Foi realizado um estudo em resistência bacteriana, com um enfoque especial para o Mycobacterium tuberculosis. Fez-se também uma apreciação das implicações clínicas do fenômeno à luz de levantamentos realizados no Brasil e no exterior. Discutiram-se os testes de sensibilidade, examinando-se seu posicionamento nos programas de saúde pública e em medicina individual. Par atestar a sensibilidade dos bacilos isolados a partir de amostras de escarro de tuberculosos não tratados previamente, empregou-se o método das proporções de Canetti, Rist e Grosset. As drogas utilizadas foram a estreptomicina, hidrazida, rifampicina, estambutol e PAS. A resistência a uma ou mais de uma droga encontrada foi e 12,80%, com predomínio de germes resistentes a uma droga somente. Os medicamentos que com maior freqüência selecionaram mutantes resistentes foram a estreptomicina (6,40%) e hidrazida (5,60%). Os resultados encontrados mostraram semelhanças aos apontados por outros levantamentos.

Klebsiella pneumoniae (KP) pertence à família Enterobacteriaceae e é frequentemente isolada em infecções nosocomiais, reportada globalmente como uma das mais importantes causas de bacteremias. O seu tratamento usual com β-lactâmicos foi posto a prova na década de 80, com o surgimento de cepas produtoras de β-lactamases de espectro estendido (ESBLs), e posteriormente com as carbapenemases, como sua principal representante Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), capazes de hidrolisar todos os β-lactâmicos. Apesar das limitadas opções, em geral as Klebsiella pneumoniae produtoras de KPC (KP-KPC) apresentam susceptibilidade às polimixinas, aminoglicosídeos e tigeciclina, que são comumente aplicadas em regimes terapêuticos combinados, dependente dos perfis de sensibilidade ou resistência a estas drogas, mas dos quais ainda não há informações suficientes para a definição do tratamento mais adequado. A escassez de opções terapêuticas é um dos fatores que contribuem para os altos índices de mortalidade das infecções por K. pneumoniae, de cerca de 40%. Assim, se fazem necessárias avaliações dos perfis fenotípicos de isolados de KP-KPC e a caracterização da disseminação deste mecanismo de resistência, avaliando a presença de perfis clonais relacionados dentro da população. A partir deste cenário, os objetivos deste trabalho foram determinar as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) frente à polimixina B (PMB), meropenem (MEM) e tigeciclina (TGC), os perfis de sensibilidade frente a outras drogas comumente utilizadas no tratamento destas infecções, assim como caracterizar molecularmente as amostras resistentes à PMB. Para a determinação das CIMs e dos perfis de susceptibilidade foram utilizadas as técnicas de microdiluição em caldo e disco-difusão, respectivamente, e o perfil molecular foi analisado através de técnica de macrorestrição de DNA seguida por PFGE. Foram incluídas neste estudo 158 amostras isoladas de corrente sanguínea, de quatro hospitais terciários de Porto Alegre. Destas 158 amostras, nenhuma foi sensível a MEM de acordo com o Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), 118 (74,7%) a PMB utilizando a recomendação do European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), e 94 (59.5%) à TGC considerando EUCAST ou 137 (86.7%) de acordo com o Food and Drug Administration (FDA). Um total de 48 (30.4%), 28 (17.7%) e 16 (10.1%) isolados foram considerados sensíveis à amicacina (AMK) de acordo com CLSI, EUCAST e USCAST, respectivamente, e 11 (7.0%), 9 (5.7%) e 9 (5.7%) reportados como sensíveis à gentamicina (GEN) de acordo com CLSI, EUCAST e USCAST, respectivamente. Doxiciclina foi o antimicrobiano mais ativo (24, 60.0%) frente aos 40 (25,3%) isolados resistentes a PMB. Destes 40 isolados, 29(72.5%) foram caracterizados molecularmente sendo encontrados 18 clones, dos quais cinco perfis clonais foram identificados em mais de um hospital. Neste estudo, pudemos demonstrar um importante aumento nos níveis de resistência às polimixinas, acompanhado por um desafiador perfil de susceptibilidade frente as outras opções terapêuticas disponíveis, ainda que os índices de sensibilidade destas drogas variem de acordo com os pontos de corte de cada comitê. Quanto à caracterização molecular, a detecção de dezoito clones diferentes e a presença do mesmo perfil em mais de um hospital provavelmente estão associadas à emergência de resistência mediada por mutações, assim como a um processo de disseminação horizontal. / Klebsiella pneumoniae (KP) belongs to the family Enterobacteriaceae and is frequently isolated in nosocomial infections, reported globally as one of the most important causes of bacteremia. Its usual β-lactam treatment was challenged in the 1980s with the emergence of extended-spectrum β-lactamase producing (ESBLs) strains, and later with carbapenemases, as its main representative Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), capable of hydrolyze all β-lactam. Despite the limited options, KPC-producing Klebsiella pneumoniae (KPC-KP) are generally susceptible to polymyxins, aminoglycosides and tigecycline, which are commonly applied in combination therapy regimens depending on levels of sensitivity or resistance to these drugs, but of which there is still insufficient information to define the most appropriate treatment. The scarcity of therapeutic options is one of the factors that contribute to the high mortality rates of K. pneumoniae infections, of around 40%. Thus, it is necessary to evaluate the phenotypic profiles of KPC-KP isolates and the characterization of the dissemination of this resistance mechanism, evaluating the presence of related clonal profiles within the population. From this scenario, the objectives of this study were to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) against polymyxin B (PMB), meropenem (MEM) and tigecycline (TGC) by broth microdilution and the susceptibility profiles to aminoglycosides and other drugs by disk-diffusion method, as well as to evaluate the molecular profile of KPC-KP isolates from four tertiary hospitals in Porto Alegre. A total of 158 samples were included in this study, where none were sensitive to MEM according to the Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), 118 (74.7%) to PMB using the recommendation of the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), and 94 (59.5%) to TGC considering EUCAST or 137 (86.7% %) according to Food and Drug Administration (FDA). A total of 48 (30.4%), 28 (17.7%) and 16 (10.1%) isolates were considered susceptible to amikacin (AMK) according to CLSI, EUCAST and USCAST, respectively, and 11 (7.0%), 9 %) and 9 (5.7%) reported as sensitive to gentamicin (GEN) according to CLSI, EUCAST and USCAST, respectively. Doxycycline was also the most active antimicrobial (24, 60.0%) against 40 (25.3%) PMB resistant isolates. Of these 40 isolates, 29 (72.5%) were clonally related, resulting in 18 clones, where five profiles were identified in more than one hospital. In this study, we could demonstrate an important increase in the levels of resistance to polymyxins, accompanied by a challenging profile of susceptibility to other drugs, although the sensitivity indexes of the latter vary significantly according to the breakpoints of each committee. As for molecular characterization, the detection of eighteen different clones and the presence of the same profile in more than one hospital are probably associated with the emergence of resistance mediated by mutations, as well as a process of horizontal dissemination.

Os fármacos atualmente disponíveis para o tratamento da Doença de Chagas e leishmaniose possuem eficácia insatisfatória, principalmente devido à resistência parasitária e reações adversas severas. Duas entomobactérias, Photorhabdus luminescens e Xenorhabdus nematophila, produzem uma variedade de metabólicos secundários tóxicos a células eucarióticas. Diante disto, testou-se a toxicidade de metabólitos secretados por P. luminescens e X. nematophila sobre Leishmania amazonensis e Trypanosoma cruzi, in vitro. Os meios condicionados de ambas bactérias mostraram significativo efeito parasiticida de forma concentração e tempo-dependente (L. amazonensis: IC50 P. luminescens = 21,80 μg/mL e X. nematophila = 0,33 mg/mL; T. cruzi: IC50 P. luminescens = 1,0 mg/mL e IC50 X. nematophila = 0,34 mg/mL) e apresentaram alta seletividade ao parasito (L. amazonensis: SIP. luminescens = 3.92 e SIX. nematophila = 19,85; T. cruzi: SIP. luminescens = 7,23 e SIX. nematophila = 14.17 para promastigotas e tripomastigotas, respectivamente). Além disso, os metabolitos estimulam a atividade de macrófagos contra amastigotas por um mecanismo independente de óxido nítrico. Com relação à caracterização dos compostos antiparasitários, sugere-se que moléculas com diferentes características atuem sobre cada parasito. P. luminescens secreta uma molécula leishmanicida de natureza peptídica menor que 3 kDa e uma molécula tripanocida de natureza não proteica, resistente a aquecimento a 100 ºC. X. nematophila produz uma molécula leishmanicida de polaridade inferior à tripanocida, uma vez que a atividade antiparasitária ficou em fases diferentes na extração com metanol. O mecanismo de ação de ambas bactérias sobre promastigotas parece estar relacionado à lesão mitocondrial, uma vez que ambas levaram à despolarização da membrana mitocondrial. X. nematophila, além disso, estimula a produção de ROS pelas formas promastigotas. A seletividade pelo parasito aliada a baixa citotoxicidade tornam estas bactérias promissoras fontes de compostos com potencial terapêutico contra leishmanioses e doença de Chagas. / Drugs currently available for Chagas disease and leishmaniasis have unsatisfactory efficacy, mainly due to parasitic resistance and severe adverse reactions. Two entomobacteria, Photorhabdus luminescens and Xenorhabdus nematophila, produce a variety of secondary metabolites toxic to eukaryotic cells. So, the toxicity of the metabolites secreted by Photorhabdus luminescens and Xenorhabdus nematophila were tested against Trypanosoma cruzi and Leishmania amazonensis. The mean values of both bacteria showed a significant concentration-dependent and time-dependent effect 14.17 (L. amazonensis: IC50P. luminescens = 21.80 μg / mL and IC50X. nematophila = 0.33 mg / mL, T. cruzi: IC50P. luminescens = 1,0 mg/mL and IC50X. nematophila = 0 , 34 mg / mL), and showed a high selectivity to the parasite (L. amazonensis: SIP. luminescens = 3,92 and SIX.nematophila = 19.85, T. cruzi: SIP. luminescens = 7.23 and SIX.nematophila = 14.17 for promastigotes and trypomastigotes, respectively). In addition, cultures stimulate the activity of macrophages against amastigotes by an independent mechanism of nitric oxide. Regarding the characterization of antiparasitic compounds, it is suggested that molecules with different characteristics act on each parasite. P. luminescens secretes a leishmanicidal peptide molecule lesser than 3 kDa and a trypanocidal molecule of non-protein nature, resistant to heating at 100 °C. X. nematophila produces a leishmanicidal molecule of lower polarity than trypanocidal, since antiparasitic activity was at different phases in methanol extraction. The mechanism of action of both bacteria on promastigotes seems to be related to the mitochondrial injury, since both led to the depolarization of the mitochondrial membrane. X. nematophila, furthermore, stimulates the production of ROS by the promastigote. Selectivity by the parasite coupled with low cytotoxicity makes these bacteria promising sources of compounds with therapeutic potential against leishmaniasis or Chagas' disease.

Orientadores: Marcio Zaffalon Casati, Sergio de Toledo / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-10T01:28:41Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ribeiro_EricaDelPeloso_D.pdf: 610626 bytes, checksum: 77eba31c722b912eac6fdb2cdbc2b89a (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do debridamento periodontal associado ou não à administração sistêmica de metronidazol e amoxicilina no tratamento da periodontite crônica avançada. Foram selecionados 50 pacientes com pelo menos 8 dentes com sangramento à sondagem (SS) e profundidade de sondagem (PS) = 5 mm, sendo 2 dentes com PS = 6 mm e mais 2 com PS = 7 mm. Os pacientes foram divididos, aleatoriamente, em 4 grupos: raspagem e alisamento radicular + placebo (RAR); RAR + metronidazol e amoxicilina (RAR/AB); debridamento periodontal + placebo (DB) e DB + metronidazol e amoxicilina (DB/AB). Os seguintes parâmetros clínicos foram avaliados: índice de placa, índice gengival, SS, posição da margem gengival, PS e nível clínico de inserção relativo (NICr). A avaliação microbiológica foi feita através da reação da polimerase em cadeia (PCR) em tempo real para quantificação de Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia e Aggregatibacter actinomycetemcomitans. O teste imunoenzimático (ELISA) permitiu a detecção dos níveis de PGE2, IL-1ß, IFN-? e IL-10 no fluido gengival. Os parâmetros descritos foram avaliados antes do tratamento, 1, 3 e 6 meses após. Não foi observada diferença estatística entre os grupos quanto ao SS, PMG e NICr (p>0,05). Em relação à redução na PS, esta foi, no 6° mês, inferior no grupo DB quando comparada aos grupos RAR/AB e DB/AB (p<0,05). Não foi detectada diferença estatística entre os grupos na prevalência e quantidade de P. gingivalis, T. forsythia e A. actinomycetemcomitans tanto em bolsas inicialmente moderadas e profundas. Também não foi observada diferença entre os tratamentos quanto aos níveis de PGE2, IL-1ß, IFN-?, IL-10 e na proporção IL-1ß/IL-10. Pode-se concluir, portanto, que o debridamento periodontal é uma abordagem justificável para tratamento da periodontite crônica avançada e que a único benefício da utilização adjunta de metronidazol e amoxicilina parece ser a redução na necessidade de retratamento. / Abstract: The aim of the present study was to evaluate the effect of periodontal debridement, with or without the systemic administration of metronidazole and amoxicillin, in the treatment of severe chronic periodontitis. Fifty patients presenting at least 8 teeth with probing pocket depth (PPD) = 5 mm and bleeding on probing (BOP), out of which at least 2 teeth had PPD = 7 mm and a further 2 teeth with PPD = 6 mm, were selected. Patients were randomly divided into four groups: scaling and root planning + placebo (SRP); SRP + metronidazole and amoxicillin (SRP/AB); periodontal debridement + placebo (DB) and DB + metronidazole and amoxicillin (DB/AB). The following clinical outcomes were evaluated: visible plaque index, gingival index, BOP, position of the gingival margin (PGM), relative attachment level (RAL) and PPD. The microbiological analysis was done by real-time polymerase chain reaction (PCR) for quantification of Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia and Aggregatibacter actinomycetemcomitans. The enzyme-linked immunosorbent assay technique (ELISA) permitted the detection of PGE2, IL-1ß, IL-10 and IFN-? levels in gingival crevicular fluid. All parameters were evaluated at baseline and 1, 3 and 6 months after periodontal treatment. No difference was observed between groups regarding BOP, PGM and RAL (p>0.05). Six months after treatment, the DB group showed less PPD reduction than SRP/AB and DB/AB groups (p<0.05). The results of realtime PCR failed to demonstrate significant differences between groups in the prevalence and quantity of A. actinomycetemcomitans, P. gingivalis and T. forsythia. Also, no difference was observed between groups in the levels of PGE2, IL-1ß, IFN-?, IL-10 and on the proportion of IL-1ß/IL-10. It can be concluded that periodontal debridement is a justified approach for the treatment of severe chronic periodontitis and that only benefit of the adjunct use of metronidazole and amoxicillin was the reduction in the need of retreatment. / Doutorado / Periodontia / Doutor em Clínica Odontológica

A vancomicina é um glicopeptídeo amplamente utilizado na prática clínica, especialmente nos pacientes criticamente enfermos. No entanto, nos últimos anos tem ocorrido aumento nas taxas de falência terapêutica da vancomicina. Algumas situações clínicas podem alterações a farmacocinética e farmacodinâmica da vancomicina como a sepse, a insuficiência renal e a hemodiálise. A obtenção do nível sérico é o método mais prático para monitorar o tratamento e pode auxiliar na manutenção da concentração sérica terapêutica do antibiótico e na prevenção de toxicidade. O objetivo deste trabalho é avaliar a adequação dos níveis séricos de vancomicina através da monitoração sérica do antibiótico. O delineamento do estudo é uma coorte prospectiva e observacional realizada na Unidade de Tratamento Intensivo do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Todos os pacientes acima de 18 anos que receberam vancomicina por 48 horas ou mais foram analisados. Os grupos analisados foram divididos entre pacientes com e sem o diagnóstico de sepse, com e sem insuficiência renal, nos pacientes que realizaram e ou não terapia renal substitutiva e nos pacientes com e sem o diagnóstico de obesidade. Além disso, foi analisada a adequação no tempo da coleta do nível sérico da droga. Observamos que as doses utilizadas entre os diferentes grupos variaram de 0,5 g/dia a 3 g/dia e o total de amostras coletas foi de 289. Considerando o total de amostras, o número de amostras abaixo do esperado, de 15 mg/L, foi de 106 (37%) da amostra. Níveis séricos abaixo de 10 mg/L foram observados em 57 (20%) das coletas. Analisando o momento de cada coleta, considerando adequado as amostras obtidas uma hora antes da administração do antibiótico, verificou-se que apenas 41 (14%) do total as amostras foram obtidas imediatamente antes da dose do antibiótico. A análise e interpretação dos resultados dependem diretamente da coleta no tempo correto, conseqüentemente os resultados do estudo assim como a interpretação clínica do nível sérico foram prejudicados. Sugerimos maior rigor na coleta sanguínea para este exame uma vez que as coletas não realizadas no vale da dose de vancomicina podem acarretar interpretações equivocadas e levar ao uso errático do antibiótico. Em conclusão, os pacientes incluídos neste estudo foram expostos a doses sub terapêuticas do antibiótico. Monitorar a concentração sérica de vancomicina é recomendada a fim de otimizar o sucesso terapêuticos. / The vancomycin is a highly used glycopeptide in clinical practice, specially in critically ill patients. However, in the last few years there has been an increase in the vancomycin treatment failure rates. Some clinical situations may cause change to the vancomycin pharmacokinetic and pharmacodynamic such as sepsis, renal failure and hemodialysis. The obtaining of the serum trough concentration level is the most practical method to monitor the treatment and it may help in the maintenance of the antibiotic therapeutic serum concentration and in the prevention of toxicity. The purpose of the present work is to evaluate the adequacy of vancomycin serum levels through the antibiotic serum monitoring. The study outline is a prospective and observational cohort performed in the Intensive Care Unit at the Porto Alegre Clinical Hospital. All patients above 18 years old who were medicated with vancomycin for 48 hours or more were analyzed. The analyzed groups were divided in patients with and without a sepsis diagnosis, with and without renal failure, in patients who took replacement renal therapy or not and in patients diagnosed obese or not. Besides this, the adequacy at the time of collecting the drug serum level was analyzed. The administered dose of vancomycin ranged from 0,5 g/day to 3 g/day and the total of the samples collected was of 289. Considering the dosages of serum levels in a total samples, the number of those below the expected level, of 15 mg/L, was of 106 (37%). Serum level samples below 10 mg/L were observed in 57 (20%) of the collections. Analyzing the moment of each collection, considering adequate the obtained samples one hour before the antibiotic administration, we highlight that only in 41 (14%) of the obtained samples were collected in this period of time. The analysis and interpretation of the results depend directly on the material collection at the correct time. Therefore the study results as well as the clinical interpretation of the serum level were affected. We suggest a better control when the blood is collected for this exam as the collections not performed properly concerning the vancomycin dosage may result in mistaken interpretations which may lead to a wrong use of the antibiotic. In conclusion, the patients included in this study were exposed to antibiotic subtherapeutic doses. Considering the increased risk of selecting resistant microorganisms, monitoring of serum vancomycin levels is recommended.

Resumo não disponível

Introdução: Durante a década passada, todas as crianças com câncer submetidas à quimioterapia que apresentassem um episódio de neutropenia febril (NF) eram hospitalizadas e manejadas com antibioticoterapia endovenosa de largo espectro, independente de sua condição clínica. Neste estudo, os autores comparam o uso de antibioticoterapia endovenosa versus a oral. Pacientes e Métodos: Foram selecionadas todas as crianças com idade inferior a 18 anos, classificadas como baixo risco para complicações e neutropênicas. O estudo ocorreu entre 2002 a 2005, na Unidade de Oncologia Pediátrica do Hospital de Clínicas de Porto Alegre. Os pacientes, divididos em grupo A e grupo B, eram randomizados a receberem terapia oral ou endovenosa. O tratamento utilizado para o grupo A foi ciprofloxacina e amoxicilinaclavulanato via oral e placebo endovenoso e para o grupo B, cefepime e placebo oral. Resultados: Foram selecionados 91 episódios consecutivos de NF em 58 crianças. Para os pacientes do grupo A, a taxa de falência foi de 51,2%, e a média de tempo de hospitalização foi de 8 dias (variação de 2-10). Para os pacientes tratados com antibioticoterapia endovenosa, a taxa de falência foi de 45,8%, e a média de tempo de hospitalização foi de 7 dias (variação de 3-10). Discussão: Neste estudo não houve diferenças entre o grupo oral versus a terapia endovenosa. Estudos randomizados com maior número de pacientes são necessários antes de padronizar a terapêutica oral como tratamento para esta população de pacientes. / Introduction: In the past decade nearly all children with cancer who suffered an episode of febrile neutropenia (FN) were hospitalized and managed with broad spectrum intravenous antimicrobials irrespective of their clinical condition. As the optimal therapy for FN cancer patients is not entirely known the authors compared the efficacy of an oral regimen with intravenous cefepime. Patients and Methods: Patients younger than 18 years of age and classified as low risk for complication and FN were selected from 2002 to 2005 at the Pediatric Oncology Unit of Hospital de Clinicas de Porto Alegre, Brazil. Patients were randomly assigned to receive oral or intravenous therapy. Empirical antimicrobial treatment used for group A was oral ciprofloxacin plus amoxicillin-clavulanate and intravenous placebo and group B was cefepime and oral placebo. Results: A total of 91 consecutive episodes of FN occurring in 58 children were included in this study. For patients treated with ciprofloxacin and amoxicillin+clavulanate the treatment failure rate was 51.2%. The median of length of stay was 8 days (range 2-10 days). For patients treated with cefepime the treatment failure rate was 45.8%. Of the 26 successful treatment episodes, the length of hospitalization was 7 days (range 3-10 days). Discussion: There was no difference in outcome in oral versus intravenous therapy. It is necessary larger prospective randomized multinstitutional trials will be required before oral empirical therapy administered on a patient basis should be considered the new standard of treatment for low risk patients.

Orientador: Regina Maria Puppin-Rontani / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T10:32:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Castilho_AlineRogeriaFreirede_D.pdf: 4223932 bytes, checksum: d68ac38e0ad424f4cce1e0e952fd0608 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Procedimentos de remoção parcial de cárie, indicados para os dentes com lesão de cárie profunda, utilizam-se do preceito de retirar a dentina mais amolecida e infectada,deixando-se uma fina camada de dentina afetada por cárie, sobre a câmara pulpar, evitandoseassim, exposição pulpar mecânica. Contudo, algumas bactérias cariogênicas podem permanecer na dentina por indeterminados períodos de tempo, podendo ocasionar progressão da lesão. Assim, estudos conduzidos com o propósito de melhorar a propriedade antibacteriana de materiais restauradores, sem, contudo produzir efeitos citotóxicos em células odontoblastóides e capaz de manter as propriedades básicas do material pode ser uma alternativa no tratamento de lesões de cárie profundas, uma vez que não existe um produto comercialmente disponível que associe todas estas características. No intuito de facilitar a apresentação desta Tese, a mesma foi dividida em dois capítulos, como descrito nas proposições seguintes. Capítulo 1: avaliar in vitro as propriedades biológicas (ação antibacteriana contra Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei e Actinomyces viscosus, e cito toxicidade em células de linhagem odontoblástica MDPC-23)e mecânicas (resistência à compressão e à tração diametral) de um cimento de ionômero de vidro modificado por resina (Fuji Lining LC), contendo digluconato de clorexidina em diferentes concentrações (0,2%, 0,5%, 1,25% e 2,5%) e assim determinar a concentração terapêutica para utilização desta substância em tratamentos restauradores. Capítulo 2:verificar in vitro o comportamento de um cimento de ionômero de vidro modificado por resina (Fuji Lining LC) contendo hiclato de doxiciclina nas concentrações 1,5%, 3% e 4,5%frente a diferentes patógenos cariogênicos (Streptococcus mutans, Lactobacillusacidophilus, Lactobacillus casei e Actinomyces viscosus), células odontoblástóides MDPC-23 e quando submetidos aos ensaios mecânicos de resistência à compressão e à tração diametral. Os resultados observados em ambos os estudos mostraram que a incorporação de antimicrobianos ao cimento de ionômero de vidro, é capaz de melhorar significativamente efeito inibitório do cimento contra microrganismos criogênicos. A adição de dig luconato de clorexidina a 2,5% promoveu ligeira alteração no metabolismo e morfologia das células MDPC-23. O hiclato de doxiciclina, quando incorporado ao ionômero de vidro mesmo em maiores concentrações, não causou efeitos tóxicos em cultura de células odontoblásticas MDPC-23. Além disso, o cimento de ionômero de vidro contendo digluconato declorexidina a 2,5% apresentou resistência à compressão reduzida, sem alteração da propriedade de resistência a tração diametral do cimento. A adição de hiclato de doxiciclina não alterou as propriedades mecânicas do cimento. Assim, a adição de hiclato de doxiciclina e de digluconato de clorexidina nas concentrações estudadas produziu aumento na atividade antimicrobiana sem efeitos citotóxicos e alteração nas propriedades mecânicas da mistura, exceto para o digluconato de clorexidina a 2,5%, que apresentou o menor resistência a compressão e alterações no metabolismo e morfologia de células pulpares. / Abstract: Partial caries removal approaches are indicated to the management of deep caries. It consists of the incomplete removal of softened carious dentine during cavity preparation, leaving a soft dentine layer over the pulp, so that it is not mechanically exposed. However, some viable cariogenic bacteria have been found in the remaining affected dentine, which may promote caries lesion progression. Therefore, studies aimed to improve inhibitory effect of the restorative materials, without cytotoxic effects on odontoblast cells and able to keep properties of material could be an alternative to the treatment of deep caries lesions. Nevertheless, the disposal-marketed products do not associate all those features. In order to facilitate the accomplishment of this Thesis, it was divided into two chapters, as described on the following descriptions. Chapter 1: to evaluate in vitro biological properties (antibacterial effect against Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei and Actinomyces viscosus, and cytotoxicity at odontoblast cell line MDPC-23) and mechanical properties (compressive strength and diametral tensile strength) of a resin-modified glass ionomer cement (Fuji Lining LC) containing different concentrations of chlorhexidine digluconate (0.2%, 0.5%, 1.5% and 2.5%) and, thus to determine the therapeutic concentration of it for using in restorative dental treatment. Chapter 2: to verify in vitro the performance of a resin-modified glass ionomer cement (Fuji Lining LC) containing the antibiotic doxycycline hyclate at 1.5%, 3% and 4.5% against some cariogenic pathogens (Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei and Actinomyces viscosus); to analyze it indirect contact with odontoblast-like MDPC-23 cells; and, to reveal the mechanical properties under compressive strength and diametral tensile strength. Results of both studies proved that the incorporation of antimicrobials at adequate proportions into the glass ionomer cement have the ability to become better inhibitory effects of the cement against cariogenic bacteria. The 2.5% chlorhexidine digluconate added to glass ionomer cement promoted slight alteration on the mebolism and morfology of MDPC-23 cells. The incorporation of doxycycline hyclate to glass ionomer cement, even in the highest concentration, did not cause toxic effects on culture of odontoblast-like MDPC-23 cells. In addition, 2.5% chlorhexidine digluconate-containing glass ionomer cement decreased the compressive strength of cement, although there was no difference to diametral tensile strength. The adding of doxycycline hyclate did not alter mechanical properties of cement. It was concluded that doxycycline hyclate and chlorhexidine digluconate in the studied concentrations produced increased antimicrobial activity without cytotoxic effects and changes in mechanical properties of the mixture, except for the 1.25% chlorhexidine digluconate that presented the lowest compressive strength and alterations on metabolism and morphology of pulp cells. / Doutorado / Odontopediatria / Doutor em Odontologia

Orientador: Marcelo Brocchi / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T01:01:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MartinsJunior_Dorival_M.pdf: 1174036 bytes, checksum: 073886b15ce1e9305f7c5b8fc5eb8f81 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Uma vez que violaceína - um composto com atividade antibiótica, aniparasitária e antitumoral - apresenta baixa solubilidade em água, nanopartículas poliméricas contendo esse composto podem aumentar a sua solubilidade em água e potencializar sua atividade biológica. Logo, o objetivo desse trabalho foi a obtenção e caracterização de nanopartículas poliméricas biocompatíveis de poli-D,L-(lactídeo-co-glicolídeo) 50:50 encapsulando violaceína para posterior avaliação de sua atividade antibacteriana in vitro e in vivo. As nanopartículas foram preparadas pelo método de nanoprecipitação e caracterizadas em termos físico-químicos (distribuição de tamanho e potencial Zeta), taxas de recuperação de polímero, eficiência de encapsulamento e cinética de liberação in vitro. Posteriormente, sua atividade antibacteriana foi testada frente a linhagens de Staphylococcus aureus (incluindo linhagens meticilina-resistentes e resistentes intermediárias a vancomicina) por ensaios de determinação de concentrações mínimas inibitórias, curvas de tempo morte e ensaios de interação com outros antibióticos. Por fim, avaliações da atividade antibacteriana in vivo foram realizadas contra uma linhagem de Staphylococcus aureus resistente a meticilina em modelo murino imunocomprometido (C3H Nude) e imunocompetente (Balb/C). A metodologia otimizada resultou em nanopartículas com diâmetro entre 116 e 139 nm, bem como carga superficial negativa. A eficiência de encapsulamento variou entre 84 e 90% e a taxa de recuperação do polímero foi de 93%. Pelos ensaios de cinética de liberação in vitro, observou-se que a violaceína encapsulada apresenta perfil de liberação sustentada até 160 h de análise nas condições experimentais analisadas. O sistema obtido apresentou atividade antibacteriana frente a cepas de Staphylococcus aureus e atividade não significativa frente à linhagens de enterobactérias Gram-negativas. O sistema apresentou atividade pelo menos duas vezes maior que a violaceína livre in vitro e in vivo. Por fim, foi observada uma interação aditiva entre o sistema e antibióticos ß-lactâmios e interação sinérgica quando combinado com inibidores de síntese proteíca. / Abstract: Since violacein - an antibiotic, antiviral and antiparasitic compound - exhibits poor solubility in water, polymeric nanoparticles containing this compound could improve its solubility in water and biological activities. Therefore, the aim of this work was the preparation and characterization of biodegradable and biocompatible poly-D,L-(lactide-co-glycolide) 50:50 nanoparticles loading violacein to further evaluation of their antibiotic activity in vitro and in vivo. The nanoparticles were prepared by nanoprecipitation method and characterized in terms of average diameter and Zeta potential, drug loading and polymer recovery, in vitro release kinetics, in vitro and in vivo antibacterial activity against Staphyloccocus aureus strains. Nanoparticles with diameter between 116 and 139 nm and negative-charged outer surface were obtained. Drug loading efficiency and polymer recovery were 87% and 93%, respectively. In vitro release kinetics assays showed that violacein loaded in these nanoparticles has sustained release profile until 5 days of analysis. The system exhibited antibacterial activity in vitro and in vivo against Staphylococcus aureus methicilin-resistant (MRSA) strains and no significant activity against Gram-negative Enterobacteriaceae. Nanoparticles-loaded violacein was at least two times more efficient as antibiotic compound than free violacein both in vitro and in vivo. Also, this system presented additive interactions when combined with ß-lactam antibiotics and strong synergic interactions when combined with protein synthesis inhibitors. / Mestrado / Genetica de Microorganismos / Mestre em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Maria Luiza Moretti, Raquel Silveira Bello Stucchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-13T06:04:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vigani_AlineGonzalez_D.pdf: 3903866 bytes, checksum: ff088b307f62ac2226ce3f88499695cf (MD5) Previous issue date: 2008 / Resumo: O enterococo é o terceiro agente mais freqüente em infecção de corrente sangüínea (ICS) hospitalar, responsável por 10% dessas infecções e está associado com alta letalidade. Durante as duas últimas décadas, o surgimento de alto nível de resistência à gentamicina (HLGR) e resistência à vancomicina adicionaram desafios ao tratamento das infecções por Enterococcus faecalis. Avaliamos as ICSs por E. faecalis no Hospital de Clínicas (HC) da Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) identificadas de janeiro de 1999 a dezembro de 2003. Nosso objetivo foi determinar as características clínicas, microbiológicas e moleculares das ICSs por E. faecalis com HLGR e sem HLGR em pacientes internados no HC-Unicamp. ICS foi definida como pelo menos uma cultura de sangue positiva para E. faecalis com ou sem sinais e sintomas associados. Em casos de múltiplos episódios de ICS em um mesmo paciente, somente o primeiro episódio foi considerado. Coletamos informações de prontuários médicos utilizando formulários estruturados. A tipagem molecular de isolados de E. faecalis estocados foi realizada através da técnica de eletroforese em gel com campo pulsátil (PFGE). Identificamos 164 pacientes com ICS por E. faecalis, dos quais 145 (88,4%) foram incluídos neste estudo. Nossos achados demonstraram que pacientes com ICS por E. faecalis são graves. Dentre os 145 pacientes, 128 (88,3%) apresentavam pelo menos uma co-morbidade. Além disso, a realização de procedimento invasivo ou presença de dispositivos invasivos foram freqüentes (75,2%), assim como o uso prévio de antimicrobianos (61,4%). Das 145 ICSs, 66 (45,5%) foram por E. faecalis com HLGR e 79 (54,5%) sem HLGR. Na análise univariada, idade avançada, malignidade hematológica, cateterização urinária e uso prévio de cefalosporinas, quinolonas e carbapenêmicos foram mais freqüentes em pacientes com infecção por HLGR quando comparados com pacientes sem HLGR (p <0,05). A análise multivariada mostrou idade avançada, presença de malignidade hematológica e uso prévio de vancomicina como variáveis independentes associadas com infecção por HLGR (p <0,05). A taxa de letalidade foi de 46,2% e não apresentou diferença estatística significativa entre pacientes com infecção por HLGR (50,0%) e sem HLGR (43,0%) (p= 0,40). Ventilação mecânica e gravidade das co-morbidades foram associadas com óbito (p <0,05). Durante o período de estudo, a taxa de resistência à ampicilina foi de 2,0%; ciprofloxacina, 51,7%; penicilina, 35,1%; e estreptomicina, 27,6%. Nenhum isolado resistente à vancomicina foi identificado. A genotipagem dos 44 isolados disponíveis (32 de pacientes incluídos no estudo e 12 controles) revelou 29 isolados distribuídos em 11 perfis genotípicos e 15 isolados apresentaram perfis genotípicos únicos e distintos. Alguns isolados geneticamente relacionados eram suscetíveis à gentamicina e outros possuíam HLGR, o que pode ser resultado da transferência de gene plasmidial de resistência HLGR entre isolados. Nossos resultados permitem concluir que ICSs por E. faecalis estão associadas com alta taxa de letalidade e são freqüentemente causadas por HLGR. Medidas de controle de infecção, incluindo vigilância ativa, respeito às normas de precauções de contato e uso criterioso de antimicrobianos devem ser consideradas para reduzir o risco de transmissão de E. faecalis resistentes em ambiente hospitalar. / Abstract: Enterococus is the third most frequent agent in nosocomial blood stream infection (BSI), accounting for 10% of nosocomial BSI, and is associated with high mortality. During the last two decades, the emergence of high-level gentamicin resistance (HLGR) and vancomycin resistance added additional challenges in the treatment of Enterococcus faecalis infections. We evaluated E. faecalis BSI at the Hospital de Clínicas (HC) of the Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) in Brazil between January 1999 and December 2003. We sought to determine the clinical, microbiological, and molecular characteristics of BSI caused by HLGR and non-HLGR strains. E. faecalis BSI was defined as at least one positive blood culture for E. faecalis during the study period with or without associated symptoms. In patients with multiple BSI episodes, only the first episode was considered. We collected information from medical charts using standard forms. Banked E. faecalis isolates were typed using pulsed field gel electrophoresis (PFGE). We identified 164 patients with E. faecalis BSI, 145 (88.3%) patients were included in this study. Our data showed that patients with E. faecalis BSI are severely ill. One hundred twenty-eight (88.3%) patients had some underlying chronic disease. Invasive procedure or invasive device (75.2%) and previous use of antimicrobial (61.4%) were also frequent. Of the 145 BSIs, 66 (45.5%) were due to HLGR isolates and 79 (54.5%) were non-HLGR. In the univariate analysis, patients with HLGR infection were older, had hematological malignancy, had higher rates of bladder catheterization, and more often had treatment with cephalosporin, quinolone, and carbapenem when compared with non-HLGR infection patients (p <0.05). Multivariate analysis indicated that older age, hematological malignancy, and previous use of vancomycin were independent risk factors associated with HLGR (p <0.05). Mortality rate was 46.2% and was not statistically significantly different among patients with HLGR (50.0%) and non-HLGR (43.0%) infections (p= 0.40). Multivariate analysis indicated that mechanical ventilation and severity of underlying chronic diseases were associated with death (p <0.05). During the study period, the prevalence of resistance to ampicilin was 2.0%; to ciprofloxacin, 51.7%; to penicillin, 35.1%; and to streptomycin, 27.6%. We did not detect any isolate resistant to vancomycin. We genotyped 44 available isolates, 32 from study patients and 12 controls. Twenty-nine isolates were distributed in 11 PFGE patterns, the remaining 15 isolates had distinct and unique PFGE patterns. Some isolates with related PFGE pattern were HLGR and others non-HLGR, this may have result from transference of HLGR resistance plasmidial between isolates. Our results suggest that E. faecalis BSI are associated with high mortality and are frequently caused by HLGR. Hospital infection control measures, including active surveillance and judicious use of antibiotics, should be considered to reduce the spread of resistant E. faecalis infections in healthcare settings. / Doutorado / Clinica Medica / Doutor em Clínica Médica