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Análise preliminar do transcriptoma de células dendríticas humanas após infecção por Trypanosoma cruziJaramillo, Natalia Gil 04 July 2016 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2016. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2016-08-23T21:08:48Z
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2016_NataliaGilJaramillo.pdf: 4120292 bytes, checksum: fb6ec765888c19b556a05de5def2b1e4 (MD5) / As células dendríticas (DCs) são um dos mais importantes componentes do sistema imunológico e desempenham funções essenciais como reconhecimento do antígeno no local da infecção bem como sua internalização e apresentação de forma eficiente. Estas células tem papel central na ligação das respostas imunes naturais e adquiridas contra Trypanosoma cruzi, o agente causador da doença de Chagas. As DCs podem modular a resposta imunológica do hospedeiro, dependendo da sua subpopulação, do seu nível de maturação, das citocinas presentes no meio e do receptor dessas células envolvido nas interações com o T. cruzi, influenciando o desenvolvimento das formas clínicas da doença. Dentro desde contexto, esta dissertação apresenta a padronização da obtenção de DCs provenientes de monócitos de três doadores voluntários e otimização da diferenciação da forma tripomastigota metacíclica (TM) do parasito in vitro para posterior interação entre ambas as células e extração do RNA total para sequenciamento e montagem do transcriptoma por duplicata. Entre as cepas G e CL Brener de T. cruzi, a 2ª mostrou um melhor rendimento no que diz respeito a velocidade de crescimento em cultura, porcentagens finais de metaciclogênese e taxa de infecção. Durante a obtenção e diferenciação das DCs, três técnicas foram aplicadas para confirmação, incluindo citometria de fluxo, visualização em microscópio óptico e de fluorescência. O tempo estabelecido para interação parasito-célula hospedeira foi de 12 h, depois de transcorrido esse tempo obteve-se 39% de taxa de infecção, média de 2,4 amastigotas/DC infectada e 80% de DCs infectadas ativadas contra 47% das células controle. O passo seguinte foi a extração do RNA total das amostras controle e infectadas para sequenciamento e a montagem dos reads. Os resultados provenientes deste processo mostram ser confiáveis devido à cobertura satisfatória dos reads dentro do genoma humano com ~23.000.000 reads por amostra, e ao coeficiente de correlação próximo a 1 entre as duplicatas, fortes indícios da qualidade dos dados. A obtenção de uma visão detalhada da biologia das células apresentadoras de antígenos após os contatos iniciais com T. cruzi poderá proporcionar novos alvos para o tratamento da doença e ajudará no entendimento da evolução diferencial da doença nos pacientes e nos mecanismos de resistência e tolerância ao T. cruzi. / Dendritic cells (DCs) are one of the most important components of human immunologic system and are able to develop essential functions like antigen recognition at the infection site and its internalization and presentation are accomplished with high efficiency. These cells play a central role in linking natural and acquired immune response against Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of Chagas disease. DCs can modulate host immunologic response depending on their subset, maturation level, cytokine milieu and DC receptor involved in the interactions with T. cruzi, influencing the development of the disease clinic forms. Therefore, this dissertation presents the standardization of DCs derived from monocyte obtained from three voluntaries and the optimization of in vitro metacyclic trypomastigote form differentiation to proceed to interaction between both cells and subsequently total RNA extraction for sequencing and transcriptome assembly. Among G and CL Brener T. cruzi strains, the second yielded more with respect to culture grow velocity, final metacyclogenesis percentages and infection rate. During DCs obtainment and differentiation, three technics were applied to confirmation, including flow cytometry and optic or fluorescence microscopy visualization. A parasite-host cell interaction time of 12 h was established and after it, infection rates of about 39%, an average of 2.4 amastigotes/infected DC were obtained and also 80% of DCs from infected assays were activated. The next step was extraction of total RNA from control and infected samples for sequencing and assembly of the reads accordingly to human reference genome. These results showed good reliability because of the satisfactory human genome coverage obtained with ~23,000,000 reads per sample, and correlation coefficient of ~1 between duplicates, which are strong indications of data quality. A detailed vision of antigen presenting cells biology after initial contacts with T. cruzi could provide new targets for the disease treatment and it will help understanding the differential evolutions of Chagas disease in patients and in resistance and tolerance to parasite.
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Transmissão sexual do Trypanosoma cruzi em camundongos chagásicos crônicosRibeiro, Marcelle Araujo 29 May 2015 (has links)
Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências Médicas, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2015. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2015-11-03T16:56:43Z
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2015_MarcelleAraujoRibeiro.pdf: 2353438 bytes, checksum: 52175a4000b57978111e13f9f7945300 (MD5) / O Trypanosoma cruzi é transmitido principalmente por via vetorial, entretanto, outras vias de transmissão também apresentam importância epidemiológica, como a transfusão sanguínea, a via transplacentária e por meio da contaminação de alimentos. A transmissão sexual do T. cruzi foi sugerida por vários pesquisadores, desde a descoberta da doença de Chagas, contudo, poucos trabalhos científicos foram realizados. Pesquisas anteriores sugerem que camundongos infectados podem transmitir o parasito por via sexual durante a fase aguda da doença, quando a carga parasitária é alta. Como a maioria dos indivíduos infectados são diagnosticados na fase crônica, é de extrema importância investigar se também ocorre a transmissão sexual do T. cruzi em condições de baixa parasitemia. O presente trabalho teve como objetivo investigar a transmissão sexual do T. cruzi no modelo experimental murino durante a fase crônica. Dez camundongos BALB / c, machos e fêmeas sexualmente maduros, infectadas por via intraperitoneal com 103 formas tripomastigotas de T. cruzi, foram cruzados com animais não infectados após 90 dias da infecção. Os casais foram avaliados depois de duas gestações e a infecção pelo T. cruzi foi analisada por testes parasitológicos, sorológicos e métodos moleculares. Além disso, foi determinada a carga parasitária em diferentes tecidos por qPCR. Os resultados mostram que camundongos cronicamente infectados por T. cruzi podem transmitir o parasita aos parceiros sexuais. O exame parasitológico identificou o parasito no sangue periférico em 100% dos animais infectados intraperitonialmente e em 20% dos camundongos que foram infectados pela via sexual. Os testes sorológicos e moleculares demonstraram a presença de anticorpos específicos e amplicons em todos os animais testados após o período de 120 dias. Análise histopatológica do coração, testículo/ovário, intestino e músculo, identificou a presença de infiltrado inflamatório moderado e destruição de fibras cardíacas nos animais infectados pela via intraperitoneal, na ausência de ninhos de amastigota. A transmissão sexual do parasita para fêmeas inicialmente não infectadas também foi validada pela identificação da infecção transplacentária para os filhotes. A análise da progênie mostrou que a infecção congênita ocorreu em 25/26 (96,15%) animais, que apresentaram resultados positivos nos testes moleculares. Os resultados confirmam a transmissão sexual do T. cruzi na fase crônica da infecção. Até onde sabemos, esta é a primeira demostração experimental da transmissão sexual do T. cruzi na fase crônica da infecção. A via sexual pode ser um fator potencial de dispersão da Doença de Chagas no mundo. A determinação desta via de transmissão em animais cronicamente infectados é de suma importância, uma vez que a maioria dos indivíduos com CD encontram-se na fase crônica. Além disso, estudos epidemiológicos em áreas livres de triatomíneos são necessários para determinar o potencial de infectividade em casais em que apenas um dos parceiros tem uma história de CD, favorecendo a maior compreensão da importância da transmissão sexual em populações humanas. / Trypanosoma cruzi is mainly transmitted by haematophagous triatomines, however, other routes of transmission also have epidemiological importance, such as blood transfusion, transplacental route and through food contamination. Sexual transmission of T. cruzi was suggested by several researchers, since the discovery of Chagas disease, but, few scientific studies have been conducted on the subject. Previous work suggests that infected mice can transmit the parasite sexually during the acute phase of the disease, when the parasite load is high. Since most infected individuals are diagnosed during the chronic phase, it is important to investigate whether also occurs sexual transmission of T. cruzi in low parasitaemia conditions. This study aimed to investigate the sexual transmission of T. cruzi in murine model during the chronic phase. Ten sexually mature BALB/c, males and females, infected intraperitoneally with 103 T. cruzi trypomastigotes were crossbred with non-infected animals 90 days after infection. The couples were assayed after two pregnancies and T. cruzi infection was analyzed by parasitological, serological and molecular methods. In addition, parasite load was determined in different tissues by qPCR. The results show that mice chronically infected with T. cruzi can transmit the parasite to sexual partners. Parasitological test identified the parasite in the peripheral blood in 100% of intraperitoneally infected animals and in 20% of mice that were infected through sexual contact. The serologic and molecular analysis demonstrated the presence of specific antibodies and amplicons in all animals tested after 120 days. Histolopathological analysis of heart, testis / ovary, intestine and muscle identified the presence of mild infiltration and destruction of cardiac fibers in animals infected intraperitoneally, in absence of amastigote nests. Sexual transmission of the parasite to naive females was also validated by the identification of transplacental infection in their offspring. Progeny analysis showed that congenital infection arised in 25/26 (96.15%) animals, which showed positive results in molecular tests. The results confirm the sexual transmission of T. cruzi in the chronic phase of infection. To the best of our knowledge, this is the first confirmation of sexual transmission of T. cruzi, a route with great potential for spreading CD worldwide. The determination of this pathway in chronically infected animals is of paramount importance, since most individuals with CD are in the chronic phase. In addition, epidemiological surveys in triatomine-free areas are required to determine the infectivity rate in couples in which only one partner has a history of CD, thus helping to clarify the importance of this mode of transmission in human populations.
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Estudo citoquímico de enzimas mitocondriais de Trypanosoma cruzi em culturas de tecidoMeirelles, Maria de Nazareth Silveira Leal de Meirelles January 1978 (has links)
Submitted by Alberto Vieira (martins_vieira@ibest.com.br) on 2017-08-19T00:49:53Z
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Previous issue date: 1978 / CAPES / Fiocruz / FINEP / Um estudo citoquímico a nível de microscopia ótica e eletrônica foi feito para localizar enzimas mitocondriais do Trypanosoma cruzi em culturas de tecido usando miocárdio de embrião de pinto infectado pela cepa Y. As seguintes desidrogenases foram reveladas pelo uso de sais de tetrazolio como aceptores de hidrogênio da reação: Succinato Desidrogenase (E.C. 1.3.99.1), Isocitrato Desidrogenase (E.C. 1.1.42), a Glicerofosfato Desidrogenase (E.e. 1.1.2.1), B Hidroxibutirato Desidrogenase (E.C. 1.1.1.30) e NADPH tetrazolio Redutase (NADPH diaforase). A nível ótico a reação se revela intensa na forma de grãos de cor azul (sal NBT) localizados no citoplasma das células, em volta do núcleo e em todo o espaço citoplasmático útil nas células parasitadas. Nas formas intracelulares esferomastigotas (amastigotas) e epimastigotas a reação se revela na forma de 5 a 7 grãos e nas formas livres de 8 a 15 grãos para as enzimas Isocitrato e Succinato Desidrogenases e NADPH tetrazolio Redutase. A nível ultra-estrutural o produto eletrondenso (sal DS NBT) se localiza nas mitocôndrias da célula hospedeira na região das cristas e membrana interna mitocondriais. Nas formas intracelulares também a reação é de cristas e membrana interna em todas as regiões da mitocôndria do corpo celular. Para as enzimas da via dos lipídios a Glicerofosfato e B Hidroxibutirato Desidrogenases a reação se revelou de membrana interna mitocondrial. Raras cristas são vistas com reação. A atividade da Citocromo . oxidase (E.C. 1.9.3.1) foi melhor revelada utilizando-se Diaminobenzidina (DAB) como doador de hidrogênio da reação. A localização desta enzima na forma de grãos marrons no citoplasma celular e num produto eletron-denso nas cristas e membrana interna das mitocôndrias das células parasitos intracelulares se revelou semelhante às das enzimas descritas acima: Isocitrato e Succinato Desidrogenases e NADPH
tetrazolio Redutase. / In order to locate the activity of rnitochondrial enzymes in Trypanosoma cruzi in tissue cultures a cytochemical study at light and electron rnicroscopic levels was performed using chick embryo heart rnuscle cultures infected by the Y strain of the parasite. Tetrazolium salts were used as hidrogen aceptors of the reaction to locace Succinate Dehydrogenase (E.C. 1.3.99.1), Isocitrate Dehydrogenase (E. C. 1 . 1. 42 ) , a Glycerophosphate Dehydrogenase (E.C. 1. 1. 2. 1) , b Hydroxybutyrate Dehydrogenase (E.C. 1.1.1.30) and NADPH Tetrazolium Redutase. Light microscopy showed an intense reaction. Blue granules (NBT salt) were seen within the cytoplasm of the cells in the region of the nucleus. In parasitized cells they were seen throughout the cytoplasm not occupied by parasites. Isocitrate Dehydrogenase, Succinate Dehydrogenase and NADPH Tetrazoliurn Redutase activity was revealed as 5 to 7 granules in the spherornastigotes (amastigote) and epimastigotes and as 8 to 15 granules in the trypomastigotes. At the ultrastructural level the electrondense product (DS NBT salt) was concentrated in the host cell rnitochondria at the region of the cristae; and inner membrane. In the intracellular forms of the parasite the reaction also occurs at the cristae and inner rnembrane in all regions of the
mitochondria. For the lipid pathway enzymes a Glycerophosphate Dehydrogenase and B Hydroxybutyrate Dehydrogenase the reaction was mainly located at the inner membrane of the mitochondria. Few cristae were seen with the reaction. Cytochrome Oxidase (E. C. 1. 9. 31. 1) activity was best revealed with the use of diaminobenzidine (DAB) as hydrogen donor and sodium cacodylate ( 0. lM, pH 7. 2 ) as buffer. At the host cells and intracellular parasites the activity was observed in the form of brown granules in the cytoplasm and as an electrondense product at the cristae and inner membrane of the mitochondria.
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Avaliação diagnóstica para Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi em gatos domésticos procedentes da associação protetora dos animais do município de Ilha Solteira, SP, BrasilMartin, Maria Fernanda Alves [UNESP] 19 April 2013 (has links) (PDF)
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Previous issue date: 2013-04-19Bitstream added on 2014-06-13T19:51:39Z : No. of bitstreams: 1
000732128.pdf: 1845052 bytes, checksum: 8a61d1ec584ab68f087995ac86705c8d (MD5) / As leishmanioses são zoonoses que acometem o homem e outras espécies de mamíferos silvestres e domésticos. É uma doença causada por protozoários intracelulares do gênero Leishmania. O agente causador da leishmaniose visceral no Novo Mundo é Leishmania infantum (syn. L. chagasi), sendo Lutzomya longipalpis o principal vetor responsável pela sua transmissão. O gato doméstico também desenvolve a infecção, geralmente de forma assintomática, podendo atuar também como reservatório destes protozoários. Tendo em vista a inespecificidade dos achados clínicos da leishmaniose felina (LF), a ausência de sinais e a semelhança dos aspectos clínicos dessa enfermidade com outras enfermidades em gatos, como a micoplasmose, leucemia felina (FIV) e síndrome da imunodeficiência felina (FeLV), esta zoonose deve ser sistematicamente incluída nas suspeitas clínicas de gatos em áreas endêmicas para leishmanioses canina e humana. Foram utilizadas amostras de sangue de 55 gatos procedentes da Associação Protetora dos Animais (APAISA) de Ilha Solteira, co-habitantes com cães portadores de leishmaniose visceral. À técnica de hemocultura, 16,4% (9/55) dos gatos apresentaram protozoários flagelados. A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para L. infantum (syn. L. chagasi) foi testada em 51 gatos, revelando 62,7% (32/51) de animais reagentes. Testando-se a técnica de RIFI para Trypanosoma cruzi, 54,9% (28/55) dos animais foram reagentes. Pela busca de anticorpos anti-Leishmania e anti-Trypanosoma, pela técnica de ELISA indireto com antígeno bruto, encontrou-se 72,5% (37/51) e 39,2% (20/55) de animais reagentes, respectivamente. Com o teste de ELISA indireto com rK39 para Leishmania infantum (syn. L.chagasi), obteve-se a positividade em 21,6% (11/51) dos felinos testados. Pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), das 55 amostras de sangue total testadas, cinco (9,1%) foram positivas... / The leishmaniasis are zoonoses that affect humans and other species of wild and domestic mammals. It is a disease caused by intracellular protozoa of the genus Leishmania. Leishmania infantum (syn. L. chagasi) is the causative agent of visceral leishmaniasis in the New World, Lutzomyia longipalpis is the main vector responsible for transmission. The cat, besides living closely with humans, also develops infection, usually asymptomatic and may also act as a reservoir of these protozoa. Given the specificity of clinical feline leishmaniasis (LF), the absence of pathognomonic signs and symptoms, and the similarity of the clinical aspects of this disease with other very common in cats, as mycoplasmosis, feline leukemia virus (FIV) and immunodeficiency syndrome FeLV (Feline), this zoonosis should be systematically considered in the clinical suspicions of cats in of the areas endemic for canine and human leishmaniasis. Samples of blood from 55 cats coming from the Association for the Protection of Animals (APAISA) of Ilha Solteira, co-inhabitants with dogs with visceral leishmaniasis, were collected. The blood culture technique showed 16,4% (9/55) flagellate protozoa. The technique of indirect fluorescent antibody (IFA) for L. infantum (syn. L. chagasi) was tested on 51 cats, showing 62,7% (32/51) of animals reagents. Testing the technique of IFA for Trypanosoma cruzi, 54,9% (28/55) of animals were reactive. The search for anti-Leishmania antibodies and anti-Trypanosoma, the technique of ELISA with crude antigen, we found 72,5% (37/51) and 39,2% (20/55) of animals reagents, respectively. By ELISA with indirect rK39 for Leishmania infantum (syn. L.chagasi) gave a positive result in 21,6% (11/51) of tested cats. For the PCR, the 55 whole blood samples tested, five (9.1%) were positive for Leishmania spp. Confronting all the results obtained with the diagnostic techniques , is possible to determine the ...
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Conversão in vitro e in vivo do pró-fármaco hidroximetilnitrofural, candidato a fármaco antichagásico /Serafim, Eliana Ometto Pavan. January 2008 (has links)
Resumo: A doença de Chagas, descoberta por Carlos Chagas há aproximadamente 100 anos, ainda constitui um grave problema de Saúde Pública. É considerada doença extremamente negligenciada, uma vez que afeta exclusivamente as populações dos países em desenvolvimento. Os pacientes dessa doença são, em sua maioria, de baixa renda e, não representando mercado, ficam excluídos do escopo e dos esforços de Pesquisa e Desenvolvimento das Indústrias Farmacêuticas. Estima-se que entre 18 e 20 milhões de indivíduos estejam infectados pelo Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença e de, aproximadamente, 120 milhões, a população em risco de contaminação na América Latina. O tratamento da doença de Chagas continua sendo um desafio, pois apenas dois fármacos nitro-heterocíclicos são comercializados no mundo: nifurtimox (Lampit8, Bayer) e benznidazol (Rochagan8, Roche), sendo este último, o único fármaco disponível no mercado brasileiro. Dentre os compostos potencialmente antichagásicos em estudo, o hidroximetilnitrofural (NFOH) mostrou maior atividade tripanomicida e menor mutagenicidade do que o nitrofural (composto matriz) em todos estágios de desenvolvimento de um fármaco. Em 2006, os estudos pré-clínicos de toxicidade mostraram que o NFOH apresentou DL50 >2000 mg em ratos, dose considerada segura pela Organização Mundial da Saúde (OMS) e promissor para a continuidade dos ensaios. Nesse sentido, o objetivo deste trabalho foi estudar a conversão in vitro e in vivo do NFOH em NF. Assim, metodologia analítica foi desenvolvida e validada para a determinação de NF e NFOH em matriz de plasma humano e rato e foram realizados estudos de conversão in vitro (pH 1,2 e 7,4) e ensaios in vivo (farmacocinéticos) em ratos. Os resultados mostraram que o NFOH apresenta estabilidade in vitro, é metabolizado em plasma (humano e de ratos) e também, ...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Chagas disease, discovered by Carlos Chagas about a century ago and also known as American trypanosomiasis, is still a serious Public Health problem. The disease is considered extremely neglected because it afflicts exclusively populations in developing countries. Most Chagas' disease patients fall within the low income bracket and, being economically insignificant, are excluded from the research and development scope and efforts of the Pharmaceutical Industry. It is estimated that 18 and 20 million people in Latin America are infected with Trypanosoma cruzi, the etiologic agent of the disease, and that approximately 120 million people are at risk of contamination in the continent. Chagas' disease treatment is a challenge because only two nitroheterocyclic drugs are market worldwide, namely nifurtimox (Lampit8, Bayer) and benznidazol (Rochagan8, Roche), and the latter is the only drug available in the Brazilian market. Among the potentially anti-Chagas compounds under study, hydroxymethyl nitrofural (NFOH) has shown higher tripanomicide activity and lower mutagenicity than nitrofural (active compound) in all stages of development of the parasite. In 2006, preclinical toxicity studies showed that NFOH presented LD50 higher than 2000 mg in rats. This value is considered safe by the World Health Organization (WHO) and promising for continuing test. In this context, the purpose of this work was to investigate the in vivo stability of NFOH. To this end, an analytical methodology was designed and validated for the determination of NF and NFOH in human and rat blood plasma. Conversion studies were carried out in vitro (pH 1.2 and 7.4) and in vivo (pharmacokinetic studies) with rats. The results indicated that NFOH presents in vitro stability, and is converted in plasma (human and rat) and in the liver. The NFOH displayed a profile ...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Maria Lucia Ribeiro / Coorientador: Chung Man Chin / Banca: Lourdes Campaner dos Santos / Banca: Manoel Lima de Menezes / Banca: Cláudio Viegas Junior / Banca: Elizabeth Igne Ferreira / Doutor
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Avaliação diagnóstica para Leishmania spp. e Trypanosoma cruzi em gatos domésticos procedentes da associação protetora dos animais do município de Ilha Solteira, SP, Brasil /Martin, Maria Fernanda Alves. January 2013 (has links)
Orientador: Simone Baldini Lucheis / Coorientador: Wilma Aparecida Starke Buzetti / Banca: Denise Saraiva Bresciani / Banca: Virginia Bodelão Richini Pereira / Resumo: As leishmanioses são zoonoses que acometem o homem e outras espécies de mamíferos silvestres e domésticos. É uma doença causada por protozoários intracelulares do gênero Leishmania. O agente causador da leishmaniose visceral no Novo Mundo é Leishmania infantum (syn. L. chagasi), sendo Lutzomya longipalpis o principal vetor responsável pela sua transmissão. O gato doméstico também desenvolve a infecção, geralmente de forma assintomática, podendo atuar também como reservatório destes protozoários. Tendo em vista a inespecificidade dos achados clínicos da leishmaniose felina (LF), a ausência de sinais e a semelhança dos aspectos clínicos dessa enfermidade com outras enfermidades em gatos, como a micoplasmose, leucemia felina (FIV) e síndrome da imunodeficiência felina (FeLV), esta zoonose deve ser sistematicamente incluída nas suspeitas clínicas de gatos em áreas endêmicas para leishmanioses canina e humana. Foram utilizadas amostras de sangue de 55 gatos procedentes da Associação Protetora dos Animais (APAISA) de Ilha Solteira, co-habitantes com cães portadores de leishmaniose visceral. À técnica de hemocultura, 16,4% (9/55) dos gatos apresentaram protozoários flagelados. A Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI) para L. infantum (syn. L. chagasi) foi testada em 51 gatos, revelando 62,7% (32/51) de animais reagentes. Testando-se a técnica de RIFI para Trypanosoma cruzi, 54,9% (28/55) dos animais foram reagentes. Pela busca de anticorpos anti-Leishmania e anti-Trypanosoma, pela técnica de ELISA indireto com antígeno bruto, encontrou-se 72,5% (37/51) e 39,2% (20/55) de animais reagentes, respectivamente. Com o teste de ELISA indireto com rK39 para Leishmania infantum (syn. L.chagasi), obteve-se a positividade em 21,6% (11/51) dos felinos testados. Pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR), das 55 amostras de sangue total testadas, cinco (9,1%) foram positivas ... / Abstract: The leishmaniasis are zoonoses that affect humans and other species of wild and domestic mammals. It is a disease caused by intracellular protozoa of the genus Leishmania. Leishmania infantum (syn. L. chagasi) is the causative agent of visceral leishmaniasis in the New World, Lutzomyia longipalpis is the main vector responsible for transmission. The cat, besides living closely with humans, also develops infection, usually asymptomatic and may also act as a reservoir of these protozoa. Given the specificity of clinical feline leishmaniasis (LF), the absence of pathognomonic signs and symptoms, and the similarity of the clinical aspects of this disease with other very common in cats, as mycoplasmosis, feline leukemia virus (FIV) and immunodeficiency syndrome FeLV (Feline), this zoonosis should be systematically considered in the clinical suspicions of cats in of the areas endemic for canine and human leishmaniasis. Samples of blood from 55 cats coming from the Association for the Protection of Animals (APAISA) of Ilha Solteira, co-inhabitants with dogs with visceral leishmaniasis, were collected. The blood culture technique showed 16,4% (9/55) flagellate protozoa. The technique of indirect fluorescent antibody (IFA) for L. infantum (syn. L. chagasi) was tested on 51 cats, showing 62,7% (32/51) of animals reagents. Testing the technique of IFA for Trypanosoma cruzi, 54,9% (28/55) of animals were reactive. The search for anti-Leishmania antibodies and anti-Trypanosoma, the technique of ELISA with crude antigen, we found 72,5% (37/51) and 39,2% (20/55) of animals reagents, respectively. By ELISA with indirect rK39 for Leishmania infantum (syn. L.chagasi) gave a positive result in 21,6% (11/51) of tested cats. For the PCR, the 55 whole blood samples tested, five (9.1%) were positive for Leishmania spp. Confronting all the results obtained with the diagnostic techniques , is possible to determine the ... / Mestre
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Planejamento, sintese e avaliação biológica de derivados furoxânicos e benzofuroxânicos potencialmente antichagásicos /Bosquesi, Priscila Longhin. January 2013 (has links)
Orientador: Chung Man Chin / Coorientador: Jean Leandro dos Santos / Banca: Carlota de Oliveira Rangel Yagui / Banca: Gustavo Henrique Goulart Trossini / Banca: Adelia Amelia de Almeida / Banca: João Aristeu da Rosa / Resumo: Há mais de um século de sua descrição, a doença de Chagas continua sendo um dos maiores problemas de saúde pública. Resultante da infecção pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi, a doença é endêmica nos 21 países da América Latina e estima-se que 10 milhões de pessoas estejam infectadas e aproximadamente 100 milhões estão sob o risco de contaminação. Apenas dois fármacos são disponíveis para tratamento da doença, nifurtimox e benznidazol. Ambos são ativos somente na fase aguda da doença, além de causarem efeitos colaterais graves. No Brasil apenas o benznidazol é comercializado. Neste sentido, a desenvolvimento de fármacos tripanossomicidas é de extrema importância. Estudos mostraram que derivados nitrofurânicos inibem a tripanotiona redutase, considerada enzima chave do metabolismo antioxidativo do T. cruzi. Pesquisas com o hidroximetilnitrofural (NFOH) tem demonstrado maior atividade in vitro e in vivo contra T. cruzi com menor toxicidade quando comparado ao fármaco matriz, nitrofural. Um amplo espectro de atividades biológicas tem sido relatada para compostos furoxânicos (N-óxido-1,2,5-oxadiazol) e benzofuroxânicos (N-óxido-benzo[1,2-c]1,2,5-oxadiazol), sendo assim, foi obtida uma série de derivados isósteros de nitrofural, substituindo o anel nitrofurano pelos respectivos furoxanos e benzofuroxanos. Os compostos obtidos foram avaliados quanto à atividade tripanossomicida in vitro em formas epimastigotas e amastigotas de T. cruzi, capacidade de doação de óxido nítrico e mutagenicidade in vivo. Foram sintetizados, identificados e caracterizados oito compostos. Os derivados benzofuroxânicos (compostos 20 e 21) foram os mais ativos contra as formas epimastigotas de T. cruzi, entretanto no ensaio contra as formas amastigotas, sete apresentaram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: For more than a century of his description, Chagas disease remains a major public health problems. Resulting from infection flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, is endemic in 21 Latin American countries and it is estimated that 10 million people are infected and about 100 million are at risk of contamination. Only two drugs are available for treating the disease, nifurtimox and benznidazole. Both are active only during the acute phase of the disease, and cause serious side effects. In Brazil only benznidazole is marketed. In this sense, the development of drugs trypanosomicide is extremely important. Studies demonstrated that nitrofurans derivatives inhibit the trypanothione reductase, the key enzyme in the metabolism considered antioxidant T. cruzi. Research with hydroxymethylnitrofurazone (NFOH) has shown greater activity in vitro and in vivo against T. cruzi with less toxicity when compared to the drug matrix, nitrofurazone (NF). A wide spectrum of biological activities have been reported for compounds furoxans (1,2,5-oxadiazol-2-N-oxide) and benzofuroxans (benzo[1,2-c]-1,2,5-oxadiazol-1-N-oxide) and thus was obtained a series of derivatives of Nitrofural isosteres, nitrofuran ring by replacing the respective furoxans and benzofuroxans. The compounds were evaluated for in vitro trypanocidal activity in epimastigotes and amastigotes of T. cruzi, ability to donate nitric oxide and mutagenicity in vivo. Were synthesized, characterized and identified eight compounds. Benzofuroxans derivatives (compounds 20 and 21) were the most active against epimastigotes of T. cruzi, however the assay against amastigotes, seven showed IC50 higher than or equal to a drug used as reference (benznidazole) and less mutagenic potential when compared with the results obtained for the drugs nitrofurazone... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor
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Farmacocinética pré-clínica do hidroximetilnitrofural (NFOH) - potencial pró-fármaco antichagásico /Nogueira Filho, Marco Antonio Ferraz. January 2013 (has links)
Orientador: Rosângela Gonçalves Peccinini / Banca: Elza Kimura / Banca: Jean Leandro dos Santos / Resumo: O pró-fármaco hidroximetilnitrofural (NFOH) apresenta atividade antichagásica com grande diminuição da toxicidade e maior atividade contra formas amastigotas do T. cruzi quando comparadas ao seu fármaco matriz nitrofural (NF). Essas vantagens tornam o pró-fármaco uma possível alternativa terapêutica tanto para o tratamento da fase aguda, quanto da fase crônica da doença de Chagas. Nesse trabalho foi investigado o perfil farmacocinético do NFOH em modelo animal não roedor, estudo necessário para a continuidade do desenvolvimento do pró-fármaco. O NF foi administrado por via intravenosa e oral nas doses de 6,35 e 63,5 mg/kg, respectivamente, e o NFOH 8,05 e 80,5 mg/kg respectivamente; em coelhos albinos (n=20). Após a administração foram realizadas coletas seriadas de sangue dos animais por punção venosa. As amostras foram processadas e analisadas por método bioanalítico validado, utilizando-se um sistema MS. O sistema operou em modos positivo e negativo para as leituras dos compostos - NF e NFOH- e do padrão interno (diclofenaco 5ug/mL em metanol), sob eluição de fase móvel composta por água:metanol (50:50). As médias dos parâmetros farmacocinéticos foram calculadas pelas curvas de concentração plasmática versus tempo e comparadas pelo teste de Mann-Whitney (p<0,05). O NF apresentou biodisponibilidade oral de 114,97% no modelo animal e na administração oral este composto apresentou meia-vida de eliminação de 276,09 minutos, estatisticamente diferente da meia vida apresentada na administração intravenosa (17,32 minutos). A administração do NFOH permitiu o cálculo dos parâmetros farmacocinéticos tanto do pró-fármaco quanto do NF liberado pelo mesmo. O perfil farmacocinético do NF administrado comparado ao do NF obtido do pró-fármaco não foi estatisticamente diferente. A biodisponibilidade oral relativa do NF a partir do pró-fármaco administrado foi de 60,1% / Abstract: The prodrug hydroximethylnitrofurzone (NFOH) presents antichagasic activity with greatly reduced toxicity compared to its drug matrix nitrofurazone (NF). Besides these new characteristics, the prodrug was more active against the parasite T. cruzi amastigotes. These advantages make the prodrug a possible therapeutic alternative for the treatment of both acute and the chronic phase of Chagas disease. Male albino rabbits (n=20) were divided into four groups and subjected to single administration of NF and NFOH. NF was administered intravenously and orally in doses of 6.35 and 63.5 mg / kg respectively, and NFOH, in doses 8.05 and 80.5 mg / kg respectively. After administration, serial blood samples were collected by venipuncture. The samples were processed and the final product was analyzed by MS. The system operated in positive and negative modes for the determination of compounds and internal standard, under elution of the mobile phase 50:50 water: methanol. The NF presented an oral bioavailability of 114.97% in the albino rabbits and oral administration showed half-life of 276.09 minutes due to the absorption process against 17.32 obtained in the intravenous administration. The administration of NFOH allowed the calculation of pharmacokinetic parameters of the prodrug, and the NF obtained from NFOH administration. Comparing the behavior of NF administered orally and obtained from the prodrug was not evidenced significant changes in the pharmacokinetic profiles. The relative oral bioavailability of NF obtained from the NFOH was 60,1%. / Mestre
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Estudo de hidroximetilnitrofural (Nfoh) na fase crônica da doença de chagas em modelo animal /Scarim, Cauê Benito. January 2016 (has links)
Orientador: Chung Man Chin / Banca: Cleverton Roberto de Andrade / Banca: João Aristeu da Rosa / Resumo: A tripanosomíase americana ou doença de Chagas é uma zoonose endêmica em 21 países das Américas do Sul e Central, apontada como uma grave doença parasitária resultante da infecção pelo parasito hemoflagelado denominado Trypanosoma cruzi que utilizam insetos triatomíneos como vetores. Existem dois fármacos para o tratamento dessa enfermidade, o nifurtimox (NFX) e o benznidazol (BNZ), ativos apenas na fase aguda da doença, sendo que no Brasil apenas o BNZ é comercializado. Em busca de novas alternativas para o tratamento, destaca-se o hidroximetilnitrolfural (NFOH), ativo contra as formas tripomastigotas e amastigotas em ensaio in vitro e in vivo. O objetivo deste trabalho foi realizar ensaios in vivo em camundongos Balb/c, na fase crônica da doença de Chagas. Neste sentido foi padronizado o ensaio em fase crônica, utilizando a cepa Y de T.cruzi, com inóculos de 102 formas tripomastigotas. Os animais foram tratados durante 60 dias com NFOH e BNZ seguido de imunossupressão induzida por dexametasona durante 14 dias. Ao final do protocolo os animais foram eutanasiados, pesados, realizado as análises bioquímicas (TGO, TGP, CK-MB, e GGT) e histopatológica. Os resultados demonstraram que nos animais tratados com NFOH e BZN não foi observada a reativação da parasitemia após a imunossupressão, enquanto no controle positivo houve reativação em 55,5% dos animais. Os ensaios bioquímicos não demonstraram alteração nos valores em todos os grupos. Os pesos relativos bem como a análise macroscópica do coração, vesícula biliar, baço e rins do grupo NFOH foram similares ao grupo controle negativo enquanto o grupo BZN foi semelhante ao grupo controle positivo. Na analise histopatológica, o grupo NFOH apresentou apenas a presença de um amastigota em um coração dentre oito animais (1/8) enquanto o grupo BZN foi observado presença de um à dois ninhos... / Abstract: The American trypanosomiasis or Chagas disease is an endemic zoonosis in 21 countries of South and Central America, identified as a serious parasitic disease resulting from infection by the hemoflagellate parasite called Trypanosoma cruzi, which use triatomine insects as vectors. There are two drugs for treatment of Chagas disease, nifurtimox (NFX) and benznidazole (BNZ), that are active only in the acute phase of the disease,, and in Brazil only the BNZ is marketed. In search of new alternatives for treatment, there is the hidroximetilnitrolfural (NFOH), which was active against trypomastigotes and amastigotes form during in vitro and in vivo assay. The aim of this work was to evaluate NFOH in an in vivo chronic phase assay of Chagas disease, using BALB / c. It has been standardized a chronic phase assay, using Y strains of T. cruzi with inocula of 102 trypomastigotes. The animals were treated for 60 days with NFOH and BNZ followed by immunosuppression induced by dexamethasone for 14 days. At the end of the protocol, the animals were euthanized, weighed, performed the biochemical (ALT, AST, CK-MB, and GGT) and histopathological analysis. The results showed that in animals treated with NFOH and BZN were not observed reactivation of the parasitemia after immunosuppression, while in positive control was observed reactivation in 55.5% of animals. The biochemical assays demonstrated no alteration in the values in all groups. The relative weights as well as the macroscopic examination of the heart, gallbladder, spleen, and kidneys of NFOH group were similar to negative control group while BZN group was similar to the positive control group. In the histopathological analysis, the NFOH group showed only the presence of amastigotes in one heart of eight animals (1/8), while in BZN group was observed the presence of one to two nests in four hearts (4/8) and in the liver ... / Mestre
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Estudo de transcriptomas por RNAseq em tecidos de cabeça e glândula salivar de Rhodnius montenegrensis e Rhodnius robustus (Hemiptera, Reduviidade, Triatominae) /Carvalho, Danila Blanco de. January 2016 (has links)
Orientador: João Aristeu da Rosa / Coorientador: Reinaldo Alves de Brito / Banca: Daniel Alfredo Frías Lasserre / Banca: Maria Tercília Vilela de Azeredo Oliveira / Banca: Cleber Galvão / Banca: Mara Cristina Pinto / Resumo: A doença de Chagas é uma das principais parasitoses que ocorrem na América Latina, cujo agente etiológico é o protozoário Trypanosoma cruzi, que é veiculado por triatomíneos. Estima-se que entre oito milhões de pessoas estejam infectadas. Rhodnius é um dos gêneros que pode veicular T. cruzi e inclui espécies estreitamente relacionadas com baixos níveis de diferenciação morfológica. Atualmente, existem 19 espécies conhecidas, entre elas, Rhodnius montenegrensis que é considerada a fim de Rhodnius robustus. Para investigar as diferenças genéticas interespecíficas dessas duas espécies utilizou-se a metodologia de larga escala RNA-seq. Por essa técnica foram geradas quatro bibliotecas de RNA total de cabeças e glândulas salivares de machos de R. montenegrensis e R. robustus. Após filtrar pela qualidade, foram realizadas montagens de novo de cada uma das espécies. Esse processo resultou em 64952 contigs para R. montenegrensis e 70894 para R. robustus com N50 de 2100 para as duas espécies aproximadamente. Com base na montagem de R. robustus, foi feita uma procura por SNPs e foram encontrados 3055 polimorfismos interespecíficos fixados. Foram selecionados 216 transcritos com alta divergência contendo apenas polimorfismos fixados entre as duas espécies. O teste de enriquecimento nesses transcritos revelou uma sobrerepresentação de oito termos relacionados ao complexo da proteína clatrina. Os resultados obtidos mostram que R. montenegrensis e R. robustus apresentam uma quantidade substancial de polimorfismos interespecíficos fixados o que sugere um alto grau de divergência genética entre as duas espécies. / Abstract: Chagas disease is one of the main parasitic diseases found in Latin America infecting an estimated eight million people worldwide. The protozoan Trypanosoma cruzi, its etiological agent, uses triatomines as a disease vector, among them the genus Rhodnius. This genus includes species that have been difficult to differentiate because they show low amounts of morphological differentiation. Despite that, there are currently 19 known species described, one of them Rhodnius montenegrensis, which has been confounded with Rhodnius robustus. Here we generated Large-scale RNA-sequencing data from heads and salivary glands to investigate genetic differences between these two species. We produced a total of four RNAseq libraries from heads and salivary glands of males of R. montenegrensis and R. robustus. de novo transcriptome assemblies produced for each species resulted in 64,952 contigs for R. montenegrensis and 70,894 contigs for R. robustus, with N50 of approximately 2100 for both species. We performed a search for SNPs based on the more complete R. robustus assembly and found 3,055 fixed interspecific differences. We identified two hundred and sixteen transcripts with high levels of divergence which contained fixed polymorphisms found between the two species. A Gene Ontology enrichment analysis revealed that these highly differentiated transcripts were enriched for the following terms: clathrin coat of endocytic vesicle, AP-2 adaptor complex, clathrin-coated endocytic vesicle, clathrincoated endocytic vesicle membrane, clathrin coat of coated pit, endocytic vesicle membrane, clathrin vesicle coat, and coated pit. The results reveal that R. montenegrensis and R. robustus show a substantial quantity of fixed interspecific polymorphisms, a finding which suggests a high degree of genetic divergence between the two species, which likely corroborates their species status. / Doutor
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