En la presente investigación se evaluó la actividad antibacteriana in vitro del Aceite de la cáscara de la nuez del Anacardium occidentalea partir de distintas concentraciones (al 100 %, al 60 %, al 50 %, al 40 % y al 30 %) sobre dos tipos de cepas de Streptococcus mutans (cepas de Streptococcus mutans ATCC 25175 y aisladas de muestras de pacientes) La siembra, cultivo y recolección del fruto fue llevada a cabo en la ciudad de Iquitos (Loreto-Perú), la extracción del aceite se realizó mediante la técnica sólido-líquido o Soxhlet, el diluyente del aceite fue el Hidróxido de Sodio al 0.1 N, y el control positivo la Clorhexidina al 0,12 %. El aceite de la cáscara de la nuez del Anacardium occidentale en todas las concentraciones utilizadas presentó acción antibacteriana mediante el método de difusión in vitro, sobre ambos tipos de cepas de Streptococcus mutans y tuvo mejor actividad antibacteriana que la Clorhexidina al 0,12 % (p>0,05). No se pudo encontrar diferencias significativas en la acción antibacteriana del aceite a las diversas concentraciones en ambos tipos de cepa, y las cepas de procedencia clínica fueron estadísticamente más sensibles que las cepas ATCC. / Tesis

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-03-21T17:07:14Z No. of bitstreams: 1 TES_CLARISSA_AIRES_ROZA_PARCIAL.pdf: 507622 bytes, checksum: afb3f324ad1f25c628f444e32084d5b7 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-21T17:07:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_CLARISSA_AIRES_ROZA_PARCIAL.pdf: 507622 bytes, checksum: afb3f324ad1f25c628f444e32084d5b7 (MD5) Previous issue date: 2016-05-25 / Introduction: Acute bronchiolitis (AB) is the most common disease of the lower airways in infants. There is disagreement in the literature on the AB definition, especially in relation to age and recurrence of symptoms. As some children may develop post-bronchiolitis recurrent wheezing, it has been widely studied interventions to prevent recurrence wheezing. Methods: A systematic literature review was conducted in MEDLINE with filter for "clinical trial" and the search term was "acute bronchiolitis?. It was established two distinct groups of setting: 1-first episode of wheezing and 2-clinical presentation of AB below 24 months of age, regardless of recurrence. Furthermore, we conducted a double-blind randomized placebo-controlled trial with patients admitted for AB to test the hypothesis that use of azithromycin in the acute episode of AB may reduce the risk of recurrent wheezing. Results: The systematic review included 79 trials and showed that the majority (59.49%) defines AB as the first episode of wheezing in infants and 56.96% includes children under 12 months. The trial included 91 patients (51 in the azithromycin group and 40 in the placebo group). The risk of hospital readmission was not different between the groups studied 1, 3 and 6 months after AB. The risk of recurrent wheezing was significantly reduced up to 6 months after admission for AB (p = 0.022). Conclusion: AB definition used by most clinical trials was the first episodes of wheezing in children, and most of the studies included patients up to 12 months. Therefore, this should be the definition used in guidelines and documents ofrecommendations. The use of azithromycin in the first episode of AB reduces the risk of recurrent wheezing in infants. / Introdu??o: A bronquiolite aguda (BA) ? a doen?a mais comum das vias a?reas inferiores. H? diverg?ncias importantes na literatura sobre a defini??o de BA, principalmente em rela??o ? idade e ? recorr?ncia dos sintomas. Como algumas crian?as podem desenvolver sibil?ncia recorrente ap?s epis?dio agudo de BA, tratamentos t?m sido avaliados com o objetivo de prevenir tal recorr?ncia. M?todos: Foi realizada uma revis?o sistem?tica da literatura na base de dados MEDLINE com filtro ?clinical trial? e o termo de busca foi ?acute bronchiolitis?. Estabeleceram-se dois grupos distintos de defini??o: 1- primeiro epis?dio de sibil?ncia e 2- quadro cl?nico de BA abaixo de 24 meses de idade,independente da recorr?ncia. Al?m disso, foi realizado ensaio cl?nico randomizado (ECR) duplo-cego controlado por placebo com pacientes internados por BA para testar a hip?tese de que uso de azitromicina no epis?dio agudo de BA reduza o risco de sibil?ncia recorrente. Resultados: A revis?o sistem?tica incluiu 79 ensaios cl?nicos e mostrou que a maioria (59,49%) define BA como o primeiro epis?dio de sibil?ncia na inf?ncia e que 56,96% incluem crian?as abaixo de 12 meses de idade. O ensaio cl?nico incluiu 91 pacientes (51 no grupo azitromicina e 40 no grupo placebo). O risco de readmiss?o hospitalar n?o foi diferente entre os grupos estudados 1,3 e 6 meses ap?s a BA. O risco de sibil?ncia recorrente foi significativamente reduzido em um seguimento de 6 meses ap?s admiss?o por BA (p =0.022). Conclus?o: A defini??o de BA mais utilizada pelos ensaios cl?nicos foi o primeiro epis?dio de sibil?ncia na inf?ncia, sendo que a maioria dos estudos incluiu pacientes de no m?ximo 12 meses de idade. Portanto, recomenda-se a utiliza??o dessa defini??o em guidelines ou documentos de recomenda??es. Ainda, o ECR demonstrou que o uso de azitromicina no epis?dio agudo de BA reduz o risco de sibil?ncia recorrente em lactentes nos primeiros 6 meses ap?s o epis?dio agudo.

A espécie Litchi chinensis Sonn., popularmente conhecida como lichieira, é originária da China e tem aplicações medicinais em muitos países, em especial pela medicina tradicional chinesa. O objetivo deste trabalho foi avaliar química e biologicamente o extrato de folhas e frações desta espécie. Foi preparado o extrato hidroetanólico das folhas e, a partir da partição líquido-líquido, foram obtidas as frações hexânica, acetato de etila, butanólica e aquosa. Foi utilizada a técnica de espectrometria de massas ESI-IT-MSn para traçar o perfil do extrato e das frações. Procedeu-se à quantificação dos teores de fenóis totais, de flavonoides totais, do poder sequestrante do radical DPPH e do poder redutor do extrato de folhas e frações. Além disso, foram avaliadas também as seguintes atividades biológicas in vitro: antimicrobiana para bactérias e fungos (ensaio da difusão em ágar e concentração inibitória mínima), leishmanicida e citotoxicidade. O extrato de folhas e frações apresentaram compostos fenólicos como principais constituintes químicos, tais como flavonoides (agliconas e heterosídeos) e taninos condensados. Os resultados da determinação dos fenólicos totais e flavonoides demonstraram que existe uma maior concentração destes compostos na fração acetato de etila em relação ao extrato de folhas e às outras frações e a avaliação do poder sequestrante de radicais DPPH e do poder redutor demonstra que esta fração também apresentou maior atividade antioxidante in vitro em comparação ao extrato de folhas e às outras frações. Assim, evidencia-se a possível correlação entre estes compostos e a atividade antioxidante. O extrato de folhas de L. chinensis e frações testados neste trabalho apresentaram atividade antimicrobiana contra as seguintes bactérias gram-positivas: Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, Staphylococcus aureus e frente à bactéria gram-negativa Proteus mirabilis. O extrato de folhas de L. chinensis e frações não apresentaram atividade contra L. amazonensis até a concentração testada de 40 µg/mL, nem tampouco apresentaram toxicidade aos macrófagos murinos até a concentração testada (160 µg/mL). A fração acetato de etila (FrAcOEt) do extrato de folhas apresentou os melhores resultados quanto ao teor de fenóis totais, flavonoides totais, a melhor atividade antioxidante e os menores valores de concentração inibitória mínima, evidenciando assim a viabilidade desta fração do extrato de folhas como fonte potencial de compostos bioativos. / The species Litchi chinensis Sonn., popularly known as litchi, originated in China and has medicinal applications in many countries, particularly in traditional chinese medicine. The aim of this study was to evaluate leaf extract and fractions of this species both chemically and biologically. The hydroethanolic leaf extract was prepared, and from the liquid-liquid partition, the fractions hexane, ethyl acetate, butanol and aqueous acetate were obtained. The technique of mass spectrometry ESI -IT-MSn was used to determine the profile the extract and fractions. The quantification of total phenolic content, total flavonoid, the scavenging power of DPPH radical and the reducing power of leaf extracts and fractions was carried out. In addition, the following in vitro biological activities were also evaluated: antimicrobial for bacteria and fungi (agar diffusion method and minimum inhibitory concentration), leishmanicidal and cytotoxicity. The leaf extract and fractions showed phenolic compounds as major chemical constituents, such as flavonoids (aglycones and glycosides) and condensed tannins. The results of the determination of total phenolics and flavonoids have shown that there is a higher concentration of these compounds in the ethyl acetate fraction compared to the leaf extract and other fractions and evaluation of scavenging power of DPPH radical and reducing power demonstrates that this fraction also showed higher antioxidant activity in vitro compared to the leaf extract and other fractions. Thus, there is evidence of a possible correlation between these compounds and antioxidant activity. The leaf extract of L. chinensis and fractions tested in this work had the following antimicrobial activity against gram-positive bacteria: Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Micrococcus luteus, Enterococcus faecalis, and Staphylococcus aureus and against the gram-negative bacteria Proteus mirabilis. The leaf extract of L. chinensis and fractions showed no activity against L. amazonensis tested up to a concentration of 40 mg/mL, nor were toxic to murine macrophages in the concentration tested (160 mg/mL). The ethyl acetate fraction (FrAcOEt) of leaf extracts showed the best results on the content of total phenolics, total flavonoids, the best antioxidant activity and the lowest values of minimum inhibitory concentration, thus demonstrating the viability of this fraction of the leaf extract as a potential source of bioactive compounds.

Orientador: Carlos Alan Candido Dias Junior / Banca: Alaor Aparecido Almeida / Banca: José Eduardo Tanus dos Santos / Resumo: Neste trabalho foi investigado a participação de MMP's na intoxicação aguda por chumbo, bem como se a doxiciclina reverte a hipertensão induzida pelo chumbo e a alteração dos níveis plasmáticos de CGRP- (peptídeo relacionado ao gene da calcitonina), adrenomedulina ou endotelina após hipertensão induzida pelo chumbo. Utilizamos 40 ratos machos Wistar adultos jovens (pesando 200g). Grupo Pb (n=12) foi intoxicado com acetato de chumbo (1ª dose 8 μg /100g do rato, e subsequentes doses 0.1μg/100g intra-peritoneal para cobrir a perda diária, durante sete dias) e tratados com doxiciclina 30mg/kg/dia do rato (Pb+Doxy = 12) via oral uma vez ao dia. Grupo controle (n=8) recebeu acetato de sódio para oferecer quantidade equimolar de moléculas de acetato do grupo Pb. Grupo controle também foi tratado com doxiciclina (Grupo Doxy, n=8). Todos os tratamentos foram realizados por sete dias. A concentração em chumbo em sangue total foi determinada em forno de grafite por espectrometria de absorção atômica. Concentrações plasmáticas de adrenomedulina, CGRP, endotelina e MMP-2 foram avaliadas usando kits comerciais de imunoensaio enzimático (ELISA). O comitê de ética institucional (protocolo nº 458/2013) aprovou todos os experimentos. Houve aumento na pressão sistólica (grupo Pb 167 ± mmHg vs. 142 ± 2 ou 143 ± 3 mmHg no grupo controle) (P<0.05), entretanto, doxiciclina mostrou diminuir valores (137 ± 3 mmHg no grupo Pb+Doxy). A concentração de chumbo no sangue foi significativamente aumentada em ambos os grupos intoxicados (Pb e Pb + Doxy) que apresentou 10μg/dL (± 1,0) vs. 2,0 μg/dL (± 1,0) em grupos não intoxicados (grupos Controle ou Doxy). Doxiciclina reverteu a redução de 45% nos níveis de adrenomedulina induzido pelo chumbo (grupo Pb apresentou 0.43 (± 0,2) vs. 1.0 pg/mL (± 0,2) em grupo Pb+Doxy). Não observamos mudança nos níveis plasmáticos de CGRP, endotelina e MMP-2. Sugerimos que a hipertensão... / Abstract: In this work was investigated the participation of MMP's in acute lead intoxication, as well as if doxycycline reverses the lead-induced hypertension,and whether there arechanges in CGRP (calcitonin gene related peptide),adrenomedullin or endothelinplasma levels afterlead-induced hypertension.40 Wistar young adult male rats(weighting 200g) were used. Pb group (n=12) was intoxicated with lead acetate (1st dose 8μg/100g of body weight, and subsequent doses 0.10 μg/100g, intra-peritoneal to cover daily loss, during seven days) and treated with doxycycline (30mg/kg of body weight) (Pb+Doxy group, = 12) or saline (Pb group, = 12) by gavage, once a day. Control groups (n=8) received sodium acetate in order to offer the same amount of acetate molecules asPb group. Control group was also treated with doxycycline (Doxy group, n=8). All treatments were performed for seven days. Lead concentrations in whole blood were determined by graphite furnace atomic absorption spectrometry. Plasma adrenomedullin, CGRP, endothelin and MMP-2 concentrations were evaluated using commercials enzyme immunoassays (ELISA) kits. All experiments were approved by the Institution ethics committee (protocol nº 458/2013). There was an increase (P<0.05) in the systolic blood pressure of Pb group (167 mmHg vs. 142 ± 2 ou 143± 3 mmHg in Control group), however, doxycycline showed a decrease in these values (137± mmHg in Pb+Doxy group). The lead concentrations in blood were significantly increased in both intoxicated groups (Pb and Pb+Doxy groups) which presented 10μg/dL±1,0 μg/dLvs. 2μg/dL±1,0 μg/dL, in non-intoxicated groups (Saline or Doxy groups). Doxycycline reversed the reduction of 45% in the levels ofadrenomedullin induced by lead (Pb group presented 0.43 pg/mL vs. 1.0 pg/mL in Pb+Doxy group). We did not observe changes in the plasmatic levels of CGRP, endothelin and MMP-2.We suggest that hypertension induced by lead exposure (8 μg/100g ... / Mestre

Orientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Luciano dos Santos Bersot / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Resumo: No presente estudo foram avaliadas carcaças de frangos convencionais (originárias de aves que recebem promotores de crescimento) e alternativos (que não recebem promotores de crescimento), com o objetivo de: a) avaliar o efeito da não utilização de tais drogas sobre a prevalência de Salmonella spp. em frangos alternativos, comparando-a com a dos convencionais; b) determinar e comparar o perfil de resistência a antimicrobianos das cepas de Salmonella spp. isoladas de ambos os tipos de frangos; c) avaliar o efeito das operações de abate sobre a contaminação das carcaças, tanto em frangos convencionais quanto nos alternativos. Foram avaliadas 50 carcaças convencionais e 48 alternativas, as quais apresentaram prevalências de Salmonella spp. de 58% e 56,3%, respectivamente, ao longo da linha de abate. Na entrada dos frangos no abatedouro, não houve diferença significativa (p > 0,05) nas prevalências entre os dois grupos testados (38% nos convencionais e 47,9% nos alternativos), sendo que ao final do processamento os convencionais apresentaram 47,9% de positividade contra 14,6% dos alternativos, diferença essa significativa (p < 0,05). S. Enteritidis foi o sorotipo predominante entre as cepas identificadas. Quanto ao perfil de resistência, nossos resultados mostraram que, quando observada, ela foi maior nas cepas oriundas dos frangos convencionais. Conclui-se que: a) a não utilização dos promotores de crescimento não levou a um aumento da prevalência de Salmonella spp. nas aves alternativas; b) as cepas oriundas de frangos alternativos revelaram uma tendência a um menor nível de resistência aos antimicrobianos testados quando comparadas às dos convencionais; c) as operações de abate, no caso das aves alternativas, foram responsáveis por uma diminuição na contaminação inicialmente observada no tocante à Salmonella spp, sendo que no caso das convencionais, pelo seu aumento. / Abstract: Conventional chicken (receiving growth promoters) and alternative chickens (not receiving growth promoters) carcasses had been valuated in the present study, with the following objectives: a) to estimate the effect of no utilization of such drugs on the prevalence of Salmonella spp. in alternative chicken as compared to that of the conventional ones; b) to determine and to compare the resistance profile to antimicrobial agents of Salmonella spp. strains isolated from both types of chickens; c) to valuate the effect of the slaughter operations on the carcasses contamination in conventional chickens and in alternative ones. Fifty conventional and 48 alternative carcasses had been valuated, with Salmonella spp. prevalences of 58% and 56.3%, respectively, along the slaughter line. At the entry of the chickens in the slaughter-house there was no significant difference (p > 0.05) in the prevalences between the two tested groups (38% in the conventional and 47,9% in the alternative), at the end of the processing the conventional presenting 47,9% of positiveness compared to 14,6% of the alternative, this difference being significant (p < 0,05). S. Enteritidis was the predominant serotype among the identified strains. In relation to the resistance profile, our results showed that when it had been observed, it was larger in the strains originated from the conventional chicken. It had been concluded that: a) the removal of the growth promoters did not produce an increase in the Salmonella spp. prevalence in the alternative chicken; b) the strains originated from alternative chicken showed a trend toward a smaller resistance level to the tested antimicrobial agents compared to those from the conventional ones: c) the slaughter operations in the case of the alternative chickens were responsible for a decrease in the contamination initially observed regarding Salmonella spp. and for its increase in the case of the conventional. / Mestre

Orientadora: Cristiane Duque / Banca: Ana Claudia Okamoto / Banca: Vivien Thiemy Sakai / Resumo: Terapias biológicas tem buscado novas substâncias/protocolos que promovam a eliminação microbiana e induzam ou estimulem a regeneração pulpa r e o desenvolvimento completo radicular d e dente s permanente s jove ns com processos patológicos pulpares. Os objetivos do estudo foram avaliar a a tividade antimicrobiana /antibiofilme de algumas combinações de antibióticos sobre microrganismos de interesse endodôntico e analisar o efeito da combinação de antibióticos com melhor ação antimicrobiana associada à sinvastatina na expressão de marcadores o dontoblásticos em células da polpa dental humana (CPDH) . A atividade antimicrobiana dos seguintes antibióticos : Metronidazol (ME), C iprofloxacina (CI), Minociclina (MI), Doxicilina (DO) e F osfomicina (FO), isolados ou em combinação dupla (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) ou tripla (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO) foram testados contra Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii e Candida albicans em condições planctônicas. Biofilmes mono - espécie de E. faecalis e biofilmes em dual - espécies de E. faecalis and C. albicans fora m prepara dos em bloc os de dentina para testar a atividade anti biofilme das combinações de antibióticos com os melhores result ados microbiológicos. O efeito antibiofilme das combinações antibióticas sobre biofilme de E. faecalis dentro dos túbulos dentinários foi também avaliada por microscopia confocal. Culturas de CPDH foram expostas à combinação antibiótica com melhor resultad o microbiol ógico e sinvastatina e determinada a viabilidade celular, atividade da f osfatase alcalina (ALP), deposição de nódulos de mineralização e expressão de DSPP (sialofosfoproteína dentinária), importante marcador odontoblástico... / Abstract: Biological therapies have searching for substances/protocols, which promote microbial elimination and induce or sti mulate pulp regeneration and completion of apical root development in young perm anent teeth wi th pulp pa thological processes . The objective s of this study were to evaluate the anti microbial /anti - biofilm activity of some antibiotics combinations on endodontic microorgan isms and the effect of the combina tion of anti biotics with the best anti microbial action associated with simvastatin on expression of odontoblast markers by human dental pulp cells (HDPC) . The antimicrobial activity of the following antibiotics : Metronidazole ( ME ), Ciprofloxacin ( CI), Minocycline (MI), Doxycycline (DO) and Fosfomycin ( FO), either alone or in double (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) or triple combinations (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO ) were tested against Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii and Candida albicans in planktonic conditions . Mono - species biofilm of E. faecalis and dual - species biofilms of E. faecalis and C. albicans were prepared in dentin blocks to test the anti - biofilm activity of antibiotic combi nations with the best microbiolo gical results . Antibiofilm effect of antibiotic combination on E. faecalis biofilm inside dentin tubules was also evaluated by confocal microscopy . Culture s of HDPC were exposed to the antibiotic combination with the best antimicrobial effect and simvastatin and determined cell viability, alkaline phosphatase activity, deposition of mineralization nodules and expression of Dspp (dentin sialophosphoprotein), important odontoblast markers of dentin mineralization. Data were analyzed statistically, considering p<0.05 . All antibiotic combina tions reduced statistically the growth of bacteria... / Mestre

Submitted by Sandro Camargo (sandro.camargo@unipampa.edu.br) on 2015-05-08T03:06:29Z No. of bitstreams: 1 127110046.pdf: 2895137 bytes, checksum: edf417bbba917e277ef644cfa24efbf9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-08T03:06:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 127110046.pdf: 2895137 bytes, checksum: edf417bbba917e277ef644cfa24efbf9 (MD5) Previous issue date: 2014-07-21 / As chalconas são compostos de origem vegetal e apresentam estrutura química simples que é amplamente utilizada como molécula protótipo para a obtenção de novos compostos bioativos através de modificações estruturais nos seus anéis aromáticos. Este fato é importante uma vez que a Sociedade Americana de Doenças Infecciosas lançou a iniciativa “10 x 20”, ou seja, o rápido desenvolvimento de 10 novos antibióticos até o ano de 2020. O objetivo deste estudo é a obtenção e determinação das propriedades físico-químicas e biológicas de chalconas com atividade antibacteriana potencial. As moléculas foram planejadas utilizando-se a metodologia de bioisosterismo clássico de valência, propondo a alteração da hidroxila presente na posição 4 do anel A da Licochalcona pelo grupo amino; no anel B houve a introdução de grupos nas posições para e meta, com graus variáveis de efeito eletrônico, de acordo com o emprego do Diagrama de Craig. As aminochalconas substituídas foram sintetizadas pela reação de Claissen-Schimdt, com quantidades equimolares de 4- aminoacetofenona e benzaldeídos variados e purificadas via cromatografia em coluna ou recristalização para posterior caracterização por espectroscopia de infravermelho e ressonância magnética nuclear. A avaliação da atividade antibacteriana e sinérgica foi realizada através do método de microdiluição em caldo descrito pelo Clinical and Laboratory Standards Institute e Teste de checkerboard frente a cepas referências de bactérias gram- positivas e gram-negativas (Staphylococcus aureus ATCC 29213 e Escherichia coli ATCC 25922), além de uma cepa S. aureus resistente à meticilina (N315). Foi utilizado o programa computacional Spartan ́08 for Windows para determinação da estrutura química em 3D e cálculo dos valores das energias de HOMO e LUMO. O estudo teórico das propriedades físico-químicas foi realizado pelos programas Chem3D Ultra, Molinspiration e MarvinSketch 6.2. Para o estudo teórico da toxicidade e dos perfis de druglikeness e drugscore empregou-se o programa Osiris Property Explorer. Os compostos 1, 3 e 7 apresentaram os menores valores de CIM quando ensaiados frente a ambas cepas de S. aureus, o que sugere que o mecanismo de resistência bacteriana não afeta a atividade desempenhada pelas 4-aminochalconas. Os compostos 5 e 8 foram os mais ativos frente a cepas E. coli. Não houve interação significativa entre as 4-aminochalconas e os antibióticos testados (oxacilina e cloranfenicol). Através da avaliação das relações estrutura-atividade, verificou-se que o composto 8 apresentou vários parâmetros que podem justificar sua ação frente a bactérias gram-negativas, como peso molecular elevado e menores valores de cLogP e LogD 7.4 . Resultados superiores à levofloxacina foram também evidenciados quando calculado seu potencial de druglikeness e de drugscore. Todos os compostos apresentaram alto risco teórico para o efeito mutagênico e baixo perfil toxicológico para o efeito irritante. Em relação aos efeitos no sistema reprodutor, apenas o composto 1 apresentou um risco médio, e para os compostos 2 e 3 foi descrito alto risco para o efeito tumorogênico. Mesmo apresentando uma atividade antibacteriana baixa, estas moléculas podem vir a delinear modificações estruturais com o intuito de aumento da ação biológica, visto que todas enquadram-se dentro dos parâmetros delineados na Regra dos Cinco e, devido a isso, são promissoras a apresentar uma boa biodisponibilidade oral. / Chalcones are vegetal origin compounds and they present a simple chemical structure which is widely used as a molecule prototype in order to obtain new bioactive compounds by structural changes in their aromatic rings. Such fact is important as the American Society of Infectious Diseases has released the “10 x 20” initiative, meaning the fast development of 10 new antibiotics up to 2020. This study aims to obtain and establish chalcone’s physical- chemical and biological properties with potential antibacterial activity. The molecules were designed by the classic bioisosterismo classic methodology, proposing the modification of the hydroxyl existent in licochalcone’s position 4 of ring A in the amino group, in ring B groups were introduced in para and meta positions, with variable degrees of electronical effects, according to the usage of Craig ́s Diagram. The replaced aminochalcones were synthesized by the Claissen-Schimdt reaction with equimolar quantities of 4-aminoacetophenone and varied benzaldehydes and purified by column chromatography or recrystallization for further characterization by infrared spectroscopy and nuclear magnetic resonance. The evaluation of the antibacterial and synergic activity was made through Microdilution Methods described by the Clinical and Laboratory Standards Institute and checkerboard test against reference strains of gram-positive and gram-negative (Staphylococcus aureus ATCC 29213 and Escherichia coli ATCC 25922), plus S. aureus meticillin resistant (N315). Spartan’08 for Windows was the computational program used to establish the 3D chemical structure and the HOMO’s and LUMO’s energy amount figures. The theoretical study of Physical-chemical properties was accomplished by Chem3D Ultra, Molinspiration and MarvinSketch 6.2 programs. In order to theoretically study both toxicity and profile of druglikeness and drugscore, Osiris Property Explorer program was used. The compounds 1, 3 and 7 showed the smallest CIM values when against both S. aureus strains, which suggests that the bacterial resistance mechanism doesn’t affect the 4-aminochalcones activity. Compounds 5 and 8 were more actives against strains E. coli. There was no significant interaction among the 4- aminochalconas and the antibiotics tested (oxacilin and chloramphenicol). Throughout the structural-activity relation evaluation, it was verified that compound 8 presented several parameters that may justify its action facing Gram-negative bacteria, such as the growth of its molecular weight and decreased values of cLogP and LogD7,4 . Levofloxacin superior results were also certified when its potential of druglikeness and drugscore were figured. All the compounds have presented a high theoretical risk to the mutagenic effect and low toxicological profile to the irritant effect. Relating to the effects in the reproductive system, only compound 1 has presented a mid-risk and compound 2 and 3 high risk to tumorigenic effect. Even though these molecules have showed low antibacterial activity, they might outline changes in their structure aiming the biological action growth as they all fit the Rule of Five parameters and as a result, they tend toward a good oral bioavailability.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-22T14:22:35Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Carmem Lucia dos Santos Machado.pdf: 2830040 bytes, checksum: e257722fc7ff4b644add8fc45c9be5cd (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-09-22T14:22:57Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Carmem Lucia dos Santos Machado.pdf: 2830040 bytes, checksum: e257722fc7ff4b644add8fc45c9be5cd (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-22T14:22:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Carmem Lucia dos Santos Machado.pdf: 2830040 bytes, checksum: e257722fc7ff4b644add8fc45c9be5cd (MD5) Previous issue date: 2016-06-24 / A apocinina é uma acetofenona que apresenta estrutura pequena e possui diversas atividades biológicas. Sua estrutura pode ser oxidada em certas condições químicas ou biológicas e resultar na formação do seu dímero, a diapocinina. As chalconas são compostos que contém em sua estrutura básica a porção 1,3-diarilpro-2-em-1-ona e se caracterizam por apresentar ampla variedade de atividades biológicas, como atividade antioxidante e antibacteriana. Estudos demostram que modificações estruturais nos anéis aromáticos das chalconas resultam na obtenção de compostos com atividade aceptora de radicais e antibacterianas. Neste trabalho foram realizadas a síntese de chalconas derivadas da apocinina e diapocinina, a avaliação da atividade antioxidante e antibacteriana. Adicionalmente foram realizados estudos de modelagem molecular, determinação de propriedades físico-químicas e a avaliação da toxicidade in silico, com a finalidade de se obter compostos que possam ser utilizadas como protótipos a novos fármacos. As chalconas derivadas da apocinina e da diapocinina, com substituintes 4-OCH3, 3,4-OCH3, e 3,4,5-OCH3 ligados ao anel B, e não substituída (H), foram sintetizadas através da condensação de Claisen-Schmidth, dos benzaldeídos com a apocinina e diapocinina, em meio básico, temperatura ambiente, por 24 horas. Ao final de cada reação, os compostos foram analisados e purificados por recristalização ou em cromatografia em coluna. Os compostos foram caracterizados por CCD, ponto de fusão, espectroscopia de infravermelho (IV), e por 1H e 13C RMN. A análise de capacidade aceptora de radicais das moléculas sintetizadas, foram realizadas através do emprego do método colorimétrico de análise do DPPH e ABTS, utilizando como padrão BHT e Trolox, respectivamente, nas concentrações 6,75, 12,5, 25, 50, 100, 200 e 400 μM. A avaliação da atividade antibacteriana dos compostos obtidos foi realizada através do método de difusão ágar-cilindro e leitura de halos de inibição, onde foram testadas as cepas de Staphylococcus aureus ATCC 25923 (bactéria Gram positiva) e Escherichia coli ATCC 25922 (bactéria Gram negativa), utilizando como padrão o antibiótico cloranfenicol. A análise de toxidade in silico, como a genotoxidade, mutagenicidade, efeitos irritante e sobre sistema reprodutor, foi realizado através do programa computacional Osiris Property Explorer. Os compostos apresentaram atividade aceptora do radical DPPH e ABTS na faixa de concentração de 400 a 12,5μM, sendo superiores ao padrão de BHT e Trolox. No ensaio de avaliação da atividade antibacteriana todos os compostos apresentaram atividade antibacteriana frente à cepa Staphylococcus aureus, sendo, no entanto, inferior ao padrão cloranfenicol. Não foi observada atividade contra a cepa Escherichia coli. A partir da análise da toxicidade in silico observou-se que somente os compostos que tinham grupamentos OCH3 substituídos em posição para, apresentaram risco médio e alto para efeito irritante e tóxico para o sistema reprodutor. Os demais compostos apresentaram risco teórico baixo de desenvolver os efeitos tóxicos citados. Diante dos resultados obtidos, observa-se que as chalconas derivadas da apocinina e diapocinina se apresentam como compostos promissores para o estudo e o desenvolvimento de agentes com atividade antioxidante, com ação antibacteriana e baixa toxicidade teórica, sendo assim demonstrando potenciais agentes para se utilizar na terapêutica. / The apocynin is an acetophenone which has little structure and has several biological activities. Its structure can be oxidized in certain chemical or biological conditions and result in the formation of the dimer, the diapocinina. The chalcones are compounds containing in its basic structure portion 1,3-diaryl-pro-2-en-1-one and are characterized by having variety of biological activities such as antibacterial and antioxidant activity. Studies show that structural modifications on the aromatic rings of chalcones result in obtaining the compounds with acceptor radical and antibacterial activity. In this work were performed chalcones derived synthesis of apocynin and diapocinina, the evaluation of antioxidant and antimicrobial activity. It was also performed molecular modeling studies, determination of physicochemical properties and toxicity evaluation in silico, in order to obtain compounds which can be used as prototypes of new drugs. The derivatives of the chalcones and apocynin diapocinina, substituents 4-OCH3, 3,4-OCH3, and 3,4,5-OCH3 attached to B ring, unsubstituted (H) were synthesized by Claisen-Schmidth condensation, of benzaldehydes with apocynin and diapocinina, in basic medium at room temperature for 24 hours. After each reaction, the compounds were analyzed and purified by recrystallization or column chromatography. The compounds were characterized by TLC, melting point, infrared spectroscopy (IR) and 1H and 13C NMR. The acceptor capacity analysis of radical synthesized molecules were carried out by employing the colorimetric method of analysis of DPPH and ABTS using standard as BHT and Trolox, respectively, at concentrations 6.75, 12.5, 25, 50, 100 200 and 400 uM. The evaluation of the antibacterial activity of the obtained compounds was performed by the method of agar-cylinder diffusion and reading inhibition zones, where Staphylococcus aureus ATCC 25923 (Gram positive bacterium) and Escherichia coli ATCC 25922 (Gram negative bacteria) were tested using as standard antibiotic chloramphenicol. The analysis of in silico toxicity, such as genotoxicity, mutagenicity, and irritating effects on reproductive system, was performed using the computer program Osiris Property Explorer. The compounds showed acceptor activity of DPPH and ABTS radical in the concentration range of 400 to 12,5μM, being superior to the standard of BHT and Trolox. The evaluation of the antibacterial activity test all compounds showed antibacterial activity against Staphylococcus aureus strain being, however, lower than the standard chloramphenicol. There was no activity against Escherichia coli strain. From the analysis of in silico toxicity it was observed that only compounds which had OCH3 groups substituted in the para position, exhibited medium and high risk of irritating and toxic effect on the reproductive system. Other compounds showed low theoretical risk of developing toxic effects reported. Considering the results, it is observed that the derivatives of apocynin and diapocinina chalcones present as promising compounds for the study and development of agents having antioxidant activity, antibacterial action and low theoretical toxicity, thus demonstrating potential agents for use in therapy.

Introdução. Pseudomonas aeruginosa é um patógeno clinicamente importante. Existem diversos mecanismos de resistência aos antimicrobianos em P. aeruginosa, dentre eles a produção de enzimas (β-lactamases) e sistemas de efluxo se destacam, uma vez que são capazes de conferir resistência aos carbapenêmicos. Objetivo. Avaliar os sistemas de efluxo MexAB-OprM e MexXY em isolados clínicos de P.aeruginosa de pacientes atendidos no Hospital de Clínicas de Porto Alegre-RS e relacionar a expressão destes sistemas com a CIM de meropenem em isolados produtores e não produtores de metalo-beta-lactamases (MBL). Metodologia. Um total de 86 isolados de P. aeruginosa com suscetibilidade reduzida aos carbapenêmicos foram avaliados. A hiperexpressão dos sistemas MexAB e MexXY foi determinada fenotipicamente utilizando inibidor seletivo da bomba (PAβN). MBLs foi determinada por PCR utilizando primers específicos. Resultados. O fenótipo de hiperexpressão dos sistemas de efluxo estudados foi observado em 34 (47,8%) dos 71 isolados negativos para a produção de MBL e em 14 (93.3%) dos 15 isolados MBL positivos. Na presença de PaβN, todos os isolados não produtores de MBL apresentaram uma redução da CIM para meropenem para valores na faixa de suscetibilidade. Entretanto, das 13 P. aeruginosa produtoras de MBL que diminuíram a CIM, essa redução não foi para valores dentro da faixa de sensibilidade. Conclusão. Os isolados de P. aeruginosa não produtores de MBL apresentam resistência ao meropenem devido a hiperexpressão de MexAB-OprM. Na presença de PaβN, independente de apresentarem produção de MBL, o CIM de meropenem reduziu para valores ≤ 8 mg/L. Contudo, quando isolados não apresentavam MBL, a CIM de meropenem reduziu para níveis de sensibilidade. / Introduction. Bacterial efflux pump systems are resistance mechanisms which may lead to therapeutic failure of antibiotic treatment since many antimicrobial agents are substrate for these mechanisms. The aim of the study was to evaluate the expression of the MexAB, MexXY pump efflux and to determine its influence on meropenem MIC in carbapenemase producing and non-producing P. aeruginosa. Methods. A total of 86 non-repetitive clinical isolates of P. aeruginosa with reduced susceptibility to carbapenems were evaluated. Overexperession of MexAB and MexXY efflux systems were evaluated phenotypically using the PAβN selective inhibitor. Metallo-β-lactamases (MBL) were detected by PCR using specific primers. Results. The efflux pump-overexpressed phenotype was observed in 34 (47.8%) MBL-negative and in 14 (93.3%) MBL-positive isolates. In the presence of the PaβN, all non-producers of MBL presented a reduction of meropenem MICs to the range of susceptibility. In contrast, the 13 P. aeruginosa MBL-producing isolates decreased meropenem MICs at least 16-fold but this reduction did not reach the range of susceptibility. Conclusion. P. aeruginosa non-MBL-producing showed resistance to meropenem due to overexpression of MexAB-OprM. In the presence of PaβN, the isolates harboring or not MBL genes, the meropenem MICs were reduced to values ≤8 mg/L. However, when the isolates harbor MBL genes, the meropenem MIC values were reduced to the susceptibility.

Orientador: Reinaldo Marchetto / Banca: Saulo Santesso Garrido / Banca: Flávio Henrique da Silva / Banca: Clovis Ryuichi Nakaie / Banca: Hérida Regina Nunes Salgado / Resumo: YacG é uma pequena proteína membro da família dos zinc-fingers, descoberta em E. coli. Sua função biológica está ligada a inibição da atividade de DNA girase e ao metabolismo do stress em procariotos. YacG atua na inibição da atividade de DNA girase por um mecanismo bipartido, a região do domínio zinc-finger atua impedindo a ligação do DNA à subunidade B e a região c-terminal liga-se a subunidade A. Embora a literatura cite YacG como sendo um inibidor de DNA girase, nada foi observado a respeito da atividade de inibição de YacG de E.coli e de outras linhagens de micro-organismos frente a outras DNA topoisomerases e não foi realizado nenhum trabalho envolvendo fragmentos peptídicos desta proteína, e tampouco ensaios de inibição do crescimento celular por estes. Sendo assim YacG de Klebsiella pneumoniae foi obtida por expressão heteróloga e uma série de peptídeos derivados desta foram sintetizados pelo método de fase sólida. Os peptídeo sintéticos foram projetados de forma a manter a região zinc-finger nativa (YacGAG1), substituídos os resíduos de cisteína por serina (YacGAG4), alanina (YacGAG5), histidina (YacGAG6 e YacGAG8) e também sintetizada a sua região c-terminal (YacGAG7). Os ensaios de inibição da atividade de DNA girase pelos peptídeos sintéticos e proteína, mostraram que YacG, YacGAG4, YacGAG5 e YacGAG7 conseguem inibir a atividade desta enzima, ao contrario do fragmento nativo YacGAG1. Por outro lado YacGAG1 conseguiu inibir a atividade de Topoisomerase IIα humana juntamente com os demais peptídeos YacGAG4, YacGAG5 e YacGAG7 e proteína YacG. Os ensaios aqui apresentados corroboram com os dados apresentados na literatura onde a região c-terminal por si só é capaz de inibir a atividade de DNA girase. Os ensaios de anisotropia de fluorescência demonstraram que a interação dos peptídicos sintéticos com DNA girase se dá pela interação destes com... / Abstract: YacG belongs to zinc-finger's protein family discovered in E. coli. Its biological function is connected to the catalytic inhibition of DNA gyrase and stress metabolism in prokaryotes. This protein inhibits DNA gyrase (gyrase) through a bipartite mechanism where the zinc-finger domain prevents the DNA ligation to the B subunit (GyrB) and the C-terminal bindings to the A subunit (GyrA). Although it is classified as a gyrase inhibitor neither the inhibition activity of YacG from E. coli and other microorganisms against other DNA topoisomerases nor the biological activity of fragments in cellular assays has been evaluated until present. In this study, YacG from Klebsiella pneumoniae was obtained by heterologous expression and derivative peptides from this protein were synthesized by the solid-phase method. The synthetic peptides were designed to keep the native region of zinc-finger (YacGAG1), to substitute cysteines to serines (YacGAG4), to alanine (YacGAG5), to histidine (YacGAG6 and YacGAG8) and also having only the C-terminal region (YacGAG7). The inhibition assays of gyrase by the peptides and the native protein revealed that YacG, YacGAG4, YacGAG4 e YacGAG7 inhibited this enzyme and the human topoisomerase IIα (htopoIIα). However, the same was not observed for the native fragment YacGAG1, which inhibited only the htopoIIα. The results are in agreement with literature showing that solely the C-terminal region is able to inhibit the gyrase. The assays of fluorescence anisotropy indicated that these synthetic peptides interact with GyrA. Besides inhibiting the gyrase and the htopoIIα, these peptides also revealed bacteriostatic activity against gram-negative and gram-positive bacteria. A computational study by applying a molecular dynamics protocol highlighted the importance of residues I47, R46 and W40 from YacG in the process of molecular recognition and interaction with GyrB. The results... / Doutor