Magnetic nanoparticles (MNPs) hold great promise in the fields of biology and medicine. The synthesis of functional MNPs with precisely controlled crystallographic, physicochemical, and magnetic properties on a large scale still remains the challenge today. This thesis reports the exploration of liquid-fed flame spray pyrolysis (FSP) in the synthesis of functional MNPs, their surface modifications, and potential bio-applications. Superparamagnetic and ferromagnetic maghemite (γ-Fe2O3) nanoparticles, and silica-coated maghemite (SiO2/γ-Fe2O3) nanocomposites were synthesised using FSP. The size of γ-Fe2O3 was controllable from 6 to 53 nm, with morphology evolving from a disordered near-spherical shape to fully ordered 2-D hexagonal/octagonal platelet. The saturation magnetisation (Ms) increased from 21 to 74 emu/g with increasing particle size, up to 13 nm when Ms approached the bulk γ-Fe2O3 characteristics. In the case of SiO2/γ-Fe2O3, three distinct morphologies, namely the single segregated γ-Fe2O3 core- SiO2 shell, transitional mixed morphologies, and multi γ-Fe2O3 cores embedded in submicron SiO2 shell, were obtained. The core size, composite size, and morphology of γ- Fe2O3 were tunable by varying %SiO2 loading and the use of a quartz tube enclosure during flame synthesis. The magnetic behaviour correlated well with the crystal microstructure. Following the core particle design, protein adsorption-desorption behaviour on FSP-madeMNPs was studied. Bovine serum albumin (BSA) adsorption was found to follow the Langmuir isotherm, with high binding capacities (150−348 mg BSA/g particle) and fast association constants. Electrostatically governed BSA orientations were proposed for different particle-buffer systems. The adsorbed BSA was effectively recovered by pH-shift using K2HPO4. Subsequently, terminal amine, aldehyde, carboxylic, epoxy, mercapto and maleimide functionality were anchored onto the FSP-made γ-Fe2O3 particles. These versatile functional groups led to conjugation of active trypsin. The immobilised trypsin exhibited superior durability with >60% residual activity after one week, and excellent reusability for >5 cycles. The trypsin-conjugated MNPs are promising carriers in proteomics, demonstrating good substrate specificity with equivalent or better sequence coverage compared to free trypsin in insulin and BSA digestion. In another application, a refined silanisation procedure simultaneously reduced γ-Fe2O3 to Fe3O4, and generated thiol enriched surface for matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) conjugation. The highly active MMP-2-conjugated MNPs could potentially enhance the interstitial transport of macromolecule/nanoparticles in drug delivery.

Thesis (Ph.D. in Pharmaceutical Sciences) -- University of Colorado Denver, 2008. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 219-242). Free to UCD affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;

Chronic kidney disease (CKD) is highly prevalent, with increasing numbers of patients affected by the disease world-wide, and anemia is a common finding in patients with CKD. Anemia impacts negatively on cardiovascular disease, exercise capacity and quality of life, resulting in a significant mortality and morbidity. The aim of this study was to evaluate the levels of ischemia-modified albumin and lactate in patients with established anemia associated to CKD and its correlations with hemoglobin levels. Hematocrit, hemoglobin, iron, ferritin, albumin, creatinine, lactate and IMA were measured in 17 patients with established anemia associated to CKD and 19 controls by standard methods. The results of hematocrit, hemoglobin, iron and albumin were lower in anemia group than control group. Ferritin, creatinine and lactate levels were higher in anemia of CKD group than control group. IMA increases in anemia group (0.8115 ± 0.1304) ABSU compared to control (0.4951 ± 0.0393) ABSU. Significant correlations between IMA and lactate, IMA and hemoglobin, IMA and creatinine, and hemoglobin and lactate were observed. IMA and lactate increase during anemia and this elevation could be associated to hypoxia due to low hemoglobin levels. However, our data suggest that lactate is more sensitive to detect hypoxia in anemia compared to IMA. / A doença renal crônica (DRC) é altamente prevalente, com um aumento do número de pacientes no mundo inteiro, e a anemia é muito comum nestes pacientes. A anemia tem impacto negativo sobre a doença cardiovascular, capacidade de executar exercícios e a qualidade de vida, resultando numa significativa morbidade e mortalidade. O objetivo deste estudo foi avaliar os níveis de albumina modificada pela isquemia (IMA) e lactato em pacientes com anemia associada à DRC e sua correlação com os níveis de hemoglobina. Hematócrito, hemoglobina, ferro, ferritina, albumina, creatinina, lactato e IMA foram avaliados em 17 pacientes com anemia associada à DRC e em 19 pacientes do grupo controle, por métodos padronizados. Os resultados do hematócrito, hemoglobina, ferro e albumina foram menores no grupo de anêmicos do que no grupo controle. Ferritina, creatinina e lactato foram maiores no grupo de anêmicos do que no grupo controle. A IMA aumentou no grupo de anêmicos (0,8115 ± 0,1304) ABSU se comparado ao grupo controle (0,4951 ± 0,0393) ABSU. Foram observadas significativas correlações entre IMA e lactato, IMA e hemoglobina, IMA e creatinina e hemoglobina e lactato. A IMA e lactato aumentaram durante a anemia e esta elevação poderia ser associada com hipóxia devido aos baixos níveis de hemoglobina. Entretanto, nossos dados sugerem que o lactato possui maior sensibilidade na detecção da hipóxia na anemia, quando comparado com a IMA.

A corticoterapia tem sido utilizada frequentemente nas éguas suscetíveis. O uso de isuflupredona melhora a taxa de prenhez e altera o perfil proteico do líquido endometrial em relação a éguas não tratadas. A utilização de dexametasona diminui o acúmulo de líquido pós-cobertura, reduz o edema do útero, porém, desconhecem-se seus efeitos no perfil proteico do líquido endometrial. O objetivo do presente estudo foi analisar o efeito da dexametasona em éguas suscetíveis à endometrite persistente póscobertura sobre perfil proteico do líquido endometrial na presença ou ausência de infecção. Nove éguas suscetíveis foram utilizados, com idade entre 7 a 30 anos. Após a verificação dos sinais de estro as éguas foram submetidas a quatro tratamentos: (C) éguas não receberam nenhum tipo de tratamento e serviram como controle; (D) éguas receberam 40mg de dexametasona (IV), no momento da cobertura, com coleta da amostras após 6 horas, (I-6 e I-24) infusão intra-uterina de 1 x 109 de S. zooepidemicus/mL, com coleta da amostra após 6 e 24 horas; (I/D-6 e I/D-24) infusão intra-uterina de 1 x 109 S. zooepidemicus/mL e administração de 40mg de dexametasona (IV), com coleta da amostra após 6 e 24 horas. Todas as éguas foram submetidas a todos os tratamentos. As amostras foram coletadas e submetidas à eletroforese bidimensional para separação proteica e espectrometria de massa para a identificação das bandas proteicas relevantes. A corticoterapia provocou alteração na proteômica do líquido endometrial de éguas suscetíveis, caracterizada pelo aumento (TTR) e/ou diminuição (ApoA1) na densidade óptica de proteínas da fase aguda da inflamação. Conclui-se que a utilização da dexametasona em éguas com e sem presença de infecção altera a proteômica do fluido endometrial de éguas suscetíveis. Sugere-se que a dosagem ou a frequência de aplicação da dexametasona deva ser aumentada. / Corticotherapy has often been used in susceptible mares. The use of isuflupredona improves pregnancy rate and alters the protein profile of the endometrial fluid in relation to untreated mares. The use of dexamethasone decreases the post breeding fluid accumulation, reduces the uterine edema, however is unaware of its effects on the protein profile of endometrial fluid. The aim of the present study was analyze the effect of dexamethasone in mares susceptible to post-breeding persistent endometritis on the protein profile of endometrial fluid in the presence or absence of infection. Nine susceptible mares were used, aged 7-30 years old. After checking the signs of estrus, mares were subjected to four treatments: (C) mares received no treatment and served as controls; (D) mares received 40 mg of dexamethasone at breeding time, with collection of samples after 6 hours; (I-6 and I-24) intrauterine infusion of 1 x 109 S. zooepidemicus/ml and the sample was collected after 6 and 24 hours; (I/D-6 and I/D-24) intrauterine infusion of 1 x 109 S. zooepidemicus/ml and 40 mg of dexamethasone administration, collecting the sample after 6 and 24 hours. All of the mares were subjected to all treatments. Samples were collected and subjected to two-dimensional electrophoresis for protein separation and mass spectrometry for the identification of relevant protein bands. Corticotherapy resulted in alteration of the protein profile of the endometrial fluid of susceptible mares, characterized by an increase (TTR) and/or decrease (ApoA1) in optical density of the acute phase of proteins of inflammation. We conclude that the use of dexamethasone in mares with and without the presence of infection alters the protein profile of endometrial fluid of susceptible mares. It is suggested that the dosage or frequency of application of dexamethasone should be increased.

O fluido folicular (FF) é um líquido extracelular complexo que se acumula no antro dos folículos ovarianos durante o seu desenvolvimento. É o meio essencial para o crescimento e a maturação das células ovarianas somáticas e germinativas e contém substâncias envolvidas na diferenciação celular, maturação do oócito, qualidade do gameta, ruptura da parede folicular e luteinização. O estudo de seus componentes é fundamental para um melhor entendimento dos mecanismos que envolvem a dinâmica folicular na espécie equina. O objetivo deste trabalho foi comparar o perfil proteico do maior folículo, e entre o maior e o segundo maior folículo, em diferentes momentos do desenvolvimento folicular. Para este estudo, quarenta ovários, oriundos de vinte éguas Crioulas, não gestantes e cíclicas, foram coletados durante a estação reprodutiva, em um abatedouro. Antes do abate, as éguas foram divididas em quarto grupos de acordo com o diâmetro folicular, ecotextura uterina (EU) e presença de corpo lúteo (CL): G 15 (emergência) (n = 3) folículos até 15 mm, EU ≥ 1, CL ≥ 20 mm; G 20 (divergência) (n = 9) folículos entre 20 e 25 mm, EU 1-2, CL 15-20 mm; G 30 (dominância) (n = 4) folículos entre 30 e 35 mm, EU ≥ 2, CL ≤ 15 mm; G 40 (pré-ovulatória) (n = 4) folículos ≥ 40 mm, EU 2-3, CL ≤ 15 mm. Após o abate, os ovários foram coletados e o FF dos dois maiores folículos foi aspirado. A técnica de 2D-PAGE foi realizada, em duplicata, utilizando gel de acrilamida a 12%. Os géis foram corados com Comassie Brilliant Blue R-250, escaneados e analisados, utilizando o PDQuest software, para determinar a densidade óptica dos spots. A identificação proteica foi realizada através de espectometria de massa (MS). Um total de 43 spots foi observado. Sete spots, representando cinco proteínas (albumina, apolipoproteína A-1, gelsolina, transferrina e α-1-antiproteinase 2), apresentaram diferenças (P˂0,05) na expressão, no FF do maior folículo, nos diferentes grupos. Um spot, representado pela proteína POMZP3, demonstrou diferença (P=0,018) em sua expressão, entre o maior e o segundo maior folículo, nos diferentes grupos. E, por fim, um spot, identificado como a proteína α-1-antiproteinase 2, apresentou interação (P=0,047) entre o maior e o segundo maior folículo e as diferentes fases da foliculogênese. Os resultados deste trabalho demonstram que o perfil proteico do FF difere durante o desenvolvimento folicular e que, as maiores alterações, são observadas a partir da dominância. Além disso, provavelmente, algumas destas proteínas, bem como suas correlações, tenham grande importância nos eventos que ocorrem durante a foliculogênese. / The follicular fluid (FF) is a complex extracellular fluid that accumulates in the antrum follicles during the follicular development. It is the essential medium for the growth and maturation of somatic and germ ovarian cells and contains substances involved in cell differentiation, oocyte maturation, gamete quality, rupture of the follicle wall and luteinization. The study of its components is crucial for a better understanding of the mechanisms involved in follicular dynamics in mares. The objective of this study was to determine the protein profile of the largest follicle and among the largest and the second largest follicle at different stages of follicular development. In this study, 40 ovaries from 20 non pregnant Criollo cycling mares were collected during the breeding season in an abattoir. Before slaughter, the mares were divided into four groups according to follicular diameter, uterine ecotexture (UE) and the presence of corpus luteum (CL): G 15 (emergence) (n = 3), follicles up to 15mm, EU ≥ 1, CL ≥ 20 mm; G 20 (deviation) (n = 9), follicles between 20 and 25 mm, EU 1-2, CL 15-20 mm; G 30 (dominance) (n = 4), follicles between 30 e 35 mm, EU ≥ 2, CL ≥15 mm; G 40 (ovulation) (n = 4), follicles ≥ 40 mm, EU 2-3, CL ≥ 15 mm. After slaughter, the ovaries were collected and the FF of the two largest follicles was aspirated. The technique of 2D-PAGE was performed in duplicate using 12% acrylamide gel. Gels were stained with Comassie Brilliant Blue R-250, scanned and analyzed using the PDQuest software to determine the optical density of the spots. Protein identification was performed by mass spectrometry (MS). A total of 43 spots was observed. Seven spots representing five proteins (albumin, apolipoprotein A-1, gelsolin, transferrin e α-1-Antitrypsin 2) showed differences (P˂0.05) in expression, the FF of the largest follicle in the different groups. One spot, represented by POMZP3 protein showed a difference (P=0.018) in expression between the largest and second largest follicle in the different groups. Finally, one spot, identified as the protein α-1-antitrypsin 2, showed interaction (P=0.047) between the largest and second largest follicle. The results of this study demonstrated that the protein profile of FF differs during follicular development and that the largest changes are observed from the dominance. Also probably some of these proteins, as well as their correlations, have great importance in the events that occur during folliculogenesis.

A albumina humana (AH) é um medicamento de ampla utilização e de custo elevado que integra o elenco de procedimentos especiais do Ministério da Saúde no Brasil. Em 2004, a ANVISA publicou uma resolução que estabelece diretrizes para o uso terapêutico deste medicamento. Apesar dos dados da literatura sugerirem conclusões não definitivas sobre os reais benefícios do uso de albumina no tratamento de pacientes com síndrome nefrótica (SN), a diretriz recomenda o uso nos casos de edemas refratários ao uso de diuréticos. O objetivo deste estudo foi avaliar através de análises econômicas a indicação clinica da diretriz para uso de Albumina Humana da ANVISA, em pacientes com Síndrome Nefrótica. A partir de uma coorte concorrente foram realizadas análises econômicas dos tipos custo-efetividade e custoutilidade. A população do estudo foi constituída por pacientes adultos e pediátricos internados com síndrome nefrótica em quatro grandes hospitais do SUS do Estado da Bahia. Os pacientes incluídos foram divididos em dois grupos comparativos conforme o seguimento ou não das orientações de uso de albumina humana da diretriz da ANVISA. A perspectiva da análise econômica foi sobre o provedor de atenção à saúde, o SUS. Os dados de qualidade de vida dos pacientes foram obtidos através de aplicação dos questionários genéricos SF36 e CHQ-PF50. O índice QALY (anos de vida ajustados à qualidade de vida) foi utilizado para a avaliação de custo-utilidade da comparação. Ao final do estudo foram selecionados 109 pacientes, com 60% de adultos, 56% do gênero feminino, mais de 90% de negros e pardos tendo 41,3% seguido as diretrizes da ANVISA. O custo médio global por internação (média de 22 dias) para o SUS foi de R$ 2.360/paciente. Os parâmetros de efetividade analisados, peso, diurese e balanço hídrico foram mais efetivos em termos de custo para os pacientes que seguiram a diretriz. A RCEI para dias de internação evitados evidenciou um custo adicional de R$55,33/dia evitado. A análise de qualidade de vida demonstrou que seguir a diretriz dominou o não seguimento propiciando um acréscimo de 8% de qualidade de vida e gerando uma economia de R$ 3.458,13 por QALY ganho. As análises de sensibilidade das RCEI e RCUI evidenciaram a robustez dos resultados, principalmente na variação do QALY, que mesmo após 60% de variabilidade garantiu economia para o sistema. Os resultados deste estudo forneceram informações sobre o uso de albumina humana em pacientes com síndrome nefrótica que podem juntamente com outros dados nortear as práticas de saúde no SUS do ponto de vista clinico e econômico. As análises econômicas indicaram que apresentam melhores relações de custo-efetividade e custo utilidade os tratamentos dos pacientes que seguiram as orientações da diretriz da ANVISA. / Human albumin (HA) is a drug widely used and of high cost that integrates the cast of special procedures of the Ministry of Health in Brazil. In 2004, ANVISA issued a resolution establishing guidelines for the therapeutic use of this drug. Although data from the literature suggest no definite conclusions about the real benefits of the use of albumin in the treatment of patients with nephrotic syndrome (NS), the guideline recommends the use in cases of edema refractory to diuretics. The aim of this study was to evaluate economic analyzes through the clinical indication of guideline for use of Human Albumin ANVISA, in patients with nephrotic syndrome. Economic analyzes of both cost-effectiveness and cost-utility types were performed from a concurrent cohort. The study population was composed of adult and pediatric patients hospitalized with nephrotic syndrome in four major public hospitals in the State of Bahia. The included patients were divided into two distinct groups according to whether ANVISA’s guidelines for use of human albumin were followed by them or not. The economic perspective of the analysis regarded the health care provider, the NHS. The quality of life data of the patients were obtained through application of generic questionnaires SF36 and CHQ - PF50. The QALY index (quality-adjusted life year) was used to assess cost-utility comparison. At the end of the study 109 patients were selected, consisting of 60% adults, 56 % females, over 80 % blacks and dark-skinned, where 41.3 % followed the guidelines of ANVISA. The overall average cost per hospitalization (22 days average) to the NHS was R$ 2.360/patient. The analyzed parameters, weight, urine volume, and fluid balance were more effective in terms of cost for patients who followed the guidelines. The ICER for days of hospitalization avoided showed an additional cost of R$55.33/avoided day. The quality of life analysis showed that the majority followed the guidelines providing an increase of 8 % for quality of life and generating savings of R$ 3,458.13 per QALY gained. Sensitivity analyzes of the ICER and ICUR showed the robustness of the results, especially the variation of the QALY, which even after 60% of variability guaranteed savings for the system. The results of this study provided information on the use of human albumin in patients with nephrotic syndrome that can, along with other data, guide health care practices in the NHS from both clinical and financial standpoints. The economic analyzes that show better the costeffectiveness and cost utility of treatment patients who followed the recommendations the guideline of ANVISA.

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Raphael Pires Bolzan.pdf: 255186 bytes, checksum: b4c5317a3c518a2e50145e1e51dd83ef (MD5) Previous issue date: 2010-08-30 / O Perfil Metabólico (PM) é utilizado de maneira confiável para avaliar o estado nutricional do animal, podendo ser usado para monitorar a adaptação metabólica, diagnosticar desequilíbrios da homeostase de nutrientes e revelar as causas da manifestação das doenças nutricionais, também conhecidas como doenças metabólicas. No Brasil, a utilização de cruzamentos de raças européias especializadas na produção de leite com raças zebuínas adaptadas às condições tropicais, contribui significativamente na produção leiteira do país. Entretanto, os estudos do PM de vacas leiteiras são direcionados principalmente para as raças puras, geralmente presentes em regiões de clima temperado e subtropical. Por meio da revisão bibliográfica, buscou-se descrever aspectos importantes sobre as condições particulares da produção leiteira nos trópicos, a importância dos marcadores bioquímicos utilizados na avaliação do PM, bem como os principais metabólitos utilizados para avaliar o PM protéico, e, com a pesquisa, aferir os valores e avaliar o comportamento dos marcadores bioquímicos protéicos em dois grupos genéticos de vacas primíparas holandês x gir, em dois períodos da lactação, no período da seca, nos trópicos. O experimento foi realizado no município de Passos MG. Utilizou-se dados coletados nos meses de maio e agosto de 2009, referente ao período da seca na região. O rebanho foi composto por 45 vacas ½ Holandesa x ½ Gir (½ HG) com produção leiteira média de 13,8 kg/vaca/dia e 39 vacas ¾ Holandesa x ¼ Gir (¾ HG) com produção leiteira média de 16,3 kg/vaca/dia, todas primíparas, com escore de condição corporal inicial entre 2,5 e 3,0 pontos, não variando mais que 0,5 pontos. Concentrou-se os estudos em dois períodos da lactação, de 28 a 60 dias (P1 da lactação) e de 110 a 130 dias (P2 da lactação). A dieta foi composta por ração total. Foram analisados os indicadores bioquímicos do perfil metabólico protéico por meio da quantificação da uréia, albumina, proteínas totais, hemoglobina e globulinas. Utilizou-se a estatística descritiva para obtenção de médias, desvio padrão e coeficiente de variação, analisados pelo t de Student, com nível de significância de 5%, para se estabelecer possíveis diferenças entre os períodos de lactação e os grupos genéticos. Houve diferença significativa (P<0,05) dos dias em lactação sobre os teores séricos de uréia e albumina para as primíparas ½ e ¾ HG, do P1 para o P2 da lactação. Para efeito do grau genético, não se observou diferença significativa (P>0,05) para a uréia, enquanto para a albumina, foi observado diferença significativa (P<0,05) apenas no P2 da lactação, podendo presumir a existência de possíveis diferenças na capacidade de recuperação dos teores séricos de albumina entre grupos genéticos. Em manejo onde a ingestão protéica não foi limitante, obteve-se intervalos de normalidade para animais cruzados ½ e ¾ HG mais restritos que os intervalos propostos pela literatura científica para a espécie bovina. Os teores séricos de uréia observados denotam ter havido subutilização de proteína da dieta no P1 da lactação

Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tatiana Fiorotti Rodrigues.pdf: 734442 bytes, checksum: 1e0f917c7e09642b3b468b433c78ea21 (MD5) Previous issue date: 2013-06-25 / The objective of this study was to evaluate the action of propolis in the feeding of ewes in pre and post-partum phases and the animal response by plasma concentrations of some blood metabolites. Four treatments were studied, using 16 animals divided in four groups. The treatmens were: Control treatment (TC), control diet; Flushing treatment (TF) control diet with flushing; Flushing Treatment with propolis level 1 (TFP1), control diet with flushing and 20 ml of alcoholic solution of propolis/animal/day and ; Treatment Flushing with level 2 of propolis (TFP2) diet control and flushing with 30 mL of alcoholic solution of propolis/animal/day. The animals were kept in stalls and fed over a period of 37 days, seven of the control diet adaptation and 30 days of blood sampling. Were fed twice a day at 7 AM y 16PM, samples were taken at three-day and one hour before the delivery of food and one and three hours after feeding. There were significant differences among treatments for albumin, which were within normal range, and for globulins, which values were below those considered normal. Aspartate transaminase enzyme presented a significant difference between the phases, before and after birth, but with normal values. Propolis extract did not affect urea and total proteins, however resulted in changes on albumin and globulin levels / Objetivou-se avaliar a ação da própolis na alimentação de ovelhas nas fases de pré e pós-parto e a resposta animal por meio de concentrações plasmáticas de alguns metabólitos sanguíneos. Foram estudados quatro tratamentos, usando-se 16 animais divididos em quatro grupos. Os tratamentos foram: Controle (TC), dieta controle; Tratamento Flushing (TF), dieta controle mais 300 g de fubá de milho; Tratamento Flushing com nível 1 de própolis (TFP1), dieta controle com flushing e 10 mL de solução alcoólica de própolis/animal/dia; Tratamento Flushing com nível 2 de própolis (TFP2), dieta controle com flushing e 15 mL de solução alcoólica de própolis/animal/dia. Os animais foram mantidos estabulados e alimentados em um período de 37 dias, sendo sete de adaptação à dieta controle e 30 dias de coletas de sangue. A alimentação foi feita duas vezes ao dia, às 7 e 16 horas. As coletas de sangue foram realizadas de três em três dias, sendo uma hora antes do fornecimento da alimentação e uma e três horas após a alimentação. Uréia e proteínas totais não apresentaram variações significativas em relação aos tratamentos. Houve diferença significativa entre os tratamentos para a albumina, dentro do intervalo de normalidade, e de globulinas, cujos valores estavam abaixo dos normais. A enzima Aspartato transaminase (AST) apresentou diferença significativa entre as fases de estudo, pré e pós-parto, contudo dentro do intervalo de normalidade. O extrato de própolis não afetou os valores de uréia e proteínas totais, entretanto, resultou em alterações nos níveis de albumina e globulinas

L'objectif de cette étude était d'optimiser d'abord la méthode de nanoprécipitation pour la préparation de nanoparticules à base de protéines. Des nanoparticules d'albumine sérique bovine ont été préparées et l'effet des paramètres expérimentaux de la méthode sur les propriétés colloïdales des particules a été évalué. Les conditions optimales conclues ont été utilisées pour préparer des nanoparticules d'albumine sérique humaine en tant que véhicules pour l'élastase neutrophile humaine (NE) et l'inhibiteur sécrétoire de la protéase leucocytaire (SLPI). L'effet des nanoparticules sur l'activité des deux molécules a été évalué. Et l'application de ces particules a été testée et discutée. Ce travail peut conduire à de nouveaux agents thérapeutiques potentiels pour le traitement des lésions pulmonaires et la destruction non-antibiotiques des bactéries / The objective of this study was to first optimize the nanoprecipitation method for the preparation of protein-based nanoparticles. Bovine serum albumin nanoparticles were prepared and the effect of the experimental parameters of the method on the colloidal properties of the particles were evaluated. The concluded optimal conditions were used to prepare human serum albumin nanoparticles as carriers for human neutrophil elastase (NE) and secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI). The effect of nanoparticles on the activity of both molecules was evaluated. And the application of this particles was tested and discussed. This work can lead to potential novel therapeutic agents for the treatment of lung injury and non-antibiotic bacteria killing

Submitted by ANA CAROLINA DE TOLEDO SANTANA null (actoledo@iq.unesp.br) on 2016-03-17T17:25:32Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Carol Final.pdf: 7825510 bytes, checksum: 921c29706ed56e5ef489712bae28fc30 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2016-03-21T20:10:04Z (GMT) No. of bitstreams: 1 santana_act_me_iq_par.pdf: 4512361 bytes, checksum: 07a7dc911b2bdd27db8608948a16848b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-21T20:10:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 santana_act_me_iq_par.pdf: 4512361 bytes, checksum: 07a7dc911b2bdd27db8608948a16848b (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O presente trabalho teve como principal objetivo estudar a atividade catalítica de soroalbumina bovina (BSA) em reações formadoras de uma nova ligação C-C: Reações aldólica, de Henry e Morita-Baylis-Hillman (MBH). Em todos os casos a BSA atuou como catalisador, visto que quando as reações foram realizadas sem sua presença, não houve formação dos produtos desejados. Os rendimentos obtidos para as reações aldólica (37%), Henry (80%) e MBH (73%), variaram de bons a moderados e não foi observada enantiosseletividade para nenhuma das reações estudadas. As soroalbuminas são proteínas que formam muita emulsão dificultando os processos downstream na separação dos produtos e materiais de partida. Visando minimizar este inconveniente, a BSA foi submetida à imobilização em MCLEA (magnetic cross-linking enzyme aggregates) utilizando nanopartículas magnéticas de óxido de ferro. Nestes casos, o biocatalisador pôde ser facilmente retirado do meio reacional com aplicação de um campo magnético externo. Esta metodologia afetou diretamente no rendimento da reação de Henry, passando de 80% para 89%. Porém, para as outras reações a melhoria no rendimento não foi tão expressiva. A imobilização também não foi eficaz para o aumento dos excessos enantioméricos. Até o momento para a reação de MBH com os substratos utilizados, não há relatos na literatura para a síntese do aduto desejado catalisado pela BSA. Sendo assim, optamos por realizar um planejamento fatorial completo dessa reação visando otimizar as condições reacionais bem como os rendimentos. As variáveis estudadas foram: temperatura, concentração do biocatalisador e condição do biocatalisador (livre ou imobilizado). Os resultados obtidos mostraram que a variável com maior influência na reação, é a concentração do biocatalisador. A conversão obtida passou de 30% para 40% utilizando 2,2 μmol de BSA. Em seguida, realizamos um estudo de ascendência da concentração do catalisador visando otimizar este parâmetro. A conversão obtida passou para 73% quando foram utilizadas 3,7 μmol de biocatalisador imobilizado. Realizamos um estudo de reciclagem do biocatalisador imobilizado. Foi possível reutiliza-lo porém com diminuição da conversão a partir do segundo ciclo. Os resultados obtidos nesta dissertação evidenciam o potencial biocatalítico da BSA em reações para a formação de ligação C-C. / This work aimed to study the catalytic activity of bovine serum albumin (BSA) in reactions that form a new C-C bond: aldol reactions, Henry and Morita-Baylis-Hillman (MBH). In all cases BSA served as the catalyst, whereas when the reactions were carried out without their presence there was no formation of the desired products. The yields obtained for aldol reactions (37%), Henry (80%) and MBH (73%), ranged from good to moderate enantioselectivity and was not observed for any of the studied reactions. The serum albumins are proteins that form the much emulsion difficulting downstream processes in separation of the products and starting materials. To minimize this inconvenience, the BSA was subjected to immobilization in M-CLEA (magnetic cross-linking enzyme aggregates) using magnetic nanoparticles of iron oxide. In these cases the biocatalyst could be easily removed from the reaction medium by applying an external magnetic field. This methodology directly affect the yield of the Henry reaction, from 80% to 89%. However, for other reactions the improvement of yields was less pronounced. The immobilization was also not effective for improving the enantiomeric excess. So far for the MBH reaction with the worked substrates, there are no reports in the literature for the synthesis of the desired adduct catalyzed by BSA. So we decided to study a full factorial design of this reaction to optimize the reaction conditions and yields. The variables studied were: temperature, the biocatalyst concentration and biocatalyst conditions (free and immobilized). The concentration of biocatalyst was the major factor with interference in all reactions. The conversion increased from 30% to 40% using 2.2 μmol of BSA. Then we perform a study of catalyst concentration to optimize this parameter. The conversion increased to 73% when they were used 3.7 μmol immobilized biocatalyst. To evaluate the retention of catalytic activity of BSA immobilized, it was performed a study of the immobilized biocatalyst recycling. It was possible the reuse but with reduced conversion from the second cycle. The results obtained in this work demonstrated the potential of BSA in C-C bond formation reactions.