MEDEIROS, Suelen Carneiro de. Expressão heteróloga de uma glicosil hidrolase da Família 18 (cv2736) de Chromobacterium violaceum em Pichia pastoris com potencial antibacteriano. 2012. 122 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica)-Universidade Federal do Ceará, Fortaleza-CE, 2012. / Submitted by Eric Santiago (erichhcl@gmail.com) on 2016-07-11T13:31:54Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_scmedeiros.pdf: 2847279 bytes, checksum: c0e6c68e1b479acad3f4108642933a87 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa (jairo@ufc.br) on 2016-08-02T20:21:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_scmedeiros.pdf: 2847279 bytes, checksum: c0e6c68e1b479acad3f4108642933a87 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-02T20:21:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_scmedeiros.pdf: 2847279 bytes, checksum: c0e6c68e1b479acad3f4108642933a87 (MD5) Previous issue date: 2012 / Chitinases are enzymes capable of hydrolyzing chitin, a polysaccharide composed of units of N-acetyl-D- glucosamine, which is abundant in nature. The genome sequence of C. violaceum ATCC 12472 has revealed some genes encoding proteins with potential applications in agriculture and medicine, such as those encoding chitinases. This study aimed to express the protein CV2736 in Pichia pastoris KM71H and to evaluate its antimicrobial potential against microorganism of medical importance. To this purpose, the full ORF (encoding rCV2736 PS+) and a partial sequence of it, encoding a truncated protein without its putative signal peptide (rCV2736PS‒), were cloned into the vector pPICZ α A for expression in P. pastoris. The protein rCV2736 PS+ was detected in the cell-free culture medium of P. pastoris cells harboring the corre sponding expression cassete. The recombinant CV2736PS+ was produced in a heterogeneous manner, and when analyzed by SDS-PAGE, three protein bands with apparent molecular masses of 41. 3, 38.1 and 36. 2 kDa were detected. The protein band with the highest molecular mass (41.3 kDa) was stained with the Periodic acid - Schiff’s reagent, thus showing that this band corresponds to N-glycosylated rCV2736PS+. Furthermore, tryptic peptides identified by mass spectrometry (ESI-MS) confirmed the identity of the expressed protein. The recombinant protein produced without the first 22 amino acids(rCV2736PS‒) showed higher chitinase activity than that found for th e fraction containing rCV2736PS+, despite not being detected by SDS-PAGE. The recombinant protein CV2736PS+, present in the fraction F0/95 from the culture medium of induced cells, was active after heat treatment at 50 °C and its maximum chitinolytic activity was recorded at pH 3.0. This fraction was also able to degrade the synthetic substrates 4-nitrophenyl N,N'-diacetyl -β-D-chitobioside and 4-nitrophenyl N,N',N''-triacet yl chitotrioside, which characterizes an endochitinase activity. Abinitio molecular modeling demonstrated that the polypeptide of CV2736 likely folds as a(β/α)8 barrel (also known as TIM barrel), which is typical of the GH18 family proteins. The fraction F0/95 showed antimicrobial activity against Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Staphylococcus aureus and growth inhibition against Salmonella cholera-suis. The same fraction were evaluated against the yeast Candida albicans, but was not detectable inhibition of this microorganism in the assay. These results suggest that rCV2736 should be further studied as a new anti-bacterial agent. / Quitinases são enzimas capazes de hidrolisar quitina, um polissacarídeo formado por unidades de N-acetil-β-D-glucosamina, que é extremamente abundante na natureza. Após o sequenciamento do genoma de C. violaceum ATCC 12472, alguns genes referentes a proteínas com potencial biotecnológico foram encontrados, dentre eles os que codificam para quitinases. Este trabalho teve como objetivos expressar a proteína CV2736 de C. violaceum ATCC 12472 de forma recombinante em células de Pichia pastoris KM71H e avaliar seu potencial antimicrobiano frente a microrganismos de importância médica. Para isto, a sequencia completa da ORF (CV2736PS+), bem como uma sequencia parcial, codificando uma proteína truncada, sem um possível peptídeo sinal N-terminal (CV2736PS‒), foram clonadas no vetor de expressão pPICZαA, para expressão em P. pastoris KM71H. A proteína completa (rCV2736PS+) foi detectada em uma fração proteica, contendo as proteínas secretadas para o meio de cultura, por células de P. pastoris transformadas com o respectivo cassete de expressão recombinante. A rCV2736PS+ apresentou-se de forma heterogênea, quando analisada por SDS-PAGE, exibindo três bandas com massas moleculares aparentes de 41,3, 38,1 e 36,2 kDa, respectivamente, sendo uma delas (41,3 kDa) maior do que se poderia deduzir a partir da sequencia de aminoácidos. Após coloração com reagente de Schiff para revelação de glicoproteínas, constatou-se que essa banda (41,3 kDa) correspondia a rCV2736PS+ na sua forma N-glicosilada. Além disso, rCV2736PS+ teve seus peptídeos identificados por espectrometria de massas, na fração F0/95 do meio de cultura livre de células. A proteína recombinante produzida sem os 22 aminoácidos iniciais (rCV2736PS‒) apresentou atividade quitinásica maior que a encontrada para a fração contendo rCV2736PS+, apesar de não ter sido detectada por SDS-PAGE. A fração F0/95 do meio de cultura contendo rCV2736PS+ mostrou-se termoestável até 50°C e com pico de atividade quitinolítica em pH 3,0. A mesma fração apresentou maior atividade endoquitinásica e ativa contra os substratos sintéticos 4-nitrofenil N,N’–diacetil-β-D-quitobiosídeo e 4-nitrofenil N,N’,N’’–triacetilquitotriose. A modelagem molecular evidenciou o dobramento na forma de barril (β/α)8 (barril TIM), típico das proteínas da família GH18. Do mesmo modo, a fração F0/95 foi testada contra seis espécies de bactérias, apresentando atividade microbicida contra Pseudomona aeruginosa, Escherichia coli e Staphylococcus aureus, e foi capaz de inibir o crescimento de Salmonella choleraesuis. A mesma fração foi testada contra a levedura Candida albicans, mas não foi detectada inibição do crescimento contra este microrganismo no ensaio. Portanto, a proteína recombinante rCV2736 pode, assim, ser considerada uma molécula com potencial antibacteriano. Palavras-chave: Quitinase; Pichia pastoris; antimicrobiano; Expressão heteróloga.

Made available in DSpace on 2015-12-06T23:47:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / INTRODUÇÃO: Os antimicrobianos são amplamente utilizados em hospitais. A análise do elevado consumo de antimicrobianos de uma instituição hospitalar permite direcionar intervenções especificas e apontar o uso inadequado ou abusivo, além de contribuir para conter a disseminação da resistência bacteriana a estes medicamentos. OBJETIVOS: Analisar a variação de consumo dos principais antimicrobianos utilizados no Hospital São Paulo e nas enfermarias agrupadas por especialidades, entre 1995 a 2006. Correlacionar o consumo dos antimicrobianos com a resistência bacteriana de alguns microorganismos isolados de hemoculturas entre 2000 a 2006. MÉTODO: Análise do consumo de 27 antimicrobianos agrupados por Indicação Clínica e/ou Classe Farmacológica do hospital e por tipo de unidades de internação. Para a mensuração do consumo dos antimicrobianos foi utilizada o número de Doses Diárias Definidas por 100 pacientes-dia, para cada enfermaria e todo hospital. Também se correlacionou o consumo de antimicrobianos com a freqüência de resistência bacteriana de alguns agentes isolados de hemoculturas. Os dados foram avaliados por Análise de Variância (ANOVA) e regressão linear simples, adotando 5% como limiar de significância. RESULTADOS: Houve diminuição no número de pacientes-dia atendidos nas enfermarias Clínicas e Cirúrgicas e aumento nas Unidades de Terapia Intensiva. Os antibióticos mais consumidos foram respectivamente: Ceftriaxona, Cefalotina, Clindamicina, Vancomicina, Amicacina, Metronidazol e Ciprofloxacina. As Cefalosporinas de 3ª e 4ª geração foram as mais consumidas dentre drogas para microorganismos Gram-negativos e a Vancomicina entre as Anti-estafilocócicas. Os antifúngicos apresentaram aumento significante no consumo durante o estudo. Outros antimicrobianos analisados destacaram-se pela elevada prescrição: a Clindamicina, Metronidazol e a Ciprofloxacina. As enfermarias que apresentaram maior uso das drogas analisadas foram: UTI-Geral, Transplantes, Pronto Socorro, Propedêuticas, Hematologia, Gastrocirurgia e Neurocirurgia. Dentre os agentes Gram-positivos analisados apresentaram diminuição de resistência bacteriana a alguns antibióticos: Staphylococcus coagulase negativo (Ciprofloxacina, Gentamicina e Rifampicina), Staphylococcus aureus (Ciprofloxacina e Gentamicina) e os Enterococcus spp. (Gentamicina). Não houve correlação estatisticamente significativa entre o consumo de antimicrobianos e a resistência bacteriana dos microorganismos Gram-Positivos das hemoculturas. Entre os microorganismos Gram-negativos selecionados, apresentaram aumento de percentual de resistência a diversos antimicrobianos: Acinetobacter baumanni (Ciprofloxacina, Imipenem, Meropenem); Enterobacter spp. (Ceftriaxona, Cefepime, Ceftazidime); Escherichia coli (Ciprofloxacina); Klebsiella pneumoniae (Cefalotina, Ceftriaxona, Cefepime, Ceftazidima, Ciprofloxacina e Sulfametoxazol/Trimetoprim) e para as cepas produtoras de ESBL (Ceftriaxona). Os microorganismos Enterobacter spp. e Klebsiella pneumoniae apresentaram correlação positiva e estatisticamente significante entre o aumento no percentual de resistência e o consumo da Ceftriaxona e Cefepime, durante o período analisado. Conclusão: Observou-se aumento de consumo em 12 (44,4%) das drogas analisadas e diminuição em 7 (25,9%), durante anos de 1995 a 2006. Os antimicrobianos foram mais consumidos em ordem decrescente, nas Unidades de Terapia Intensiva, de Pronto Socorro, Unidades Clínicas e Unidades Cirúrgicas. Houve correlação estatisticamente significativa entre o aumento de consumo de Cefalosporinas com aumento do percentual de resistência para os microorganismos Enterobacter spp. e Klebsiella pneumoniae. / BACKGROUND: The antimicrobials are largely used at hospitals. The analysis of antimicrobials use in large hospital institutions allows the better design of interventions aiming to control their inadequate or abusive use and that also contribute to contain the spread of bacterial resistance to those medicines. OBJECTIVE: To analyze the temporal variation of some antimicrobials usage at Hospital Sao Paulo and its Infirmary Units grouped by specialties, between 1995 and 2006; and, to correlate antimicrobials use with bacterial resistance of some microorganisms isolated from blood culture between 2000 and 2006. METHOD: Analysis of the use of 27 antimicrobials grouped by clinical indication and/or pharmacological class was done in the following units: Clinics, Surgeries, Intensive Care (ICU) and Emergency units. Antimicrobials use was measured by normalizing the numbers of Daily Defined Doses per 100 patients-days for each unit and for the entire hospital. It was also done the correlation of the intensity of antimicrobials use with the frequency of resistance of agents isolated from blood cultures. Data were analyzed by Analysis of Variance (ANOVA) and by simple linear regression, adopting 5% as the limit of significance. RESULTS: There was a reduction in the number of patients-days attended in Clinical and Surgical wards, with a correspondent increase in the ICUs. The most frequently used antibiotics were, respectively: Ceftriaxone, Cefalotin, Clindamycin, Vancomycin, Amikacin, Metronidazole and Ciprofloxacin. Third and forth generations Cephalosporins were the ones most used for Gram- negative organisms, with Vancomycin being so for against-staphylococcus organisms. There was a significant increase of antifungal drugs through the study interval. Other antimicrobials with a great number of prescriptions were: Clindamycin, Metronidazole and Ciprofloxacin. The Infirmaries in which antimicrobials were most used were: ICU, Transplants, Hematology, Emergency room, Clinical Ward, Gastric Surgery and Neurosurgical. There was a decrease in the percentage of resistance to the cited antimicrobials for the following Gram-positive agents: Staphylococcus negative coagulase (Ciprofloxacin, Gentamicin and Rifampin), Staphylococcus aureus (Ciprofloxacin and Gentamicin), and Enterococcus spp. (Gentamicin). However, there was no significant correlation between the use of antimicrobials and the development of bacterial resistance for the Gram–positives microorganisms. The Gram – negative agents that showed an increase in the percentage of resistance were: Acinetobacter baumanni (Ciprofloxacin, Imipenem, Meropenem); Enterobacter spp. (Ceftriaxone, Cefepime, Ceftazidime); Escherichia coli (Ciprofloxacin); Klebsiella pneumoniae (Cefalotin, Ceftriaxone, Cefepime, Ceftazidima, Ciprofloxacin) and for the cepas producing of ESBL (Ceftriaxone). For Enterobacter spp. and Klebsiella pneumoniae were shown a significant correlation between the increase of the percentage of the resistance and the use of Ceftriaxone and Cefepime, throughout the study period. CONCLUSION: Antimicrobials use increased for 12 (44,4%) of the analyzed drugs and decreased for 7 (25,9%) between 1995 and 2006. The antimicrobials were most used, in decreasing order, at: ICUs, Emergency units, Clinical Wards and Surgery Units. Finally, there was a significant positive correlation between the use of Cephalosporins with the percentage of resistance for Enterobacter spp. and Klebsiella pneumoniae. / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Evalúa la composición química, actividad antioxidante, actividad tóxica, citotóxica y actividad antibacteriana de los alcaloides y flavonoides aislados del extracto etanólico liofilizado de las hojas de Erythroxylum coca Lam y Erithroxylum novogranatense (Morris) Hieron. Las muestras de hojas son proporcionadas por la Empresa Nacional de la Coca S.A. Los ensayos biológicos se realizan en el Instituto de Ciencias Farmacéuticas y Recursos Naturales “Juan de Dios Guevara” de la Facultad de Farmacia y Bioquímica UNMSM; así como en el Instituto de Investigación “Antonio Raimondi” de la Facultad de Ciencias Biológicas UNMSM. / Tesis

NOBRE, C. B. Caracterização físico-química e efeito sobre bactérias orais de uma lectina de sementes de Andira surinamensis (Bondt) Splitg. ex Amshoff. 2012. 93 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2012. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-10-31T20:03:44Z No. of bitstreams: 1 2012_dis_cbnobre.pdf: 1864484 bytes, checksum: 118f59fa7f9546d508dc8870d7c1b826 (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-16T20:56:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_dis_cbnobre.pdf: 1864484 bytes, checksum: 118f59fa7f9546d508dc8870d7c1b826 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-16T20:56:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_dis_cbnobre.pdf: 1864484 bytes, checksum: 118f59fa7f9546d508dc8870d7c1b826 (MD5) Previous issue date: 2012 / Andira surinamensis (Bondt) Splitg. ex Amshoff seeds, a species belonging to the Leguminosae family, Papilionoideae subfamily, Dalbergieae tribe, have a glucose/mannose specific lectin rabbit erythrocytes that agglutinate native or treated with proteolytic enzymes. The lectin from Andira surinamensis seeds was purified by affinity chromatography on Mannose-Sepharose matrix followed by ion exchange chromatography on DEAE-Sephacel matrix. This procedure resulted in a purified lectin, named ASL. ASL purification process was monitored by specific hemagglutinating activity and SDS-PAGE, where it was observed that this lectin is composed of six protein bands, a higher molecular weight of approximately 20 kDa and five other bands of lower apparent molecular weight between 15 and 12 kDa.The intact molecular mass of the purified lectin was determined by mass spectrometry with electrospray ionization (ESI). The analysis of the intact mass spectrum showed the presence of two majority ions of molecular mass 12.220+ 2 and 13.258 + 2 Da. ASL also had its primary structure partially sequenced by mass spectrometry sequence. This lectin is a glycoprotein and shows high stability, being able to maintain their hemagglutinating activity in a wide pH range and after exposure to temperatures up to 80 °C for 1 hour. After dialysis against the chelating agent EDTA, ASL had its hemagglutinating activity decreased, but recovered its activity after the addition of metals, being dependent on divalent metal cations. We also evaluate the effect of ASL on planktonic bacterial growth and biofilm formation and found that it interfered with the growth of two different planktonic gram-positive bacterial strains (Streptococcus mitis and Streptococcus salivarius) and biofilm formation by Stafilococcus aureus e Streptococcus salivarius. / As sementes de Andira surinamensis (Bondt) Splitg. ex Amshoff, uma espécie pertencente à família Leguminosae, subfamília Papilionoideae, tribo Dalbergieae, possuem uma lectina glicose/manose específica, que aglutina eritrócitos de coelhos nativos ou tratados com enzimas proteolíticas. A lectina de sementes de Andira surinamensis foi purificada através de cromatografia de afinidade em matriz de Sepharose-Manose seguida por cromatografia de troca iônica em matriz de DEAE-Sephacel. Esse procedimento resultou na lectina purificada, nomeada de ASL. O processo de purificação da ASL foi monitorado pela atividade hemaglutinate específica e SDS-PAGE, onde se observou que essa lectina é composta por seis bandas protéicas, uma de maior peso molecular aparente de aproximadamente 20 kDa e outras cinco bandas de menor peso molecular aparente entre 15 e 12 kDa. A massa molecular intacta da lectina purificada foi determinada através da técnica de espectrometria de massa com Ionização por Eletrospray (ESI). A análise do espectro de massa intacta mostrou a presença de dois íons majoritários de massa molecular de 12.220+ 2 e 13.258 + 2 Da. ASL também teve sua estrutura primária parcialmente sequenciada através de espectrometria de massa sequencial. Essa lectina é uma glicoproteína e demonstra elevada estabilidade, sendo capaz de manter sua atividade hemaglutinante em uma ampla faixa de pH e após exposição a temperaturas de até 80 ºC por 1hora. Após diálise contra o agente quelante EDTA, ASL teve sua atividade hemaglutinante diminuída, porém recuperou sua atividade após a adição de metais, mostrando-se dependente de cátions metálicos divalentes. Foi avaliado também o efeito da ASL no crescimento planctônico bacteriano e na formação de biofilmes e observou-se que ela interferiu no crescimento planctônico de duas diferentes cepas bacterianas gram-positivas (Streptococcus mitis e Streptococcus salivarius) e na formação de biofilme por Staphylococcus aureus e Streptococcus salivarius.

FARIAS, D. F. Proteínas de sementes de Amburana cearensis (Allemao) A. C. Smith: valor nutricional e bioatividade contra patógenos e vetores de doenças. 2009. 187 f. Dissertação (Mestrado em Bioquímica) - Centro de Ciências, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2009. / Submitted by Francisco Lacerda (lacerda@ufc.br) on 2014-11-26T20:59:40Z No. of bitstreams: 1 2009_dis_dffarias.pdf: 1943323 bytes, checksum: dd2074b7cf88fa8338feee08dbcd7b3f (MD5) / Approved for entry into archive by José Jairo Viana de Sousa(jairo@ufc.br) on 2015-01-06T17:16:09Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2009_dis_dffarias.pdf: 1943323 bytes, checksum: dd2074b7cf88fa8338feee08dbcd7b3f (MD5) / Made available in DSpace on 2015-01-06T17:16:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2009_dis_dffarias.pdf: 1943323 bytes, checksum: dd2074b7cf88fa8338feee08dbcd7b3f (MD5) Previous issue date: 2009 / Amburana cearensis (Allemao) A. C. Smith, usually known in portuguese language as “Imburana-de-Cheiro” or “Cumaru”, is a leguminous tree, subfamily Papilionoideae with common occurrence in “Caatinga” Dominium. Despite the numerous ethnobotanical uses, few studies report biological activities of medical interest and / or agribusiness for this species or yet its utilization as food for humans and / or animals. This study aimed to evaluate the proteins of A. cearensis on its nutritional value associated with its biochemical characterization and as to the presence of bioactivity against bacteria, yeasts and filamentous fungi, all pathogens of humans, animals or plants of economic importance, and also against the vectors of disease, Aedes aegypti and Ae. albopictus. For this, seeds were collected in areas of caatinga trees in the municipality of Quixadá - CE and, subsequently, dried and finely ground. The seeds of A. cearensis have high nutritional potential, evidenced by the high content of proteins (22.69  0.81 g 100 g-1), lipid (24.45 2.02 g 100 g-1) and dietary fiber (34.75 1.78 g 100 g-1), keeping smaller quantities of starch (11.43 0.18 g 100 g-1), of total sugars (5.60 0.09 g 100 g-1) and minerals (4.51 0.21 g 100 g-1). Its amino acid composition is comparable to that of soybeans and beans. Moreover, the seeds have moderate levels of antinutritional factors, being detected only trypsin inhibitory activity (27.41 ± 0.03 gTI Kg-1), urease activity (434 ± 34 U kg-1) and some secondary metabolites such as tannins, phenols, flavones, flavonols, and xantone steroids. Chemical components, probably of low molecular mass present in seeds flour incorporated into diets, seem to interfere with their acceptance and use by animals since when the protein fraction (F0/90), obtained from its soluble protein, was incorporated into the balanced diet, the rats accepted well the diets and their performance indicated that F0/90 a good source of protein, comparable to major sources of vegetable protein such as soy and beans. Proteins of A. cearensis seeds are mainly composed of globulins (74.43 g 100 g-1) and albumins (14.23 g 100 g-1), with smaller quantities of glutelin basic proteins (10.07 g 100g-1), prolamins (1.20 g 100 g-1) and glutelin acidic proteins (0.07 g 100 g-1). The seeds crude extract (GE) offers a wide variety of proteins as shown by electrophoretic profiles with a predominance of proteins with apparent molecular mass over 45.0 kDa. The seeds of A. cearensis show also high bioactive potential, especially the activities of their majority proteins (albumins and globulins) against the growth of human pathogenic bacteria and yeast and phytopathogenic filamentous fungi, and against larvae of Aedes aegypti and Ae. albopictus. The inhibitory activity of the growth of phytopathogenic fungi concentrated in the albumins F70/90 fraction, being rich in proteins of low molecular mass (<30 kDa). Thus we can conclude that F0/90 is a good source of protein food when compared to other plant sources already used by the population. In addition, the globulins and albumins of A. cearensis are promising sources of bioactive proteins to be studied further and in greater purity. / Amburana cearensis (Allemao) A. C. Smith, popularmente conhecida como Imburana-de-Cheiro ou Cumaru, é uma leguminosa arbórea da subfamília Papilionoideae de ocorrência freqüente na região do domínio Caatinga. Apesar dos inúmeros usos etnobotânicos, poucos trabalhos relatam atividades biológicas de interesse médico e/ou agroindustrial para esta espécie ou, mesmo, sua utilização como fonte de alimento para humanos e/ou animais. Assim, o presente trabalho objetivou avaliar as proteínas de A. cearensis quanto a seu valor nutricional aliado à sua caracterização bioquímica e quanto à presença de bioatividade contra bactérias, leveduras e fungos filamentosos, todos patógenos do homem, de animais ou de plantas de importância econômica, e, ainda, contra os vetores de doenças, Aedes aegypti e Ae. albopictus. Para tanto, sementes foram coletadas em área de caatinga arbórea, no município de Quixadá – CE, sendo, posteriormente, desidratadas e finamente moídas. As sementes de A. cearensis possuem alto potencial nutricional, revelado pelo alto teor de proteínas (22,69  0,81 g. 100 g-1), lipídios (24,45 2,02 g. 100 g-1) e fibra alimentrar (34,75 1,78 g.100 g-1), retendo quantidades menores de amido (11,43 0,18 g.100g-1), açúcares totais (5,60 0,09 g.100 g-1), e de minerais (4,51 0,21 g.100 g-1). Sua composição aminoacídica é comparável àquela da soja e feijão. Além disso, as sementes apresentam moderados níveis de fatores antinutricionais, sendo detectados apenas atividade inibitória de tripsina (27,41 ± 0,03 gTI.Kg-1), atividade ureásica (434,0 ± 34,0 U.Kg-1) e alguns metabólitos secundários, como taninos, fenóis, flavonas, flavonóis, xantonas e esteróides. Componentes químicos, provavelmente de baixa massa molecular, presentes nas sementes incorporadas a dietas interferem na sua aceitação e aproveitamento por parte dos animais, uma vez que quando a fração proteica (F0/90) obtida de suas proteínas solúveis é incorporada à dieta balanceada, apresenta boa aceitação pelos animais, mostrando-se uma boa fonte de proteínas, comparável a importantes fontes de proteínas vegetais como a soja e os feijões. As proteínas das sementes de A. cearensis são compostas principalmente por globulinas (74,43 g. 100g-1) e albuminas (14,23 g.100 g-1), com quantidades menores de proteínas do tipo glutelinas básicas (10,07 g.100 g-1), prolaminas (1,20 g.100 g-1) e proteínas do tipo glutelinas ácidas (0,07 g.100 g-1). O extrato bruto (EB) das sementes apresenta uma grande diversidade de bandas proteicas com predominância de bandas com massa molecular aparente > 45,0 kDa. As sementes de A. cearensis possuem também alto potencial bioativo, destacando-se as atividades de suas proteínas majoritárias (globulinas e albuminas) contra o crescimento de bactérias e leveduras patógenas do homem e de fungos filamentosos fitopatogênicos, e atividade contra larvas de Aedes aegypti e Ae. albopictus. A atividade inibitória do crescimento de fungos fitopatogênicos concentra-se na fração F70/90 das albuminas, sendo rica em proteínas de baixa massa molecular (< 30 kDa). Assim, pode-se concluir que a F0/90 é uma boa fonte de proteína alimentar quando comparada a outras fontes vegetais já utilizadas pela população. Além disso, as globulinas e albuminas de A. cearensis são fontes promissoras de proteínas bioativas que devem ser estudadas mais detalhadamente e em maior grau de pureza.

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / Se determina la concentración de triclosán en 32 muestras de jabón líquido y gel antibacterial provenientes de 8 marcas diferentes comercializadas en los principales supermercados de Lima Metropolitana. La presencia y concentración de triclosán se determina por el método de Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) debido a que es el método de elección según bibliografías actuales. Como resultados se obtiene que de las 8 marcas evaluadas, el 53% presenta concentraciones de triclosán en un rango que oscila de 0.178% a 0.531%; del total de muestras, el 18.75% supera los límites establecidos por la FDA. En las muestras de jabones líquidos, el 31.25 % supera los límites establecidos por la FDA y en el caso de geles antibacteriales el 6.25 %. Se concluye que las concentraciones de triclosán presente en los jabones líquidos no es significativo a excepción de una de las marcas que si sobrepasa los límites establecidos por la FDA, en el caso de geles antibacteriales las concentraciones de triclosán se encuentran dentro del rango permitido en todas las marcas. Finalmente se recomienda establecer la concentración máxima permisible de triclosán para productos cosméticos en nuestro país debido al potencial riesgo para la salud humana. / Tesis

Publicación a texto completo no autorizada por el autor / El documento digital no refiere asesor / La mayoría de los tratamientos odontológicos en niños presentan una gran complejidad en su realización y dependen de diversos factores para alcanzar el éxito clínico, estos pueden ser resumidos en tres: la selección de los materiales, la habilidad o destreza por parte del clínico, además de la cooperación del paciente. Es así que la selección de materiales, juega un rol importante, destacando los materiales para medicación de obturación pulpar en dientes deciduos. Uno de ellos es la pasta compuesta por cloranfenicol, tetraciclina y óxido de zinc más eugenol, fue sugerida para el tratamiento de piezas dentales temporales con compromiso pulpar, siendo una técnica caracterizada por no requerir de instrumentación de los conductos radiculares denominada Técnica de Endodoncia No Instrumentada. Dicha pasta está compuesta de una parte de tetraciclina (500mg), una parte de cloranfenicol (500mg), dos partes de óxido de zinc tipo I (1000mg) y eugenol (una gota). Se reporta el caso de un paciente de 3 años 11 meses de edad, de sexo masculino; con diagnóstico a nivel estomatológico de necrosis pulpar, conducta negativa; a quien se le realizó tratamiento odontológico integral, siendo uno de los tratamientos a nivel pulpar, pulpectomías, con pasta medicada de obturación radicular CTZ, en Sala de Operaciones (SOP) del Instituto Nacional de Salud del Niño (INSN). Se muestra que los componentes de la pasta CTZ, tienden a ser más efectivos en el tratamiento de pulpectomía que otros materiales, en donde a la exploración clínica de 1 mes y 2 meses después de su colocación se encontraban asintomáticos; y al examen radiográfico al primer mes reveló una reducción o estabilización de la lesión periapical. El objetivo es realizar tratamientos pulpares con la pasta CTZ demostrando excelentes resultados y reduciendo la carga bacteriana hasta niveles mínimos. / Trabajo académico

Klebsiella pneumoniae (KP) pertence à família Enterobacteriaceae e é frequentemente isolada em infecções nosocomiais, reportada globalmente como uma das mais importantes causas de bacteremias. O seu tratamento usual com β-lactâmicos foi posto a prova na década de 80, com o surgimento de cepas produtoras de β-lactamases de espectro estendido (ESBLs), e posteriormente com as carbapenemases, como sua principal representante Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), capazes de hidrolisar todos os β-lactâmicos. Apesar das limitadas opções, em geral as Klebsiella pneumoniae produtoras de KPC (KP-KPC) apresentam susceptibilidade às polimixinas, aminoglicosídeos e tigeciclina, que são comumente aplicadas em regimes terapêuticos combinados, dependente dos perfis de sensibilidade ou resistência a estas drogas, mas dos quais ainda não há informações suficientes para a definição do tratamento mais adequado. A escassez de opções terapêuticas é um dos fatores que contribuem para os altos índices de mortalidade das infecções por K. pneumoniae, de cerca de 40%. Assim, se fazem necessárias avaliações dos perfis fenotípicos de isolados de KP-KPC e a caracterização da disseminação deste mecanismo de resistência, avaliando a presença de perfis clonais relacionados dentro da população. A partir deste cenário, os objetivos deste trabalho foram determinar as concentrações inibitórias mínimas (CIMs) frente à polimixina B (PMB), meropenem (MEM) e tigeciclina (TGC), os perfis de sensibilidade frente a outras drogas comumente utilizadas no tratamento destas infecções, assim como caracterizar molecularmente as amostras resistentes à PMB. Para a determinação das CIMs e dos perfis de susceptibilidade foram utilizadas as técnicas de microdiluição em caldo e disco-difusão, respectivamente, e o perfil molecular foi analisado através de técnica de macrorestrição de DNA seguida por PFGE. Foram incluídas neste estudo 158 amostras isoladas de corrente sanguínea, de quatro hospitais terciários de Porto Alegre. Destas 158 amostras, nenhuma foi sensível a MEM de acordo com o Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), 118 (74,7%) a PMB utilizando a recomendação do European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), e 94 (59.5%) à TGC considerando EUCAST ou 137 (86.7%) de acordo com o Food and Drug Administration (FDA). Um total de 48 (30.4%), 28 (17.7%) e 16 (10.1%) isolados foram considerados sensíveis à amicacina (AMK) de acordo com CLSI, EUCAST e USCAST, respectivamente, e 11 (7.0%), 9 (5.7%) e 9 (5.7%) reportados como sensíveis à gentamicina (GEN) de acordo com CLSI, EUCAST e USCAST, respectivamente. Doxiciclina foi o antimicrobiano mais ativo (24, 60.0%) frente aos 40 (25,3%) isolados resistentes a PMB. Destes 40 isolados, 29(72.5%) foram caracterizados molecularmente sendo encontrados 18 clones, dos quais cinco perfis clonais foram identificados em mais de um hospital. Neste estudo, pudemos demonstrar um importante aumento nos níveis de resistência às polimixinas, acompanhado por um desafiador perfil de susceptibilidade frente as outras opções terapêuticas disponíveis, ainda que os índices de sensibilidade destas drogas variem de acordo com os pontos de corte de cada comitê. Quanto à caracterização molecular, a detecção de dezoito clones diferentes e a presença do mesmo perfil em mais de um hospital provavelmente estão associadas à emergência de resistência mediada por mutações, assim como a um processo de disseminação horizontal. / Klebsiella pneumoniae (KP) belongs to the family Enterobacteriaceae and is frequently isolated in nosocomial infections, reported globally as one of the most important causes of bacteremia. Its usual β-lactam treatment was challenged in the 1980s with the emergence of extended-spectrum β-lactamase producing (ESBLs) strains, and later with carbapenemases, as its main representative Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC), capable of hydrolyze all β-lactam. Despite the limited options, KPC-producing Klebsiella pneumoniae (KPC-KP) are generally susceptible to polymyxins, aminoglycosides and tigecycline, which are commonly applied in combination therapy regimens depending on levels of sensitivity or resistance to these drugs, but of which there is still insufficient information to define the most appropriate treatment. The scarcity of therapeutic options is one of the factors that contribute to the high mortality rates of K. pneumoniae infections, of around 40%. Thus, it is necessary to evaluate the phenotypic profiles of KPC-KP isolates and the characterization of the dissemination of this resistance mechanism, evaluating the presence of related clonal profiles within the population. From this scenario, the objectives of this study were to determine the minimum inhibitory concentrations (MICs) against polymyxin B (PMB), meropenem (MEM) and tigecycline (TGC) by broth microdilution and the susceptibility profiles to aminoglycosides and other drugs by disk-diffusion method, as well as to evaluate the molecular profile of KPC-KP isolates from four tertiary hospitals in Porto Alegre. A total of 158 samples were included in this study, where none were sensitive to MEM according to the Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), 118 (74.7%) to PMB using the recommendation of the European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST), and 94 (59.5%) to TGC considering EUCAST or 137 (86.7% %) according to Food and Drug Administration (FDA). A total of 48 (30.4%), 28 (17.7%) and 16 (10.1%) isolates were considered susceptible to amikacin (AMK) according to CLSI, EUCAST and USCAST, respectively, and 11 (7.0%), 9 %) and 9 (5.7%) reported as sensitive to gentamicin (GEN) according to CLSI, EUCAST and USCAST, respectively. Doxycycline was also the most active antimicrobial (24, 60.0%) against 40 (25.3%) PMB resistant isolates. Of these 40 isolates, 29 (72.5%) were clonally related, resulting in 18 clones, where five profiles were identified in more than one hospital. In this study, we could demonstrate an important increase in the levels of resistance to polymyxins, accompanied by a challenging profile of susceptibility to other drugs, although the sensitivity indexes of the latter vary significantly according to the breakpoints of each committee. As for molecular characterization, the detection of eighteen different clones and the presence of the same profile in more than one hospital are probably associated with the emergence of resistance mediated by mutations, as well as a process of horizontal dissemination.

Os fármacos atualmente disponíveis para o tratamento da Doença de Chagas e leishmaniose possuem eficácia insatisfatória, principalmente devido à resistência parasitária e reações adversas severas. Duas entomobactérias, Photorhabdus luminescens e Xenorhabdus nematophila, produzem uma variedade de metabólicos secundários tóxicos a células eucarióticas. Diante disto, testou-se a toxicidade de metabólitos secretados por P. luminescens e X. nematophila sobre Leishmania amazonensis e Trypanosoma cruzi, in vitro. Os meios condicionados de ambas bactérias mostraram significativo efeito parasiticida de forma concentração e tempo-dependente (L. amazonensis: IC50 P. luminescens = 21,80 μg/mL e X. nematophila = 0,33 mg/mL; T. cruzi: IC50 P. luminescens = 1,0 mg/mL e IC50 X. nematophila = 0,34 mg/mL) e apresentaram alta seletividade ao parasito (L. amazonensis: SIP. luminescens = 3.92 e SIX. nematophila = 19,85; T. cruzi: SIP. luminescens = 7,23 e SIX. nematophila = 14.17 para promastigotas e tripomastigotas, respectivamente). Além disso, os metabolitos estimulam a atividade de macrófagos contra amastigotas por um mecanismo independente de óxido nítrico. Com relação à caracterização dos compostos antiparasitários, sugere-se que moléculas com diferentes características atuem sobre cada parasito. P. luminescens secreta uma molécula leishmanicida de natureza peptídica menor que 3 kDa e uma molécula tripanocida de natureza não proteica, resistente a aquecimento a 100 ºC. X. nematophila produz uma molécula leishmanicida de polaridade inferior à tripanocida, uma vez que a atividade antiparasitária ficou em fases diferentes na extração com metanol. O mecanismo de ação de ambas bactérias sobre promastigotas parece estar relacionado à lesão mitocondrial, uma vez que ambas levaram à despolarização da membrana mitocondrial. X. nematophila, além disso, estimula a produção de ROS pelas formas promastigotas. A seletividade pelo parasito aliada a baixa citotoxicidade tornam estas bactérias promissoras fontes de compostos com potencial terapêutico contra leishmanioses e doença de Chagas. / Drugs currently available for Chagas disease and leishmaniasis have unsatisfactory efficacy, mainly due to parasitic resistance and severe adverse reactions. Two entomobacteria, Photorhabdus luminescens and Xenorhabdus nematophila, produce a variety of secondary metabolites toxic to eukaryotic cells. So, the toxicity of the metabolites secreted by Photorhabdus luminescens and Xenorhabdus nematophila were tested against Trypanosoma cruzi and Leishmania amazonensis. The mean values of both bacteria showed a significant concentration-dependent and time-dependent effect 14.17 (L. amazonensis: IC50P. luminescens = 21.80 μg / mL and IC50X. nematophila = 0.33 mg / mL, T. cruzi: IC50P. luminescens = 1,0 mg/mL and IC50X. nematophila = 0 , 34 mg / mL), and showed a high selectivity to the parasite (L. amazonensis: SIP. luminescens = 3,92 and SIX.nematophila = 19.85, T. cruzi: SIP. luminescens = 7.23 and SIX.nematophila = 14.17 for promastigotes and trypomastigotes, respectively). In addition, cultures stimulate the activity of macrophages against amastigotes by an independent mechanism of nitric oxide. Regarding the characterization of antiparasitic compounds, it is suggested that molecules with different characteristics act on each parasite. P. luminescens secretes a leishmanicidal peptide molecule lesser than 3 kDa and a trypanocidal molecule of non-protein nature, resistant to heating at 100 °C. X. nematophila produces a leishmanicidal molecule of lower polarity than trypanocidal, since antiparasitic activity was at different phases in methanol extraction. The mechanism of action of both bacteria on promastigotes seems to be related to the mitochondrial injury, since both led to the depolarization of the mitochondrial membrane. X. nematophila, furthermore, stimulates the production of ROS by the promastigote. Selectivity by the parasite coupled with low cytotoxicity makes these bacteria promising sources of compounds with therapeutic potential against leishmaniasis or Chagas' disease.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Ciência e Engenharia dos Materiais, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-04-11T04:15:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 344805.pdf: 3407614 bytes, checksum: 1a069297cc3637bae334a74103353b38 (MD5) Previous issue date: 2016 / Este trabalho descreve o desenvolvimento de sistemas nanoestruturados antibacterianos, visando à aplicação na indústria calçadista. Dois diferentes sistemas de nanopartículas a base de copolímeros em bloco foram desenvolvidos pela técnica da nanoprecipitação: nanopartículas de PEO5kDa-b-PLA4,5kDa e de PEO5kDa-b-PLA10kDa, contendo óleo essencial de lavanda, óleo essencial de eucalipto e também uma blenda de óleos. Ambos, os sistemas coloidais apresentaram formas esféricas. Estudos de espalhamento de luz dinâmico mostraram raios hidrodinâmicos de aproximadamente 75 nm para as nanopartículas de PEO5kDa-b-PLA4,5kDa, e de cerca de 25 nm para as nanopartículas de PEO5kDa-b-PLA10kDa. As soluções de nanopartículas de PEO-b-PLA contendo óleo essencial de lavanda e com a mistura de óleos apresentaram valores de eficiência de encapsulação de 70-80%. As nanopartículas também foram caracterizadas por análise de monitoramento de nanopartículas (NTA) e microscopia eletrônica de transmissão (MET). A impregnação das nanopartículas contendo óleos essenciais nos têxteis ocorreu por imersão individual de cada amostra em 1 mL de solução, até total absorção do líquido. A adsorção das nanopartículas nos têxteis mostrou boa estabilidade, visto que a adsorção mostrou-se eficiente mesmo após cerca de 60 dias, mantendo as nanopartículas incorporadas nos têxteis, mesmo com a ação da umidade e temperatura. As nanopartículas contendo a blenda de óleos essenciais, para os dois sistemas estudados, demonstraram atividade antibacteriana contra as bactérias Staphylococcus Aureus, indicando seu potencial como agente antibacteriano. Assim, os resultados obtidos indicam que os sistemas desenvolvidos para os têxteis estudados contendo nanopartículas, oferecem uma nova estratégia para a liberação controlada e atividade antibacteriana de óleos essenciais e apresentam potenciais aplicações na indústria calçadista.<br> / Abstract : This manuscript describes the development of antibacterial nano-structured systems aimed at application in the footwear industry. Two different nanoparticle systems based on block copolymers were developed by the nanoprecipitation technique: nanoparticles of PEO5kDa-b-PLA4,5kDa and PEO5kDa-b-PLA10kDa, containing lavender essential oil, eucalyptus essential oil and a blending of essential oils. Both colloidal systems have spherical shape. Dynamic light scattering studies showed hydrodynamic radius around 75 nm to nanoparticles PEO5kDa-b-PLA4.5kDa and about 25 nm for nanoparticles PEO5kDa-b-PLA10kDa. The solutions of PEO-b-PLA nanoparticles containing lavender essential oil and the blending showed encapsulation efficiency values of 70-80%. The nanoparticles were also characterized by nanoparticle tracking analysis (NTA) and transmission electronic microscopy (MET). The impregnation of nanoparticles containing essential oils in the textiles was performed by individual immersion of each sample in 1 mL of solution, until total absorption of the liquid. The adsorption of the nanoparticles in the textiles showed good stability, since the adsorption was efficient even after about 60 days, keeping the nanoparticles incorporated in the textiles, even with the action of humidity and temperature. Nanoparticles containing the blending of essential oils, for the two studied systems, demonstrated antibacterial activity against Staphylococcus Aureus, indicating its potential as an antibacterial agent. The results indicate that the systems developed for the studied textiles containing nanoparticles offer a new strategy for the controlled release and antibacterial activity of essential oils, suggesting a potential application in the footwear industry.