNA-proteína (mRNPs) é uma importante via de regulaçãopós transcricional em eucariotos e, recentemente, foi demonstrado que grânulos deRNA estão presentes em T. cruzi. Alguns ortólogos de proteínas humanas envolvidasem mecanismos de regulação foram encontrados nestas estruturas e caracterizados,mas a função e composição de grânulos de mRNA neste modelo experimentalpermanecem desconhecidas. Em humanos e outros eucariotos, condições de estressecomo calor, radiação UV, presença de agentes citotóxicos ou deficiência de glucosepodem induzir a formação de grânulos de estresse, um tipo de estrutura citoplasmáticaenvolvida em repressão, separação e armazenamento de mRNA durante condiçõesadversas. Foram encontradas, em banco de dados de T. cruzi, três sequências deproteínas que possuem certa similaridade estrutural com as proteínas humanas TIA1 eTIAR. Os genes correspondentes foram clonados utilizando-se a tecnologia Gateway®,para a obtenção de proteínas recombinantes. As proteínas purificadas foram utilizadaspara produzir anticorpos policlonais em camundongos, os quais puderam elucidar alocalização celular e padrões de expressão destas proteínas durante o ciclo de vida doparasita. A caracterização destas proteínas pode ajudar a elucidar melhor osmecanismos de regulação pós transcricional em T. cruzi. / Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas’ disease, is an organism widely
studied due to its medical importance and particular features that make it an alternative
model for basic biological studies. Repression of messenger RNAs in cytoplasmic
granules composed of mRNA-protein (mRNP) complexes is an important pathway of
posttranscriptional regulation in eukaryotes, and recently was shown that mRNA
granules are present in T. cruzi. A few orthologs of human proteins involved in mRNA
metabolism were found and characterized on these structures, but the function and
composition of mRNA granules in this organism remain unknown. In humans and other
eukaryotes, stress conditions such as heat, UV radiation, presence of cytotoxic agents
or glucose starvation can induce the formation of stress granules, cytoplasmic structures
involved in mRNA repression, sorting and storage during adverse conditions. Three
protein sequences that have a certain structural similarity with the human TIA1/TIAR
proteins were found in the T. cruzi data bank. The genes encoding these three proteins
were cloned using the Gateway® technology and the recombinant proteins were
obtained. The purified proteins were used to produce polyclonal antibodies in mice and
the cellular localization and expression patterns of these proteins during the parasite’s
life cycle were performed. The characterization of these proteins can help to elucidate
the mechanisms of posttranscriptional regulation in T. cruzi.
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Impacto da superexpressão da proteína Prion Celular sobre o sistema imune correlação com maior susceptibilidade à infecção experimental pelo Trypanosoma cruziBerbert, Luiz Ricardo January 2010 (has links)
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Previous issue date: 2014-10-07 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro,RJ, Brasil / A proteína Príon celular (PrPc) é uma glicoproteína constitutivamente expressa no sistema nervoso, bem como no sistema imune, porém, seu papel fisiológico e em processos infecciosos é pouco compreendido. Dados prévios da literatura sugerem disfunções fisiológicas no sistema imune em modelos murinos transgênicos que superexpressam essa proteína podendo levar os mesmos a um processo de imunodeficiência mediante infecçãos. Para testar essa hipótese, este projeto tem o objetivo de avaliar o impacto da infecção experimental pelo T. cruzi em camundongos que superexpressam (TG20) ou não expressam PrPc (KO), analisando parâmetros de infecção correlacionados com a infiltração linfocitária no tecido cardíaco. Nossos resultados demonstram que a superexpressão de PrPc em camundongos gera inicialmente susceptibilidade do modelo à infecção se comparado ao grupo que não expressa a proteína, conforme observado nas taxas de sobrevida e parasitemia
A presença de células T, B, bem como células CD11b+ de infiltrado inflamatório é numericamente maior no grupo TG20, porém, esse evento não parece estar relacionado diretamente com alterações observadas no baço e linfonodos desses animais durane cinética de infecção; em relação à expressão de moléculas de ativação linfócitos nestes modelos, observamos aumento das mesmas nas subpopulações linfocitárias do grupo TG20. Nos timo dos modelos TG20 foram observadas alterações fenotípicas, bem como aumento de espressão de laminina e fibronectina e seus receptores nos timócitos. Os dados deste trabalho demonstram que Prpc tem um grande impacto na fisiologiada infecção pelo T. cruzi no modelo murino que superexpressa essa proteína, correlacionando esse evento a uma imunodeficiência previamente observada no mesmo modelo não infectado / Cellular Príon Protein (PrP
c
) is a glycoprotein constitutively expressed in nervous an
d
immune systems, but its physiological role is not well und
erstood. Previous data suggest
that murine models which overexpress PrP
c
show physiological disfunctions that could
be related with a possible immunodeficiency, which might
lead to poor immune response
against infections. To support this hypothesis, this project
has the aim to evaluate the
impact of experimental
T. cruzi
infection in mice that overexpress or do not express
PrP
c
, correlating infection parameters to lymphocyte infilt
ration on heart tissue. Our
results demonstrated that PrP
c
overexpression in mice leads to animal susceptibility
during acute infection when compared to KO group, comp
aring survival and parasitemia
rates on these groups. Inflammatory infiltrate cells such
as T and B lymphocytes, as well
as CD11b
+
cells are present in higher numbers in TG20 model, but
it seems to be not
correlated with spleen and lymph nodes alteractions duri
ng infection kinectics; activation
molecules are highly express in TG20 periferical lympho
cytes. TG20 mouse thymus
showed phenotypic alteractions, as well as higher expressio
n of laminin and fibronectin
and its receptors in thymocytes, which could be possibily re
lated to immature thymocyte
exportation and their presence in heart tissue. Those
data suggest thar PrP
c
has an
important impact during
T. cruzi
infection in murine model that overexpress PrP
c
,
correlating these alteractions to previous immunodeficien
cy in non infected TG20 murine
models
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Trypanosoma cruzi Investigação sobre óleos essenciais como potenciais agentes tripanocidasSantoro, Giani França January 2007 (has links)
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Previous issue date: 2014-11-18 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Nifurtimox e benznidazol, as drogas usadas no tratamento da doença de Chagas, apresentam vários efeitos colaterais e tem sua eficácia limitada, especialmente na fase crônica. Diversos produtos naturais têm demonstrado potencial antiparasitário em laboratório e, nesse sentido, compostos obtidos de plantas aparecem como agentes potenciais para o desenvolvimento de novas drogas antiparasitárias. Assim, no presente trabalho investigamos o efeito de óleos essenciais obtidos de Origanum vulgare L. (orégano), Thymus vulgaris L. (tomilho), Achillea millefolium L. (mil-folhas), Syzygium aromaticum L. (cravo) Ocimum basilicum L. (manjericão) e Cymbopogon citratus (DC) Stapf (capim-limão), e de seus principais constituintes, sobre a proliferação e ultra-estrutura de Trypanosoma cruzi. Destilação a vapor foi usada para isolar os óleos essenciais, com análise química realizada por cromatografia gasosa acoplada a espectrometria de massa (CG-EM) através de colaboração com o Departamento de Química da UFLA (Lavras, MG). Epimastigotas de cultura e tripomastigotas sangüíneos foram incubados por 24 h com diferentes concentrações dos óleos essenciais e de alguns de seus principais constituintes sendo quantificado o valor de IC50
Nossos dados indicam que óleos essenciais são eficazes contra T. cruzi apresentando a seguinte ordem decrescente de atividade sobre epimastigotas (IC50/24 h expresso µg/mL): tomilho (77,0) > cravo (99,5) > manjericão (102,0) > capim-limão (126,5) > mil folhas (145,5) > orégano (175,0 µg/mL). Nos ensaios com formas tripomastigotas sangüíneas os óleos mais efetivos foram: capim-limão (15,5) > tomilho (38,0) > cravo (57,5) > orégano (115,0) > mil-folhas (228,0) > manjericão (467,5). Assim, com exceção dos óleos de manjericão e de mil-folhas, os demais óleos testados foram mais ativos sobre tripomastigotas do que sobre epimastigotas. Tratamento com os principais constituintes dos óleos essenciais de capim-limão (citral), manjericão (linalol), cravo (eugenol) e tomilho (timol) também demonstrou efeito tripanocida. No caso de citral, timol e eugenol, as formas tripomastigotas foram as mais suscetíveis. Citral, principal componente do óleo de capim-limão, também foi eficiente no tratamento de macrófagos peritoneais infectados, inibindo a proliferação de amastigotas intracelulares e apresentando para o parâmetro percentagem de infecção um valor de IC50/48 h de 12,1 µg/mL. Experimentos de citometria de fluxo após incubação de epimastigotas e tripomastigotas com óleos essenciais de orégano e tomilho demonstraram que a permeabilidade da membrana celular foi afetada somente em concentrações 4 vezes maiores que a concentração correspondente ao IC50/24 h. Por outro lado, uso de concentrações de óleos correspondentes ao IC50/24h não resultou em permeabilização celular
Microscopia eletrônica de varredura (MEV) de parasitas tratados com todos os óleos essenciais não demonstrou alterações na membrana plasmática. Entretanto, havia inchaço do corpo do parasito, quando comparado a parasitas do grupo controle. Observação por microscopia eletrônica de transmissão (MET) mostrou inchaço citoplasmático, porém com manutenção na integridade da membrana dos parasitos. Estes dados indicam que os óleos permeam as membranas e atuam sobre organelas ou vias metabólicas citoplasmáticas. Os óleos essenciais de tomilho e capim-limão foram muito mais ativos sobre os parasitas do que sobre macrófagos peritoneais apontando para a realização de ensaios in vivo. Nossos resultados indicam que óleos essenciais e seus constituintes são promissores agentes anti-T. cruzi, abrindo perspectivas para descoberta de drogas mais eficazes de origem vegetal para o tratamento de doenças parasitárias / Nifurtimox and benznidazole, currently used for the treatment of Chagas
disease, present several side effects and have limited efficacy, especially in the
chronic phase of the disease. Several natural products have revealed anti-parasitic
potential in the laboratory and, in this sense, plant-derived compounds appear as
potential targets for the development of new anti-parasitic drugs. Thus, in the present
work we have investigated the effect of essential oils obtained from Origanum
vulgare L. (oregano), Thymus vulgaris L. (thyme), Achillea millefolium L. (yarrow),
Syzygium aromaticum L. (clove), Ocimum basilicum L. (basil) and Cymbopogon
citratus (DC) Stapf (lemongrass), and of their main constituents, on proliferation and
ultrastructure of Trypanosoma cruzi.
Steam distillation was used to isolate the essential oils, with chemical analyses
performed by gas chromatography C coupled to mass spectrometry (GC-MS) in
collaboration with the Departamento de Química of UFLA (Lavras, MG).
Epimastigotes and bloodstream trypomastigotes were incubated for 24 hours with
different concentrations of the essential oils and with some of the main constituents
of the oils, being quantified the IC50/24h. Our data indicate that essential oils are
effective against T. cruzi, presenting the following order of decreased activity on
epimastigotes (IC50/24 h expressed as μg/mL): thyme (77.0) > clove (99.5) > basil
(102.0) > lemongrass (126.5) > yarrow (145.5) > oregano (175.0). In the assays with
bloodstream trypomastigotes, the more active oils were: lemongrass (15.5) > thyme
(38.0) > clove (57.5) > oregano (115.0) > yarrow (228.0) > basil (467.5). Thus, except
for basil and yarrow, the essential oils were more active on trypomastigotes than on
epimastigotes.
Treatment with the main constituents of lemongrass (citral), basil (linalool),
clove (eugenol) and thyme (thymol) essential oils also demonstrated trypanocidal
effect. The lemongrass oil was effective in the treatment of infected macrophages,
inhibiting intracellular amastigote proliferation, and presenting for the parameter % of
infection an IC50/2 days of 12.1 μg/mL.
Flow cytometry experiments after incubation with oregano and thyme essential
oils demonstrated that the cell membrane permeability of treated epimastigotes and
trypomastigotes was affected only at concentrations at least 4 times higher than that
of the corresponding IC50/24h. On the other hand, use of corresponding IC50/24h
value for each essential oil did not result in cell permeabilization. Scanning electron
microscopy (SEM) of treated cells demonstrated apparently no plasma membrane
alteration with all used oils. However, there was swelling of the parasite body, as
compared to control cells. Observation by transmission electron microscopy (TEM)
showed cytoplasmic swelling, however with maintenance of the parasite membrane
integrity, as compared to control cells. These data indicate that the oils permeate the
membranes and act on cytoplasmic organelles or metabolic pathways.
Thyme and lemongrass oils were much more active against the parasites
when compared to the effect on peritoneal macrophages, pointing out to further
assays of treatment of experimentally infected mice. Our results indicate that
essential oils and their constituents are promising anti-T. cruzi agents, opening
perspectives to the discovery of more effective drugs of vegetal origin for the
treatment of parasitic diseases.
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Dinâmica do Panstrongylus megistus nos ciclos de transmissão de Trypanosoma cruzi em áreas de cerrado e mata atlântica no estado de Minas Gerais, BrasilSantos Júnior, José Eloy dos January 2011 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-15T13:05:22Z
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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil. / O triatomíneo Panstrongylus megistus pode ser encontrado ao longo do Brasil em um diversificado número de hábitats, tanto silvestres como artificiais. Este trabalho teve como objetivo estudar a dinâmica populacional de P. megistus nos ciclos de transmissão do Trypanosoma cruzi em áreas de Cerrado e Mata Atlântica no Estado de Minas Gerais/ Brasil. Os municípios estudados foram Bambuí (Cerrado) e Piracema (Mata Atlântica). Foram realizadas coletas nos ambientes natural e artificial, com objetivo de identificar a dinâmica populacional, as fontes alimentares (FA) e os ecótopos naturais utilizados por P. megistus, bem como caracterizar a interrelação dos ciclos de transmissão do T. cruzi a partir dos reservatórios e vetores
associados. As amostragens de campo foram realizadas em locais de maior presença do barbeiro e proximidade de áreas naturais. A partir dos dados avaliados foi observado o sucesso das atividades de controle vetorial, alcançadas em momentos diferentes em cada município. Através da análise por morfometria geométrica, foi possível identificar uma semelhança entre as populações doméstica e silvestre de P. megistus, sugerindo o ambiente natural como principal foco de infestação triatomínica nos municípios. As análises de FA revelaram uma grande mobilidade da espécie no ambiente domiciliar, destacando as aves (49%) e os cães (22%) como principais recursos utilizados. A investigação do ambiente natural levou ao encontro do primeiro foco silvestre de P. megistus em Bambuí, após 69 anos de pesquisas, demonstrando a baixa densidade da espécie no meio silvestre. Foram
identificados os gambás (Didelphis sp.) e os cães domésticos como principais reservatórios de T. cruzi nos ambientes natural e artificial, respectivamente. Os dados mostram que as infestações domiciliares por P. megistus, embora reduzidas, se mantêm permanentes na última década avaliada, mesmo com poucos focos silvestres, como detectado em Bambuí. Ficou evidenciado também a ocorrência de um progressivo declínio das densidades triatomínico-tripanossômicas nas áreas estudadas, o que se deve provavelmente à fatores relacionados com a permanente vigilância epidemiológica, à redução da população rural, a melhoria das habitações rurais e redução das áreas naturais associada à expansão agropecuária / The triatomine Panstrongylus megistus can be found throughout the country in a diverse number of habitats, both silvatic and artificial. This work aimed to study the dynamics of P. megistus in the Trypanosoma cruzi transmission cycles in areas of Cerrado and Atlantic Forest in Minas Gerais, Brazil. The municipalities studied were Bambuí (Cerrado) and Piracema (Atlantic Forest). Colects were conduced in natural and artificial environments, in order to identify the population dynamics, food sources and the natural ecotope used by P. megistus, and to characterize the interrelationship of T. cruzi transmission cycles from the reservoirs and vectors involved. The field surveys were conducted in sites with high presence of the triatomine and proximity to natural areas. From the data evaluated was observed the success of vector control activities reached at different times, in each municipality. A geometric morphometric analysis showed no difference between domestic and silvatic populations, suggesting the natural environment as the main focus of infestation triatomine rates in the municipalities. The food sources analysis revealed a highly mobility of the specie in the domiciliar environment highlighting the birds (49%) and dogs (22%) as the main resources used. The investigation of the natural environment led to the meeting of the first focus of silvatic P. megistus in Bambuí, after 69 years of research, demonstrating the low density of the specie in the silvatic environment. It was identified the opossums (Didelphis sp.) and dogs as the main reservoirs of T. cruzi in natural and artificial environments, respectively. The data
shows that household infestation by P. megistus, although reduced, remain persistent in the last decade evaluated, even with a few silvatic foci, as detected in Bambuí. It also demonstrates the occurrence of a progressive decline of T.cruzi/Triatomine-density in the studied areas, which is probably due to factors related to the permanent epidemiological surveillance, reduction of rural population, the improvement of rural housing and reduction of natural areas associated with the expansion of agriculture and livestock.
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Efeito dos parasitos Trypanosoma cruzi e Trypanosoma rangeli em aspectos do fitness de Rhodnius prolixusBelinato, Maria Raquel Fellet January 2014 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-04-14T14:24:52Z
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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Os triatomíneos são insetos hematófagos capazes de transmitir Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas. Existem poucos estudos sobre a virulência do parasito ao inseto vetor e, com isso, o parasito tem sido considerado por diversos autores como não-patogênico nesse sentido. Trypanosoma rangeli, outro protozoário transmitido por triatomíneos, não é patogênico ao homem, mas apesar de vários efeitos negativos ao vetor serem conhecidos, seu papel sobre o comportamento e a biologia reprodutiva do inseto ainda não foi investigado. Essa tese avaliou o efeito da infecção por T. cruzi (em duas temperaturas de criação: 25-25ºC - os insetos foram mantidos em 25ºC durante as fases ninfal e adulta e 30-25ºC - os insetos foram mantidos a 30ºC durante a fase ninfal e transferidos para 25ºC após a muda imaginal) e por T. rangeli - somente em 25-25ºC, em aspectos reprodutivos e no comportamento de cópula e voo de R. prolixus. Inicialmente, foi demonstrado que tanto T. cruzi 30-25ºC quanto T. rangeli causaram uma diminuição na fecundidade e fertilidade dos triatomíneos, sendo os efeitos decorrentes da infecção por T. rangeli mais evidentes. Além disso, foi observado para os mesmos grupos que a presença dos parasitos diminuiu o tamanho, o peso e o conteúdo proteico de ovos postos por pares infectados. O comportamento sexual dos insetos também foi afetado pelas infecções por T. rangeli e T. cruzi (30-25ºC). A frequência e duração da cópula em ensaios sem escolha de parceiro somente foram alteradas na infecção por T. rangeli. Interessantemente, quando foi permitido a insetos não infectados escolherem entre um parceiro infectado e um não infectado, um número significativamente maior escolheu parceiros não infectados, em infecções por T. cruzi e T. rangeli. O comportamento de início de voo também foi alterado em decorrência das infecções. Ambos os parasitos diminuíram a frequência de início de voo dos insetos. Adicionalmente, um maior número de fracassos nas tentativas de início de voo foi visto nos insetos infectados em comparação aos sem infecção. De maneira geral, as infecções por T. cruzi e T. rangeli produziram efeitos negativos no fitness de R. prolixus. No caso de T. cruzi a temperatura de criação dos insetos parece ser relevante para a ocorrência dos efeitos. Será importante investigar ainda se os insetos são capazes de controlar comportamentalmente as populações de parasitos, escolhendo, por exemplo, temperaturas ambientais adequadas ou se os tripanosomas podem manipular ativamente o comportamento dos triatomíneos para seu próprio benefício. / Triatomine bugs are bloodsucking insects capable of transmitting Trypanosoma cruzi, the causative agent of Chagas disease. There are few studies on the virulence of this parasite to its vector and thereby, T. cruzi has been considered by several authors as non-pathogenic in this sense. Trypanosoma rangeli, another protozoan transmitted by triatomine bugs, is not pathogenic to humans, but despite several negative effects to the vector being known, their role on the behavior and reproductive biology of this insect has not been investigated yet. This thesis evaluated the effect of T. cruzi (at two rearing temperatures: 25-25ºC – the insects were kept at 25ºC both during ninfal and adult phases and 30-25ºC - the insects were kept at 30°C and transferred to 25°C after the imaginal molt) and T. rangeli (25-25ºC) infections on reproductive, mating and flight behavior of R. prolixus. First we have shown that both T. cruzi 30-25ºC and T. rangeli caused a decrease in fecundity and fertility of triatomines and these effects were more evident on T. rangeli infection. Furthermore, it was observed for the same groups that the presence of parasites decreased size, weight and protein content of eggs laid by infected pairs. The sexual behavior of insects was also affected by both T. rangeli and T. cruzi (30-25ºC) infection. The frequency and duration of matings in assays without mating choice were only altered by T. rangeli infection. Interestingly, when uninfected insects were allowed to choose between uninfected and infected partners, significantly more individuals chose uninfected partners in both T. cruzi and T. rangeli infections. The behavior of flight initiation was also altered as a result of infections. Both parasites decreased the frequency of flight initiation of insects. Additionally, an increased number of failures on flight initiation was observed in infected insects when compared to uninfected ones. Generally, infection by T. cruzi and T. rangeli resulted in negative effects on fitness of R. prolixus. In the case of T. cruzi, the rearing temperature of insects seems to be important for the occurrence of effects. It will be important to further investigate whether triatomines present behavioral responses that may control trypanosome growth through actively choosing, for example, appropriate environmental temperatures or whether trypanosomes actively manipulate the insect behavior to their own benefit.
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Doença de Chagas em Bambuí: estado atual e vigilânciaMatos, Christiane Santos January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou / Cenário de importantes atividades no controle da doença de Chagas (DCh), Bambuí foi o primeiro município brasileiro a alcançar a vigilância epidemiológica em
1974. O presente trabalho buscou caracterizar a atual situação epidemiológica da doença de Chagas no município de Bambuí, identificando principais grupos afetados, formas clínicas predominantes e grupos do parasito circulantes nos pacientes. Foram amostrados 1.782 indivíduos, dos quais 138 (7,7%) foram sororeagentes para T. cruzi. Para ambos os gêneros predominaram soros positivos acima dos 60 anos de idade, sendo detectadas duas mulheres mais jovens (32 e 40
anos) infectadas. Nos pacientes clinicamente avaliados, foi possível diagnosticar as
formas clínicas digestiva (7/101), indeterminada (14/101), cardíaca (30/101) e
cardiodigestiva (50/101), bem como a presença do grupo DTU TcII, excetuando
apenas dois casos de infecção mista (DTU TcI e TcII). Dos 5.429 óbitos ocorridos em Bambuí ao longo de 31 anos, 638 (11,8%) foram devido à DCh, sendo 54,5% (348/638) referente ao sexo masculino, 45,1% (288/638) ao sexo feminino e 0,3% (2/638) tiveram registro de sexo ignorado. A faixa etária na qual se registrou o maior número de óbitos no município foi de 60 a 69 anos. Com relação à morbidade, observou-se um total 22 registros de internações em Bambuí pelo Sistema Único de Saúde no período de 1984 a 2007, sendo 7 (31,82%) referentes à homens e 15 (38,69%) à mulheres. Este trabalho pode servir como um alerta ao cuidado dos
pacientes crônicos que ainda requerem atenção médica especializada e reforça a
necessidade de constantes medidas de vigilância epidemiológica à endemia
chagásica no município de Bambuí. / Recognising the importance of Chagas disease (Chd) in Brazil, Bambuí set up epidemiological surveillance in 1974 and was the first municipality to do so. This
study aimed to characterize the current epidemiological situation of Chd in Bambuí,
identifying main groups affected, the predominant clinical forms and the parasite
groups circulating in patients. We sampled 1.782 individuals, of which 138 (7.7%)
were tested positive for Trypanosoma cruzi. Both genders above 60 years of age were seropositive for Chagas disease, also being detected in two younger women (32 and 40 years of age). In patients clinically evaluated it was possible to diagnose
digestive (7/101), undetermined (14/101), cardiac (30/101) and cardiodigestive clinic
forms (50/101), as well as the presence of DTU TCII groups, except in only two
cases of mixed infection (DTU TcI and TCII). Out of the 5.429 deaths occurring in
Bambuí over 31 years, 638 (11.8%) were due to Chd, being 54.5% (348/638) for males, 45.1% (288/638) for females and 0.3% (2/638) had unknown sex registry. The age range at which the highest number of deaths in the municipality were registered was 60 to 69 years. With respect to morbidity, there was a total of 22 records of hospitalizations in Bambuí by the Brazilian Unified Health System during the period of 1984-2007, with 7 (31.82%) related to men and 15 (38.69%) to women. This study can be useful as a warning for the care of chronic patients who still require specialized medical attention and reinforces the need for constant surveillance
measures for Chd in Bambuí.
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Estudo da diversidade genética das subpopulações de Trypanosoma cruzi I isoladas do gênero Didelphis no Brasil baseado no Multilocus Sequênce Typing (MLST)Roman Maldonado, Irene Fabiola January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2015-06-10 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / O genótipo TcI é a subpopulação de Trypanosoma cruzi mais amplamente distribuída no Brasil e nas Américas, tanto em relação ao número de espécies hospedeiras quanto à sua distribuição geográfica. Classicamente considerado como sendo homogéneo, estudos mais recentes vem demostrando o contrário na medida em que na Colombia já se descreveu a heterogeneidade desta população. Inclusive uma subpopulação denominada TcDOM, associada ao ciclo doméstico naquele pais. Com o objetivo de estudar a variabilidade genética do T. cruzi I, trinta e três amostras isoladas de espécies do gênero Didelphis, provenientes de quatro biomas do Brasil, foram analisadas mediante árvores filogenéticas, usando quatro genes constitutivos e utilizando a técnica de Tipagem por Sequências de Multilocus (MLST). As espécies do gênero Didelphis se caracterizam por seus hábitos silvestres/sinantrópicas, por serem nómades, amplamente distribuídos por todos os biomas do Brasil e ecléticos, tanto em relação aos habitats que podem ocupar quanto à alimentação, ou seja expostos a todos os ciclos de transmissão
Por estas características e por ser um dos hospedeiros mais antigos deT. cruzi foi escolhido como espécie hospedeira para a análise. Os resultados mostraram a existência de uma micro heterogeneidade presente nos isolados examinados, onde a maior diversidade foi observada no bioma Amazônia e a menor diversidade no bioma Caatinga. Observou-se uma correspondência entre a diversidade genética de T cruzi I e a diversidade faunística das áreas onde foram realizadas as coletas correpondentes a cada bioma. O gene LYT1 apresentou o maior número de sitios polimórficos nos isolados de T cruzi I, corroborando que ele constitue um gene recomendável para estudar variabilidade em TcI. O gênero Didelphis confirmou sua competência como bioacumulador da diversidade da DTU TcI de T. cruzi / cI genotype is the most widespread subpopulation of
Trypanosoma cruzi
in
Brazil as well as in the Americas. This is so, in terms of the number of host species
as well as of its g
eographic distribution.
Traditionally considered as homogeneous,
this genotype has been shown by recent studies not to be so, since in Colombia its
heterogeneity of population has already been described. This includes the so called
Tc
DOM
, which is
linked t
o the domestic cycle in that country.
In order to study the
current genetic variability of
T. cruzi I
, thirty three samples isolated from species of
the
Didelphis
spp genus adquired from four different biomes of Brazil were analyzed
by means of phylogeneti
c trees using four constitutive genes and the Multilocus
Sequencing Typing (MLST) technique.
Species of the
Didelphis
genus are
characterized by their silvatic/sinanthropic habits, for being nomads that are widely
distributed across Brazil, and for being e
clectic in terms of their habitats as well as
their feeding; i. e. exposed to all the transmission cycles. Because of these traits and
also for being one of the most ancient hosts of
T. cruzi
they were selected as the
host species for analysis. Results sho
w the existence of a micro heterogeneity in the
examined isolates, where the highest diversity was observed in the Amazonia biome,
and the lowest in the Caatinga biome. A correspondence between the genetic
diversity of
T cruzi
I and the faunal diversity of
the areas where the corresponding
captures took place. The gene LYT1 displayed the highest number of polymorphic
sites in the
T cruzi
I isolates, corroborating that it constitutes an adequate gene for
studying the variability of
TcI. The
Didelphis
genus c
onfirmed its aptitude as a
bioacumulator for the diversity of the DTU TcI of
T. cruzi
.
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Os sítios adicionais de trans-splicing na 5' UTR dos genes trans-sialidase de Trypanosoma cruzi e avaliação de seus efeitos sobre a traduçãoPaula, Tainah Silva Galdino de January 2013 (has links)
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Previous issue date: 2015-10-29 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A regulação gênica em tripanossomatídeos é policistrônica e ocorre de maneira pós-transcricional. Nas extremidades 5' e 3' dos RNA mensageiros existem segmentos que podem conter elementos regulatórios chamados UTR (Untranslated Regions), os quais são regiões transcritas, porém não-traduzidas. Para verificar se UTR de tamanhos diferentes possuem impacto na transcrição e, por conseguinte, na tradução de proteínas, selecionou-se genes da família de trans-sialidases, devido à importância destas no processo de invasão celular. A metodologia envolveu a extração de RNA total de T. cruzi CL-Brener, seguido da síntese de cDNA, PCR, clonagem dos produtos amplificados e seqüenciamento por Sanger e pelo uso do 454 Junior (Next Generation Sequencing \2013 NSG). Como as trans-sialidases correspondem a uma família gênica de cópias múltiplas, usou-se a estratégia de sequenciamento de alto-desempenho na tentativa de cobrir o maior número possível de genes desta família. Para isso foram obtidos cDNAs de trans-sialidases de CL-Brener nas formas epimastigota e tripomastigota com o iniciador 5\2019UTRTCNA, os quais apresentaram UTR com tamanhos variados entre 65 \2013 187 pb, além da obtenção de cDNAs para esta família de proteínas, em epimastigotas CL-Brener, com o iniciador 5\2019TcTS, apresentando UTR variando de 171 a 221 pb, com similaridade de sequências entre elas. Com o intuito de avaliar a correspondência entre a transcrição dos RNAs de trans-sialidases e a sua tradução, houve a necessidade de identificação das proteínas. Desenvolvemos uma metodologia de lise celular e produção de extrato proteico (denominado TcS12) a partir de células de T. cruzi no estágio epimastigota. As cepas selecionadas para esse estudo foram CL-Brener (TcVI), Dm28c (TcI), Y (TcII) e 4167 (TcIV)
O processo de lise celular foi otimizado para 107 parasitos/mL ressuspensos em 200 \03BCL de tampão de lise hipotônica (por 30 minutos a 40C), associado ao sonicador de banho (por 30 minutos a 40C). A eficiência da metodologia foi validada pela citometria de fluxo mostrando que aproximadamente 72% das células foram marcadas com iodeto de propídeo (PI). A qualidade dos extratos proteicos foi analisada por LCMS/MS usando-se a estratégia MSE label free para quantificação relativa de proteínas. Foram identificadas 1153 proteínas totais, cuja expressão proteica das cepas 4167, Dm28c e Y, quando comparada à CL-Brener (cepa referência), apresentou 32, 51 e 73 proteínas up-expressed, enquanto que 80, 92 e 60 proteínas mostraram-se down\2013expressed, respectivamente. Entre as trans-sialidases identificadas, a única cópia encontrada no extrato TcS12 (número de acesso no UniProt - Q4DGV8) apresentou seu RNAm correspondente no banco de dados de cDNA de CL-Brener, com UTR de 214 pb, estando, portanto, na faixa de tamanhos das outras UTR de trans-sialidases obtidas neste estudo. Esse resultado sugere que outros fatores, não necessariamente o tamanho per se das UTR, podem influenciar no fenômeno de tradução nesses tripanossomatídeos. Em relação aos extratos proteicos de epimastigotas gerados a partir das outras cepas, a quantidade de trans-sialidases identificadas foram de 1 (cepa 4167), 2 (cepa Dm28c) e 117 (cepa Y) cópias, indicando assim a tradução satisfatória de pelo menos uma das muitas cópias desta família gênica / Gene regulation in trypanosomatids is polycistronic and occurs in a post
-
transcriptional
way.
There are also regulatory elements named UTRs (Untranslated Regions) that are
transcribed regions, but not translated. To verify the impact of UTRs presenting different
sizes in the transcription machinery and protein translation, genes f
rom
trans
-
sialidas
e
family were selected due to its importance in the cell invasion process.
The
methodological strategies involved the extraction of total RNA from
T. cruzi
CL
-
Brener
strain
, followed by cDNA synthesis, PCR, cloning and sequencing of amplified products
by Sanger and by using the 454 Junior
(Next Generation Sequencing
–
N
G
S
).
Considering that trans
-
sialidase is a multi
-
copy gene family, this high
-
throughput
sequencing strategy
was employed in an attempt to cover
the
largest number of trans
-
sialidase genes. Trans
-
sialidase cDNAs from CL
-
Brener epimastigote and
tripomastigote were obtained with 5`UTRTCNA primer show
ing
UT
R sizes between 65
-
187 bp. The
cDNA
from this protein fam
ily were also obtained
with
the
5’TcTS primer
from CL
-
Brener
epimastigote
s
,
generating
UTRs with 171
-
221 bp
. Both 5’UTR
presented
sequence similarit
ies
between them. In order to evaluate the correspondence
between trans
-
sialidase gene transcription and t
ranslation, it was necessary to
accomplish the identification of proteins. Therefore, we developed a methodology for
cell
disruption, which resulted in a protein extract
(
referred
as TcS12
)
from epimastigote
T. cruzi
cells. The strains selected for this st
udy were CL
-
Brener (TcVI),
Dm28c (TcI), Y
(TcII) and 4167 (TcIV). The process for lysing the cells was optimized to 10
7
parasites/mL resuspended in 200 μL hypotonic lysis buffer (30 minutes at 4
o
C)
, followed
by
water bath sonication
(30 minut
e
s a
t
4
o
C)
. The
process
effic
acy
was confirmed by
FACS
,
showing that
near
72% of the cells were
successfully
stained with propidium
iodide solution (PI). The quality of the protein extracts was analyzed by LCMS/MS using
the strategy MS
E
label free for relative quant
ification of proteins. A totality of 1153
proteins were identified and the comparison of the expression profiles between the
strains 4167, Dm28c and Y
,
using the CL
-
Brener as reference, showed 32, 51 and 73
proteins up
-
expressed, and 80, 92 and 60 proteins
were shown to be down
-
expressed,
respectively.
We observed that 117 trans
-
sialidase
s
were identified in Y strain,
whilst
in
4167, Dm28c and CL
-
Brener were found 1, 2 and 1 trans
-
sialidases, respectively.
Moreover
only
one
copy
of trans
-
sialidase
found in
the TcS12 extract (UniProt
accession number
-
Q4DGV8), also met its corresponding mRNA in the CL
-
Brener
cDNA database, presenting an UTR of 214 bp, in the size range of the others trans
-
sialidase UTRs obtained herein. This result suggests th
at other
facto
r
s, but not
exclusively the UTR
sizes
per se
, could be related to the translation phenomenon in
these trypanosomes
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Atividade locomotora, uso de abrigos e predação em Rhodnius prolixus: alterações induzidas pelainfecção por tripanosomatídeosMarliére, Newmar Pinto January 2015 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2015-11-23T12:39:35Z
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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / Rhodnius prolixus é um inseto hematófago considerado principal transmissor do
Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas, na Colômbia e Venezuela. Além do T. cruzi, ele pode transmitir o Trypanosoma rangeli a várias espécies de mamíferos, incluindo o homem. Durante o dia, estes insetos são encontrados no interior de abrigos, agregados com seus co-específicos em um estado de imobilidade denominado acinese. Durante a noite, estes insetos
apresentam um perfil de atividade locomotora com dois picos característicos: um na
primeira metade da escotofase, relacionado com a procura por hospedeiros e parceiros sexuais, e outro, na interfase entre o fim da fase escura e a fotofase, direcionado à procura de refúgios. Como seus hospedeiros são comumente vertebrados predadores de insetos, os triatomíneos podem ser mortos durante sua busca e o subsequente processo de alimentação. Desta maneira, o presente estudo avaliou se a infecção pelos tripanosomas acima citados altera o nível de atividade locomotora, os padrões de uso de abrigos e as taxas de predação sofridas por
ninfas de R. prolixus. Além disso, avaliou-se a possibilidade de camundongos se
infectarem ao ingerir ninfas infectadas com T. rangeli. Inicialmente, demonstrou-se
que insetos infectados com T. cruzi apresentam uma diminuição nos níveis de
atividade locomotora durante as primeiras horas da escotofase. Em contraste, a
infecção por T. rangeli induziu a um aumento no nível de atividade locomotora durante praticamente todo o ciclo diário. Os padrões de uso de abrigos por ninfas infectadas com T. cruzi praticamente não foram alterados, porém esses insetos foram significativamente mais predados que insetos sadios. Trypanosoma rangeli modificou todos os parâmetros avaliados relacionados com o uso de abrigo. A infecção por este parasito aumentou a porcentagem de insetos que permaneceram fora dos abrigos, a exposição ao hospedeiro e consequentemente suas taxas de predação. Por fim, demonstrou-se que camundongos não se infectam com T. rangeli
pela via oral. As alterações observadas, principalmente aquelas das taxas de predação, podem ter importantes implicações na transmissão de ambos os tripanosomatídeos na natureza, e são discutidas no presente trabalho. / The hematophagous insect Rhodnius prolixus is considered the main vector of Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease, in Colombia and Venezuela. In addition to T. cruzi, these insects can transmit Trypanosoma rangeli to different mammals, including humans. During daylight hours, triatomines remain hidden in shelters, aggregated with co-specifics in an immobility state called akinesis.
During night time, these insects become active, presenting two locomotory peaks: cone during the first half of the scotophase, related to host and sexual partner search, and another at the scotophase/photophase transition, when they return to their refuges. Triatomines can be eaten during host seeking and feeding because triatomine hosts are frequently insect predators. In this study, we evaluated whether infection by T. cruzi or T. rangeli influences the locomotor activity, the use of shelters and the predation rates suffered by R. prolixus nymphs. In addition, we evaluated whether mice can become infected with T. rangeli by ingestion of infected R. prolixus nymphs. T. cruzi infected insects exhibited a decreased locomotor activity level during the first hours of the scotophase. In contrast, T. rangeli infected insects showed increased locomotor activity during most daylight hours. T. cruzi infected nymphs did not show alterations in their patterns of shelter use. However, they suffered a significantly higher predation rate than healthy bugs. On the other hand, T. rangeli infected insects presented an altered pattern of shelter use. Specifically, these insects tended to remain out of their shelters, being exposed to their hosts and suffering higher predation rates. Finally, mice did not become infected by predating on T. rangeli infected insects. These behavioral changes, and especially the higher predation rates observed for infected insects, may have important implications for the transmission of both trypanosomatids in nature.
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