Submitted by Rosivalda Pereira (mrs.pereira@ufma.br) on 2017-05-05T20:04:11Z No. of bitstreams: 1 ThaysSilvaBaldez.pdf: 2095828 bytes, checksum: 9de3dacfb0850842d669bc07ee7407eb (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-05T20:04:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThaysSilvaBaldez.pdf: 2095828 bytes, checksum: 9de3dacfb0850842d669bc07ee7407eb (MD5) Previous issue date: 2016-07-06 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Amino acids complex of transition metals has increasingly attracted the interest of researchers due to their wide range of physical properties for understanding metal-amino acid interactions. In this work [Bis(L-Alaninato)Diaqua] Nickel(II) Dihydrate [Ni(C3H6O2N)2(H2O)2.2H2O] crystals were obtained by slow evaporation method using 0,1 mol/L of NiCl2.6H2O, 0,2 mol/L of L-alanine and NaOH. Rietveld refinement of X-ray data confirmed the structure. The structural properties of these crystals were studied by X-ray diffraction (XRD) in the temperature range from 25 to 150 °C. Thermal analysis experiments were performed by TG/DTA between 25 and 500 °C, and by DSC between 25 and 250 °C. The results obtained by TG/DTA indicate the loss of water molecules by [Bis(L-Alaninato)Diaqua] Nickel(II) Dihydrate crystals at temperatures of 64 and 117 °C, which was also confirmed by the results obtained by DSC. The X-ray diffraction pattern show new peaks, in temperatures around 55 and 110 ° C, indicating to loss of water by crystals. The transformation is irreversible because the diffraction pattern obtained after the sample return to the room temperature differs from that obtained before heating of the sample. The vibrational properties were analyzed by Raman spectroscopy between 25 and 185 °C. The Raman spectroscopy measurements as a function of the temperature show the loss of water molecules. The spectra at high temperatures resemble the spectrum at room temperature, showing that the crystal undergoes phase transformation, but probably do not change the crystal symmetry. / Aminoácidos complexados com metais de transição têm atraído cada vez mais o interesse de pesquisadores devido à grande variedade de propriedades físicas que eles apresentam para o entendimento das interações metal-aminoácido. Neste trabalho, cristais de Bis(L-alaninato) de Níquel (II) di-hidratado [Ni(C3H6O2N)2(H2O)2.2H2O] foram obtidos por meio da evaporação lenta do solvente de uma solução saturada contendo 0,1 mol/L de NiCl2.6H2O, 0,2 mol/L de L-alanina e NaOH. Após a obtenção da amostra, a confirmação da estrutura deu-se por refinamento de Rietveld. As propriedades estruturais desses cristais foram estudadas por medidas de difração de raios-X em função da temperatura na faixa de 25 a 150 °C. Experimentos de análise térmica foram realizados por TG/DTA entre 25 e 500 °C e por DSC entre 25 e 250 °C. Os resultados obtidos por TG/DTA evidenciam a saída das moléculas de água do cristal de Bis(L-alaninato) de Níquel (II) di-hidratado nas temperaturas de 64,51 e 117,25 °C, que também foi confirmada pelos resultados obtidos por DSC. O padrão de difração de raios-X mostrou desaparecimento e o surgimento de novos picos no difratograma, para temperaturas próximas a 55 °C e 110 °C, indicando a saída de água do cristal. Essa transformação é irreversível, pois o padrão de difração obtido após a amostra retornar à temperatura ambiente difere significativamente daquele obtido antes do aquecimento. As propriedades vibracionais foram analisadas por Espectroscopia Raman entre 25 e 185 °C. As medidas dos espectros Raman em função da temperatura evidenciam a saída das moléculas de água. O espectro à alta temperatura se assemelha ao espectro à temperatura ambiente, mostrando que o cristal sofre transformação de fase, mas provavelmente permanece com a mesma simetria cristalina.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / In this study we investigated the interaction between lead and the amino acid cysteine, lysine and N-acetylcysteine by testing long-term contact with ion exchanger resins and also the determination of stability constants. The importance of investigating the presence of lead in solutions for parenteral nutrition is related to the risk of internal contamination of these solutions due to the affinity between amino acids that compose these solutions and lead present in plastic packaging. The amino acids according to their relative affinities can act as carriers of metal in living organisms. The long term tests with adsorbents in form of Pb2+ showed that the higher extraction of lead occurs at amino acid that has a greater affinity for the metal and this is evidenced by the value of stability constant calculated, i.e., there was a direct relationship of the values of the calculated stability constants. Kinetic effects were not significant in this study, since the trials were of long duration. Tests with complexing agents such as EDTA and citric acid, that have known stability constants, were also performed for comparison purposes. The quantification of lead in long term tests was performed by atomic absorption spectrometry with flame and electrothermal atomization. The stability constants were obtained by potentiometry by processing the data through the software BEST®. Titrations in aqueous solutions with constant ionic strength and temperature showed that the predominant species in solution have molar ratio of 1:1 (L: M) to N-acetyl-cysteine and lysine and 1:1 and 2:1 for cysteine. The main species found for cysteine were Cys2Pb and CysPbOH with log K = 1.61 and 24.00, respectively, for N-acetylcysteine N-Acetyl-Cys2Pb, N-Acetyl-Cys2PbH and N-Acetyl-CysPbOH with log K =-1.55, 14.52 and 21.49 respectively, and for lysine LysPb with log K = 9.69. The interaction of amino acids studied with lead was also detected by the tests made with the raw material of the packaging of parenteral nutrition solutions through the analysis by AAS. / Neste trabalho investigou-se a interação entre chumbo e os aminoácidos cisteína, N-acetilcisteína e lisina por meio de ensaios de contato de longa duração com resina de troca iônica e estudos para determinar as constantes de estabilidade dos complexos formados entre eles. A importância de investigar a presença de chumbo em soluções de nutrição parenteral relaciona-se ao risco de contaminação interna destas soluções em decorrência da afinidade entre os aminoácidos que compõem as soluções e o chumbo presente nas embalagens plásticas. Os aminoácidos em função de suas afinidades relativas podem atuar como transportadores do metal nos organismos vivos. Os resultados dos ensaios de contato com resina na forma Pb2+ mostraram que a maior extração do chumbo ocorre pelo aminoácido que possui maior afinidade pelo metal e isto é comprovado pelo valor da constante de estabilidade calculada, ou seja, houve relação direta dos valores das constantes obtidas através do cálculo das mesmas para os aminoácidos estudados com a taxa de extração do chumbo da resina pelos ligantes (aminoácidos). O efeito cinético, estabelecido pelas leis de velocidades não importaram nesse estudo, uma vez que os ensaios foram de longa duração. Ensaios com agentes complexantes, como EDTA e ácido cítrico, com constantes de estabilidade já conhecidas, também foram realizados para fins comparativos. A quantificação de chumbo nos ensaios de longa duração foi realizada por espectrometria de absorção atômica (AAS) com atomizações por chama e eletrotérmica. As constantes de estabilidade foram obtidas por potenciometria com o tratamento dos dados através do programa computacional BEST®. Titulações potenciométricas, de soluções aquosas com força iônica e temperatura constantes, mostraram que as espécies predominantes em solução são de razão molar 1:1 (L:M) para N-acetilcisteína e lisina e de 1:1 e 2:1 para cisteína. As principais espécies encontradas foram para cisteína, Cys2Pb e CysPbOH com log K = 1,61 e 24,00 respectivamente, para N-acetilcisteína N-Acetil-Cys2Pb, N-Acetil-Cys2PbH e N-Acetil-CysPbOH, com log K = -1,55; 14,52 e 21,49 respectivamente, e para lisina LysPb, com log K = 9,69. A interação dos aminoácidos estudados com o chumbo também foi constatada pelos ensaios feitos com a matéria-prima das embalagens das soluções de Nutrição Parenteral através da análise por AAS.

Made available in DSpace on 2015-03-26T14:02:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 282982 bytes, checksum: 02ab6e3afc4b760df02b71b3ecefbab5 (MD5) Previous issue date: 2009-05-29 / Pasture is the main source of cattle feed, but it is not capable of supplying the animal nutritional requirements completely. Therefore, an adequate management is necessary to improve productivity and reduce costs related to long term production. The search for technology to increase animal performance may be a feasible alternative to reduce costs with cattle nutrition. Fiber digesting ruminal bacteria utilize ammonia as their main source of nitrogen. Also, they have specific requirements for amino acids and an optimum growth when ruminal pH is around 6.2 to 6.8. For that, maximization of fiber fermentation is essential to increase ruminant production on pasture. Results of several experiments have shown that the supplementation of branched-chain amino acids (BCAA) increases feed intake, celluloses digestion, ruminal microbial growth, and daily gain for growing beef cattle. In this revision, studies show raise in milk production and daily gain in ruminants fed with forage based diets with the combination of some or all BCAA. In addition, this work makes possible to conclude that the supplementation with BCAA in association with rumen undegradable protein sources can increase animal production through the maximization of metabolizable protein. / O pasto constitui a principal fonte de alimentos dos bovinos, mas não é capaz de suprir todas as exigências nutricionais dos animais. Portanto, um manejo adequado é necessário para melhorar a produtividade e reduzir os custos associados à produção em longo prazo. A busca por tecnologias para o aumento do desempenho destes animais pode ser uma alternativa viável para reduzir os custos com alimentação do rebanho. Bactérias que fermentam carboidratos fibrosos (CF) utilizam a amônia como principal fonte de nitrogênio, possuem requerimentos específicos para aminoácidos e possuem um crescimento ótimo quando o pH ruminal está ao redor de 6,2 a 6,8. A maximização da fermentação de fibra é essencial para se aumentar a produção de ruminantes a pasto. Os resultados de vários experimentos têm mostrado que a adição de aminoácidos essenciais de cadeia ramificada aumenta a ingestão alimentar, a digestão da celulose, o crescimento dos microrganismos ruminais e o ganho de peso para animais em crescimento. Nesta revisão bibliográfica, os estudos mostram o aumento na produção de leite e no ganho de peso com a combinação de alguns, ou de todos os ácidos graxos voláteis de cadeia ramificada (AGVR) na dieta de ruminantes, compostas basicamente por volumosos. Além disso, através deste trabalho, conclui-se que é possível proporcionar um incremento na produção animal através da maximização da proteína metabolizável, associando AGVR a fontes de proteína não degradáveis no rúmen.

Femtosecond laser inscribed waveguides inside the bulk of materials have shown great relevance for the development of photonic optical circuits. Due to high intensity, long interaction length and strong light confinement, nonlinear optical effects are significant to pulse propagation within the waveguide. Therefore, it is important to search for new and better platforms to host photonic devices, as well as, to analyze its linear and nonlinear optical properties. In this dissertation, we have studied the inscription of nonlinear waveguides in Gorilla Glass (strengthened alkali aluminosilicate glass) and in L-threonine organic crystals. Initially, we studied the nonlinear refractive index of Gorilla Glass, demonstrating that it presents an approximately constant value of n2 = (3.3 ± 0.6) × 10-20 m2/W over the spectral region from 490 nm up to 1.5 µm. Single-mode waveguides written in Gorilla Glass presents propagation losses on the order of (0.35 ± 0.01) dB/mm, which is comparable to other waveguides inscribed in silicate glasses. In the nonlinear regime, the guided pulse presented spectral broadening, compatible with the measured n2 value, and white-light continuum generation. The generation of new frequencies is due to self-phase modulation and stimulated Raman scattering effects, both associated with third-order nonlinearities of Gorilla Glass. In a second part, we inscribed cladding waveguides in L-threonine organic crystal, in order to explore its second-order nonlinearities. After their linear characterization, that revealed propagation losses of (0.5 ± 0.1) dB/mm, we obtained guided second harmonic generation in the ultraviolet region. The written waveguide presented a normalized power conversion efficiency of (10.3 ± 0.4) % (MW cm2)-1 and approximately four times higher normalized intensity conversion efficiency than the crystal itself. Such enhancement effect was attributed to the influence of the waveguide dispersion in the phase-matching condition necessary for second harmonic generation. In general, the results presented here expand the knowledge on femtosecond laser writing of waveguide in organic and inorganic materials, and their nonlinear properties, which are relevant for developing photonic devices. / Guias de ondas fabricados com pulsos de femtossegundos no volume de materiais são de grande importância para o desenvolvimento de circuitos fotônicos. Devido as altas intensidades, longos comprimentos de interação e forte confinamento, efeitos ópticos não lineares são significativos durante a propagação de pulsos laser em guias de onda. Portanto, é importante buscar novas e melhores plataformas para construir os dispositivos fotônicos, bem como analisar suas propriedades ópticas lineares e não lineares de guiamento. Nesta tese, estudamos a fabricação de guias de onda não lineares em Gorilla Glass (vidro aluminossilicato alcalino) e no cristal orgânico de L-treonina. Inicialmente, estudamos o índice de refração não linear do Gorilla Glass, demonstrando que este apresenta um valor aproximadamente constante, n2 = (3.3 ± 0.6) × 10-20 m2/W, no intervalo espectral de 490 nm até 1,5 µm. Os guias monomodo produzidos no Gorilla Glassapresentaram perdas de transmissão da ordem de (0,35 ± 0,01) dB/mm, as quais são comparáveis às de outros guias em vidros silicatos já reportados. No regime não linear, o pulso guiado apresentou alargamento espectral compatível com o valor determinado para n2, e geração de luz branca. A geração de novas frequências observada se deve aos fenômenos de auto modulação de fase e espalhamento Raman estimulado, ambos associados à não linearidade de terceira ordem do Gorilla Glass. Numa segunda etapa, fabricamos guias de onda do tipo casca em cristais orgânicos de L-treonina, afim de explorar sua não linearidade de segunda ordem. Após sua caracterização linear, onde medimos uma perda de guiamento de (0,5 ± 0,1) dB/mm, fomos capazes de obter geração de segundo harmônico guiada, na região do ultravioleta. O guia fabricado apresentou uma eficiência normalizada de conversão de potência de (10.3 ± 0,4) % (MW cm2)-1 e eficiência normalizada de conversão de intensidade aproximadamente quatro vezes maior do que a do cristal em si. Tal aumento foi atribuído à influência da dispersão do guia no casamento de fase, necessário para geração de segundo harmônico. De maneira geral, os resultados apresentados aqui expandem o conhecimento de fabricação de guias de onda com laser de femtossegundos em materiais inorgânicos e orgânicos, bem como de suas propriedades não lineares relevantes para produção de dispositivos.

A leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa caracterizada citogeneticamente pela presença do cromossomo Philadelfia (Ph) e molecularmente pelo neogene bcr-abl1 que codifica a oncoproteína BCR-ABL com alta atividade de tirosina-quinase. A célula leucêmica BCR-ABL+ apresenta baixa adesão ao estroma medular, resistência à apoptose e potencial mitogênico exacerbado. A LMC possui curso evolutivo trifásico (fase crônica, acelerada e blástica) e seu tratamento pode ser realizado por meio de diferentes modalidades terapêuticas, destacando-se o mesilato de imatinibe (MI) que inibe a TK BCR-ABL induzindo altas taxas de remissão citogenética dos pacientes na fase crônica da doença. Apesar do MI ser eficiente, os pacientes na fase acelerada e blástica da doença são comumente refratários a essa terapia e na fase crônica há casos de resistência ao MI descritos. Nesse contexto, potenciais novos fármacos são investigados para melhorar a eficiência da terapia da LMC. Nesse estudo, investigamos o efeito do veneno bruto (VB) e da enzima L-amino-ácido-oxidase (LAAO) da Bothrops pirajai em desencadear apoptose em células BCR-ABL+. A apoptose das células HL-60 e HL-60.BCR-ABL foi quantificada pela detecção da percentagem de células com núcleos hipodiplóides pela da citometria de fluxo e confirmada pela observação da ativação das caspases 3, 8 e 9 por western-blot. Os resultados obtidos indicam que a LAAO é capaz de induzir apoptose em células HL-60 e HL-60.BCR-ABL por ativação das vias extrínseca e intrínseca. Além disso, foi verificado que a LAAO diminui a fosforilação de BCR-ABL em células HL-60.BCR-ABL e quando associada ao MI potencializou a inibição da atividade quinase de BCR-ABL. Os dados da presente investigação indicaram ainda que a LAAO é capaz de modular a expressão de bad, bak, bax, bid, bimel, fas,fasl, a1, bcl-2, bcl-xl, bcl-w e c-flip, genes reguladores da apoptose celular. Apesar do pouco conhecimento acerca do mecanismo de ação dessa toxina, os dados obtidos sugerem que a LAAO possui o potencial de estimular a apoptose nas linhagens HL-60 e HL-60.BCR-ABL e aumentar o efeito do inibidor da atividade quinase, MI, dados relevantes para estudos futuros associados a descrição de novos fármacos contra leucemia mielóide crônica. / Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative disorder cytogenetically characterized by the presence of Philadelphia chromosome (Ph) and molecularly by bcr-abl1 neogene that encodes the BCR-ABL oncoprotein with high tyrosine kinase (TK) activity. The leukemic cell BCR-ABL+ presents poor adhesion to bone marrow stroma, resistance to apoptosis and exacerbated mitogenic potential. The CML has a three-phase course (chronic, accelerated and blastic phase) and its treatment can be performed by different therapeutic modalities, especially the imatinib mesylate (IM) that inhibits the TK BCR-ABL inducing high rates of cytogenetic remission in chronic phase. Although MI is effective, patients in accelerated and blastic phases of the disease are often refractory to this therapy and there are also cases of resistance to MI described in chronic phase. In this context, potential new drugs are investigated to improve the efficiency of the therapy of CML. In this study, we investigated the effect of crude venom (CV) and of the enzyme L-amino acid oxidase (LAAO) from Bothrops pirajai in triggering apoptosis in BCR-ABL+. The apoptosis of HL-60 cells and HL-60. BCR-ABL was quantified by detecting the percentage of cells with hypodiploid nuclei by flow cytometry and confirmed by observation of the activation of caspases 3, 8 and 9 by Western blot. The results indicate that LAAO is able to induce apoptosis in HL-60 cells and HL-60. BCR-ABL by activation of the extrinsic and intrinsic pathways. Furthermore, it was found that LAAO decreases phosphorylation of BCR-ABL in HL-60 cells. BCR-ABL when associated with MI potencialized the inhibition of kinase activity of BCR-ABL. The data from this study also indicated that the LAAO is able to modulate the expression of bad, bak, bax, bid, bimel, fas, FasL, A1, bcl-2, bcl-xl, bcl-w and c-flip, regulatory genes of apoptosis. Even though there is little knowledge about the mechanism of action of this toxin, the data obtained suggests that LAAO has the potential to stimulate apoptosis in HL-60 lines and HL-60. BCR-ABL and increase the effect of the inhibitor of protein kinase activity, MI, relevant data for future studies associated with the description of new drugs against chronic myeloid leukemia.

As L-aminoácido oxidases (LAAOs) isoladas de peçonhas de serpentes são alvos de um grande número de pesquisas devido às suas inúmeras ações biológicas e farmacológicas. O objetivo do presente trabalho foi caracterizar funcionalmente a Laminoácido oxidase da peçonha de Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) por meio das atividades: bactericida, fungicida, leishmanicida, tripanomicida, citotóxica, inflamatória e análise da expressão de genes e proteínas apoptóticas. A CR-LAAO mostrou-se altamente citotóxica sobre as células tumorais HepG2 e HL-60, promovendo cerca de 80% de morte celular na maior concentração testada (100 ?g/mL) e apresentou baixa toxicidade sobre células PBMC. Foi possível observar que a proteína induziu apoptose (AV+) em PBMC. Em HepG2, as menores concentrações (0,1-2,5 ?g/mL) causaram apoptose (AV+), e as maiores (5-100 ?g/mL) causaram apoptose/necrose (PI+/AV+). Em HL-60, as concentrações testadas (0,1-100 ?g/mL) induziram apoptose/necrose (PI+/AV+). A expressão do gene FAS e ativação das caspases 8 e 3 determinou a ativação da via extrínseca da apoptose na linhagem HL-60. A CR-LAAO promoveu algumas alterações na modulação do ciclo celular, sendo que nas linhagens tumorais os atrasos se concentraram nas fases G0/G1 e S do ciclo celular. Ademais, a CR-LAAO mostrouse bactericida contra as cepas S. aureus e E. coli, com maior especificidade para a cepa gram-positiva (S. aureus). Em análises de microscopia de transmissão, foi possível observar um desmantelamento da parede celular bacteriana. Após 6h de pré-incubação com C. albicans, a CR-LAAO foi capaz de inibir 80% do crescimento da levedura. A CR-LAAO mostrou-se também um bom agente leishmanicida contra as espécies L. infantum chagasi (IC50=16,66 ?g/mL) e L. braziliensis (IC50=24,47 ?g/mL) e inibiu o crescimento da forma promastigota do Trypanosoma cruzi (IC50=196,8 ?g/mL). Testes in vivo revelaram que a CR-LAAO promoveu inflamação local aguda, recrutando células inflamatórias como neutrófilos e induzindo a formação de citocinas (IL-6 e IL-1?) e mediadores lipídicos (LTB4 e PGE2). Os resultados obtidos sugerem que a CR-LAAO apresenta potencial biotecnológico evidente, com efeitos antiparasitários, fungicida, bactericida, bem como atividade antitumoral in vitro. Dessa forma, os resultados obtidos para a CR-LAAO fornecem subsídios importantes para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas de ação direcionada, como quimioterápicos e antimicrobianos mais eficazes. / L-amino acid oxidases (LAAOs) isolated from snake venoms are targets of a large number of researches due to their numerous biological and pharmacological actions. The objective of this study was to functionally characterize the L-amino acid oxidase from the venom of Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) through the activities: bactericidal, fungicidal, leishmanicidal, trypanocidal, cytotoxic, inflammatory and analysis of gene expression and apoptotic proteins. CR-LAAO showed high cytotoxicity in HepG2 and HL-60 tumor cells, inducing about 80% cell death at the highest concentration tested (100 ?g/mL) and showing low toxicity in PBMC cells. It was observed that the protein induced apoptosis (AV+) in PBMC. In HepG2, lower concentrations (0.1-2.5 ?g/mL) caused apoptosis (AV+), while major concentrations (5-100 ?g/mL) caused apoptosis/necrosis (PI+/AV+). In HL-60, the concentrations tested (0.1-100 ?g/mL) induced apoptosis/necrosis (PI+/AV+). The FAS gene expression and activation of caspases 8 and 3 determined the activation of the extrinsic pathway of apoptosis in HL-60 cells. CR- LAAO promoted some changes in the modulation of the cell cycle, and delays in tumor cell lines were concentrated in G0/G1 and S cell cycle phases. In addition, CR-LAAO proved to be bactericidal against S. aureus and E. coli strains, with higher specificity for Gram-positive strains (S. aureus). In analyses of transmission electron microscopy, it was possible to observe a dismantling of the bacterial cell wall. After 6 hours of preincubation with C. albicans, CR-LAAO was able to inhibit 80% of growth of yeast. CR-LAAO also showed antiparasite potential against species L. chagasi infantum (IC50 = 16.66 ?g/mL) and L. braziliensis (IC50 = 24.47 ?g/mL) and inhibited the growth of Trypanosoma cruzi promastigote form (IC50 = 196.8 ?g/mL). In vivo tests revealed that CR-LAAO promotes acute local inflammation by recruiting inflammatory cells as neutrophils and by inducing the production of cytokines (IL-6 and IL-1?) and lipid mediators (PGE2 and LTB4). The results suggest that CR-LAAO presents evident biotechnological potential, with antiparasite, fungicidal, bactericidal and antitumor effects in vitro. Thus, the results obtained for CR-LAAO provide important information for the development of therapeutic strategies with directed action, such as more effective chemotherapeutic and antimicrobial agents.

A leucemia mielóide crônica (LMC) é uma doença mieloproliferativa clonal caracterizada pela presença do cromossomo Philadelphia e o oncogene BCR-ABL1. Este oncogene codifica a oncoproteína Bcr-Abl com atividade tirosina-quinase constitutiva. A proteína Bcr-Abl é responsável pela resistência das células leucêmicas a apoptose. Atualmente, os pacientes com LMC são tratados com os inibidores de tirosina-quinase - mesilato de imatinibe, dasatinibe e nilotinibe. Apesar de o tratamento ser eficiente, pacientes em fases avançadas e mesmo na fase crônica da doença, apresentam resistência à terapia. Desta forma, novos fármacos devem ser investigados para melhorar o tratamento da LMC. As L-aminoácido oxidases (LAAOs) têm sido descritas como substâncias citotóxicas e indutoras de apoptose. Assim, o principal objetivo do presente estudo foi investigar o potencial antitumoral da LAAO isolada da serpente Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) nas células Bcr-Abl positivas. Avaliou-se a citotoxicidade da CR-LAAO nas linhagens HL-60 (linhagem Bcr-Abl negativa), HL-60.Bcr-Abl, K562 e KCL22 (linhagens Bcr-Abl positivas) e nas células mononucleares (MNC) de sangue periférico de indivíduos saudáveis, na presença ou ausência da catalase. Para investigar os mecanismos da ação citotóxica da CR-LAAO, realizou-se os ensaios de indução de apoptose por meio da quantificação das percentagens de núcleos hipodiplóides e anexina V-FITC, nas linhagens celulares e nas células MNC de indivíduos saudáveis e pacientes com LMC. Avaliou-se também os níveis de expressão das caspases 3, 8 e 9, o potencial de membrana mitocondrial, danos no DNA e o efeito apoptótico da toxina combinada com os inibidores de tirosina-quinase nas linhagens Bcr-Abl positivas. Além disso, investigamos se a CR-LAAO foi capaz de modular a expressão dos apoptomiRs miR-15a, miR-16, miR-145, miR-26a, hsa-let-7d, miR-142-3p, miR-29c, miR-146a, miR-21, miR-130a e miR-130b, assim como das proteínas pro- e anti-apoptóticas Bak, Bax, Bid, Bim, A1, Bcl-2, c-Flip, Ciap-2 e Mcl-1 nas linhagens Bcr-Abl positivas. Nossos resultados mostraram que o efeito citotóxico da CR-LAAO foi mais potente nas linhagens Bcr-Abl positivas em relação às células MNC de indivíduos saudáveis, e está associado ao peróxido de hidrogênio produzido durante a reação enzimática da CR-LAAO. Demonstrou-se também que a CR-LAAO induziu apoptose nas linhagens Bcr-Abl postivas testadas e nas células MNC de pacientes com LMC na fase crônica da doença. Em todas as linhagens celulares detectou-se danos no DNA, perda do potencial de membrana e ativação das caspases 3, 8 e 9. A percentagem de apoptose aumentou quando as células HL-60.Bcr-Abl foram tratadas com a CR-LAAO combinada com os inibidores de tirosina-quinase. A CR-LAAO modulou a expressão dos apoptomiRs miR-15a, miR-16, miR-145, miR-26a, hsa-let-7d, miR-142-3p, miR-29c, miR-21, miR-130a e miR-130b e de possíveis proteínas alvos nas linhagens Bcr-Abl positivas. Sendo assim, os resultados obtidos sugerem que a CR-LAAO apresenta uma ação antitumoral capaz de destruir as células leucêmicas / Chronic myeloid leukemia (CML) is a clonal myeloproliferative disease characterized by the presence of Philadelphia chromosome and BCR-ABL1 oncogene. This oncogene encodes the Bcr-Abl tyrosine kinase (TK) which presents a constitutive activity. The Bcr-Abl is responsible for leukemic cells resistance to apoptosis. The CML patients are currently treated with tyrosine kinase inhibitors (TKI) - imatinib mesylate, dasatinib and nilotinib. Although TKI are efficient for CML treatment, patients in advanced phases and even in chronic phase of the disease present resistance to therapy. Thus, potential new drugs must be investigated to improve the CML treatment. The L-amino acid oxidases (LAAOs) have been described as cytotoxic and apoptosis-inducing substances. Here, we investigated the LAAO from Calloselasma rhodostoma (CR-LAAO) antitumoral potential against Bcr-Abl positive cells. We evaluated the CR-LAAO cytotoxic effect against HL-60 (Bcr-Abl negative cell line), HL-60.Bcr-Abl, K562, KCL22 (Bcr-Abl positive cell lines) and the peripheral blood mononuclear cells (PBMC) from healthy subjects, in the presence or absence of catalase. To investigate the mechanisms underlying the CR-LAAO cytotoxic action, we performed the apoptosis induction assays through the hypodiploid nuclei and annexin-V quantification in the cell lines and PBMC from healthy subjects and CML patients. We also evaluated the levels of caspases 3, 8 and 9 expression, the mitochondrial membrane potential, DNA damage and the apoptotic effect of CR-LAAO combined with TKI on Bcr-Abl positive cells. In addition we investigated if CR-LAAO was capable of modulating the apoptomiRs miR-15a, miR-16, miR-29c, hsa-let-7d, miR-145, miR-146a, miR-21, miR-130a, miR-130b, miR-142-3p and miR-26a, the pro- and anti-apoptotic proteins (Bak, Bax, Bid, Bim, A1, Bcl-2, c-Flip, Ciap-2 and Mcl-1 expression in HL-60, HL-60.Bcr-Abl, K562 and KCL22 cells. Our results showed that the CR-LAAO cytotoxic effect was more potent in Bcr-Abl positive cell lines than in PBMC from healthy subjects and it is linked to hydrogen peroxide produced during the enzymatic action of CR-LAAO. It was also demonstrated that CR-LAAO was capable of inducing apoptosis in Bcr-Abl positive cell lines and CML patient\'s cells in chronic phase of the disease. In all tested cell lines, the loss of mitochondrial membrane potential, DNA damage and caspases 3, 8 and 9 activation were detected. The apoptosis percentage was improved when HL-60.Bcr-Abl cells were treated with CR-LAAO combined with TKI. The CR-LAAO modulated the apoptomiRs miR-15a, miR-16, miR-145, miR-26a, hsa-let-7d, miR-142-3p, miR-29c, miR-21, miR-130a and miR-130b expression as well the predict target proteins levels on Bcr-Abl positive cells. Thus, our results suggest that CR-LAAO presents an antitumoral action capable of destroying the CML cells.

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:47:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thais_Lorana_Savoldi.pdf: 1377046 bytes, checksum: ce52257de202a1ec71a096f32d36ad42 (MD5) Previous issue date: 2012-10-15 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Two experiments were conducted to evaluate the effects of levels of metabolizable energy (ME) and digestible lysine (LD) in the pre-starter diet on broiler chicks 1-10 days and 8-21 days, about the characteristics of performance and morphometry of the intestinal mucosa of broiler chicks. In the first experiment, the objective was to evaluate the effect of levels of metabolizable energy (ME) and digestible lysine (LD), on the performance of broiler chicks 1-10 days old and intestinal morphometric characteristics. We used 1152 broiler chicks, with an average weight of 55g, distributed in a completely randomized in a 4x4 factorial, four levels of ME (2700, 2825, 2950, and 3075 kcal.kg-1) and four levels of LD (1.080, 1.187 , 1.295 and 1.403%), resulting in 16 treatments with three replications and 24 birds each. The levels of lysine and metabolizable energy acted independently in the performance of broiler chicks in the pre-start, where the energy levels exerted a linear increase (P <0.05) in final weight and weight gain, and effect quadratic (P <0.05) on feed intake and feed conversion. The levels of lysine quadratic effect (P <0.05) on the final weight, weight gain and feed conversion, and increased linearly (P <0.05) on feed intake exerted a quadratic effect. In the variable rate of deposition of protein (TDP) and fat (TDG) was not significantly influenced, however, TDG were affected linearly by increasing levels of lysine. Significant effect between levels of MS and LD on the morphometry of the intestinal mucosa (P <0.05) on the villus height of duodenum, jejunum and villous: crypt ileum. It was observed that for the pre-initial chicks level of digestible lysine for greater weight gain is 1.271% and feed conversion, 1.221%, and the level of metabolizable energy for gain weight and feed conversion is 3075 kcal.kg-1. We observed that the levels of 3075 kcal.kg-1 of 1.403% and LD yielded improved performance and morphology of the intestinal mucosa in birds in the pre-start. In the second experiment the objective was to evaluate the effect of levels of energy and digestible lysine on performance of broiler chicks 8-21 days old (early stage) and morphometry of the intestinal mucosa. We used 864 broiler chicks, with 8 days of age, with an average weight of 125g were randomly distributed in 48 pens in a 4x4 factorial design with four levels of ME (2700, 2825, 2950, and 3075 kcal.kg-1) and four levels of LD (1.080, 1.187, 1.295 and 1.403%) for a total of 16 treatments with three replicates each. The highest level of LD study (1.403%) and the highest levels (3075 kcal.kg-1) provided better results for final weight and weight gain for broilers from 8 to 21 days old. To better feed the indicated level is 3075 kcal.kg-1 to 1.080% digestible lysine. The highest levels (3,075 kcal.kg-1) and LD (1.403%) promoted better rate of protein deposition in the carcass while the higher levels of MS and LD promoted a higher rate of fat deposition in the carcass. The simultaneous increase of metabolizable energy and digestible lysine caused a linear effect (P <0.05) villus height in the duodenum, jejunum and villous: crypt ileum. The lysine levels for best performance of broiler chicks 8-21 days and morphometric characteristics is less than 1.403%. The level of 3075 kcal.kg-1 is sufficient for good performance of the bird / Foram conduzidos dois experimentos com o objetivo de avaliar os efeitos dos níveis de energia metabolizável (EM) e lisina digestível (LD) na dieta pré-inicial em pintos de corte de 1 a 10 dias e de 8 a 21 dias, sobre as características de desempenho, taxa de deposição de proteína e gordura corporal e morfometria da mucosa intestinal de pintos de corte. No primeiro experimento, o objetivo foi avaliar o efeito dos níveis de energia metabolizável (EM) e de lisina digestível (LD), sobre o desempenho de pintos de corte de 1 a 10 dias de idade, taxa de deposição de proteína e características morfométricas intestinais. Foram utilizados 1.152 pintos de corte, com peso médio de 55g, distribuídos em delineamento inteiramente casualizado, em esquema fatorial 4x4, sendo quatro níveis de EM (2.700; 2.825; 2.950; e 3.075 kcal.kg-1) e quatro níveis de LD (1,080; 1,187; 1,295 e 1,403%), resultando em 16 tratamentos com três repetições e 24 aves cada. Os níveis de lisina digestível e energia metabolizável atuaram de maneira independente no desempenho de pintos de corte na fase pré-inicial, onde os níveis de energia metabolizável exerceram aumento linear (P<0,05) no ganho de peso, e em relação ao consumo de ração e conversão alimentar exerceram efeito quadrático (P<0,05). Os níveis de lisina digestível exerceram efeito quadrático (P<0,05) para o ganho de peso e conversão alimentar, e para o consumo de ração exerceu aumento linear (P<0,05). Em relação a taxa de deposição de proteína (TDP) e de gordura (TDG) não foram influenciadas significativamente, no entanto, a TDG foi influenciada de forma linear pelos níveis crescentes de lisina. Houve interação significativa entre os níveis de EM e LD sobre a morfometria da mucosa intestinal (P<0,05) referente à altura de vilosidade do duodeno, jejuno e relação vilo:cripta do íleo. Observou-se que para a fase pré-inicial de pintos de corte o nível de lisina digestível para maior ganho de peso é de 1,271% e para conversão alimentar, 1,221%; sendo que o nível de energia metabolizável para ganho de peso e conversão alimentar é de 3075 kcal.kg-1. Os níveis de lisina digestível e energia metabolizável apresentam efeito positivo sobre o desenvolvimento intestinal dos pintos de corte na fase pré-inicial. No segundo experimento o objetivo foi avaliar o efeito dos níveis de energia metabolizável e lisina digestível no desempenho de pintos de corte de 8 a 21 dias de idade (fase inicial), taxa de deposição de proteína e gordura na carcaça e morfometria da mucosa intestinal. Foram utilizados 864 pintos de corte, com 8 dias de idade, com peso médio de 125g, distribuídos ao acaso em 48 boxes, em esquema fatorial 4x4 sendo quatro níveis de EM (2.700; 2.825; 2.950; e 3.075 kcal.kg-1) e quatro níveis de LD (1,080; 1,187; 1,295 e 1,403%) totalizando em 16 tratamentos com três repetições cada. O maior nível de LD estudado (1,403%) e o maior nível de EM (3075 kcal.kg-1) proporcionaram melhores resultados de para peso final e ganho de peso para frangos de corte de 8 a 21 dias de idade. Para melhor conversão alimentar o nível indicado é de 3075 kcal.kg-1 para 1,080% de lisina digestível. O maior nível de EM (3.075 kcal.kg-1) e de LD (1,403%) promoveram melhor taxa de deposição de proteína na carcaça enquanto que os maiores níveis de EM e LD promoveram maior taxa de deposição de gordura na carcaça. O aumento simultâneo de energia metabolizável e lisina digestível provocaram um efeito linear (P<0,05) na altura de vilosidade do duodeno, jejuno e relação vilo:cripta do íleo. Os níveis de energia metabolizável e lisina digestível da dieta influenciam o desempenho de pintos de corte, no período de 8 a 21 dias de idade. Recomenda-se o uso de 3.075 kcal.kg-1 de EM e 1,403% de LD, ou maior, para melhor desempenho, taxa de deposição de proteína, bem como melhor desenvolvimento das características morfométricas intestinais de pintos de corte na fase inicial, de 8 a 21 dias de idade

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Doglas_Lazzeri.pdf: 319692 bytes, checksum: ab1f14cee65939d583d1aaf7427d892d (MD5) Previous issue date: 2011-07-29 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Aiming to determine the digestible isoleucine requirement for barrows from 15 to 30 kg, two experiments were conducted, being one of digestibility and another of performance. Ten crossbreed barrows with average initial weight of 15.00 ± 0.27 kg were used to determine the ileal digestibility coefficient of amino acids from basal diet. The animals were housed individually in metabolic cages in a completely randomized design, with two treatments, five replicates and one animal per experimental unit. The treatments consisted of a basal diet with 14.13% crude protein and 0.45% isoleucine, and a free protein diet. Forty crossbreed barrows with average initial weight of 15.00 ± 0.87 kg were used to determine the digestible isoleucine requirement. The animals were distributed in a randomized block design with five treatments (0.45, 0.52, 0.59, 0.66 and 0.73% digestible isoleucine), four replicates and two animals per experimental unit. The coefficients of true ileal digestibility of essential amino acids were higher than the coefficients of apparent ileal digestibility and threonine, methionine+cystine and valine had the biggest increases. The true ileal digestibility of basal diet for lysine, threonine and tryptophan were higher than the true ileal digestible calculated amino acids. The same was not observed for true ileal digestibility of basal diet of arginine, histidine, isoleucine, leucine, methionine, methionine+cystine, phenylalanine and valine. The protein deposition rate had a quadratic effect (P<0.05) which the level of 0.600% digestible isoleucine had the highest protein deposition in carcasses of pigs. The daily isoleucine intake had quadratic effect (P<0.01), which level of 0.938% digestible isoleucine provided the higher intake. There was linear effect (P<0.01) on efficiency of isoleucine utilization for weight gain, with reduction on values of EIleUWG as levels of digestible isoleucine increased in rations. A quadratic effect (P=0.09) of digestible isoleucine levels on the final weight was observed, with better values for the level 0.599%. The level of 0.60% digestible isoleucine obtained in the present work provided a digestible isoleucine:lysine relation of 0.60. The daily requirement of digestible isoleucine was 5.86 g/day, providing 1.76g of digestible isoleucine/Mcal of metabolizable energy / Com o objetivo de determinar a exigência de isoleucina digestível para suínos machos castrados dos 15 aos 30 kg de peso vivo, foram realizados dois experimentos, um de digestibilidade e outro de desempenho. Para determinar o coeficiente de digestibilidade ileal dos aminoácidos da ração basal, foram utilizados 10 suínos, machos castrados, mestiços, com peso médio inicial de 15,00±0,27 kg, alojados individualmente em gaiolas de metabolismo, em um delineamento inteiramente ao acaso, com dois tratamentos, cinco repetições e um animal por unidade experimental. Os tratamentos consistiram de uma dieta basal, com 14,13% de proteína bruta e 0,450% de isoleucina, e uma dieta isenta de proteína. Na determinação da exigência de isoleucina digestível para suínos machos castrados, foram utilizados 40 suínos mestiços, com peso médio inicial de 15,00±0,87 kg, distribuídos em um delineamento experimental de blocos casualizados, com cinco tratamentos (0,45; 0,52; 0,59; 0,66 e 0,73% de isoleucina digestível), quatro repetições e dois animais por unidade experimental. Os valores dos coeficientes de digestibilidade ileal verdadeira dos aminoácidos essenciais foram maiores do que os coeficientes de digestibilidade ileal aparente, sendo a treonina, a metionina + cistina e a valina os aminoácidos que apresentaram os maiores aumentos. Os valores de digestibilidade ileal verdadeira da dieta basal para lisina, treonina e triptofano foram superiores aos valores de aminoácidos digestíveis ileais verdadeiros calculados. O mesmo não foi observado para os valores de digestibilidade ileal verdadeira da dieta basal dos aminoácidos arginina, histidina, isoleucina, leucina, metionina, metionina + cistina, fenilalanina e valina. A taxa de deposição de proteína apresentou efeito quadrático (P<0,05), em que o nível de 0,600% de isoleucina digestível proporcionou a maior deposição de proteína na carcaça dos suínos. Houve efeito quadrático (P<0,01) dos níveis de isoleucina digestível sobre o consumo diário de isoleucina, com estimativas de melhor consumo para o nível de 0,938%. Foi observada diferença linear (P<0,01) apenas para a eficiência de utilização de isoleucina para ganho, em que o modelo linear apresentou redução nos valores de eficiência à medida que aumentaram os níveis de isoleucina digestível nas rações. Foi observado efeito quadrático (P=0,09) dos níveis de isoleucina digestível sobre o peso final, com melhores valores obtidos para o nível de 0,599%. O nível de 0,60% de isoleucina digestível, obtido no presente estudo, proporcionou uma relação isoleucina:lisina digestível de 0,60. A exigência diária de isoleucina digestível foi de 5,86 g/dia, proporcionando um consumo de 1,76 g de isoleucina digestível/Mcal de energia metabolizável

Made available in DSpace on 2017-07-10T17:48:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sandra_Elisa_Schneider.PDF: 294647 bytes, checksum: 05675a02350b5b1d8181899f53ffda67 (MD5) Previous issue date: 2011-09-30 / Two experiments were carried with the aiming at determining the nutritional requirement of digestible lysine for brow-egg laying hens. The first experiment was performed at the end of the first production cycle, in the period from 50 a 66 weeks of age and the second with birds in the period from 74 to 90 weeks of age. In both experiments, 150 layers Shaver Brow laying hens, distributed in a completely randomized design, with five treatments (digestible lysine levels: 0.79, 0.82, 0.85, 0.8 and 0.91%), six replications and five birds for experimental unit. The experimental period lasted 16 weeks and it was divided in four periods of collection of the eggs, being each one corresponding to 28 days. The parameters evaluates were the productive performance (production, mass and egg´ weight), of the intake consumption (feed and lysine), of the feed conversion (mass and egg dozen), egg components (albumen, yolk and shell), of the egg quality (albumen and yolk index, Haugh units and egg shell specific quality). In the first experiment, the productive performance, the feed intake, the feeds conversions, the components percentage, egg quality and yolk index were not influenced (P>0.05) by the levels of digestible lysine, except for the lysine intake which show a linear response (P<0.05) with increase in the digestible lysine levels. For the albumen index and Haugh units, the LRP model (Linear Response Plateau) adjusted better to the data, estimating at 0.832% and 0.883 % of the lysine digestible, respectively. In the second experiment, was observed a linear increase (P<0.05) of lysine intake increased as the level of dietary lysine and quadratic effect (P<0.05) of the yolk percentages, estimating the level of 0,837% digestible lysine for the lowest percentage of yolk. Variables such as performance, consumption, feed conversion, components percents and egg quality had not shown significant differences (P>0.05). Based on productive parameters that were not influenced by levels of lysine diets in both experiments, suggested the level of 0.79% of lysine, for brow-egg laying hens in the period from 50 to 66 weeks and 74 to 90 weeks of age / Foram conduzidos dois experimentos com o objetivo de determinar a exigência nutricional de lisina digestível para poedeiras semipesadas. O primeiro experimento foi realizado ao final do primeiro ciclo de produção, no período de 50 a 66 semanas de idade e o segundo com aves no período de 74 a 90 semanas de idade. Em ambos os experimentos, foram utilizadas 150 poedeiras semipesadas da linhagem Shaver Brow, distribuídas em um delineamento inteiramente casualizado (DIC) contendo cinco tratamentos (níveis de lisina digestível: 0,79; 0,82; 0,85; 0,88 e 0,91%), seis repetições e cinco aves por unidade experimental. Cada período experimental teve duração de 16 semanas, subdividido em quatro períodos de coleta dos ovos, sendo cada um correspondente a 28 dias. Foram avaliados os parâmetros de desempenho (produção, peso e massa de ovos), de consumo (ração e lisina), de conversão alimentar (dúzia e massa de ovos), de componentes dos ovos (porcentagem de gema, de casca e de albúmen) e de qualidade interna e externa dos ovos (índice de gema e de albúmen, unidade Haugh e gravidade específica). No primeiro experimento, o consumo de ração, as conversões alimentares, os percentuais dos componentes, a qualidade externa e o índice de gema dos ovos não foram influenciados (P>0,05) pelos níveis de lisina digestível, com exceção para consumo de lisina que aumentou linearmente (P<0,05) conforme aumentou o nível deste aminoácido na ração. Para o índice de albúmen e unidade Haugh, o modelo LRP (Linear Response Plateau) melhor se ajustou aos dados, estimando em 0,832% e 0,883% de lisina digestível, respectivamente. No segundo experimento, observou-se aumento linear (P<0,05) sobre o consumo de lisina conforme aumentou o nível deste aminoácido na ração e efeito quadrático (P<0,05) sobre a porcentagem de gema, estimando-se o nível de 0,837% de lisina digestível para menor valor desta variável. Os parâmetros de desempenho, consumo, conversão alimentar, porcentagens dos componentes, qualidade interna e externa não apresentaram diferenças significativas (P>0,05). Com base nos parâmetros produtivos que não foram influenciados pelos níveis de lisina das rações em ambos os experimentos é sugerido o nível de 0,79% de lisina digestível, para poedeiras semipesadas nos períodos de 50 a 66 semanas e de 74 a 90 semanas de idade