Submitted by Automa??o e Estat?stica (sst@bczm.ufrn.br) on 2017-05-31T20:46:06Z No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) / Approved for entry into archive by Arlan Eloi Leite Silva (eloihistoriador@yahoo.com.br) on 2017-06-01T20:53:14Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T20:53:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PauloRicardoPorfirioDoNascimento_TESE.pdf: 3589123 bytes, checksum: d44189d5ff788541433dfaed7669cd11 (MD5) Previous issue date: 2016-12-13 / Introdu??o: Os c?es s?o considerados os principais reservat?rios dom?sticos de Leishmania infantum no Brasil e apresentam um amplo espectro de manifesta??es cl?nicas, variando de perda de peso, anemia grave, hepatoesplenomegalia e les?es d?rmicas disseminadas. O objetivo deste estudo foi avaliar o perfil de express?o g?nica em c?lulas do ba?o e do sangue perif?rico de c?es naturalmente infectados por L. infantum e investigar as altera??es histopatol?gicas no ba?o, f?gado, intestino e pele, visando identificar poss?veis vias imunorreguladoras envolvidas na patog?nese da LVC. Metodologia: Vinte e um c?es oriundos do Centro de Controle de Zoonoses de Natal-RN foram estudados e um subgrupo destes animais (n=8) foi utilizado para estudos de express?o g?nica global. A carga de Leishmania nos diversos tecidos, foi estimada por qPCR e cultura para Leishmania foi realizada. O RNA total do ba?o e do sangue perif?rico foi extra?do e as bibliotecas de cDNA foram obtidas e sequenciadas em plataforma Illumina. As sequ?ncias obtidas foram filtradas e alinhadas contra o genoma de Canis familiaris pelo software Bowtie. A express?o g?nica diferencial foi analisada usando o protocolo do Cufflinks, a anota??o funcional e as caracter?sticas moleculares dos genes foram obtidas no banco de dados Gene Ontology e KEGG atrav?s do pacote STRINGdb. Fragmentos de f?gado, duodeno, pele e ba?o foram coletados, processados e corados com hematoxilina/eosina e imunofluoresc?ncia para an?lises histopatol?gicas. Resultados: As cargas parasit?rias estimadas para ba?o e f?gado apresentam correla??o, por?m n?o h? correla??o entre a carga parasit?ria destes tecidos com aquela presente no sangue. Aproximadamente 756 genes se mostraram super expressos no ba?o de animais sintom?ticos, como CTLA4, CCL2 e IL27; al?m destes, cerca de 1.190 genes apresentaram express?o reprimida neste mesmo grupo, como BMP6, C1QB e C1QC. As vias de ativa??o de c?lulas NK, receptores dos tipos Toll-like e NOD-like expressas no ba?o de animais sintom?ticos estavam com express?o elevada, enquanto as vias de s?ntese de ?ncoras de GPI e ativa??o do imunoproteossoma estavam reprimidas. A progress?o da LVC resulta em desorganiza??o da citoarquitetura do ba?o, com perda parcial da delimita??o entre polpa branca e vermelha. ? observado infiltrado inflamat?rio no f?gado, duodeno e pele. Validando o achado do transcriptoma, foi observada por imunofluoresc?ncia a presen?a de CTLA4, CCR7 e NLRP3 no ba?o de animais sintom?ticos. Conclus?es: A desregula??o de mecanismos tipicamente associados ? imunidade inata pode estar diretamente envolvida na patogenia da LVC. Al?m disso, uma alta efici?ncia no processamento e apresenta??o de ant?genos parecem ser respons?veis, pela resist?ncia ao desenvolvimento dos sinais cl?nicos e integridade tissular durante a infec??o por L. infantum em c?es. / Background: Dog is the main domestic reservoir of Leishmania infantum in Brazil. Those animals present a wide spectrum of clinical manifestations, varying from weight loss, anemia to hepatosplenomegaly and skin lesions. The goal of this study was to evaluate the gene expression profile in the spleen and peripheral blood cells from naturally Leishmania-infected dogs and to study the histology of the spleen, liver, gut and skin, in order to determine possible molecular pathways and histopathological process underlying the mechanisms related to disease progression and resistance. Methodology: 21 dogs was studied and a sub group (n=8) was selected for transcriptomic studies. In addition, spleen, liver, gut and blood parasitism were estimated by qPCR and parasite was isolated from the spleen by culture. Total RNA was extracted and cDNA libraries were constructed and sequenced in an Illumina platform. The reads obtained were filtered and aligned against Canis familiaris genome using Bowtie. Differential gene expression was analyzed using the Cufflinks workflow, functional annotation and molecular features for each gene was obtained from Gene Ontology and KEGG database using STRINGdb. A fragment of liver, gut, skin and another spleen fragment were collected, processed and stained by HE and immunofluorescence for histopathological analysis. Results: Parasite load estimated in the spleen and liver were strongly associated, however no correlation was observed between them and circulating parasite estimation. Approximately, 756 genes were upregulated in the spleens of symptomatic dogs, as CTLA4, CCL2 and IL27, furthermore, about 1,190 genes were downregulated in the same group of animals, as BMP6, C1QB and C1QC. We found that NK cells activation, toll-like and NOD-like receptors pathways are highly expressed in the spleen of symptomatic dogs, while GPI-anchors synthesis and immunoproteasome activation related genes are downregulated in these animals. Additionally, we observed that in symptomatic animals, the cytoarchitecture of spleen is altered, with partial loss of the delimitation between white and red pulp. Furthermore, an intense inflammatory infiltrate in the liver, gut and skin of these animals. Confirming the RNA-Seq findings, we observed by immunofluorescence CTLA4, CCR7 and NLRP3 are overexpressed the spleen of symptomatic dogs. Conclusions: These findings suggest that misregulation of innate immunity is involved in CVL and an efficient antigen presentation maybe decisive for resistance to clinical signs development and tissue integrity during L. infantum infection in dogs.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-26Bitstream added on 2014-06-13T19:18:35Z : No. of bitstreams: 1 camargo_jb_me_botfmvz.pdf: 604246 bytes, checksum: 07ea679245c94fa23e7b1461f7a2ce2a (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A leishmaniose visceral (LV) é uma enfermidade infecciosa de caráter zoonótico, endêmica em algumas áreas do Brasil, causada pela L. chagasi. A maior dificuldade encontrada para controlar a doença está relacionada ao seu diagnóstico, que apresenta limitações quanto aos seus resultados. Desta maneira, o estudo comparou duas provas sorológicas, a reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e o ensaio imunoenzimático (ELISA); o exame parasitológico direto bem como a reação em cadeia pela polimerase (PCR), ambos de aspirado de linfonodo. Foram utilizados os iniciadores gênero-específicos LINR4 e LIN19 e os iniciadores RV1 e RV2 espécie-específicos para identificar a L. chagasi. Foram coletadas amostras de 100 cães sorologicamente positivos, provenientes do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ) de Bauru, região endêmica, e de 100 cães provenientes do CCZ de Botucatu-SP, área não-endêmica para a enfermidade. A RIFI, o parasitológico e a PCR apresentaram especificidade de 100% e o ELISA de 99%. As sensibilidades foram 97,77%; 93,33% e 91,11%, para RIFI, ELISA e PCR respectivamente. A proporção de concordância entre as provas foi satisfatória, apresentando valores de P sempre menores que 0,05. Pode-se concluir que além do exame sorológico, pode-se utilizar também a PCR de linfonodo no diagnóstico da LVC, pois a associação de técnicas melhorou a detecção de cães infectados, contribuindo para o melhor controle desta zoonose. / The visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic infectious disease, endemic in some areas from Brazil, caused by L. chagasi. The greatest difficulty to control the disease is related to its diagnosis, which present limitations related with the results. Thus, the study compared two serologic methods, the indirect fluorescent antibody test (IFAT) and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA); the parasitological direct examination and the polymerase chain reaction (PCR), both drawn from the lymph node. The initiators used were gender-specific LINR4 and LIN19 and the initiators species-specific RV1 and RV2 to identify L. chagasi. The samples were collected from 100 dogs serologically positive, from the Center for Zoonoses Control (CZC) of Bauru, endemic region, and 100 dogs from the CZC of Botucatu-SP, an area considered non-endemic to the disease. The IFAT, the parasitological and the PCR showed 100% of specificity and ELISA 99%. The sensitivities were 97.77%, 93.33% and 91.11% for IFAT, ELISA and PCR respectively. The proportion of agreement between the methods was satisfactory, showing values of P always smaller than 0,05. It was concluded that in addition to the serologic methods, PCR of lymph node can also be used for CVL diagnosis, and that the combination of techniques improved the detection of infected dogs, contributing for better control of this zoonosis.

Orientador: Tereza Cristina Cardoso da Silva / Coorientadora: Katia Denise Saraiva Bresciani / Banca: Ana Carolina Borsanelli / Banca: Andréa Fontes Garcia / Resumo: Leishmaniose visceral é uma doença infecciosa, de potencial zoonótico, negligenciada e um sério problema de saúde pública em muitas partes do mundo. Dada à importância epidemiológica, a pesquisa teve como objetivo identificar soroprevalência, distribuição espacial e os fatores de risco relacionados à ocorrência de casos de leishmaniose visceral canina (LVC) no município de Piacatu. Foram analisados dados de inquérito censitário canino, com coleta de amostras de 833 animais, com posterior mapeamento dos casos positivos e aplicação de questionário epidemiológico casa a casa em locais de ocorrência de LVC. Baseado nos dados da análise soro- epidemiológica e espacial observou-se que ocorreram associações significativas entre fatores de risco e prevalência de LVC. Medidas de controle da LV necessitam ser intensificadas e direcionadas ao controle de vetores com identificação de flebótomos infectados, manejo ambiental e avaliação do real potencial de transmissão de gatos e animais considerados sorologicamente negativos. / Abstract: Visceral leishmaniasis is an infectious disease of zoonotic potential, neglected and a serious public health problem in many parts of the world. Given the epidemiological importance, the research aimed to identify seroprevalence, spatial distribution and risk factors related to the occurrence of cases of canine visceral leismaniasis (LVC) in the city of Piacatu. Data from a canine census survey were analyzed, with samples collected from 833 animals, with subsequent mapping of the positive cases and application of an epidemiological questionnaire at places with LVC occurrence. Based on data from the seroepidemiological and spatial analysis it was observed that there were significant associations between risk factors and prevalence of LVC. Control measures of LV need to be intensified and directed to the control of vectors with identification of infected sandflies, environmental management and evaluation of the real transmission potential of cats and animals considered serologically negative. / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Núcleo de Medicina Tropical, Progragama de Pós-graduação em Medicina Tropical, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2013-01-04T13:40:56Z No. of bitstreams: 1 2012_VivianeMedeirosSilva.pdf: 8808644 bytes, checksum: 9d9dc0f5cdac4641c66122653211e830 (MD5) / Approved for entry into archive by Guimaraes Jacqueline(jacqueline.guimaraes@bce.unb.br) on 2013-02-04T12:53:57Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_VivianeMedeirosSilva.pdf: 8808644 bytes, checksum: 9d9dc0f5cdac4641c66122653211e830 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-02-04T12:53:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_VivianeMedeirosSilva.pdf: 8808644 bytes, checksum: 9d9dc0f5cdac4641c66122653211e830 (MD5) / No Brasil, a leishmaniose visceral canina (LVC) é causada pelo parasito Leishmania chagasi, (sin. L. infantum). Considera-se que a principal via de transmissão da LV é por meio da picada de flebotomíneos infectados. Entretanto, formas alternativas têm sido investigadas e a picada ou ingestão de carrapatos infectados poderia ter relevância epidemiológica. A presença de L. chagasi em Rhipicephalus sanguineus poderia explicar a transmissão do parasito na população canina em locais onde há baixa frequência de flebotomíneos. O objetivo deste trabalho foi detectar a presença de Leishmania spp. em R. sanguineus coletados em cães naturalmente infectados no Distrito Federal. O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética no Uso de Animais da Faculdade de Medicina da Universidade de Brasília. Os carrapatos foram obtidos de uma amostra de conveniência composta por 48 cães entregues por seus donos à Diretoria de Vigilância Ambiental da Secretaria de Saúde do Distrito Federal com diagnóstico suspeito ou confirmado de LVC, por meio de testes sorológicos, ou cães recolhidos por ocasião da realização do inquérito rotineiro do programa de controle de LVC no DF. Foi coletado sangue venoso dos 48 cães para avaliação sorológica da infecção por Leishmania spp por meio das técnicas imunoenzimática e imunofluorescência indireta, ambas com antígeno bruto de L. major; do teste imunocromatográfico rápido de duplo percurso com antígeno recombinante K28 e aplicação da técnica de PCR para amplificação de alvos de DNA gênero-específicos. Após a identificação dos espécimes de R. sanguineus, os carrapatos foram armazenados em pools de até 10 espécimes, separando-os em grupos de machos, fêmeas e ninfas. Os carrapatos foram dissecados para retirar o intestino e glândulas salivares para extração de DNA e posterior amplificação da região conservada de 120pb de kDNA e 234pb do gene hsp70 de Leishmania spp. por meio da PCR e para cultura em meio NNN modificado. Os produtos amplificados de kDNA foram ainda submetidos à digestão com as endonucleases Hae III e BstUI e ao sequenciamento genético para identificação das espécie do parasito. Foram realizados esfregaços em lâminas coradas com Giemsa para observação direta de formas de Leishmania spp. A positividade das técnicas sorológicas aplicadas ao sangue canino foi de 66,6% pelo ELISA, destes, 81,2% pela RIFI e 56,2% do total pelo DPP, e ainda, 70,8% dos cães apresentaram pelo menos um dos três testes com resultados reagentes ou positivos. Foram coletados 130 espécimes de R. sanguineus dos 27 cães que se apresentaram ectoparasitados. Houve sucesso no isolamento em cultura de Leishmania spp. de cinco pools de glândulas salivares e intestinos de carrapatos coletados em quatro cães. O sequenciamento do kDNA amplificado pela PCR a partir destas amostras demonstrou homologia com sequências de Leishmania spp. Os produtos amplificados de kDNA a partir de amostra sanguínea de um dos cães apresentou homologia com sequência de L. braziliensis, no entanto, a homologia do material amplificado a partir dos carrapatos coletados desse cão foi com uma sequência de L. infantum. A cultura analisada por eletroforese de isoenzimas foi identificada como L. infantum. A infecção por Leishmania nos cães, dos quais foram coletados os pools de carrapatos positivos na cultura, foi confirmada pela PCR. A lâmina do pool de machos de um dos cães foi a única a apresentar formas flageladas de tripanossomatídeos, cuja identificação não foi possível pela morfometria. Os resultados obtidos indicam que R. sanguineus que se alimentam naturalmente em cães naturalmente infectados por L. infantum apresentam DNA do parasito no intestino e glândulas salivares, confirmam a presença de L. infantum viável nestes ectoparasitos,e a possibilidade de isolar L. infantum em meio de cultura. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / In Brazil, canine visceral leishmaniasis (CVL) is caused by the parasite Leishmania chagasi (syn. L. infantum). It is considered that the principal route of transmission of the VL is through the bite of infected sand flies. However, alternative methods have been investigated and bites or ingestion of infected ticks could have epidemiological relevance. The presence of L. chagasi in Rhipicephalus sanguineus could explain the transmission of the parasite in the canine population in areas where there are low frequency of sand flies. The objective of this study was to detect the presence of Leishmania spp. in R. sanguineus collected from dogs naturally infected in the District Federal. The project was approved by the Ethics Committee on Animal Use of the UNB Faculty of Medicine. Ticks were obtained from a convenience sample consisting of 48 dogs delivered by their owners to the Environmental Surveillance Directory of Health Department of the District Federal with suspected or confirmed diagnosis of CVL, through tests, or dogs collected during the day routine investigation of the control program LVC in DF. Venous blood was collected from 48 dogs for serologic evaluation of infection by Leishmania spp. by means of ELISA and indirect immunofluorescence techniques, both with crude antigen of L. major, the immunochromatographic dual path assays with recombinant K28 and amplification of genus specific DNA targets by PCR. After identification of specimens of R. sanguineus ticks were stored in pools of up to 10 specimens, separating them into groups of males, females and nymphs. Ticks were dissected to remove the gut and salivary glands for DNA extraction and subsequent amplification of 120pb of the conserved region of kDNA and 234pb of the hsp70 gene of Leishmania spp. by PCR. Ticks sample were also cultured in modified NNN culture medium. The amplified products of kDNA were further subjected to digestion with restriction endonucleases Hae III and BstUI and gene sequencing to identify the parasite species. Smears were prepared on slides stained with Giemsa for observation of Leishmania spp. forms. The positivity of serological techniques applied to canine blood was 66.6% by ELISA. Among positive samples, 81.2% were also positive by IFA and 56.2% by DPP, then, 70.8% of dogs had at least one of the three tests with positive results. We collected 130 specimens of R. sanguineus of the 27 dogs that had ectoparasites. Isolation of Leishmania spp. was successfull in five pools of salivary glands and intestines of ticks collected from four dogs. Sequencing kDNA amplified by PCR from these samples revealed homology with sequences of Leishmania spp. The amplified products of kDNA in a blood sample from one of the dogs showed sequence homology to L. braziliensis, however, the amplified material from ticks collected from this dog had homology with L. infantum sequence. The isolate analyzed by mulilocus enzyme electrophoresis was identified as L. infantum. The Leishmania infection in dogs where we collected the pools of ticks which had successful parasite isolation in culture was confirmed by PCR. The smear of the pool of male ticks collected from one dog was the only positive for flagellated trypanosomatidae whose identification was not possible by morphometry. Our results indicate that R. sanguineus feeding naturally in dogs naturally infected by L. infantum had parasite DNA present in the intestine and salivary glands, confirm the presence of viable L. infantum in these ectoparasites, and the possibility of isolation of L. infantum in culture medium.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2008. / Submitted by Fernanda Weschenfelder (nandaweschenfelder@gmail.com) on 2010-06-11T20:16:07Z No. of bitstreams: 1 2008_CeciliaAzevedoDias.pdf: 1860042 bytes, checksum: a5e68c02f6ce03d9bfe796388ba72bd5 (MD5) / Approved for entry into archive by Lucila Saraiva(lucilasaraiva1@gmail.com) on 2010-06-23T23:40:51Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2008_CeciliaAzevedoDias.pdf: 1860042 bytes, checksum: a5e68c02f6ce03d9bfe796388ba72bd5 (MD5) / Made available in DSpace on 2010-06-23T23:40:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2008_CeciliaAzevedoDias.pdf: 1860042 bytes, checksum: a5e68c02f6ce03d9bfe796388ba72bd5 (MD5) Previous issue date: 2008-12-10 / Considerando que os rins são freqüentemente acometidos na leishmaniose visceral canina, esse estudo visa contribuir para um melhor entendimento das alterações clínico-laboratoriais e nefropatias associadas à enfermidade. Foram realizados exames clínicos, hemograma completo, bioquímica sanguínea (proteína total, globulina, albumina, uréia e creatinina) e urinálise de 14 cães sintomáticos e 13 cães assintomáticos com leishmaniose visceral, além de 10 animais saudáveis como controle. Os principais sinais clínicos encontrados foram: palidez de mucosas (59,3%), linfadenopatia generalizada (55,6%), alterações dermatológicas (55,6%), esplenomegalia (55,6%), hepatomegalia (33,3%), condição corporal magra (33,3%) e alterações oftálmicas (29,6%). Nos cães com a enfermidade, foi observada anemia normocítica normocrômica (70,4%), diminuição na contagem de linfócitos (33,3%), aumento das concentrações séricas de uréia e creatinina (18,5%) e concentrações elevadas de proteínas, sangue oculto e hemácias na urina, em comparação aos animais do grupo controle. Os cães do grupo sintomático apresentaram hiperproteinemia, hiperglobulinemia e hipoalbuminemia mais expressivas, acometendo 64% dos animais desse grupo. Foram observadas glomerulonefrites em 70,4% dos cães, alterações intersticiais no parênquima renal em 70,4% e alterações tubulares em 40,7%. As principais glomerulopatias observadas nos cães com leishmaniose visceral foram glomerulonefrite membranoproliferativa (47,4%), glomeruloesclerose segmentar focal (21%), glomerulonefrite proliferativa mesangial (15,8%) e glomerulonefrite membranosa (15,8%). Os cães com glomerulonefrite membranoproliferativa apresentaram maior comprometimento da função renal. Em áreas endêmicas para a doença, como o Distrito Federal, os resultados do presente estudo pretendem contribuir para identificação e diagnóstico mais precoce da enfermidade nos cães. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Considering the fact that kidneys are usually injured in canine visceral leishmaniasis, the aim of this study was to improve knowledge about clinical and laboratorial changes and nephropathies associated with this disease It was conducted physical examination, complete blood count, serum biochemistry (total protein, globulin, albumin, blood urea nitrogen and creatinln) and urinalysis from 14 symptomatic and 13 asymptomatic dogs with visceral leishmaniasis. Ten healthy animals were used as control group. The most important clinical signs found were: paleness of the mucous membrane, generalized limphadenopathy, cutaneous lesions, splenomegaly, hepatomegaly, weight loss and ophtalmological lesions. The infected group presented normocytic normochromic anemia, lymphopenia, azotemia and higher urinary level of proteins, occult blood and erythrocytes, compared with control group. The symptomatic group presented most significant hyperproteinemia, hyperglobulinemia and hypoalbuminemia in 64% of the animals. 70.4% of the dogs presented glomerulonephritis and intersticial changes in renal parenchyma, and 40.7% presented tubular injuries. The most important glomerulopathies reported in dogs with visceral leishmaniasis were membranoproliferative glomerulonephritis (47.4%), focal segmentar glomerulosclerosis (21%), mesangial proliferative glomerulonephritis (15.8%) and membranous glomerunephritis (15.8%). Dogs with membranoproliferative glomerulonephritis presented a more impaired renal function.. In canine visceral leishmaniasis endemic areas, such as Distrito Federal, the results of this study intend to improve early identification and diagnosis of the disease in dogs.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T15:02:06Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilzane Dantas Nóbrega.pdf: 1294447 bytes, checksum: 21608dde0c9fde9504e79e6652893aa4 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T15:02:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO Gilzane Dantas Nóbrega.pdf: 1294447 bytes, checksum: 21608dde0c9fde9504e79e6652893aa4 (MD5) Previous issue date: 2014 / A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma doença de caráter zoonótico que reflete em graves problemas à saúde pública. Os cães são os principais reservatórios domésticos do protozoário. No Brasil, uma das formas de controle é a eutanásia dos cães portadores da infecção e nesse contexto, o diagnóstico preciso da LVC é muito importante. Porém, ainda não há um teste altamente sensível e específico, de fácil execução, simples, menos invasivo e de rápido resultado. As avaliações das novas metodologias empregadas para diagnóstico são necessárias ao aprimoramento do programa de controle. Esse estudo teve como objetivo avaliar e comparar dois testes sorológicos que utilizam proteínas recombinantes, sendo um teste imunocromatográfico (TR DPP®) com antígeno rk26/rk39/rk9 e um Ensaio Imunoenzimático (ELISA/S7®) com HSP70 e um teste molecular, a Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real para diagnóstico da LVC no Semiárido Paraibano. Foram utilizadas 258 amostras de soro e sangue total divididas em dois grupos: 212 de animais assintomáticos e 46 de animais sintomáticos obtidos durante um levantamento epidemiológico no Semiárido Paraibano. Os resultados mostraram que do total das amostras, 32,9% (85/258) foram positivas em pelo menos um teste, sendo 29,2 % (62/212) dos animais assintomáticos e 50,0% (23/46) dos animais sintomáticos. Os melhores resultados de concordância entre os testes foram obtidos quando realizada a comparação entre a qPCR e o ELISA/S7® mostrando que para animais assintomáticos a sensibilidade e especificidade foi de 74% e 93%, respectivamente e coeficiente Kappa de 0,58, os animais sintomáticos apresentaram sensibilidade de 80% e 81% de especificidade com coeficiente Kappa de 0,51 revelando moderada concordância em ambos os grupos. Com base nos resultados, o ELISA/S7® apresentou um melhor desempenho entre os testes, embora o TR DPP® seja um teste de fácil execução e rápido diagnóstico.

Made available in DSpace on 2014-06-12T16:29:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4897_1.pdf: 8357327 bytes, checksum: 46d7207290a153cad6a38d771aae9c1c (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / A Cartografia tem sido utilizada pela saúde pública desde 1854 com os estudos do Dr. John Snow, que a partir de dados descritivos dos óbitos e a base espacial do centro de Londres, conseguiu controlar o problema da epidemia da cólera. A pesquisa aqui desenvolvida teve como objetivos gerar um aplicativo para monitoramento epidemiológico utilizando SIG - Sistemas de Geoinformação, fornecer subsídios às secretarias de saúde e avaliar a aplicação de técnicas de análise espacial. Para tanto, foram utilizados conceitos de Cartografia, com ênfase em SIG, e de epidemiologia com o estudo da zoonose Leishmaniose visceral - Calazar, tendo como área piloto ZEIS Zonas Especiais de Interesse Social em Jaboatão dos Guararapes - PE. Como resultado, foi desenvolvido um sistema aplicativo em SIG utilizando a plataforma SPRING, de consulta pela internet, tendo sido aplicada à metodologia de Modelagem de Dados Espaciais

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2018-08-07T14:48:12Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1802736 bytes, checksum: e5db15c40e2dab33fc52de0674a58641 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-07T14:48:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1802736 bytes, checksum: e5db15c40e2dab33fc52de0674a58641 (MD5) Previous issue date: 2018-02-22 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Leishmaniose é o nome dado as enfermidades causadas por protozoários do gênero Leishmania que são capazes de gerar diversos quadros de doenças em seres humanos, dependendo da espécie envolvida na infecção podem ocorrer desde lesões cutâneas localizadas a lesões disseminadas e infecção visceral. No Brasil a leishmaniose visceral (LV) é causada principalmente por Leishmania infantum chagasi (syn Leishmania infantum). A LV tem os cães e o homem como principais espécies afetadas, é uma doença endêmica ocorrendo principalmente em regiões rurais, mas que vem apresentando tendência a urbanização. Segundo o ministério da saúde entre 1990 e 2016 foram relatados mais de 75000 casos desta doença no Brasil. As ecto-nucleotidases da família E-NTPDase são enzimas capazes de hidrolisar nucleotideos di e/ou trifostato e atuam em diversos processos relacionados a infeciosidade deste parasito, além de terem potencial para uso em diagnóstico de LV em cães. Duas isoformas são conhecidas em L. infantum chagasi, uma maior denominada LicNTPDase1 (~70kDa) e uma menor denominada LicNTPDase2 (~40kDa). Até o momento somente as NTPDases recombinates de L. infantum chagasi foram estudadas. Nosso objetivo foi estudar as enzimas nativas do parasito. Nesse trabalho foram realizadas diferentes abordagens: tentativas de purificar ambas enzimas nativas de promastigotas, avaliação da expressão do mRNA relativos às enzimas em diferentes fases evolutivas do parasito, clonagem e expressão solúvel da região que codifica para o ectodomínio da LicNTPDase2. Constatamos a secreção de uma NTPDase com aproximadamente 70 kDa por formas promastigotas. Análises por RT-qPCR mostraram que a LicNTPDase1 é mais expressa em promastigota de fase logarítmica de crescimento e em condições acidófilas, enquanto a LicNTPDase2 possui maior expressão em amastigota que é uma das formas infecciosas do parasito. Estes dados podem reforçar a participação destas enzimas no desenvolvimento e infecciosidade do parasito. Foi possível expressar a LicNTPDase2 em sua forma solúvel, o que nos ajudará em futuros estudos estruturais, enzimáticos e na produção de anticorpos estruturais contra esta proteína. / Leishmaniasis is the name given to diseases caused by protozoans of the genus Leishmania that are capable of generating several disease states in humans, depending on the Leishmania species involved in the infection, can occur from localized skin lesions to disseminated lesions and visceral infection. In Brazil the visceral leishmaniasis (VL) is caused by the species Leishmania infantum chagasi and its transmission occurs by the bite of females of the insect Lutzomya longipalpis. VL has dogs and man as main species affected, is an endemic disease occurring mainly in rural regions, but that has been showing a strong tendency to urbanization. According to the Health Ministry between 1990 and 201, more than 75,000 cases of this disease have been reported in Brazil. The Ecto-nucleotidases from the E-NTPDase family are enzymes capable of hydrolyzing di- and / or triphosphate nucleotides and act in several processes related to the infectivity of this parasite, besides being potential for use in the diagnosis of VL in dogs. Two isoforms of these enzymes are known in L. infantum chagasi, LicNTPDase1 (~70kDa) and LicNTPDase2 (~ 40kDa). Until now only the recombinants NTPDases of L. infantum chagasi were studied. Thus, our aim was to work with the native enzymes of the parasite. In this work, different approaches were carried out: attempts to purify both native promastigote enzymes, evaluation of the mRNA expression related to the enzymes in different evolutionary stages of the parasite, cloning and soluble expression of the region encoding the ectodomain of LicNTPDase2. Futhermore, we observed the secretion of an NTPDase with approximately 70kDa by promastigote forms. Analyzes by RT-qPCR showed that the LicNTPDase1 is more expressed in log-phase growth promastigotes and in acidophilic conditions, while the LicNTPDase2 has greater expression in amastigote that is one of the infectious forms of the parasite. These datacan reinforce the participation of these enzymes in parasite development and infectivity. Moreover, it was possible to express the LicNTPDase2 in its soluble form, which will help us in future structural, enzymatic studies and in the production of structural antibodies against this protein.

A leishmaniose visceral (LV) à um sÃrio problema de saÃde pÃblica na AmÃrica Latina e vem apresentando uma letalidade crescente no Brasil. à uma doenÃa infecciosa sistÃmica que envolve a medula Ãssea, causando vÃrias manifestaÃÃes hematolÃgicas. Objetivos: Descrever as caracterÃsticas da medula Ãssea na LV e correlacionar os achados citomorfolÃgicos com parÃmetros do sangue perifÃrico e com os sinais de gravidade da doenÃa. Metodologia: Trata-se de um estudo retrospectivo, com levantamento dos dados clÃnicos e laboratoriais de pacientes atendidos em trÃs hospitais de referÃncia no Estado do CearÃ, entre junho de 2001 a agosto 2010. Foram incluÃdos 126 pacientes com diagnÃstico de LV, confirmado pela detecÃÃo do parasito na medula Ãssea e/ou pela sorologia positiva, atravÃs do rK39. As lÃminas dos mielogramas de todos os pacientes foram avaliadas e a carga parasitÃria e os parÃmetros hematolÃgicos foram determinados. A gravidade foi determinada pelo risco de Ãbito, utilizando sistema de escores. Resultados: A idade variou de 5 meses a 79 anos e 74% eram do gÃnero masculino. Os pacientes residentes em regiÃo urbana representaram 68,2% da casuÃstica. Comorbidades estavam associadas em 31,7% dos pacientes. Os achados mais frequentes da medula Ãssea foram carga parasitÃria moderada/alta (57,2%), displasia com predomÃnio de diseritropoese (80,9%), hemofagocitose (30,1%) e granuloma (22,2%). Houve uma associaÃÃo positiva entre a carga parasitÃria com neutropenia grave, neutrÃfilos <500/mm3 (p=0,04) e hemofagocitose (p=0,05). No presente trabalho, utilizando o modelo de prognÃstico baseado em escores, foi observado que 23,8% foram classificados como pacientes com alto risco de Ãbito (&#8805; 3). A maioria dos pacientes com escore considerado de alto risco de Ãbito apresentou medula Ãssea normocelular, carga parasitÃria moderada/alta, diseritropoese e disgranulopoese. Em relaÃÃo à presenÃa de granuloma, houve uma associaÃÃo negativa, estatisticamente significante, nos pacientes com alto risco de Ãbito (p=0,02). O estudo aponta para possÃveis indicadores diagnÃsticos e de prognÃsticos identificÃveis na medula Ãssea de pacientes com LV / The visceral leishmaniasis (VL) is a serious problem of public health in the Latin America and has shown an increase mortality in the Brazil. This is a systemic infectious disease involving the bone marrow, causing many hematologic manifestations. Objetives: to describe LV bone marrow features and correlate cytomorphological findings with peripheral blood parameters and the disease severity: Methodology: It is a retrospective study with gathering clinical and laboratory data of patients attended at three references hospital of Cearà State between june 2001 and August 2010. Were included 126 patients with a LV diagnosis confirmed by detection of the parasite in bone marrow and/or by positive sorology, by rK39. The slides of bone marrow aspiration of all patients were evaluated and the parasite load and the hematologic parameters were determined.The gravity was determined by the risk of death using the scoring system. Results: The age ranged from 5 months to 79 years and 74% were male. The patients from urban area accounted 68,2%. Comorbidities were associated in 31,7% patients. The more frequently finding of bone marrow were moderate/high parasite load (57,2%), dysplasia with predominance of dyserythropoiesis (80,9%), hemophagocytosis (30,1%) and granuloma (22,2%).There was one positive association between parasite load and serious neutropenia, neutrophil <500/mm3 (p=0,04), and hemophagocytosis (p=0,05). In this present study, using the model predictions based on scores was observed that 23,8% were classified as high risk of death. Most patients with a score considered with high risk of death had normocelular bone marrow, parasite load moderate/high, dyserythropoiese and dysgranulopoiese. In relation to the presence of granuloma there was a negative association statistically significant in the patients with high risk of death (p=0,02). The study points to possible diagnostic and prognostic indicators identified in the bone marrow of patients with VL

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:06:34Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo6314_1.pdf: 1402240 bytes, checksum: 3a6b521eb7d3cff5b8fb4e3b2347a3ec (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2005 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Protozoários flagelados do gênero Leishmania são transmitidos para mamíferos através da picada de insetos flebotomíneos e são os agentes etiológicos das quatro formas clínicas de leishmanioses: leishmaniose visceral que é fatal quando não tratada, leishmaniose mucocutânea, leishmaniose cutânea e a leishmaniose cutânea difusa. A leishmaniose visceral é comum em países em desenvolvimento, com uma estimativa de 500.000 novos casos a cada ano. A Leishmania chagasi é o agente etiológico da leishmaniose visceral nas Américas e outras espécies são responsáveis pela forma visceral da doença no Velho Mundo. Devido sua importância, o desenvolvimento de drogas e vacinas usando antígenos do parasito têm sido o alvo de muitos estudos. Entre os maiores antígenos do parasito estão as proteínas de choque térmico (HSP), a maior classe de proteínas conservadas, classificadas como chaperonas. Elas são essenciais no controle do ciclo celular e estão envolvidas na assistência ao dobramento e prevenção de reações irreversíveis tais como agregações inespecificas de proteíans celulares. As HSP possuem um papel importante com agente imunoregulatório com potente uso terapeutico; ademais elas foram identificadas como os maiores imunógenos em várias doenças infecciosas e que estimulam uma resposta específica protetora. A HSP83, ortóloga a HSP90 de mamíferos, é uma das proteínas de Leishmania mais abundantes e é reconhecida pela resposta imune humoral e celular em humanos e em cães com leishmaniose visceral. Neste estudo, baseado em alinhamentos, a estrutura primária da HSP83 de Leishmania chagasi foi comparada a HSP90 de outros organismos, para investigação de suas relações filogenéticas. Quando a seqüência de aminoácidos foi alinhada às seqüências depositadas no banco de genes públicos, ficou evidente que a proteína é extremamente conservada mesmo em organismos pertencentes a diferentes reinos. Quando a seqüência codificante foi comparada, foi possível mapear rigorosamente os exons do gene humano, exceto pela presença de três gaps. O primeiro gap corresponde a uma alça flexível entre duas folhas beta, o segundo tem 57aa (o maior gap), compreende o domínio N-terminal correspondendo ao sítio de ligação de ATP e o último gap, que corresponde também a uma alça flexível entre o domínio central e o domínio carboxi. O aumento da divergência na seqüência é coincidente com as regiões equivalentes as junções dos exons na proteína ortóloga de mamíferos. Nossos resultados sugerem que o gene da HSP83 dos organismos ancestrais aos Kinetoplastida tinha introns, e que foram perdidos durante a evolução.