Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-22T18:22:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 136436 bytes, checksum: 97e1f7f9fc34da0d9d3684e0bae49553 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T18:22:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 136436 bytes, checksum: 97e1f7f9fc34da0d9d3684e0bae49553 (MD5) Previous issue date: 2004-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os inseticidas lufenuron 50 g/l, esfenvalerate 25 g/l, betacyflutrin 50g/l, betacyflutrin 125g/l, Bacillus thuringiensis 25.000 IU/mg, tebufenozide 240g/l, methoxifenozide 240g/l, triflumuron 250 g/kg são os mais utilizados, para o controle de pragas na cultura do tomateiro no Espírito Santo.Esse trabalho teve como objetivo estudar o efeito desses inseticidas, nas características biológicas das gerações F1 e F2 de duas linhagens do parasitóide Trichogramma pretiosum Riley (Hym.: Trichogrammatidae), em ovos do hospedeiro alternativo Anagasta kuehniella (Zeller) (Lep.: Pyralidae). Esta pesquisa foi desenvolvida no Laboratório de Entomologia do Centro de Ciências Agrárias da Universidade Federal do Espírito Santo (CCAUFES) na cidade de Alegre, estado do Espírito Santo. As duas linhagens de T. pretiosum foram coletadas na cultura do tomateiro na localidade de Rive (252 metros de altitude) (L1) e no município de Afonso Cláudio (380 metros de altitude) (L2) no Espírito Santo. O efeito dos inseticidas foi avaliado sobre as fases adulta e imatura de T. pretiosum nas gerações F1 e F2. Na fase adulta, as cartelas contendo ovos de A. kuehniella foram tratadas por imersão em inseticidas e, posteriormente, oferecidas a T. pretiosum. Na fase imatura, as cartelas foram oferecidas ao parasitóide e, posteriormente, tratadas nos diferentes períodos 0-24 horas (ovo-larva) 72-96 horas (larva-pré-pupa) e 168-192 horas (pupa-adulto) correspondendo aos períodos de desenvolvimento embrionário desse parasitóide. Após o nascimento desses parasitóides, foram individualizadas fêmeas provenientes de cada tratamento e cartelas com ovos de A. kuehniella não tratados com inseticidas foram oferecidas às mesmas para avaliação dos descendentes. Bacillus thuringiensis, lufenuron e triflumuron foram seletivos às duas linhagens do parasitóide, mas o abamectin e os piretróides betacyflutrin (50 e 125 g/L) e esfenvalerate afetaram o parasitismo das mesmas, quando aplicados durante a fase adulta de T. pretiosum. A linhagem 1 de T. pretiosum foi mais susceptível quando recebeu os inseticidas durante a sua fase adulta. O inseticida que mais afetou a geração F2 de T. pretiosum, nas duas linhagens, foi o esfenvalerate. As fases imaturas das duas linhagens de T. pretiosum foram mais susceptíveis ao esfenvalerate, enquanto o abamectin apresentou efeito intermediário na emergência, principalmente quando aplicado na fase de ovo-larva das duas linhagens de T. pretiosum. Abamectin e esfenvalerate reduziram o desenvolvimento das duas linhagens de T. pretiosum nas três fases de desenvolvimento embrionário. Os inseticidas que foram seletivos para as duas linhagens de T. pretiosum na fase adulta foram B. thuringiensis, lufenuron e triflumuron. Enquanto, as fases imaturas do parasitóide foram susceptíveis a abamectin e esfenvalerate. / The insecticides lufenuron 50 g/l, esfenvalerate 25 g/l, betacyflutrin 50g/l, betacyflutrin 125g/l, Bacillus thuringiensis 25,000 IU/mg, tebufenozide 240g/l, methoxifenozide 240g/l, triflumuron 250 g/kg are used, to the control of pests in the tomato crop in the Espírito Santo State.This work had the aim to study the effect of these insecticides on the biological characteristics of the F1 and F2 generations of two lineages of the parasitoid Trichogramma pretiosum Riley (Hym.: Trichogrammatidae), on eggs of the alternative host Anagasta kuehniella (Zeller) (Lep.: Pyralidae). This research was carried out in the Laboratory of Entomology of the Center of Agriculture Sciences of the Federal University of the Espirito Santo (CCAUFES) in Alegre, state of the Espirito Santo. The two lineages of T. pretiosum had been collected in the tomato crop in the locality of Rive (252 meters of altitude) (L1) and the city of Afonso Cláudio (380 meters of altitude) (L2) in the Espirito Santo. The effect of the insecticides was evaluated on the adult and immature phases of T. pretiosum on the F1 and F2 generations. In the adult phase, the cards contend eggs of A. kuehniella had been treated by immersion in insecticides and later they were offered to T. pretiosum. In the immature phase, the cards had been offered to the parasitoid and later treated in the periods between 0-24 hours (egg-larvae) 72-96 hours (larva-pre-pupae) and 168- 192 hours (pupae-adult), corresponding to the periods of the embryonic development of this parasitoid. After the emergency of these parasitoids, the females had been individualized from each treatment and cards with treated eggs of A. kuehniella with insecticides had not been offered to the same ones for evaluation of the descendants. Bacillus thuringiensis, lufenuron and triflumuron had been selective to the two lineages of the parasitoid but abamectin and the betacyflutrin (50 and 125 g/L) and esfenvalerate had affected the parasitism of the same ones, when they were applied during the adult phase of T. pretiosum. The lineage 1 of T. pretiosum was susceptible when it received the insecticides during its adult phase. The insecticide that more affect on the generation F2 of T. pretiosum in the two lineages was esfenvalerate. The immature phases of the two lineages of T. pretiosum had been susceptibles to esfenvalerate, when abamectin presented intermediate effect on the emergency, mainly when applied in the phase of egg-larvae of the two lineages of T. pretiosum. Abamectin and esfenvalerate reduced the development of the two lineages of T. pretiosum in the three phases of embryonic development. The insecticides that had been selective for the two lineages of T. pretiosum in the adult phase were B. thuringiensis, lufenuron and triflumuron. While, the immature phases of the parasitoid had been susceptibles to abamectin and esfenvalerate.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-22T18:29:14Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 318346 bytes, checksum: 5a7977b165bc50c40d088858294396dc (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T18:29:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 318346 bytes, checksum: 5a7977b165bc50c40d088858294396dc (MD5) Previous issue date: 2001-09-12 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este estudo ocupou-se da análise sistemática da Política Fundiária dos Governos Fernando Henrique Cardoso enquanto indicativa da direção que jurídica e politicamente orienta e caracteriza a sua proposta de Regularização Fundiária e respectivo Programa de Reforma Agrária. Buscou-se compreender e interpretar a lógica e os princípios que geram as contradições e os limites dentro dos quais transitam as medidas de Política Fundiária do Governo, seus avanços e recuos, bem como os resultados práticos do processo de reordenamento fundiário observados neste período. Neste sentido, deu-se ênfase particular às alterações na legislação agrária, normas e procedimentos administrativos, especialmente os voltados para o aperfeiçoamento dos processos de arrecadação de terras para a implantação de projetos de assentamento e, ainda, a participação tanto dos movimentos sociais, principalmente o MST, quanto dos setores conservadores neste processo. Ficou evidenciado pelas análises desenvolvidas neste estudo que, na prática, a Política Fundiária dos Governos Fernando Henrique Cardoso capitulou ante as pressões e interesses de latifundiários, especuladores e grileiros especializados. Assim, em conclusão, apesar de todos os esforços de reformismo institucional e de buscar a mediação de interesses pela via da conciliação, o resultado de sua prática administrativa e política de Reforma Agrária, longe de viabilizar soluções efetivas para os problemas fundiários, é favorável à perpetuação do status quo no campo, de concentração das terras e dos privilégios das oligarquias agrárias em detrimento dos interesses dos pequenos produtores e trabalhadores rurais sem terra, ou excluídos da terra. / This study is concerning to the systematic analysis of the Settlement Policy in governments by Fernando Henrique Cardoso, as an indicator of the direction that juridical and politically guides and characterizes its proposal for Settlement Regularization and its respective Agrarian Reform Program as well. It was searched to understand and interpret the logic and principles that generate the contradictions and limits, where the measures of the Government Settlement Policy pass through, its progresses and retreats, as well as the practical results of the settlement rearrangement process observed in this period. In this sense, a particular emphasis was given to the alterations in the agrarian legislation, norms and administrative procedures, especially those related to the improvement of the land levies for implantation of establishment projects, as well as the participation of either social movements, mainly the MST, and the conservative sectors in this process. According to the analyses developed by this study, it was evidenced that, in the practice, the Settlement Policy in the governments by Fernando Henrique Cardoso had surrendered to the pressures and interests of the landowners, speculators and specialized land invaders. Thus, in spite of all efforts of institutional reformism and the search for the mediation of interests through conciliation, the result from its administrative practice and Agrarian Reform policy , far away from turning possible the effective solutions for the settlement problems, is favorable to perpetuation of the status quo, to land concentrations and to privileges of the agrarian oligarchies in disadvantage to the interests of the small producers and rural workers who do not hold any land or have been excluded from land. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-23T11:30:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1276609 bytes, checksum: 45df7b7375c7396922fdb96568290586 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-23T11:30:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1276609 bytes, checksum: 45df7b7375c7396922fdb96568290586 (MD5) Previous issue date: 2001-05-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Atualmente, os sistemas agroflorestais (SAFs) estão sendo difundidos no Estado do Acre como alternativa viável de uso da terra em áreas de produtores locais, no que se refere a colonos e seringueiros. Nesse sentido, os SAFs têm como principal objetivo à recuperação de áreas abandonadas, principalmente áreas em pousio de longos anos e pastagens em fase de degradação, pois se busca com os SAFs cultivos que possam se assemelhar com a floresta, proporcionando a integração e a combinação de conservação ambiental e produção. Tendo em vista a ausência de avaliação desses sistemas, é que se propôs a realização desta pesquisa, objetivando avaliar a relação entre a concepção dos SAFs concebida por pesquisadores e a sua operacionalização pelas práticas das famílias seringueiras, por meio da adotabilidade. Investiga-se também o alcance dos objetivos associados a sustentabilidade e se a adotabilidade está sendo atingida integralmente e corretamente e parcialmente e incorretamente. Os dados foram coletados por meio de entrevistas semi-estruturadas, aplicadas junto a 10 famílias seringueiras do Projeto de Assentamento Extrativista Chico Mendes (PAE Chico Mendes), que trabalham com SAFs. No que se refere à operacionalização das práticas pelas famílias, observou-se que as estas estão realizando as práticas sem compreender sua importância, assim como as vantagens ecológicas para o ambiente da floresta. Com relação às técnicas de campo para a implantação das culturas, seus componentes deveriam ter arranjos espaciais e temporais devidamente organizados de acordo com a especificidade de cada cultura, porém foram encontrados arranjos mal distribuídos, sem considerar os espaçamentos dos consórcios, podendo os plantios vir a ter problemas de competição por água, luz e nutrientes. Com relação a adotabilidade das práticas pelas famílias, observou-se que as mesmas foram apenas repassadas na forma de como fazer e do que fazer, não tendo nenhum repasse sobre o significado conceitual do SAF. Com isso, vendo que a concepção teórica do SAF referente às relações dos componentes em nível ecológico, social e econômico, é fundamental ao seu desenvolvimento, preocupa-se com o fato de que esta concepção não foi incorporada pelas famílias seringueiras. Observou-se, então, que a adotabilidade ocorreu em todos os casos parcialmente e incorretamente. / The agroforestry systems (SAFs) have been actually diffused in Acre State as a viable alternative for land use in areas explored by local producer, that is colonists and rubber-tappers. In this sense, SAFs mainly aim at the reclamation of the abandoned areas, mainly those areas under fallow for long years and pastures under degradation phase, since SAFs program seeks for croppings that might resemble to forest, as providing the integration and combination of the environmental conservation and production. Considering the absence of these system evaluations, this research was proposed in order to evaluate the relationship between the SAFs conception conceived by researchers and their operationalization by the rubber-tapper families’ practices through adoptability. The attainment of the objectives associated to the sustainment also investigated, as well as if the adoptability has being either integrally and correctly reached or partially and incorrectly reached. Data were collected through semi-structured interviews applied to tem rubber-tapper families assisted by the Projeto de Assentamento Extrativista Chico Mendes (PAE Chico Mendes) working with SAFs. In relation to the operationalization of the practices by families, it was observed that these families are accomplishing the practices without understanding their importance as well as the ecological advantages for forest environment. Relatively to the field techniques for implantation of the crops, their components should have space and temporary arrangements properly organized in accordance with the specificity of each crop. However, it was verified that the arrangements were not well distributed, without consideration of the intercropping spacings, therefore croppings could present competition problems related to water, light and nutrients. In relation to the practice adoptability by families, it was observed that the practices were only repassed under the form as how to do and what to do, thus no repassing is done on the conceptual meaning of SAF. Considering that the theoretical conception of SAF regarding the component relationships at the ecological, social and economic level is fundamental to its development, the fact this conception was not incorporated by the rubber-tapper families is really a matter of concern. Then, the adoptability was observed to occur partially and incorrectly in all cases. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-06T16:54:49Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 650913 bytes, checksum: b9f17c4a57a8b906d67c928beb6ed056 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T16:54:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 650913 bytes, checksum: b9f17c4a57a8b906d67c928beb6ed056 (MD5) Previous issue date: 2015-07-28 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os fungos endofíticos constituem um grupo de micro-organismos produtores de metabólitos secundários bioativos. Dentro desta perspectiva, foi estudado o potencial antimicrobiano do endofítico Cochliobolus sativus, isolado do feijoeiro comum Phaseolus vulgaris. Foi investigada a capacidade deste fungo em produzir metabólitos secundários com atividade antifúngica e antibacteriana em diferentes condições de crescimento, levando em consideração o meio de cultura, o fotoperíodo e o tempo de incubação. Os extratos gerados nas diferentes condições foram testados contra quatro fitopatógenos de importância agrícola e bactérias Gram-positivas e Gram-negativas de interesse médico e industrial, utilizando o método de diluição em ágar e difusão em ágar, respectivamente. O extrato que apresentou os melhores resultados de inibição determinou a melhor condição de crescimento para a síntese desses compostos. Foi observado que a atividade do extrato E4 nos micro- organismos testados foi superior a atividade dos demais extratos, apresentando inibição significativa de 52%, 29,69% e 8,16% do crescimento micelial dos fungos Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani e Fusarium oxysporum. A inibição do fitopatógeno Colletotrichum lindemuntianum não foi significativa. Quanto as bactérias, a atividade dos extratos brutos só foi observadas nas Gram-positivas Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis e Enterococcus faecalis, apresentando os melhores halos de inibição, pelo extrato bruto 4, de 12 mm, 10 mm e 6,8 mm, respectivamente. A menor MIC (concentração mínima inibitória) do extrato bruto foi contra S. aureus (MIC = 32 μg mL -1 ), enquanto em B. subtillis e E. faecalis foi de 68 μg mL -1 . Sendo assim, foi selecionada a condição de crescimento correspondente ao extrato bruto E4 para otimização da síntese de metabólitos secundários em larga escala. Ensaios biológicos foram realizados, para averiguação da influência do pH do filtrado fúngico na extração com acetato de etila. Os resultados indicaram que não há necessidade de acidificação ou alcalinização do filtrado para se obter os compostos bioativos. Posteriormente, os extratos brutos foram submetidos a análises de cromatografia à gás, apontando inicialmente, para dois compostos majoritários. Procedimentos futuros serão empregados para o isolamento e caracterização completa desses compostos e será testada a capacidade do fungo para inibir o crescimento de fitopatógenos in vivo. / From this perspective, we investigated the potential antimicrobial activity of Cochliobolus sativus endophyte, isolated from the common bean Phaseolus vulgaris. We investigated the ability of this fungus to produce antifungal and antibacterial secondary metabolites in different growth conditions, taking into account the culture medium, photoperiod and incubation time. Extracts of the culture media generated under the various growth conditions were tested against four phytopathogenic fungi of agricultural importance and against gram- positive and gram-negative bacteria of medical and industrial interest, using the agar dilution method and agar diffusion, respectively. The extract that showed the best inhibition results determined the best growth condition for the synthesis of these compounds. Extract E4 showed the higher antifungal and antibacterial activities inhibiting 52%, 29.69%, and 8.16% of the mycelial growth of the fungus Sclerotinia sclerotiorum, Rhizoctonia solani and Fusarium oxysporum, respectively. Also, this extract presented significant activity against gram-positive bacteria Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, and Enterococcus faecalis,producing inhibition zones of 12 mm, 10 mm, and 6.8 mm in diameter, respectively. MIC (minimum inhibitory concentration) values were determined as 32 ug mL -1 for S. aureus and 68 ug mL -1 for B. subtilis and E. faecalis . Therefore, the growth conditions that lead to extract E4 were selected for large scale fermentation and isolation of bioactive metabolites. Biological assays were performed to investigate the influence of the pH of the culture filtrates on the of extraction of the metabolites. The results indicated that there is no need for acidification or alkalinization of the filtrate to improve the extraction of the bioactive compounds. Subsequently, the crude extracts were subjected to analysis by Gas-Chromatography-Mass Spectrometry, pointing initially to two major compounds. Future procedures will be applied to the complete isolation and characterization of these compounds, which will be tested for its ability to inhibit in vivo growth of pathogens.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-03-28T18:05:40Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 471765 bytes, checksum: 03ab4c873c96b008460eac471ccf1476 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-28T18:05:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 471765 bytes, checksum: 03ab4c873c96b008460eac471ccf1476 (MD5) Previous issue date: 2003-07-21 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A pesquisa em tela visou fazer uma análise do processo de reestruturação organizacional da EMATER-MG, através de uma perspectiva que partiu da opinião dos técnicos da empresa e dos produtores rurais atendidos pela mesma. De modo geral o objetivo deste trabalho foi analisar a ação extensionista desenvolvida pelos técnicos da EMATER-MG, no sentido de verificar a satisfação dos pequenos produtores rurais, bem como a opinião dos agentes extensionistas em relação às suas condições de atuação junto a esses produtores após a implementação do programa de reestruturação organizacional da EMATER-MG. Especificamente, objetivou-se verificar junto aos pequenos produtores rurais, a partir de sua opinião, se houve alguma alteração na ação extensionista nos serviços prestados pela EMATER-MG após a implementação do programa de reestruturação organizacional; identificar a opinião dos extensionistas rurais sobre as suas atividades de atendimento aos pequenos produtores rurais, após a implementação do programa de reestruturação e identificar a partir da opinião dos técnicos da EMATER-MG e dos produtores rurais atendidos quais as suas perspectivas com relação ao Programa de Reestruturação Organizacional da EMATER-MG. Este trabalho utilizou como suporte teórico principalmente a teoria das organizações, o estudo das organizações, a nova administração pública, a crise do estado, enfim os novos enfoques e diretrizes para uma administração pública moderna. Os autores mais utilizados foram Etzioni (1967, 1974, 1978), Motta (1979), Costa e Cavalcanti (1991), Grau (1998), Bresser Pereira (1998), Vieira (2000), Sandes (2000) e Castro (2002). O presente trabalho consiste em um estudo de caso, este que tem, segundo BECKER (1997), um propósito duplo. Por um lado, tenta chegar a uma compreensão abrangente do grupo em estudo, e por outro, tenta desenvolver declarações teóricas mais gerais sobre regularidades do processo e estruturas sociais. O estudo em tela contemplou o emprego das seguintes técnicas: análise documental e entrevista semi- estruturada, tendo por unidade de análise os técnicos da EMATER-MG e os pequenos produtores rurais atendidos por esta empresa. O emprego da técnica da entrevista semi-estruturada possibilitou uma maior interação entre entrevistador e entrevistado. Tal procedimento permitiu melhor articular os dados coletados com a análise documental. Foi elaborado um roteiro para entrevistas com questões flexíveis, contendo os elementos que permitiram responder ao problema proposto. O locus da pesquisa foi a cidade de Viçosa e os municípios limítrofes: Cajuri, Coimbra, Paula Cândido, Porto Firme, São Miguel do Anta e Teixeiras, os quais pertencem à Unidade Regional de Viçosa- MG, da EMATER-MG. Tal opção decorreu do fato de existirem nesses municípios, produtores rurais e técnicos que se enquadraram nas variáveis relacionadas ao problema de estudo, quais sejam: pequenos produtores rurais que estejam de acordo com os critérios estabelecidos pela EMATER-MG e que tenham sido atendidos antes e depois do programa de reestruturação organizacional da EMATER-MG, o mesmo valendo para os técnicos que trabalham na empresa. Neste estudo foi utilizada, conforme ALMEIDA (1989:147), para a interpretação dos dados da pesquisa, uma adaptação da Escala Proporcional. Esta escala pode ser utilizada de forma unidimensional, quando a cada posição corresponde uma só possibilidade de interpretação; ou pluridimensional, onde cada posição é definida por muitas dimensões. Dentro dessa escala, utilizou-se a Escolha Múltipla, de forma pluridimensional, para a interpretação dos dados referentes à pesquisa. Esta escolha consiste de alternativas que vão desde: Sim: na maioria das vezes, Sim: sempre, Sim: parcialmente, Não: nunca e Não: sabe. Como se tratou da adaptação de uma escala houve uma certa liberdade ao se trabalhar estes dados e na construção dos gráficos. O critério utilizado para interpretação das respostas às entrevistas foi a opinião dos produtores rurais atendidos pela EMATER-MG e a opinião dos funcionários da EMATER-MG. Com relação aos produtores rurais entrevistados, pode-se afirmar com base nas respostas obtidas, que uma parcela significativa (46%) deles percebeu algum tipo de mudança na empresa nos serviços de ATER prestados pela EMATER-MG; para 79% destes produtores a EMATER-MG vem atendendo às necessidades de sua propriedade; para 83% desta categoria, o atendimento dos técnicos da EMATER-MG ocorre no período em que ele acha adequado; apenas 16% dos produtores rurais seguem todas as orientações que os técnicos passam, a maioria (84%) dos produtores não seguem todas as orientações, sendo que o fator financeiro é o que pesa mais, associado às condições climáticas. A grande maioria (71%) desta categoria percebe que o técnico da empresa dá atenção suficiente à sua propriedade; já 75% dessa classe acham que o técnico esteve presente em sua propriedade nos momentos em que ele mais precisou; 71% dos produtores se encontram satisfeitos e 29% parcialmente satisfeitos, respeitando as limitações que a empresa possui; grande parte (59%) acha que as orientações dadas pelo técnico fornecem o resultado esperado, desde que as condições climáticas sejam favoráveis; e praticamente 100% consideram que o técnico está preparado para orientar os serviços de ATER. Através deste estudo, foi possível perceber e concluir a respeito dos serviços da EMATER-MG, que a empresa necessita passar por uma reestruturação que, de fato, envolva todos os setores da empresa, os funcionários de nível técnico e administrativo, e todos os setores hierárquicos de seu organograma, ou como a própria empresa define, funcionograma. As mudanças que ocorreram ao longo da década de 90, de acordo com os estudos de Vieira (2000), Sandes (2000) e Castro (2002), enfatizam as mudanças que ocorreram nos organogramas, na diminuição de níveis hierárquicos, na diminuição de chefias, dentre outras, porém ressaltam que não houve um envolvimento entre todos os setores da empresa. Para que um programa de reestruturação funcione e alcance os seus objetivos, é indispensável que todos os setores da empresa estejam engajados e conscientes acerca do que representa o processo de reestruturação organizacional e seus respectivos programas. Contudo, essa investigação demonstra que a maioria (55%) dos técnicos entrevistados desconhecia o programa de reestruturação organizacional. E que o número de técnicos da EMATER-MG é insuficiente, para 100% desses entrevistados. No entanto, é imperioso destacar que, para melhorar o processo de atuação da EMATER- MG, por meio da superação dos problemas internos e externos, torna-se necessário que o processo de reestruturação envolva todos os setores da empresa e, que haja abertura para uma maior participação destes nos diversos níveis hierárquicos da empresa, o que poderá trazer benefícios tanto para os produtores rurais, para os técnicos, para a EMATER-MG e para a extensão rural. E com todos estes fatores em consonância a sociedade e o Estado serão os maiores beneficiados no processo. / The purpose of the research was to analyze the process of EMATER- MG’s organizational restructure, through a perspective that began with the opinion of the company’s technicians and the rural producers served by this company. In a general manner, the purpose of this work was to analyze the extencionist action developed by EMATER-MG’s technicians to verify the satisfaction of small rural producers as well as the opinion of extencionist agents concerning their acting conditions towards those small rural producers after the implementation of the EMATER-MG’s program of organizational restructure. Specifically, the aim was to verify the small rural producer’s opinion on the extencionist action in the services provided by EMATER-MG after the implementation of the program of organizational restructure; identify the rural extencionist’s opinion about their attending the small rural producers, after the implementation of the program of restructure and identify based on the opinion of EMATER-MG’S technicians and small rural producers attended what their perspectives concerning EMATER-MG’s program of organizational restructure are. During this work, the theory of organizations, the study of organizations, the new public administration, the state’s crises, in sum the new focuses for a modern public administration were the main theoretical support used. The most utilized authors were: Etzioni (1967, 1974, 1978), Motta (1979), Costa e Cavalcanti (1991), Grau (1998), Bresser Pereira (1998), Vieira (2000), Sandes (2000) e Castro (2002). The present work consists of a study of case, which has, according to BECKER (1997), a double purpose. In one side, one tries to get to a wide comprehension of group that is being studied, and, in another side, one tries to develop more general theoretical declarations about regularities of the process and social structures. This study has contemplated the usage of the following techniques: documental analysis and semi-structured interview, which had as its unit the analysis of EMATER-MG’s technicians and the small rural producers attended by such a company. The usage of the semi- structured interview technique has made it possible to have a better interaction between the interviewer and the interviewee. Such procedure permitted the collected data to be articulated with a documental analysis. A flexible set of questions for the interviews was elaborated; it contained the elements that made it possible to answer the proposed problem. The cities near Viçosa, and Viçosa itself were the locus of the research: Cajuri, Coimbra, Paula Cândido, Porto Firme, São Miguel do Anta and Teixeiras, which belong to Viçosa-MG’s Regional Unit of EMATER-MG. Such an option was chosen based on the fact that there are, in these cities, rural producers and technicians which fit the variables related to the problem being studied. Those variables are: small rural producers which fallow the criterion established by EMATER-MG and which have been attended before and after EMATER-MG’s program of organizational restructure, the same for the technicians that work at the company. In this study, an adaptation of the Proportional Scale, according to ALMEIDA (1989: 147), for interpretation of the research data was utilized. This scale can be used in a one-dimensional way, when one position corresponds to only one possible interpretation; or multi-dimensional, when each position is defined by many dimensions. In this scale, multiple choice was chosen, in a multi-dimensional way, for the interpretation of the data referring the research. Such a choice consists of the following alternatives: Yes: most of the times, Yes: always, Yes: partially, No: never and Do not know. As an adaptation of a scale was used there was a certain freedom in working with these data and in constructing the graphics. The criterion used to analyze the answers of the interviews was the opinion of the rural producers attended by EMATER-MG and of EMATER-MG’s employees. Concerning the interviewed rural producers, it is possible to affirm, based on the obtained answers, that a significant parcel of them (46%) realized some kind of change in the company and in the ATER services provided by EMATER-MG; 79% percent of these produces agree that EMATER-MG has been attending their properties necessities; 83% of this category believe that the attendance of EMATER-MG’s technicians takes place in an adequate period; only 16% of the rural producers fallow the orientations of the technicians, most of the producers (84%) do not follow all the orientations, mainly because the financial factor, associated with the climatic conditions. A great majority of this category (71%) notices that the company’s technicians give enough attention to their property; 75% of this class think the technician has been present in the moments they most needed; 71% of the producers are satisfied and 29% partially satisfied, respecting the limitations the company has; a great part (59%) think that the orientation given by the technicians provide them with the expected results provided the climatic conditions are favorable; and almost 100% consider the technician is prepared to advise the ATER services. Through this work, it was possible to notice and conclude about the services provided by EMATER that the company needs to restructure things that involve all the sectors in the company, the technical and administration level employees, and all the hierarchical sectors of its organogram, or as the company defines, functionogram. The changes that took place the 90’s, according to Vieira (2000), Sandes (2000) and Castro (2002) studies, emphasize the changes that occurred in the organogram, in the decrease of hierarchical levels, in the decrease of bosses, among others, but stand out that there was no involvement between all the sectors in the company. For a restructure program to work and achieve its goals, it is essential that all the sectors in the company are engaged and conscious of what the organizational restructure process and its respective programs represent. However, this investigation demonstrates that the majority (55%) of the interviewed technicians did not know about the organizational restructure program. According to 100 %the interviewed technicians, EMATER-MG’s number of technicians is insufficient. Nevertheless, it is very important to stand out the necessity of the involvement of all the sectors of company in order to improve EMATER-MG’s acting process by overcoming its internal and external problems. Besides that, it is necessary that all the sectors have more participation in the diverse of hierarchical levels in the company, which can bring lots of benefits for the rural producers, the technicians, EMATER-MG and for the rural-extension. Having all these factors in consonance will make the society as well as the State be widely benefited in the process. / Dissertação importada do Alexandria

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-30T12:17:24Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6298113 bytes, checksum: d062e887b062b16684f43141310ca424 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T12:17:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 6298113 bytes, checksum: d062e887b062b16684f43141310ca424 (MD5) Previous issue date: 2004-07-30 / O objetivo deste trabalho foi analisar a morfologia das glândulas salivares do predador Podisus nigrispinus (Dallas, 1851) (Heteroptera: Pentatomidae) e caracterizar a atividade bioquímico-enzimática dessas glândulas. P. nigrispinus apresenta um par de glândulas salivares principais e um de acessórias. Cada glândula principal é constituída por um lóbo anterior e um posterior sendo o anterior localizado na região do protórax. O lóbo posterior apresenta forma de saco alongado, translúcido com a porção próxima ao lóbo anterior dilatada. Entre esses lóbos existe uma forte constrição, caracterizando um hilo onde se inserem dois ductos, o excretor e o da glândula salivar acessória. As glândulas salivares principais e acessórias de P. nigrispinus são supridas por uma rede de traquéias. A ultraestrutura das glândulas salivares principais de P. nigrispinus mostrou que o epitélio do lóbo anterior está constituído por uma camada única de células achatadas com núcleo volumoso e predomínio de cromatina descondensada com porção apical apresentando microvilosidades curtas e irregulares. Mitocôndrias, retículo endoplasmático rugoso, inclusões lipídicas, figuras mielínicas e grânulos de secreção com diferentes eletrondensidades se acumulam no citoplasma. O conteúdo do lúmen das glândulas salivares de P. nigrispinus é muito eletrondenso, mas apresenta inclusões esféricas e eletrontransparentes. Na porção mediana da célula verificou-se retículo endoplasmático rugoso, elementos do complexo de Golgi, mitocôndrias e corpos densos tomados como lisossomos. A porção basal da célula apresenta invaginações da membrana plasmática basal, mitocôndrias e vacúolos eletrontransparentes. A membrana basal apresenta uma túnica formada por células musculares e elementos traqueais. O epitélio do lóbo posterior é achatado com vesículas eletrontransparentes e cisternas do retículo endoplasmático rugoso. A porção apical da célula apresenta eliminação de porções do citoplasma para o lúmen preenchido por secreção eletrondensa e homogênea, enquanto a basal apresenta invaginações da membrana plasmática basal. O núcleo é irregular com cromatina condensada. Externamente há células musculares e traqueais. A porção secretora das glândulas salivares acessórias de P. nigrispinus apresenta uma camada única de células colunares com cutícula espessa e lúmen vazio. A porção apical da célula secretora tem microvilosidades curtas e irregulares com acúmulo de grânulos eletrondensos e vacúolos. A porção basal da célula é rica em mitocôndrias, com retículo endoplasmático rugoso, vacúolos e alguns grânulos eletrondensos. O núcleo, caracteristicamente, apresenta cromatina descondensada. A célula está assentada sobre uma fina membrana basal, sem células musculares externas. O epitélio do ducto das glândulas salivares acessórias de P. nigrispinus é mais baixo que na porção secretora, com citoplasma vacuolizado. A caracterização bioquímico-enzimática do extrato de glândulas salivares de P. nigrispinus mostrou atividades das enzimas digestivas amilase, lipase e proteases. A atividade específica de amilase sobre o amido e aquela da lipase sobre o tributirato de ditiopropanol apresentaram aumento linear com o aumento da concentração do substrato. A atividade proteásica, determinada sobre a azocaseína em concentrações de 0 a 0,6 mg/mL, apresentou curva hiperbólica seguindo a cinética Michaeliana. A atividade específica tripsina-like, caracterizada com o substrato sintético L- BApNA em diferentes pH apresentou picos de atividade específica a pH 5,0 e 8,0, com maior atividade neste último. A atividade tripsina-like, a diferentes temperaturas, apresentou, picos de atividade a 25o C e 37,5o C. O efeito de inibidores, sobre a atividade esterásica, foi determinado em presença de benzamidina, um inibidor competitivo clássico de tripsina e do TLCK, inibidor irreversível desta enzima. Esses inibidores ocasionaram queda na atividade da tripsina-like com aumento da concentração dos mesmos, com redução de 65,2 e 70,9% nessa atividade, respectivamente. O gráfico de Michaelis-Mentem apresentou valor de Km 1,57 mM e Vmáx 0,166 μM.s-1. As glândulas salivares de P. nigrispinus contêm enzimas hidrolíticas, com pronunciada atividade catalítica que, possivelmente, estão envolvidas no processo de predação e fitofágico desse predador. / The objective of this investigation was to analyze the morphology of the salivary glands of the predator Podisus nigrispinus (Dallas, 1851) (Heteroptera: Pentatomidae) and to characterize biochemical-enzymatic activity of these glands. P. nigrispinus presents a pair of main salivary glands and one pair of ancillaries. Each main gland is constituted by an anterior and one posterior lobe being the anterior located in the protoraxial region. The posterior lobe exhibit the format of an oblong sac, translucid with the proximal portion of the lobe dilated. Between these lobes exists a strong constriction, characterizing a hilum where two ducts are inserted, the excretory and the one of the ancillary salivary gland. The main and ancillary salivary glands of the P. nigrispinus are supplied by a net of tracheas. The ultra structure of the main salivary glands of P. nigrispinnus shows that the epithelium of the anterior lobe is constituted by a single layer of flattened cells with a bulky nucleus and a predominance of descondensed chromatin with the apical portion presenting short and irregular microvilosides. Mitochondria, creasy endoplasmatic reticules, fatty inclusions, myelin images and secretion granules with different electron densities accumulates in the cytoplasm. The lumen content of the salivary glands of the P. nigrispinus is very electron dense, but exhibits spherical and electron transparent inclusions. In the median portion of the cell a creasy endoplasmatic reticule was detected, as well as elements of the Golgi complex, mitochondria and dense bodies considered as lisosomes. The basal portion of the cell exhibits invaginations of the basal plasmatic membrane, mitochondria and electron transparent vacuoles. The basal membrane presents a tunic formed muscular cells and tracheal elements. The epithelium of posterior lobe is flattened with electron transparent vesicles and cisterns of the creasy endoplasmatic reticule. The apical portion of the cell presents elimination of portions of the cytoplasm to the lumen filled by electron dense and homogeneous secretion, whereas the basal portion presents invaginations of the basal plasmatic membrane. The nucleus is irregular with condensed chromatin. Externally there are muscular and tracheal cells. The secretor portion of the ancillary salivary glands of the P. nigrispinus exhibits a single layer of columnar cells with thick cuticle and empty lumen. The apical portion of the secretor cell has short and irregular micromicrovilosides with accumulation of electron dense granules and vacuoles. The basal portion of the cell is rich in mitochondria, with creasy endoplasmatic reticule, vacuoles and some electron dense granules. The nucleus, characteristically, presents decondensated chromatin. The cell is settled on a thin basal membrane, with no external muscular cells. The epithelium of the ducts of the ancillary salivary glands of P. nigrispinus is lower than in the secretor portion, with vacuolated cytoplasm. The biochemical-enzymatic characterization of the extract of the salivary glands of P. nigrispinus exhibited activity of the digestive enzymes amylase, lipase and protease. The specific activity of the amylase on the starch and that of the lipase on dithiopropanol tributyrate exhibited linear increase with the concentration of the substrate. The protease activity, determined on azocaseine in concentrations from 0 to 0.6 mg/mL, exhibited a hyperbole curve following a Michaelian kinetics. The specific trypsine-like activity, characterized with the synthetic substrate L-BapNA at different pH’s exhibited peaks of specific activity at pH 5.0 and 8.0, with a higher activity with respect to the latter. The trypsine-like activity, at different temperatures, exhibited activity peaks at 25oC and 37.5 oC. The effect of inhibitors on the stereoastic activity was determined in the presence of benzamidyne, a classic competive inhibitor of trypsine and of TLCK, irreversible inhibitor of this enzyme. These inhibitors caused decrease in the activity of the trypsine-like with the increase of the concentrations of the same, with a reduction of 65.2 and 70.9 % of this activity, respectively. The Michaelis-Mentem graph exhibited a value of KM 1.57 mM and Vmax 0.166 mM.s-1. The salivary glands of P. nigrispinus contain hydrolytic enzymes, with prominent catalytic activity that, possibly, are involved in the predatory and phytophagic process of this predator.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-03-30T18:32:26Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 417709 bytes, checksum: ee91ea6602fb6b857ebe82045dbc0e19 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-30T18:32:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 417709 bytes, checksum: ee91ea6602fb6b857ebe82045dbc0e19 (MD5) Previous issue date: 2004-02-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A deltametrina está entre os principais inseticidas utilizados para o controle da lagarta-do-cartucho Spodoptera frugiperda, além de outras pragas importantes da cultura do milho. Apesar da importância desse composto e de seu uso freqüente, pouco se sabe sobre seus efeitos em artrópodes não-alvo de aplicação. Estudos de avaliação ecotoxicológica desses inseticidas são muito raros e provenientes de regiões temperadas. Normalmente são explorados apenas aspectos de seletividade em favor de inimigos naturais ou os estudos concentram-se na quantificação de resíduos na planta, solo e água da localidade sem identificarem o impacto destes em sistemas biológicos relevantes. Contudo, sob o aspecto ecotoxicológico, esses estudos são de valor restrito por não possibilitarem a avaliação dos efeitos, a campo, do inseticida aplicado na comunidade alvo primário da ação inseticida (i.e., a comunidade de insetos peculiar ao ecossistema sob investigação) e sua recuperação frente a este fator de estresse ambiental. Esse tipo de estudo feito aqui contempla não apenas o complexo de insetos fitófagos e predadores/parasitóides associados a determinado cultivo, mas também outros elementos da comunidade que possuem grande importância na estruturação da mesma, como artrópodes detritívoros. Além do impacto inseticida, avaliou- se também a influência dos sistemas de plantio na estrutura e abundância de artrópodes. Métodos multivariados como análise de variáveis canônicas (CVA), análise de componentes principais (PCA) e curvas de respostas principais (PRC), que permitem uma visão global da estrutura da comunidade, foram utilizados. Este tipo de análise propicia uma visão ao nível de comunidade levando em conta as relações intra e interespecíficas, além da influência exercida por fatores ambientais. Na parte aérea, detectou-se efeito significativo do sistema de cultivo na comunidade de artrópodes. Em relação ao impacto do inseticida, ele foi significativo apenas no sistema de plantio convencional. Quanto ao sistema de plantio direto, ele foi capaz de tamponar o impacto do inseticida na comunidade de artrópodes minimizando o seu efeito. Na avaliação dos artrópodes do solo, foi dada atenção particular aos identificados como bioindicadores. A avaliação dos artrópodes, em nível taxonômico maior, não detectou impacto significativo do inseticida nos grupos de artrópodes avaliados. Para alguns grupos como as formigas, não foi detectado nem efeito do sistema de plantio. No entanto, o sistema de plantio exerceu influência nas comunidades de Collembola e de ácaros. Avaliando-se a comunidade de formiga em nível de espécie, foi possível detectar efeito nítido do sistema de plantio o que não foi possível quando se fez o agrupamento das formigas por subfamília. Quanto ao inseticida, aparentemente não causa efeito significativo nos artrópodes do solo. A análise de resíduo por cromatografia gasosa não detectou presença de inseticida nas amostras de solo colhidas a campo 24 h após a aplicação do inseticida nas linhas de cultivo. De forma geral, encontrou- se mais efeitos do sistema de plantio do que efeitos do inseticida com uma tendência do plantio direto mitigar os efeitos do inseticida principalmente na parte área. / Deltamethrin is among the main insecticides used for controlling the fall armyworm Spodoptera frugiperda besides other important maize pests. Despite the importance and frequent use of this insecticide, little is known about its effect on non-target arthropods. Ecotoxicological assessments of such compounds are scarce e from temperate regions. Natural enemy selectivity and residue quantification on the plant, soil and water are usually the main objectives of these studies, which do not assess the impact of the compounds in relevant biological systems. However, this studies are of restricted value by the ecotoxicological standpoint since the do not allow the field assessment of the insecticide impact on the primary target community of its action (i.e., the insect community peculiar to the system under investigation) and the community recovery after this environmental stress. The kind of study here reported encompasses not only the complex of phytophagous insects and their natural enemies, but also other community elements that show relevant in its structuring, as detritivorous arthropods. Besides insecticide impact, the influence of the crop system in the structure and abundance of arthropods was also assessed. Multivariate techniques, such as canonical variate analysis (CVA), principal component analysis (PCA) and principal response curves (PRC) were employed for providing an overall view of the community structure. This sort of analysis allows community-level assessment taking into account intra and interespecific relationships, considering the influence of environmental variables. There was significant effect of crop system in the arthropod community associated to the plant canopy. Insecticide impact was significant only on the conventional crop system. The no-tillage crop system was able to buffer the insecticide impact on the arthropod community minimizing its effect. Particular attention was given to the arthropods recognized as bioindicators of community stress in the soil assessments. Analysis of high taxonomic levels was not able to detect significant impact of the treatments. However, the crop system showed significant influence on the assemblages of springtails (Collembola) and soil mites (Oribatida and Gamasida)). The ant assemblage was very abundant and diverse and was therefore assessed at the species level where a significant effect of the crop system was evident, what did not take place when considered at the level of subfamily. The insecticide deltamethrin did not showed significant impact on the soil arthropod community. Insecticide residue analysis by gas chromatography did not detect insecticide in soil samples field collected 24 h after insecticide application. The overall trend of the experiment was of a more drastic impact caused by the crop system than the insecticide application and the crop system can actually mitigate insecticide impact in the arthropod community associated with the plant canopy.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-06T18:26:29Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1197506 bytes, checksum: 9193cadcda46986559ce00d7fba20538 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-06T18:26:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1197506 bytes, checksum: 9193cadcda46986559ce00d7fba20538 (MD5) Previous issue date: 2015-07-23 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A produção economicamente viável de etanol de segunda geração, depende principalmente de microrganismos capazes de fermentar a xilose, sendo o principal açúcar presente na fração hemicelulósica. A levedura Saccharomyces cerevisiae, não pode utilizar a xilose, uma vez que não possui transportador específico e os genes do metabolismo são expressos em baixos níveis. Neste sentido, as leveduras Spathaspora arborariae, Spathaspora passalidarum e Sheffersomyces stipitis, tornam-se promissoras para a fermentação industrial de hidrolisados lignocelulósicos, por naturalmente converterem de maneira eficiente xilose em etanol. O presente trabalho teve como objetivo caracterizar fisiologicamente essas linhagens e definir as melhores condições de fermentação. Foi realizado experimentos de fermentação em batelada com diferentes concentrações de xilose (4, 8 e 10%) e temperaturas (28, 32 e 35 °C). Posteriormente as melhores condições desta etapa para cada levedura, foram avaliadas em cofermentação com glicose (2 e 4%). O processo fermentativo foi realizado durante 70 horas, e amostras da cultura foram recolhidas para avaliação dos parâmetros cinéticos e fermentativos. Todas as leveduras crescem com velocidades similares em diferentes concentrações de açúcar, mostrando a tolerância a altas concentrações de xilose. Em relação às diferentes temperaturas avaliadas, S. arborariae, S. passalidarum e S. stipitis apresentam um bom crescimento em uma faixa de temperatura de 28 a 35°C. Ao avaliar o rendimento de etanol, S. arborariae apresentou o maior rendimento em 10% de xilose na temperatura de 28°C (27,6 g/L), S. passalidarum e S. stipitis apresentaram maior rendimento em 10% de xilose em 32°C (38,4 g/L e 37,8 g/L, respectivamente). Nos ensaios de cofermentação, estas leveduras consomem preferencialmente a glicose. A viabilidade celular não foi alterada durante as 70 horas de fermentação. A adição de HMF não representou efeito inibitório no crescimento destas leveduras, o furfural inibiu apenas o crescimento de S. arborariae, enquanto o ácido acético apresentou efeito inibitório para todas as leveduras. S. passalidarum cresceu em 6% de etanol, enquanto as demais não. S. passalidarum demonstrou ser promissora para a produção de etanol por produzir as maiores concentrações em um período curto de tempo e baixos rendimentos de xilitol e glicerol, em todas as condições avaliadas e por ser mais tolerante aos inibidores. / The economically viable production of second generation ethanol depends mainly on the ability of microorganisms to ferment xylose, the main sugar present in the hemicellulose fraction. Sacchamomyces cerevisiae cannot utilize xylose since it does not have any specific carrier, and the genes of xylose metabolism are expressed at low levels. In this regard, the yeasts Spathaspora arborariae, Spathaspora passalidarum and Sheffersomyces stipitis have been considered promising for industrial fermentation of lignocellulosic hydrolysates because they naturally convert xylose to ethanol efficiently. This study aimed to physiologically characterize these lines and set the best conditions for fermentation. Fermentation was performed in batch experiments with different xylose concentrations (4, 8 and 10%) and temperatures (28, 32 and 35 ° C). Then, the best conditions for each one of the yeasts were evaluated in co-fermentation with glucose (2 and 4%). The fermentation process was carried out for 70 hours and culture samples were collected for further evaluation of kinetic and fermentation parameters. All yeast strains grown at similar rates in the different sugar concentrations tested, showing tolerance to high concentrations of xylose. Spathaspora arborariae, Spathaspora passalidarum and Sheffersomyces stipitis had important development at 28 - 35 °C temperature range. To assess ethanol yield, S. arborariae showed the highest rate in 10% xylose concentration at 28 °C (27.6 g/L), while S. passalidarum and S. stipitis showed the highest yields in 10% xylose treatment, but at 32 °C (38.4 g/L and 37.8g/L, respectively). In the co- fermentation assays, these yeasts preferentially consume glucose. Cell viability was not affected during the 70 hour fermentations. The addition of 5-hydroxymethylfurfural did not present inhibitory effect on the yeasts development; furfural only inhibited S. arborariae growth, and acetic acid showed inhibitory effects in all yeasts. S. passalidarum grew in 6% ethanol, while the others did not. S. passalidarum showed to be promising for ethanol production because it had the highest ethanol concentration rates in a short period of time, showed low yields of xylitol and glycerol in all tested conditions, and proved to be more tolerant to inhibitors.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-07T16:46:59Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 7523105 bytes, checksum: a1b40bb2fc7f6707988b2c59b1367cc4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-07T16:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 7523105 bytes, checksum: a1b40bb2fc7f6707988b2c59b1367cc4 (MD5) Previous issue date: 2015-03-13 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Neste trabalho foi construída uma biblioteca metagenômica a partir de um consórcio microbiano termofílico com aproximadamente 135.000 clones, abrigando cerca de 3,5 Gpb de DNA metagenômico. Essa biblioteca foi construída com o objetivo de identificar genes que codificam enzimas lignocelulolíticas para serem expressos na levedura Kluyveromyces marxianus CCT 7735 (UFV-3). De 6.720 clones analisados (5 % do total), foram obtidos 182 hits positivos para atividades de celulases, xilanases e β-glicosidases, com seleção e sequenciamento de 30 fosmídeos que deram origem à identificação de 34 ORFs codificando para enzimas glicosil hidrolases, relacionadas com a hidrólise de celulose e hemicelulose. Paralelo à construção da biblioteca, foi obtido uma linhagem de K. marxianus CCT 7735 (UFV- 3) mutante (ura3 ̄ ). Pela primeira vez nesta levedura a deleção deste gene foi realizada utilizando-se a técnica split-marker, com seleção dos mutantes primeiramente em placas contendo geneticina e, posteriormente, associados à seleção em placas contendo ácido 5-fluorótico (5-FOA). Os resultados apresentados mostram que esta técnica de deleção pode ser eficientemente empregada para K. marxianus CCT 7735 (UFV-3), mesmo levando-se em conta a diploidia desta linhagem. A partir da obtenção do mutante ura3 ̄ , deu-se a construção do vetor pKmLPG para ser usado como sistema de expressão para essa levedura, uma vez que a marca de seleção contida neste vetor é o gene URA3. A característica diferencial e promissora deste sistema de expressão é o uso da sequência do promotor do gene que codifica a enzima endo-polygalacturonase endógena de K. marxianus CCT 7735 (UFV-3). A confirmação do vetor pKmLPG será realizada por sequenciamento. Sem essa confirmação, utilizou-se então o vetor de expressão pKMCL para clonagem de três genes de β-glicosidase isolados a partir da biblioteca fosmidial na levedura K. marxianus CCT 7735 (UFV-3). O vetor pKMCL é derivado do vetor de expressão pKLAC2 de K. lactis e utiliza a marca de seleção que confere resistência ao antibiótico geneticina. Por realização de teste enzimático dos transformantes em meio sólido, observou-se a presença de atividade extracelular de β-glicosidase endógena de K. marxianus CCT 7735 (UFV- 3). Com o genoma desta levedura anotado, foi possível identificar o gene, e juntamente com os demais genes de β-glicosidase (P3Gli, P8Gli e P9Gli), foram preditas as estruturas tri-dimensionais dessas proteínas. A confirmação dos transformantes para os genes P3Gli, P8Gli e P9Gli foi realizada por PCR, e atividade de β-glicosidase foi detectada tanto no sobrenadante extracelular quanto na região do periplasma em oito das nove cepas transformantes analisadas. Os resultados de expressão heteróloga de β-glicosidades em K. marxianus CCT 7735 (UFV-3) mostram que esta linhagem pode ser usada como hospedeira na expressão de diferentes genes lignocelulolíticos, com expectativa de uso das linhagens recombinantes capazes de secretar celulases visando a produção de etanol celulósico. / A metagenomic library harboring around 3,5 Gpb was constructed from a thermophilic microbial consortium. The aim of this library was to identify genes coding lignocellulolytic enzymes that could be expressed in the yeast Kluyveromyces marxianus CCT 7735 (UFV-3). In total, 6,720 clones (5% of all clones) were analysed and 182 positive hits were found for cellulases, xylanases and β-glucosidases. The sequencing of 30 selected fosmids resulted in the identification of 34 putative open reading frames (ORFs) coding glycoside hydrolases involved with cellulose and hemicellulose degradation. Simultaneously, a defective mutant strain of K. marxianus CCT 7735 (UFV-3) for gene ura3 was obtained. The gene was deleted by using, for the first time in this yeast, the split- marker technique that consisted in a first selection of mutants in solid medium with the antibiotic geneticin followed by a second selection in the presence of 5- Fluoroorotic Acid. The results presented here demonstrated the efficiency of the split-marker technique in K. marxianus CCT 7735 (UFV-3), even though this is a diploid strain. Once the ura3 - was obtained, the vector pKmLPG was constructed using the URA3 as a marker gene in order to have an expression system for the ura3 - mutant strain. The differential and promising feature of this vector lies in the presence of the promoter sequence of the gene coding an endo-polygalacturonase enzyme from K. marxianus CCT 7735 (UFV-3). The confirmation of the correct vector construction will be performed by sequencing. In order to express genes isolated from the metagenomic library in the yeast K. marxianus CCT 7735 (UFV-3) three genes coding β-glucosidase were cloned onto the vector pKMCL. This vector is derived from pKLAC2 of Kluyveromyces lactis and it uses the resistance gene for the antibiotic geneticin as a marker. Extracellular activity of endogenous β- glucosidase from K. marxianus CCT 7735 (UFV-3) was detected by enzymatic assay in solid medium during the analyses of transformants, and based in the annotated genome of this yeast, was possible to identify the β-glucosidase gene. The three dimensional structure of the endogenous protein as well from those codified by the β-glucosidase genes (P3Gli, P8Gli and P9Gli) were predicted. The confirmation of transformants for the cloned genes P3Gli, P8Gli and P9Gli was done by PCR, and the β-glucosidase activity was detected in both extracelllular supernatant and periplasm region in eight of nine transformants analysed. Results of heterologous expression of β-glucosidase in K. marxianus CCT 7735 (UFV-3) demonstrated that this strain can be used as a host for expression of various lignocellulolytic genes, with the expectation to use recombinant yeast strains capable to secret celulases targeting the production of cellulosic etanol. / Tese liberada do Sigilo pelo departamento em 04-04-2017, ver arquivo

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2017-04-11T13:27:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 793077 bytes, checksum: e8fd78c52cfc4c8933ad3b3d0d195135 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-11T13:27:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 793077 bytes, checksum: e8fd78c52cfc4c8933ad3b3d0d195135 (MD5) Previous issue date: 2016-05-20 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / A contaminação de solos por petróleo e seus derivados tem exigido o desenvolvimento de estratégias para melhorar a eficiência dos processos envolvidos na remoção dos hidrocarbonetos contaminantes. Entre elas, a bioaumentação, como parte dos processos de biorremediação in situ, representa uma das alternativas para descontaminação ambiental. No entanto, a heterogeneidade do ambiente edáfico e as interações ecológicas microbianas, como a predação, representam um desafio no sucesso da adaptação e desempenho metabólico dos consórcios microbianos inoculados. Em razão disso, a utilização de bactérias hidrocarbonoclásticas que possam se adaptar e se proteger da predação por protozoários pode representar um avanço no processo de bioaumentação. Portanto, nesse trabalho se avaliou a capacidade de degradação de petróleo e de proteção contra a predação por protozoários, de um consórcio de ultramicrocélulas bacterianas (UMCs) hidrocarbonoclásticas em microcosmos contendo dois tipos de agregados de solo, agregados > 0,5 mm até 4,75mm e agregados < 0,5 mm. A hipótese do trabalho era que as UMCs pudessem colonizar os microporos, proteger-se da predação por protozoários e utilizar as moléculas de hidrocarbonetos retidas nesses locais e indisponíveis para bactérias de maior dimensão. Após 30 dias de incubação, foram determinados a atividade microbiana (emissão de CO2), número mais provável de protozoários (NMP) e concentração de hidrocarbonetos totais de petróleo (TPH) residual. Maior produção de CO2 foi obtida nos tratamentos sem petróleo e nos microcosmos contendo protozoários + bactérias de tamanho normal e protozoários + UMCs. Maior número de protozoários foi encontrado na presença de UMCs. Em relação à concentração de TPH, a degradação foi influenciada negativamente pela inoculação do consórcio bacteriano, tanto no estado fisiológico normal quanto no estado de UMCs. Concluiu-se que as características intrínsecas do solo limitaram o estabelecimento e crescimento dos dois distintos estados fisiológicos bacterianos dentro dos agregados, o que impediu sua atividade hidrocarbonoclástica. A predação não teve influência na degradação dos hidrocarbonetos e os predadores foram beneficiados na presença de UMCs. Portanto, a mudança celular a estado de UMCs imposta por estresse fisiológico não contribuiu para a proteção das populações bacterianas no interior dos microporos do solo ou para diminuir a pressão de predação pelos protozoários, nem para melhorar a eficiência da degradação de hidrocarbonetos no solo. / Soil contamination by oil and oil products demand the development of strategies to improve the process to remove hydrocarbons from soil. Set of in situ strategies are termed bioremediation. One critical strategy is a bioaugmentation. However, soil heterogeneity and ecological microbial interactions, such as protozoa predation, represent a challenge in the success of adaptation and metabolic activity of bacterial populations introduced into soil. For this reason, the use of hydrocarbonoclastic bacteria which are able to adapt and protect themselves from protozoan predation, may represent an enhancement in the bioaugmentation process. Therefore, the aim of this study was to evaluate the hydrocarbons oil degradation capacity and protection against protozoan predation of a bacterial consortium induced to ultramicrocells (UMCs) in soil microcosms with aggregates of <4,75- 0,5 mm and 0,5 mm contaminated with crude oil. Our hypothesis was that UMCs could penetrate soil micropores, there UMCs could protect themselves from protozoan predation and use hydrocarbons molecules retained in these micropores and unavailable for large bacteria. After 30 days of incubation were determined the microbial activity (CO2), most probable number of protozoa (NMP) and the total petroleum hydrocarbons concentration (TPH). Increased CO2 production was obtained in the treatments without oil and microcosms containing protozoa + normal bacteria and protozoa + UMCS. The number of protozoa increase in the presence of UMCs. Regarding the concentration of TPH, degradation was negatively influenced by the introduction of the bacterial consortium, as normal physiological state or state of UMCs. Thus, we concluded that soil intrinsic characteristics and addition of crude oil, restricted the establishment and growth of bacterial consortium in both physiological states into aggregates soil, thereby inhibiting its hydrocarbonoclastic activity. Predation had no effect on the hydrocarbons degradation and predators were benefited from the presence of UMCs, so cell change for UMCs state by physiological stress, it did not help to protect within soil micropores from protozoan predation or to enhance the hydrocarbon degradation in soil.