A contaminação por micoplasma em culturas celulares pode causar consideráveis interferências no metabolismo celular, acarretando em um sério problema para os laboratórios de cultura de células. Com o objetivo de avaliar o efeito da contaminação por micoplasma e do tratamento com o antibiótico removedor de micoplasma (MRA), sobre a medida da atividade de hidrolases lisossômicas, foram cultivadas culturas de fibroblastos de indivíduos normais para realização destas medidas. Para tanto, foram selecionadas enzimas de referência do Laboratório de Erros Inatos do Metabolismo do Serviço de Genética Médica do HCPA sendo elas: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ß-glicuronidase e hexosaminidase (Total e A). Mediu-se a atividade em fibroblastos contaminados com micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados foram comparados com a atividade enzimática em fibroblastos controles (sem contaminação) e fibroblastos controles tratados com MRA. Somente a enzima ß-glicosidade não alterou significativamente sua atividade na presença do micoplasma e nem do MRA. A hexosaminidase Total e a ß-galactosidase sofreram interferência significativa na presença do micoplasma e do MRA. A hexosaminidase A e a arilsulfatase A sofreram interferência significativa somente na presença do MRA. A ß-glicuronidase sofreu alteração de sua atividade somente na presença do micoplasma. Estes resultados mostraram que as enzimas testadas comportaramse de maneira diferente frente à pre sença do MRA e/ou do micoplasma, levandonos a avaliar, em um segundo momento, se estes agentes (micoplasma e antibiótico), poderiam alterar a medida da atividade enzimática em cultura de fibroblastos de pacientes com doenças lisossômicas (DL). Para tanto foi realizada a medida da atividade das enzimas: ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A e a-glicosidase. A atividade destas foram medidas em culturas de fibroblastos contaminadas por micoplasma, antes e após adição do MRA. Os resultados destas atividades foram comparados com as atividades enzimáticas em culturas cultivadas na ausência de contaminação. Somente a ASB alterou significativamente sua atividade tanto na presença do micoplasma quanto do MRA. As demais enzimas não sofreram interferência significativa na presença de ambos. Os resultados obtidos nos permitem concluir que em cultura de fibroblastos, tanto a contaminação por micoplasma quanto o uso de um tipo de antibiótico (MRA), podem ser fator de interferência para medida da atividade de algumas hidrolases lisossômicas. Sendo assim, sugerimos que haja a prevenção da contaminação através da detecção do micoplasma bem como o uso de técnicas assépticas e, para aquelas culturas que não podem ser descartadas, faça-se o uso criterioso de antibióticos capazes de remover o micoplasma, como o analisado neste estudo. Dessa maneira, trabalharíamos com um grau de confiabilidade maior nos resultados laboratoriais. / Contamination of cellular cultures by mycoplasma can cause considerable interference with the cellular metabolism and result in serious problems for cell culture laboratories. To evaluate the effects of mycoplasma contamination and treatment with the mycoplasma removal antibiotic agent (MRA) on the measurement of the activity of lysosomal hydrolyses; fibroblast cultures from normal individuals were cultivated specifically to realize these measurements. To do this, we selected reference enzymes from the Laboratory of Inborn Errors of Metabolism maintained by the Service of Genetic Medicine at the HCPA in Porto Alegre, Brazil as follows: ß-galactosidase, ß-glicosidase, arilsulfatase A, ßglicuronidase and hexosaminidase (Total and A). The activity of the fibroblasts contaminated by mycoplasma was measured before and after the addition of the MRA. The results were compared with the enzymatic activity in controls both of non-contaminated fibroblasts and others treated with MRA. The ß-glycosidase enzyme was the only enzyme that demonstrated no significant activity alterations in the presence of either the mycoplasma or the MRA. All the others showed significant changes - the total hexosaminidase and the ß-galactosidase from the presence of the both the mycoplasma and the MRA ; the hexosaminidase A and the arilsulfatase A from the presence of the MRA only; while the presence of the mycoplasma on its own significantly altered the ß-glicuronidase activity. These results prove that the enzymes we tested behave differently when exposed to MRA and/or the mycoplasma. This raises the question as to whether these agents (mycoplasma and antibiotic) could alter the measurement of enzymatic activity in fibroblast cultures from patients with lysosomatic diseases (DL). To resolve this question, the activities of the ß-galactosidase, arilsulfatase B (ASB), hexosaminidase A and a-glicosidase enzymes were measured in cultures of fibroblasts contaminated with mycoplasma, before and after the addition of MRA. The results obtained were compared with the enzymatic activities of uncontaminated cultures. Significant alteration of activity in the presence of MRA and the mycoplasma was observed only in the ABS. The other enzymes demonstrated no significant alteration in the presence of either. The results obtained permit us to conclude that, in a fibroblast culture, both contamination by mycoplasma and the effects of the use of a type of antibiotic (MRA) can interfere in the results of the measurement of the activity of some lysosomatic hydrolyses. Therefore, we suggest that measures be taken to prevent contamination by the detection of the mycoplasma and the employment of aseptic techniques, and, in those cases where the cultures cannot be disposed of, antibiotics capable of removing the mycoplasma should be utilized as analyzed in this study. In this way, greater confidence in the respective laboratory results can be assured.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-07T14:24:28Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1069443 bytes, checksum: c686cbc03e51bc1d4591f84feedb3d75 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-07T14:24:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1069443 bytes, checksum: c686cbc03e51bc1d4591f84feedb3d75 (MD5) Previous issue date: 2016-07-22 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / O objetivo deste estudo foi investigar o efeito de diferentes doses de bacteriocinas e antibióticos sobre a fermentação ruminal, digestibilidade de fibra e produção de metano in vitro utilizando líquido ruminal de vacas leiteiras alimentadas com dieta à base de silagem de milho (SM) ou silagem de milho/sorgo adicionado com 6 Kg de concentrado proteico (SMC). Amostras foram coletas em diferentes tempos de incubação e foram realizadas análises da concentração de amônia e ácidos orgânicos voláteis, produção de metano e gases totais, digestibilidade in vitro (DIVFDN) e do pH ruminal. Três doses de cada antimicrobiano foram avaliadas: Bovicina HC5 e nisina (Doses A = 360 AU mL -1 ; B = 180 AU mL -1 ; C = controle); Monensina (Doses A = 5 mmol L -1 ; B = 1 mmol L -1 ; C = controle); Virginiamicina (Doses A = 10 mmol L -1 ; B = 5 mmol L -1 ; C = controle). Na dieta à base de silagem de milho, houve efeito significativo da interação (P<0,05) entre dose e inibidor para todas as variáveis testadas, exceto para ácidos orgânicos voláteis. A dose A de bovicina HC5 reduziu (P<0,05) a digestibilidade. Quando se adicionou monensina ao meio, houve redução (P<0,05) na digestibilidade, em relação ao controle. As concentrações de amônia não foram influenciadas (P>0,05) pelas doses de bovicina HC5 e virginiamicina. No entanto, a adição de nisina aumentou as concentrações de amônia (P<0,05), enquanto a monensina reduziu essas concentrações (P<0,05). As concentrações de metano com base na matéria seca degradada (CH 4 MSd) foram (30%) menores quando se adicionou (Dose A) bovicina HC5 (P<0,05). Além disso, a média da dose A de bovicina HC5, foi equivalente à média da dose A de virginiamicina, a qual reduziu CH 4 MSd em 20%. A monensina, não influenciou as concentrações de metano (P>0,05). A adição de bovicina HC5 reduziu (P<0,05) as concentrações de metano com base na matéria seca incubada (CH 4 MSi) em até 24%. No entanto, a média das doses de nisina e monensina não apresentaram diferença significativa (P>0,05) em relação ao controle para essa variável (CH 4 MSi). O pH final do líquido ruminal da vaca alimentada à base de silagem de milho/sorgo adicionado de 6 Kg de concentrado proteico (SMC), foi menor que 6,0. Houve efeito significativo da interação (P<0,05) entre dose e inibidor para todas as variáveis, exceto para pH, metano (CH 4 MSd) e digestibilidade na dieta SMC. As maiores concentrações de amônia na dieta SMC foram observadas quando se adicionou bovicina HC5. Contudo, não houve (P>0,05) diferença de efeito das doses (A e B) de nisina, monensina e virginiamicina na concentração de amônia em relação aos respectivos controles. Independente da dose do inibidor, as maiores concentrações de metano (CH 4 MSd) na dieta SMC foram observadas quando se adicionou monensina. Além disso, independente do inibidor adicionado, o uso de doses altas reduziu as concentrações de metano (CH 4 MSd). Os resultados indicaram que as bacteriocinas testadas apresentaram alguns efeitos positivos sobre a fermentação ruminal, digestibilidade de fibra e produção de metano in vitro na dieta SM. Bovicina HC5 apresentou efeitos similares a virginiamicina na dieta SM, reduzindo a relação acetato:propionato e concentração de CH 4 MSd. A adição de concentrado à dieta diminuiu o pH ruminal e reduziu a influência das bacteriocinas e antibióticos na fermentação in vitro. / The aim of this study was to investigate the effect of different doses of bacteriocins and antibiotics on ruminal fermentation, fiber digestibility and methane production in vitro using rumen fluid of dairy cows fed diets based on corn silage (CS) or silage corn/sorghum added with 6 kg of protein concentrate (CSC). Samples were collected at different incubation times and were carried out analysis of the concentration of ammonia and organic acids, methane production and total gases, in vitro digestibility (IVNDF) and ruminal pH. Three doses of each antimicrobial were evaluated: bovicin HC5 and nisin (Doses = 360 AU ml -1 ; B = 180 AU ml -1 , C = control); Monensin (Doses = 5 mmol l -1 ; B = 1 mmol l -1 , C = control); Virginiamycin (Doses A = 10 mmol l -1 , B = 5 mmol l -1 , C = control). In the diet based on corn silage, there was significant interaction (P <0.05) between dose and inhibitor for all variables tested, except for organic acids. The dose A of bovicin HC5 reduced (P<0.05) digestibility, similar to the doses (A and B) of monensin and virginiamycin. When monensin was added to the medium digestibility decreased (P<0.05) compared to the control. Ammonia concentrations were not affected (P>0.05) by doses of bovicin HC5 and virginiamycin. However, the addition of nisin increased concentrations (P<0.05), while monensin reduced ammonia during in vitro incubation (P<0.05). The methane concentration based on degraded dry matter (CH4MSd) were 30% lower when bovicin HC5 (Dose A) was added (P<0.05). Furthermore, the average dose of bovicin HC5 was equivalent to the mean dose of the virginiamycin, which reduced CH4MSd by 20%. The monensin did not affect methane concentrations (P>0.05). The addition of bovicin HC5 reduced (P<0.05) methane concentrations based on dry matter incubated (CH4MSi) up to 24%. However, the average doses of nisin and monensin showed no significant difference (P>0.05) in this variable compared to the control (CH4MSi). The final pH of the rumen fluid from cows fed silage based corn/sorghum added 6 kg of protein concentrate (SMC) was less than 6.0. There was a significant interaction (P<0.05) between dose and inhibitor for all variables, except for pH, methane (CH 4 MSd) and digestibility in the diet SMC. The highest ammonia concentrations in the diet SMC were observed when bovicin HC5 was added. However, no dose (A and B) of nisin, virginiamycin and monensin affected ammonia concentrations (P>0.05) compared to their respective controls. Regardless of the inhibitor dose, higher concentrations of methane (CH 4 MSd) in SMC diet were observed when monensin was added. Furthermore, independent of the inhibitor added, higher doses always decreased the concentrations of methane (CH 4 MSd). However, only nisin (Doses A and B) decreased the acetate:propionate ratio (P<0.05) in diet SMC,and no significant differences (P>0.05) were observed between doses of other antimicrobials and control and, among the tested inhibitors. Nevertheless, the relative values (A:P) were higher when monensin was added. These results indicated that the tested bacteriocins showed some positive effects on ruminal fermentation, fiber digestibility and methane production in vitro in CS diet. Bovicin HC5 showed similar effects to virginiamycin in the CS diet, reducing the acetate:propionate ratio and concentration of CH 4 MSd. The addition of concentrate to the diet decreased ruminal pH and reduced influence of bacteriocins and antibiotics on the in vitro fermentation.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2016-09-02T18:10:15Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 577340 bytes, checksum: 019f4d91340efac9861eed0ddbc447f1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T18:10:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 577340 bytes, checksum: 019f4d91340efac9861eed0ddbc447f1 (MD5) Previous issue date: 2007-12-21 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / Os determinantes de resistência aos antimicrobianos vancomicina e oxacilina foram investigados em 264 bactérias do gênero Staphylococcus originados de salame fermentado, de bovinos acometidos com mastite e de casos clínicos humanos. Todos os isolados foram sensíveis ao antibiótico vancomicina e não apresentaram o gene vanA. Dos 57 isolados de salame fermentado, houve um predomínio de CNS, estafilococos coagulase negativos , (89,5%) sobre Staphylococcus aureus (10,5%) e apenas um isolado apresentou-se resistente à oxacilina pelo método de difusão em disco e seu mecanismo de resistência foi proveniente da atividade da -lactamase de expectro extendido). Noventa e cinco isolados de mastite bovina foram submetidos ao teste de atividade da enzima coagulase, predominando a espécie de S. aureus (68,5%), sobre os CNS (32,5%) e ao teste de sensibilidade in vitro, obtendo-se 14 resistentes a oxacilina, sendo dois isolados apresentando o gene mecA e outros 11 atividade de ESBL, predominando este mecanismo de resistência. Dos espécimes clínicos, 52,7% foram CNS e 47,3% S. aureus constituindo 112 isolados, sendo 103 resistentes à oxacilina. Destes, 67 possuíam o gene mecA, 71 apresentaram atividade de ESBL e 40 isolados ambos os mecanismos de resistência. Entre os da espécie S. aureus, predominou a presença do gene mecA como o provável fator de resistência, enquanto nos isolados de CNS, a atividade de ESBL foi mais significativa como possível determinante de resistência. Cinco isolados de origem humana e um de leite mastítico não tiveram seu mecanismo de resistência elucidado, sugerindo ser linhagens MODSA (modified penicillin-binding protein S. aureus) ou outro mecanismo de resistência. Os resultados demonstraram a maior prevalência de resistência a antimicrobianos entre os isolados relacionados a espécimes clínicos humanos seguidos daqueles de vacas mastíticas, bem como a diversidade em possíveis mecanismos de resistência. / The determinants of antimicrobial resistance oxacillin and vancomycin were investigated on 264 Staphylococcus bacteria of the genus originated from fermented sausage, ill with bovine mastitis cases in humans. All isolates were sensitive to the antibiotic vancomycin and not had the vanA gene. Of the 57 isolates of fermented sausage, there was a predominance of CNS, coagulase negative staphylococci, (89.5%) on Staphylococcus aureus (10.5%) and only one isolated presented itself resistant to oxacillin by the disk diffusion method, and its mechanism of resistance was coming from the activity of the enzyme ESBL ( -lactamase-spectrum extended). Ninety-five isolates of bovine mastitis were submitted to the test of coagulase activity of the enzyme, most kinds of S. Aureus (68.5%) on the CNS (32.5%) and the test sensitivity in vitro, obtaining 14 resistant to oxacillin and two isolated presenting the mecA gene and 11 other activity of ESBL, mainly this mechanism of resistance. Two clinical specimens, were 52.7% and 47.3% CNS S. Aureus isolates constituting 112, and 103 resistant to oxacillin. Of these, 67 had the mecA gene, 71 showed activity of ESBL and 40 isolates both mechanisms of resistance. Among the species S. Aureus, the predominant presence of the mecA gene as the likely source of resistance, while in isolated from CNS, the activity of ESBL was more significant as a possible determinant of resistance. Five isolates of human origin and a milk mastítico not have its mechanism of resistance clear, suggesting strains be MODSA (modified penicillin-binding protein S. aureus) or other mechanism of resistance. The results showed a higher prevalence of resistance to antimicrobial among isolates related to human clinical specimens followed those of cows mastíticas, and the diversity in possible mechanisms of resistance.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-06-25. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-11T03:25:44Z : No. of bitstreams: 1 Publico-10785.pdf: 1454333 bytes, checksum: 1773b999177d308849498e6df3d6f921 (MD5) / Objetivo: O estudo procurou determinar os fatores de risco independentes para o surgimento de pneumonia hospitalar por Pseudomonas aeruginosa resistente a carbapenem em uma UTI clinico-cirurgica. Foram tambem estudados os fatores relacionados a evolucao desfavoravel nesses episodios de pneumonia nosocomial tratados com polimixina B e os fatores de risco e evolucao dos episodios causados por cepas portadoras da metalo-ƒÀ-lactamase SPM-1. Metodo: O estudo foi realizado no Hospital Sao Paulo, hospital terciario de ensino da Universidade Federal de Sao Paulo. No estudo de fatores de risco para pneumonia hospitalar por Pseudomonas aeruginosa, foram avaliados pacientes internados na UTI da Anestesiologia, no periodo de 2002 a 2005, atraves de um estudo tipo caso-casocontrole. Pacientes com episodios de pneumonia com cepas resistentes a imipenem e pacientes com pneumonia por cepas sensiveis a imipenem foram designados como casos resistentes (estudos Ia) e sensiveis (estudo Ib), respectivamente. Os controles foram pacientes da mesma unidade, internados no mesmo periodo. O segundo estudo, sobre evolucao clinica em pacientes tratados com polimixina B, analisou pacientes internados em UTIs do hospital, no periodo de 1997 a 2005, atraves de um estudo caso-controle aninhado dentro dessa coorte. Os casos foram pacientes com evolucao desfavoravel, e os controles foram pacientes com evolucao favoravel. O terceiro estudo utilizou tambem a metodologia caso-controle aninhado nessa mesma coorte de pacientes. Os casos eram pacientes com pneumonia por cepas de Pseudomonas aeruginosa resistente a carbapenem e portadora da metaloenzima SPM-1, e os controles eram pacientes com cepas sem a presenca dessa metaloenzima. Resultados: Nos estudos Ia e Ib, 58 casos resistentes, 47 casos sensiveis e 237 controles foram avaliados. Os fatores independentemente relacionados ao surgimento de pneumonia no estudo Ia foram: tempo de hospitalizacao(OR 1,19 IC95%: 1,12-1,26, p< 0,001); escore APACHE II( OR 1,11 IC95%: 1,01-1,22, p=0,03); sexo masculino(OR 8,01 IC95%: 1,66-38,51, p=0,009); uso de hemodialise(OR 6,85 IC95%: 1,33-35,2, p=0,02); uso de corticoide (OR 13,18 IC95%:3,80-45,64,p<0,001); uso de piperacilina-tazobactam(OR 14,31 IC95%:1,02- 200,16, p=0,04) e uso de cefalosporinas de 3a geracao(OR 7,45 IC95%: 1,80-30,86, p=0,006). Os fatores independentemente relacionados ao surgimento de pneumonia nosocomial por Pseudomonas aeruginosa sensivel a carbapenem ( estudo Ib) foram: tempo de internacao na UTI( OR 1,02 IC95%: 1,01-1,04, p=0,004) e uso de corticoide(OR 12,32 IC95%: 5,81-26,10, p< 0,001). O unico fator independentemente relacionado ao surgimento de pneumonia nos dois estudos foi o uso de corticoide. Portanto, a razao de chances real do uso de corticoide no surgimento de episodios de pneumonia por Pseudomonas aeruginosa resistente a carbapenem foi de 1,06 (valor da OR do estudo Ia dividido pela OR do estudo Ib). Setenta e quatro pacientes com pneumonia hospitalar tratados com polimixina B foram avaliados quanto a evolucao. A mortalidade atribuivel a pneumonia causada por Pseudomonas aeruginosa resistente a carbapenem foi de 29,8%. Os fatores relacionados a evolucao desfavoravel nesses episodios de pneumonia foram: presenca de choque septico (OR 4,81 IC95%: 1,42-16,25, p=0,01) e presenca de sindrome do desconforto respiratorio agudo ( OR 11,29 IC95%: 2,64-48,22, p=0,001). Vinte e nove desses 74 pacientes foram analisados quanto a presenca de metalo-ƒÀ- lactamases. Apenas cinco pacientes apresentavam cepas produtoras de SPM-1. A presenca de SPM-1 nao teve impacto na evolucao desses episodios (p=0,67). O tratamento combinado com polimixina B e imipenem, em pacientes com Pseudomonas aeruginosa sem a presenca da SPM-1, nao teve impacto positivo na evolucao clinica (p=0,67), nem na sobrevida desses pacientes. Nenhuma variavel se mostrou independentemente associada ao surgimento de episodios de pneumonia por cepas portadoras de SPM-1. Apenas o sexo feminino apresentou uma tendencia na analise univariada (OR 9,71; IC95%: 0,92-103,04; p=0,05). Tambem nao houve diferenca nas variaveis relacionadas a evolucao clinica entre os pacientes com cepas de Pseudomonas aeruginosa produtora de SPM-1. Conclusoes: Em nosso estudo, o uso de corticoide foi a unica variavel independentemente relacionada ao surgimento de pneumonia nosocomial por Pseudomonas aeruginosa resistente a carbapenem. A presenca de choque septico e da sindrome do desconforto respiratorio agudo foram fatores relacionados a evolucao desfavoravel nesses episodios. Nao encontramos variaveis relacionadas a presenca da metalo-enzima SPM-1. A presenca dessa enzima nao teve impacto na evolucao clinica nesse tipo de infeccao. / Objective: The study sought to determine the risk factors independently associated to nosocomial pneumonia due to carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa in a medical-surgical ICU. The factors associated to unfavorable outcome on those patients who were treated with polymyxin B were evaluated as well as the outcome in episodes caused by strains harboring the metallo-ƒÀ- lactamase SPM-1. Methods: The study was undertaken at Hospital Sao Paulo, a university-affiliated hospital. We evaluated patients admitted to Anestesiology ICU through a case-case-control study, between 2002 and 2005. Patients with nosocomial pneumonia caused by resistant and susceptible strains were designed as resistant cases (study 1) and susceptible cases ( study 2), respectively. The controls were patients admitted to the same unit in the same period. The second study addressed the outcome of patients admitted to ICUs with nosocomial pneumonia due to carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa who were treated with polymyxin B. Patients admitted to the ICUs between 1997-2005 were enrolled for the study. A nested case-control was undertaken. Cases were patients with unfavorable outcome and controls were patients with favorable outcome. The third study was undertaken through a nested case-control methodology as well. Cases were patients with nosocomial pneumonia caused by carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa harboring the metalloenzyme SPM-1, and controls were patients without SPM-1. Results: 58 resistant cases, 47 susceptible cases and 237 controls were evaluated.The risk factors independently associated to nosocomial pneumonia in study 1 were: duration of hospitalization( OR 1,19 CI95%: 1,12-1,26, p< 0,001); APACHE II score(OR 1,11 CI95%: 1,01-1,22, p=0,03); male sex(OR 8,01 CI95%: 1,66-38,51, p=0,009); receipt of hemodyalisis(OR 6,85 CI95%:1,33-35,2, p=0,02); receipt of corticosteroid (OR 13,18 CI95%:3,80-45,64, p< 0,001); receipt of piperacillin-tazobactam ( OR 14,31 CI95%:1,02-200,16, p=0,04) and receipt of 3rd-generation cephalosporins( OR 7,45 CI95%: 1,80-30,86, p=0,006). The risk factors independently associated to nosocomial pneumonia caused by carbapenem-susceptible Pseudomonas aeruginosa( study 2) were: duration of ICU stay(OR 1,02 CI95%: 1,01-1,04, p= 0,004) and receipt of corticosteroid( OR 12,32 CI95%: 5,81-26,10, p< 0,001). The sole independently risk factor that was present in the two studies was the corticosteroid use. Thus, the real OR for the variable found in the study was 1,06 ( OR of study 1 divided by OR of study 2). 74 patients with nosocomial pneumonia treated with polymyxin B were evaluated. The factors associated to a unfavorable outcome were: presence of septic shock(OR 4,81 CI95%:1,42-16,25, p= 0,01) and presence of acute respiratory distress syndrome( OR 11,29 CI95%:2,64-48,22, p=0,001). 29 strains were evaluated concerning the presence of metallo-â- lactamases. Only five strains were positive for SPM-1. The presence of SPM-1 didn’t have impact on the outcome of these episodes (p=0,67). The combined treatment with polymyxin B and imipenem in patients without SPM-1 did not have positive impact on the outcome (p=0,67). None variable was independently associated to nosocomial pneumonia caused by SPM-1-positive strains. Only female sex showed a trend in univariate analysis (OR 9,71; CI95%: 0,92-103,04; p=0,05). There was no difference in outcome in episodes caused by Pseudomonas aeruginosa strains harboring SPM-1 compared to strains without SPM-1. Conclusions: The receipt of corticosteroid was the sole independently risk factor associated to nosocomial pneumonia caused by carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa. The presence of septic shock and acute respiratory distress syndrome (ARDS) were the only factors related to unfavorable outcome. None variable was associated to the presence of metallo-â-lactamase SPM-1. In addition, the presence of this enzyme did not have impact on clinical outcome. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

O presente trabalho objetiva o desenvolvimento de uma formulação racional e justificável, bem como o estudo de uma tecnologia adequada para a preparação da Cefalexina monoidratada em Suspensão oral. Objetiva, ainda, a avaliação da biodisponibilidade, toxicidade, estabilidade físico-química e determinação do tempo de vida ail do principio ativo na forma farmaceutica proposta.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:09:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_5995_.pdf: 4287118 bytes, checksum: bf88112162398ad06e44a8696de5388a (MD5) Previous issue date: 2012-08-03 / Existem interessantes perspectivas a partir da utilização da urina humana como fertilizante em uso agrícola, principalmente em países em desenvolvimento devido às altas concentrações de nutrientes, como nitrogênio, fósforo e potássio. No entanto, a urina humana é a principal via de excreção de fármacos inalterados e seus metabólitos fazendo-se necessária a remoção de resíduos farmacêuticos para evitar em longo prazo riscos ao meio ambiente. O presente trabalho objetivou desenvolver e validar um método para quantificação simultânea de antibióticos da classe das fluoroquinolonas (FQs): ofloxacina (OFLO), norfloxacina (NOR) e ciprofloxacina (CIPRO) em urina humana, avaliar o comportamento desses antibióticos na urina durante tratamento para reciclagem de nutrientes via estocagem e evaporação e analisar o desempenho de evaporadores solares para redução de volume da urina humana. O método desenvolvido descreve uma metodologia analítica por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um detector de fluorescência (CLAE-DF) sem recorrer à etapa de clean-up que geralmente exige o uso de grandes quantidades de solventes orgânicos e outros procedimentos, como extração em fase sólida. O método demonstrou ser seletivo, com linearidade de r > 0,99, sensível, com recuperação de 80% a 107% e adequado para análises de rotina (baixo custo, simples e utilização de pequeno volume de solventes) para abordagens ecológicas. Esse método foi aplicado na avaliação do comportamento das três FQs na urina humana durante o tratamento de estocagem e evaporação. A urina utilizada para os dois tratamentos foi coletada apenas de pessoas do sexo masculino, saudáveis e sem utilização de medicamentos. Esta foi dividida em dois tipos, urina normal (sem acidificação) e urina acidificada. Durante os dois tratamentos também foram avaliados o comportamento dos nutrientes da urina humana e análise microbiológica na urina normal durante a estocagem. Para as análises das FQs na estocagem foi utilizada apenas urina acidificada e para a evaporação foram utilizados os dois tipos. A estocagem da urina acidificada não foi capaz de reduzir as concentrações destes fármacos em quantidades significativas, considerando-se o limite de detecção do método cromatográfico empregado (1,0 µg l-1). Consequentemente, o monitoramento da presença estes fármacos na urina humana a ser utilizada na agricultura deve ser implementado. Nos testes microbiológicos realizados com a urina normal constatou-se que após um período de 15 dias e em temperatura ambiente, as densidades de coliformes totais e E. coli mostraram-se nulas. Os ensaios de evaporação evidenciaram uma maior resistência à degradação da OFLO e uma alta degradabilidade da NOR e da CIPRO sob as diferentes condições de pH e temperatura. A acidificação da urina com a quantidade de ácido utilizada aumentou a resistência à degradação das NOR e CIPRO sob as três temperaturas testadas, cujas velocidades e as eficiências de degradação mostraram-se bastante reduzidas com relação aos testes com urina normal. Conclui-se que a acidificação na quantidade de ácido sulfúrico utilizada não foi um método eficaz de conservação de nitrogênio e para a degradação do antibiótico OFLO na urina sob as condições de evaporação testadas. Para avaliação da evaporação nos dois processos utilizando energia solar foi utilizada apenas urina acidificada. Os resultados mostraram que é possível reduzir o volume utilizando-se ambas as técnicas. Quando se relaciona as taxas de evaporação e a eficiência energética, o concentrador solar parabólico teve melhor desempenho em relação ao evaporador de bandeja, apresentando um tempo de residência menor, temperaturas mais elevadas e maiores taxas de degradação de FQs.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro Tecnológico, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Elétrica, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2017-01-31T03:11:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 343682.pdf: 2819403 bytes, checksum: 248286588753491207623482e77331f5 (MD5) Previous issue date: 2016 / Neste trabalho estudou-se o metabolismo do Mycobacterium tuberculosis com ferramentas computacionais. Compreender a fisiologia e o metabolismo dos organismos patogênicos é de primordial importância na pesquisa e desenvolvimento de antibióticos, pois a compreensão do mecanismo de ação de uma nova droga passa pela compreensão de como a exposição do organismo ao antibiótico afeta e altera o seu metabolismo. Esse conhecimento se torna ainda mais importante em situações em que o organismo desenvolve resistência aos compostos. É sabido que o Mycobacterium tuberculosis possui um grande poder de adaptação e capacidade de desenvolver resistência a muitos dos compostos atualmente utilizados para o tratamento da tuberculose. As linhagens resistentes adaptam-se e desenvolvem a capacidade de sobreviver mesmo em presença de um composto a que antes eram susceptíveis. A sobrevivência do organismo está associada diretamente com a capacidade de manter o seu metabolismo em um estado funcional após exposto ao composto bactericida. A sobrevivência das cepas resistentes, portanto, depende de um uso diferenciado dos caminhos metabólicos. Estudar o metabolismo permite compreender a gama de variações metabólicas executadas pelo organismo para manter a sua sobrevivência. O estudo computacional do metabolismo em escala genômica apresenta entretanto diversos desafios. Três principais problemas são (1) o reduzido número de amostras em grande parte dos experimentos de bancada, devido ao alto custo da implementação e complexidade dos métodos de obtenção de dados (2) a inerente alta dimensionalidade dos dados e (3) como incorporar conhecimento biológico existente em modelos computacionais. Este trabalho busca soluções para contornar esses três problemas, com um estudo sobre geração de dados sintéticos, técnicas de estimação, e propostas de modelos com dimensionalidade reduzida e uso de informação biológica a priori em modelos computacionais. Os resultados mostram que a aplicação de técnicas computacionais para estudo de metabolismo de organismos expostos à ação de antibióticos é de fundamental importância na identificação de caminhos metabólicos de sobrevivência, além de produzir uma maior compreensão do mecanismo de ação de compostos antibióticos sobre um organismo patogênico.<br> / Abstract : In this work the metabolism of the Mycobacterium tuberculosis (Mtb) was studied with computational biology tools. To understand the physiology and metabolism of pathogenic organisms is of paramount importance in antibiotics R & D, because in order to understand the mechanism of action of a new drug it is necessary to understand how exposing an organism to the antibiotics affects and alters its metabolism. Even more important is this knowledge in situations when the organism may develop resistance to the compound. It is known that the Mycobacterium tuberculosis is highly adaptable and is able to develop resistance to a great number of the anti-tubercular compounds used for tuberculosis (TB) treatment today. The resistant strains adapt and develop the ability to survive even in the presence of a bactericidal compound for which they were once susceptible. The survival of the organism is directly linked to its ability to keep metabolism in a functional state after drug exposure. Therefore, the survival of Mtb resistant strains hinges on being able to use its metabolic mechanisms in a different way. By studying metabolism one may be able to understand the large spectrum of metabolic variations performed by the organism in order to remain alive. A computational study of metabolism in a genomic-scale however presents a number of challenges. Three main difficulties that arise are: (1) the small number of samples available in the majority of wetlab experiments, due to high cost and complexity of methods used for experimental data gathering, (2) the high dimensionality of the data and (3) how to incorporate available biological knowledge in computational models. This work has searched for solutions to overcome these three problems with a study on synthetic data generation, estimation tools, models with reduced dimensionality, and with inclusion of a priori biological knowledge. The results show that the use of computational techniques to study the metabolism of organisms exposed to antibiotics is of fundamental importance for identification of metabolic pathways used for survival and also for producing a better understanding of the mechanism of action of antibiotic compounds on a pathogenic organism.

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-07-22Bitstream added on 2015-04-09T12:48:12Z : No. of bitstreams: 1 000810644_20160915.pdf: 208157 bytes, checksum: c6656b5e8df5507808d5f01c0f4cd094 (MD5) Bitstreams deleted on 2016-09-16T12:08:14Z: 000810644_20160915.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-09-16T12:08:46Z : No. of bitstreams: 1 000810644.pdf: 2074882 bytes, checksum: bbd737f347bffa395a2b3202247cb23b (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / A leishmaniose é considerada uma das 14 doenças negligenciadas segundo a Organização Mundial da Saúde, afetando cerca de 500 milhões de pessoas que vivem nas zonas subtropicais e tropicais. É causada pela infecção do hospedeiro por protozoários da família Leishmania, podendo ser do tipo cutânea, muco-cutânea e visceral. As atuais formas de tratamento da doença são através de pentavalentes antimoniais e drogas como Anfotericina B, porém ambos causam sérios efeitos colaterais, e alguns estudos sugerem que o parasita vem apresentando resistência. Neste trabalho investigamos peptídeos antimicrobianos com conhecida ação leishmanicida buscando parâmetros estruturais que possam ser responsáveis pela eficiência contra Leishmania. Sete peptídeos foram escolhidos, sendo cinco extraídos de anfíbios: Bombinin H2 e H4 da espécie Bombina variegata, Temporin A e B da espécie Rana temporária, e o Phylloseptin-1 da espécie Phyllomedusa azurea. E dois peptídeos provenientes de vespa, Decoralin com e sem o terminal-C amidado, sendo que somente a forma sem amidação é natural e ocorre na vespa solitária Ouremenes decoratus. Os parâmetros estruturais dos peptídeos escolhidos foram pesquisados através da técnica computacional de Dinâmica Molecular, em uma caixa de solvente contendo TFE/água na proporção 30/70 (v:v). Foram encontrados alguns fatores que podem estar relacionados à maior eficiência de alguns peptídeos, dentre eles o comprimento e estabilidade da hélice-α, o volume dos peptídeos, a anfipaticidade, e a solvatação da cadeia principal e dos terminais. Baseados nessas características 14 novos peptídeos foram desenhados buscando reproduzir e aperfeiçoar as caracteríticas estruturais daqueles peptídeos de melhor eficiência biológica. Esses peptídeos foram estudados por Dinâmica Molecular seguindo as mesmas condições dos peptídeos de referência. Dentre esses novos peptídeos alguns apresentaram ... / Leishmaniasis is considered one among 14 neglected diseases according to the World Health Organization, affecting about 500 million people that live in tropical and subtropical areas. The disease is caused by the infection of the host by a protozoan of the Leishmania family, and could be cutaneous, mucocutaneous or visceral. The current forms of treatment involve pentavalent antimonial drugs and others as amphotericin B; however, both cause serious side effects and some studies suggest that the parasite has already shown resistance. In this work, we investigate antimicrobial peptides with known leishmanicidal activity seeking structural parameters that could be correlated to their effectiveness against Leishmania. Seven peptides were chosen, five extracted from amphibian skins and secretions: Bombinin H2 and H4 from Bombina variegata, Temporin A and B from Rana temporaria, and Phylloseptin-1 from Phyllomedusa azurea. In addition, two peptides Decoralin with and without an amidated C-terminal, the natural form being the carboxylated, and occurring in the venom of the solitary wasp Ouremenes decoratus. The structural parameters of selected peptides were investigated by Molecular Dynamics, in a box containing the solvent TFE/water at 30/70 (v:v) concentration. Some features were found that may be related to the greater efficiency of these peptides. They include the length and stability of the α-helix, the volume of the peptides, the amphipathicity, and solvation of the backbone and terminals. Based on these features, 13 new peptides were designed to reproduce and enhance the structural features of those peptides with increased biological efficiency. The new peptides were studied by Molecular Dynamics following the same procedures used for the reference peptides. Among these new peptides some show optimized structural characteristics and will have their leishmanicidal activity determined

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-08-29Bitstream added on 2015-04-09T12:48:12Z : No. of bitstreams: 1 000810624_20170829.pdf: 165327 bytes, checksum: 7335e36c8ac7360ff615beba6af27f84 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-09-01T13:14:02Z: 000810624_20170829.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-09-01T13:15:01Z : No. of bitstreams: 1 000810624.pdf: 2405456 bytes, checksum: b0b79d0ba3d3f1f429b64fb272de2c61 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Muitos peptídeos extraídos de plantas e secreções de animais exibem um amplo espectro de atividade antimicrobiana contra bactérias gram-positivas, negativas, fungos e parasitas. Devido a essa característica e ao crescente aumento da resistência dos microrganismos patogênicos às formas de tratamento convencionais, especula-se a utilização destes peptídeos como possíveis novos fármacos. Por isso, várias técnicas experimentais e teóricas que fazem uso de sistemas miméticos do ambiente membranar têm sido utilizadas para se estudar os mecanismos de ação desta classe de peptídeos. No presente trabalho, utilizam-se simulações por Dinâmica Molecular com o intuito de investigar a influência de algumas características de interação peptídeo-peptídeo e peptídeo-membrana sobre a eficiência biológica de Protonectinas e Jeleínas. Protonectina e Protonectina 1-6 são peptídeos antimicrobianos, o primeiro apresenta atividade hemolítica, de degranulação de mastócitos e quimiotática, enquanto o segundo apresenta somente a atividade quimiotática. Dados experimentais indicam que a associação destes dois peptídeos (proporção 1:1) gera uma forma de estrutura supramolecular agregada e também aumenta as atividades hemolíticas e de degranulação de mastócitos, enquanto a atividade quimiotática decresce acentuadamente, ou seja, em associação eles apresentam um comportamento mais acentuado de interação com membranas. Tendo em vista estes resultados, especulam-se, neste trabalho, quais as interações entre Protonectina/Protonectina 1-6 (mistura) que estariam associadas à formação de tal estrutura agregada e quais as implicações desta estrutura no mecanismo de interação com membrana. Os resultados das simulações em água e micela de SDS para estes peptídeos indicam que há a tendência de agregação entre Protonectinas puras e Protonectina/Protonectina 1-6, e que esta ocorre por meio de ligações por ... / Many peptides extracted from plants and animal secretions exhibit a broad spectrum of antimicrobial activity against bacteria gram-negative, gram-positive, fungi and parasites. Due this characteristic and the increasing resistance of pathogenic microorganisms to conventional forms of treatment, it is speculated the use of these peptides as potential new drugs. Therefore, various experimental and theoretical techniques that make use of membrane mimetic systems have been used to study the mechanisms of action of this class of peptides. In this work, we use molecular dynamics simulations to understand the influence of some characteristics of interaction peptide-peptide and peptide-membrane on biological efficiency of the Protonectins and Jelleines. Protonectin and Protonectin 1-6 are antimicrobial peptides, the first shows hemolytic activity, mast cell degranulation and chemotaxis, while the second presents chemotactic activity. Experimental data indicate that the association between those two peptides (1:1) generates a supramolecular aggregate structure and also increases the hemolytic and mast cell degranulation activities, while the chemotactic activity decreases, i.e., in combination they exhibit accentuated behavior of the interaction with membranes. Based on these results in this work, we speculate, which the interactions between Protonectin/Protonectin 1-6 (mixture) that would be associated with the formation of aggregate structure and the implications of this structure in the interaction with membrane mechanism. The results of the simulations in water and SDS micelle for these peptides indicate that there is a tendency of aggregation between pure Protonectins and Protonectin/Protonectin 1-6, and that this occurs through intermittent hydrogen bonds. Furthermore, it was found that the electrostatic interactions between the mixture of peptides is less favorable than for the pure Protonectins, influencing the distance between the ...

Dissertação (mestrado —Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2012. / Submitted by Albânia Cézar de Melo (albania@bce.unb.br) on 2012-05-22T13:20:12Z No. of bitstreams: 1 2012_FabianoJoseQueirozCosta.pdf: 1711681 bytes, checksum: 0d9c0dec152fb69bb8583c87ffdf65ac (MD5) / Approved for entry into archive by Marília Freitas(marilia@bce.unb.br) on 2012-05-24T12:01:50Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_FabianoJoseQueirozCosta.pdf: 1711681 bytes, checksum: 0d9c0dec152fb69bb8583c87ffdf65ac (MD5) / Made available in DSpace on 2012-05-24T12:01:50Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_FabianoJoseQueirozCosta.pdf: 1711681 bytes, checksum: 0d9c0dec152fb69bb8583c87ffdf65ac (MD5) / Desde os primórdios da terapêutica antimicrobiana têm-se relatos de microrganismos resistentes às drogas antimicrobianas clássicas. Com o seu uso indiscriminado, cada vez mais vêm surgindo microrganismos resistentes aos antimicrobianos disponíveis. Por mais dinâmicas que sejam as indústrias farmacêuticas na busca por novas drogas, elas não conseguem acompanhar o espantoso fenômeno da multirresistência apresentada por muitos microrganismos. Esta constante mudança nos perfis de sensibilidade dos microrganismos conduz a uma incessante busca por novas drogas antimicrobianas, onde os peptídeos antimicrobianos se destacam como agentes promissores. As secreções cutâneas dos anfíbios são uma riquíssima fonte de peptídeos antimicrobianos. O presente estudo avaliou a atividade biológica de dois análogos sintéticos da Hylina a1, um peptídeo antimicrobiano isolado da espécie de anuro Hypsiboas albopunctatus. Os dois análogos, denominados Ha1_1996 e Ha1_1883, foram produzidos por síntese química manual pela técnica Fmoc, purificados por meio de cromatografia líquida de alta eficiência em fase reversa (HPLC-RP) e sua homogeneidade, bem com, a correção dos produtos produzidos avaliadas por espectrometria de massas tipo MALDI-TOF. Após confirmação da pureza, os análogos foram utilizados em ensaios in vitro com o objetivo de se avaliar suas atividades antibacterianas, fungicidas, micobactericidas e hemolíticas. Os dois análogos apresentaram atividade antimicrobiana contra cepas de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas, inclusive frente à cepas de Staphylococcus aureus meticilina-resistente (MRSA) e Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). Também apresentaram atividade fungicida contra três espécies de Candida, além de atividade micobactericida contra duas cepas de Mycobacterium tuberculosis. Apesar da pronunciada atividade hemolítica frente a eritrócitos humanos (tipo O+) e ao efeito citolítico observado sobre leucócitos humanos, deve ser levado em conta que refinamentos na estrutura desses peptídeos podem levar ao surgimento de análogos com propridedades antimicrobianas melhoradas ou mantidas e perda ou redução da atividade hemolítica. Espera-se com isto que os peptídeos antimicrobianos se constituam em novas armas de um arsenal medicamentoso capaz de combater microrganismos multirresistentes. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Since the beginning of antimicrobial therapy reports of microorganisms resistant to conventional antimicrobial drugs have been described. Due to its indiscriminate use, more resistant microorganisms to the available antimicrobials are emerging. For more dynamic than the pharmaceutical companies are in search for new drugs, they can not keep up the amazing phenomenon of multidrug resistance shown by many microorganisms. This constant change in the sensitivity profiles of microorganisms leads to an endless search for new antimicrobial drugs, where antimicrobial peptides stand out as promising agents. The amphibians’ skin secretions are a rich source of antimicrobial peptides. The present study characterized biologically two synthetic analogues of Hylin a1, an antimicrobial peptide isolated from the anuran species Hypsiboas albopunctatus. Both analogs, named Ha1_1996 and Ha1_1883, were produced by manual chemical synthesis by Fmoc technique, purified by reversed-phase high-performance liquid chromatography (HPLC-RP) and purity assessment, as well as, the quality of the synthetic peptides produced were evaluated by MALDI-TOF mass spectrometry. After confirmation of their purity, these two analogs were tested on in vitro assays to evaluate their antibacterial, fungicidal, hemolytic and mycobactericidal activities. Both analogues showed antimicrobial activity against Gram-positive and Gram-negative bacterial strains, including methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) and Klebsiella pneumoniae carbapenemase (KPC). They also showed antifungal activity against three species of Candida, and mycobactericidal activity against two strains of Mycobacterium tuberculosis. Despite pronounced hemolytic activity against human erythrocytes (type O+ ) and cytolytic effects on human leukocytes, additional refinements in their structures can lead to the development of analogues with antimicrobial properties improved or maintained and loss or reduction of hemolytic activity. It is thus expected that antimicrobial peptides become a new weapons arsenal able to combat the multiresistant microorganisms.