Orientador: Alvaro de Baptista Neto / Banca: Alberto Colli Badino Junior / Banca: Fernando Lucas Primo / Resumo: Com o desenvolvimento da indústria moderna, houve o aumento na utilização de colorantes artificiais em diferentes áreas, entre elas destaca-se o setor alimentício e farmacêutico. Com a utilização contínua desses colorantes no ramo alimentício foi verificado, dependendo da classe e da concentração, o grande potencial desses compostos causarem diversas doenças, dentre elas o câncer. Com isso, é possível observar um crescente desenvolvimento de tecnologias que visam à obtenção de processos de produção de colorantes naturais, de origem biológica, que são considerados mais saudáveis e menos nocivos à saúde humana. Nesse contexto, as antraquinonas, se destacam por possuírem compostos que podem ser utilizados como colorante natural. Há muitos trabalhos na literatura destacando diversas ações desses compostos naturais, como por exemplo, atividade hepatoprotetora, anticancerígena, antimicrobiana, antifúngica, antiviral, antidiabética, antioxidante, entre outras. Nesse sentido, visto a grande importância de colorantes naturais pertencentes ao grupo das antraquinonas, o presente trabalho teve como objetivo desenvolver métodos para extração e quantificação de um colorante natural pertencente à classe das antraquinonas, e os resultados foram satisfatórios. Foi possível determinar o processo de purificação e extração através de cromatografia de adsorção, utilizando como adsorvente a resina IRA-410 e como eluente solução de Cloreto de Sódio 5,0% e Etanol PA, onde foi possível obter uma recu... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: With modern industry development, the use of artificial colors in different areas has increased, among them, the alimentary segment. With the continuous use of these dyes in the food industry, it was verified that depending on the class and concentration, there's a huge potential of these compounds cause various diseases, among them cancer. With this, it is possible to observe a growing development of technologies that aim at obtaining biological origin natural dyes production processes, that are considered healthier and less harmful to human health. In this context, the anthraquinones, stand out because they have compounds that can be used as a natural dye. There are many works in the literature highlighting several actions of these natural compounds, such as hepatoprotective, anticancer, antimicrobial, antifungal, antiviral, antidiabetic, antioxidant, among others activities. In this sense, given the great importance of natural dyes belonging to the quinones group, the present work aimed to develop methods for extracting and quantifying a natural dye belonging to the class of anthraquinones, and the results were satisfactory. It was possible to determine the purification and extraction process by adsorption chromatography using as adsorbent IRA-410 resin and as eluent 5.0% Sodium Chloride solution and Ethanol PA, where it was possible to obtain a recovery of 100% and a yield of 86% when the fixed bed tests were performed, obtaining a promising method for determining the con... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

O objetivo deste estudo preliminar foi obter padrões metodológicos para viabilizar a utilização de um dispositivo acrílico intra-oral adaptável à mucosa palatina de ratos e passível de reembasamento com material resiliente temporário (Trusoft) modificado com antimicrobianos em suas mínimas concentrações inibitórias (MCIs) para biofilme de Candida albicans. Para delinear essa adequação, foram determinados parâmetros em relação à dieta e alojamento dos animais enquanto usuários desses dispositivos. A amostra total dos ratos (n=115) foi dividida em seis grupos: Controle Negativo (CN): sem dispositivo acrílico intra-oral; Controle Geral (CG): dispositivo acrílico sem reembasamento; Controle Positivo (CP): dispositivo reembasado com Trusoft sem fármaco; Diacetato de Clorexidina (CLO): dispositivo reembasado com Trusoft contendo clorexidina (0,064 g/mL); Cetoconazol (CET): dispositivo reembasado com Trusoft contendo cetoconazol (0,128 g/mL) e Nistatina (NIS): dispositivo reembasado com Trusoft contendo nistatina (0,032 g/mL). Os animais foram eutanasiados após 7 ou 14 dias da instalação dos dispositivos intraorais. As adaptações para a obtenção dos dispositivos incluíram a técnica de moldagem, método de reembasamento e formas de retenção à mucosa palatina dos animais. Para proporcionar a análise histopatológica descritiva padronizada, foram estabelecidos critérios em relação à obtenção das amostras histológicas, à seleção da região de interesse (RI) da análise e aos determinantes utilizados na descrição. Foi observado que a dieta pastosa e o alojamento em gaiolas com piso aramado sobre base de maravalha e papel craft possibilitaram melhores condições de sobrevivência aos animais. Os dispositivos intra-orais confeccionados individualmente e retidos via amarrilhos com fios ortodônticos nos incisivos e molares se mantiveram satisfatoriamente em posição durante todo o experimento para a maioria dos animais (72,6%), sobretudo no período inicial de 7 dias. O procedimento para o reembasamento dos dispositivos foi considerado apropriado em ambos os períodos testados. Houve perda de alguns animais por desnutrição (9,5%) ou durante a anestesia (4,1%). As amostras histológicas obtidas da mucosa palatina (tecido mole) foram descartadas por serem adequadas para a determinação da RI, sendo utilizadas apenas aquelas provenientes de tecidos mole e duro (n=12). A RI mais satisfatória para análise histopatológica correspondeu à área entre os primeiros molares, de um feixe neurovascular ao outro. A simples comparação visual das fotomicrografias obtidas na análise histopatológica descritiva sugeriu a ausência de infiltrado inflamatório em todos os grupos testados para ambos os períodos de avaliação. Após 7 dias, a espessura da camada córnea, estratificação das camadas do epitélio e disposição das fibras colágenas, dos vasos e das células da lâmina própria dos grupos de estudo se apresentaram similares ao observado para o grupo CN, havendo sinais de reabsorção óssea palatina apenas no grupo CG. Aos 14 dias, foi observado aumento da espessura de ortoqueratina e compressão das células epiteliais e do tecido conjuntivo da lâmina própria de todos os grupos em relação ao CN. Neste período, a reabsorção óssea palatina foi presente em todos os grupos, exceto CN e CP, com maior intensidade no grupo CG. Foi possível sugerir que os dispositivos acrílicos intra-orais podem ser considerados funcionais e viáveis para os testes de materiais para base de próteses e avaliação de tratamento para estomatite protética em ratos, sobretudo em períodos de até 7 dias. / The purpose of this study was to produce preliminary methodological standards to allow the use of an intraoral acrylic device adjusted to the palatal mucosa of rats and capable of relining with temporary resilient material (Trusoft) modified with antimicrobial agents in the minimum inhibitory concentrations (MICs) for Candida albicans biofilm. To design this adjustment, parameters were determined in relation to the diet and housing of animals as users of these devices. The total sample (n=115) was divided into six groups: Negative control (NC): without an acrylic intraoral device; Overall Control (OC): device without relining; Positive Control (PC): device relined with Trusoft without the addition of drugs; Chlorhexidine diacetate (CHL): device relined with Trusoft containing chlorhexidine diacetate (0.064 g/mL); Ketoconazole (KET): device relined with Trusoft containing ketoconazole (0.128g/mL); and Nystatin (NYT): acrylic device relined with Trusoft containing nystatin (0.032 g/mL). The animals were sacrificed after 7 or 14 days from the installation ofthe intra-oral devices. The adaptations for obtaining the devices included the impression technique, the reline method and the means of retaining in the palatal mucosa of animals. To obtain the standard descriptive histopathological analysis, criteria had been established in relation to obtaining the histological samples,selecting the region of interest (RI) of analysis and the criteria utilized in the description. It was observed that a paste diet and housing in cages with a wired fence floor with an additional base of wood shavings and craft paper enabled the best possible survival conditions for the animals. The individually made intra-oral devices retained with stainless steel wires at the incisors and molars remained satisfactorily in position throughout the experiment for most animals (72.6%), mainly in the initial period of 7 days. The procedure for the relining of the devices was deemed appropriate for both test periods. Some animals were lost from malnutrition (9.5%) or failure to recover from the anaesthetic (4.1%). The obtained histological samples of the palatine mucosa (soft tissue) were discarded as inappropriate for the determination of the RI, having utilized only those derived from hard and soft tissues (n = 12). The RI most satisfactory for the histopathological analysis corresponded to the area between the first molars from a palatal neurovascular bundle. A simple visual comparison of the photomicrographs obtained from the descriptive histopathological analysis suggested the absence of an inflammatory infiltrate in all the groups tested for both periods. After 7 days, the thickness of the keratin, the layers of the stratified epithelium and arrangement of the collagen fibers, cells and vessels of the lamina from the mucosa of the study groups presented similar findings to those observed for the NC group, having signals of palatine bone resorption only in the OC group. At 14 days, there was an increasing thickness of the keratin and compression of the epithelial cells and connective tissue of the lamina from the mucosa of all groups in relation to the NC group. In this period, the palatal bone resorption was present in all groups except the NC and PC groups, with a greater intensity in the OC group. It was possible to suggest that the intraoral acrylic devices may be considered as functional and viable for the testing of denture base materials and the evaluation of treatment for denture stomatitis in rats, especially in periods of up to 7 days.

Reembasadores resilientes temporários contendo fármacos antifúngicos foram sugeridos como um tratamento adjunto para estomatite protética. No entanto, antes de utilizar clinicamente estes reembasadores modificados em humanos, é importante avaliar a sua biocompatibilidade em modelos animais. Este estudo avaliou a biocompatibilidade in vivo de um reembasador resiliente temporário para base de prótese (Trusoft) modificado por agentes antimicrobianos em suas mínimas concentrações inibitórias (MCIs) para biofilme de Candida albicans. Dispositivos acrílicos intra-orais (DIOs) foram confeccionados individualmente para 60 ratos Wistar. Os ratos foram divididos em 6 grupos (n=5): 3 grupos controle (Negativo: sem DIO; Geral: DIO sem reembasamento; Positivo: DIO reembasado com Trusoft sem fármacos) e 3 grupos experimentais (DIOs reembasados com Trusoft modificados por fármacos em suas respectivas MCIs: 0,032 g de nistatina, 0,064 g de diacetato de clorexidina e 0,128 g de cetoconazol). Os ratos com ou sem os DIOs foram eutanasiados após 7 e 14 dias de avaliação. A análise histopatológica qualitativa foi realizada comparando-se fotomicrografias de secções histológicas, que foram obtidas utilizando um microscópio óptico que abrangeu transversalmente a região intermolares. As alterações morfológicas no epitélio e queratina foram analisadas quantitativamente através da realização de planimetria computadorizada. Os dados quantitativos foram analisados utilizando ANOVA 2-fatores e teste de Tukey (=0,05). A análise quantitativa mostrou que apenas o grupo com DIO contendo cetoconazol diminuiu significativamente a espessura e a área do estrato córneo em comparação com os outros grupos (p<0,05), que não apresentaram diferenças significativas entre si (p>0,05). Estes resultados estiveram de acordo com os obtidos para análise qualitativa. A incorporação de MCIs de nistatina e diacetato de clorexidina no Trusoft não induziram alterações histopatológicas na mucosa palatina de ratos, sugerindo a biocompatibilidade in vivo deste protocolo para o tratamento de estomatite protética. / Temporary resilient denture liners containing antifungal drugs have been suggested as an adjunct treatment for denture stomatitis. However, before clinically using these modified liners in humans, it is important to assess their biocompatibility in animal models. This study evaluated the in vivo biocompatibility of a temporary soft denture liner (Trusoft) modified by antimicrobial agents at their minimum inhibitory concentrations (MICs) for biofilm formation by Candida albicans. Methods: Acrylic intraoral devices (IODs) were individually made for 60 Wistar rats. The rats were divided into the following 6 groups (n=5): 3 control groups (Negative: without IOD; General: IOD without relining; Positive: IOD relined with Trusoft without drugs) and 3 experimental groups (IOD relined with Trusoft modified by drugs at MICs: 0.032 g for nystatin, 0.064 g for chlorhexidine diacetate, and 0.128 g for ketoconazole). The rats with or without the IODs were sacrificed after 7 or 14 days of evaluation. Histopathological qualitative analysis was performed by comparing photomicrographs of histological sections, which were obtained using an optical microscope that transversely covered the inter-molar region. Morphological changes in the epithelium and keratin were quantitatively analyzed by performing computerized planimetry. Quantitative data were analyzed using 2-way ANOVA and Tukey\'s test (=0.05). Quantitative analysis showed that only the group with IOD containing ketoconazole significantly decreased the thickness and area of the stratum corneum compared with the other groups (p<0.05), which showed no significant differences between each other (p>0.05). These results were in accordance with those obtained for qualitative analysis. Incorporation of MICs of nystatin and chlorhexidine diacetate in Trusoft did not induce histopathological changes in the palatal mucosa of rats, suggesting the in vivo biocompatibility of this protocol for treating denture stomatitis.

Introdução: Em pacientes críticos, como os grandes queimados, todos os parâmetros farmacocinéticos (absorção, distribuição, metabolismo e excreção) de muitas classes de drogas, incluindo antimicrobianos, estão alterados. Devido à forte associação entre a terapia antimicrobiana adequada em pacientes com queimaduras e mortalidade, intervenções como o monitoramento terapêutico de drogas podem ser uteis para otimizar a concentração sérica desses agentes em diferentes estágios do estado hiperdinâmico. Portanto, é possível melhorar desfecho clínico e sobrevivência além de reduzir o desenvolvimento de resistência. O objetivo deste estudo foi analisar o impacto em mortalidade de uma estratégia de ajuste de dose de acordo com o monitoramento terapêutico e modelagem farmacocinética/farmacodinâmica em pacientes de uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI) para Queimados. Métodos: Um estudo comparativo, retrospectivo, foi conduzido entre pacientes admitidos com pneumonia, infecção em queimadura, infecção de corrente sanguínea e/ou infecção do trato urinário associados à assistência à saúde em uma UTI para Queimados do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP). Estes pacientes foram divididos em dois grupos: aqueles admitidos de maio de 2005 a outubro de 2008 que receberam antibioticoterapia em regime de dose convencional proposto pelo Grupo de Controle de Infecção Hospitalar do HC-FMUSP e aqueles admitidos de novembro de 2008 a junho de 2011 que receberam terapia antimicrobiana com dose ajustada de acordo com o monitoramento plasmático e modelagem farmacocinética. Características gerais dos dois grupos foram analisadas e desfechos clínicos (melhora dos sinais e sintomas da infecção), mortalidade em 14 dias e mortalidade hospitalar foram comparados. Resultados: 63 pacientes admitidos na UTI de Queimados apresentaram os critérios de inclusão para o grupo de tratamento convencional e 77 para o grupo de tratamento monitorado. Comparando dois grupos homogêneos em suas características gerais, houve diferenças quanto ao número de desbridamentos realizados e história de alcoolismo e uso de drogas ilícitas, mais frequentes no grupo de tratamento monitorado. Melhora clínica ocorreu em 56% dos pacientes sob regime monitorado e a mortalidade hospitalar foi similar entre os grupos. Pertencer a um dos grupos de tratamento não afetou o prognóstico. Na análise multivariada final, variáveis significativamente associadas com mortalidade hospitalar foram superfície corporal queimada maior que 30%, idade mais avançada e sexo masculino. Conclusão: Nosso estudo demonstrou que a estratégia de monitoramento terapêutico de antimicrobianos não alterou prognóstico de pacientes queimados. Acreditamos que são necessários mais estudos para embasar esta estratégia / Introduction: In critical patients, such as burn patients, pharmacokinetic parameters (absorption, distribution, metabolism and excretion) of many classes of drugs, including antibiotics, are altered. The aim of this study was to compare two groups of burned patients under treatment for healthcare associated infections with and without therapeutic drug monitoring (TDM) based on PK/PD modeling. Methods: A comparative study was conducted with patients with healthcare-associated pneumonia, burn infection, bloodstream infection and urinary tract infection in the Burn Intensive Care Unit (ICU) of a tertiary-care hospital. These patients were divided into two groups: 1) those admitted from May 2005 to October 2008 who received conventional antimicrobial dose regimen; and 2) those admitted from November 2008 to June, 2011 who received antibiotics with doses adjusted according to plasma monitoring and pharmacokinetics modeling. General characteristics of the groups were analyzed and clinical outcomes, 14-day and in-hospital mortality. Results: 63 patients formed the conventional treatment group and 77 the monitored treatment group. The groups were very homogeneous. Improvement occurred in 56% of the patients under monitored treatment and the in-hospital mortality was similar between groups. In the final multivariate models, variables significantly associated with in-hospital mortality were total burn surface area (TBSA) > 30%, older age and male sex. Treatment group did not affect the prognosis. Conclusions: TDM for antimicrobial treatment did not alter the prognosis of burn patients. More trials are needed to support the use of TDM to optimize treatment in burn patients

Bicamadas de lípides sintéticos como o brometo de dioctadecildimetilamônio (DODAB) ou dihexadecilfosfato de sódio (DHP) foram avaliadas como carreadores em potencial de miconazol (MCZ), uma droga altamente hidrofóbica. A solubilização e/ou estabilização do MCZ foi avaliada através de métodos de espectrofotometria no UV-visível, determinações de tamanho por espalhamento de luz dinâmico, determinações de potencial zeta e cinéticas de agregação da droga por medidas turbidez em presença ou ausência das dispersões dos anfifílicos. Os resultados mostram que há uma notável capacidade de solubilização de MCZ em fragmentos de membrana (BF) de dispersões de DODAB, o que não ocorre para vesículas grandes (LV) dos mesmos anfifilicos. Ainda, demonstrou-se uma evidente estabilização coloidal do particulado de droga em dispersão aquosa por deposição de bicamadas aniônicas de DHP sobre os grânulos catiônicos do miconazol. Em elevadas proporções molares drogai lípide sintético observou-se um aumento na estabilidade coloidal do particulado de droga que foi atribuído ao recobrimento do particulado catiônico de droga com bicamadas aniônicas. Posteriormente, foram avaliadas as possíveis interações existentes entre células de Candida albicans e fragmentos e/ou vesículas de DODAB. Isotermas de adsorção foram obtidas em função do método de dispersão, concentração do anfifílico e densidade numérica de células. Para os fragmentos de bicamada, as isotermas mostraram-se de alta afinidade (adsorção não-reversivel) não havendo desorção, ao contrário do resultado obtido para as vesículas grandes, onde foi observada desorção a partir da superficie celular. A desorção é favorecida pelo aumento da quantidade de vesículas livres no sobrenadante, sugerindo assim que existe uma significante interação intervesicular de natureza hidrofóbica entre DODAB adsorvido e as vesículas livres. Experimentos de mobilidade eletroforética (ME) mostram a mesma tendência. Dois tipos de interações puderam ser notados. As interações de natureza eletrostática estão presentes em ambas condições (interação das células com fragmento e/ou vesícula). A interação ocorre entre a cabeça carregada do anfifilico e a membrana do fungo. Interações hidrofóbicas possivelmente ocorrem somente em fragmentos de bicamada devido a interações extra-atrativas entre regiões hidrofóbicas da parede celular e as bordas hidrofóbicas dos fragmentos. / Bilayer of synthetic lipids such as sodium dioctadecyldimethylarnrnoniurn bromide (DODAB) or dihexadecylphosphate (DHP) were assessed as potential carriers for miconazol (MCZ), a very hydrophobic drug. The solubilization anel/or stabilization of the drug were tested by UV-visible spectrophotometry methods, size deterrninations by dynamic light scattering, zeta-potential detenninations and drug aggregations kinetics by turbidity changes in the presence or absence of amphiphiles dispersions. Our results show an outstanding capacity solubilization of MCZ in bilayer fragrnents (BF) of DODAB dispersions, what doesn\'t occur with large vesicles (LV) from the same amphiphiles. Still, we have demonstrated a colloidal stabilization of drug particles in water dispersion by deposition of anionic bilayers of DHP on the cationic MCZ granules. In high molar ratio drug/synthetic lipid we observed an increasing colloidal stabilization of drug particles that was attributed to the covering of the drug cationic particles with anionic bilayers. Subsequently, were evaluated the possible interactions that existed between Candida Albicans cells and DODAB fragrnents and/or vesicles. Adsorption isotherrns were obtained as a function of the method of dispersion, concentration of the amphiphiles and cells number density. For the bilayer fragrnents, the isotherrns showed high affinity (irreversible adsorption) without desorption, in contrast with the isotherrns obtained for large vesicles, where we observed desorption of these vesicles over the cellular surface. The desorption was favored by the increase of free vesicles in the supematant, thus suggesting that there is a significant inter-vesicle interaction ofhydrophobic nature between adsorbed DODAB and the free vesicles. Electrophoretic mobility (ME) experiments showed the same tendency. Two types of interactions could be observed. The electrostatic nature interactions were present in both conditions (cellular interaction with fragrnent and/or vesicle). The interaction occurs between the charged head of the amphiphilic and the fungus membrane. Hydrophobic interactions possibly only occur with bilayer fragrnents due the extraattractive interaction existing between hydrophobic regions of the cell wall and the hydrophobic borders of the fragrnents.

No capítulo 1, a modelagem HQSAR, a docagem e os estudos de ROCS foram construídos utilizando uma série de 57 inibidores de cruzaína. O melhor modelo HQSAR (q2 = 0,70, r2 = 0,95, r2test = 0,62, q2rand. = 0,09 and r2rand. = 0,26) foi utilizado para predizer a potência de 121 compostos extraídos da literatura (conjunto de dados V1), resultando em um valor de r2 satisfatório de 0,65 para essa validação externa. Uma validação externa adicional foi empregada utilizando uma série de 1223 compostos extraído dos bancos de dados ChEMBL e CDD (conjunto de dados V3); nessa validação externa o valor de AUC (área sob a curva) para a curva ROC foi de 0,70. Os mapas de contribuição, obtidos para o melhor modelo HQSAR 3.4, estão de acordo com as predições do modo de interação e com as bioatividades dos compostos estudados. Nos estudos de ROCS, a forma molecular utilizada como filtro, foi útil na rápida identificação de modificações moleculares promissoras para inibidores de cruzaína. O valor de AUC obtido com a curva ROC foi de 0,72, isso indica que o método foi muito eficiente na distinção entre inibidores ativos e inativos da enzima cruzaína. Em seguida, o melhor modelo HQSAR foi utilizado para predizer os valores de pIC50 para novos compostos. Alguns dos compostos identificados, utilizando esse método, demonstraram valores de potência calculada maior do que a série de treinamento em estudo. No capítulo 2, os efeitos sobre a potência na inibição da enzima cruzaína pela substituição de um grupo nitrila como warhead por outros grupos foi avaliada. Com a síntese de 20 compostos do tipo dipeptidil, avaliou-se a relação estrutura-atividade (SAR), baseado na troca do grupo warhead na porção P1\'. O grupo oxima foi mais potente que o grupo correspondente nitrila em 0,7 unidades logarítmicas. Os compostos do tipo dipeptidil aldeídos e azanitrila obtiveram potências mais elevadas do que o correspondente dipeptidil nitrila em duas de magnitude. Os compostos dipeptidil alfa-beta insaturados foram menos potentes do que o correspondente dipeptidil nitrila. No capítulo 3, estratégias de química medicinal foram empregadas nas sínteses de 23 novos análogos, contendo o esqueleto básico de imidazopiridina. Sete e doze compostos sintetizados exibiram EC50 <= 1µM in vitro contra os parasitos Tripanosoma cruzi (T. cruzi) e brucei (T. brucei), respectivamente. Com os resultados promissores de atividade biológica in vitro, citotoxicidade, estabilidade metabólica, ligação proteica e propriedades farmacocinéticas, o composto 41 foi selecionado como candidato para os estudos de eficácia in vivo. Esse composto foi submetido em um modelo agudo da infecção com T. cruzi em ratos (cepa Tulahuen). Depois de estabelecida a infecção, os ratos foram dosados duas vezes ao dia, durante 5 dias; e monitorados por 6 semanas usando um sistema de imagem in vivo IVIS (do inglês, \"In Vivo Imaging System\"). O composto 41 demonstrou inibição parasitária comparável com o grupo de treinamento dosado com benzonidazol. O composto 41 representa um potencial líder para o desenvolvimento de novos fármacos para o tratamento de tripanossomíases. / In chapter 1, the HQSAR, molecular docking and ROCS were applied to a dataset of 57 cruzain inhibitors. The best HQSAR model (q2 = 0.70, r2 = 0.95, r2test = 0.62, q2rand. = 0.09 and r2rand. = 0.26) was then used to predict the potencies of 121 unknown compounds (the V1 database), giving rise to a satisfactory predictive r2 value of 0.65 (external validation). By employing an extra external dataset comprising 1223 compounds (the V3 database) either retrieved from the ChEMBL or CDD databases, an overall ROC AUC (area under the curve) score well over 0.70 was obtained. The contribution maps obtained with the best HQSAR model (model 3.4) are in agreement with the predicted binding mode and with the biological potencies of the studied compounds. We also screened these compounds using the ROCS method, a Gaussian-shape volume filter able to identify quickly the shapes that match a query molecule. The AUC obtained with the ROC curves (ROC AUC) was 0.72, indicating that the method was very efficient in distinguishing between active and inactive cruzain inhibitors. These set of information guided us to propose novel cruzain inhibitors to be synthesized. Then, the best HQSAR model obtained was used to predict the pIC50 values of these new compounds. Some compounds identified using this method has shown calculated potencies higher than those which have originated them. In chapter 2, the effects on potency of cruzain inhibition of replacing a nitrile group with alternative warheads were explored; with the syntheses of 20 dipeptidyl compounds, we explored the structure activity relationships (SAR) based on exchanging of the warhead portion (P1\'). The oxime was 0.7 units more potent than the corresponding nitrile. Dipeptide aldehydes and azadipeptide nitriles were found to be two orders of magnitude more potent than the corresponding dipeptide nitriles. The vinyl esters and amides were less potent than the corresponding nitrile by between one and two orders of magnitude. In chapter 3, we synthesized 23 new imidazopyridine analogues arising from medicinal chemistry optimization at different sites on the molecule. Seven and twelve compounds exhibited an in vitro EC50 <= 1µM against Trypanosoma cruzi (T. cruzi) and Trypanosoma brucei (T. brucei) parasites, respectively. Based on promising results of in vitro activity (EC50 &lt; 100 nM), cytotoxicity, metabolic stability, protein binding and pharmacokinetics (PK) properties, compound 41 was selected as a candidate for in vivo efficacy studies. This compound was screened in an acute mouse model against T.cruzi (Tulahuen strain). After established infection, mice were dosed twice a day for 5 days, and then monitored for 6 weeks using an in vivo imaging system (IVIS). Compound 41 demonstrated parasite inhibition comparable to the benznidazole treatment group. Compound 41 represents a potential lead for the development of drugs to treat trypanosomiasis.

Orientador: Mara Correa Lelles Nogueira / Banca: Doroti de Oliveira Garcia / Banca: Aripuanã S. Aranha Watanabe / Banca: Nilton Erbet Lincopan Huenuman / Banca: Mânlio Tasso de Oliveira Mota / Resumo: O gênero Enterobacter compreende bactérias anaeróbias facultativas, fermentadores de glicose e ubíquo na natureza. Atualmente, existem 28 espécies de Enterobacter spp que podem ser identificadas por métodos bioquímicos, moleculares ou por espectrometria de massa. As infecções mais causadas por Enterobacter spp são de pele e tecidos moles, pneumonias e bacteremias, e, para o tratamento destas, os antimicrobianos mais utilizados são carbapênemicos, cefalosporinas e quinolonas. Entretanto, a resistência aos antimicrobianos tem aumentado no gênero Enterobacter, principalmente, devido à mecanismos enzimáticos codificados por genes plasmidiais. Os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, investigar genes de beta-lactamases (blaTEM-like, blaSHVlike, blaVEB-like, blaPER-like, blaGES-like, blaCTX-M-like), carbapenemases (blaKPC, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaGES e blaOXA-48) e de enzimas que conferem resistência as quinolonas (qnrA, qnrB, qnrS, -Ib-cr e qepA) e determinar a similaridade genética entre os isolados de Enterobacter spp. Sessenta isolados de Enterobacter spp resistentes aos carbapenêmicos, cefalosporinas de terceira e quarta geração e quinolonas provenientes de pacientes admitidos em diferentes unidades de internação do Hospital de Base de São José do Rio Preto (HB) foram encaminhados ao laboratório CIM-Centro de Investigação de Microrganismos da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP), onde foram realizadas a extração de DNA, a investigação dos genes por PCR e a tipagem molecular por ERIC-PCR. O gene de resistência blaKPC foi detectado em 22% dos isolados. Os genes blaTEM-like e blaCTX-Mlike em 82% e blaSHV-like em 3% dos isolados respectivamente. O grupo 1 de CTX-M foi detectado em 56,5%, do grupo 2 em 41,3% e do grupo 8/25 em 2,2% dos isolados. Os genes de resistência a quinolonas detectados foram qnrA, qnrB e qnrS em 40%, 22% 2% dos isolados... / Abstract: The Enterobacter genus comprises facultative anaerobic bacteria, glucose fermenters and ubiquitous in nature. Currently, there are 25 species of Enterobacter spp and two which can be identified by biochemical, molecular methods or by mass spectrometry. Infections caused by Enterobacter spp are skin and soft tissues, bacteremia and pneumonia, and for the treatment of these, the most commonly used antimicrobials are carbapenems, cephalosporins and quinolones. However, antimicrobial resistance has increased the Enterobacter spp mainly due to enzymatic mechanisms encoded by plasmid genes. The objectives of this study were to evaluate the antimicrobial susceptibility profile, investigate beta-lactamase genes (blaTEM-like, blaSHV-like, blaVEB-like, blaPER-like, blaGES-like, blaCTX-M-like), carbapenemases (blaKPC, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaGES and blaOXA-48) and enzymes that confer resistance to quinolones (qnrA, qnrB, qnrS, aac (6') - Ib-cr and qepA) and determine the genetic similarity among isolates of Enterobacter spp. Sixty isolates of Enterobacter spp resistant to carbapenems, cephalosporins ( third and fourth generation) and quinolones from patients admitted to the Base Hospital (HB), were send Laboratory - Microorganisms Research Centre the School of Medicine of São José do Rio Preto (FAMERP), where DNA extraction, the investigation of genes and molecular typing by ERIC-PCR were carried out. The blaKPC resistance gene was detected in 22% of the isolates. The genes blaTEM-like and blaCTX-M-like 82%, blaSHV-like 3% of the isolates. The group 1 CTX-M was detected in 56.5%, of group 2 in 41.3% and 8/25 group at 2.2% of the isolates. The quinolone resistance genes qnrA, qnrB, and qnrS were detected in 40% 22% 2% of the isolates, respectively. The ERIC-PCR typing by genetic generated twelve groups (G1 to G12) for E. cloacae and one group (G1) for E. aerogenes, horizontal transfer of resistance genes in some groups was observed, but the ... / Mestre

O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da adição de mínimas concentrações inibitórias (MCIs) de agentes antimicrobianos para biofilme de Candida albicans na sorção de água e solubilidade de materiais resilientes temporários (Softone e Trusoft) para reembasamento de próteses removíveis. Os grupos de estudo (n=10) foram formados por corpos de prova circulares (50 mm x 0,5 mm) dos materiais sem (controle) ou com a incorporação das MCIs de três fármacos utilizados para tratamento de estomatite protética: nistatina (Ni)-0,032g/mL; diacetato de clorexidina (Cl)- 0,064g/mL; cetoconazol (Ce)- 0,128g/mL. Para determinar a sorção de água e solubilidade, as amostras foram dessecadas, imersas em água por 24 h, 7 ou 14 dias, pesadas, dessecadas e pesadas novamente. Os dados obtidos (&#x3BC;g/mm3) foram analisados por ANOVA 3 fatores e teste de Tukey (&#x3B1;=0,05). Comparado aos respectivos controles, a sorção de água dos dois materiais avaliados aumentou com a adição de nistatina e clorexidina após 24 h e 7 dias de imersão em água (P<0,0001). Após 14 dias de avaliação, exceto pela clorexidina (P<0,0001) no Softone (483,00 ± 61,00 &#x3BC;g/mm3), a sorção dos materiais não foi afetada (P>0,05) pela adição dos fármacos (Softone: Ni- 310,72 ± 55,00 &#x3BC;g/mm3; Ce- 202,13 ± 52,28 &#x3BC;g/mm3/ Trusoft: Ni- 320,26 ± 22,89 &#x3BC;g/mm3; Ce: 300,45 ± 69,49 &#x3BC;g/mm3; Cl: 331,01 ± 48,18 &#x3BC;g/mm3) em comparação aos respectivos controles (Softone: 244,00 ± 42,00 &#x3BC;g/mm3; Trusoft: 274,85 ± 83,12 &#x3BC;g/mm3). Para todos os grupos, o tempo de imersão aumentou (P<0,0001) a solubilidade do Softone (24h: 18,82 ± 9,80 &#x3BC;g/mm3; 7d: 32,16 ± 4,48 &#x3BC;g/mm3; 14d: 58,81 ± 8,79 &#x3BC;g/mm3), mas não do Trusoft (24h: 12,46 ± 4,51 &#x3BC;g/mm3; 7d: 14,34 ± 5,20 &#x3BC;g/mm3; 14d: 15,48 ± 5,68 &#x3BC;g/mm3) (P>0,05). Em relação aos controles e para todos os períodos, a solubilidade dos dois materiais foi alterada com clorexidina e cetoconazol (P<0,0001), mas não sofreu influência da nistatina (P>0,05). Foi possível concluir após 14 dias de imersão em água, a adição das MCIs de nistatina e cetoconazol nos dois materiais resilientes e de clorexidina no Trusoft não interferiu com a sorção de água. A solubilidade dos dois materiais temporários testados não foi alterada pela nistatina em até 14 dias de avaliação. / The objective of the present study was to evaluate the addition of minimum inhibitory concentrations (MICs) of antimicrobial agents for C. albicans biofilm on the water sorption and solubility of temporary resilient materials (Softone e Trusoft) for denture base relining. Test groups (n=10) were formed by disc specimens (50 mm x 0.5 mm) of the materials without (control) or with incorporation of the MICs of three drugs for denture stomatitis\' treatment: nystatin (Nt)- 0.032g/mL; chlorhexidine diacetate (Cl)- 0.064g/mL; ketoconazole (Kt)- 0.128g/mL. To determine the water sorption and solubility, samples were dried, immersed in water for 24 h, 7 or 14 days, weighed, dried and weighed again. Data (&#x3BC;g/mm3) were analyzed by 3-way ANOVA and Tukeys test (&#x3B1;=.05). Compared to the respective controls, the water sorption of the two materials evaluated increased with the addition of nystatin and ketoconazole after 24 h and 7 days of water immersion (P<.0001). After 14 days of evaluation, except by chlorhexidine (P<.0001) in Softone (483.00 ± 61.00 &#x3BC;g/mm3), the sorption of the materials was not affected (P>.05) by the addition of the drugs (Softone: Nt- 310.72 ± 55.00 &#x3BC;g/mm3; Kt- 202.13 ± 52.28 &#x3BC;g/mm3 / Trusoft: Nt- 320.26 ± 22.89 &#x3BC;g/mm3; Kt: 300.45 ± 69.49 &#x3BC;g/mm3; Cl: 300.45 ± 69.49 &#x3BC;g/mm3) compared to the respective controls (Softone: 244.00 ± 42.00 &#x3BC;g/mm3; Trusoft: 274.85 ± 83.12 &#x3BC;g/mm3). For all groups, the immersion time increased (P<.0001) the solubility of Softone (24h: 18.82 ± 9.80 &#x3BC;g/mm3; 7d: 32.16 ± 4.48 &#x3BC;g/mm3; 14d: 58.81 ± 8.79 &#x3BC;g/mm3), but not of Trusoft (24h: 12.46 ± 4.51 &#x3BC;g/mm3; 7d: 14.34 ± 5.20 &#x3BC;g/mm3; 14d: 15.48 ± 5.68 &#x3BC;g/mm3) (P>.05). In comparison to the controls, and for all periods the solubility of the both materials was affected with chlorhexidine and ketoconazole (P<.0001), but not was influenced by nystatin (P>.05). It can be concluded that after 14 days of water immersion the addition of MICs of nystatin and ketoconazole in the both resilient materials and chlorhexidine in the Trusoft did not affect the water sorption. The solubility of the two temporary materials tested was not altered by nystatin up to 14 days.

Made available in DSpace on 2016-06-07T17:12:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-06-03. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-07T17:16:51Z : No. of bitstreams: 1 000864235_20180603.pdf: 404032 bytes, checksum: b266e22e2d4df6bf0f07ab059b407663 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-06-05T12:59:17Z: 000864235_20180603.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-06-05T13:00:21Z : No. of bitstreams: 1 000864235.pdf: 10314327 bytes, checksum: 5298ad6b602124ea408b4e80fcc3351c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O gênero Enterobacter compreende bactérias anaeróbias facultativas, fermentadores de glicose e ubíquo na natureza. Atualmente, existem 28 espécies de Enterobacter spp que podem ser identificadas por métodos bioquímicos, moleculares ou por espectrometria de massa. As infecções mais causadas por Enterobacter spp são de pele e tecidos moles, pneumonias e bacteremias, e, para o tratamento destas, os antimicrobianos mais utilizados são carbapênemicos, cefalosporinas e quinolonas. Entretanto, a resistência aos antimicrobianos tem aumentado no gênero Enterobacter, principalmente, devido à mecanismos enzimáticos codificados por genes plasmidiais. Os objetivos deste estudo foram avaliar o perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos, investigar genes de beta-lactamases (blaTEM-like, blaSHVlike, blaVEB-like, blaPER-like, blaGES-like, blaCTX-M-like), carbapenemases (blaKPC, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaGES e blaOXA-48) e de enzimas que conferem resistência as quinolonas (qnrA, qnrB, qnrS, -Ib-cr e qepA) e determinar a similaridade genética entre os isolados de Enterobacter spp. Sessenta isolados de Enterobacter spp resistentes aos carbapenêmicos, cefalosporinas de terceira e quarta geração e quinolonas provenientes de pacientes admitidos em diferentes unidades de internação do Hospital de Base de São José do Rio Preto (HB) foram encaminhados ao laboratório CIM-Centro de Investigação de Microrganismos da Faculdade de Medicina de São José do Rio Preto (FAMERP), onde foram realizadas a extração de DNA, a investigação dos genes por PCR e a tipagem molecular por ERIC-PCR. O gene de resistência blaKPC foi detectado em 22% dos isolados. Os genes blaTEM-like e blaCTX-Mlike em 82% e blaSHV-like em 3% dos isolados respectivamente. O grupo 1 de CTX-M foi detectado em 56,5%, do grupo 2 em 41,3% e do grupo 8/25 em 2,2% dos isolados. Os genes de resistência a quinolonas detectados foram qnrA, qnrB e qnrS em 40%, 22% 2% dos isolados... / The Enterobacter genus comprises facultative anaerobic bacteria, glucose fermenters and ubiquitous in nature. Currently, there are 25 species of Enterobacter spp and two which can be identified by biochemical, molecular methods or by mass spectrometry. Infections caused by Enterobacter spp are skin and soft tissues, bacteremia and pneumonia, and for the treatment of these, the most commonly used antimicrobials are carbapenems, cephalosporins and quinolones. However, antimicrobial resistance has increased the Enterobacter spp mainly due to enzymatic mechanisms encoded by plasmid genes. The objectives of this study were to evaluate the antimicrobial susceptibility profile, investigate beta-lactamase genes (blaTEM-like, blaSHV-like, blaVEB-like, blaPER-like, blaGES-like, blaCTX-M-like), carbapenemases (blaKPC, blaIMP, blaVIM, blaNDM, blaGES and blaOXA-48) and enzymes that confer resistance to quinolones (qnrA, qnrB, qnrS, aac (6') - Ib-cr and qepA) and determine the genetic similarity among isolates of Enterobacter spp. Sixty isolates of Enterobacter spp resistant to carbapenems, cephalosporins ( third and fourth generation) and quinolones from patients admitted to the Base Hospital (HB), were send Laboratory - Microorganisms Research Centre the School of Medicine of São José do Rio Preto (FAMERP), where DNA extraction, the investigation of genes and molecular typing by ERIC-PCR were carried out. The blaKPC resistance gene was detected in 22% of the isolates. The genes blaTEM-like and blaCTX-M-like 82%, blaSHV-like 3% of the isolates. The group 1 CTX-M was detected in 56.5%, of group 2 in 41.3% and 8/25 group at 2.2% of the isolates. The quinolone resistance genes qnrA, qnrB, and qnrS were detected in 40% 22% 2% of the isolates, respectively. The ERIC-PCR typing by genetic generated twelve groups (G1 to G12) for E. cloacae and one group (G1) for E. aerogenes, horizontal transfer of resistance genes in some groups was observed, but the ...

Introdução: Em pacientes críticos, como os grandes queimados, todos os parâmetros farmacocinéticos (absorção, distribuição, metabolismo e excreção) de muitas classes de drogas, incluindo antimicrobianos, estão alterados. Devido à forte associação entre a terapia antimicrobiana adequada em pacientes com queimaduras e mortalidade, intervenções como o monitoramento terapêutico de drogas podem ser uteis para otimizar a concentração sérica desses agentes em diferentes estágios do estado hiperdinâmico. Portanto, é possível melhorar desfecho clínico e sobrevivência além de reduzir o desenvolvimento de resistência. O objetivo deste estudo foi analisar o impacto em mortalidade de uma estratégia de ajuste de dose de acordo com o monitoramento terapêutico e modelagem farmacocinética/farmacodinâmica em pacientes de uma Unidade de Terapia Intensiva (UTI) para Queimados. Métodos: Um estudo comparativo, retrospectivo, foi conduzido entre pacientes admitidos com pneumonia, infecção em queimadura, infecção de corrente sanguínea e/ou infecção do trato urinário associados à assistência à saúde em uma UTI para Queimados do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo (HC-FMUSP). Estes pacientes foram divididos em dois grupos: aqueles admitidos de maio de 2005 a outubro de 2008 que receberam antibioticoterapia em regime de dose convencional proposto pelo Grupo de Controle de Infecção Hospitalar do HC-FMUSP e aqueles admitidos de novembro de 2008 a junho de 2011 que receberam terapia antimicrobiana com dose ajustada de acordo com o monitoramento plasmático e modelagem farmacocinética. Características gerais dos dois grupos foram analisadas e desfechos clínicos (melhora dos sinais e sintomas da infecção), mortalidade em 14 dias e mortalidade hospitalar foram comparados. Resultados: 63 pacientes admitidos na UTI de Queimados apresentaram os critérios de inclusão para o grupo de tratamento convencional e 77 para o grupo de tratamento monitorado. Comparando dois grupos homogêneos em suas características gerais, houve diferenças quanto ao número de desbridamentos realizados e história de alcoolismo e uso de drogas ilícitas, mais frequentes no grupo de tratamento monitorado. Melhora clínica ocorreu em 56% dos pacientes sob regime monitorado e a mortalidade hospitalar foi similar entre os grupos. Pertencer a um dos grupos de tratamento não afetou o prognóstico. Na análise multivariada final, variáveis significativamente associadas com mortalidade hospitalar foram superfície corporal queimada maior que 30%, idade mais avançada e sexo masculino. Conclusão: Nosso estudo demonstrou que a estratégia de monitoramento terapêutico de antimicrobianos não alterou prognóstico de pacientes queimados. Acreditamos que são necessários mais estudos para embasar esta estratégia / Introduction: In critical patients, such as burn patients, pharmacokinetic parameters (absorption, distribution, metabolism and excretion) of many classes of drugs, including antibiotics, are altered. The aim of this study was to compare two groups of burned patients under treatment for healthcare associated infections with and without therapeutic drug monitoring (TDM) based on PK/PD modeling. Methods: A comparative study was conducted with patients with healthcare-associated pneumonia, burn infection, bloodstream infection and urinary tract infection in the Burn Intensive Care Unit (ICU) of a tertiary-care hospital. These patients were divided into two groups: 1) those admitted from May 2005 to October 2008 who received conventional antimicrobial dose regimen; and 2) those admitted from November 2008 to June, 2011 who received antibiotics with doses adjusted according to plasma monitoring and pharmacokinetics modeling. General characteristics of the groups were analyzed and clinical outcomes, 14-day and in-hospital mortality. Results: 63 patients formed the conventional treatment group and 77 the monitored treatment group. The groups were very homogeneous. Improvement occurred in 56% of the patients under monitored treatment and the in-hospital mortality was similar between groups. In the final multivariate models, variables significantly associated with in-hospital mortality were total burn surface area (TBSA) > 30%, older age and male sex. Treatment group did not affect the prognosis. Conclusions: TDM for antimicrobial treatment did not alter the prognosis of burn patients. More trials are needed to support the use of TDM to optimize treatment in burn patients