Orientador: Ana Julia Fernandes Cardoso de Oliveira / Resumo: O desenvolvimento urbano em áreas costeiras tem ocorrido intensamente e o aumento das descargas de esgotos domésticos é uma das consequências desta expansão e motivo de preocupação para a saúde pública. Assim a qualidade microbiológica das águas, sedimentos e alimentos de origem marinha devem ser monitoradas, principalmente os organismos filtradores como os mexilhões, Perna perna. moluscos bivalves, por filtrarem a água para obtenção de alimento e oxigênio, concentram material em suspensão nos seus tecidos, inclusive bactérias patogênicas resistentes a substâncias antimicrobianas, o que os torna uma fonte potencial de contaminação humana por patógenos. O objetivo do presente estudo foi avaliar a densidade e resistência a antimicrobianos de Enterococcus sp, Escherichia coli e Aeromonas sp isolados dos tecidos de mexilhão Perna perna, água e sedimento coletados em Santos e Itanhaém, Estado de São Paulo. Como resultado observa-se que as densidade de Enterococcus sp e Escherichia coli encontradas na água dos dois pontos de coleta estão dentro das normas da Resolução Conama 274/2000, já as densidades encontradas nos sedimentos e em tecidos moles dos mexilhões foram elevadas. Para Aeromonas sp não existe padrão, pois as mesma não estão presentes na legislação. Observou-se também altas frequências de resistência bacteriana aos antimicrobianos. Os resultados obtidos sugerem que pode haver uma questão importante para a saúde pública, pois foram encontrados microrganismos apresentan... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Urban development in coastal areas has occurred intensely and the increase in discharges of domestic sewage is one of the consequences of this expansion and cause of concern for public health. Thus the microbiological quality of the waters, sediments and foods of marine origin must be monitored, mainly the filtering organisms like the mussels, Perna perna, bivalve molluscs, in view of the fact that by filtering the water to obtain food and oxygen they concentrate suspended material in their tissues, including pathogenic bacteria resistant to antimicrobial substances, which makes them a potential source of human contamination by pathogens. The objective of the present study was to evaluate the density and antimicrobial resistance of Enterococcus sp, Escherichia coli and Aeromonas sp isolated from tissues mussel Perna perna, water and sediment collected in Santos and Itanhaem, São Paulo State. As a result, it was observed that the density Enterococcus sp and Escherichia coli found in the water of the two collection points were within the norms of Conama Resolution 274/2000, since the densities found in the sediments and soft tissues of the mussels were high. For Aeromonas sp there is no standard because they are not present in the legislation. Equally, it was observed high rates of antimicrobial resistance. The results suggest that there may be an important issue of public health, since microorganisms were found to have multiple resistance to the analyzed antibiotics, once ciprofloxacin was the most efficient against the three microorganisms analyzed. A worrisome situation is concluded because the tested microorganisms are highly resistant to multiple antimicrobials, resulting in a great public health problem... (Complete abstract electronic access below) / Mestre

Resumo: Um dos problemas da aqüicultura é a ocorrência freqüente de infecções por parasitos e bactérias, principalmente em sistemas de criação intensiva. Entre os antibióticos, a oxitetraciclina (OTC) e o florfenicol (FFC) são os mais usados para tratar infecções causadas por bactérias em peixes. Os objetivos foram estimar a concentração letal 50% (CL50;48h) da OTC (Terramicina®) e do FFC (Aquaflor®) para o pacu (Piaractus mesopotamicus), classificar a OTC e o FFC pelo risco de intoxicação ambiental; determinar a dose eficaz de OTC e de FFC administrada na ração para o controle da infecção por Aeromonas hydrophila em pacu; avaliar o efeito da diluição da OTC e do FFC nas variáveis de qualidade de água durante os testes de toxicidade e durante o tratamento e avaliar as alterações histopatológicas após o tratamento com OTC e FFC. Para os testes de toxicidade aguda os animais (peso entre 0,5 e 1,0 g) foram expostos a 7,0; 7,5; 8,0 e 8,5 mgL-1 de OTC ou a 600,0; 700,0; 800,0; 900,0 e 1000,0 mgL-1 de FFC e um tratamento controle. A OTC e o FFC foram classificados pela toxicidade aguda e pelo risco ambiental de acordo com as classes de valores de CL50;48h. Para o tratamento de infecção induzida por A. hydrophila (3.0 x108 bactéria.mL-1), foram realizados dois testes, um com OTC (110,0; 140,0 e 170,0 mg.Kg-1) e outro com FFC (5,0; 10,0 e 15,0 mg.Kg-1). Os tratamentos foram três concentrações de cada antibiótico, um controle sem infecção e um com infecção. Para análise histopatológica foram coletados fragmentos de brânquia, fígado, rim e pele dos peixes após o tratamento com os antibióticos. As variáveis de qualidade de água registradas diariamente foram pH, temperatura, condutividade elétrica e concentração de oxigênio dissolvido, nos testes de toxicidade aguda e durante os testes de concentrações curativas. Nos testes de toxicidade aguda, a CL50;48h... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: One of the main problems of modern aquaculture is the occurrence of infection of farmed fish by parasites and bacteria, especially in intensive systems. Among the antibiotics, the oxytetracycline (OTC) and the florfenicol (FFC) are the most commonly used to treat infections caused by bacteria in fishes. The objective was to estimate the 50% lethal concentration (LC50, 48h) of OTC (Terramycin®) and of the FFC (AQUAFLOR®) for the pacu (P. mesopotamicus), classify the OTC and FFC of according the assessment risk and to determine the effective concentration of OTC and of FFC administered in feed for control of Aeromona hydrophila in pacu; to evaluate the effect of dilution of OTC and of the FFC in variables in water quality during toxicity tests and for treatment and to evaluate the histopathological changes after treatment with OTC and FFC. For acute toxicity tests the animals (weighing between 0.5 and 1.0 g) were exposed to 7.0, 7.5, 8.0 and 8.5 mg.L-1 OTC or 600.0, 700 , 0, 800.0, 900.0 and 1000.0 mg.L-1 of FFC and a control treatment. The OTC and the FFC were classified for acute toxicity and for environmental risk of according with the ranking of value of LC 50;48h. For the treatment of A. hydrophila induced by experimental infection (3.0 x108 bactéria.mL-1), were carried out two tests, one with OTC (110.0, 140.0 and 170.0 mg.Kg-1) and another with FFC (5.0; 10.0 and 15.0 mg.Kg-1). The treatments included three concentration of antibiotic, a control without infection and a with infections. For histopathological analysis were collected gill tissue, liver, kidney and skin of fish after the treatment of bacterial diseases with antibiotics. The water quality variables were recorded daily pH, temperature, electrical conductivity and dissolved oxygen in acute toxicity tests and during treatment. In tests of acute toxicity, the LC50;48h estimated of OTC for pacu was... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Joaquim Gonçalves Machado Neto / Coorientador: Claudinei da Cruz / Banca: Pedro Antonio Zagatto / Banca: Flávio Ruas de Moraes / Mestre

Orientadora: Eliana Gertrudes Macedo Lemos / Banca: Lúcia Maria Carareto Alves / Banca: Vanderlei Rodrigues / Resumo: Metabólitos secundários são compostos bioativos, com grande importância para a indústria farmacêutica e agropecuária, produzidos por certos grupos de microrganismos e plantas. Os policetídeos, que são sintetizados por complexos enzimáticos denominados policetídeos sintases (PKSs), desatacam-se entre os metabólitos secundários conhecidos e compõe a estrutura química básica de vários antibióticos. Todos os genes envolvidos na biossíntese de um policetídeo se encontram agrupados fisicamente no cromossomo, e contém genes que são altamente conservados, comumente chamados d~ pks mínima. Os métodos tradicionais para pesquisa de novas drogas, que envolvem o cultivo de microrganismos isolados do solo, não são mais tão promissores, devido à alta taxa de redescoberta de antibióticos já conhecidos, que chega a 99,9%, e à pequena parcela de microrganismos do solo que são cultiváveis pelas técnicas padrões de cultivo, cerca de 1 %. A Metagenômica é uma abordagem promissora que permite acessar o genoma desses organismos incultiváveis, pois consiste na extração de DNA diretamente do ambiente e construção de uma biblioteca com este genoma misto. Neste trabalho descrevemos a construção de uma biblioteca feita com DNA de alto peso molecular isolado diretamente de solo coletado sob arboreto de eucaliptos no Estado de São Paulo, Brasil. A biblioteca possui 9.320 clones e foi construída em vetor cosmídeo, com insertos de tamanho variando entre 30 e 45kb...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Secondary metabolites are bioactive compounds with great importance in the pharmaceutical and agriculture industries, procuced by a few groups of microrganisms and plants. The polyketides that are synthetized by enzimatic complexes, denominated polyketides synthases, outstand among the secondary known metabolites, which are part of the main structure of many antibiotics. Ali genes involved in the biosynthesis of antibiotics are found as clusters in the chromossome. The traditional methods for the research of new drugs that are made from microrganisms cultures isolated from the soil are not so promissing, due to the high rate of rediscorevy of already known species, reaching 99.9%. The other small piece of microrganisms are culturable by standards culture methods, reaching 1 % maximum. Metagenomics is a promissing approach that allows the access to genom of these organisms that are not culturable, as it is carried out by DNA extraction directly from the environment and construction of a mixed genomic library. In this work, we describe the construction of a library made from high molecular weight DNA isolated directly form the soi! undemeath a pinus forest in the State of São Paulo, Brazil. The library shows 9.320 dones and it was constructed in a cosmideo vector, with insert size ranging from 30 to 45 kb. Digestion with difterent restriction enzymes of cosmidial DNA randomly chosen allowed to visualize evident difterences in the restriction fragments among the clones, as does the possibility to determine the average insert size. The initial evaluation of the presence of genes involved in the biosynthesis of antibiotics synthesized by the enzymatic system PKS of kind I, was accomplished by the PCR amplification of clones from the library using specific primers. We studied 4.320 clones and the results suggest a great variety of these genes. The PCR products obtained were sequenced for the determination of identity of the amplified gene. / Mestre

Introdução: Feridas neoplásicas malignas (FNM) são resultantes da invasão direta do câncer na pele que, ao se exteriorizarem, adquirem características de ferida. Com incidência variando de 0,6 a 9,0%, são mais comuns nos cânceres de mama e cabeça e pescoço. Dentre os sinais e sintomas, destaca-se o odor que tem sido descrito como intolerável e nauseante, acarretando impacto negativo sobre o paciente, familiares e equipe de saúde. O odor em FNM ocorre em consequência da interação das microbiotas aeróbica e anaeróbica que colonizam e infectam as feridas. Objetivando reduzir a carga microbiana local e, assim, controlar o odor, tem-se descrito o uso de antissépticos e antibióticos tópicos, dentre os quais destaca-se o metronidazol. Objetivo: Identificar as evidências científicas sobre a utilização do metronidazol para controle do odor em FNM, por meio de revisão sistemática (RS) de ensaios clínicos controlados e não controlados. Método: A partir da questão norteadora do estudo: Qual a eficácia da terapia tópica de metronidazol para o controle do odor em feridas neoplásicas malignas?, realizou-se a busca dos artigos nas bases de dados BIREME, LILACS, COCHRANE, CINAHL e EMBASE, com auxílio da estratégia PICO, utilizando-se descritores indexados e não indexados. Os estudos foram selecionados por duas pesquisadoras de forma independente e os estudos incluídos na RS foram analisados segundo o enunciado CONSORT, grau de recomendação e nível de evidência. Para o estudo randomizado utilizou-se também a Escala de Jadad. Resultados: Recuperaram-se 384 artigos, sendo selecionados 14 para leitura na íntegra, sendo incluídos, ao final, apenas três estudos na RS. Destes, um estudo é randomizado (grau de evidência e recomendação = 2b, Jadad = 2) e dois não são controlados (grau de evidência 4 para ambos). Quanto ao método de avaliação e/ou classificação do odor, não se identificou um instrumento formal, sendo empregada apenas escala analógica de 0 a 10 ou presença/ausência de odor. O tempo necessário para o emprego da terapia tópica foi de 1 a 14 dias, com troca do curativo 1 ou 2 vezes ao dia; e a aplicação do metronidazol foi em gel de 0,75% a 0,8%. Os estudos não mencionaram ou descreveram reações adversas. Os estudos apresentam limitações e fragilidades metodológicas importantes, destacando-se as amostras reduzidas e a falta de descrição de aspectos como o cegamento e randomização no único estudo randomizado, além dos procedimentos empregados nos curativos, dentre outros. Conclusão: Apesar dos três estudos concluírem que o metronidazol tópico é eficaz no controle do odor em FNM, não há forte evidência científica para corroborar essa eficácia. / Introduction: Malignant wounds (MW) are the result of direct invasion of cancer in the skin that, when exteriorized, acquire characteristics of the wound. With an incidence ranging from 0.6 to 9.0%, are more common in breast and head and neck . Among the signs and symptoms, there is the odor that has been described as intolerable and sickening, causing negative impact on the patient, family and healthcare team. The MW odor occurs as a result of the interaction of aerobic and anaerobic bacteria that colonize and infect wounds. In order to reduce local microbial load and thus control the odor, there has been described the use of topical antiseptics and antibiotics, among which stands out metronidazole. Objective: To identify the scientific evidence on the use of metronidazole for odor control in MW, through systematic review (SR) of randomized controlled trials and uncontrolled. Method: From the main question of the study: \"What is the efficacy of topical metronidazole therapy for odor control in malignant neoplastic wounds,\" there was the search for articles in the databases MEDLINE, LILACS, Cochrane Library, CINAHL database and EMBASE, using the PICO strategy, using descriptors indexed and unindexed. Studies were selected by two researchers independently and studies included in the RS were analyzed according to the CONSORT statement, strength of recommendation and level of evidence. For the randomized study also used the Jadad Scale. Results: 384 articles were recovered, 14 were selected for full reading, being included in the end, only three studies in SR. Of these, a study is randomized (level of evidence and recommendation= 2b, Jadad= 2) and two are not controlled (evidence grade 4 for both). As to the method of assessment and / or classification of odor, did not identify a formal instrument, being used only analog scale of 0 to 10, or the presence / absence of odor. The time required for the use of topical therapy was 1 to 14 days, with change of the dressing 1 or 2 times a day, and the application of metronidazole was 0.75% gel 0.8%. Studies have not mentioned or described adverse reactions. The studies have important methodological limitations and weaknesses, highlighting the small sample size and lack of description of aspects such as blinding and randomization in the only randomized, besides the procedures used in dressings, among others. Conclusion: Although the three studies conclude that topical metronidazole is effective in controlling odor in MW, there is no strong scientific evidence to support its effectiveness

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:47Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-30Bitstream added on 2014-06-13T19:56:38Z : No. of bitstreams: 1 gondim_jo_me_arafo.pdf: 487270 bytes, checksum: 789b8f434824d723680740b007e8975b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A incorporação de agentes antibacterianos aos sistemas adesivos dentinários autocondicionantes tem sido proposta com o intuito de eliminar bactérias residuais presentes na dentina, prevenindo, assim, a recorrência de cárie. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a atividade antibacteriana dos sistemas adesivos dentinários autocondicionantes: Clearfil Protect Bond (CPB), Clearfil SE Bond (CSEB), Xeno III (XIII) e Clearfil Tri-S Bond (C3SB), com e sem fotoativação, sobre bactérias cariogênicas, bem como a influência da dentina humana na atividade antibacteriana destes sistemas adesivos, utilizando o método de difusão em ágar. A solução de digluconato de clorexidina a 0,2% foi utilizada como controle positivo. O componente adesivo do CPB e do CSEB, o líquido A do XIII e o C3SB não apresentaram atividade antibacteriana quando aplicados sobre discos de papel. O conjunto primer e adesivo do CPB não fotoativado promoveu a maior inibição contra S. mutans (p<0,05), enquanto que com a fotoativação, não houve diferença entre esses componentes juntos e o primer isoladamente. Para o L. acidophillus, o primer do CPB apresentou a maior atividade antibacteriana nas duas condições de fotoativação (p<0,05). Quando os materiais foram aplicados sobre discos de dentina, somente a CHX promoveu efeito inibitório, o qual foi de menor intensidade do que quando aplicada sobre discos de papel (p<0,05). A CHX apresentou maior atividade antibacteriana sobre S. mutans quando comparado com L. acidophillus (p<0,05). Pode-se observar que a fotoativação reduziu significantemente a 18 atividade antibacteriana dos sistemas adesivos autocondicionantes, que a presença do MDPB no sistema adesivo dentinário é importante para a atividade antibacteriana sobre bactérias cariogênicas, e que a dentina atua como barreira de proteção eliminando ou reduzindo a ação antibacteriana de materiais odontológicos. / The incorporation of antibacterial agents in self-etching dentin bonding systems has been introduced in attempts to eliminate dentin residual bacteria, preventing secondary caries. Therefore, the aim of this study was to evaluate the antibacterial activity of cured and uncured self-etching dentin bonding systems Clearfil Protect Bond (CPB), Clearfil SE Bond (CSEB), Xeno III (XIII) and Clearfil Tri-S Bond (C3SB), against S. mutans and L. acidophillus, by the agar disc-diffusion test, as well as to evaluate the influence of human dentin on their antibacterial activity. A 0.2% aqueous solution of chlorhexidine (CHX) was used as a positive control. CPB and CSEB bond component, liquid A of Xeno III and C3SB did not show any antibacterial activity when applied onto paper discs. The primer and bond set of uncured CPB presented the strongest inhibitory activity against S. mutans (p<0.05), however after light-activation, no difference was observed between these components together and when primer was applied individually. Independently of light-activation conditions, CPB primer showed the strongest antibacterial activity against L. acidophillus (p>0.05). When the materials were applied onto dentin discs, only CHX presented inhibitory activity, which was less intense than when it was applied onto paper discs (p<0.05). CHX showed stronger antibacterial activity against S. mutans than against L. acidophillus (p<0.05). In conclusion, light-activation significantly reduced the antibacterial activity, the presence of MDPB in adhesive systems is important to the inhibitory effect against cariogênico 20 bacteria, and the dentin acted as a protection barrier reducing or inhibiting the antibacterial activity of dental materials.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-11-30Bitstream added on 2014-06-13T19:30:05Z : No. of bitstreams: 1 faco_efs_me_araca.pdf: 505680 bytes, checksum: b909cd6744b7ed5464b05f875aed649e (MD5) / A descoberta de um medicamento capaz de inativar bactérias ou até mesmo destruílas foi de extrema importância para as diversas áreas da saúde, entre elas a odontologia. Com o uso dos antibióticos, foi possível conseguir a cura e a prevenção de inúmeras doenças infecciosas, a partir de sua utilização terapêutica e profilática. A realização de antibioticoterapia em odontologia é muito bem estabelecida, devido à grande quantidade e diversidade de agentes bacterianos pertencentes à microbiota bucal normal. Eventualmente, causam bacteremias pela má higienização do paciente iniciadas por cáries ou periodontites, processos patológicos inerentes à cavidade bucal e intervenções realizadas pelo cirurgião dentista. Entretanto alguns tópicos permanecem controversos, como a utilização de profilaxia antibiótica no pré-operatório de determinados procedimentos odontológicos, se esta profilaxia deve se estender no período pós-operatorio e por quanto tempo; a posologia do fármaco; e qual o antibiótico de escolha em cada situação já que muitas variáveis podem influenciar por exemplo a idade do paciente, a presença de alguma patologia de base como doença hepática ou renal, a presença de resistência bacteriana à um determinado antibiótico, o local onde está ocorrendo a infecção e qual os micrrorganismos prevalentes e o mecanismo de ação do antibiótico. O objetivo deste trabalho é descrever os tópicos acima citados de forma prática para que o uso da antibioticoterapia se torne mais específico e efetivo nas infecções odontogênicas e nos procedimentos mais freqüentes na cavidade bucal. / The discovery of a medication capable of inactivating bacterias or even to destroy them was of extreme importance for the health several areas, among them the odontology. Through the antibiotics, it was possible to get the cure and the prevention of countless infectious diseases, starting from its therapeutic and prophylactic utilization. Antibioticotherapy accomplishment in odontology is very well established, due to the large quantity and diversity of the bacterial agents belonging to the normal buccal flora. Eventually, they cause bacteraemia caused by the patient's bad hygiene initiated by caries or periodontitises, inherent pathological processes to the buccal cavity and interventions accomplished by the surgeon dentist. However some topics remain controversial, like the utilization of antibiotic prophylaxis in the preoperative of determined odontological procedures, if this prophylaxis owes extend in the period postoperative and for how long; the pharmacon posology; end which the choice antibiotic in each situation, since many variable can influence for example, the patient's age, the presence of some pathology as hepatic or renal disease, the presence of bacterial resistance to a certain antibiotic, the location where is occurring the infection and which microorganisms prevalent and the antibiotic action mechanism. The goal of this work is to describe the topics above cited in a practical way so that antibioticotherapy use becomes more specific and effective in the odontogenic infections and in the more frequent procedures in the buccal cavity.

Orientador: Dr. Felipe Francisco Bondan Tuon / Coorientador: Dr. Ayrton Alves Aranha Junior / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Medicina Interna. Defesa : Curitiba, 23/08/2017 / Inclui referências : f. 40-46 / Resumo: O tratamento mais eficaz para infecções por enterobactérias produtoras de carbapenemases ainda não está estabelecido. O objetivo do estudo foi avaliar a eficácia de monoterapias e associações de antimicrobianos para o tratamento de Klebsiella pneumoniae produtora de Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC-­ KP) sensível a polimixina e tigeciclina e com CIM acima de 32mg/L para meropenem em um modelo experimental. A validação do inóculo bacteriano foi realizada previamente com uma cepa de Klebsiella pneumoniae produtora de betalactamase de espectro estendido (ESBL) em ratos adultos tratados com meropenem, definindo-­ se 1.0x1010UFC/ml como dose para infecção potencialmente letal. Os ratos inoculados com 1.0x1010UFC/ml de KPC-­KPC via intraperitoneal foram tratados com meropenem (MER), polimixina (PMB) e tigeciclina (TIG) e diferentes associações destes antimicrobianos. O tempo de sobrevida, os resultados de hemoculturas e de culturas quantitativas de líquido peritoneal foram avaliados em animais tratados e nos controles. Um estudo in vitro de curvas de morte bacteriana com a mesma cepa de KPC-­KP foi realizado. Variáveis contínuas foram analisadas com teste de Mann-­ Whitney e teste de Kruskal-­Wallis foi usado para analisar as curvas de sobrevida. Os ratos inoculados com cepas produtoras de ESBL e de KPC apresentaram 80% de mortalidade quando mantidos sem antibioticoterapia. Terapia com MER em ratos infectados com cepa produtora de ESBL promoveu 60% de sobrevida (p=0.042) e redução da contagem de colônias abaixo de 5.0x104 unidades formadoras de colônias por mililitro (UFC/mL) em 80% (p=0.001), porém não houve diferença na positividade das hemoculturas entre os grupos. Nos animais inoculados com cepa produtora de KPC, o uso de MER, TIG e PMB em monoterapia promoveram respectivamente sobrevidas de 40%, 40% e 70% (p=0.04 PMB versus controle). As combinações contendo PMB promoveram 100% de sobrevida (p<0.001) e a associação de PMB e TIG foi sinérgica in vitro. Associação de MER e TIG promoveu menor sobrevida (70%) e teve efeito antagônico in vitro. Tratamento com PMB tanto em monoterapia como em associações reduziu a contagem de colônias abaixo de 5.0x104 UFC/mL (p<0.001) e a associação de PMB e TIG esterilizou 70% das hemoculturas. Conclui-­se que combinações de antimicrobianos incluindo PMB foram superiores para promover sobrevida e esterilização de culturas e foram sinérgicas in vitro. Terapia tripla não foi superior a combinação de PMB com TIG in vivo. Palavras chave: carbapenemase, KPC, associação de antimicrobianos, modelo experimental, tigeciclina, polimixina, meropenem / Abstract: The most effective treatment for carbapenemase-­producing enterobacterial infections has not yet been established. The aim of the study was to evaluate the efficacy of monotherapy and antimicrobial combinations for the treatment of Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC-­KP) susceptible to polymyxin and tigecycline and presenting MIC of 32 mg/L for meropenem in an experimental model. Validation of the bacterial inoculum was previously performed with an extended spectrum beta-­ lactamase-­producing Klebsiella pneumoniae strain (ESBL) in adult rats treated with meropenem, with 1.0x1010 UFC / ml being defined as a dose for potentially lethal infection. Mice inoculated with 1.0x1010 UFC / ml of KPC-­KP intraperitoneally were treated with meropenem (MER), polymyxin (PMB) and tigecycline (TIG) and different combinations of these antimicrobials. Survival time, blood cultures and quantitative cultures of peritoneal fluid were evaluated in treated animals and controls. An in vitro study of time-­to-­kill curves with the same strain of KPC-­producing Klebsiella pneumoniae was performed. Continuous variables were analyzed using the Mann-­ Whitney test and Kruskal-­Wallis test was used to analyze the survival curves. Mice inoculated with ESBL and KPC-­KP strains showed 80% mortality when kept without antibiotic therapy. MER therapy in mice infected with ESBL-­producing strain promoted a 60% survival (p=0.042) and a reduction in colony counts below 5.0x104 colony forming units per milliliter (CFU/mL) by 80% (p=0.001), but there was no difference in the positivity of blood cultures between groups. In the animals inoculated with KPC-­producing strain, the use of MER, TIG and PMB in monotherapy promoted respectively 40%, 40% and 70% survivals (p=0.04 PMB vs control). Combinations containing PMB promoted 100% survival (p<0.001) and the association of PMB and TIG was synergistic in vitro. Association of MER and TIG promoted lower survival (70%) and had an antagonistic effect in vitro. Treatment with PMB both in monotherapy and in combinations reduced colony counts below 5.0x104 CFU/mL (p<0.001) and the association of PMB and TIG sterilized 70% of blood cultures. It is concluded that combinations of antimicrobials including PMBs were superior to promote survival and sterilization of cultures and were synergistic in vitro. Triple therapy was not superior than the combination of PMB with TIG in vivo. Key words: carbapenemase, KPC, antimicrobial combinations, experimental model, tigecyclyne, polymyxin, meropenem,

Submitted by VLADMIR ALVIM VIEIRA MAGALHAES null (profvlad@live.com) on 2016-07-23T12:58:49Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao_MAGALHAES_VAV_IQ_Unesp.pdf: 3275925 bytes, checksum: 576eddfe1a8c0c083948bfbeb4c332ac (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-07-28T19:31:44Z (GMT) No. of bitstreams: 1 magalhaes_vav_me_araiq.pdf: 3275925 bytes, checksum: 576eddfe1a8c0c083948bfbeb4c332ac (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T19:31:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 magalhaes_vav_me_araiq.pdf: 3275925 bytes, checksum: 576eddfe1a8c0c083948bfbeb4c332ac (MD5) Previous issue date: 2016-07-15 / O presente trabalho consiste na funcionalização do fluido de perfuração conhecido como bentonita (BN) com grupos funcionais sulfidril (SH) provenientes do reagente 3- mercaptopropil-trimetoxissilano (MPTS) e nanopartículas de prata (NPs/Ag), visando a inibição da biocorrosão por oxidação de bactérias. Para tanto, a argila do tipo bentonita, constituída principalmente do argilomineral montmorilonita, foi modificada através de rota de inserção de organossilano e nanopartículas de prata (NPs/Ag) em sua estrutura, sendo um processo favorecido pelo efeito redutor do grupo tiol, proveniente do silano. As amostras funcionalizadas em concentrações distintas de Ag foram testadas contra a ação da ferrobactéria do tipo Thiobacillus ferrooxidans. Para testar o efeito antibacteriano do material híbrido, utilizou-se metodologia em meio de cultura T&K, onde foi possível medir a capacidade de inibição da oxidação de Fe2+ a Fe3+ por unidade de tempo. O processo de modificação proposto permitiu a manutenção da estrutura original da bentonita, bem como a criação de nanopartículas de prata, cujo efeito antibacteriano inibiu a biocorrosão de Fe2+ obtendo, desta forma, fluido de perfuração funcionalizado com grande potencial de aplicação em obras de perfuração de poços tubulares profundos. / This work proposes the functionalization of the drilling fluid known as bentonite (BN) with sulfhydryl functional groups (SH) from the reagent 3-mercaptopropyltrimethoxysilane (MPTS) and silver nanoparticles (Ag/NPs), to inhibit corrosion by bacteria that oxidize metal. Therefore, the type clay bentonite, consisting mainly of montmorillonite clay mineral, was modified through organosilane insertion route and silver nanoparticles in its structure, because this is a process favored by the reducing effect of the thiol group from the silane. Samples functionalized in different concentrations of Ag were tested against the action of ferrobactéria type Thiobacillus ferrooxidans. To test the antibacterial effect of the hybrid material, was used T&K methodology, where it was possible to measure the capacity to inhibit the oxidation of Fe2+ to Fe3+ per unit time. The planned modification process, permitted the maintenance the original structure of the bentonite, as well as the creation of silver nanoparticles, that due to the antibacterial effect, has inhibited biocorrosion of Fe2+, obtained in this way, a drilling fluid functionalized with great potential for application in drilling works of deep wells.

Made available in DSpace on 2015-09-30T02:38:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000475295-Texto+Parcial-0.pdf: 563 bytes, checksum: 4a169fcc2d293d6f288381480124104f (MD5) Previous issue date: 2015 / The species of the “C. parapsilosis complex” are common etiological agents of nosocomial candidemia, and C. parapsilosis sensu stricto is one of non-albicans Candida species with the highest incidences in clinical infections, primarily related to implanted medical devices. In this study, we identified 29 isolates comprising the “C. parapsilosis complex” to species level, all previously obtained from the hospital environment and medical tools. The isolates were also characterized for in vitro activity of aspartyl proteinase and phospholipase, as well as for their ability to form biofilms. The isolates identified as C. parapsilosis sensu stricto were also evaluated for their capability to interact with Staphylococcus aureus and Acinetobacter sp. in two-species polymicrobial biofilms. These biofilms were then analyzed for their tolerance to treatments with increasing concentrations of antimicrobials drugs and sanitizers. The results indicated that 75. 9% of the isolates were identified as C. parapsilosis sensu stricto, 24. 1% as Candida metapsilosis and none as Candida orthopsilosis. Regarding C. parapsilosis sensu stricto, all isolates were very strong producers of aspartyl proteinase, and 13. 6% of phospholipase. Regarding C. metapsilosis, 71. 4% and 14. 3% of the isolates showed very strong aspartyl proteinase and phospholipase activity, respectively. Moreover, all isolates were able to form biofilm on polystyrene surface. Among the C. parapsilosis sensu stricto isolates, 9. 1%, 45. 4% and 45. 4% were strong, moderate and weak biofilm producers, respectively. Regarding C. metapsilosis, 71. 4% were moderate and 28. 6% were weak biofilm producers. We also demonstrated that C. parapsilosis sensu stricto was capable of associating synergistically with both bacteria tested, since in polymicrobial biofilms a significantly higher number of bacterial cells adhered, compared to their own monomicrobial condition. However, bacterial cells did not interfere on the efficiency of yeast biofilm formation. When testing sanitizers, we showed that 70% ethyl alcohol and 1% sodium hypochlorite were effective to significantly decrease the number of viable cells, although they have not been able to eliminate the microbial populations of the biofilms. Our data also showed that the cells from all monomicrobial biofilms exhibited elevated tolerance to their respective antimicrobial drugs, at higher doses than their pre-determined minimal inhibitory concentration values. Nevertheless, biofilms of 6, 12 and 24 h of C. parapsilosis sensu stricto presented some decrease in cell viability to the treatment with ketoconazole, whereas 48 h biofilms were resistant to this antifungal. In polymicrobial biofilms, the bacterial cells did not affect the tolerance of yeast isolates to this antimicrobial. Conversely, S. aureus and Acinetobacter sp. cells were even more tolerant to the treatment with vancomycin and polymyxin B, respectively, when they were in polymicrobial biofilms, which was significantly different from their respective monomicrobial condition. The results from this work revealed the ability of “C. parapsilosis complex” isolates from nosocomial environment to express important virulence factors, as well as to interact synergistically with bacterial species of clinical importance. This data is clinically relevant, since such phenotypic features may represent an important risk in terms of nosocomial infection to hospitalized patients. / As espécies do “complexo Candida parapsilosis” mostram-se como frequentes agentes etiológicos de candidemias nosocomiais, sendo a C. parapsilosis sensu stricto uma das espécies não-albicans de Candida de maior incidência em infecções clínicas, estando relacionada principalmente com dispositivos médicos implantados. Neste estudo, identificamos, em nível de espécie, 29 isolados pertencentes ao “complexo Candida parapsilosis”, todos previamente obtidos a partir do ambiente hospitalar e de dispositivos médicos. Os isolados também foram caracterizados quanto à atividade in vitro de aspartil proteinase e fosfolipase, e quanto à habilidade de formar biofilmes. Os isolados identificados como C. parapsilosis sensu stricto foram avaliados quanto à capacidade de interagir com Staphylococcus aureus e Acinetobacter sp. no desenvolvimento de biofilmes polimicrobianos de duas espécies. Estes biofilmes foram então analisados quanto à sua capacidade de tolerar o tratamento com concentrações crescentes de fármacos antimicrobianos e sanitizantes. Como resultados, 75,9% dos isolados foram identificados como C. parapsilosis sensu stricto, 24,1% como Candida metapsilosis e nenhum como Candida orthopsilosis. Em relação à C. parapsilosis sensu stricto, todos os isolados mostraram-se como produtores muito fortes de aspartil proteinase e 13,6% de fosfolipase. Em relação à C. metapsilosis, 71,4% e 14,3% dos isolados apresentaram atividade muito forte de aspartil proteinase e fosfolipase, respectivamente. Além disso, todos os isolados foram capazes de formar biofilme em superfície de poliestireno. Dentre os isolados de C. parapsilosis sensu stricto, 9,1%, 45,4% e 45,4% mostraram-se como produtores fortes, moderados e fracos de biofilme, respectivamente. Em relação aos de C. metapsilosis, 71,4% foram moderados e 28,6% foram fracos formadores de biofilme. Demonstramos também que a C. parapsilosis sensu stricto foi capaz de se associar de forma sinérgica com ambas as bactérias testadas, pois nos biofilmes polimicrobianos um número significativamente maior de células bacterianas se aderiram em comparação à sua condição monomicrobiana. Entretanto, as bactérias não interferiram na eficiência de formação de biofilmes da levedura. O tratamento com sanitizantes mostrou que o álcool etílico a 70% e o hipoclorito de sódio a 1% foram eficazes em diminuir significativamente o número de células viáveis, mas não foram capazes, mesmo assim, de eliminar as populações microbianas dos biofilmes. Além disso, nossos dados mostraram que as células integrantes de todos os biofilmes monomicrobianos avaliados apresentaram elevada tolerância aos seus respectivos antimicrobianos, em doses superiores aos seus valores de concentração inibitória mínima, previamente determinados. Mesmo assim, os biofilmes de C. parapsilosis sensu stricto de 6, 12 e 24 h mostraram alguma perda de viabilidade celular ao tratamento com cetoconazol, enquanto biofilmes de 48 h se mostraram resistentes a este antifúngico. Nos biofilmes polimicrobianos, a presença das células bacterianas não influenciou a tolerância das leveduras ao antimicrobiano. Por outro lado, as células de S. aureus e Acinetobacter sp. foram ainda mais tolerantes ao tratamento com vancomicina e polimixina B, respectivamente, quando em biofilmes polimicrobianos, de forma significativa em comparação às suas respectivas condições monomicrobianas. Os resultados deste trabalho revelaram a capacidade de isolados do “complexo C. parapsilosis” do ambiente nosocomial de expressar importantes fatores de virulência, bem como de interagir sinergicamente com bactérias de importância clínica. Em conjunto, estas informações mostram-se de grande relevância clínica, em função de tais características fenotípicas representarem um importante risco em termos de infecção hospitalar a pacientes internados.

Orientador: Denise Pedrini / Coorientador: Alberto Carlos Botazzo Delbem / Coorientador: Cristiane Duque / Banca: Débora Barros Barbosa / Banca: Adelisa Rodolfo Ferreira Tiveron / Resumo: O objetivo do presente estudo foi avaliar as propriedades antimicrobianas, físico-mecânicas e de liberação de fluoreto do cimento de ionômero de vidro (CIV) associado ao hexametafosfato de sódio (HMP) microparticulado e nanoparticulado. Inicialmente, foram obtidas soluções de HMP nas concentrações 1, 3, 6, 9 e 12 % e a atividade antibacteriana foi avaliada contra Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus e Actinomyces israelli por meio do teste de difusão em ágar. A mesma metodologia foi empregada para determinar a atividade antimicrobiana do CIV associado ao HMP nas concentrações de 6, 9 e 12 % microparticulado ou nanoparticulado. Foi determinada a liberação de fluoreto (F) e HMP em soluções de desmineralização e remineralização. Além disso, as resistências à tração diametral e compressão, dureza de superfície e grau de conversão de monômeros foram analisados. Testes paramétricos e não paramétricos foram realizados, após a verificação da homocedasticidade dos dados (p < 0,05). As soluções de 6, 9 e 12 % de HMP apresentaram melhor atividade antimicrobiana contra as bactérias testadas, sendo essas concentrações incorporadas ao CIV. Todas as concentrações de HMP associado ao CIV tiveram atividade antimicrobiana para todas as bactérias. Observou-se uma relação dose-resposta entre concentração de HMP no CIV e a atividade antimicrobiana. Com relação à liberação de F e HMP, os maiores valores ocorreram no primeiro dia em todos os grupos e as maiores médias de liberação ocorreram nos grupos contendo 9 e 12 % de HMP nanoparticulado. Entretanto, a incorporação do HMP ao CIV reduziu as propriedades físico-mecânicas quando comparado ao CIV mostrando uma relação dose-resposta. Concluiu-se que a incorporação de HMP no CIV melhora a atividade antimicrobiana e aumenta a liberação de F, porém reduz suas... / Abstract: The aim of this study was to evaluate antimicrobial, physico-mechanical and fluoride release properties of the glass ionomer cement (GIC) associated with HMP microparticle and nanoparticle. Initially, solutions of HMP were obtained at concentrations of 1, 3, 6, 9 and 12 %, and the antibacterial activity was evaluated against Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus and Actinomyces israelli by agar diffusion test. The same methodology was used to determine the antimicrobial activity of GIC associated with HMP at concentrations of 6, 9 and 12 % microparticle or nanoparticle. The release of F and HMP were determined in demineralization and remineralization solutions. Furthermore, the resistance to diametral tensile and compression, surface hardness and the degree of conversion of monomers were measured. Parametric and non-parametric tests were performed, after checking homocedasticity data (p < 0.05). The solutions of 6, 9 and 12 % of HMP showed better antimicrobial activity against all bacteria tested, and these concentrations incorporated into the CIV. All concentrations of HMP incorporated into the GIC had antimicrobial activity for all bacteria. There was a dose-response relationship between concentration of HMP in the GIC and antimicrobial activity. Regarding the release of F and HMP, higher values occurred on the first day in all groups and the highest levels of release occurred in groups containing 9 and 12 % of HMP nanoparticle. However the incorporation of HMP in the GIC reduced values of physical and mechanical tests when compared to the GIC, showing a dose-response relationship. It was concluded that the incorporation of HMP in GIC improves antimicrobial activity and increase the release of fluoride, but reduces its physical and mechanical properties. The reduction of particulate HMP led to better antimicrobial and fluoride release results / Mestre