Submitted by Luciane Willcox (luwillcox@gmail.com) on 2016-09-01T17:38:04Z No. of bitstreams: 1 diserrtacao Dec 2015 com ficha catalog.pdf: 1787907 bytes, checksum: 7c2f9f3193dc6d7ee34d8018c1bb33ee (MD5) / Approved for entry into archive by Luciane Willcox (luwillcox@gmail.com) on 2016-09-01T17:43:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 diserrtacao Dec 2015 com ficha catalog.pdf: 1787907 bytes, checksum: 7c2f9f3193dc6d7ee34d8018c1bb33ee (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-01T17:43:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 diserrtacao Dec 2015 com ficha catalog.pdf: 1787907 bytes, checksum: 7c2f9f3193dc6d7ee34d8018c1bb33ee (MD5) / A presente dissertação teve por objetivo avaliar o potencial tripanocida in vitro dos óleos essenciais (OEs) de Piper hispidinervum (pimenta longa) e Piper aduncum (pimenta de macaco) sobre diferentes formas evolutivas de Trypanosoma cruzi clone Dm28c (epimastigotas; amastigotas intracelulares; tripomastigotas metacíclicas e de cultivo). O OE de pimenta longa é rico em safrol e demonstrou baixa atividade contra T. cruzi (IC50/24h>100 μg/ml para formas epimastigotas e tripomastigotas) e leve citotoxicidade contra células Vero. O OE de pimenta de macaco foi efetivo contra formas epimastigotas (IC50/24h=84,74 μg/ml), sendo porém mais eficaz contra formas tripomastigotas metacíclicas (12,1 μg/ml) e de cultura a 28°C (2,8 μg/ml). Os valores obtidos com formas tripomastigotas foram melhores do que os obtidos com a droga de referência benzonidazol a 28°C (IC50/24h=16,1 μg/ml). Entretanto, contra formas amastigotas o benzonidazol foi mais ativo que o OE de pimenta de macaco (IC50/24h=0,8 μg/ml e 9 μg/ml respectivamente). Testes realizados com tripomastigotas de cultura a 4°C (mesma condição térmica de armazenamento de bolsas de sangue) demonstraram alta atividade do OE de pimenta de macaco (IC50/24h = 3,8 μg/ml), em comparação com os resultados obtidos com a droga de referência violeta de genciana (IC50/24h=60,7 μg/ml). Avaliação da citotoxicidade do OE de pimenta de macaco contra células Vero a 37°C (CC50/24h=42,8 μg/ml) e hemácias a 4°C (CC50/24h=351,6 μg/ml) demonstrou um alto índice de seletividade (IS) contra tripomastigotas (11,26 e 92,52, respectivamente). Estes índices sugerem que o OE de pimenta de macaco não é um candidato favorável para pacientes chagásicos, mas sim um composto promissor para tratamento de bolsas de sangue. Ensaios por citometria de fluxo evidenciaram que o OE de pimenta de macaco não afeta o ciclo celular de formas epimastigotas, mas inibe consideravelmente o potencial da membrana mitocondrial destas formas. Análise por microscopia eletrônica de transmissão demonstrou que tratamento de tripomastigotas com 3,8 μg/ml (correspondente ao IC50/24h) produz danos ultra-estruturais como lise de membranas e perda de citoplasma. Análise por Cromatografia de Gases e Espectroscopia de Massas (CG-EM) demonstrou que os constituintes majoritários do OE de pimenta de macaco são nerolidol e linalol (25% e 13,42% respectivamente). Testes com tripomastigotas de cultura a 4°C demonstraram que nem sempre o constituinte majoritário de um OE é o mais eficiente como tripanocida, pois linalol apresentou melhor efeito tripanocida (IC50/24h=306 ng/ml) que nerolidol, o qual não induziu alterações visíveis por microscopia óptica. Nossos dados indicam que linalol é um composto promissor contra tripomastigotas, pois foi 168,6 vezes mais eficiente que benzonidazol em testes com formas tripomastigotas de cultura. Em conclusão, as propriedades tripanocidas do OE da pimenta de macaco e seu constituinte linalol devem ser estudadas mais aprofundadamente, especialmente devido à sua seletividade contra tripomastigotas de cultura. Linalol surge como um potencial candidato a uma droga para aplicação em tratamento de bolsas de sangue.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La enfermedad de Chagas o Tripanosomiasis Americana es uno de los principales problemas de salud pública en América Latina. Dicha patología determina además severas consecuencias a nivel socioeconómico, tanto en la región endémica como en países no endémicos, debido a la globalización de la enfermedad. El agente causal es el protozoario hemoflagelado Trypanosoma cruzi el cual afecta diversas especies de mamíferos, incluido el humano. Este parásito unicelular presenta un ciclo de vida indirecto, precisando de un vector biológico para su transmisión (insectos hematófagos triatominos). T. cruzi se encuentra en tres formas celulares: epimastigote en insectos vectores; tripomastigote, tanto en vectores triatominos (tripomastigote metacíclico) como en hospederos mamíferos (tripomastigote sanguíneo) y amastigote, forma intracelular presente en hospederos mamíferos. Estas diversas formas parasitarias dan cuenta de la gran plasticidad del parásito para adaptarse a las diferentes condiciones del medio al que se enfrenta, lo que implica notables cambios de su forma, motilidad y características bioquímicas. T. cruzi sobrevive al daño del ADN por especies reactivas de oxígeno y nitrógeno generadas en ambos hospederos, probablemente por activación del mecanismo de escisión de bases (vía BER), proceso altamente conservado en el que las endonucleasas apurínicas/apirimidínicas (APEs) juegan un rol fundamental. APE1 es la principal AP endonucleasa de Homo sapiens encargada de reparar sitios abásicos en el DNA. Estudios demuestran que ratones carentes de APE1 mueren tempranamente en el desarrollo, poniendo de manifiesto su importancia en la reparación del DNA. Indagaciones destinadas a hacer más eficientes los tratamientos quimioterapéuticos contra el cáncer, desarrollaron una forma dominante negativa para APE1 que se une al sustrato con una mayor afinidad que la proteína nativa, pero que carece de actividad AP endonucleasa. De esta forma se impediría la reparación del DNA de células tumorales, incrementando su porcentaje de apoptosis por acción de anticancerígenos genotóxicos. En T. cruzi se ha descrito la secuencia del gen ortólogo de ape1 (tcap1) y se ha demostrado que la sobreexpresión de la proteína TcAP1 en epimastigotes de T. cruzi incrementa su viabilidad frente a H2O2 y NOO-. En esta Memoria de Título se desarrollaron vectores plasmidiales destinados a expresar la forma nativa de APE1 humana, así como del dominante negativo de APE1 (APE1DN) en epimastigotes de T. cruzi. Tanto APE1 como APE1DN presentaron una localización preferentemente nuclear; sin embargo también fue posible detectar ambas proteínas en el citoplasma de los parásitos transfectados. La expresión de la forma nativa de APE1 otorgó mayor resistencia a parásitos frente a la exposición de concentraciones crecientes de H2O2; por el contrario, la expresión de APE1DN incrementó la sensibilidad de los epimastigotes a dicho agente oxidante probablemente por la inhibición de la actividad endonucleasa apurínica/apirimidínica parasitaria. Finalmente se purificó en condiciones nativas la proteína APE1DN desde homogeneizados de epimastigotes transfectados; esta proteína recombínate será utilizada en ensayos bioquímicos posteriores. Sobre la base de estudios previos que demuestran un incremento de la resistencia a agentes oxidantes de epimastigotes que sobrexpresan TcAP1, los resultados de esta Memoria de Título sugieren un importante grado de conservación en la actividad endonucleasa apurínica/apirimidínica entre humano y parásito. Sin embargo, debido al escaso nivel de conservación aminoacídica entre TcAP1 parasitaria y APE1 humana (cercano al 30%) es factible el desarrollo de agentes químicos que permitan inhibir específicamente la endonucleasa parasitaria y, consecuentemente, la vía BER de T. cruzi, sin afectar a Homo sapiens. Estos inhibidores podrían potenciar el efecto citotóxico de daño oxidativo al DNA generado por cardiomiocitos y células del sistema inmune innato. / Chagas disease, also known as American Trypanosomiasis, is one of the most important public health problems in Latin America, with consequences in the economy and social wellness of endemics countries. Today this illness is taking a major impact due to its expansion to non endemic regions. The causative agent of this disease is Trypanosoma cruzi, a protozoan parasite which infects many mammals, including humans. Vectorial transmission of Chagas’ disease is produced by infected triatomine insects that upon feeding on mammal blood, deposits feces with infective parasites (trypomastigotes) that are ingested in vacuoles (parasitophorous vacuoles) in host cells. In the cytoplasm, trypomastigotes differentiate to round amastigotes that undergo 8-9 cycles of multiplication before transforming back to trypomastigotes that escape to circulation. Upon infection of target tissues trypomastigotes change to intracellular amastigotes (amastigote nests) that maintain T. cruzi infection for life. Eventually, blood trypomastigotes may be ingested by a triatomine and transformed to epimastigotes in the vector’s midgut. After multiplication, epimastigotes move to the insect hindgut where they differentiate into infective metacyclic trypomastigotes. Thus, this parasite presents an important plasticity, adapting to different media which implies changes in shape, motility and biochemical properties. In its life cycle, T. cruzi must overcome diverse oxygen and nitrogen reactive species (ROS and RNS, respectively) that induce DNA damage. For T. cruzi survival, resulting in the development of a chronic infection in mammal hosts, the parasite has to repair its DNA, most probably by activation of the base excision repair pathway (BER). This is a highly conserved mechanism, where apurinic/apyrimidinic endonucleases (APEs) play a key role. APE1 is the main AP endonuclease in Homo sapiens devoted to repair abasic sites in damaged DNA. The importance of this enzyme is demonstrated by studies in which mice depleted of APE1 dye early during development. Interestingly, studies directed to develop new drugs against cancer have shown that a dominant negative form of that enzyme (APE1DN) binds to an apurinic/apyrimidinic substrate with higher affinity than the native protein, but without AP endonuclease activity. Thus, APE1DN impedes DNA repair in tumor cells, increasing apoptosis induced by genotoxic anti-tumoral drugs. In T. cruzi the sequence of an orthologous ape1 gen (tcape1) has been described and it has been shown that over-expression of the TcAPE1 protein in epimastigotes increases the viability of parasites when chased with H2O2 or NOO-. In this work plasmidial vectors expressing human APE1 in T. cruzi epimastigotes, as well its negative dominant form (APE1DN), have been developed. Both, APE1 and APE1DN, are mostly located in the nucleus though a low signal was also present in the cytoplasm of transfected parasites. Expression of native human APE1 conferred resistance of transfected parasites to H2O2 exposition. Contrarily, expression of the APE1DN form increases the sensitivity of parasites when exposed to H2O2, probably by inhibition of the native apurinic/apyrimidinic enzyme activity. Additionally, APE1DN was purified in native conditions from transfected epimastigotes homogenates; this recombinant protein will be used in the future in biochemical assays. Considering that epimastigotes over-expressing TcAP1 show an increase in the resistance to ROS/RNS, results of the present work suggest an important conservation in the apurinic/apyrimidinic endonuclease activity among Homo sapiens and T. cruzi. However, considering the low level of amino acidic conservation between the parasite TcAPE1 and the human APE1 (approx. 30%), it may be possible to develop chemicals directed to inhibit the parasite endonuclease activity without affecting the human one. Those inhibitors could potentiate the parasite DNA damage induced by ROS/RNS generated in the parasitophorous vacuole and by the immune system. / Financiamiento: Proyecto Bicentenario Anillo ACT 112, Proyectos Fondecyt Nos. 1090124, 11100053 y 1130113.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El agente etiológico de la enfermedad de Chagas es un protozoo hemoflagelado llamado Trypanosoma cruzi, el cual es transmitido principalmente por vectores conocidos como vinchucas. En Chile, el ciclo de transmisión silvestre está mediado por vinchucas del género Mepraia, las cuales se encuentran parasitadas en distintas proporciones desde la región de Arica y Parinacota hasta la región del Libertador Bernardo O’Higgins. Para este trabajo, se recolectaron 176 ejemplares Mepraia spinolai en la Reserva Nacional Las Chinchillas durante mayo del 2015. Adultos y ninfas de distintos estadios se alimentaron cinco veces con ratones (Mus musculus) libres de infección por T. cruzi y se sometieron a dos períodos variables de ayuno entre las alimentaciones. Se detectó T. cruzi con DNA extraído de las heces de cada insecto mediante PCR, se genotipificó T. cruzi mediante sondas de DNA pertenecientes a los cuatro linajes más frecuentemente encontrados en Chile y se evaluó la sobrevivencia de ninfas y adultos durante el período del experimento. El porcentaje de infección por T. cruzi en M. spinolai silvestre fue de 29,27%. Los valores más elevados se encontraron en ninfas III (61%), lo cual permitió diferenciar infecciones únicas y mixtas con los linajes TcI, TcII y TcV. Además, ninfas III presentaron mayor resistencia a los periodos de ayuno. La sobrevivencia de ninfas no parece verse afectada cuando se encuentran infectadas con T. cruzi. Los resultados obtenidos en los distintos grupos de insectos se discutieron respecto de la patogenicidad de T. cruzi en M. spinolai naturalmente infectados. / The etiological agent of Chagas disease is a hemoflagellate protozoon called Trypanosoma cruzi, which is transmitted mainly by known vectors such as kissing bugs. In Chile, the cycle of wild transmission is mediated by kissing bug of Mepraia genus, which are parasitized in different proportions from Arica and Parinacota region to Libertador Bernardo O’Higgins region. For this work, 176 bugs M. spinolai were collected in Las Chinchillas National Reserve during May 2015. Adults and different nymphs stages were fed five times with T. cruzi free infection mice (Mus musculus) and underwent two variable periods of fasting between feeds. Trypanosoma cruzi was detected by PCR extracting DNA from fecal samples of each insect, T. cruzi was genotyped by DNA probes belonging to the four lineages most frequently found in Chile and survival of nymphs and adults during the period of the experiment was evaluated. Percentage of T. cruzi infection in wild M. spinolai was 29.27%. The highest values were found in the III nymphs (61%), which allowed to differentiate unique and mixed infections with the TcI, TcII and TcV lineages. In addition, nymphs III presented greater resistance to periods of fasting. Survival of nymphs does not seem to be affected when they are infected with T. cruzi. Results with the different groups of insects were discussed regarding the pathogenicity of T. cruzi in M. spinolai naturally infected. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1120122

Submitted by Maurílio Figueiredo (maurilioafigueiredo@yahoo.com.br) on 2013-03-12T19:52:37Z No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaVariabilidadeGenética.PDF: 16224264 bytes, checksum: 2ed133aebe11fb0ace36d30c69aa6fa9 (MD5) / Approved for entry into archive by Neide Nativa (neide@sisbin.ufop.br) on 2013-03-15T15:58:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaVariabilidadeGenética.PDF: 16224264 bytes, checksum: 2ed133aebe11fb0ace36d30c69aa6fa9 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-03-15T15:58:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTAÇÃO_InfluênciaVariabilidadeGenética.PDF: 16224264 bytes, checksum: 2ed133aebe11fb0ace36d30c69aa6fa9 (MD5) Previous issue date: 2007 / A variabilidade genética do Trypanosoma cruzi parece correlacionar-se a algumas variáveis da doença como tropismo tecidual, infectividade e resistência a drogas. Neste estudo, clones das linhagens do T. cruzi I (Gamba cl1 e SP104 cl1 - genótipo 19) e (Cuica cl1 e P209 cl1 - genótipo 20), e do T. cruzi II (Bug2148 cl1 e MN cl2 - genótipo 39) e (MVB cl8 e IVV cl4 - genótipo 32) foram avaliadas quanto à capacidade de gerar reativação da doença crônica em camundongos imunossuprimidos com ciclofosfamida (Cy) e ainda, se o tratamento prévio com o fármaco benznidazol (Bz) previniria esta recrudescência clone-específica. Entre os clones de ambas as linhagens do T. cruzi não houve alteração no perfil da curva de parasitemia nos animais infectados. Porém, após o protocolo de imunossupressão com Cy, no final da fase aguda e durante a fase crônica, clones da linhagem T. cruzi I induziram índices de reativação da parasitemia de 77,5% e 51,25%, respectivamente, enquanto clones da linhagem T. cruzi II apresentaram reativação de 4,7% apenas no final da fase aguda nos camundongos avaliados. De modo geral, o tratamento com Bz induziu uma redução dos índices de reativação tanto na fase aguda (72,22%) quanto na fase crônica (31,37%) da infecção. No entanto, Bz não foi capaz de prevenir a reativação da parasitemia em animais inoculados com os clones Gamba cl1, Cuica cl1 e P209 cl1 na fase aguda. Outro aspecto associado ao Bz, ainda na fase aguda, foi a queda induzida dos níveis totais de IgG avaliados. Finalmente, a imunossupressão induziu aumento de parasitismo tecidual durante a fase crônica mostrando-se, principalmente, associada aos animais infectados com clones da linhagem T. cruzi I. Nosso estudo demonstrou, pela primeira vez, a correlação entre a divergência filogenética do T. cruzi e a reativação da doença de Chagas em condição de imunossupressão, sendo esta relacionada a parasitos da linhagem genética T. cruzi I. Além disso, foi demonstrado que a eficácia da prevenção secundária na reativação pelo tratamento com Bz, provavelmente também dependente das características genéticas das populações do T. cruzi. Nossos resultados abrem perspectivas para se validar a terapêutica imunossupressora em indivíduos chagásicos submetidos à quimioterapia antineoplásica e/ou corticoidoterapia ou mesmo a proposição de novos fármacos imunossupressores. ___________________________________________________________________________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: The genetic variability of Trypanosoma cruzi appears to be correlated with some aspects of Chagas disease like tissue parasite tropism, infectivity and drug resistance. In this study, lineages of T. cruzi I (Gamba cl1 and SP104cl1 - genotype 19) and (Cuica cl1 and P209 cl1 - genotype 20) and T. cruzi II (Bug2148 cl1 and MN cl2 - genotype 39) and (MVB cl8 e IVV cl4 - genótipo 32), were evaluated to its capacity to generate reactivation during experimental chronic phase of disease using Cyclophosfamide (Cy) immunosuppressed mice and, whether the previously treatment with Benznidazol (Bz) would foresee this clone-specific recrudescence. There was no difference associated with parasitemia curve observed among clones into each T. cruzi lineage. However, T. cruzi I lineage was able to induce 77,5% and 51.25% of parasitemia reactivatin when Cy was administrated in the end of acute phase and 51,25%, respectively, while this reactivation associated with T. cruzi II was observed only in the end of acute phase (4.7%). In general, treatment with Bz was able to induce low index of reactivation in acute (72.22%) and chronic (31.37%) phase of infection. Nevertheless, Bz was not able to prevent reactivation of parasitemia in acute phase, induced by clones clones Gamba cl1, Cuica cl1 e P209 cl1. Another aspect associated with Bz treatment, in acute phase, was the reduction of IgG1 levels, except to clones that belongs to 32 and 39 genotypes. Finally, immunosuppression induced high levels of tissue parasites during chronic phase and this aspect was associated with animals infected with T. cruzi I clones. In our study, we demonstrated for the first time, the correlation between philogenetic divergence of T. cruzi and reactivation of Chagas disease under immunosuppression condition and a close relation of these events with T. cruzi I genetic lineage. Besides, it was demonstrated a secondary prevention of this reactivation after Bz treatment and, also, this event appears to be dependent of genetic T. cruzi populations. Our data open new perspectives to an immunosuppressed therapeutic validation in chagasic individuals submitted to chemotherapy to neoplasic cells or corticoterapia or, at least, to propose new immunosuppression drugs.

Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas. Núcleo de Pesquisas em Ciências Biológicas, Pró-Reitoria de Pesquisa e Pós Graduação, Universidade Federal de Ouro Preto. / Submitted by Oliveira Flávia (flavia@sisbin.ufop.br) on 2014-08-14T19:37:05Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) TESE_Eco-epidemiologiaDoençaChagas.pdf: 3662041 bytes, checksum: 355296d46561aed26bcd629566fbb715 (MD5) / Approved for entry into archive by Gracilene Carvalho (gracilene@sisbin.ufop.br) on 2014-08-25T13:30:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) TESE_Eco-epidemiologiaDoençaChagas.pdf: 3662041 bytes, checksum: 355296d46561aed26bcd629566fbb715 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-08-25T13:30:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 21267 bytes, checksum: 73e23c2acaaf13389e092bd813e3223d (MD5) TESE_Eco-epidemiologiaDoençaChagas.pdf: 3662041 bytes, checksum: 355296d46561aed26bcd629566fbb715 (MD5) Previous issue date: 2013 / Na Amazônia Brasileira as descrições sobre Doença de Chagas Aguda (DCA) tem se limitado a análise de surtos orais e casos isolados. O Estado do Pará, a partir da sistematização da vigilância da doença de Chagas, registrou entre 2005 e 2012 um número crescente de casos agudos, principalmente na região nordeste do Estado. Para avaliar fatores associados ao risco de ocorrência de DCA foram selecionadas áreas urbanas, rurais e ilhas, no município de Abaetetuba onde foram feitos cortes epidemiológicos entre os anos 2008 e 2009 confrontando-se as informações da casuística registrada pelo Sistema Nacional de Notificação de Agravos (SINAN) no período 2005-2012 com os achados do trabalho de campo. Nos inquéritos realizados foi aplicado um questionário, coleta de amostras biológicas para estudo sorológico e parasitológico, capturas entomológicas em unidades domiciliares e ecótopos naturais para determinar os níveis de infestação, infecção pelo Trypanosoma cruzi e estudo de fonte alimentar em triatomíneos, georreferenciamento das residências, palmeiras e casos humanos, análise ambiental para estratificar o grau de antropização e dados climatológicos. De uma população de 6213 residentes (4,3% da população do município), foram analisadas 4699 amostras, dando uma soroprevalência geral de 2,54 por mil hab. Não foram encontrados triatomíneos domiciliados e dos 250 espécimes capturados em palmeiras, 85,20% foi da espécie Rhodinus pictipes, com uma infectividade de 11,26% que se alimentaram principalmente com sangue de gambá e roedor. A análise multivariada demostrou que a febre, contato com triatomíneos, palmeiras infestadas e velocidade do vento são fatores altamente significativos e associados (RC= 28.7; 14.5; 10.3 e 4.36 respectivamente) ao risco de contrair a doença de Chagas, principalmente na ilha de Ajuaí, área menos antropizada, que no momento da pesquisa apresentava um ciclo enzoótico ativo e estabelecido; no banco de vigilância observou-se associação significante entre a ocorrência de DCA e apresentar edema, febre e alimentar-se com açaí. Os resultados indicam uma epidemiologia da DCA diferenciada entre as áreas de estudo onde a dinâmica de produção do açaí produzido nas ilhas tem relação com a ocorrência dos casos agudos por transmissão oral na área urbana. Estes achados devem ser considerados na formulação das políticas públicas para o controle da doença na região amazônica. _______________________________________________________________________________________ / ABSTRACT: In the Brazilian Amazon descriptions of Acute Chagas Disease (ACD) have been limited to oral outbreaks and isolated cases analysis. Between 2005 and 2012, the Pará State, under systematic surveillance of Chagas disease, recorded an increasing number of acute cases, especially in the northwest region. To assess factors associated with the risk of ACD, crosssectional surveys were developed in urban, rural and island areas in Abaetetuba municipality, between 2008 and 2009. Findings in the fieldwork were confronted to the information recorded by the National System of Notifiable Diseases (SINAN) between 2005-2012. Surveys techniques included: a questionnaire, collection of biological samples for serological and parasitological studies, entomological catches in households and natural ecotopes to determine infestation levels, infection by Trypanosoma cruzi and the food source in triatomines; georeferencing was made of households, palm trees and human cases; environmental analysis assessed the degree of anthropization; climate data was included. From a population of 6213 residents (4.3% of the municipality), 4699 samples were analyzed, giving an overall prevalence of 2.54 per thousand inhabitants. Not domiciled triatomines were found and out of 250 specimens captured in palms, 85.20% was Rhodnius pictipes, whose infectivity was 11.26% and fed mainly with possum and rodent blood. Multivariate analysis demonstrated that fever, contact with triatomines, infested palms and wind speed are factors strongly associated (OR = 28.7; 14.5; 10.3 and 4.36 respectively) to the risk of contracting ACD, primarily on the island of Ajuaí, less anthropized area, which at the time of the survey had an active and established enzootic cycle. The surveillance data showed significant association between the occurrence of ACD and the presence of edema, fever and having fed açai. We observed an epidemiology of ACD differentiated between the study sites, where the dynamics of açai produced in the islands has a relationship with the occurrence of acute cases by oral transmission in the urban area. These findings should be considered in the formulation of public policies for the control of Chagas´ disease in the Amazon region.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-18Bitstream added on 2014-06-13T18:53:21Z : No. of bitstreams: 1 nogueirafilho_maf_me_arafcf.pdf: 498252 bytes, checksum: d20af41ad3c23eecfd5204ddd0e9510e (MD5) / O pró-fármaco hidroximetilnitrofural (NFOH) apresenta atividade antichagásica com grande diminuição da toxicidade e maior atividade contra formas amastigotas do T. cruzi quando comparadas ao seu fármaco matriz nitrofural (NF). Essas vantagens tornam o pró-fármaco uma possível alternativa terapêutica tanto para o tratamento da fase aguda, quanto da fase crônica da doença de Chagas. Nesse trabalho foi investigado o perfil farmacocinético do NFOH em modelo animal não roedor, estudo necessário para a continuidade do desenvolvimento do pró-fármaco. O NF foi administrado por via intravenosa e oral nas doses de 6,35 e 63,5 mg/kg, respectivamente, e o NFOH 8,05 e 80,5 mg/kg respectivamente; em coelhos albinos (n=20). Após a administração foram realizadas coletas seriadas de sangue dos animais por punção venosa. As amostras foram processadas e analisadas por método bioanalítico validado, utilizando-se um sistema MS. O sistema operou em modos positivo e negativo para as leituras dos compostos - NF e NFOH- e do padrão interno (diclofenaco 5ug/mL em metanol), sob eluição de fase móvel composta por água:metanol (50:50). As médias dos parâmetros farmacocinéticos foram calculadas pelas curvas de concentração plasmática versus tempo e comparadas pelo teste de Mann-Whitney (p<0,05). O NF apresentou biodisponibilidade oral de 114,97% no modelo animal e na administração oral este composto apresentou meia-vida de eliminação de 276,09 minutos, estatisticamente diferente da meia vida apresentada na administração intravenosa (17,32 minutos). A administração do NFOH permitiu o cálculo dos parâmetros farmacocinéticos tanto do pró-fármaco quanto do NF liberado pelo mesmo. O perfil farmacocinético do NF administrado comparado ao do NF obtido do pró-fármaco não foi estatisticamente diferente. A biodisponibilidade oral relativa do NF a partir do pró-fármaco administrado foi de 60,1% / The prodrug hydroximethylnitrofurzone (NFOH) presents antichagasic activity with greatly reduced toxicity compared to its drug matrix nitrofurazone (NF). Besides these new characteristics, the prodrug was more active against the parasite T. cruzi amastigotes. These advantages make the prodrug a possible therapeutic alternative for the treatment of both acute and the chronic phase of Chagas disease. Male albino rabbits (n=20) were divided into four groups and subjected to single administration of NF and NFOH. NF was administered intravenously and orally in doses of 6.35 and 63.5 mg / kg respectively, and NFOH, in doses 8.05 and 80.5 mg / kg respectively. After administration, serial blood samples were collected by venipuncture. The samples were processed and the final product was analyzed by MS. The system operated in positive and negative modes for the determination of compounds and internal standard, under elution of the mobile phase 50:50 water: methanol. The NF presented an oral bioavailability of 114.97% in the albino rabbits and oral administration showed half-life of 276.09 minutes due to the absorption process against 17.32 obtained in the intravenous administration. The administration of NFOH allowed the calculation of pharmacokinetic parameters of the prodrug, and the NF obtained from NFOH administration. Comparing the behavior of NF administered orally and obtained from the prodrug was not evidenced significant changes in the pharmacokinetic profiles. The relative oral bioavailability of NF obtained from the NFOH was 60,1%.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-01Bitstream added on 2014-06-13T19:20:29Z : No. of bitstreams: 1 bosquesi_pl_dr_arafcf.pdf: 1593785 bytes, checksum: 3477969063f7684f4832aaebfb59c1a0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Há mais de um século de sua descrição, a doença de Chagas continua sendo um dos maiores problemas de saúde pública. Resultante da infecção pelo protozoário hemoflagelado Trypanosoma cruzi, a doença é endêmica nos 21 países da América Latina e estima-se que 10 milhões de pessoas estejam infectadas e aproximadamente 100 milhões estão sob o risco de contaminação. Apenas dois fármacos são disponíveis para tratamento da doença, nifurtimox e benznidazol. Ambos são ativos somente na fase aguda da doença, além de causarem efeitos colaterais graves. No Brasil apenas o benznidazol é comercializado. Neste sentido, a desenvolvimento de fármacos tripanossomicidas é de extrema importância. Estudos mostraram que derivados nitrofurânicos inibem a tripanotiona redutase, considerada enzima chave do metabolismo antioxidativo do T. cruzi. Pesquisas com o hidroximetilnitrofural (NFOH) tem demonstrado maior atividade in vitro e in vivo contra T. cruzi com menor toxicidade quando comparado ao fármaco matriz, nitrofural. Um amplo espectro de atividades biológicas tem sido relatada para compostos furoxânicos (N-óxido-1,2,5-oxadiazol) e benzofuroxânicos (N-óxido-benzo[1,2-c]1,2,5-oxadiazol), sendo assim, foi obtida uma série de derivados isósteros de nitrofural, substituindo o anel nitrofurano pelos respectivos furoxanos e benzofuroxanos. Os compostos obtidos foram avaliados quanto à atividade tripanossomicida in vitro em formas epimastigotas e amastigotas de T. cruzi, capacidade de doação de óxido nítrico e mutagenicidade in vivo. Foram sintetizados, identificados e caracterizados oito compostos. Os derivados benzofuroxânicos (compostos 20 e 21) foram os mais ativos contra as formas epimastigotas de T. cruzi, entretanto no ensaio contra as formas amastigotas, sete apresentaram... / For more than a century of his description, Chagas disease remains a major public health problems. Resulting from infection flagellate protozoan Trypanosoma cruzi, is endemic in 21 Latin American countries and it is estimated that 10 million people are infected and about 100 million are at risk of contamination. Only two drugs are available for treating the disease, nifurtimox and benznidazole. Both are active only during the acute phase of the disease, and cause serious side effects. In Brazil only benznidazole is marketed. In this sense, the development of drugs trypanosomicide is extremely important. Studies demonstrated that nitrofurans derivatives inhibit the trypanothione reductase, the key enzyme in the metabolism considered antioxidant T. cruzi. Research with hydroxymethylnitrofurazone (NFOH) has shown greater activity in vitro and in vivo against T. cruzi with less toxicity when compared to the drug matrix, nitrofurazone (NF). A wide spectrum of biological activities have been reported for compounds furoxans (1,2,5-oxadiazol-2-N-oxide) and benzofuroxans (benzo[1,2-c]-1,2,5-oxadiazol-1-N-oxide) and thus was obtained a series of derivatives of Nitrofural isosteres, nitrofuran ring by replacing the respective furoxans and benzofuroxans. The compounds were evaluated for in vitro trypanocidal activity in epimastigotes and amastigotes of T. cruzi, ability to donate nitric oxide and mutagenicity in vivo. Were synthesized, characterized and identified eight compounds. Benzofuroxans derivatives (compounds 20 and 21) were the most active against epimastigotes of T. cruzi, however the assay against amastigotes, seven showed IC50 higher than or equal to a drug used as reference (benznidazole) and less mutagenic potential when compared with the results obtained for the drugs nitrofurazone... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-11-06Bitstream added on 2014-06-13T20:24:53Z : No. of bitstreams: 1 gardim_s_dr_arafcf_parcial.pdf: 160360 bytes, checksum: bb515cf7688b1355b670a850d3d9c795 (MD5) Bitstreams deleted on 2014-12-19T18:32:46Z: gardim_s_dr_arafcf_parcial.pdf,Bitstream added on 2014-12-19T18:33:34Z : No. of bitstreams: 1 000726380.pdf: 3221251 bytes, checksum: 8f109e2488063ca255b691ce5abe0451 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A doença de Chagas apresenta como agente etiológico o protozoário Trypanosoma cruzi, cujos vetores pertencem à subfamília Triatominae. Triatomíneos são insetos sugadores de sangue (ordem Hemiptera e família Reduviidae), distribuídos, principalmente, na região Neotropical e, epidemiologicamente, se destacam espécies dos gêneros Panstrongylus, Rhodnius e Triatoma. O gênero Rhodnius apresenta alta semelhança morfológica entre suas espécies e o gênero Triatoma é o mais diversificado, porém ambos foram agrupados em complexos de espécies, com base em semelhanças morfológicas, distribuição geográfica, abordagens genéticas, entre outros. Para alguns complexos de espécies os caracteres morfológicos não são suficientes para a identificação específica correta. Portanto, as ferramentas moleculares são apresentadas como uma alternativa útil para a identificação de espécies relacionadas. Este estudo visou contribuir para a identificação de três grupos de espécies de triatomíneos, por meio do desenho de novos primers diagnósticos para compor uma multiplex-PCR: o primeiro grupo é composto por quatro espécies de Rhodnius: R. neglectus, R. robustus, R. prolixus e R. pictipes; os segundo e terceiro grupos apresentam espécies do gênero Triatoma: T. maculata e T. pseudomaculata; e T. tibiamaculata, T. melanocephala e T. vitticeps. Além disso, avaliaram-se as relações filogenéticas com as sequências resultantes. Após extração do DNA mitocondrial (16S, Cytb e COI) e DNA nuclear (ITS1 e ITS2) genes foram amplificados e sequenciados. Para diagnosticar as espécies do gênero Rhodnius, os primers referentes ao Cytb foram eficientes para compor uma multiplex-PCR, que se separou R. prolixus, R. neglectus, R. pictipes e R. robustus. Da mesma forma, os primers desenhados para o fragmento 16S distinguiram T. tibiamaculata, T. melanocephala... / Chagas disease presents as etiologic agent the protozoan Trypanosoma cruzi, whose vectors belong to the Triatominae subfamily. Triatomine bugs are bloodsucking insects (belonging to the Hemiptera order and Reduviidae family), which are distributed predominantly at the Neotropical region and epidemiologically stand the species belong Panstrongylus, Rhodnius and Triatoma genera. The Rhodnius genus shows high morphological similarity among their species, as the Triatoma genus is the most numerous, however both were grouped into species complexes, according to morphological similarities and geographical distribution, genetic approaches, and others. For some species complexes morphological characters are not enough to make the correct specific identification. Therefore, molecular tools are presented as an useful alternative to identify closely related species. This study aimed to contribute to the identification of three groups of Triatominae species by the design of new diagnose primers for multiplex-PCR: the first group consists of four species of Rhodnius genus: R. neglectus, R. robustus, R. prolixus and R. pictipes; the second and third groups comprise Triatoma species: T. maculata, and T. pseudomaculata; and T. tibiamaculata, T. melanocephala and T. vitticeps. Additionally, we evaluated the phylogenetic relationships with the resulting sequences. After DNA extraction, mitochondrial (16S, Cytb and COI) and nuclear DNA (ITS1 and ITS2) genes were amplified and sequenced. To diagnose Rhodnius species the primers for the fragment of Cytb were efficient, by using a multiplex-PCR that separated R. prolixus, R. neglectus, R. robustus and R. pictipes. Similarly, the primers designed for the 16S fragment distinguished T. tibiamaculata, T. melanocephala and T. vitticeps. For T. maculata and T. pseudomaculata no one of the tested candidate primers showed satisfactory results... (Complete abstract click electronic access below) / FAPESP: 10/50.355-1

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. / Submitted by Raquel Almeida (raquel.df13@gmail.com) on 2018-05-08T17:24:45Z No. of bitstreams: 1 2017_DéborahBiancaSantosMartins.pdf: 4320625 bytes, checksum: 8a3bd1eead0328739a78a254969a6ecf (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-05-15T16:13:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_DéborahBiancaSantosMartins.pdf: 4320625 bytes, checksum: 8a3bd1eead0328739a78a254969a6ecf (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-15T16:13:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_DéborahBiancaSantosMartins.pdf: 4320625 bytes, checksum: 8a3bd1eead0328739a78a254969a6ecf (MD5) Previous issue date: 2018-05-15 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal (FAPDF). / Rhodnius neglectus (Hemiptera: Reduviidae) é um vetor potencial do Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. Ele apresenta em suas glândulas salivares moléculas importantes que neutralizam os mecanismos hemostáticos do hospedeiro, auxiliam na alimentação sanguínea e, de forma indireta, na transmissão do T. cruzi. Assim, a saliva desse inseto hematófago se torna um relevante alvo de pesquisas devido à presença de moléculas com elevado potencial farmacológico. Este estudo teve por objetivos, a expressão heteróloga de membros das famílias de proteínas salivares triabina e antígeno 5 e a avaliação da atividade apirásica salivar de R. neglectus. As sequências nucleotídicas das proteínas foram obtidas a partir do transcriptoma de R. neglectus, clonadas no vetor pET100/D-TOPO e expressas em bactérias Escherichia coli da linhagem BL21(DE3). Ambas as proteínas recombinantes, triabina e antígeno 5, foram observadas na fração insolúvel após a lise das bactérias. Essas foram purificadas por cromatografia de afinidade e usadas para a produção de anticorpos policlonais em camundongos, os quais reagiram cruzadamente com antígenos das salivas das espécies R. prolixus e T. infestans. Após a otimização do protocolo de expressão, somente a triabina foi expressa na fração solúvel do lisado bacteriano. A atividade apirásica também foi avaliada na saliva de R. neglectus em solução e por zimografia em gel. As proteínas salivares com atividade apirásica foram identificadas por espectrometria de massas das bandas excisadas do zimograma contendo ADP como substrato. Os anticorpos antiapirase de R. prolixus reagiram cruzadamente com antígenos da saliva de R. neglectus. Os resultados mostram que há espécies nas tribos Rhodniini e Triatomini que compartilham epítopos semelhantes de triabina, antígeno 5 e apirase. Como perspectiva, a triabina recombinante solúvel poderá ser avaliada como potencial marcador de exposição aos triatomíneos, bem como ter determinadas as suas potenciais atividades farmacológicas e contribuir na compreensão das interações dinâmicas hospedeiro-vetor. / Rhodnius neglectus (Hemiptera: Reduviidae) is a potential vector for Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease. It presents in its salivary glands important molecules that neutralize the hemostatic mechanisms of the host, assist in the blood supply and in T. cruzi transmission. The saliva of this hematophagous insect is, therefore, a research target due to the presence of molecules with pharmacological potential. In this study, the heterologous expression of members from triabin and antigen 5 families and the evaluation of R. neglectus salivary apyrase activity are reported. Protein nucleotide sequences were selected from R. neglectus transcriptome, cloned into pET100/D-TOPO vector and expressed in Escherichia coli strain BL21(DE3). Both recombinant proteins, triabin and antigen 5, were observed in the insoluble fraction after bacterial lysis. They were purified by affinity chromatography and used to raise polyclonal antibodies in mice, which cross-reacted with antigens from saliva of R. prolixus and Triatoma infestans. After optimization of the expression protocol, only triabin was expressed in the bacterial soluble fraction. Apyrase activity was also evaluated in R. neglectus saliva, both in solution and by in gel zymography. Salivary proteins with apyrase activity were identified by mass spectrometry of bands excised from the zymogram containing ADP as substrate. R. prolixus anti-apyrase antibodies cross-reacted with R. neglectus salivary antigens. Results show that species from both Rhodniini and Triatomini tribes share similar antigen 5, triabin, and apyrase epitopes. As a perspective, soluble recombinant triabin can be evaluated as biomarker candidate to triatomine exposure, for potential pharmacological activities and may contribute in the understanding of host-vector dynamic interactions.

Resumo não disponível.