Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000440746-Texto+Completo-0.pdf: 8186310 bytes, checksum: 2ddc0fe8a6260707c7754fc8b9f27f5b (MD5) Previous issue date: 2012 / The Angiostrongylus genus includes two species that can infect humans, A. cantonensis and A. costaricensis. They may cause infections known as eosinophilic meningitis and abdominal angiostrongyliasis, respectively. In A. costaricensis infection, eggs and larvae are central elements in the inflammatory reactions, which may get worse with death of the worms. The currently available anthelmintics act on the parasite essential metabolic pathways with a killing effect. Therefore, an alternative substance to treat angiostrongyliasis, acting mainly in worms reproduction is necessary. An in vitro study conducted with Schistosoma mansoni showed inhibition of oviposition by Phenanthroline. In another study with Caenorhabditis elegans, it was shown that serotonin increases the egg-laying rate of the female nematode, besides controlling the change of its posture state (rest and activation). Serotonin is a neurotransmitter present in vertebrates and invertebrates. In order to test the effect on egg laying of Angiostrongylus spp., two substances that interfere with serotonin neurotransmission in humans, Buspirone and Pizotifen, were used in an experimental model in vivo. 28 rodents of species Rattus norvegicus were divided into three groups and infected with 100 L3 of A. cantonensis: a control group (untreated) and two groups treated with each substance. The substances were administered as soon as all rodents started releasing larvae, once a day, orally, for 10 days, at a concentration of 0. 03 mg / mL each. In this period rodent feces were collected daily for counting the number of L1 and after 10 days the animals were euthanized for collection of the worms. The average number of larvae released in feces was 37,934 by the Control group, 10,658 by the Buspirone group and 6,658 by the Pizotifen group. The worms were counted and separated by sex: in the Control group 59 females and 40 males were obtained; in Buspirone group 86 females and 41 males were found; and in the Pizotifen group 83 females and 64 males were counted. The comparison of data from Control and Experimental groups was statistically analyzed by ANOVA and no significant difference was observed. Females were measured using a millimetric eyepiece installed in a stereomicroscope. The ANOVA analysis resulted in a significant difference between Control and Pizotifen, which had an average size of 18 mm, compared with to average size of 19 mm of Control, indicating that Pizotifen would have some effect in the nematodes development, but not affecting their reproduction. These results indicate that the search for alternative drugs that act on egg laying needs a better understanding of the pathways that regulate the reproductive system of parasitic organisms. / O gênero Angiostrongylus engloba duas espécies A. cantonensis e A. costaricensis, que podem infectar o ser humano e causar infecções conhecidas como meningite eosinofílica e angiostrongilíase abdominal, respectivamente. Na infecção por A. costaricensis, ovos e larvas são elementos centrais nas reações inflamatórias podendo haver o agravamento dessas lesões, pela morte dos vermes. Os anti-helmínticos atualmente disponíveis, atuam em vias metabólicas essenciais ao parasito, culminando com a morte dos vermes. Portanto, uma droga alternativa para o tratamento das angiostrongilíases, que atue principalmente na reprodução dos vermes, se torna necessária. Um estudo in vitro realizado com Schistosoma mansoni demonstrou a inibição da oviposição pela fenantrolina. Em outro estudo com Caenorhabditis elegans foi demonstrado que a serotonina estimula o aumento da taxa de ovos liberados pela fêmea do nematódeo, além de controlar a alteração do seu estado de postura (repouso e ativação). A serotonina é um neurotransmissor presente tanto em vertebrados como em invertebrados .Com o objetivo de testar o efeito na oviposição de Angiostrongylus cantonensis, duas substâncias que interferem na neurotransmissão da serotonina em humanos, Buspirona e Pizotifeno, foram utilizadas em modelo experimental in vivo. 28 roedores da espécie Rattus norvegicus foram divididos em 3 grupos e infectados com 100 L3 de A. cantonensis: um grupo controle (não tratado) e 2 grupos tratados com cada substância. As substâncias foram administradas a partir do momento em que todos os roedores iniciaram a larvipostura, uma vez ao dia por via oral, durante 10 dias, numa concentração de 0,03 mg/mL cada. Neste período as fezes dos roedores foram recolhidas diariamente para a contagem do número de L1 eliminadas e, após os 10 dias, os animais foram eutanasiados para coleta dos vermes. A média de larvas eliminadas nas fezes para o grupo controle foi 37. 934, para o grupo Buspirona 10. 658 e para o grupo Pizotifeno 6. 658. Os vermes foram contados e separados pelo sexo: no grupo controle foram obtidas 59 fêmeas e 40 machos; no grupo Buspirona foram encontradas 86 fêmeas e 41 machos e no grupo Pizotifeno 83 fêmeas e 64 machos. A comparação dos dados dos grupos experimentais e do controle foram analisadas estatisticamente pelo teste ANOVA e nenhuma diferença significativa foi verificada. As fêmeas foram medidas através de uma ocular milimetrada instalada em um estereomicroscópio.A análise foi feita também pelo teste ANOVA e resultou numa diferença significativa entre o grupo controle e o Pizotifeno, no qual teve um tamanho médio de 18 mm, em comparação com o tamanho médio do controle de 19 mm, indicando que o Pizotifeno poderia ter algum efeito no desenvolvimento dos nematódeos, porém não afetando a reprodução. Estes resultados indicam que para a procura de drogas alternativas, que atuem na oviposição, é necessário uma melhor compreensão das vias reguladoras do sistema reprodutivo dos organismos parasitos.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000425616-Texto+Completo-0.pdf: 700521 bytes, checksum: 0b0a886f69479584d784bf6200b7110f (MD5) Previous issue date: 2009 / Natural hybridization among wild species is currently recognized as a sufficiently common process that it can present significant relevance in the evolutionary trajectory of the involved species. This process can be characterized by the occurrence of sporadic events between sympatric species, by the formation of narrow hybrid zones among taxa with parapatric distribution, or even by an extensive process of admixture between parental populations. Leopardus tigrinus and L. geoffroyi are two closely related species of small felids with essentially allopatric distributions in Neotropical Region. In the State of Rio Grande do Sul (RS), in southern Brazil, the two species present a geographic contact zone where we have previously identified the existence of a complex and extensive pattern of hybridization. To better understand the dynamics of this process, it is critical to combine the use of multiple approaches, including the assessment of different types of molecular markers, whose different sensitivity to demographic processes may illuminate the forces shaping this hybrid zone. The objective of this study was to develop new sequence-based nuclear markers that are informative for the investigation of this hybrid zone, aiming to characterize the ongoing admixture and to expand the knowledge on the magnitude and directionality of this process. Our final data set includes DNA sequences of seven different segments (five of them located on the X chromosome, and two on autosomes), which were analyzed along with 11 microsatellite loci in a sample of 68 individuals of both pure and hybrid origin. In addition to the L. tigrinus and L. geoffroyi samples, six L. colocolo samples were included for comparison. Through the use of haplotype networks and Bayesian admixture analyses it was possible to identify 48 hybrids, most of them originating from RS state. Nevertheless, the geographic breadth of the genetic gradient between the two species appears to indicate that the hybrid zone extends beyond RS state. Our results corroborate recent studies that reported the existence of ongoing hybridization between these species, and suggest a pattern of bidirectional and likely asymmetric genomic introgression. / A hibridação natural entre espécies selvagens é atualmente reconhecida como um processo bastante comum, que pode apresentar relevância significativa na trajetória evolutiva das espécies envolvidas. Este processo pode consistir de eventos esporádicos entre espécies simpátricas, ou da formação de zonas híbridas estreitas entre táxons com distribuição parapátrica, ou até mesmo de um intenso processo de miscigenação entre as populações parentais. Leopardus tigrinus e L. geoffroyi são duas espécies de pequenos felinos proximamente relacionados, com distribuições basicamente alopátricas na Região Neotropical. No Estado do Rio Grande do Sul (RS), as duas espécies apresentam uma zona de contato geográfico onde foi verificada a existência de um complexo e extenso padrão de hibridação. Este estudo tem como objetivo caracterizar novos marcadores nucleares a serem utilizados na investigação genética desta zona híbrida a fim de quantificar o processo de hibridação e ampliar os conhecimentos existentes sobre a magnitude e direcionalidade deste fenômeno. Para a realização deste trabalho foram utilizadas sequências de cinco locos localizados no cromossomo X e dois locos autossômicos, além de onze locos de microssatélites, em uma amostra total de 68 indivíduos, incluindo prováveis puros e híbridos. Além das amostras de L. tigrinus e L. geoffroyi, seis amostras de L. colocolo foram incluídas para fins de comparação. Através da construção de redes de haplótipos e de análises Bayesianas de alocação populacional dos indivíduos, foi possível identificar 48 híbridos, a maioria deles com procedência do RS. No entanto, a amplitude geográfica do gradiente genético entre as duas espécies parece indicar uma extensão da zona híbrida para além do estado do RS. Os resultados corroboram estudos recentes documentando a existência de um processo atual de hibridação entre estas espécies, e indicam a ocorrência de um padrão de introgressão genômica bidirecional e provavelmente assimétrico.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000438209-Texto+Completo-0.pdf: 6947151 bytes, checksum: 0114d6e8bfccd4c5809c464a81794137 (MD5) Previous issue date: 2012 / Doradidae is a monophyletic family endemic to South America diagnosed by a unique synapomorphy among catfish and recognized by a combination of morphological characteristics. Species of the family posses a infranuchal scute which is a superficial platelike bone co-formed by the fusion of an expanded ossicle of the lateral line canal and an ossified ligament extending from beneath the posterior nuchal plate to the tip of the first rib. Most species are characterized by a well-developed cephalic shield, subterminal mouth, large exposed postcleithral process, sturdy serrated pectoral- and dorsal-fin spines, and dorsoventrally flattened bodies (Sabaj, 2002). It is a diverse family with 92 extant and one fossil species grouped into 32 genera. Phylogenetic studies of doradids have traditionally been based on morphological characters and only one work has been based on molecular characters, which conflicts with previous morphological results. The main goal of this study was to recover phylogenetic relationships of the entire Doradidae by the analysis of all the previously available data for Doradidae and newly gathered morphological and molecular data. 200 characters referring to external morphology, osteology, gonads, and swimbladder were reviewed from previous authors. 91 myological characters were analyzed and proposed here for the first time in a phylogenetic context. 3011 molecular characters were gathered correspondent to two mitochondrial genes (16s and co1) and one nuclear gene (rag1). Compiling a total of 3302 characters for 94 species. In order to achieve the main goal molecular and anatomical studies were performed separated. An only molecular analysis was carried out including 77 described and six undescribed species. The analysis was base on fragments of the mitochondrial 16s and co1 and the nuclear rag1. It was obtained an aligment of 3011 base pairs for 146 specimens of Doradidae and the outgroup Auchenipteridae and Aspredinidae. Data were analyzed using Maximum Parsimony, Maximum Likelihood, and Bayesian analyses. An anatomical study was also developed and is presented as a descriptive manuscript of the cranial and pectoral musculature of Doradidae. 61 species of Doradidae were examined including representatives of all the genera. 22 muscles were described referring to their ontogenetic origin, function, area of origin and insertion, and portions; in certain cases key aspect of each muscle were described. The analysis of the all the data together uncovered newly hypothesized relationships. Astrodoradinae is recovered as the most basal clade of the family. The monotypic Wertheimeria, Franciscodoras, and Kalyptodoras, endemic to the east-coast drainages of Brazil, are recovered as a clade. The monotypic Doraops and Centrochir, endemic to TransAndean drainages, are recovered as sister to widely distributed Pterodoras and Platydoras respectively. The Doradidae with fimbriate barbels and Oxydoras are recovered as a monophyletic group. The recently described Ossancora is not recovered as a monophyletic group. / Doradidae é uma família monofilética endêmica da América do Sul diagnosticada por uma única sinapomorfia entre os bagres e reconhecida por uma combinação de características morfológicas. Espécies da família possuem um escudo infranuchal, que é uma placa óssea superficial formada pela fusão dos ossículos expandidos da linha lateral e um ligamento ossificado que se estende desde a placa nucal posterior ate a ponta da primeira costela. A maioria das espécies são caracterizadas por ter uma placa cefálica bem desenvolvida, boca subterminal, processo poscleitral largamente exposto, acúleo peitoral e dorsal serrilhados e o corpo achatados dorsoventralmente (Sabaj, 2002). É uma família diversificada com 92 espécies, das quais uma é fóssil, agrupadas em 32 gêneros. Os estudos filogenéticos dos Doradidae têm sido tradicionalmente baseados em caracteres morfológicos e apenas um trabalho foi baseado em caracteres moleculares, os resultados desse trabalho são conflitantes com os resultados morfológicos. O objetivo principal deste estudo foi recuperar relações filogenéticas de Doradidae a traves da análise simultânea de todos os conjuntos de dados previamente disponíveis para a família Doradidae alem de dados morfológicos e moleculares propostos neste estudo. 200 caracteres, utilizados por outros autores, referentes à morfologia externa, osteologia, gônadas e bexiga natatória foram revisados. 91 caracteres miológicos foram analisados e propostos aqui pela primeira vez num contexto filogenético. 3011 caracteres moleculares foram obtidos de dois genes mitocondriais (16s e co1) e um gene nuclear (rag1). Foram compilados um total de 3302 caracteres para 94 espécies. Para atingir o objetivo principal estudos moleculares e anatômicos foram realizados por separado. Uma análise apenas molecular foi realizado com 77 espécies descritas e seis espécies não descritas. A análise foi baseada em fragmentos dos genes mitocondriais 16s e co1 e um gene nuclear rag1. Foi obtido um alinhamento de 3011 pares de bases para 146 espécimes de Doradidae e o grupo externo Auchenipteridae e Aspredinidae. Os dados foram analisados usando máxima parcimônia, máxima verossimilhança, e análises Bayesianas. Um estudo anatômico foi também desenvolvido e é apresentado como um manuscrito descritivo da musculatura peitoral e cranial de Doradidae. 61 espécies de Doradidae foram examinados incluindo representantes de todos os gêneros. 22 músculos foram descritos referindo-se a sua origem ontogenética, função, áreas de origem e de inserção, e porções, em alguns casos aspectos chave de cada músculo foram descritos. A análise simultânea de todos os dados disponíveis revelou interessantes hipóteses de relacionamentos. Astrodoradinae é recuperado como o clado mais basal da família. Os gêneros monotípicos Wertheimeria, Franciscodoras e Kalyptodoras, endémicos das drenagens da costa leste do Brasil, são recuperados como um clado. Os gêneros monotípicos Doraops e Centrochir, endêmicos das drenagens transandinas, são recuperados como grupo irmão dos gêneros amplamente distribuídos, Pterodoras e Platydoras respectivamente. Os gêneros de Doradidae com barbilhões ramificados e Oxydoras, são recuperados como um grupo monofilético. O gênero Ossancora, recentemente descrito, não e recuperado como um um grupo monofilético.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000431486-Texto+Completo-0.pdf: 11102374 bytes, checksum: 14767d88daa85eca369d46be493533c1 (MD5) Previous issue date: 2011 / Compsurini is a tribe of Cheirodontinae known for hosting inseminating species, and also characterized by unusual morphological modifications related to the male sexual dimorphism. The tribe defined by Malabarba, Weitzman & Burns, was found to be monophyletic in the phylogeny of the Cheirodontinae (Malabarba, 1998), however the relationships among its members was unstable when new terminals were added to the analysis by Malabarba, whose search for characters was focused to the Cheirodontini. With the description of new species after Malabarba´s analysis and the discovery of eight possible new species to the tribe Compsurini, a phylogenetic analysis of Compsurini was developed with the aim of testing the monophyly of the tribe and elucidating the relationships among its members. A hypothesis of phylogenetic relationships of Compsurini was built through parsimony analysis under implied weights based on 278 characters including external morphology, osteology, miology and ultrastructure of spermatozoa. In this analysis, both Cheirodontinae and Compsurini were found to be monophyletic. The new synapomorphies supporting Compsurini are: 1) distance between mesethmoid lateral processes distal tips, equal or shorter than mesethmoid posterior region; 2) anal-fin hooks anteriorly directed, curved over lateral surface of the anal-fin ray; 3) anal-fin rays bearing hooks concentrated along distal half or distal third of their length; 4) anal fin more strongly pigmented along distal portion of branched anal-fin rays on mature males; 5) spermatozoa midpiece not truncated posteriorly, and citoplasmatic canal longer than the half length of nucleus; and 6) spermatozoa with numerous globular vesicles.In Compsurini, two new species from the Amazon basin without caudal-fin sexual dimorphism were found to be sister group of the remaining integrants of the tribe. The genera Kolpotocheirodon, Saccoderma, and Compsura, the latter with two new species, were found to be monophyletic in this analysis. The Central America species “Compsura” gorgonae, “Odontostilbe” dialeptura, and “Odontostilbe” mitoptera, formed a monophyletic clade, sister group of the trans-Andean genus Saccoderma, which synapomorphies are related to sexual dimorphism and spermatozoa ultrastructure, supporting the creation of a new genus to accommodate these three species hitherto kept in temporary genera. In the taxonomic revision carried out in parallel to the phylogenetic analysis, the genus Compsura was redescribed along with the description of two new species from rio Guaporé and rio Araguaia basins. The genus Macropsobrycon is redefined and here considered monotypic with M. uruguayanae as typespecies. Saccoderma is also redescribed and restricted to two valid species, S. hastata and S. melanostigma, and the species S. falcata and S. robusta, considered synonyms of S. hastata. Three genera and six new species of the tribe are described for the high portion of Amazonian tributaries, along with the proposal of a taxonomic key comprising all compsurin species. Finally, on the reanalysis of the morphology-based matrix of characters present in the literature for Characidae, “Macropsobrycon” xinguensis was found to be sister group of Leptobrycon jatuaranae (with the addition of those species), and thus, “M”. xinguensis is located to Leptobrycon. / Compsurini é uma tribo de Cheirodontinae conhecida por abrigar as espécies inseminadoras da subfamífia, também caracterizadas por incomuns modificações morfológicas relacionadas ao dimorfismo sexual dos machos. A tribo foi definida por Malabarba, Weitzman & Burns, e se revelou monofilética dentro da filogenia de Cheirodontinae (Malabarba, 1998); porém, a relação entre seus integrantes se mostrou instável quando Malabarba (1998) adicionou novos terminais à análise, cujo a busca de carácteres havia sido focada nos Cheirodontini. Com a descrição de novas espécies após a análise de Malabarba (1998) e a descoberta de oito possíveis novas espécies para a tribo Compsurini, uma análise filogenética dos integrantes de Compsurini foi desenvolvida com o objetivo de testar a monofilia da tribo e elucidar as relações entre seus integrantes. Uma hipótese das relações filogenéticas das espécies de Compsurini foi elaborada através da análise de parcimônia com peso implícito baseada em 278 caractéres abrangendo morfologia externa, osteologia, miologia e ultraestrutura de espermatozóides. Nesta análise. tanto Cheirodontinae quando Compsurini formaram grupos monofiléticos.As novas sinapomorfia: que sustentam Compsurini são: 1) distância entre as extremidades distais dos processos laterais do mesetmóide igual ou menor que sua base; 2) ganchos da nadadeia anal anteriormente direcionados, curvados sobre a superfície lateral dos raios; 3) raios nadadeira anal com ganchos concentrados na sua metade ou terço distal; 4) nadadeira mais pigmentada na sua margem distal nos machos maduros; 5) peça intermediária dos espermatozóides não truncada posteriormente, com canal citoplasmático mais longo que o metade do comprimento do núcleo; e 6) espermatozóides com um grande de ¬vesículas globulares. Dentro de Compsurini, duas espécies novas da bacia amazônica sem ¬dimorfismo sexual na nadadeira caudal formam o grupo irmão de todos os outros integrantes ¬da tribo. Os gêneros Kolpotocheirodon, Saccoderma, e Compsura, este último com duas espécies novas, se mostraram monofiléticos nesta análise. As espécies da américa central, "Compsura" gorgonae, "Odontostilbe" dialeptura e "Odontostilbe" mitoptera, formaram um ¬clado monofilético, grupo irmão do gênero trans-andino Saccoderma, cujas sinapomorfias são referentes ao dimorfismo sexual e ultraestrutura de espermatozóides, suportando a criação de um novo gênero para abrigar estas três espécies até então rnantidas em gêneros provisórios. Na revisão taxonômica realizada em paralelo à análise filogenética, o gênero Comnpsura é redescrito juntamente coma descrição de duas espécies novas das bacias do rio Guaporé e Araguaia.O gênero Macropsobrycon é redefinido e aqui considerado monotípico com M. uruguayanae como espécie tipo. Saccoderma também é redescrito e restringido a duas espécies válidas, S. hastata e S. melanostigma, sendo as espécies S. Falcata e S. Robusta consideradas sinônimos de S. hastata. Três gêneros e seis novas espécies da tribo são descritas para o alto curso de tributários amazônicos, juntamente com a elaboração de uma chave taxonômica para todas as espécies de Compsurini. Por fim, "Macropsobrycon” xinguensis é apontada como grupo irmão de Leptobrycon jatuaranae ao se reanalisar uma matriz de caracteres morfológicos para Characidae presente na literatura com o acréscimo destas espécies, e assim, é alocada em Leptobrycon.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000427622-Texto+Completo-0.pdf: 4680280 bytes, checksum: 75e54492eea58e6d4b33bd97da9115de (MD5) Previous issue date: 2010 / Among the angiostrongylid worms there are two extensively studied species because of their importance as causes of human health problems, Angiostrongylus costaricensis and A. cantonensis. While there are numerous in vitro studies on maintenance and evolution of trematodes, the literature is short of reports on similar trials with nematodes. Through cultivation and cocultivation with Biomphalaria glabrata embryonic cells, the best conditions were searched for the production of intra-mollusk larval stages from both parasites under study. A previous reported protocol for axenization of first stage larvae was adjusted especially concerning the concentration of sodium hypochlorite and a 0,25 % preparation was found effective. It was demonstrated that cultivation enriched with crude body proteic extract of B. glabrata resulted in a higher recovery of second stage larvae. In order to investigate the possibility of a differential expression of proteins after infection, bidimensional electrophoresis was performed. A 37 kDa protein with isoeletric point 4,2 was expressed exclusively at tissues of the infected snails. In order to guarantee the supply of first stage larvae for a future in vitro production of L3, several conditions for cryopreservation were assayed and the best larvae yield was achieved with a 1% dimethil-sulphoxide and 5% bovine fetal serum, and incubation time of 60 minutes before quick introduction into liquid nitrogen. In conclusion, although the unsuccessful trial to produce in vitro large amounts of L3, several aspects were assayed and the resulting knowledge may pave the way for the ongoing effort to establish an in vitro system that enables regular large production of parasitic forms.The results now reported have contributed to a better understanding of the complex task of in vitro manipulation of nematodes and the challenges standing ahead for the better understanding of their biology. / Dentre os angiostrongilídeos, há duas espécies que têm sido extensamente estudadas por constituírem problemas de saúde humana: Angiostrongylus costaricensis e A. cantonensis. Enquanto existem numerosos estudos sobre a manutenção e desenvolvimento in vitro de trematódeos, são poucas as tentativas registradas na literatura do mesmo esforço em relação aos nematódeos. Através do desenvolvimento de cultivos e co-cultivos com células embrionárias de B. glabrata buscou-se encontrar a forma mais adequada para a produção de larvas nas fases intramolusco dos dois parasitos em estudo. Em um trabalho anterior foi utilizada a axenização das larvas de primeiro estágio, este método foi adaptado especialmente quanto à concentração de hipoclorito de sódio que foi utilizado a 0,25% de modo eficiente. Verificou-se que nos cultivos enriquecidos com extrato protéico do corpo de B. glabrata, houve uma maior recuperação de larvas de segundo estágio. A fim de se investigar a possibilidade de uma diferença quanto à expressão de proteínas entre caramujos infectados e não infectados, foi realizada a eletroforese bidimensional. Uma proteína de 37 kDa no ponto isoelétrico de 4,2 foi expressa apenas nos tecidos dos caramujos infectados. Para se ter um estoque de larvas de primeiro estágio, testou-se formas de criopreservá-las com diferentes concentrações de dimetil-sulfóxido (DMSO) e de soro fetal bovino (SFB). Para ambos nematódeos, o uso de 1% de DMSO em meio enriquecido com 5% de SFB, incubação prévia de 60 minutos com o criopreservante em temperatura ambiente, seguido pelo congelamento rápido em nitrogênio líquido, apresentou os melhores índices de larvas ativas recuperadas.Embora os experimentos não tenham tido êxito para produzir in vitro larvas de terceiro estágio (L3), vários aspectos foram analisados e todo o conhecimento resultante representa o início do caminho para, com esforço contínuo, se estabelecer um sistema in vitro capaz de produzir em grande quantidade e regularmente essas formas parasitárias. Os resultados apresentados contribuem para uma melhor compreensão da complexa tarefa de manipulação in vitro desses nemátodeos e dos desafios para o melhor entendimento de sua biologia.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000434730-Texto+Completo-0.pdf: 855325 bytes, checksum: c32de7fd4729e20d9bcd4832226480d4 (MD5) Previous issue date: 2011 / The species Brachyteles arachnoides, popularly known as southern muriqui, is considered the largest neotropical primate and currently listed as endangered, nevertheless no molecular population genetics study has been done so far in the southern muriqui. Here we analyze the phylogeography pattern, genetic diversity and demographic history of this species using sequences from part of the mtDNA Control Region and 14 microsatellites. The mtDNA showed a high genetic diversity and no clear evidence of geographical structuring. Moreover we showed that there was a population expansion around 15 thousand years ago and there is no concrete evidence of population decline. As well as in analysis with mtDNA, the microsatellites also showed no geographical structure, groups were not clearly defined and recent population decline was not evident. The lack of geographical structure was expected, mainly for mtDNA data, since females are known to disperse from their natal group, moreover the social groups are formed by male and females without an apparent hierarchy. For the other hand, as the microsatellites usually respond more rapidly to more recent fragmentation it would be expected they showed some evidence of structure caused by the recent fragmentation of Atlantic Forest, which was not observed. Similar results were also observed with the northern muriqui (Brachyteles hypoxanthus) that is critically endangered and occurs in more fragmented areas. / A espécie Brachyteles arachnoides, popularmente conhecido como muriqui do sul, é considerado o maior primata da América Latina e listado atualmente como estando ameaçado de extinção, apesar disso, até o momento, não existem estudos moleculares de genética de população a seu respeito. Aqui nós analisamos o padrão filogeográfico, diversidade genética e história demográfica da espécie utilizando sequências de parte da Região Controle do mtDNA e 14 loci de microssatélites. O mtDNA mostrou uma alta diversidade genética e nenhum indício claro de estruturação geográfica. Além disso, mostrou-se que houve uma expansão populacional há cerca de 15 mil anos atrás e não há nenhuma evidência concreta de declínio populacional. Assim como nas análises com mtDNA, os microssatélites também mostraram falta de estruturação geográfica, ausência de grupos definidos e nenhuma evidência de declínio populacional recente. A ausência de estruturação geográfica era esperada, principalmente para os dados de mtDNA, visto que as fêmeas são conhecidas por migrarem do seu grupo natal, além disso os grupos sociais de muriqui são formados por machos e fêmeas sem uma hierarquia aparente. Por outro lado, como os loci de microssatélite usualmente respondem rapidamente à fragmentação recente, seria esperado que eles mostrassem alguma evidência de estruturação causada pela recente fragmentação na Mata Atlântica, o que não foi observado. Resultados semelhantes também foram encontrados com o muriqui do norte (Brachyteles hypoxanthus) que está criticamente ameaçado e ocorre em áreas mais fragmentadas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000383111-Texto+Completo-0.pdf: 310802 bytes, checksum: 52b57e21c31e774a699dae39ae4cb899 (MD5) Previous issue date: 2005 / Were analyzed poison samples as a pool from different proceedings, one from Rio Grande do Sul area, South Brazil (regional pool), and another mainly from São Paulo area, Central Brazil (national pool). The national pool was made by venom samples from Espírito Santo, Minas Gerais, São Paulo and Paraná states. Were analyzed: lethal, proteolytic (on casein), coagulant (on human plasma), and phospholipasic enzyme activities, the quantity of protein and the electrophoretic patterns were analyzed too. The analyses between the samples were made by comparison of biochemical actions and protein composition into a species, and inter-regionally between the pools. The comparison by electrophoresis, regional samples showed particularities in their venom protein composition sharing phospholipasic miotoxinas, with 14 KDa, that were poorly observed in the national pool, suggesting this action been more regionalized for this venom. However, we can observe miotoxic phospholipases, with different molecular weigh (16 KDa), present in all of the samples, suggesting a biochemical similarity still shared although the regional differences between the samples. The major phospholipasic activity and protein quantity were verified in regional samples. The regional pool has more proteolytic and coagulant activities, when we compare with the national pool, that’s reinforces the possibility of those actions were more regionalized in B. alternatus and B. jararaca venoms. / Foram analisadas amostras de veneno em forma de “pool”, extraídos de duas espécies de Bothrops (B. alternatus, B. jararaca). O “pool” regional foi composto de venenos exclusivamente do Rio Grande do Sul coletados de exemplares provenientes de várias partes do estado. O “pool” nacional foi composto de venenos de exemplares provenientes, principalmente, de São Paulo e adjacências (estados de Espírito Santo, Minas Gerais e Paraná) e usado como veneno-referência. Foram analisadas: atividade letal; ação proteolítica sobre caseína; enzimas fosfolipásicas; ação coagulante no plasma humano; dosagem da quantidade de proteínas; e perfil eletroforético. As análises entre as amostras foram feitas comparando-se as ações bioquímicas e a composição protéica entre as espécies que compõe cada “pool”, bem como inter regionalmente, entre os “pools”. Quando comparadas pela eletroforese, as amostras regionais apresentaram particularidades quanto à composição protéica do veneno compartilhando miotoxinas fosfolipásicas com 14 KDa, que são pouco observadas nas amostras do “pool” nacional sugerindo ser esta ação mais “regionalizada” para estas peçonhas. Entretanto, observam-se outras fosfolipases miotóxicas com peso molecular diferente (16KDa) presente em todas as amostras, sugerindo a similaridade bioquímica ainda compartilhada, apesar das diferenças regionais entre as amostras. Também se verificou maior atividade fosfolipásica e teor protéico nas amostras regionais. O “pool” regional teve maior atividade proteolítica e coagulante no plasma quando comparado com o “pool” nacional, reforçando a possibilidade de maior toxicidade no “pool” regional.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000411902-Texto+Completo-0.pdf: 1844382 bytes, checksum: 931e1914fb940d53059306226fa0e0ea (MD5) Previous issue date: 2009 / Brassica napus L. is considered self-fertile, although, studies indicate that the foraging from Apis mellifera L. increase its productivity. Considering the importance of the culture in Rio Grande do Sul, it was evaluated the pollinator potential of A. mellifera L. in B. napus flowers according to the anthesis phenophases and the increase in production through the pollination induction. The phases of anthesis were characterized and related to the stigma receptivity and the pollen grains viability. In parallel, the behavior of bees on flowers was followed considering the touched structures, the resources colleted, the number of flowers visited by plant, the time of permanence on flowers and the floral fidelity. The frequency of insects visits to the flowers was registered and related to the development of the culture. From the pollination tests (autogamy; insects visits: handly pollination among flowers from the same plant: handly pollination among flowers from distinct plants) it was compared the productivity of siliquas and seeds. Including the visitors insects registered the Hymenoptera (92,35%) stood out among the most frequent insects, from which 99,83% were A. mellifera. During foraging the bees touched anthers and stigmas, visited among 1-7 flowers/plant, remained on the flowers for 1-43 seconds and carried only B. napus pollen grains. The period with potential of pollination by A. mellifera happened during the second and third phases of anthesis and the relation among the frequency of these bees and the flowering progress was significantly positive. The productivity of seeds/plant increased from 28,36% to 55,12% with pollination induction. Bees foraging increased the productivity of B. napus and this production could still be increased with the rise and management of bees in the culture during the flowering period. / Brassica napus L. é considerada autofértil, entretanto, estudos indicam que o forrageio de Apis mellifera L. eleva sua produtividade. Considerando-se a crescente importância da cultura no Rio Grande do Sul, avaliou-se o potencial polinizador de A. mellifera L. em flores de B. napus de acordo com as fenofases da antese e o incremento na produção através da indução de polinização. Os estágios da antese foram caracterizados e relacionados à receptividade do estigma e à viabilidade dos grãos de pólen. Paralelamente, o comportamento das abelhas nas flores foi acompanhado considerando-se as estruturas tocadas, os recursos coletados, o número de flores visitadas por planta, o tempo de permanência nas flores e a fidelidade floral. A freqüência de visitas de insetos às flores foi registrada e relacionada ao desenvolvimento da cultura. A partir de testes de polinização (autogamia; visitação de insetos; polinização manual entre flores da mesma planta; polinização manual entre flores de plantas distintas) comparou-se a produtividade de síliquas e sementes. Dentre os insetos antófilos registrados Os Hymenoptera (92,35%) destacaram-se entre os insetos mais freqüentes, dos quais 99,83% eram A. mellifera. Durante o forrageio as abelhas tocaram anteras e estigmas, visitaram entre 1-7 flores/ planta, permaneceram nas flores de 1-43 segundos e carregaram exclusivamente grãos de pólen de B. napus. O período com potencial de polinização por A. mellifera ocorreu durante o segundo e terceiro estágios da antese e a relação entre a freqüência dessas abelhas e o curso da floração foi significativamente positiva.A produtividade de sementes/planta elevou-se de 23,63% para 61,87% com indução de polinização. O forrageio das abelhas elevou a produtividade de B. napus e essa produção ainda poderia ser aumentada com o adensamento e manejo dirigido de abelhas na cultura durante o período de floração.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000439112-Texto+Completo-0.pdf: 538880 bytes, checksum: 671e168d7e9a8ca0457a6099c1cea1de (MD5) Previous issue date: 2012 / Successional processes present complex relationships between abiotic and biotic factors. These processes influence the structure and functioning of the community, as well as the ecosystem. The Subclass Peritrichia is one of the largest groups in the Phylum Ciliophora. They can occupy various types of water bodies. However, despite their great diversity and common occurrence, they are poorly studied. In the present work we performed a one year survey of peritrich ciliates colonizing glass slides in the Lake Guaiba located in southern Brazil. We analyzed the population dynamics of the species composing the community, and correlated it with environmental factors. A total of 35 morphospecies of Peritrichia were found, of which at least six are undescribed. Results showed that the group presents high diversity and a complex successional organization, with different responses to environmental factors and days of exposure of the traps. / Processos de sucessão apresentam relações complexas entre fatores abióticos e bióticos. Esses processos influenciam a estrutura e funcionamento da comunidade, bem como do ecossistema inteiro. Ciliados da subclasse Peritrichia constituem um dos grupos com o maior número de espécies. Peritríquios podem ocupar vários tipos de corpos d'água. No entanto, mesmo com grande diversidade e sendo de ocorrência comum, são pouco estudados. No presente trabalho, foi realizado um estudo de um ano com os ciliados peritríquios colonizando lâminas de vidro em um ponto de amostragem no Lago Guaíba, localizado no estado do Rio Grande do Sul, sul do Brasil. Neste período, foi analisada a dinâmica populacional das comunidades de peritríquios, correlacionando-a com fatores ambientais. Um total de 35 morfoespécies, além de pelo menos 6 novas espécies foram encontradas. Os resultados mostram que o grupo possui complexa organização sucessional, com diferentes respostas a fatores ambientais e tempo de exposição das armadilhas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T19:12:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000390935-Texto+Completo-0.pdf: 694578 bytes, checksum: 8d865cc1fcc32224e3fab149c5bae10f (MD5) Previous issue date: 2007 / The poisons found in animals are complex mixtures rich in toxins and enzymes that can present a large number of effects over the haemostatic mechanisms, as an example, at the platelets functions; they also induct hematological and immunological alterations and activate the liberation of pro-inflammatory cytokines. Between the Brazilian rattlesnakes species it is distinguished the Crotalus genera. At the Rio Grande do Sul state (RS) only the subspecies Crotalus durissus terrificus (Cdt) occurs, which poison’s proprieties has yet no studies. The crotoxin molecule is composed by two subunits named: basic, that has a phospholipase A2 enzyme (PLA2) activity, and the acidic, called crotapotin. PLA2 has an inflammatory activity and changes the platelets aggregation. Crotapotin - a protein that has shown in several studies that increases the PLA2 action - modulates the inflammatory response in vivo, decreasing carrageenin-induced rat paw oedema. The evaluation of different parameters related to the toxicity and haemostatic system effects is important to determine the toxicity of rattlesnake’s venoms. It is important to investigate the venoms from species that has already been described for some states of the country; therefore alterations in the poison and in its effects are known to happen at different locations. Several parameters can be utilized, like tests that describe the presence of the toxins (as the FPLC purification) and tests that evaluate its effects (as cytokines liberation tests, evaluation of alteration on cellular membrane enzymatic activity, and others).This study aimed to evaluate the poison characteristics on platelets aggregation and the possible involved mechanisms, as well to evaluate the inflammatory/anti-inflammatory action of some Cdt poison components. To go trough this objectives, two articles has been written: The first was developed in function of the alterations that can be caused by the Cdt venom over the haemostasis and platelet aggregation system, trying to identify possible action mechanisms that leads to these alterations. It was found that RS Cdt venom has the platelet aggregating capacity already described for the subspecies. In the second one we tried to understand how two crotoxin formative subunits, crotapotin and PLA2, could present antiinflammatory and inflammatory effects respectively. To evaluate the subunits actions, it was quantified the TNF-[ production. The peripherical blood mononuclear cells, stimulated by phytohemagglutinin, were incubated at different crotapotin and PLA2 concentrations to verify the proliferative and immunomodulatory capacity and the respective cytotoxicity. / As peçonhas de origem animal são misturas complexas ricas em toxinas e enzimas que podem apresentar um número variado de efeitos sobre os mecanismos homeostásicos como, por exemplo, na função plaquetária, além de induzir alterações hematológicas, imunológicas e ativar a liberação de citocinas pró-inflamatórias. No estado do Rio Grande do Sul (RS) há apenas a ocorrência da subespécie Crotalus durissus terrificus (Cdt), cuja peçonha ainda não possui suas propriedades estudadas. A crotoxina é uma fração que tem como efeito principal atividade neurotóxica pré-sináptica. Esta toxina é composta por duas subunidades denominadas: subunidade básica, que possui atividade fosfolipásica A2 (PLA2) e a subunidade ácida, a crotapotina. A PLA2 atua como estimulador de processos inflamatórios e altera a capacidade agregante plaquetária. Já a crotapotina - uma proteína que em diversos estudos demonstrou potencializar as ações da PLA2 - possui atividade antiinflamatória in vivo, apresentando inibição do edema de pata induzido por carragenina. A avaliação de diferentes parâmetros relacionados a toxicidade e efeitos sobre o sistema homeostásico são importantes para a terminação da toxicidade dos venenos de serpentes. Cabe salientar a importância de investigar venenos de espécies que possuem efeitos já descritos para algumas regiões do país, pois são descritas alterações nas peçonhas e em seus efeitos conforme a localidade que ocorrem. Diversos parâmetros podem ser utilizados, como testes que descrevam a presença das toxinas (como a purificação feita por FPLC) e testes que avaliem seus efeitos (como testes de liberação de citocinas, avaliação sobre a alteração de atividade de enzimas de membranas celulares, entre outros).Nossos estudos buscaram avaliar as características do veneno sobre a agregação plaquetária e os possíveis mecanismos envolvidos neste processo, bem como avaliar a ação inflamatória/antiinflamatória de alguns componentes da peçonha de Cdt. Para cumprir estes objetivos foram desenvolvidos dois artigos: O primeiro artigo foi desenvolvido em função das alterações que a peçonha de Cdt pode causar no processo de agregação plaquetária, buscando-se identificar os possíveis mecanismos de ação que levam a estas alterações. Verificou-se que a peçonha da Cdt do Rio Grande do Sul possui a capacidade agregante plaquetária já descrita para a subespécie e seu mecanismo de ação não parece ser via NO nem alterações da atividade das E-NTPDases. O segundo artigo buscou entender como duas subunidades formadoras da crotoxina, a crotapotina e a PLA2, podem apresentar efeitos antiinflamatórios e inflamatórios, respectivamente em culturas de células. Para avaliar as ações das subfrações foi quantificada a liberação de TNF-α. As células mononucleares de sangue periférico humano, estimuladas com fitohemaglutinina, foram incubadas com diferentes concentrações de crotapotina e PLA2, verificando-se a capacidade proliferativa, imunomoduladora, as respectivas citotoxicidades e expressão da citocina inflamatória, TNF-α.