Orientador: Fabiana Pilarski / Banca: Manoel Victor Franco Lemos / Diogo Teruo Hashimoto / Resumo: A intensificação na criação de tilápia tem aumentado gradativamente o número de enfermidades bacterianas nos peixes, com destaque para o Streptococcus sp. e Aeromonas sp., que provocam um número elevado de morbidade e mortalidade nos peixes. Quando surtos de bacterioses ocorrem, um grande número de antimicrobianos é utilizado, muitas vezes de forma indiscriminada e sem critérios, causando danos à saúde dos peixes, meio ambiente e consumidor. O aparecimento de cepas bacterianas resistentes a uma ou mais drogas, incluindo à oxitetraciclina, já se tornou a maior ameaça à saúde pública da atualidade, e a Organização Mundial de Saúde, já há algum tempo, tenta regulamentar o uso não terapêutico destas substâncias. Assim, este estudo teve como objetivo elucidar o perfil de resistência da Aeromonas sp. e do Streptococcus sp. aos dois antimicrobianos legalizados para uso na piscicultura brasileira (florfenicol e oxitetraciclina) e detectar os genes envolvidos na resistência à tetraciclina. Para tanto, foram utilizadas 108 bactérias, isoladas de tilápia-do-Nilo com sinais clínicos característicos de aeromonose ou estreptococose, as quais foram submetidas ao teste de susceptibilidade aos antimicrobianos oxitetraciclina e florfenicol, através da concentração mínima inibitória (MIC) pelo método da microdiluição e identificadas como cepas sensíveis ou resistentes. Também foi verificado a presença dos genes de resistência (tetA, tetE, tetL e tetM) à oxitetraciclina atravé... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The tilapia production has gradually increased the number of fish bacterial diseases, especially for Streptococcussp. and Aeromonassp. which cause a high number of morbidity and mortality in fish. When bacterial diseases outbreaks occur, a large number of antimicrobials are used, often indiscriminate causing damage to fish health, environment and consumer. The appearance of resistant bacterial strains to one or more drugs, including oxytetracycline, has become the greatest threat to public health today, and the World Health Organization, since some time ago, tried to regulate the non-therapeutic use of these substances. This study aimed to elucidate the resistance profile of Aeromonas sp. and Streptococcus sp. to two antimicrobials florfenicol and oxytetracycline, legalized for the Brazilian fish production and to detect genes involved in resistance to tetracycline. Therefore, we used 108 bacteria isolated from Nile tilapia with clinical characteristic signs of Aeromonas or Streptococcus infection, which were submitted to the susceptibility test to oxytetracycline and florfenicol antimicrobial by minimum inhibitory concentration (MIC) using the microdilution method and identified as wild or non-wild strains. It was alsofound the presence of resistance genes (tetA, tetE, tetL and tet M) oxytetracycline by PCR analysis. As a result of MIC for the antimicrobial agents tested, one variation of oxytetracycline for Aeromonas between 0,06 to 32 µg/ml and 0,125 to 1... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Rodrigo Fernando Costa Marques / Banca: Miguel Jafelicci Junior / Banca: Wilton Rogério Lustri / Resumo: O presente trabalho consiste na funcionalização do fluido de perfuração conhecido como bentonita (BN) com grupos funcionais sulfidril (SH) provenientes do reagente 3- mercaptopropil-trimetoxissilano (MPTS) e nanopartículas de prata (NPs/Ag), visando a inibição da biocorrosão por oxidação de bactérias. Para tanto, a argila do tipo bentonita, constituída principalmente do argilomineral montmorilonita, foi modificada através de rota de inserção de organossilano e nanopartículas de prata (NPs/Ag) em sua estrutura, sendo um processo favorecido pelo efeito redutor do grupo tiol, proveniente do silano. As amostras funcionalizadas em concentrações distintas de Ag foram testadas contra a ação da ferrobactéria do tipo Thiobacillus ferrooxidans. Para testar o efeito antibacteriano do material híbrido, utilizou-se metodologia em meio de cultura T&K, onde foi possível medir a capacidade de inibição da oxidação de Fe2+ a Fe3+ por unidade de tempo. O processo de modificação proposto permitiu a manutenção da estrutura original da bentonita, bem como a criação de nanopartículas de prata, cujo efeito antibacteriano inibiu a biocorrosão de Fe2+ obtendo, desta forma, fluido de perfuração funcionalizado com grande potencial de aplicação em obras de perfuração de poços tubulares profundos. / Abstract: This work proposes the functionalization of the drilling fluid known as bentonite (BN) with sulfhydryl functional groups (SH) from the reagent 3-mercaptopropyltrimethoxysilane (MPTS) and silver nanoparticles (Ag/NPs), to inhibit corrosion by bacteria that oxidize metal. Therefore, the type clay bentonite, consisting mainly of montmorillonite clay mineral, was modified through organosilane insertion route and silver nanoparticles in its structure, because this is a process favored by the reducing effect of the thiol group from the silane. Samples functionalized in different concentrations of Ag were tested against the action of ferrobactéria type Thiobacillus ferrooxidans. To test the antibacterial effect of the hybrid material, was used T&K methodology, where it was possible to measure the capacity to inhibit the oxidation of Fe2+ to Fe3+ per unit time. The planned modification process, permitted the maintenance the original structure of the bentonite, as well as the creation of silver nanoparticles, that due to the antibacterial effect, has inhibited biocorrosion of Fe2+, obtained in this way, a drilling fluid functionalized with great potential for application in drilling works of deep wells. / Mestre

Orientador: Newton Luiz Dias Filho / Banca: Devaney Ribeiro do Carmo / Banca: Marcio José Tiera / Banca: Vitor de Cinque Almeida / Banca: Affonso Celso Gonçalves Junior / Resumo: A presença de compostos farmacológicos nos mananciais de abastecimento representa um comprometimento à qualidade das águas destinadas ao consumo humano. A introdução destes compostos no meio ambiente através de fontes antropogênicas constitui um risco latente para os organismos aquáticos e terrestres. Alguns estudos reportam para a reduzida efetividade na remoção dos fármacos presentes na água bruta durante seu tratamento em uma Estação de Tratamento. Diante deste tema, o presente estudo avaliou a capacidade de remoção dos antibióticos ampicilina, amoxicilina, cefalexina e ciprofloxacina, via processo de adsorção em batelada e coluna, utilizando seguintes adsorventes: PET (pós uso), bagaço de cana-de- açúcar (BCA), argila funcionalizada com N-dodecil-2-pirrolidona (Mo-DDP), sílica e oligômero poliédrico de silsesquioxano organomodificado com tiouréia (SG-TU e POSS-TU, respectivamente) e ciclodextrina modificada com sílica (β-CDSi). Os adsorventes foram caracterizados por titulação de Boehm, FTIR, pH de ponto de carga zero (pH PCZ ) e MEV. As concentrações dos fármacos foram determinadas por cromatografia líquida de alta eficiência. Os parâmetros de adsorção testados mostraram que de 120 a 240 min. de contato são suficientes para a adsorção dos adsorvatos nos adsorventes e que o pH inicial da solução interfere na adsorção em magnitudes diferentes, dependendo do sistema adsorvente-adsorvato avaliado. O equilíbrio da adsorção em batelada foi expresso por meio de isotermas de adsorção de acordo com os modelos de Langmuir, Freundlich, Temkin e D-R. A isoterma Freundlich foi a que melhor representou os dados experimentais para todos os adsorventes, exceto para β-CDSi, que teve o equilíbrio de adsorção melhor representado pelo modelo de Langmuir. A cinética de adsorção dos fármacos foi discutida utilizando os modelos cinéticos de Pseudo- primeira e... / Abstract: The presence of pharmacological compounds in water supply sources are a risk as to the quality of water intended for human consumption. The introduction of these compounds into the environment through anthropogenic sources is a latent risk to aquatic and terrestrial organisms. Some studies report to reduced effectiveness in removing the drugs present in raw water during its treatment in a Water Treatment Plant. Given this aspect, the present study evaluated the removal capacity of antibiotics ampicillin, amoxicillin, cephalexin and ciprofloxacin, via adsorption process in batch and column using the following adsorbents: plastic bottles (after use), sugar cane bagasse (SCB), functionalized clay with N-dodecyl-2- pyrrolidone (Mo-DDP), silica and oligomer polyhedral of organo silsesquioxane modified with thiourea (SG- TU and POSS-TU, respectively), and silica modified by cyclodextrin (β- CDSi). The adsorbents were characterized by Boehm titration, FTIR, pH zero point of charge (pH ZPC ) and SEM. The drug concentrations were determined by high performance liquid chromatography. The adsorption parameters tested showed that 120‟ to 240‟ of contact are sufficient for adsorbent adsorption in the adsorbents which the solution initial pH interferes in the adsorption in different magnitudes, depending on the adsorbent-adsorbate system rated. The adsorption balance batched was expressed through isotherms adsorption according to Langmuir, Freundlich, Temkin and D-R. The Freundlich isotherm was the one that best represented the experimental data for all adsorbents, except for β-CDSi, which had the best adsorption equilibrium represented by the Langmuir model. The kinetics of drugs adsorption was discussed using the kinetic models of Pseudo-first and second order, Elovich, intraparticle diffusion and film diffusion. The Pseudo-second kinetic model can better describe the adsorption of antibiotics in the ... / Doutor

Orientador: Marco Antonio de Andrade Belo / Banca: Fabiana Pilarski / Banca: Wilson Gómez Manrique / Resumo: O presente estudo avaliou o efeito modulador da tilosina sobre a resposta hematológica de tilápias, administrado de forma oral na ração, sobre a reação inflamatória aguda de tilápias do Nilo, O. niloticus, vacinadas e desafiadas com S. agalactiae. 104 tilápias (± 300g) foram acondicionadas aleatoriamente em 13 aquários (n=8), constituindo quatro tratamentos: PF= Padrão Fisiológico (n=8); NT+V= Não tratados com tilosina e vacinados (n=24); NT+NV= Não tratados com tilosina e não vacinados (n=24); T+V= Tratados com tilosina e vacinados (n=24); T+NV= Tratados com tilosina e não vacinados (n=24) Sendo amostrados em três períodos, isto é: seis, 24 e 48 horas pós-desafio (HPD), para a avaliação da resposta no tempo. Bacterina de S. agalactiae (1,0X109 células/mL) foi intramuscularmente administrada 15 dias antes do desafio bacteriano. A aerocistite demonstrou um aumento no número de migração celular conforme a evolução da reação inflamatória (P<0.001), tendo o pico de acúmulo em 48 HPD. Peixes vacinados mostraram maior número de células no exsudato inflamatório em 6 e 48 HPD. No início da reação inflamatória (6 HPD), peixes vacinados e tratados com tilosina apresentaram leucocitose com marcada linfocitose absoluta, monocitose relativa e neutrofilia relativa e absoluta. Tardiamente com 48 HPD, estes animais recuperaram os valores leucocitários, apresentando contagens próximas às observadas em animais controles (PF). Na fase inicial 6 HPD, tilápias apresentaram microcitose, aumento de creatinina, da atividade enzimática de fosfatase alcalina e aspartato aminotransferase, além de alterações no metabolismo energético com diminuição do colesterol, aumento de triglicerídeos e glicose. Com a evolução da infecção 24 e 48 HPD, observou-se macrocitose, diminuições nas contagens de eritrócitos e hemoglobina, sendo estas respostas influenciadas pelo tratamento com tilosina. Os triglicerídeos e colesterol... / Abstract: This study evaluated the effect modulator tylosin on hematologic response of tilapia, administered orally in feed, on acute inflammatory response of Nile tilapia, O. niloticus, vaccinated and challenged with S. agalactiae. 104 tilapia (± 300 g) were placed randomly in 13 aquariums (n = 8), constituting four treatments: PF = Standard Saline (n = 8); + V NT = not treated with tylosin and vaccinated (n = 24); NV + NT = Not treated with tylosin and non-vaccinated (n = 24); T + V = treated with tylosin and vaccinated (n = 24); T + = NV treated with tylosin and non-vaccinated (n = 24). The bacterin of S. agalactiae (1,0x109 cells / ml) was intramuscularly administered 15 days before the bacterial challenge. The aerocistite study showed an increase in cell migration number as the evolution of the inflammatory response (P <0.001) with peak accumulation in 48 of the HPD. Fish vaccinated showed greater number of cells in the inflammatory exudate 6 and 48 HPD. At the beginning of the inflammatory reaction (6 HPD), fish vaccinated and treated with tylosin showed leukocytosis with a marked absolute lymphocytosis on monocyte and neutrophil relative and absolute. Late 48 HPD, these animals recovered the leukocyte values, with scores close to those seen in control animals (PF). In the initial phase 6 HPD, tilapia had microcytosis, increased creatinine, the enzymatic activity of alkaline phosphatase and aspartate aminotransferase, and changes in energy metabolism with decreased cholesterol, increased triglycerides and glucose. With the evolution of the infection HPD 24 and 48, there was macrocytosis, decreases in hemoglobin and red blood cell counts, these responses are affected by treatment with tylosin. Triglycerides and cholesterol returned to baseline levels in vaccinated animals and occurred earlier recovery of creatinine and alkaline phosphatase changes in vaccinated and treated with tylosin tilapia. Vaccinated tilapia and untreated showed ... / Mestre

Orientador: Francisco Palma Rennó / Banca: Arlindo Saran Netto / Banca: Jefferson Rodrigues Gandra / Banca: Rosemary Lais Galati / Banca: Mauro Dal Secco de Oliveira / Resumo: O presente estudo teve como objetivo avaliar os efeitos da inclusão de óleo funcional composto de ácido anacárdico, cardol e cardanol (óleo da castanha de cajú) e ácido ricinoleico (óleo de mamona) na dieta de vacas em lactação sobre consumo, digestibilidade aparente total da matéria seca e nutrientes, fermentação ruminal, produção e composição do leite, síntese de proteína microbiana, perfil metabólico, balanço de nitrogênio e energia. Foram utilizadas vinte e quatro vacas pluriparas da raça Holandês, das quais seis apresentavam cânula ruminal, com peso corporal médio de 618 ± 76 kg, 150,24 ± 91,43 dias em lactação e 29,1 ± 4,01 kg/dia de produção de leite no início do experimento. As vacas foram alocadas em oito Quadrados Latinos 3 x 3, balanceados e contemporâneos, alimentadas com os seguintes tratamentos: 1) controle (CON), composto por dieta basal sem inclusão de aditivos; 2) óleo funcional (OF), com adição de 500 mg/kg da MS (Essential® Oligo Basics) e 3) monensina sódica (MON) com adição de 22 mg/kg da MS. Não houve efeito (P>0,05) dos tratamentos sobre o consumo de matéria seca e nutrientes (kg/dia), coeficientes de digestibilidade e consumo em porcentagem do peso corporal. A inclusão de óleo funcional ou monensina sódica na dieta não alterou (P>0,05) o pH, as concentrações de amônia, acetato e butirato, e a relação acetato: propionato no rúmen. No entanto, as inclusões de óleo funcional ou monensina sódica aumentaram (P<0,05) a concentração de propionato ruminal e o tratamento óleo funcional aumentou (P<0,05) a concentração total de ácidos graxos de cadeia ramificada. As vacas alimentadas com óleo funcional ou monensina sódica apresentaram aumento (P<0,05) da produção de leite, mas a inclusão de monensina sódica reduziu (P<0,05) o teor de gordura do leite. A inclusão de óleo funcional reduziu (P<0,05) a concentração de... / Abstract: This study aimed to evaluate the effects of the inclusion of functional oil composed of anacardic acid, cardol and cardanol (cashew nut shell liquid and castor oil) and ricinoleic acid (castor oil) in diets of dairy cows on intake, total apparent digestibility of dry matter and nutrients, rumen fermentation, milk yield and composition, microbial protein synthesis, metabolic profile, and nitrogen and energy balance. Twenty-four multiparous Holstein cows (six cannulated in the rumen), with an average body weight of 618 ± 76 kg, 150.24 ± 91.43 days in lactation and milk yield of 29.1 ± 4.01 kg/day in the beginning of the study were evaluated. Cows were allocated into eight 3 x 3 Latin squares, balanced and contemporary, and fed with the following treatments: 1) control (CON), composed of basal diet without inclusion of additives; 2) Functional oil (FO) with addition of 500 mg/kg DM (Essential® Oligo Basics) and 3) monensin (MON) with addition of 18 mg/kg DM. There was no effect (P>0.05) of treatments on dry matter and nutrients intake (kg/day), digestibility and intake as percentage of body weight. The inclusion of functional oil or monensin in the diet did not affect (P>0.05) pH, ammonia, acetate and butyrate concentrations and acetate: propionate ratio in the rumen. However, the inclusions of functional oil or monensin increased (P<0.05) the concentration of ruminal propionate. In addition, functional oil treatment increased (P<0.05) total concentration of branched chain fatty acids. The cows fed diets with oil or functional monensin increased (P<0.05) the milk yield of dairy cows, but cows fed diets with monensin had lower (P<0.05) milk fat content. The addition of functional oil in the diet also reduced (P<0.05) the concentration of blood urea. The microbial protein synthesis, and energy and nitrogen balances were not affected by treatments (P>0.05). Inclusion of functional oil or ... / Doutor

Made available in DSpace on 2014-05-21T02:01:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000458139-Texto+Completo-0.pdf: 1285140 bytes, checksum: 007aa44c0f4f5b63ed16f382d6a0b0a9 (MD5) Previous issue date: 2014 / Persistence is an antimicrobial tolerance phenotype with an unclear molecular background. Such tolerant cells (called persisters) correspond to small portions of the bacterial population and are capable of surviving excessive concentrations of the drug, even though they do not possess any specific resistance mechanism. The clinical impact of persisters lies on their capacity to resume multiplication and reestablish the infection after the concentration of the drug diminishes in the infection site, possibly being responsible for the re-incidence and for the chronic aspect of certain infectious diseases. This survival phenotype has been observed in several species; however reports involving A. baumannii are scarce. Therefore, this work aimed to evaluate the persistence phenotype to antimicrobial drugs in nosocomial isolates of A. baumannii, as well as verifying the possible contribution of the sodB gene, which is involved in the control of oxidative stress, and the pmrC gene, a determinant of polymyxins resistance, in persister cells formed upon polymyxin B exposure. In order to do so, clinical isolates of A. baumannii were exposed to high concentration of tobramycin and polymyxin B for 6 h and the number of surviving cells were estimated every 1. 5 h. In addition, the gene expressions at transcription level of two isolates were evaluated after the exposure to polymyxin B for 5 h. A high heterogeneity in the ability to form persister cells was observed among the isolates, presenting no correlation between the fractions of persisters after tobramycin and polymyxin B treatments. These data may indicate genetic or epigenetic variations that are determinant to the development of this characteristic, and that are not related among drugs of different classes. Moreover, the preliminary results of the gene expression assays may suggest that the mechanism involved in the polymyxin B resistance phenotype does not directly participate in persistence to polymyxin B, nor indicate the participation of sodB in this phenotype. In conclusion, the molecular mechanisms for persistence are still to be determined, and this characterization is highly important to assist in the development of new therapeutic options. / A persistência é um fenótipo de tolerância a fármacos antimicrobianos com bases moleculares pouco entendidas. Tais células tolerantes (chamadas de persisters) correspondem a pequenas parcelas da população bacteriana e são capazes de sobreviver a concentrações elevadas do fármaco, mesmo sem possuir mecanismos de resistência específicos. O impacto clínico das células persisters se dá pela capacidade destas células de retomar seu crescimento e restabelecer a infecção após os níveis do fármaco diminuírem no sítio da infecção, podendo ser responsáveis pela reincidência e pelo aspecto crônico de certas doenças infecciosas. Este fenótipo de sobrevivência já foi observado em inúmeras espécies, porém relatos envolvendo o A. baumannii são escassos. Portanto, este trabalho teve por objetivo avaliar o fenótipo de persistência a drogas antimicrobianas em isolados nosocomiais de A. baumannii, bem como verificar a possível participação do gene sodB envolvido no controle do estresse oxidativo e do gene pmrC, determinante de resistência às polimixinas, em células persisters formadas a partir da exposição à polimixina B. Para tal, isolados clínicos de A. baumannii foram expostos a concentrações elevadas de tobramicina e polimixina B por 6 h e o número de células sobreviventes foi averiguado em intervalos de 1,5 h. Além disso, as expressões gênicas a nível de transcrição de dois isolados foram avaliadas após a exposição à polimixina B por 5 h. Uma grande heterogeneidade na capacidade de formação de células persisters foi observada dentre os isolados, não havendo correlação entre a fração de persisters após o tratamento com tobramicina e polimixina B. Estes dados podem indicar variações genéticas ou epigenéticas determinantes para o desenvolvimento desta característica, as quais não são relacionadas entre drogas de diferentes classes. Além disso, os resultados preliminares dos ensaios de expressão gênica podem sugerir que o mecanismo de resistência às polimixinas não participa diretamente na persistência à polimixina B, e que não há a participação de sodB no desenvolvimento e manutenção deste fenótipo nas condições testadas. O estudo desta característica e de seus determinantes moleculares são de suma importância para o desenvolvimento de novas opções terapêuticas.

Orientador: Rondinelli Donizetti Herculano / Co-orientador: Carlos Frederico de Oliveira Graeff / Banca: Antonio Carlos Guastaldi / Banca: Ricardo José de Mendonça / Resumo: A liberação controlada de fármacos é um tópico importante para várias iniciativas em nanotecnologia, como por exemplo, a criação de sistemas otimizados que garantam a liberação desses fármacos num sítio específico a uma taxa controlada, para o tratamento de determinadas doenças. Além dos fármacos, nanopartículas de ouro podem ser utilizadas no auxílio a diagnósticos e na terapêutica de afecções. Diante disso, objetivou-se neste projeto de pesquisa: incorporar fármaco e nanopartículas de ouro em membranas de látex natural; avaliar a interação do mesmo nessas membranas; e analisar a taxa de liberação controlada desses sistemas. Para tanto, foram confeccionadas membranas de látex, com o fármaco metronidazol e nanopartícula de ouro, formando o Sistema de Liberação Controlada (SLC). A taxa de liberação deste nanocomplexo constituído de fármaco/nanopartículas foi monitorada e quantificada utilizando o método de espectroscopia óptica (UV-VIS) e observamos que a liberação do complexo (NpAu + fármaco) obedece a uma função y(t) = y0 +A1e-t/τ1 + A2e-t/τ2. Análises de infra-vermelho (FTIR) mostraram que não houve interação entre o metronidazol e o látex naturalcos. Já análises de difração de raio-X (DRX) mostraram que a cristalinidade é preservada quando incorporados à membrana. À partir da análise via Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), foi possivel observar que o metronidazol estava presente na superfície da membrana de látex e, através da avaliação da resistência mecânica, constatamos que a houve um acréscimo desta propriedade, o que corrobora para que o este material seja considerado uma ótima alternativa como um sistema de liberação controlada. / Abstract: Drug delivery system is an important subject to several initiatives in nanotechnology, such as the development of optimized systems that ensure the release of these drugs to specific sites in a controlled rate, to treatment of specific diseases. Besides drugs, gold nanoparticles can be used in diagnostic and therapeutic of diseases. Therefore, the aim of this project were incorporate a drug (metronidazole) and gold nanoparticle in natural rubber latex membrane; evaluate the interaction with the membrane; and quantify the release rate from membrane. Natural rubber latex membranes were prepared with metronidazole and gold nanoparticle, composing the Drug Delivery System (DDS). The release rate from nanocomplex composed of drug/nanoparticles were monitored and quantified by optical spectroscopic technique (UV-Vis), which the release from nanocomplex (NpAu + drug) correspond to the function y(t) = y0 +A1*e-t/τ1 + A2*e-t/τ2. Infrared analysis (FTIR) did not show interaction between metronidazole and natural rubber latex. From X-ray diffraction (XRD) results showed that the crystallinity was preserved when they were incorporated in the membrane. As of scanning electron microscope (SEM), metronidazole was observed at membrane surface; and by evaluating the mechanical strength, an increase in the properties was observed. These results corroborates that natural rubber latex membrane is relevant and applicable device to be used as delivery system. / Mestre

Introdução. Pseudomonas aeruginosa é um patógeno clinicamente importante. Existem diversos mecanismos de resistência aos antimicrobianos em P. aeruginosa, dentre eles a produção de enzimas (β-lactamases) e sistemas de efluxo se destacam, uma vez que são capazes de conferir resistência aos carbapenêmicos. Objetivo. Avaliar os sistemas de efluxo MexAB-OprM e MexXY em isolados clínicos de P.aeruginosa de pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre-RS e relacionar a expressão destes sistemas com a CIM de meropenem em isolados produtores e não produtores de metalo-beta-lactamases (MBL). Metodologia. Um total de 86 isolados de P. aeruginosa com suscetibilidade reduzida aos carbapenêmicos foram avaliados. A hiperexpressão dos sistemas MexAB e MexXY foi determinada fenotipicamente utilizando inibidor seletivo da bomba (PAβN). MBLs foi determinada por PCR utilizando primers específicos. Resultados. O fenótipo de hiperexpressão dos sistemas de efluxo estudados foi observado em 34 (47,8%) dos 71 isolados negativos para a produção de MBL e em 14 (93.3%) dos 15 isolados MBL positivos. Na presença de PaβN, todos os isolados não produtores de MBL apresentaram uma redução da CIM para meropenem para valores na faixa de suscetibilidade. Entretanto, das 13 P. aeruginosa produtoras de MBL que diminuíram a CIM, essa redução não foi para valores dentro da faixa de sensibilidade. Conclusão. Os isolados de P. aeruginosa não produtores de MBL apresentam resistência ao meropenem devido a hiperexpressão de MexAB-OprM. Na presença de PaβN, independente de apresentarem produção de MBL, o CIM de meropenem reduziu para valores ≤ 8 mg/L. Contudo, quando isolados não apresentavam MBL, a CIM de meropenem reduziu para níveis de sensibilidade. / Introduction. Bacterial efflux pump systems are resistance mechanisms which may lead to therapeutic failure of antibiotic treatment since many antimicrobial agents are substrate for these mechanisms. The aim of the study was to evaluate the expression of the MexAB, MexXY pump efflux and to determine its influence on meropenem MIC in carbapenemase producing and non-producing P. aeruginosa. Methods. A total of 86 non-repetitive clinical isolates of P. aeruginosa with reduced susceptibility to carbapenems were evaluated. Overexperession of MexAB and MexXY efflux systems were evaluated phenotypically using the PAβN selective inhibitor. Metallo-β-lactamases (MBL) were detected by PCR using specific primers. Results. The efflux pump-overexpressed phenotype was observed in 34 (47.8%) MBL-negative and in 14 (93.3%) MBL-positive isolates. In the presence of the PaβN, all non-producers of MBL presented a reduction of meropenem MICs to the range of susceptibility. In contrast, the 13 P. aeruginosa MBL-producing isolates decreased meropenem MICs at least 16-fold but this reduction did not reach the range of susceptibility. Conclusion. P. aeruginosa non-MBL-producing showed resistance to meropenem due to overexpression of MexAB-OprM. In the presence of PaβN, the isolates harboring or not MBL genes, the meropenem MICs were reduced to values ≤8 mg/L. However, when the isolates harbor MBL genes, the meropenem MIC values were reduced to the susceptibility.

Las proteínas ribosomales S13 y L33 pertenecen respectivamente a las subunidades 30S y 50S del ribosoma bacteriano. S13 se posiciona en cercanía a los factores de iniciación (IF1 e IF3). L33 se encuentra opuesta a S13 en la subunidad mayor. El presente estudio, busca evaluar las proteínas S13 y L33 marcadas fluorescentemente durante la iniciación de la síntesis proteica, para generar un sistema experimental que permita analizar cambios estructurales en las subunidades ribosomales, especialmente durante la iniciación de la traducción y en función de la unión de antibióticos. Mediante técnicas recombinantes y cromatografía de intercambio iónico, se expresaron y purificaron ambas proteínas ribosomales. Se obtuvieron rendimientos de la producción de proteína L33 en el rango de miligramos por g de Escherichia coli, e índices de pureza sobre el 98%. S13 fue producido de manera similar y se obtuvieron proteínas puras en el rango de miligramos por g de Escherichia coli con una pureza de 99%. Ambas proteínas ribosomales fueron modificadas con compuestos fluorescentes compatibles con mediciones de FRET (De sus siglas en inglés, Föester Resonance Energy Transfer). En condiciones controladas S13 logró insertarse en la subunidad 30S, mientras que experimentos de sedimentación indicaron que L33 fluorescente no se unía a la subunidad 50S. Se realizaron mediciones FRET entre la subunidad 30S modificada con S13 fluorescente y los factores de iniciación IF1 e IF3. La medición FRET entre S13(Atto-540Q) e IF3-CTD(Atto-488) se utilizó para medir la interacción de estreptomicina, espectinomicina y GE81112, antibióticos que se unen a la subunidad menor del ribosoma. Estreptomicina se une rápidamente a la subunidad 30S y ocasiona un acercamiento de S13(Atto-540Q) al IF3-CTD(Atto-488) mientras que GE81112, y en menor medida espectinomicina, promueven un alejamiento de la proteína ribosomal del factor de iniciación. Ambos movimientos son compatibles con rotaciones de la cabeza de la subunidad 30S, previamente descritos como fundamentales para el funcionamiento del ribosoma. El presente estudio de investigación brinda un sistema experimental novedoso para estudiar cambios estructurales en la subunidad menor en función de la unión de antibióticos al ribosoma. / The ribosomal proteins S13 and L33 belong respectively to the 30S and 50S subunits of the bacterial ribosome. S13 is positioned close to the initiation factors (IF1 and IF3). L33 is opposite and near to S13 in the major subunit. The present study, the aim is to evaluate the fluorescently labeled S13 and L33 proteins during the initiation of protein synthesis, aiming to build an experimental system that allows the analysis of structural changes in the ribosomal subunits, especially during the initiation of translation and with the binding of antibiotics. Using recombinant techniques and ion exchange chromatography, both ribosomal proteins were expressed and purified. Production yields of pure proteins of L33 were obtained in the range of milligrams per g of Escherichia coli, in addition, of 98% purity indices. S13 was produced in a similar manner, obtaining milligrams of pure protein per g of Escherichia coli with a purity of 99%. Both ribosomal proteins were modified with fluorescent compounds compatible with measurements of FRET (Föester Resonance Energy Transfer). Under controlled conditions S13 was able to insert into the 30S subunit, while sedimentation experiments indicated that fluorescent L33 did not bind to the 50S subunit. The 30S subunit modified with fluorescent S13 showed various FRET signals in combination with the initiation factors IF1 and IF3. These signals were used to measure the interaction of streptomycin, spectinomycin and GE81112, antibiotics that bind to the minor subunit of the ribosome. Streptomycin binds rapidly to the 30S subunit and causes an approximation of S13(Atto-540Q) to IF3-CTD(Atto-488) while GE81112, and to a lesser extent spectinomycin, promote a distancing of the ribosomal protein from the initiation factor. Both movements can account for rotations of the head of the 30S subunit, previously described as fundamental for the functioning of the ribosome. The present research provides a novel approach to study structural changes in the minor subunit according to the binding of antibiotics to the ribosome.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Antimicrobial agents of tetracycline class has been extensively used in aquaculture for disease control and growth promotion. Thus, the aim of this study was to evaluate the polyphase profile of the bacterial community in shrimp farming environment front antimicrobial classes of tetracyclines, focusing on Vibrio genus. Water and sediment samples were collected four (4) shrimp farms: two (2) in the state of Cearà and two (2) in the state of Rio Grande do Norte, of points: estuary, supply channel, pond and drainage channel. Cultivable heterotrophic bacteria (CHB), with resistance to tetracycline (CHB+TET) and oxytetracycline (CHB+OTC), total Vibrio, positive sucrose Vibrio and sucrose negative Vibrio were surveyed by Standard Plate Count method (SPC). The strains isolated from CHB, CHB+TET, CHB+OTC and Vibrio underwent phenotypic identification. The phenotypic profile of antimicrobial susceptibility of strains of Vibrio and other BHC was compared between the disk diffusion techniques and macrodilution by determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and Minimum Bactericidal Concentration (MBC) for tetracycline and oxytetracycline antimicrobials. Resistance genes tet(M), tet(S) otr(A) and otr(B) were investigated in strains characterized as phenotypically resistant. Diversity of heterotrophic bacteria is influenced by wet and rainy seasons and also by the different collection points within the shrimp farms. Overall, the CHB, CHB+TET and CHB+OTC and Vibrio counts differ between the collection seasons, with higher measurements during the rainy season to the points of pond and drainage channel. 146 strains of CHB, 57 of CHB+TET and 45 of CHB+OTC were isolated, of which the most representative genera were Vibrio and Enterobacter. A total of 100 strains of Vibrio were isolated, which V. coralliilyticus was the most representative species. Antimicrobial profile of Vibrio and other CHB differed between disk-diffusion and macrodilution techniques, being the macrodilution the most efficient in the characterization of resistance among isolates. All strains of Vibrio and other CHB, phenotypically resistant, presented the tet(M) gene as a determinant of resistance determinat, but tet(S) otr(A) and otr(B) genes were not observed. Thus, it proves that Vibrio genus is most abundant among herotrotrophic bacteria with resistance to tetracyclines, with the bacterial diversity strongly influenced by seasons. / Antimicrobianos da classe das tetraciclinas tÃm sido extensivamente usados em aquicultura para o controle de doenÃas e como promotores de crescimento. Dessa forma, foi traÃado como objetivo geral avaliar o perfil polifÃsico da comunidade bacteriana de ambiente de criaÃÃo de camarÃo frente aos antimicrobianos das classes das tetraciclinas, com enfoque no gÃnero Vibrio. Amostras de Ãgua e sedimento foram coletadas de quatro (4) fazendas de carcinicultura: duas (2) no estado do Cearà e duas (2) no estado do Rio Grande do Norte, dos pontos: estuÃrio, canal de abastecimento, viveiro e canal de drenagem. Foram pesquisadas bactÃrias heterotrÃficas cultivÃveis (BHC), com resistÃncia à tetraciclina (BHC+TET) e oxitetraciclina (BHC+OTC), Vibrio total, sacarose positivos e negativos pelo mÃtodo de Contagem PadrÃo em Placas (CPP). As cepas isoladas de BHC, BHC+TET, BHC+OTC e Vibrio foram submetidas à identificaÃÃo fenotÃpica. O perfil fenotÃpico de susceptibilidade antimicrobiana das cepas de Vibrio e demais BHC foi comparado entre as tÃcnicas de disco-difusÃo e macrodiluiÃÃo, pela determinaÃÃo da ConcentraÃÃo InibitÃria MÃnima (CIM) e ConcentraÃÃo Bactericida MÃnima (CBM) para os antimicrobianos tetraciclina e oxitetraciclina. Os genes de resistÃncia tet(M), tet(S), otr(A) e otr(B) foram pesquisados nas cepas fenotipicamente caracterizadas como resistentes. A diversidade de bactÃrias heterotrÃficas foi influenciada pelos perÃodos de estio e chuvoso e tambÃm pelos diferentes pontos de coleta dentro das fazendas de carcinicultura. No geral, as contagens de BHC, BHC+TET e BHC+OTC e Vibrio e demais BHC diferiram entre os perÃodos de coleta, com quantificaÃÃes superiores no perÃodo chuvoso para os pontos de coleta viveiro e canal de drenagem. Foram isoladas 146 cepas de BHC, 57 de BHC+TET, 25 de BHC+OTC, das quais os gÃneros mais representativos foram Vibrio e Enterobacter. Foi possÃvel o isolamento de 100 cepas de Vibrio, das quais V. coralliilyticus foi a espÃcie mais representativa. O perfil antimicrobiano diferiu entre as cepas de Vibrio e demais BHC entre as tÃcnicas de disco-difusÃo e macrodiluiÃÃo, sendo a de macrodiluiÃÃo a mais eficiente na caracterizaÃÃo de resistÃncia dentre os isolados. Todas as cepas de Vibrio e demais BHC, fenotipicamente resistentes, apresentaram o gene tet(M) como determinante de resistÃncia, no entanto os genes tet(S), otr(A) e otr(B) nÃo foram verificados. Com isso, comprovou-se que Vibrio à gÃnero mais abundante dentre as bactÃrias heterotrÃficas com resistÃncia Ãs tetraciclinas, estando a diversidade bacteriana fortemente influenciada pelos perÃodos do ano.