Parasitas da família trypanosomatidae como dos generos Crithidia, Blastocrithidia, Leptomonas, Hepertomonas e Rhynchoidomona infectam insetos e Phytomonas parasitam plantas. O T. cruzi e L. (L.) chagasi, agentes etiológicos respectivamente da doença de Chagas e da leishmaniose visceral (LV) também fazem parte desta família. Pela similaridade entre estes parasitos alguns estudos tem utilizado os tripanosomatídeos não patogênicos como fonte alternativa de antígenos para o imunodiagnóstico da doença de Chagas e da leishmaniose. Com o objetivo de identificar moléculas em tripanosomatídeos não patogênicos que reagem com anticorpos anti T. cruzi e anti- Leishmania sp, foram utilizados dois preparados antigênicos: a fração excretada-secretada (ES) e o extrato total obtido por digestão química (ET) de L. seymouri, C. deanei, C. fasciculata e C. luciliae, sempre comparados com o T. cruzi e a L. (L.) chagasi. A reatividade diferencial entre anticorpos anti T. cruzi e anti L. (L.) chagasi levou à escolha da L. seymouri, único parasito no qual a fração ES mostrou significativas diferenças de reatividade, a C. deanei apresentou dados semelhantes. Anticorpos presentes em casos de LV reagem, por ELISA, tanto com ES como com ET de L. seymouri, no entanto casos de leishmaniose tegumentar e a maioria dos chagásicos não apresentaram reação com a fração ES deste parasito, apesar de reagirem com o antígeno ET. O ELISA mostrou que os anticorpos anti L. (L.) chagasi reagem mais com proteínas contidas no ES e menos com carboidrato, ao contrário a baixa reatividade dos anticorpos anti T. cruzi para o ES são preferencialmente contra carboidratos. Quando as frações de ES e ET foram analisados por Immunobloting o anti- L. (L.) chagasi não reagiu com nenhuma banda por esta metodologia, ao contrário anticorpos anti- T. cruzi apresentaram intensa reação com bandas na região de 29-36kDa do ET de L. seymouri, que foram identificadas como sendo moléculas de proteínas e de carboidratos (66-97kDa) para o ES. A utilização de soros policlonais monoespecíficos mostra que ES e ET possuem epítopos compartilhados e a quantificação deste compartilhando foi calculado utilizando anticorpos monoespecíficos eluídos de ES ou ET. Estes resultados mostraram que a identificação de moléculas reativas de L. seymouri por anticorpos presentes em chagásicos e leishmanióticos sp depende da metodologia empregada versus preparado antigênico. A superioridade das moléculas contidas no parasito de L. seymouri foi adicionalmente evidenciada quando 25,5% das amostras de soros de VL que apresentavam baixa reatividade para o ET de L. chagasi, Abs 492nm menores que 0.99 e média e SD de 0,56 ? 0,18 apresentavam alta reatividade para o ET de L. seymouri (p<0,01) com média e SD de 1,51 ? 0,35. Estes dados nos indicam que uma caracterização mais profunda das moléculas presentes na L. seymouri é de vital importância se for empregada no imunodiagnóstico das doenças de Chagas e leishmaniose. / Parasites of Trypanosomatidae family as Crithidia, Blastocrithidia, Leptomonas, Hepertomonas and Rhynchoidomonas infect insects and Phytomonas parasitize plants. T. cruzi and L. (L.) chagasi the etiological agents of Chagas disease and Leishmaniasis (VL) respectively, belong to this family. The similarity between these parasites led few studies to use non-pathogenic trypanosomatids as an alternative source of antigens for Chagas\' disease and leishmaniasis immunodiagnosis. With the aim of identifying molecules in nonpathogenic trypanosomatids that react with anti T. cruzi and anti-Leishmania antibodies, two antigenic preparations were employed: the excreted-secreted molecules (ES) and total extract obtained by chemical digestion (ET) of L. seymouri, C. deanei, C. fasciculata and C. luciliae, and compared with T. cruzi and a L. (L.) chagasi. ES fraction of L. seymouri was the unique that showed differences in reactivity when tested with anti T. cruzi and anti L. (L.) chagasi antibodies, evaluation with C. deanei showed similar data. ELISA performed with L. seymouri ES and ET antigens reacted with all VL cases, however tegumentar leishmaniasis and Chagas disease cases showed no reaction with the ES fraction, although they react with ET antigen. The ELISA revealed that anti L. (L.) chagasi antibodies react with proteins contained in ES and less with carbohydrate, unlike the low reactivity of anti T. cruzi with ES were mainly against carbohydrates. When ES and ET were analyzed by immunoblotting the anti L. (L.) chagasi antibodies did not react with any bands, unlike antibodies to T. cruzi showed intense reaction with 29-36kDa protein bands of L. seymouri ET and carbohydrate bands ES (66-97kDa). The use of monospecific polyclonal sera showed that ES and ET share epitopes and these data was calculated using monospecific antibodies eluted from ES or ET antigens. These results show that the identification of L. seymouri molecules reactive by chagasic and leishmaniotic sp cases depends on the methodology employed versus antigenic preparation. The superiority of L. seymouri reactivity was further evidenced when 25.5% of VL sera that showed low reactivity to L. chagasi ET (Abs 492nm < 0.99 and smaller than average and SD of 0.56 +/- 0.18) showed high reactivity to ET L. seymouri (p <0.01) with mean and SD of 1.51 +/- 0.35. These data indicate that a more thorough characterization of molecules present in L. seymouri is of vital importance if used in Chagas disease and leishmaniasis immunodiagnosis.

A proteína Bim é uma potente molécula pró-apoptótica da família Bcl-2 que participa na indução da via intrínseca de apoptose. Pouco se sabe sobre o papel de Bim na resposta imune contra patógenos. Utilizando um modelo murino de infecção pelo T. cruzi, nós observamos um aumento da carga parasitaria e da mortalidade de animais Bim-/-. Macrófagos peritoneais isolados de camundongos Bim-/- no pico de sua parasitemia apresentaram diminuição da produção de NO e da sua atividade microbicida, provavelmente devido a uma deficiência no influxo da subpopulação SPM (small peritoneal macrophages). Ademais, neste mesma fase, esplenócitos apresentaram uma deficiência da produção de NO e das citocinas pró-inflamatórias IFN-&gamma; e IL-6 e os animais Bim-/- apresentaram uma diminuição da citotoxicidade in vivo contra antígenos específicos ao T. cruzi. Em conjunto, nossos resultados sugerem um papel importante da proteína Bim no controle da replicação e eliminação do parasita na fase inicial da infecção. / Bim protein is a potent pro-apoptotic molecule of Bcl-2 family that participates in the induction of intrinsic apoptosis pathway. Little is known about its role on the immune response against pathogens. Using a murine model of T. cruzi infection, we observed an increased parasitemia and mortality in Bim-/- mice. Peritoneal macrophages isolated from these mice at the peak of parasitemia displayed decreased NO production and microbicidal activity, probably due to a defect in the influx of the small peritoneal macrophage (SPM) subpopulation. Moreover, we also observed a deficiency in nitric oxide production, pro-inflammatory cytokines IFN-&gamma; and IL-6 secretion by splenocytes at this period of infection. Finally, Bim-/- mice has an impaired in vivo cytotoxic response against antigens from T. cruzi. Together, our results suggest an important role of Bim in the control of parasite replication and elimination in acute phase of T. cruzi infection.

Orientador: Ana Maria Aparecida Guaraldo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T10:43:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LabelloBarbosa_Rodrigo_M.pdf: 1807806 bytes, checksum: 77358b073a5933e94d6d3022544c31fb (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Em virtude de seu alto grau de impacto socioeconômico, a doença de Chagas está entre as mais importantes doenças parasitárias das Américas Central e do Sul. Entre as vias de transmissão, a forma oral tem contribuído para o surgimento de novos casos e se dá principalmente pela ingestão de formas tripomastigotas metacíclicas de Trypanosoma cruzi presentes em diferentes alimentos. A polpa de açaí possui excelentes propriedades nutricionais e é muito consumida em todo o Brasil e no exterior. Entretanto, ela vem sendo associada nos últimos anos a microepidemias da doença de Chagas aguda, especialmente na região Norte do país, onde esse fruto é o principal suplemento da dieta alimentar da população e movimenta uma parcela significativa da economia local. O objetivo desse trabalho foi a avaliação da sobrevivência in vitro e da virulência do T. cruzi em polpa de açaí mantida por diferentes períodos de incubação e submetida a diferentes tratamentos térmicos, por meio de infecções experimentais. Alíquotas de polpa in natura de açaí proveniente de Belém (PA) foram misturadas a 105 formas tripomastigotas de T. cruzi obtidas do plasma de camundongos CBA/JUnib. As amostras, devidamente homogeneizadas, foram mantidas à temperatura ambiente, refrigeração ou congelamento por períodos de incubação de até 144 horas e descongeladas quando necessário. Em seguida, para a análise da sobrevivência, a metodologia in vitro adotada foi o isolamento do parasito por filtração em lã de nylon. O produto obtido foi analisado por microscopia óptica comum e utilizado para a análise in vivo da virulência do parasito. Camundongos isogênicos imunodeficientes C.B-17-Prkdcscid/PasUnib, fêmeas e machos adultos, infectados com esse produto pelas vias intraperitonial, gavagem e oral, foram previamente submetidos à antibioticoterapia com cefalexina e posteriormente observados durante 40 dias. A parasitemia foi realizada pelo método de Brener e a mortalidade registrada diariamente. Os resultados relevantes demonstraram que a sobrevivência e a virulência do parasito foram preservadas após 144 horas da mistura mantida sob refrigeração (4ºC), após 26 horas de congelamento (-20ºC) e também após tratamento térmico combinado, sendo a mistura mantida inicialmente por 48 horas à temperatura ambiente e em seguida, por 72 horas a 4ºC. O estudo demonstrou ainda, que todas as vias de inoculação utilizadas foram eficientes, havendo retardo significativo no início da parasitemia por infecção oral. A mortalidade dos animais ocorreu até o 25º dia após a infecção. Concluiu-se que o T. cruzi foi capaz de sobreviver na polpa de açaí por diferentes períodos de incubação e sob diversos tratamentos térmicos, além de preservar a sua virulência em camundongos. Esse fato é de importância epidemiológica e descarta os processos de refrigeração e congelamento convencionais, durante os períodos de tempo testados, como métodos de controle da transmissão oral da doença de Chagas aguda / Abstract: Due to the high social and economic impact, Chagas' disease is among the most important parasitic infection in the South and Central Americas. Concerning the routes of transmission, the oral way has been contributing to the arising of new cases and it occurs as a consequence of the ingestion of metacyclic trypomastigotes present in different foods. The açaí pulp has an elevated nutritional trace and is very popular in Brazil and abroad. However, in recent years, it has been associated with outbreaks of acute Chagas' disease, especially in the northern region of the Brazil, where this fruit is the main diet supplement for the population and drives a significant portion of the local economy. Thus, the aims of this study were to evaluate the in vitro survival, the virulence of Trypanosoma cruzi in the açaí pulp and the potential of this mixture for oral infection. For that, the mixture was maintained for different periods on different temperatures of incubation. These thermic treatments were followed by experimental infections in immunodeficient mice. Aliquots of fresh açaí pulp from Belém (PA) were mixed with 105 trypomastigotes of T. cruzi Y strain obtained from blood plasma of CBA/JUnib. The samples, properly homogenized, were kept at room temperature, refrigerated or frozen by periods of incubation up to 144 hours and thawed for analysis. The methodology used for survival analysis was by isolation of parasites in vitro using isolation of parasites by nylon wool membrane for filtration. The yield collected was examined on optical microscope and used for virulence analysis in vivo. C.B-17-Prkdcscid/PasUnib immunodeficient inbred mice, adult males and females, were previously submitted to antibiotic therapy with cephalexin and followed infection by inserting the filtrated into the animals through different routes: intraperitonial, gavage or oral and during at least 40 days the animals had been observed. Thereafter, the parasitemy was performed by Brener's method and their mortality was daily recorded. The relevant results demonstrated the survival and the virulence of the parasite were preserved even after 144 hours in the mixture, when it was kept under refrigeration (4°C), after 26 hours of freezing (-20ºC) and also after combined thermic treatment, which was the mixture initially maintained initially for 48 hours at room temperature and then after maintained for 72 hours at 4ºC. The study also demonstrated that all routes used for the mice inoculations were effective, but a significant delay was observed at the onset of parasitemy by oral infection was observed. The death of the animals occurred until the 25th day after infection. It was concluded that T. cruzi was able to survive in açaí pulp for different periods of incubation and thermic treatment, moreover the açaí pulp did not interfere in the parasite capacity to cause Chagas' disease. This fact is very important at the epidemiological point of view and discards the processes of conventional cooling and freezing, during these time periods tested, as methods for control of the oral transmission of acute Chagas' disease / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

Orientadores: Ana Carolina de Mattos Zeri, Nilson Ivo Tonin Zanchin / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-14T05:56:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_JulianaFerreirade_D.pdf: 4266971 bytes, checksum: b6c93b83027283390194f44df501c5b2 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Proteínas da família SBOS (Shwachman-Bodian-Diamond Syndrome) ocorrem largamente na natureza e s.ão bastante conservadas, apresentando ortólogas em Archaea e eucariotos. Estudos de análises genômica e biofísica tem relacionado a SBOS com o metabolismo de RNA e biosíntese de ribossomos. O gene ortólogo da SBOS de Archaea está localizado em um operon conservado que contém genes do processamento de RNA; estudos de perfil de expressão gênica tem agrupado o gene da proteína SBOS de Saccharomyces cerevisiae, Sdo1p, com fatores do processamento de rRNA e estudos de análise proteômica identificaram a interação da proteína Sdo1p com fatores da biossíntese de ribossomos; ortólogas de planta contém um C-terminal estendido apresentando motivo de ligação a RNA. Mutações identificadas no gene SBDS tem sido relacionadas com a síndrome Shwachman-Oiamond (80S), uma doença caracterizada por insuficiência exócrina pancreática e disfunção na medula óssea, cujos pacientes apresentam grandes chances de desenvolver leucemia. SOS representa, portanto, um importante modelo para entender os processos envolvidos no desenvolvimento da leucemia. O objetivo principal desse trabalho consistiu na caracterização estrutural e funcional de proteínas da família SBOS. Foram realizados ensaios de cristalização com ortólogas ; da SBOS de Archaea, levedura, tripanossoma e humana. A SBOS de Pyrococcus abyssi foi cristalizada, porém os cristais difrataram a baixa resolução (3,50 A). A ' caracterização da SBOS ortóloga de Trypanosoma cruzi (TcSBOS) mostrou que esta, proteína contém uma região C-terminal estendida. Ensaios de proteólise limitada,' dicroismo circular e espectroscopia por Ressonância Magnética Nuclear (RMN) indicaram que a região adicional da TcSBOS se comporta como um fragmento de proteína intrinsicamente desenovelado, responsável pela interação da TcSBOS com RNA, verificada por ensaios de Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA). Também foi realizada a determinação da estrutura da ortóloga humana (HsSBOS) em solução por espectroscopia de RMN. A proteína HsSBOS é composta de três domínios bem estruturados, apresentando mobilidade conformacional entre os domínios N-terminal e central. Experimentos de titulação de RNA, novamente utilizando-se RMN, possibilitaram a confirmação da interação direta da SBOS humana com RNA. A região de ligação ao RNA foi identificada no N-terminal da proteína, região bastante conservada na família e considerada o principal alvo das mutações relacionadas à doença SDS / Abstract: The Shwachman-Bodian-Oiamond syndrome (SBOS) protein family occurs widely in nature and is highly conserved, with orthologues in Archaea and eukaryotes. Genomic and biophysical studies have suggested involvement of this protein in RNA metabolism and in ribosome biogenesis. Archaeal SBOS orthologue genes are located within highly conserved operons that include RNA-processing genes; transcriptional profiling analysis has clustered the yeast ortholog protein Sdo 1 p with rRNA processing factors and proteomic analysis have identified potential interactions between Sd01 p and ribosome biogenesis factors; several plant SBOS orthologues contain extended C-terminal region with putative RNA binding motif. Mutations in the SBDS gene are associated to the Shwachman-Oiamond syndrome (SOS), arare multisystem disorder characterized by exocrine pancreatic insufficiency, bone marrow dysfunction, and an increased risk of acute myeloid leukemia. SOS therefore represents an extremely useful model for understanding leukaemogenesis. The objective of the present work was the structural and functional characterization of the SBOS protein family. SBOS orthologues from Archaea, yeast, trypanosomatid and human were assayed for crystallization. The Archaeal SBOS orthologue, PaUPF0023 in Pyrococcus abyssi, was crystallized, but the crystals 'diffracted to a relatively low resolution (3.50 A). Characterization of the Trypanosoma cruzi SBOS ortholog (TcSBOS) by using limited proteolysis, circular dichroism and NMR analyses indicated that the C-terminal additional region of TcSBOS behaves as a natively unfolded protein segment, responsible for TcSBOS-RNA interaction activity in electrophoretic mobility shift assays. We have also determined the solution structure and backbone dynamics of the human SBOS protein using NMR spectroscopy. The overall structure of human SBOS comprises three well-folded domains with conformational exchange in the linker between the N-terminal and the central domains. RNA titration experiments using NMR spectroscopy provide evidence that human SBOS interacts with RNA via the N-terminal domain, a conserved region in the SBOS family and the most frequent target for SOSassociated mutations / Doutorado / Bioquimica / Doutor em Biologia Funcional e Molecular

A doença de Chagas é um problema de saúde pública, com dados preocupantes referentes ao número de pessoas contaminadas e daquelas que ainda permanecem expostas ao risco de infecção. A dificuldade do combate a Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença, está intimamente relacionada às interações existentes entre o parasito e o hospedeiro, sendo que até o momento, nenhum medicamento ou substância tem demonstrado real eficácia ao combate ao parasito. Em estudos recentes realizados por nosso grupo de pesquisa, os ácidos ursólico e oleanólico demonstraram um bom potencial tripanocida, além de um efeito imunomodulatório, promovendo a inibição da produção de IFN-? quando de suas utilizações por via intraperitoneal em elevadas concentrações. Considerando essas evidências encontradas em relação a essas substâncias e os efeitos promovidos no processo de avaliação biológica, propusemos como objetivo avaliar o potencial terapêutico dos triterpenos ácido ursólico e ácido oleanólico na fase crônica da infecção chagásica e suas associações ao benzonidazol, fármaco referência indicado ao tratamento da parasitose, verificando a possibilidade de geração de benefícios sobre a patogênese da infecção crônica experimental. A quantificação de linfócitos T CD4+ e T CD8+, e das citocinas IL-2, IL-10, IL-12, IFN-? e TNF-??pela técnica de citometria de fluxo, utilizando o kit BD Cytometric Bead Array®, indicaram que essas substâncias não apresentam efeitos imunomodulatórios significativos sobre a resposta Th1 e Th2 nessa fase da doença, na comparação entre grupos infectados e tratados e aquele que recebeu apenas solvente. O parasitismo tecidual determinado por Real Time PCR e as observações realizadas em cortes histológicos, mostraram, respectivamente, baixo número de cópias de DNA de T. cruzi, e ausência de ninhos amastigotas, porém, com marcante presença de infiltrado inflamatório em todos os grupos. Assim, os dados obtidos levam à conclusão de que apesar da atividade apresentada pelos triterpenos ácidos em estudo na fase aguda da doença de Chagas, o mesmo não ocorre na fase crônica, como seria desejável para favorecer uma melhora do quadro patológico, mesmo não havendo a cura da doença, considerando as conseqüências da infecção de longo prazo. / Chagas disease is a public health problem, with disturbing data about the number of infected people and those who remain at risk of infection. The difficulty of eliminating Trypanosoma cruzi, etiologic agent of the disease is closely related to the interactions between the parasite and the host, and until now, no medicine or substance has demonstrated real effectiveness against the parasite. In recent studies by our research group, the ursolic and oleanolic acids revealed considerable trypanocidal activity, and an immunomodulatory effect, promoting the inhibition of IFN-? with intraperitoneal administration in high concentrations. Considering these evidences and the effects observed during the biological evaluation, our objective was to evaluate the biological potential of the triterpenoids ursolic acid and oleanolic acid in the chronic phase of chagasic infection and their associations to benznidazole, the reference drug indicated for the treatment of this disease, verifying the possibility of benefits on the pathogenesis of experimental chronic infection. Quantification of T CD4+ and T CD8+ cells and of the cytokines IL-2, IL-10, IL-12, IFN-? and TNF-? by flow cytometry using the kit BD cytometric Bead Array®, indicated that these substances do not exhibit significant immunomodulatory effects on Th1 and Th2 responses in this stage of the disease, comparing infected and treated groups and that who received only solvent. The tissue parasitism determined by Real Time PCR and in histological observations showed, respectively, low copy number of T. cruzi DNA, and absence of amastigote nests, however, with marked inflammatory infiltration in all groups. Thus, our data lead to the conclusion that despite the activity presented by the triterpene acids studied in the acute phase of Chagas disease, the same does not occur in the chronic phase, as would be desirable to the reduction of the pathological conditions, even if there is no cure of the disease, considering the consequences of long term infection.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:29:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Cristiane A T Santos.pdf: 1362760 bytes, checksum: a1eb727bcf0daccfaec04c2f3ff7fd5b (MD5) Previous issue date: 2011-03-21 / Introduction: Chagas disease or American trypanosomiasis is one of several infectious diseases that can be transmitted via blood, justifying the rigorous screening of blood donors. The transfusion transmission of trypanosomiasis has been reduced in Brazil with the implementation of programs to control the quality of blood products. Objectives: a) To do Systematic Review addressing the issue of transfusion transmission of Chagas disease and b) determine the prevalence of Chagas' infection in blood donors attending the Coordinator Blood Bank of Goiás, regional blood centers of Catalão, Rio Verde and Jataí and mobile units that collect blood in 62 cities in Goiás, in the years 2005 to 2009. Methods: 1) Systematic Review using the keywords "Chagas' disease," "blood donor", "Trypanosoma cruzi" and "blood transfusion" and the qualifier "epidemiology" in databases: MEDLINE, LILACS PAHO and WHOLIS. 2) Cross-sectional study to determine the seroprevalence for Trypanosoma cruzi, using data from computerized laboratory files whose serological technique was immunosorbent assay (ELISA). The positive donors were characterized by sex, age, nationality and origin, through records of attendance. Confidence Intervals were calculated at 95%. To reach statistical significance was considered p <0.05. Results: There were 314 articles in different databases, with 48 included in the analysis. We analyzed 210,890 records of donations during the period January 2005 to December 2009. 653 were found positive for T. cruzi, resulting in a prevalence of 0.30%. Among the donors with positive serology for T. cruzi, 69.22% were men and 30.78% were women. Most donors was born in Goiás (53.45%). The prevalence of infection in new donors was 1.27% while in return donors was 0.02%. Conclusions: Advances in Hemoterapy practice in Latin America and effective vector control decreased dramatically in recent decades the occurrence of transfusion Chagas disease in endemic areas. But, because it is not restricted geographically, this disease represents a significant challenge to the developed countries that receive large numbers of immigrants, which can transmit the disease through blood transfusions. The prevalence of positive donors at the Coordinator Blood Bank and Regional transfusion centers of Goiás trend shows decline when compared with previous studies. / Introdução: A doença de Chagas ou Tripanossomíase Americana é uma das várias doenças infecciosas passíveis de transmissão através do sangue, justificando-se a rigorosa triagem sorológica dos doadores. A transmissão transfusional da tripanossomíase tem-se reduzido no Brasil com a implementação dos programas de controle da qualidade do sangue. Objetivos:a) Fazer uma Revisão Sistemática da Literatura abordando a temática da transmissão transfusional da doença de Chagas e b) Determinar a prevalência da infecção chagásica em doadores de sangue que compareceram ao Hemocentro Coordenador de Goiás, Hemocentros Regionais de Catalão, Rio Verde e Jataí e às unidades móveis de coleta de 62 cidades do interior de Goiás, nos anos de 2005 a 2009. Material e Métodos: 1) Revisão Sistemática da Literatura utilizando os descritores doença de Chagas , doadores de sangue , Trypanosoma cruzi e transfusão de sangue e o qualificador epidemiologia nas bases de dados: MEDLINE, LILACS PAHO e WHOLIS. 2) Estudo transversal para determinação de soroprevalência da infecção pelo Trypanosoma cruzi, através de dados obtidos em arquivos informatizados de laboratório cuja técnica sorológica foi o ensaio imunoenzimático (ELISA). Os doadores soropositivos foram caracterizados quanto ao sexo, idade, naturalidade e procedência, através de registros de atendimento. Foram calculados intervalos de confiança de 95%. Foi considerado estatisticamente significativo p<0,05. Resultados: Foram encontrados 314 artigos nas diferentes bases de dados, sendo 48 incluídos para análise. Foram analisados 210.890 registros de doações no período de janeiro de 2005 a dezembro de 2009. Foram encontrados 653 resultados positivos para infecção chagásica, resultando em prevalência de 0,30%. Entre os doadores com sorologia positiva para T. cruzi, 69,22% eram homens e 30,78% eram mulheres. A maioria dos doadores era natural do interior de Goiás (53,45%). A prevalência da infecção em doadores novos foi de 1,27% enquanto em doadores de retorno foi de 0,02%. Conclusões: Avanços na prática da Hemoterapia na América Latina e o efetivo combate vetorial das últimas décadas diminuíram vertiginosamente a ocorrência de doença de Chagas transfusional nas áreas endêmicas. Porém, por não ser restrita geograficamente, essa doença representa hoje um desafio aos países desenvolvidos que recebem grande número de imigrantes, os quais podem transmitir a doença através de hemocomponentes. A prevalência de doadores positivos no Hemocentro Coordenador e nos Hemocentros Regionais de Goiás mostra tendência temporal de queda, quando comparada com estudos anteriores.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AntonioWilson-2006.pdf: 6802842 bytes, checksum: 8134652d892262dcb956b18b01349113 (MD5) Previous issue date: 2006-03-31 / The Chagas disease occurs from the United States to Patagonia, affecting about 16 million peopleThis disease was always associated with poverty conditions which are represented by the primitive houses made out of wood and mud The incidence of this infection in Brazil was estimated at a hundred thousand annual new cases in the end of the seventies and has a prevalence of 4,2% in the rural population The highest rates were found in Minas Gerais and Rio Grande do Sul with the seroprevalence of 8,8% following by Goiás (7,4%) and Bahia (5,4%) In Goiás within 2000 and 2003 249.868 home units were investigated and 51.570 triatomíneos were captured with 335 specimens infected by T. cruzi The peridomiciliar infestation was significantly bigger than the intradomiciliar by the species Triatoma sordida following by Panstrongylus megistus The inverse was observed with the species Rhodnius neglectus Panstrongylus geniculatus and Triatoma pseudomaculata (p <0,018) There was not significant difference in the infestations intra and peridomiciliar by the species Panstrongylus diasi Triatoma costalimai and Triatoma williami Only one specimen of Triatoma infestans was captured in the year 2000 / A infecção chagásica ocorre desde os Estados Unidos até a Patagônia acometendo cerca de 16 milhões de pessoas Essa doença sempre esteve associada às condições de pobreza representadas pelas casas primitivas construídas de artefatos de madeira e barro A incidência dessa infecção no Brasil foi estimada em 100 mil casos novos anuais no final dos anos 70 e prevalência de 4,2% na população rural Os coeficientes mais elevados dessa doença foram encontrados em Minas Gerais e Rio Grande do Sul com a soroprevalência de 8,8% seguidos por Goiás (7,4%) e Bahia (5,4%) Em Goiás no período de 2000 a 2003 foram investigadas 249.868 unidades domiciliares e capturados 51.570 triatomíneos com 335 espécimes infectados com T. cruzi A infestação peridomiciliar foi significativamente maior do que a intradomiciliar na espécie Triatoma sordida, seguida de Panstrongylus megistus O inverso ocorreu nas espécies Rhodnius neglectus Panstrongylus geniculatus e Triatoma pseudomaculata (p< 0,018) Não houve diferença significativa nas infestações intra e peridomiciliar nas espécies Panstrongylus diasi Triatoma costalimai e Triatoma williami. Apenas um exemplar da espécie Triatoma infestans foi capturado no ano de 2000

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:30:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Juliana Boaventura.pdf: 941307 bytes, checksum: 439636680eb32ef1d8b5574e0286aa19 (MD5) Previous issue date: 2008-02-29 / Chagas disease is a zoonotic disease caused by a protozoan plagued called Trypanosoma cruzi, it is a particular problem in Latin America, where it is estimated that 12 to 14 million people are infected. The populations of Trypanosoma cruzi can be divided into two major groups, the Trypanossoma cruzi I (TCI) and Trypanossoma cruzi II (TCII), the last being more heterogeneous and divided into five subgroups TCIIa, TCIIb, TCIIc, TCIId and TCIIe However, little is known of epidemiological and clinical implications of these ratings. The frequency of vertical transmission of Chagas disease can vary from 1.6 to 18.5% in accordance with the region and the methodology used in the studies. The aim of this study was to genetic characterization of 30 isolates of T. cruzi through the blood of patients with Chagas disease in the chronic phase, pregnant and not pregnant. The genetic characterization was performed with three different markers that amplified regions of the 18S and 24S α DNA ribosomal and mini-exon of the gene that allows classify the groups and subgroups of the parasite and the analysis of genetic variability among isolates of T. cruzi was performed the characterization of the variable region of minicicles of kDNA through the technique of Low-Stringency Single Specific Primer-PCR (LSSP-PCR). The 30 patients studied 75% (25/30) were women and 25% (5 / 30) not pregnant. The patients are the four different Brazilian regions being the States of Bahia 53.3% (16/30), Goiás 40.0% (12/30), Paraíba 3.3% (1 / 30) and the Federal District 3, 3% (1 / 30). The analysis of rDNA allowed show the TCII in 100% of the isolated populations in the regions studied, where the subgroup TCIIb/e has been detected in (96.66%) and TCIId in (3.33%) the latter is a sample of the group Control of the State of Bahia. The genetic variability between the 30 samples was 24.08 ± 14.4% share of bands among pairs. There was no difference between the share of bands patients of Bahia and Goiás, where the value of significance was less than 5%. There was no difference between the percentages of bands showed in analyses by age of the patients, gestational age and in the analysis of the groups of pregnant and not pregnant. In reviewing more than one tube of blood per patient coming evidenced profiles of signatures genomic complex and heterogeneous with 62.5% of bands shared less than 77% and only 37.5% had rates higher than 83% of bands sharing among samples. Suggesting so our isolates showed a great genetic variability. / A doença de Chagas é uma zoonose causada por um protozoário flagelado denominado Trypanosoma cruzi, trata-se de um problema específico da América Latina, onde estima-se que 12 a 14 milhões de pessoas estejam infectadas. As populações de Trypanosoma cruzi podem ser divididas em dois grandes grupos, o Trypanossoma cruzi I (TCI) e o Trypanossoma cruzi II (TCII), sendo o último mais heterogêneo e subdividido em cinco subgrupos TCIIa, TCIIb, TCIIc, TCIId e TCIIe, porém, pouco se sabe das implicações clínicas e epidemiológicas dessas classificações. A freqüência da transmissão vertical da doença de Chagas pode variar de 1,6 a 18,5% de acordo com a região e a metodologia usada nos estudos. O objetivo desse estudo foi a caracterização genética de 30 isolados de T. cruzi por meio da hemocultura de pacientes com doença de Chagas na fase crônica, gestantes e não gestantes. A caracterização genética foi realizada com três diferentes marcadores que amplificaram regiões 24Sα e 18S do DNA ribossômico e do gene mini-exon que permite classificar os grupos e subgrupos do parasito e para a análise da variabilidade genética entre os isolados do T. cruzi foi realizada a caracterização da região variável dos minicírculos do kDNA por meio da técnica de Low stringency specifc primer (LSSP-PCR), das 30 pacientes estudadas 75% (25/30) eram gestantes e 25% (5/30) não gestantes. As pacientes são de quarto regiões brasileiras distintas sendo elas dos Estados da Bahia 53,3% (16/30), Goiás 40,0% (12/30), Paraíba 3,3% (1/30) e Distrito Federal 3,3% (1/30). A análise do rDNA permitiu evidenciar o TCII em 100% das populações isoladas nas regiões estudadas, onde o subgrupo TCIIb/e foi detectado em (96,66%) e o TCIId em (3,33%) este último corresponde a uma amostra do grupo controle do Estado da Bahia. A variabilidade genética entre as 30 amostras analisadas foi de 24,08 ± 14,4% de compartilhamento de bandas entre os pares. Houve diferença no compartilhamento de bandas entre as pacientes da Bahia e Goiás, onde o valor de significância foi menor que 5%. Não houve diferença entre as porcentagens de bandas compartilhadas nas análises realizadas por faixa etária das pacientes, idade gestacional e na análise dos grupos de gestantes e não gestantes. Ao analisar mais de um tubo proveniente da hemocultura por paciente evidenciamos perfis de assinaturas gênicas complexas e heterogêneas com 62,5% de bandas compartilhadas menor que 77% e apenas 37,5% tiveram índices maiores que 83% de compartilhamento de bandas entre as amostras. Sugerindo assim que nossos isolados apresentaram uma grande variabilidade genética.

O estabelecimento de uma resposta TH1 com a produção de IL-12, IFN-gama e de óxido nítrico é crucial no controle do Trypanosoma cruzi, o qual pode colonizar o SNC de crianças e pacientes imunossuprimidos. A inflamação exacerbada em decorrência da persistência de um estímulo antigênico gera o acúmulo de substâncias potencialmente citotóxicas, como mediadores pró-inflamatórios e radicais livres. A partir da infecção de camundongos imunodeficientes (IL-12p40KO) com T. cruzi Sylvio X10/4, avaliamos os danos causados à medula espinal com enfoque na inflamação e neurodegeneração. Além da desmielinização, alta reatividade glial e morte de neurônios no ponto mais tardio da doença, constatamos uma baixa produção de mediadores inflamatórios nas primeiras semanas após a infecção, acompanhada pela proliferação ascendente do parasita no tecido nervoso. Acreditamos que um atraso na produção de IFN-gama seja responsável pela ativação tardia ou ineficiente dos fagócitos da medula espinal, favorecendo a disseminação descontrolada do protozoário e subsequentes danos teciduais. / The establishment of a TH1 response with IL-12, IFN-gamma and nitric oxide production is crucial for controlling the proliferation of Trypanosoma cruzi, which may colonize the CNS of children and immunosuppressed hosts. The exacerbated inflammation due to the persistence of an antigenic stimulus results on the accumulation of potentially cytotoxic substances, such as pro-inflammatory mediators and free radicals. By the infection of immunodeficient mice (IL-12p40KO) with T. cruzi Sylvio X10/4 parasites we evaluated the spinal cord damages, focusing on the inflammation and neurodegeneration. Besides demyelization, high glial reactivity and neuron death at the latest stage of the disease, we noticed low production of inflammatory mediators during the first weeks of the infection, accompanied by an ascendant parasite proliferation in the nervous tissue. We believe that a delay on IFN-gamma production is responsible for the late or inefficient phagocyte activation in the spinal cord, contributing to the uncontrolled protozoan proliferation and subsequent tissue injury.

A enzima cruzaína é um alvo validado e promissor para a descoberta de agentes tripanossomicidas. A validação desta enzima estimulou o desenvolvimento de vários inibidores ao longo dos últimos vinte anos. A descoberta de novos compostos, provenientes de classes químicas distintas, mais seguros e eficazes representa uma importante contribuição para o desenvolvimento da quimioterapia da doença de Chagas. Dentre essas classes, encontram-se as dipeptidil-nitrilas, que apresentam alta potência contra a cruzaína e são conhecidamente inibidores covalente-reversíveis. Estudos de afinidade através de Calorimetria de Titulação Isotérmica (ITC) são fundamentais na compreensão de sistemas bioquímicos e viabilizam a determinação dos parâmetros termodinâmicos. A ITC possibilita determinar com precisão e acurácia os valores de Kd(1/Ka), &Delta;H,&Delta;G,&Delta;S e &Delta;Cp e com esses parâmetros pode-se traçar facilmente o perfil termodinâmico dos ligantes. No presente trabalho, a enzima selvagem cruzaína bem como sua forma mutante C25S foram preparadas e, pela primeira vez, foi realizado o estudo de afinidade através da ITC para 16 dipeptidil-nitrilas usadas como inibidores da cruzaína. O perfil termodinâmico (TP) foi obtido e observado como entálpico-dirigido com compensação entrópica desfavorável. A fatoração da energia livre ( &Delta;G) de interação foi usada para avaliar os efeitos causados pelas substituições em P1, P2 e P3 na energética, sugerindo uma correlação direta entre a afinidade e a otimização entálpica/entrópica. As substituições avaliadas promoveram um aumento de 10 a 20 vezes na afinidade da cruzaína pelo inibidor. Estudos em diferentes tampões foram realizados para a determinação da influência do efeito de ionização na afinidade. Foi determinado o valor de &Delta;Cp do complexo cruzaína-Neq0409 e a relação de &Delta;HITC com &Delta;HvH. O Neq0569 foi testado contra a proteína mutante C25A, tendo sido observada inversão da assinatura que passou a ser entropicamente dirigida. Além disso, uma redução de 176 vezes na afinidade foi observada, demonstrando a importância da ligação covalente-reversível para o aumento da afinidade. / The enzyme cruzain is a validated and promising target for the discovery of trypanocidal agents. The validation of this enzyme has stimulated the development of several inhibitors over the past twenty years. The discovery of new compounds from different chemical classes, which are safer and more effective is an important contribution to the development of chemotherapy of Chagas disease. Among known classes are the dipeptidyl nitriles that exhibit high cruzain affinity and are known to be covalent-reversible inhibitors. Molecular optimization requires a rigorous assessment of physicochemical properties, including the thermodynamic characterization of molecular forces that govern cruzain-inhibitor interactions. Affinity studies through Isothermal Titration Calorimetry (ITC) are fundamental in understanding biochemical systems and enable the determination of thermodynamic parameters. The ITC tool provides the determination of Kd values (1/Ka), &Delta;H, &Delta;G, &Delta;S and &Delta;Cp accurately and precisely. These parameters can easily be used to draw the thermodynamic profile of ligands. In this study, the wild type cruzain enzyme and its mutant form C25S were prepared and, for the first time by the best of our knowledge, the study was conducted by ITC for 16 dipeptidyl nitriles used as inhibitors of cruzain enzyme, which is a hydrolase. The thermodynamic profile (TP) was obtained and observed to be enthalpy-driven with unfavorable entropic compensation. The free energy factorization (&Delta;G) interaction was used to evaluate the effects caused by substitutions in P1, P2 and P3 in energy, thereby suggesting a direct correlation between the affinity and the enthalpy/entropy optimization. Substitutions made possible to observe an increase of 10 to 20 times higher than the affinity for previous cruzain inhibitors. Studies on different buffers were performed to determine the influence of ionizing effect on affinity. The &Delta;Cp value was determined for cruzain-Neq0409 complex and its &Delta;HITC relationship with &Delta;HvH was also evaluated. Neq0569 was tested against the mutant protein C25A, having been observed reversal of the signature which became entropy driven. Furthermore, a reduction of 176-fold in the affinity was observed, demonstrating the importance of covalent-reversible binding to increase affinity.