Tese de mestrado. Engenharia Biomédica. Faculdade de Engenharia. Universidade do Porto, Faculdade de Medicina Dentária. Universidade do Porto. 2008

Orientador: Rondinelli Donizetti Herculano / Banca: Marlus Chorilli / Banca: Renata Fonseca Vianna Lopez / Resumo: O látex natural (LN) é um polímero natural de grande interesse na área biomédica devido à capacidade de promover o aumento da vascularização e epitelização de tecidos. Considerando as propriedades físico, química e biológica do LN, bem como sua capacidade em atuar como dispositivo de liberação buscou-se, com o presente estudo, desenvolver membranas de LN associadas à moxifloxacina (MXF), antibiótico de amplo espectro de ação, com o intuito de tratar lesões infectadas de difícil cicatrização. A caracterização do material foi realizada por técnicas de microscopia eletrônica de varredura (MEV), espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier (FTIR) e ensaios mecânicos. Além disso, foi avaliado o potencial de liberação da MXF em diferentes pHs. Ensaios microbiológicos e de citotoxicidade foram realizados com as membranas carregadoras. A presença de cristais do fármaco na superfície e no interior do material foi observada por MEV de superfície e de corte transversal. Os espectros de FTIR identificaram as bandas de absorção características dos compostos, sugerindo que a integridade dos compostos foi mantida, o que evidencia a rápida liberação inicial do composto. Além disso, o módulo de elasticidade das membranas com e sem MXF foram similares (0,8 MPa), indicando que a elasticidade das membranas é suficiente para aplicações biomédicas. Os cristais da MXF visualizados nas micrografias da superfície da amostra, tendem a sol... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The natural rubber latex (LN) is a natural polymer which has aroused large interest in the biomedical fields. Mostly, due its ability to promote vascularization increasing and tissue epithelization. Considering the physical, chemical and biological properties of LN, as well as its ability to act as a release device, the present study aimed to develop LN membranes associated with moxifloxacin (MXF), a wide-spectrum antibiotic, in order to treat infected wounds. The techniques performed in the biomaterial characterization were FTIR, mechanical tests and electronic microscopy. Moreover, the potential of MXF release was evaluated at different pHs. In addition, microbiological assays and cell viability were performed with carrier membranes. The presence of drug crystals on the surface and inside the material was observed by electronic microscopy. The FTIR spectra identified the characteristic absorption bands of the compounds, suggesting that their integrity was maintained, which resulted in rapid early release of the compound. Furthermore, the modulus of elasticity of the membranes with and without MXF were similar (0.80 MPa), indicating the membranes have sufficient elasticity for biomedical applications. The MXF crystals visualized by electronic microscopy on the surface of the material, tend to solubilize quickly during the first hours of release, which promote the burst release effect. Results showed that the MXF released after 295 hours, was 66.44% at pH 7.4, and 53.13% at a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Reinaldo Marchetto / Co-orientador: Luiz Carlos Bertucci Barbosa / Banca: Fernanda Zanolli Freitas / Banca: Esteban Nicolás Lorenzón / Resumo: Sistemas toxina-antitoxina (TA) são tipicamente formados por dois genes que codificam uma toxina estável e uma antitoxina lábil. Esses módulos genéticos são diversos e abundantes em procariotos, sendo agrupados em seis tipos (I à VI) com base na natureza da antitoxina e no seu modo de interação com a toxina. O sistema TA GhoT/GhoS (tipo V) foi identificado em Escherichia coli, estando implicado no fenômeno de persistência celular (tolerância temporária à antibióticos). Embora a antitoxina desse sistema (GhoS) tenha sido bem caracterizada, os detalhes que envolvem a estrutura e os mecanismos de ação da toxina GhoT ainda não foram totalmente esclarecidos, sendo apenas demonstrado que a molécula in vivo ocasiona a formação de poros na membrana plasmática bacteriana, interrompendo a produção de ATP. Dessa maneira, considerando o potencial biotecnológico dos sistemas TA como alvos para o desenho de novos bactericidas, o presente trabalho caracterizou funcional e estruturalmente a proteína GhoT de Salmonella enterica e peptídeos derivados com capacidade de interação com membranas biológicas. Para isso, após a obtenção da sequência de aminoácidos da GhoT de S. enterica por BLAST e de sua predição estrutural in silico, a proteína e seus derivados (HN e HC) foram sintetizados pelo método químico em fase sólida, sendo purificados por cromatografia líquida de alta eficiência e identificados por espectrometria de massas. Em seguida, a capacidade de estruturação das moléculas foi avaliada com o auxílio da espectroscopia de dicroísmo circular. Já as suas funções foram investigadas através de ensaios de permeabilização de vesículas lipídicas, expressão heteróloga em bactéria e atividade antimicrobiana. Coletivamente, os estudos demonstraram que os polipeptídeos estão predominantemente enovelados em α-hélice, confirmando a modelagem estrutural realizada.... / Abstract: Toxin-antitoxin (TA) systems are typically formed by two genes encoding a stable toxin and a labile antitoxin. These genetic modules are diverse and abundant in prokaryotes and are grouped into six types (I to VI) based on the nature of the antitoxin and its mode of interaction with the toxin. The TA GhoT/GhoS system (type V) was identified in Escherichia coli, being implicated in the phenomenon of cell persistence (temporary tolerance to antibiotics). Although the antitoxin of this system (GhoS) has been well characterized, the details surrounding the structure and mechanisms of action of the GhoT toxin have not yet been fully elucidated, and it has only been shown that the molecule in vivo causes the formation of pores in the bacterial plasma membrane, disrupting the production of ATP. In this way, taking into account the biotechnological potential of TA systems as targets for the design of new bactericides, the present work characterized the GhoT protein of Salmonella enterica and derived peptides with interaction capacity with biological membranes. After obtaining the amino acid sequence of S. enterica GhoT by BLAST and its in silico structural prediction, the protein and analogues (HN and HC) were synthesized by the solid phase chemical method and were isolated by high performance liquid chromatography and identified by means of mass spectrometry. Then, the conformations of the molecules were evaluated with the help of circular dichroism (CD) spectroscopy. Its functions were investigated through lipid vesicle permeabilization assays, heterologous expression in bacteria and antimicrobial activity. Thus, collectively, the information revealed by the studies demonstrated that the polypeptides are predominantly anchored in α-helix, confirming the structural modeling performed. In addition, it was observed that the molecules retain the same lytic activity verified for the E. coli GhoT toxin, especially... / Mestre

As bactérias Gram-negativas das famílias Enterobacteriaceae e Pseudomonadaceae são os patógenos mais comumente isolados de infecções. Devido ao crescente aparecimento de micro-organismos resistentes aos antimicrobianos disponíveis para terapêutica, a busca de novos compostos tornou-se eminente, principalmente oriundos de fontes naturais cultiváveis. Os actinomicetos são uma das principais fontes de metabólitos secundários com atividade antibacteriana. Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial do actinomiceto endofítico R18(6) em produzir metabólitos ativos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes. Para isto, utilizou-se o teste de dupla camada para avaliar a capacidade de produção de metabólitos ativos pelo actinomiceto. As condições de cultivo, como fontes de carbono, temperatura, pH, modo de incubação e tempo de incubação do isolado, sob cultura submersa, foram otimizadas. A atividade antimicrobiana do isolado foi avaliada a cada 24 horas durante 10 dias utilizando a técnica de difusão em poço, na qual foram medidos os halos de inibição. O actinomiceto mostrou melhor atividade contra as bactérias Gram-negativas testadas quando cultivado em meio base contendo glicose como fonte de carbono, pH ajustado para 6.5, incubação a 30ºC sob agitação constante durante 96 horas. No ensaio de concentração inibitória mínima do extrato bruto, esta variou entre 1/32 e 1/256, e mostrou atividade bactericida ou bacteriostática de acordo com o isolado Gram-negativo. O extrato ativo foi avaliado quando à sua estabilidade térmica e enzimática, o qual se apresentou estável a altas temperaturas e instável às enzimas proteolíticas. O extrato bruto foi submetido à extração com solventes e a acetona mostrou-se eficiente como solvente extrator. A micromorfologia do isolado foi observada em microscopia óptica e de varredura, nos quais apresentou características semelhantes ao gênero Streptomyces. O actinomiceto endofítico R18(6) mostrou ser uma nova fonte promissora para a produção de compostos ativos contra bactérias Gram-negativas multirresistentes. / Gram-negative bacteria of the Enterobacteriaceae and Pseudomonadacea family are the most common pathogens isolated from infections. Due to the increase of microorganisms resistant to antimicrobial agents available for treatment, the search for new compounds, mainly from natural and culturable sources, has become an important issue. The actinomycetes are a major source of secondary metabolites with antibacterial activity. The aim of this work was to evaluate the potential production of active metabolites by the endophytic actinomycete R18(6) against Gram-negative bacteria multiresistant. For this, the double layer method was used to assess the ability of production of active metabolites by the isolate. Based on this assay the culture condition growth of the isolate in submerged culture was optimized. For that as carbon source, temperature, pH, incubation way and incubation time were tested looking for a better metabolite production. The antimicrobial activity of the isolate was evaluated every 24 hours for 10 days by the well diffusion assay, where the inhibition halo was measured. The actinomycete showed the best activity against Gram-negative bacteria when cultured in base medium supplemented with glucose, adjusted in pH 6,5, incubation temperature of 30ºC for 96 hours with agitation. In the microdilution assay the concentration of crude extract varied from 1/32 to 1/256, and it showed bactericidal or bacteriostatic activity according to Gram-negative tested isolate. The thermal and enzymatic stability of crude extract were evaluated, where it exhibited thermal stability in high temperature and it was unstable to proteolytic enzymes. The crude extract was subjected to solvent extraction and acetone was efficient as extractor solvent. The isolate showed similar characteristics of the genus Streptomyces when evaluated by optical and scanning microscopy. The endophytic actinomycete R18(6) showed to be a new and a promising source of active metabolites production against Gram-negative bacteria multidrug resistant.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2010 / Made available in DSpace on 2012-10-25T05:40:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 284025.pdf: 1070317 bytes, checksum: 84f916ca93468446cc10852728c41148 (MD5) / O fungo Antrodia albida foi cultivado em quatro diferentes caldos de cultivo para estudo da produção da biomassa e da substância ativa. Os extratos obtidos a partir de micélio cultivado no meio MNM apresentaram maiores halos de inibição do crescimento bacteriano em comparação com os obtidos a partir de micélios cultivados nos outros meios. Foi observado um aumento progressivo da biomassa fúngica até o 30º dia de incubação. A substância ativa começou a ser produzida a partir do 15º dia de cultivo. Os extratos se mostraram instáveis quando armazenados sob vácuo por um período de tempo superior a 30 dias. A atividade antibacteriana de extratos obtidos a partir de A. albida foi avaliada contra três espécies bacterianas Gram-negativas (Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Enterobacter aerogenes ATCC 13048) e três espécies Gram-positivas (Staphylococcus aureus ATCC 25923, Micrococcus sp., Bacillus cereus ATCC 11778). Os extratos foram ativos contra S. aureus, B. cereus, Micrococcus sp. e P. aeruginosa. A partir do cultivo em meio sólido foi possível determinar a concentração inibitória mínima para S. aureus (15 mg/ml) e para E. coli (20 mg/ml). Os extratos obtidos foram caracterizados quimicamente através de GC-MS. As análises químicas realizadas identificaram um total de dezessete diferentes substâncias presentes nos extratos testados, dentre as quais, seis destas substâncias apresentaram registros sobre atividades biológicas e importância econômica na literatura consultada, tais como: efeito imunossupressor, efeito supressor da proliferação de linhagens de células cancerosas, diminuição dos níveis de colesterol, atividade neuroprotetora e hepatoprotetora, atividade antiinflamatória, atividade inibitória de Quorum Sensing e formação de biofilmes. / Antrodia albida was grown in four different broths to study the production of biomass and the active substance. The extracts obtained from mycelium grown in MNM medium showed greater inhibition zones of bacterial growth compared with those obtained from mycelia grown in other media. It was observed a progressive increase in fungal biomass until the 30th day of incubation. The active substance began to be produced from the 15th day of cultivation. The extracts were unstable when stored at -20ºC for a period exceeding 40 days. Antibacterial activity of extracts from A. albida was evaluated against three Gram-negative bacterial species (Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Enterobacter aerogenes ATCC 13 048) and three Gram-positive species (Staphylococcus aureus ATCC 25923, Micrococcus sp., Bacillus cereus ATCC 11 778). Extracts were active against S. aureus, B. cereus, Micrococcus sp. and P. aeruginosa. From the cultivation on solid medium was possible to determine the minimum inhibitory concentration for S. aureus (15 mg / ml) and E. coli (20 mg / ml). The extracts were chemically characterized by GC-MS. The chemical analysis identified a total of seventeen different substances in tested extracts. Six of these substances had records on biological activities and economic importance in the literature, such as immunosuppressive effect, suppressive effect of proliferation of cancer cell lines, decreased levels of cholesterol, neuroprotective and hepatoprotective activity, antiinflammatory activity, inhibitory activity of Quorum Sensing and biofilm formation.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico. Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química. / Made available in DSpace on 2012-10-23T21:17:27Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Este trabalho apresenta estudos referentes a produção e caracterização microbiológica de um material compósito do tipo poIímero-madeira com propriedade bactericida (BWPC), agregada pela adição de um agente biocida, o triclosan, no processo de extrusão. Durante as etapas de processamento foram realizados ajustes nas temperaturas de máquina e nas velocidades de rotação da rosca de extrusão e avaliado o efeito destes parâmetros na eficiência bactericida do compósito. Além da definição de formulações e ajustes dos parâmetros de processamento foi realizada a caracterização microbiológica do BWPC empregando testes de Difusão em Agar com bactérias Escherichia co/i (EC) e Staphylococcus aureus (SA) , sendo avaliado o seu efeito bactericida após sua exposição em condições consideradas de degradação; em ambientes com diferentes temperaturas e contendo radiação ultravioleta. Para a avaliação do efe~to de tais fatores foram produzidas amostras de BWPC com diferentes percentuais de aditivo bactericida (triclosan), diferentes percentuais de polipropileno e expostas por diferentes períodos de tempo em ambiente com diferentes valores de temperatura e em ambientes contendo radiação ultravioleta. Os experimentos realizados indicaram a presença do efeito bactericida no compósito dependente do percentual do aditivo triclosan, da temperatura do meio de exposição e do tempo de exposição nos ambientes com diferentes temperaturas e nos ambientes contendo radiação ultravioleta. Quanto aos parâmetros de processo e o percentual da matriz polimérica tais fatores não apresentaram efeitos significativos na propriedade bactericida agregadã ao compósito BWPc.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias. Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos. / Made available in DSpace on 2012-10-24T04:29:23Z (GMT). No. of bitstreams: 1 257755.pdf: 25607035 bytes, checksum: 1cda68e05297814ff7edf3f79e43a74f (MD5) / Alguns microrganismos possuem a capacidade de produzir substâncias que podem influenciar no desenvolvimento de outros microrganismos. Desde os anos 50 é relatada a capacidade de várias espécies de bactérias do gênero Bacillus de produzir substâncias com atividade antimicrobiana como peptídeos, também denominados de bacteriocinas e enzimas como a subtilisina, subtilina, as proteases e as termolisinas. Muitos desses peptídeos e enzimas têm sido caracterizados bioquimicamente e geneticamente. Embora sejam conhecidas, a função estrutural, a biossíntese e modo de ação de alguns peptídeos antimicrobianos e enzimas, muitos aspectos desses compostos ainda permanecem desconhecidos. Frente a essa realidade, o presente estudo investigou a atividade antibacteriana e antifúngica e a toxicidade in vitro e in vivo do extrato bruto de Bacillus amyloliquefaciens R 10. O extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 foi obtido por técnicas de precipitação de proteínas, centrifugação, diálise e esterilização por filtração. A padronização das análises toxicológicas e de atividade antibacteriana e antifúngica foi realizada pela determinação da concentração de proteínas do extrato bruto de Bacillus amyloliquefaciens R 10. O ensaio de atividade antibacteriana e antifúngica foi realizado pela técnica de difusão em poços. Dentre os diferentes indicadores utilizaram-se bactérias Gram-positivas (Listeria monocytogenes NCTC 098630, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Enterococcus faecalis ATCC 29212), Gram-negativas (Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Enterobacter aerogenes ATCC 13048 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027), fungos (Aspergillus fumigatus ATCC 9197 e Penicillium commune J 238) e leveduras (Rhodotorula muscilaginosa J 350, Pichia anomala DSM 70255 e Kluveromyces marxianus ATCC 16045). O extrato bruto foi testado nas concentrações de 5, 20, 40, 60 e 80 g de proteínas, em ambos os ensaios de atividade antimicrobiana. Para avaliar a toxicidade do extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 foram utilizados ensaios in vitro (genotoxicidade) e in vivo (toxicidade aguda em ratos e camundongos e toxicidade de doses repetidas em camundongos). A investigação da genotoxicidade com células VERO ATCC-CCL 81 foi realizada pelo ensaio Cometa, utilizando-se 60, 80 e 100 g de proteínas do extrato bruto. Para análise toxicológica aguda em ratos Wistar (Rattus norvegicus), utilizou-se um grupo de 10 animais (5 machos e 5 fêmeas) tratado com o extrato bruto, por gavagem oral, com a dose de 2.000µg/kg (dose máxima recomendada). Os animais foram pesados no início e no final do experimento e observados por 14 dias quanto aos possíveis sinais de toxicidade (morte, coma, convulsão, prostração, ataxia, tremores, alteração na pele ou pêlo, alteração nas mucosas, diarréia e salivação). Para análise toxicológica aguda em camundongos Swiss (Mus musculus), utilizou-se o extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 por gavagem oral, numa única administração, nas doses de 5, 50, 500 e 5.000 g/kg a 80 camundongos (40 machos e 40 fêmeas, contendo 10 animais por grupo). Outros 20 camundongos (10 machos e 10 fêmeas) receberam veículo (salina, NaCl 0,9%), pela mesma via. Para análise toxicológica de doses repetidas em camundongos Swiss (Mus musculus) utilizou-se o extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 administrado por gavagem oral, por um período de 90 dias nas doses de 50, 500 e 5.000 g/kg em 120 animais (60 machos e 60 fêmeas, contendo 20 animais por grupo). Outros 40 camundongos (20 machos e 20 fêmeas) receberam veículo (salina, NaCl 0,9%), pela mesma via. Constatou-se nos ensaios de atividade antimicrobiana que o extrato bruto de Bacillus amyloliquefaciens R 10 não apresentou atividade contra os bolores e as leveduras nas concentrações testadas, e somente apresentou atividade antibacteriana frente Listeria monocytogenes NCTC 098630. O extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 não foi genotóxico para células VERO na concentração de 60µg/ml, porém apresentou genotoxicidade nas concentrações de 80 e 100µg/ml. Na análise toxicológica aguda em ratos a dose letal 50 (DL50) foi superior a 2.000µg/kg. Na análise toxicológica aguda em camundongos, o extrato bruto apresentou boa tolerabilidade e reduzidos efeitos tóxicos agudos importantes, com DL50 superior a 5.000µg/kg. Já na análise toxicológica de doses repetidas, a non toxic adverse effect level (NOAEL) para o extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 situa-se entre as doses de 50 e 500 g/kg. Os resultados indicam que o extrato bruto antibacteriano de Bacillus amyloliquefaciens R 10 apresenta um grande potencial como conservador natural de alimentos, dada sua marcante atividade antilisterial e sua relativa segurança toxicológica. Some microorganisms are able to produce substances that can influence the growth of other microorganisms. The ability of various bacterial species of the genus Bacillus to produce substances with antimicrobial activity such as peptides, also called bacteriocins, and enzymes such as subtilisin, subtilin, proteases and thermolysins has been reported since the 1950's. Many of these peptides and enzymes have been characterized biochemically and genetically. Although the structural function, biosynthesis and mode of action of some antimicrobial peptides and enzymes have been identified, many aspects of these compounds are still unknown. The present study investigated the antibacterial and antifungal activity and the in vitro and in vivo toxicity of the crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10. The antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 was obtained by techniques of protein precipitation, centrifugation, dialysis and sterilization through filtration. The standardization of the toxicological analysis, and antibacterial and antifungal activity was realized by determining the concentration of proteins in the crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10. The assay of antibacterial and antifungal activity was done by agar diffusion technique in wells. Among the different indicators were used the Gram-positive bacteria (Listeria monocytogenes NCTC 098630, Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Enterococcus faecalis ATCC 29212), Gram-negative (Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Enterobacter aerogenes ATCC 13048 and Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027), molds (Aspergillus fumigatus ATCC 9197 and Penicillium commune J 238), and yeasts (Rhodotorula muscilaginosa J 350, Pichia anomala DSM 70255 and Kluveromyces marxianus ATCC 16045). The crude extract was tested in concentrations of 5, 20, 40, 60 and 80 g of protein in both assays of antimicrobial activity. To evaluate the Bacillus amyloliquefaciens R 10 antibacterial crude extract's toxicity were used in vitro (genotoxicity) and in vivo (acute toxicity in rats and mice and repeated doses toxicity in mice) assays. The research of the genotoxicity with VERO ATCC-CCL 81 cells was made by Comet assay, using 60, 80 e 100 g of protein of the crude extract. To the acute toxicological analysis in rats Wistar (Rattus norvegicus), were used one group with 10 animals (5 males and 5 females) treated with the crude extract by oral gavage, with dose of 2,000µg/kg (maximum dose recommended). The animals were weighed at the beginning and at the end of the experiment, and observed during 14 days as the possible toxicity signs (death, coma, convulsions, prostration, ataxy, tremors, skin or hair alterations, mucous alteration, diarrhea and salivation). To the acute toxicological analysis in Swiss mice (Mus musculus), the antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 was used by oral gavage, in a single administration, in doses of 5, 50, 500 and 5,000 g/kg to 80 mice (40 males and 40 females, with 10 animals per group). Other 20 mices (10 males and 10 females) received the vehicle (saline, NaCl 0.9%), through the same route. To the repeated doses toxicological analysis in Swiss mice (Mus musculus) the antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 was administrated by oral gavage during 90 days in doses of 50, 500 and 5,000 g/kg in 120 animals (60 males and 60 females, in groups of 20 animals). Other 40 mice (20 males and 20 females) received the vehicle (saline, NaCl 0.9%), through the same route. It was verified in the antimicrobial activity assays that the crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 didn't present activity against molds and yeasts in the tested concentrations, and only presented antibacterial activity against Listeria monocytogenes NCTC 098630. The antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 was not genotoxic to VERO cells at concentration of 60µg/ml, but showed genotoxicity at concentration of 80 and 100µg/ml. In the acute toxicological analysis in rats the letal dose 50 (DL50) was higher than 2,000µg/kg. In the acute toxicological analysis in mice, the crude extract presented good tolerability and litle important acute toxic effects with DL50 higher than 5,000µg/kg. In the repeated doses toxicological analysis, a non toxic adverse effect level (NOAEL) for the antibacterial crude extract is between the doses of 50 and 500 g/kg. The results showed that the antibacterial crude extract of Bacillus amyloliquefaciens R 10 presents a great potential as a natural food preservative, due to its notable antilisterial activity, and its relative toxicological security.

Orientador: Antonio Celso Pezzato / Resumo: RESUMO. Para avaliar a inclusão de diferentes combinações e níveis de prebióticos em substituição aos antibióticos melhoradores de desempenho, dois experimentos foram delineados. No primeiro estudo, 1250 pintos de corte machos, linhagem ROSS AP95, foram casualmente distribuídos em 5 tratamentos, com 10 repetições cada, objetivando testar diferentes proporções de mananos com β-glucanos e frutoligossacarídeos com galactoligossacarídeos, combinados e incluídos em dietas de frangos de corte. Os tratamentos consistiram de: CP, dieta basal (DB) +AMD; DB+BUT: DB + Butirato de Cálcio; GM1⁄3+FG2⁄3: DB + GLUCANMOS (1/3 da mistura) : FOS:GOS (2/3 da mistura); GM1⁄2+FG1⁄2: DB + GLUCANMOS (1/2 da mistura) : FOS:GOS (1/2 da mistura); GM2⁄3+FG1⁄3: DB + GLUCAN MOS (2/3 da mistura) : FOS:GOS (1/3 da mistura). No segundo estudo, 1250 pintos de corte machos, linhagem ROSS AP95, foram casualmente distribuídos em 5 tratamentos, com 10 repetições cada, objetivando testar diferentes níveis de inclusão de GLUCANMOS (67% da mistura) associado a FOS:GOS (1:1). Os tratamentos consistiram de: CP, dieta basal (DB) +AMD; 0,1%; 0,2%; 0,3% e 0,4% de inclusão da mistura prebiótica. Foram avaliados o desempenho, peso relativo de órgãos, barreiras físicas e imunológicas dos segmentos do intestino delgado (integridade de vilosidades, células caliciformes e linfócitos intraepiteliais), histomorfometria de Bursa de Fabricius e contagem diferencial de leucócitos no sangue, ainda, foram quantificados os ácidos grax... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

La resistencia antimicrobiana constituye un problema actual y creciente que tiene un impacto tanto en la economía como en la salud pública. Esta resistencia se ha observado principalmente, según la OMS, en bacterias como Pseudomonas aeruginosa, la cual pertenece al grupo prioritario de patógenos para los cuales se necesita urgentemente nuevos tratamientos efectivos. Busca obtener bacteriófagos de Pseudomonas aeruginosa multidrogo-resistente a partir de muestras de agua de tres ríos de la provincia de Lima – Perú. Se logra aislar dichos bacteriófagos a partir de las muestras de los ríos Rímac, Chillón y Lurín. Estos fueron caracterizados de acuerdo con los parámetros cinéticos de periodo de latencia, tamaño de explosión y tasa de adsorción. Los periodos de latencia oscilaron, en su mayoría, entre 0 y 10 minutos; los tamaños de explosión variaron desde 15 UFP/célula hasta 3688 UFP/célula y las tasas de adsorción oscilaron entre 1,91 x 10-9 mL/min y 1,32 x 10-8 mL/min. Además, se evaluó la estabilidad térmica de los lisados a 50°C, 60°C, 70°C y 80°C, siendo el lisado denominado LR2 el que mostró una mejor estabilidad térmica a 50°C e incluso soportó temperaturas de 60°C y 70°C por un corto periodo de tiempo. Finalmente, evaluó el efecto de la presencia de Ca+2 en la tasa de adsorción de los bacteriófagos; sin embargo, no se logró establecer una relación entre ambos, ya que en uno de los casos la presencia del ion divalente Ca+2 aumentó la tasa de adsorción, en otro la disminuyó, y en un tercer caso no pareció alterarla. / Universidad Nacional Mayor de San Marcos (Lima). Vicerrectorado de Investigación y Posgrado / Tesis

A resistência aos antibióticos dos patógenos mais comuns do trato respiratório está aumentando mundialmente. Recentemente, Streptococcus pneumoniae resistente à penicilina tem sido isolado em diversos países, e a freqüência dessas cepas tem elevado de modo alarmante. O aumento da resistência, com conseqüentes implicações terapêuticas, tem levado a uma reavaliação do uso dos antibióticos ß-lactâmicos para o tratamento de infecções pneumocócicas. No presente trabalho, um total de 107 amostras de Streptococcus pneumoniae, obtidas de materiais provenientes de pacientes adultos ambulatoriais e hospitalizados, em dois centros médicos de duas cidades do Rio Grande do Sul (Porto Alegre e Caxias do Sul), os quais apresentavam quadro clínico-radiológico de infecção pulmonar, foram analisadas com o objetivo de estudar-se a resistência do germe à penicilina. As amostras constituídas de escarro (80,4%), lavado brônquico (13,5%) e aspirado traqueal (6,6%) foram coletadas no período compreendido entre Julho de 1998 e Julho de 1999. O material foi semeado em meio de Agar sangue e as colônias suspeitas de Streptococcus pneumoniae foram transferidas para meio de Mueller-Hinton para teste de optoquina e de sensibilidade à penicilina com discos de oxacilina. Um halo de inibição da oxacilina menor do que 20 mm indicava a realização de teste para determinação da concentração inibitória mínima (MIC) com E-test. Um total de nove cepas foi identificado como tendo resistência intermediária à penicilina (MIC 0,1-1,0μg/ml) e nenhuma cepa resistente (resistência elevada: MIC > 2,0 μg/ml) foi identificada. Uma monitorização local das cepas quanto à resistência antimicrobiana é de grande importância para os clínicos no manejo de infecções pneumocócicas. / Antibiotic resistance to the common respiratory tract pathogens is increasing worldwide. Recently, penicillin-resistant pneumococci have been isolated in several countries, and the incidence of these strains has risen alarmingly. The increased of resistance with consequence therapeutic implications has led to a re-evaluation of ß-lactam antibiotics for the treatment of streptococcal infections. In present study a total of 107 isolates of Streptococcus pneumoniae from samples of adult hospitalizated patients ando outpatients were prospectively collected in 2 different medical centers of Rio Grande do Sul - Brazil (Caxias do Sul and Porto Alegre) with clinical and radiologyc signs of respiratory infections, were analyzed with objective to study the penicillin-resistant pneumococci. The samples consisting of sputum (80,4%), bronchial lavage (13,5%) and inhaled traqueal (6,6%) had been colected in the period understood between 98 July and 99 July. The material was sown in agar-blood and the colonies suspicion of Streptococcus pneumoniae had been transferred to Mueller-Hinton for test of optochin and for sensitivity to penicillin test with oxacilin disks. One inhibition of the lesser that 20 mmm for oxacilin indicates the test accomplishment to determine minimum inhibitory concentration (MIC) with E-test. A total of 9 strains were intermediate-resistant to penicillin (MIC 0,1-1,0μg/ml) and neither was resistant to penicillin (MIC > 2,0 μg/ml). Monitoring local of antimicrobial resistant strains is of great importance to clinicians for the management of pneumococcal infections.