Por representar a mais importante arbovirose em nível mundial, as infecções causadas pelos vírus da dengue são de grande importância em nosso país, apresentando uma ampla variedade de sintomas clínicos que vão desde infecção assintomática até formas mais graves da doença. O título de anticorpos neutralizantes produzidos frente à infecção por dengue parece ser determinante na forma de apresentação da doença no paciente. Atualmente, a forma com que o teste de neutralização é realizado demanda tempo para sua realização. O objetivo deste trabalho foi padronizar um ensaio de neutralização viral por RT-PCR em tempo real em cepas virais dos quatro sorotipos dengue para, posteriormente, ser empregada na detecção rápida e em grande escala de anticorpos em soro de pacientes e de candidatos vacinais. Para isso, foram construídas curvas padrão, para cada sorotipo viral, por meio da transcrição in vitro do RNA viral. O ensaio de neutralização padronizado nesse estudo reduziu o número de dias de detecção da neutralização em 48 horas quando comparada com a técnica de neutralização tradicional (PRNT), além de utilizar técnicas moleculares sensíveis e específicas para detecção como a RT-PCR em tempo real que garantem maior aplicabilidade do teste. / Because Dengue virus is the most important arboviral disease worldwide, infections caused by this pathogen are of great importance in Brazil, producing a wide variety of clinical symptoms ranging from asymptomatic infection to more serious forms of the disease. The title of neutralizing antibodies produced against the dengue infection appears to be determinant in the outcome of the disease. Currently, neutralization tests that have been performed take time for its execution. The aim of this study was to standardize a viral neutralization assay by real-time RT-PCR of viral strains of the four Dengue serotypes to subsequently be used for rapid detection and large-scale using antibodies of patients and for vaccine candidates. For this matter, standard curves were constructed for each Dengue serotype, by in vitro transcription of viral RNA. The neutralization assay in this study reduced the period of neutralization to 48 hours, compared to traditional neutralization test (PRNT), and it uses a more sensitive and specific molecular technique for detection of neutralizing antibodies, such as real time RT-PCR, to ensure greater applicability of the test

INTRODUÇÃO: A vacina contra febre amarela é a principal forma de prevenção da doença, e é raramente associada a eventos adversos graves, para os quais pessoas que vivem com o vírus da imunodeficiência humana (HIV) teoricamente possuem risco aumentado. Nessa população, estudos sugerem que a imunogenicidade da vacina é inferior, e fatores associados à resposta vacinal são pouco conhecidos. Neste estudo, avaliamos a imunogenicidade e reatogenicidade da vacina contra febre amarela em pessoas infectadas por HIV e controles, comparando os títulos de anticorpos neutralizantes, ocorrência de viremia pelo vírus vacinal e eventos adversos após a vacinação, e investigamos potenciais preditores da resposta vacinal. Avaliamos ainda o grau de conhecimento a respeito da febre amarela e a adesão às recomendações de vacinação entre pessoas que vivem com HIV. MÉTODOS: No Estudo 1, indivíduos com infecção por HIV e controles com indicação de receber a vacina foram incluídos em uma coorte prospectiva com um ano de acompanhamento, com avaliação periódica de eventos adversos, viremia pelo vírus vacinal e títulos de anticorpos neutralizantes específicos contra febre amarela após a vacinação. No Estudo 2, indivíduos com infecção por HIV sob tratamento antirretroviral e controles com uma única dose da vacina contra febre amarela no passado foram incluídos em um estudo de corte transversal para avaliação dos títulos de anticorpos neutralizantes contra febre amarela. Finalmente, no Estudo 3 pessoas infectadas por HIV foram convidadas a completar um questionário avaliando o grau de conhecimento a respeito da febre amarela e a adesão às recomendações de prevenção. RESULTADOS: Não observamos entre pessoas infectadas por HIV maior risco de viremia pelo vírus vacinal, ocorrência de eventos adversos ou diferença estatisticamente significante nos títulos de anticorpos nos primeiros três meses após a vacinação. Entretanto a persistência de anticorpos foi significantemente inferior entre indivíduos infectados por HIV, e associou-se inversamente à relação CD4+/CD8+, um marcador de ativação imune e inflamação de importância crescente. Nas respostas ao questionário, embora os participantes tenham demonstrado conhecimento a respeito da febre amarela e sua prevenção, a prevalência de discrepância entre as recomendações e o uso da vacina foi de 19%. CONCLUSÕES: Nossos resultados enfatizam a necessidade de novos estudos e intervenções entre pessoas infectadas por HIV a fim de melhorar a adesão às recomendações de uso da vacina, reduzir a ativação imune excessiva associada à pior resposta vacinal, e determinar o intervalo de tempo ideal para administração de reforço vacinal nessa população / INTRODUCTION: The yellow fever vaccine is the main prevention strategy against the disease, and is rarely associated with severe adverse events for which HIV-infected persons present theoretical increased risk. Studies suggest that the immune response to the vaccine is reduced in this population, but predictors of the vaccine immunogenicity are not well known. In this study, we assessed yellow fever vaccine immunogenicity and reactogenicity among HIV-infected persons and controls by comparing yellow fever-specific neutralizing antibody titers, detection of viremia by the vaccine virus and adverse events following vaccination. We also investigated potential predictors of vaccine response. Furthermore, we assessed knowledge and perceptions about yellow fever, and adherence to yellow fever vaccine recommendations among HIV-infected individuals. METHODS: In Study 1, HIV-infected participants and controls with indication to receive yellow fever vaccine were enrolled in a prospective cohort study and followed for one year with serial assessments of adverse events, viremia by the vaccine virus and yellow fever-specific neutralizing antibody titers after vaccination. In study 2, HIV-infected individuals under antiretroviral therapy and controls with a history of a single dose of yellow fever vaccine in the past were enrolled in a cross sectional study to evaluate yellow fever-specific neutralizing antibody titers after vaccination. Finally, in Study 3, HIV-infected persons under clinical follow up were invited to complete a survey assessing knowledge and perceptions about yellow fever and adherence to yellow fever prevention recommendations. RESULTS: We found no increased risk for the occurrence of viremia by the vaccine virus or adverse events, and no significant difference in yellow fever-specific antibody titers among HIVinfected participants in the first three months after vaccination. However, the duration of antibody response was reduced in HIV-infected persons, and was inversely associated to CD4+/CD8+ ratio, a biomarker of immune activation and inflammation of increasing importance. In the survey responses, although participants demonstrated awareness about yellow fever and yellow fever prevention, the prevalence of discrepancy between vaccine recommendation and actual compliance was 19%. CONCLUSIONS: Our results reinforce the need for new studies and interventions among HIVinfected persons to improve adherence to yellow fever vaccine recommendations, reduce excessive immune activation associated with impaired vaccine response, and to determine the ideal interval for a booster vaccination in this population

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:52Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-12Bitstream added on 2014-06-13T19:03:33Z : No. of bitstreams: 1 dias_fc_dr_jabo.pdf: 950154 bytes, checksum: 170fddcca2fc4c7004161e93f093a97f (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A ocorrência de anticorpos neutralizantes contra os genótipos do vírus da diarréia viral bovina (BVDV 1 e BVDV 2) foi verificada, pelo teste de virusneutralização (VN), em 260 amostras de soro sangüíneo de 26 rebanhos não vacinados contra o BVDV, provenientes dos Estados de Minas Gerais e São Paulo. Do total de amostras, 102 (39,2%) reagiram ao BVDV, das quais 81 (31,1 %) foram reagentes ao BVDV 1 e ao BVDV 2, sete (2,7%) reagiram apenas ao BVDV 1 e 14 (5,4%) reagiram apenas ao BVDV 2. Nos mesmos rebanhos, verificou-se também a presença sugestiva de animais persistentemente infectados (PI) por meio da pesquisa de anticorpos neutralizantes em cinco amostras de soro sangüíneo de bezerros sentinelas com idade entre 6 e 12 meses. A ocorrência de animais PI foi pesquisada em três dos 26 rebanhos, dos quais foram colhidas amostras pareadas de sangue de todos os animais do rebanho. Todas as amostras foram submetidas ao teste de VN contra o BVDV 1 e o BVDV 2, e naquelas não reagentes a pelo menos um dos genótipos, bem como nas amostras provenientes de bovinos com menos de seis meses de idade, foi realizada a pesquisa do vírus pela RT-PCR. Em um dos rebanhos foram detectados dois animais PI, cujas estirpes foram caracterizadas geneticamente como pertencentes ao subgenótipo eVOV 1 b. A infecção natural pelo BVDV foi monitorada nos três rebanhos selecionados para a pesquisa de animais PI, sendo que em dois deles constatou-se a eliminação do BVDV. No entanto, a infecção permaneceu no rebanho em que haviam sido detectados dois animais PI, pois foram diagnosticados posteriormente um animal transitoriamente infectado (TI) e novos animais reagentes ao vírus. Foram submetidos à análise estatística os resultados dos testes de VN contra o BVDV 1 e o BVDV 2, realizados em 1925 amostras de soro sangüíneo obtidas no período de execução... / The occurrence of neutralizing antibodies against to bovine viral diarrhoea virus genotypes (BVDV 1 and BVDV 2) has been confirmed by virusneutralization test (VN) in 260 samples of blood serum undertaken in the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil. Samples were retrieved from 26 cattle herds which were not BVDV vaccinated. One hundred and two samples (39.2%) were reagents to BVDV, or rather, 81 (31.1%) were reagents to BVDV 1 and BVDV 2, seven (2.7%) were reagents to BVDV 1 only and 14 (5.4%) were reagents to BVDV 2 only. In the same herds, the significant presence of persistently infected (PI) animais was also verified by a research involving neutralizing antibodies in five samples of blood serum in 6 to 12¬month-old calves. The occurrence of PI animais was researched in three out of 26 herds by paired blood samples of total animais in the herdo Ali samples were analyzed by VN test against to BVDV 1 and BVDV 2, and virus research was undertaken by RT-PCR in samples which were not reagent to at least one of the genotypes and in samples of less than 6-month-old cattle. Two PI animais, genetically characterized as belonging to BVDV 1 b subgenotype, were detected in one of the herds. BVDV natural infection was monitored in three herds selected for PI animais research. BVDV was eliminated in two herds. However, infection remained in the herd in which two PI animais were diagnosed, because a transiently infected animal (TI) and other virus-reagent animais were detected later on. Statistical analysis evaluated VN test results against BVDV 1 and BVDV 2 with 1925 samples of blood serum obtained during the research period. Although no significant ditterences were found between BVDV 1 reagent bovines and BVDV 2 reagent ones (p>0.05), a significant ditterence was detected among titles of antibodies from samples which were reagent to both genotypes (p<0.0001).

Submitted by Stephany Silva (stephany.silva@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-23T14:03:16Z No. of bitstreams: 1 2016castanha-pms.pdf: 1456214 bytes, checksum: 8fc7b4fe1efd0a8f729a4d6d9904da42 (MD5) / Approved for entry into archive by Adagilson Silva (adagilson@cpqam.fiocruz.br) on 2016-09-23T19:45:38Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2016castanha-pms.pdf: 1456214 bytes, checksum: 8fc7b4fe1efd0a8f729a4d6d9904da42 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-23T19:45:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2016castanha-pms.pdf: 1456214 bytes, checksum: 8fc7b4fe1efd0a8f729a4d6d9904da42 (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães. Recife, PE, Brasil / Anticorpos antidengue materno transferidos têm sido implicados na imunopatogênese da dengue grave em lactentes. Postula-se que esses anticorpos possuam um papel distinto durante os primeiros anos de vida: ao nascimento, anticorpos antidengue materno adquiridos conferem proteção, e em seguida declinam a níveis subneutralizantes capazes de facilitar a infecção pelo vírus dengue (DENV) mediante o mecanismo de ADE (Antibody dependent enhancement), aumentando o risco de ocorrência das formas graves da dengue. Estudos prospectivos conduzidos em lactentes Asiáticos têm mostrado que o pico de anticorpos materno adquiridos com a capacidade de mediar aumento da infecção pelo DENV ocorre entre o sexto e o nono mês de vida, o que correlaciona com a epidemiologia da dengue grave em lactentes dessa região. Esta tese descreve o perfil de imunidade materna antidengue e a transferência placentária de anticorpos dengue-específicos em pares mãe-cordão recrutados em um estudo de coorte prospectivo conduzido na cidade do Recife, Nordeste do Brasil. Adicionalmente, esse trabalho analisa o papel dos níveis de IgG total maternos e da imunidade antidengue materna na transferência de anticorpos ao feto. Na coorte de lactentes, a tese avalia a cinética de declínio dos anticorpos antidengue materno-transferidos e sua capacidade de mediar ADE durante os primeiros anos de vida. Níveis de IgG DENV-especifico e de anticorpos neutralizantes sorotipo específicos (DENV1-4) foram determinados em 376 pares mãe-cordão. A cinética de anticorpos materno transferidos neutralizantes e/ou mediadores de ADE foi investigada em uma subamostra das crianças inseridas na coorte. A maior parte das gestantes apresentava imunidade ao sorotipo DENV-3 (53,7 por cento) ou a combinação DENV-3/ DENV-4 (30,6 por cento). Níveis de IgG DENV-específico e de anticorpos neutralizantes para os sorotipos DENV-3 e DENV-4 foram significativamente maiores nas amostras do cordão umbilical do que nas respectivas amostras maternas. Mães imunes a apenas um sorotipo do vírus transferiram maiores níveis de IgG DENV-especifico (p=0,02) e de anticorpos neutralizantes para o DENV-3 (p=0,04) quando comparado a mães imunes a múltiplos sorotipos do DENV. Níveis de anticorpos materno transferidos para o DENV-3 foram indetectáveis em 90 por cento das crianças aos 4 meses de idade. O pico de atividade ADE foi detectado no segundo mês de vida (p0,0001) e rapidamente declinou no quarto mês de vida (p=0,0035). Diferente do observado em lactentes asiáticas, o pico de atividade ADE mediado pelos anticorpos maternos transferidos ocorreu mais nos lactentes Brasileiros. Esses resultados possuem importantes implicações para a imunopatogênese da dengue durante a infância e para o estabelecimento de futuros esquemas vacinais antidengue nos primeiros anos de vida (AU)

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The feline calicivirus (FCV) and the felid herpesvirus type 1 (FeHV-1) are the main agents of the respiratory tract diseases of felines. Both viruses are distributed worldwide, however its distribution and prevalence in Brazil are not well known. In the present thesis we describe the isolation and one serosurvey of FCV and FeHV-1 in some counties of the Rio Grande do Sul State, Brazil; and the molecular characterization of the capsid protein gene of FCV isolates is also described. In Chapter 1, we describe the epidemiologic survey of FCV and FeHV-1 through investigation of the conjunctival, nasal, oral and oropharyngeal swabs from 302 domestic cats. The viral isolation was performed in Crandell-Reese feline kidney cells and the isolates were submitted to PCR and RT-PCR for confirmation of the presence of the FeHV-1 and FCV, respectively. Fifty five (18.2%) of the 302 cats analyzed were positive for the viral isolation; when tested by PCR, 29 cats (52.7%) were shedding the FCV, 21 (38.2%) shedding FeHV-1, and 5 cats (9.1%) shedding both viruses. In addition, isolates of FCV and FeHV-1 were standardized to be used as control in the PCR and virus neutralization (VN) assays (serological technical used in chapter 3 of the thesis). The SV65/90 (FCV) and the SV534/00 (FeHV-1) isolates were defined as standard viruses for the assays. In Chapter 2, the molecular characterization of 13 FCV isolates is described; ten isolates came from the survey performed in chapter 1, two were deposited in the virology laboratory of the UFSM and one was obtained from a cat with gingivitis-stomatitis syndrome. The ORF2 (open reading frame) region that codifies the major protein of the viral capsid was sequenced, which includes an immunodominant region of the virus. The ORF 2 was analyzed at the nucleotide and amino acid levels and these data was used for phylogenetic studies of the 13 Brazilian isolates of FCV. These isolates were compared to ten reference strains of FCV and to the San Miguel sea lion virus type 1 (SMSV-1) as an outgroup in phylogenetic study. The primers were designed using the complete sequence of FCV-F9. The comparison of the 13 Brazilian isolates with the F9 strain revealed a large molecular diversity among them, concentrated mainly along the linear epitopes of the region. The Chapter 3 describes a serosurvey against FCV and FeHV-1 in serum samples from domestic feline. From the 630 samples tested by the VN assay, 53.6% (338/630) were positive to one or both viruses with a prevalence of 39.2% for neutralizing antibodies against FCV and 30.6% for FeHV-1. The results from the present study demonstrated that the FCV and FeHV-1 are circulating among the feline population examined, and also, the presence of carriers of the viruses among these cats. Besides, the molecular characterization of the FCV evidenced the great genetic variability of the Brazilian isolates when compared to vaccine and reference strains. / O calicivírus felino (feline calicivirus FCV) e o herpesvírus felino tipo 1 (felid herpesvirus type 1 FeHV-1) são os principais agentes das doenças do trato respiratório dos felinos. Ambos os vírus são mundialmente distribuídos, mas no Brasil sua distribuição e prevalência são ainda pouco conhecidas. Na presente tese descrevemos o isolamento e sorologia do FCV e do FeHV-1 em alguns municípios do estado do Rio Grande do Sul (RS), Brasil; e a caracterização molecular do gene da proteína do capsídeo de isolados de FCV. No Capítulo 1, descreve-se o isolamento do FCV e do FeHV-1 por meio da coleta de suabes (conjuntival, nasal, oral e orofaringeano) de 302 gatos domésticos. O material coletado foi inoculado em cultivo celular de origem felina (CRFK) e submetidos a PCR e RT-PCR para confirmação em FeHV-1 e FCV, respectivamente. Dos 302 gatos analisados, 55 (18,2%) foram positivos no isolamento; e quando testados por PCR, 29 dos 55 gatos (52,7%) excretavam o FCV, 21 (38,2%) excretavam o FeHV-1 e 5 gatos (9,1%) apresentavam ambos os vírus. Além dessa descrição, realizou-se a padronização de um isolado de FCV e de FeHV-1, para serem utilizados como controle nas técnicas de PCR e na vírus neutralização [VN] (técnica sorológica utilizada no capítulo 3 da tese). O SV65/90 (FCV) e o SV534/00 (FeHV-1) foram os isolados definidos como vírus-padrão. No Capítulo 2, incluímos o estudo sobre a análise molecular de 13 isolados de FCV; dez isolados foram obtidos a partir do material descrito no capítulo 1, dois estavam armazenados no laboratório de virologia da UFSM e um foi obtido de um gato acometido pela síndrome gengivo-estomatite. A região analisada foi o gene da proteína do capsídeo, codificado pela ORF2 (open reading frame), na qual se localizam as regiões imunodominantes do FCV. A ORF2 foi analisada em nível de nucleotídeos e aminoácidos; e uma análise filogenética dos 13 isolados brasileiros de FCV, incluindo dez cepas de referência e o vírus dos leões marinhos de San Miguel tipo 1 (San Miguel sea lion virus type 1 SMSV-1) como um outgroup, foi também realizada. Os primers foram desenhados com base na sequência completa do genoma da cepa de referência a FCV-F9. Quando os 13 isolados brasileiros de FCV foram comparados a cepa F9, detectou-se grande diversidade molecular nas regiões variáveis do gene e nos epitopos lineares mapeados. O Capítulo 3 contem um estudo sorológico contra FCV e FeHV-1 em amostras de soro de felinos domésticos. Das 630 amostras testadas pela VN, 53,6% (338/630) foram positivas para um ou ambos os vírus; sendo a prevalência de anticorpos neutralizantes contra o FCV de 39,2% e do FeHV-1 de 30,6%. Os resultados aqui apresentados demonstram a circulação do FCV e do FeHV-1 na população de gatos domésticos analisados, assim como, a presença de gatos portadores para ambos os vírus. Além disso, a caracterização molecular do FCV demonstrou a grande variabilidade genética dos isolados brasileiros em comparação às cepas vacinais e às de referência.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 157447 bytes, checksum: 535cd3ca6a89ff6d3d230a356a1b6922 (MD5) Previous issue date: 2004-02-19 / Observations of clinical cases suspected of distemper, attended at the Veterinary Hospital at the Federal University of Viçosa, indicate that the dogs vaccinated in stores which commercialize agropecuary products showed a greater frequency of the disease compared to the ones vaccinated at veterinary clinics. Having as the objective of this study the evaluation of the answer to the vaccines commercialized in different stores and following or not the vaccination protocol indicated by the literature, the antibody titers against the distemper in dogs serum in the urban area of the city of Viçosa-MG was determined. To carry out this experiment, a blood serum sample was obtained from each of the 150 selected dogs. These animals were healthy and were between six months to six years old. The animals belong to several breeds and both sex. The dogs were selected following pre-established characteristics to form five groups of 30 animals each: A) dogs vaccinated in veterinary clinics following the literature patterns; B) dogs vaccinated in veterinary clinics not following the indicated protocol; C) dogs vaccinated in agropecuary product stores following the indicated protocol; D) dogs vaccinated in agropecuary product stores not following the indicated protocol; E) dogs not vaccinated. The antibody titers were measured in each animal serum through the serum neutralizing test. According to the results of this study, it was concluded that the vaccination against distemper is important, considering the difference between the titers of vaccinated and non-vaccinated dogs. There is no difference in relation to vaccinating in veterinary clinics or agropecuary product stores, if the vaccination is carried out following the vaccination protocol indicated by the literature. The quality of the vaccines commercialized in veterinary clinics and agropecuary products stores should be evaluated due to the great percentage of negative titer and titers below the ones considered protective in all the vaccinated dogs groups. / Observações de casos clínicos suspeitos de cinomose, atendidos no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Viçosa, indicam que os cães vacinados em lojas que comercializam produtos agropecuários apresentam maior freqüência da doença, quando comparados aos cães vacinados em clínicas veterinárias. Com o objetivo de avaliar a resposta às vacinas comercializadas em diferentes estabelecimentos e seguindo ou não o protocolo de vacinação indicado pela literatura, foi determinado o título de anticorpos contra a cinomose no soro de cães da área urbana do município de Viçosa-MG. Para tanto, uma amostra de soro sanguíneo foi obtida de cada um dos 150 cães selecionados. Estes animais estavam sadios e tinham entre seis meses e seis anos de idade. Os animais pertenciam a diversas raças e eram de ambos os sexos. Os cães foram selecionados segundo características pré-estabelecidas para compor cinco grupos de 30 animais: A) cães vacinados em clínicas veterinárias, seguindo o protocolo indicado na literatura; B) cães vacinados em clínicas veterinárias, não seguindo o protocolo indicado; C) cães vacinados em lojas de produtos agropecuários, seguindo o protocolo indicado; D) cães vacinados em lojas de produtos agropecuários, não seguindo o protocolo indicado; E) cães não vacinados. O título de anticorpos foi mensurado no soro de cada animal, por meio do teste de soroneutralização. De acordo com os resultados deste estudo, pôde-se concluir que a vacinação contra cinomose é importante, considerando a diferença encontrada entre o título de anticorpos dos cães vacinados e não vacinados. Não há diferença em vacinar os cães contra cinomose em clínicas veterinárias ou em lojas de produtos agropecuários, desde que a vacinação seja realizada seguindo o protocolo indicado pela literatura. A qualidade das vacinas comercializadas em clínicas veterinárias e lojas de produtos agropecuários devem ser avaliadas, diante da grande porcentagem de títulos negativos e de títulos abaixo do considerado protetor em todos os grupos de cães vacinados.

Por representar a mais importante arbovirose em nível mundial, as infecções causadas pelos vírus da dengue são de grande importância em nosso país, apresentando uma ampla variedade de sintomas clínicos que vão desde infecção assintomática até formas mais graves da doença. O título de anticorpos neutralizantes produzidos frente à infecção por dengue parece ser determinante na forma de apresentação da doença no paciente. Atualmente, a forma com que o teste de neutralização é realizado demanda tempo para sua realização. O objetivo deste trabalho foi padronizar um ensaio de neutralização viral por RT-PCR em tempo real em cepas virais dos quatro sorotipos dengue para, posteriormente, ser empregada na detecção rápida e em grande escala de anticorpos em soro de pacientes e de candidatos vacinais. Para isso, foram construídas curvas padrão, para cada sorotipo viral, por meio da transcrição in vitro do RNA viral. O ensaio de neutralização padronizado nesse estudo reduziu o número de dias de detecção da neutralização em 48 horas quando comparada com a técnica de neutralização tradicional (PRNT), além de utilizar técnicas moleculares sensíveis e específicas para detecção como a RT-PCR em tempo real que garantem maior aplicabilidade do teste. / Because Dengue virus is the most important arboviral disease worldwide, infections caused by this pathogen are of great importance in Brazil, producing a wide variety of clinical symptoms ranging from asymptomatic infection to more serious forms of the disease. The title of neutralizing antibodies produced against the dengue infection appears to be determinant in the outcome of the disease. Currently, neutralization tests that have been performed take time for its execution. The aim of this study was to standardize a viral neutralization assay by real-time RT-PCR of viral strains of the four Dengue serotypes to subsequently be used for rapid detection and large-scale using antibodies of patients and for vaccine candidates. For this matter, standard curves were constructed for each Dengue serotype, by in vitro transcription of viral RNA. The neutralization assay in this study reduced the period of neutralization to 48 hours, compared to traditional neutralization test (PRNT), and it uses a more sensitive and specific molecular technique for detection of neutralizing antibodies, such as real time RT-PCR, to ensure greater applicability of the test

Orientador: Cassiano Victória / Resumo: A raiva é uma zoonose transmitida pelo vírus do gênero Lyssavirus, e é considerada uma das enfermidades mais temidas no mundo devido à sua alta letalidade e inexistência de tratamento eficaz. Anualmente morrem mais de 50 mil pessoas por raiva em países subdesenvolvidos. O cão é o principal transmissor da raiva humana nos centros urbanos, responsável por 99% dos casos e 92% dos tratamentos pós-exposição. No Brasil, a raiva animal se apresenta de forma endêmica. A vacinação é o método mais eficiente de prevenção da raiva em cães e, por consequência, a proteção à população humana. No município de Botucatu, SP, há mais de 30 anos não são diagnosticados casos de raiva canina, devido às campanhas anuais de vacinação contra a raiva realizadas há 50 anos. Em 2010, o Ministério da Saúde preconizou o uso da vacina contra a raiva animal de cultivo celular nas campanhas de vacinação em massa. Este estudo teve como objetivo avaliar a resposta imunológica de cães que receberam apenas doses da vacina de cultivo celular contra o vírus da raiva. Para consolidação do tamanho amostral considerou-se uma porcentagem de 80% de adesão com consentimento livre e esclarecido, erro de estimação da ordem de 4% e nível de confiança de 95%. O título de anticorpos para a raiva foi detectado pelo Microteste Simplificado de Inibição de Fluorescência - SFIMT. Todas as discussões analíticas no plano estatístico foram realizadas no nível de significância de 5%. Observou-se que 59,12% (428/724) dos cães possuíam... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Rabies is a zoonosis transmitted by the virus of the genus Lyssavirus and is considered one of the most feared diseases in the world due to its high lethality and lack of effective treatment. Annually more than 50,000 people die from rabies in underdeveloped countries. The dog is the main transmitter of human rabies, accounting for 99% of cases and 92% of post-exposure treatments. In Brazil, animal rabies presents itself endemic. Vaccination is the most effective method of preventing rabies in dogs and, consequently, protecting the human population. In the municipality of Botucatu, SP, for more than 30 years no cases of canine rabies have been diagnosed due to the annual campaigns of rabies vaccination applied 50 years. In 2010, the Ministry of Health advocated the use of the antirabies animal cell culture vaccine in mass vaccination campaigns. This study aimed to evaluate the immunological response of dogs that received only doses of the cell culture vaccine against the rabies virus. To consolidate the sample size, a percentage of 80% adherence with free and informed consent, an error of the order of 4% and a 95% confidence level were considered. The antibody titers for rabies were detected by the Simplified Fluorescence Inhibition Microtest - SFIMT. All statistical analyses were performed at a significance level of 5%. It was observed that 59.12% (428/724) of the dogs had a protective titer (≥0.5 IU / mL) and 40.88% (296/724) had not developed a protective titer of anti-rab... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by Cássio da Cruz Nogueira (cassionogueirakk@gmail.com) on 2017-10-02T17:42:20Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PersistenciaAnticorposNeutralizantes.pdf: 2842585 bytes, checksum: 2c0843771c5d711a6d8b0ef3dc16c91a (MD5) / Approved for entry into archive by Irvana Coutinho (irvana@ufpa.br) on 2017-10-03T16:53:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PersistenciaAnticorposNeutralizantes.pdf: 2842585 bytes, checksum: 2c0843771c5d711a6d8b0ef3dc16c91a (MD5) / Made available in DSpace on 2017-10-03T16:53:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertacao_PersistenciaAnticorposNeutralizantes.pdf: 2842585 bytes, checksum: 2c0843771c5d711a6d8b0ef3dc16c91a (MD5) Previous issue date: 2012 / A raiva é uma zoonose cosmopolita caracterizada como uma encefalite viral aguda, progressiva que mata cerca de 55.000 pessoas anualmente no mundo. O Vírus da Raiva é transmitido por animais domésticos, rurais e silvestres, e atualmente, na Amazônia brasileira tem se observado com frequência surtos de raiva humana transmitida por morcegos. A forma de tratamento mais bem sucedida após possível exposição ao Vírus da Raiva é a imunoprofilaxia. O presente estudo apresenta-se como uma coorte prospectiva da manutenção de anticorpos neutralizantes antivírus rábico em 508 indivíduos previamente vacinados em uma população do Município de Augusto Corrêa- Pará- Brasil, no período de 2007 a 2009. Para tal, foram colhidas amostras de soro para dosagem de anticorpos neutralizantes pela técnica RFFIT. Na amostra estudada o gênero predominantemente foi o masculino; a mediana da idade foi 16 anos com desvio interquartílico entre 8 e 30 anos, e houve maior concentração nas faixas etárias de 2 a 9 anos e 10 a 19 anos e a maioria dos indivíduos realizaram esquema vacinal de exposição completo. A produção de anticorpos neutralizantes contra o vírus rábico, em níveis protetores (> 0,05 UI/mL) ocorreu em 87,3% dos indivíduos no primeiro ano do estudo e a manutenção dos títulos de soroproteção foi de 85,6% no segundo ano e de 93,2% no ano seguinte. O estudo demonstrou melhor perfil imune no gênero feminino em relação ao gênero masculino; nas faixas etárias de 30 a 39 anos e 50 a 59 anos; e no grupo de 32 indivíduos que receberam dose de reforço, conforme indicação pelos títulos de anticorpos. Nesse estudo a população investigada demonstrou bons níveis de anticorpos neutralizantes (> 0,5UI/mL) contra o Vírus da Raiva após os 4 anos de vacinação. / Rabies is a cosmopolitan zoonosis characterized as an acute viral encephalitis, progressive killing around 55.000 people annually worldwide each year. The rabies virus is transmitted by domestic animals and rural and wild, and now, in the Brazilian Amazon has been observed often outbreaks of human rabies transmitted by bats. The shape of most successful treatment after possible exposure to rabies virus is immunoprophylaxis. This study presents itself as a prospective cohort of maintaining rabies virus neutralizing antibodies in 508 previously vaccinated individuals in a population of the municipality of Augusto Corrêa- Pará- Brazil, from 2007 to 2009. To this end, serum samples were collected for measurement of antibodies by the technique RFFIT. The study sample the genre was predominantly male, with the median age about 16 years with interquartile range between 8 and 30 years, and there was a greater concentration in the age groups 2-9 years and 10 to 19 years; and most of subjects performed the immunization schedule full exposure. The production of neutralizing antibodies against rabies virus in protective levels (> 0.05 IU/mL) occurred in 87.3% of subjects in the first year of the study and preservation of seroprotection was 85.6% in the second year and 93.2% the following year. The study showed better immune profile in females compared to males; in the age groups 30-39 years and 50-59 years; and the group of 32 subjects who received a booster dose, as indicated by antibody titers. In this study, population investigated showed good levels of neutralizing antibodies (> 0.5 IU/mL) against the rabies virus after 4 years of vaccination.