Resumo não disponível.

A hidatidose cística é uma zoonose causada pelo estágio larval (cisto hidático) do Echinococcus granulosus. O cisto hidático desenvolve-se nas vísceras dos hospedeiros intermediários como uma estrutura unilocular preenchida pelo líquido hidático, que contém os produtos de excreção/secreção do parasito. O antígeno B (AgB) de E. granulosus, um dos principais componentes antigênicos do líquido hidático, é uma lipoproteína oligomérica composta por subunidades de 8 kDa. Em solução o AgB existe como distintos oligômeros e agregados em equilíbrio, contudo, os oligômeros de aproximadamente 160 kDa são predominantes. A função do AgB não é totalmente clara, mas dois papeis principais são sugeridos: de molécula imunomoduladora e de carreador de lipídios. Neste estudo, nós investigamos se o AgB é capaz de interagir com diferentes tipos celulares e afetar sua viabilidade. O AgB foi purificado por cromatografia de imunoafinidade a partir de líquido hidático coletado de cistos hidáticos individuais. A internalização do AgB pelas linhagens A549 (célula epitelial de pulmão), NIH/3T3 (fibroblasto), RH (hepatócito) e J774 (macrófago) foi avaliada por imunofluorescência. A viabilidade celular foi analisada pelo ensaio de redução do MTT após incubação com AgB por 24 h. As quatro linhagens celulares foram capazes de internalizar o AgB a 37°C. Para avaliar o envolvimento de endocitose na internalização, células RH foram incubadas com AgB a 4°C, condição que inibe processos de endocitose. Nessa condição, o AgB não foi observado no citoplasma celular, sugerindo que vias de endocitose poderiam estar envolvidas. Células RH e A549 mostraram maior sensibilidade no ensaio de MTT. A taxa de redução de MTT no tratamento com 100 μg/ml de AgB foi de 68% e 57% para RH e A549, respectivamente. Nas mesmas condições, células NIH/3T3 e J774 mostraram respostas similares, o nível de redução do MTT foi 80% e 78%, respectivamente. A sensibilidade observada para as células A549 e RH poderia estar relacionada ao organotropismo por pulmões e fígado reportado na hidatidose cística. A internalização pelas células pode ser uma etapa necessária para a função do AgB como carreador de lipídios ou molécula imunomoduladora e durante esse processo, o AgB poderia causar dano celular nos tecidos do hospedeiro. / Cystic hydatid disease is a zoonosis caused by the larval stage (hydatid cyst) of Echinococcus granulosus. The hydatid cyst develops in the viscera of intermediate host as a unilocular structure filled by the hydatid fluid, which contains parasitic excretory/secretory products. E. granulosus antigen B (AgB), one of the major antigenic component of hydatid fluid, is an oligomeric lipoprotein composed by small subunits with approximately 8 kDa. In solution, AgB exists as distinct oligomers and aggegates in equilibrium, however oligomers with approximately 160 kDa are prevalent. The AgB function is not completely clear, but two major roles are suggested: as an immunomodulatory molecule and as a lipid carrier. In this study, the ability of AgB to interact with different cell types and to affect cell viability was investigated. AgB was purified by immunoaffinity chromatography from hydatid fluid collected from individual hydatid cysts. The internalization of AgB by A549 (lung epithelial cell), NIH/3T3 (fibroblast), RH (hepatocyte) and J774 (macrophage) cells was evaluated by immunofluorescence. Cell viability was analyzed by MTT reduction assay after incubation with AgB by 24 h. The four cell lines tested were able to internalize AgB at 37°C. In order to evaluate the role of endocytosis in the internalization, RH cells were incubated with AgB at 4°C, condition that inhibits endocytosis processes. In this condition, AgB was not visualized on cell cytoplasm, suggesting that endocytosis pathways could be envolved. RH and A549 cells showed higher sensitivity on MTT assay. The MTT reduction level on the 100 μg/ml AgB treatment was 68% and 57% for RH and A549, respectively. In the same condition, NIH/3T3 e J774 cells showed similar responses, the MTT reduction level was 80% and 78%, respectively. The observed sensitivity on A549 and RH cells could be related to the organothropism by lungs and liver reported on cystic hydatid disease. The internalization by cells might be a necessary step to the AgB function as a lipid carrier or an immunomodulatory molecule and during this process, AgB could cause cell damage to the host tissues.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-13T14:59:49Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Manuella Maria Santos.pdf: 1230878 bytes, checksum: 21854ded68897cc54173c33b85cc9f42 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-13T14:59:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Manuella Maria Santos.pdf: 1230878 bytes, checksum: 21854ded68897cc54173c33b85cc9f42 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Aproximadamente 40% do risco genético para o Diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é atribuído à região HLA classe II, contudo, outras regiões são associadas aos processos autoimunes ligados à doença. No presente estudo foi avaliada a associação entre variações genéticas do Antígeno Leucocitário Humano G (HLA-G), região HLA classe I não-clássica, e o receptor de interleucina4 (IL4R), região não- HLA, em pacientes DM1 do estado de Pernambuco, nordeste doBrasil. O trabalho foi do tipo caso-controle e os pacientes foram estratificados de acordo com a presença da doença celíaca (DC) e tireoidite autoimune (AITD). O polimorfismo indel de 14 pb do HLA-G foi genotipado por reação em cadeia da polimerase (PCR) com subsequente visualização por eletroforese em gel de agarosea 3% e, os polimorfismos de base única (SNPs)(rs1805010, rs1805011, rs1805013, rs1805015, rs1805016 e rs1801275) do IL4R foram genotipados por PCR em tempo real. Diferenças estatisticamente significativas foram encontradas no indel 14 pb, entre as frequências dos pacientes (5%) e controles saudáveis (12%) do genótipo para inserção (I / I) (p = 0,028, OR = 0,39). Os SNPsgenotipados nogene IL4Rnão obtiveramresultados de associação estatisticamente significantes. Este é o primeiro trabalho que realiza um estudo de associação do indel 14 pb do HLA-Ge DM1como também, o primeiro no Brasil associando polimorfismos do IL4Rcom a doença.

Submitted by Daniella Sodre (daniella.sodre@ufpe.br) on 2015-03-18T13:46:49Z No. of bitstreams: 2 TESE Jackeline Gomes da Silva Araujo.pdf: 1816435 bytes, checksum: 302ef3838fff12047ef9cfd5cdd9cc4d (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-18T13:46:49Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Jackeline Gomes da Silva Araujo.pdf: 1816435 bytes, checksum: 302ef3838fff12047ef9cfd5cdd9cc4d (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-02-27 / O Circovírus Suíno (CVS) é um vírus de DNA fita simples, que pertence à família Circoviridae, com genoma de 1,7kilobases. Apresenta dois tipos principais, o CVS1 e o CVS2. O CVS1 não é patogênico, enquanto que o CVS2 está associado a um conjunto de doenças como a Síndrome Multissistêmica do Definhamento de Suínos (SMDS). Estes tipos virais possuem a proteína Rep, essencial para replicação e a proteína Cap, formadora do capsídeo. A pCap possui epítopos imunoreativos e imunodominantes e tem sido utilizada como um antígeno tanto para o diagnóstico, quanto para aplicação vacinal, contra infecções causadas pelo CVS2. Pichia pastoris é uma levedura metilotrófica que utiliza metanol como única fonte de carbono e tem sido utilizada para expressar genes heterólogos por apresentar vantagens como, a realização de modificações pós-traducionais e sua fácil manipulação. Objetivou-se nesse estudo expressar o gene Cap códon-otimizado do CVS2 para expressar em Pichia pastoris, visando a produção secretória da pCap e sua aplicação como antígeno recombinante em imunoensaios. Para tanto, a construção pPICZαA/CVS2Capo obtida após clonagem gênica foi inserida no genoma da levedura por eletroporação e o sistema foi induzido com metanol, sob o controle do promotor AOX1, por 72h. Os clones expressos positivamente foram identificados em Colony blot e Dot blot, após a reação dos clones com anticorpo-antiHis. A rCap foi detectada com massa molecular de ~39 kDa em sobrenadante da P. pastoris por SDS-PAGE e Western blot. Neste último, a detecção foi feita pelo reconhecimento da rCap por anticorpos anti-CVS2 de soros de animais com histórico de SMDS. A rCap testada em ELISA indireto contra soros de animais sabidamente negativos e positivos, previamente determinados pela imunoperoxidase (IP), mostrou alta eficiência discriminatória com alta razão positivo/negativo de 597. Após análise preliminar de parâmetros concordantes e discordantes, entre o IP e ELISA, observou-se uma alta concordância entre eles. Os resultados representam a efetiva produção da rCap pela via secretória de P. pastoris, com sugestiva preservação dos epítopos imunoreativos na mesma. Isto demonstra a viabilidade do sistema eucarioto de expressão utilizado e o potencial uso da rCap para detecção de anticorpos anti-CVS2 como ferramenta auxiliar no diagnóstico de doenças causadas pelo CVS2 como a SMDS.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-02-22T14:08:58Z No. of bitstreams: 1 Paulo Castelo Branco de Gouveia Filho.pdf: 1165549 bytes, checksum: 16f843e48f36122b99e932a78381d634 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-02-22T14:08:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paulo Castelo Branco de Gouveia Filho.pdf: 1165549 bytes, checksum: 16f843e48f36122b99e932a78381d634 (MD5) Previous issue date: 2017-02-24 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / Glanders is an often fatal zoonosis that affects horses, donkeys and mules, caused by Burkholderia mallei. Complement Fixation (CF) is the test prescribed by the World Organization for Animal Health (OIE) for its diagnosis. This work was conducted with the objective of evaluating the performance of CF using antigen produced with Brazilian strains of B. mallei (Biovetech, Recife Brazil) for the diagnosis of glanders compared to the antigen c.c.pro (GmbH, Oberdorla, Germany), which employs strains from Yugoslavia, India and Indonesia. The tests were performed in parallel using the protocol of cold incubation (4 ° C, 12 hours) of the serum, complement and antigen mixture. Of the 259 sera evaluated, 102 and 133 presented positive and negative results, respectively, in both tests. Twenty-four negative sera in the c.c.pro antigen test showed a positive result in the Biovetech antigen test. The calculated concordance index kappa was 0.81, considered almost perfect. / O mormo é uma zoonose frequentemente fatal que afeta equinos, asininos e muares, causada pela Burkholderia mallei. A Fixação do Complemento (FC) é o teste prescrito pela Organização Mundial de Saúde Animal (OIE) para seu o diagnóstico. Este trabalho foi conduzido com o objetivo de avaliar o desempenho da FC empregando antígeno (Biovetech, Recife Brasil), produzido com cepas brasileiras de B. mallei para diagnóstico do mormo comparativamente ao antígeno c.c.pro (GmbH, Oberdorla, Alemanha), que emprega cepas da Iuguslávia, India e Indonésia. Os testes foram realizados em paralelo utilizando o protocolo de incubação a frio (4ºC, 12 horas) da mistura soro, complemento e antígeno. Dos 259 soros avaliados, 102 e 133 apresentaram resultado positivo e negativo, respectivamente, em ambos os testes. Vinte e quatro soros negativos no teste com antígeno c.c.pro apresentaram resultado positivo no teste com antígeno Biovetech. O índice de concordância ajustada kappa calculado foi 0,81, considerado quase perfeito.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-03-08T13:34:35Z No. of bitstreams: 1 Sergio Alves do Nascimento.pdf: 1211419 bytes, checksum: 3bc943600caeb78440095073154d36ca (MD5) / Made available in DSpace on 2018-03-08T13:34:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Sergio Alves do Nascimento.pdf: 1211419 bytes, checksum: 3bc943600caeb78440095073154d36ca (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The objective of this work is to develop serological tests (AGID and ELISA -ELISAi) using antigens of the virus Arthritis Encephalitis Goat (CAEV) obtained from a goat corneal cell line (CorFC cells) grown with 0.1% FBS. For AGID antigens were obtained from cells cultured in MEM, DMEM / F12 and RPMI 1640. Of the 163 tested sera samples (28 positive and 135 negative), 28 (17.17%) were positive for MEM and Ag Ag DMEM / 12 and 29 (17.79%) to Ag is RPMI 1640. Comparing the results obtained with three Ag was observed almost perfect agreement kappa adjusted (0.98 to 1.00). The Ag RPMI 1640 antigen, which showed better quality of precipitation lines in AGID and best performance was evaluated in comparison to a commercial Ag (Kit for the diagnosis of CAE - AGID; Unika biotech, Recife). The test of 797 sera with commercial Ag showed 216 positive and 581 negative; RPMI 1640 with Ag were observed 225 positive and 572 negative, corresponding to sensitivity (Se) and specificity (Es) for 100% and 98.45%, respectively. Globally, there has been adjusted (kappa = 0.97) between the almost perfect results with both Ag. For ELISAi empregandos native viral antigens were obtained by a simple process (clarification, dialysis and the treatment with triton X-100) to from cells cultured in RPMI 1640. After standardization were made the ELISAi performance evaluations. To assess the repeatability of the observed ELISAi RPMI CV entreplacas 4.4 and 17.3 and between 18.4 and 5.1 days for negative and positive sera. The results of 722 sera tested with the kits to diagnose LVPR AGID / commercial ELISAi (Unika biotech, Recife) showed 166 positive and 556 negative; with RPMI were observed ELISAi 171 positive and 551 negative, and if Sp corresponding to about 97.59% and 98.38%, respectively, with agreement adjusted kappa 0.95, considered almost perfect. These results demonstrate that one can establish an AGID an ELISA for highly sensitive and specific diagnosis of LVPR using a simplified model for obtaining of antigens, employing CorFC cells with low levels of FBS. Depending on the cell type and medium used can be produced LVPR antigens with low FCS content, which agrees with the animal welfare, represents a reduction of input costs and protein purification processes. / Objetivou-se com este trabalho desenvolver testes sorológicos (IDGA e ELISA indireto -ELISAi) utilizando antígenos do vírus da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) obtidos a partir de uma linhagem de células de córnea caprina (células CorFC) cultivada com 0,1% de SFB. Para a IDGA foram obtidos antígenos a partir de células cultivadas em MEM, DMEM/F12 e RPMI 1640. Das 163 amostras de soros testados (28 positivas e 135 negativas), 28 (17,17%) apresentaram resultados positivos para o Ag MEM e Ag DMEM/12 e 29 (17,79%) para o Ag RPMI 1640. Comparando-se os resultados obtidos com os três Ag foi observada concordância ajustada de kappa quase perfeita (0,98 a 1,00). O antígeno Ag RPMI 1640, que apresentou melhor qualidade das linhas de precipitação na IDGA e melhor rendimento foi avaliado comparativamente com um Ag comercial (Kit para diagnóstico de CAE – IDGA; Unika biotech, Recife). O teste dos 797 soros com o Ag comercial apresentou 216 positivos e 581 negativos; com o Ag RPMI 1640 foram observados 225 resultados positivos e 572 negativos, correspondendo a sensibilidade (Se) e especificidade (Es) relativas de 100% e 98,45%, respectivamente. De forma global, houve uma concordância ajustada (kappa = 0,97) quase perfeita entre os resultados com ambos Ag. Para o ELISAi foram empregandos antígenos virais nativos obtidos por um processo simples (clarificação, diálise e tratamento com triton X-100) a partir de células cultivadas em meio RPMI 1640. Após a padronização foram feitas as avaliações de desempenho do ELISAi. Ao avaliar a repetibilidade do ELISAi RPMI observou-se o CV entreplacas de 4,4 e 17,3 e entre dias de 5,1 e 18,4, para soros negativo e positivo, respectivamente. Os resultados dos 722 soros testados com os Kits para diagnóstico de LVPR IDGA/ELISAi comerciais (Unika biotech, Recife) apresentou 166 positivos e 556 negativos; com o ELISAi RPMI foram observados 171 resultados positivos e 551 negativos, correspondendo a Se e Sp relativas de 97,59% e 98,38%, respectivamente, com concordância ajustada kappa de 0,95, considerada quase perfeita. Esses resultados demonstram que pode-se estabelecer uma IDGA e um ELISA para diagnostico de LVPR altamente sensíveis e específicos utilizando-se um modelo simplificado para obtenção de antígenos, empregando células CorFC cultivadas com baixo teor de SFB. Dependendo do tipo de célula e meio utilizado pode-se produzir antígenos de LVPR com baixo teor de SFB, que corrobora com o bem estar animal, representa redução de custos com insumos e nos processos de purificação de proteínas.

Orientador: Manoel Barros Bértolo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-16T11:36:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bonfiglioli_Rubens_D.pdf: 4535259 bytes, checksum: c162b3d3293837dabf58f540050f6b46 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Este estudo prospectivo analisou a epidemiologia, clínica e perfil genético de 102 pacientes brasileiros com Artrite Psoriásica. A associação do complexo maior de histocompatibilidade (MHC) de classe I, e os alelos do HLA-B27 com aquelas variáveis foram avaliados e comparados com sadios controles, HLA-B27 positivos, compondo um grupo de 111 indivíduos. A predominância foi do sexo masculino (59,8%), raça caucasóide (89,2%) e HLA-B27 negativos (79,4%). Oligoartrite assimétrica (62,7%) foi o subgrupo de Artrite Psoriásica mais observado, seguido pela forma espondilítica (16,7%) e poliarticular (15,7%). O sexo masculino e o subgrupo dos espondilíticos foram estatisticamente mais associados ao HLA-B27, e o subgrupo oligoarticular ao HLA-B27 negativo. Entre os 21 pacientes com Artrite Psoriásica e HLA-B27 positivos existiu uma significante prevalência do HLA-B*2705 (90,5%), similar ao observado no grupo controle (80,2%); HLA-B*2703 e HLA-B*2707 foram estatisticamente associados ao grupo controle / Abstract: This prospective study analyzed the epidemiologic, clinical and genetic profile of 102 Brazilian patients with psoriatic arthritis (PsA). The association of the major histocompatibility complex (MHC) class I and the HLA-B27 alleles with these variants was outlined, and compared to a control healthy HLA-B27 positive group of 111 individuals. There was a predominance of male gender (59.8%), Caucasian race (89.2%) and negative HLA-B27 (79.4%) patients. Asymmetric oligoarthritis (62.7%) was the most frequently observed clinical PsA subgroup, followed by spondylitis (16.7%) and polyarthritis (15.7%). Male gender and the spondylitis subgroup were statistically associated to the positive HLAB27 and the oligoarthritis subgroup was associated to the negative HLA-B27. Among the 21 HLA-B27 positive PsA patients, there was a significant prevalence of the HLA-B*2705 allele (90.5 %), similar to that observed in the control group (80.2%); HLA-B*2703 and HLA-B*2707 were statistically associated to the control group. Other antigens such as HLA- B07 (14 patients), HLA-B08 (14 patients) and HLA-B44 (13 patients) among others, were found in HLA-B27-negative patients / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica

A neurocisticercose (NC) é uma doença provocada por larvas de Taenia solium (Tso) no sistema nervoso central. Seu diagnóstico fundamenta-se em critérios clínicos, epidemiológicos e laboratoriais. A utilização de antígenos parasitários no imunodiagnóstico apresenta desvantagens como: necessidade de animais, ausência de homogeneidade entre lotes, baixo rendimento, e contaminação com proteínas suínas. Assim, os antígenos recombinantes podem otimizar o imunodiagnóstico da NC, pois são reagentes simples e reprodutíveis, sem requerer animais. Este estudo teve como objetivo a obtenção, caracterização e análise da reatividade de proteína recombinante baseada em antígenos de líquido vesicular de Taenia crassiceps (Tcra). Assim, o cDNA foi obtido por amplificação a partir de RNAm de cisticercos de Tcra. A proteína recombinante Tc14 foi produzida em Escherichia coli (DE3) BL21 utilizando-se o vetor de expressão pET-22b e purificada por cromatografia de afinidade. A caracterização antigênica deu-se por Imunoblot (IB) utilizando anticorpos monoclonais (AcMo). Houve reatividade com todos os AcMo utilizados (AcMo anti-antígeno de excreção/secreção de Tcra, AcMo anti-líquido vesicular de Tcra, AcMo antilíquido vesicular de Tso e AcMo anti-antígeno total de Tso), exceto com o AcMo anti-antígeno de escólex de Tso. Utilizando-se 22 amostras de soro e 19 de líquor (LCR) de pacientes com NC, 48 soros e 28 LCR do grupo controle negativo (GCN) e 17 soros de hidatidose do grupo outras parasitoses (OP) em Imunoblot foi observada reatividade na região de 14kDa, correspondente a Tc14, em todas as amostras NC, mas não nos GCN e OP. Em ELISA com Tc14 obteve-se sensibilidade (S) e especificidade (E) de 100% com LCR (29 amostras de NC e 35 do GCN) e S de 95,1% e E de 100% com soro (41 amostras de NC, 52 do GCN). Dentre 51 soros de OP, mostraram-se reagentes um de hidatidose e outro de estrongiloidíase. A análise comparativa entre diferentes antígenos e testes sorológicos apresentou índice de positividade de 100% em IB utilizando os antígenos Tc14 ou LLG (antígeno purificado de Tso com lentil-lectina); já em ELISA, os índices foram de 83,4% para Tc14 e 91,6% para 18/14 (antígeno purificado de líquido vesicular de Tcra com AcMo). Em ensaios de linfoproliferação a porcentagem de respondedores no grupo NC foi de 16,6% (com 0,05 e 0,6 µg de Tc14/poço), 50% (com 0,4 µg de Tc14/poço), 44,4% (com 1,0 µg de Tc14/poço) e 20% (com 2,0 µg de Tc14/poço). Não houve proliferação no GCN. A dosagem de citocinas em sobrenadante de cultura apresentou reatividade diferenciada entre o GCN e NC para IL-10, sendo uma amostra do GCN reagente e duas amostras de NC não reagentes. Não foi possível detectar IFN-γ. Em ELISA para IgG total 91,7% dos plasmas do grupo NC apresentaram reatividade, sendo a positividade para os isótipos IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4 respectivamente, de 75; 33,3; 50 e 25%. O antígeno recombinante mostrou-se como ferramenta promissora para imunoensaios na NC, abrindo nova perspectiva envolvendo estudos a serem realizados sobre diferentes sistemas de expressão e antigenicidade frente a um número maior de amostras. / The neurocisticercosis (NC) disease is caused by the presence of Taenia solium (Tso) larvae in the central nervous system. Its diagnosis is based on clinical criteria, epidemiological studies and laboratorial exams. Nevertheless, the use of parasite antigenic extracts into the immunodiagnosis presents some disadvantages: it requires animals, lacks of homogeneity between lots, low yield and may become contaminated with swine proteins. Consequently, the utilization of recombinant antigens could optimize the immunodiagnostic of NC, as they are simple and reproducible reagents that do not require animals. This study aimed the capture, characterization and reactivity analysis of the recombinant protein based on antigens of the vesicular fluid of Taenia crassiceps (Tcra). In order to do so, the cDNA was obtained through the amplification deriving from RNAm of cysticerci of Tcra. The recombinant protein Tc14 was produced in Escherichia coli (DE3) BL21 using the expression vector pET-22b and purified by affinity chromatography (nickel resin). The antigenic characterization was performed by immunoblotting (IB) using monoclonal antibodies (MoAb). The recombinant protein presented reactivity with all the MoAb used (Anti-secretion/excretion antigens from Tcra MoAb, anti-vesicular fluid from Tcra MoAb, anti-vesicular fluid from Tso MoAb and anti- total antigen from Tso MoAb), except with the anti-antigen from Tso scolex MoAb. The immunoblot was performed using 22 serum samples and 19 cerebrospinal fluid (CSF) from patients with NC, 48 serum and 28 CSF from the negative control group (GCN) and 17 hydatidosis serum from other parasitosis\' group (OP). It showed reactivity in the 14kDa region, correlated to Tc14, in all NC samples, but not presented on GCN and OP. In ELISA with Tc14, the sensibility (S) and specificity (E) of 100% was obtained with CSF (29 NC samples and 35 GCN samples) and 95.1% of S and 100% of E with serum (41 NC samples, 52 GCN samples). Among 51 OP serums, one from hydatidosis and one from strongyloidiasis demonstrated reactivity. The comparative analysis amongst different antigens and serological tests demonstrated positivity of 100% in IB when using the Tc14 antigens or LLG (purified antigen of Tso with lentil lectin). In ELISA, the positivity indicated was of 83.4% for Tc14 and 91.6% for 18/14 (vesicular fluid purified antigen with MoAb from Tcra). In lymphoproliferation tests, the percentage of responders in NC group was of 16.6% (with .0.5 and 6 µg of Tc14/well), 50% (with 0.4 µg of Tc14/well). No proliferation occurred in GCN. The dosage of cytokines in culture supernatants presented different reactivity amongst GCN and NC for IL-10, as one sample of GCN reacted and two NC samples did not. It was not possible to detect IFN-γ. In ELISA for total lgG, 91.7 % of plasmas from NC group presented reactivity, with positivity for the isotypes lgG1, lgG2, lgG3 and lgG4, 75 %, 33.3 %, 50 % and 25 %, respectively. The recombinant antigen prevails as a promising tool for immunoassays in NC, opening a new perspective involving studies to be performed concerning different expression and antigenicity ahead of a larger number of samples.

Orientador: Leonardo Oliveira Reis / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T16:48:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 FramilSanches_BrunnoCezar_M.pdf: 1330489 bytes, checksum: 3aed09d72f2ce65fc826ce7231b9c31b (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: INTRODUÇÃO: A identificação e refinamento dos fatores preditores de resultados e morbidade são fundamentais na seleção ideal dos pacientes que podem se beneficiar de braquiterapia exclusiva como modalidade de tratamento do câncer de próstata. OBJETIVOS: Identificar preditores de resultados em pacientes com câncer de próstata localizado tratados com braquiterapia com iodo-125, em um estudo não controlado longitudinal. MÉTODOS: Estudo retrospectivo utilizando banco de dados colhidos prospectivamente a partir de informações obtidas durante o tratamento de 560 pacientes com diagnóstico de câncer de próstata e tratados com braquiterapia no período de 2000 a 2011. Destes, 305 foram selecionados para o estudo, pois apresentavam tumor localizado e tiveram mais de 24 meses de acompanhamento. RESULTADOS: A idade média dos pacientes foi de 63,93 anos (44-88), a média pré-tratamento do PSA foi de 6,34 ng/ml (0,67-33,09), a média geral de acompanhamento foi de 75,35 meses (24-158,37), recorrência bioquímica ocorreu em 17 pacientes (5,57%), a sobrevida específica por câncer foi de 100% e a sobrevida global 98,03%. Na análise multivariada, apenas nadir de PSA em um ano e idade foram relacionadas à sobrevida livre de doença: a cada unidade de aumento do PSA- nadir, o risco de recorrência aumenta 87,3% (OR=1,87, p< 0,001; IC95%-1,31-2,67). O risco recorrência foi 4,7 vezes maior para aqueles com menos de 50 anos em comparação com aqueles com mais de 70 anos (OR=4,69, (p= 0,04; IC95%-1,39-18,47). Melhor corte para nadir de PSA em um ano foi de 0,285 (AUC = 0,78, p<0,001; IC95% - 0,68-0,89). Análise de Kaplan-Meier confirmou nadir do PSA como fator preditor independente de prognóstico (p<0,001), enquanto que a classificação de prognóstico D'Amico falhou neste quesito (p=0,24). Nenhum grau 3 ou 4 de complicação foi relatada após o procedimento, e apenas 31,4% dos pacientes apresentaram grau 2 de toxicidade urinária ou retal. PSA bounce ?0,4 ng/mL ocorreu em 18,4%, sem impacto sobre a recorrência bioquímica. CONCLUSÕES: Metade (50,49%) dos pacientes no cenário do câncer de próstata localizado tratados com braquiterapia com iodo -125 alcançaram PSA nadir em um ano <0,285, e este foi reconhecido como um fator prognóstico independente / Abstract: Introduction: The identification and refinement of outcome predictors and morbidity are critical in the optimal selection of patients who can benefit from exclusive brachytherapy as a treatment modality for prostate cancer. Objectives: To identify predictors of outcomes in patients with localized prostate cancer treated with iodine-125brachytherapy in a longitudinal uncontrolled study. Methods: Between 2000 and 2011, 560 histologically confirmed patients were treated with brachytherapy of whom 305 with >24-month follow-up and localized tumor were evaluated after exclusion of those locally advanced and under androgen ablation. Results: Patients¿ mean age was 63.93 years (44¿88), mean pretreatment prostate-specific antigen (PSA) was 6.34 ng/mL (0.67¿33.09), overall median follow-up was 75.35 months (24¿158.37), biochemical recurrence occurred in 17 patients (5.57%), cancer-specific survival was 100%, and overall survival was 98.03%. At multivariate analyses, only PSA-nadir at 1 year and age were related to disease-free survival: To each unit of PSA-nadir, the risk increases 87.3%¿OR 1.87 (p<0.001; 95% CI 1.31¿2.67), and risk was 4.7 times higher for those under 50 years (vs. [70)¿OR 4.69 (p = 0.04; 95% CI 1.39¿18.47). Best cutoff for PSA-nadir at one year was 0.285 (AUC=0.78; p<0.001; 95 % CI 0.68¿0.89). Kaplan¿Meier analysis confirmed PSA-nadir (p<0.001) as prognostic, while D¿Amico¿s classification failed (p = 0.24). No grade 3 or 4 complication was reported, and only 31.4% of patients had grade 2 urinary or rectal toxicity. PSA bounce ?0.4 ng/mL occurred in 18.4% with no impact on biochemical recurrence. Conclusions: Half (50.49%) of patients in the scenario of localized prostate cancer treated with iodine-125 brachytherapy reach PSA-nadir at 1 year ?0.285, recognized as a key independent prognostic factor / Mestrado / Fisiopatologia Médica / Mestre em Ciências

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