Orientador: Humberto da Araujo Rangel / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T08:01:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Koury_MatildeCota_D.pdf: 3126315 bytes, checksum: 89aa50dab9d9e870fec52f0a4106e80c (MD5) Previous issue date: 1982 / Resumo: Pelo tratamento de leptospiras desintegradas por ultra som ou íntegras com álcool metílico foi possível isolar os antígenos do tipo I e 11 respectivamente. Esses antígenos,quando examinados com soros de pacientes com outras doenças infecciosas pelas reações de fixação de complemento,mostraram-se específicos para o diagnóstico das leptospiroses. As reações de aglutinação microscópica e fixação de complemento com os antígenos do tipo I e II concordaram em 84% dos casos suspeitos de leptospiroses. Esses antígenos foram capazes de reagir com anticorpos para os sorotipos homólogos e heterólogos, mostrando, portanto, uma ampla especificidade. Fez-se uma tentativa de purificação do antígeno do tipo II pela precipitação com acetona (antígeno do tipo IIc) ou acetona e clorofórmio (antígeno do tipo IId). A análise química do antígeno do tipo IIc revelou a presença de carboidrato, proteína, lípide e fósforo. Na reação de imunodifusão observou-se um padrão de identidade entre os antígenos do tipo I e II. Assim o diagnóstico das leptospiroses pode ser feito utilizando-se os antígenos do tipo I ou II. Pode-se sugerir o uso de uma mistura dos antígenos do tipo I ou do tipo II para o diagnóstico das leptospiroses, a fim de que se possa obter um aumento da sensibilidade. ...Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: Not informed. / Doutorado / Doutor em Ciências Biológicas

OBJETIVO: Determinar a freqüência da pneumonia adquirida na comunidade (PAC) por pneumococo, através do teste de detecção de antígeno urinário para Streptococcus pneumoniae em adultos imunocompetentes hospitalizados. Avaliar rendimento de exame de escarro e hemoculturas, bem como descrever aspectos clínicos, radiológicos, epidemiológicos e prognósticos associados à PAC. MÉTODOS: Durante um período de 17 meses, foram estudados, prospectivamente, 30 pacientes consecutivos com diagnóstico de PAC. RESULTADOS: Dezessete (57%) pacientes eram homens, a idade média foi de 49 anos, 14 (48,3%) apresentavam comorbidades, 17 (57%) pertenciam às classes IV e V de Fine e 11 (36,7%) pacientes foram admitidos em unidade de terapia intensiva (UTI). Um agente etiológico foi identificado em 19 dos 30 casos (63%). O Streptococcus pneumoniae foi identificado em 14 casos(47%) e representou 74% dos diagnósticos etiológicos obtidos. O teste imunocromatográfico de membrana (BINAX NOW) identificou S. pneumoniae em 11 dos 30 casos (36,7%), e foi positivo em 33% dos casos de etiologia desconhecida através de métodos convencionais de escarro e hemoculturas. O uso de antimicrobianos previamente à admissão hospitalar ocorreu em 31% dos casos e foi significativamente associado com etiologia desconhecida. Teste imunocromatográfico de membrana não foi afetado pelo uso de antibióticos previamente à admissão hospitalar e pacientes com teste positivo tiveram maior tempo de permanência hospitalar. CONCLUSÕES: Em nosso estudo, o teste de detecção de antígenos urinários para S. pneumoniae (BINAX NOW) demonstrou ser um instrumento diagnóstico útil na avaliação de pacientes com pneumonia adquirida na comunidade causada por penumococo. / PURPOSE: The aim of this study was to determine the frequency of pneumococcal community-acquired pneumonia by using the Binax NOW Streptococcus pneumoniae urinary antigen test in immunocompetents adults patients admitted to the hospital. To evaluate the performance of sputum and blood cultures to determine the pneumococcal etiology. To describe the clinical, epidemiological, radiological and prognostic features. METHODS: During a 17-month period, all consecutive patients with clinical and radiological diagnosis of CAP were prospectively enrolled in the study. RESULTS: The study group consisted of 30 patients (17 males and 13 females). The mean age of the patients was 49 years; most patients had underlying diseases (14 patients, 48,3%), 17 (57%) patients belonged to IV and V Fine Index, and 11 (36,7%) patients were admitted to intensive care unit (ICU). An etiologic agent was identified in 19 cases (63%). Streptococcus pneumoniae was identified in 14 patients (47%) and was accounts for 74% of cases where an etiologic diagnosis was made. The immunochromatographic test (BINAX NOW) was positive in 11 patients (36,7%) and recognized 33% of the cases in whom no pathogen was identified by conventional methods. Prior antimicrobial treatment was observed in 31% of cases, and was significantly associated with unknown etiology. In contrast, BINAX NOW antigen assay performance was not affected by prior antibiotic therapy. Patients with a positive immunochromatographic test were significantly associated with most prolongated hospital stay. CONCLUSIONS: In our study, urinary antigen test for detection of Streptococcus pneumoniae (BINAX NOW), proved to be a useful diagnostic tool in the evaluation of the patients with pneumococcal community-acquired pneumonia.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:41Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-05Bitstream added on 2014-06-13T20:04:05Z : No. of bitstreams: 1 nascimento_mpp_dr_botfm.pdf: 257230 bytes, checksum: 279e4c7577f3c5e9014f50d0a8e75ddc (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Células gigantes multinucleadas (CGM) são células características, presentes em lesões granulomatosas, induzidas por agentes infecciosos e, sua formação pode ser modulada por citocinas produzidas por células da resposta imune. No presente trabalho avaliou-se o efeito modulador de citocinas pró-inflamatórias (IFN-γ e TNF-α) e anti-inflamatórias (IL-10 e TGF-β1) na formação de CGM in vitro, a partir de monócitos humanos, estimulados com antígenos de Paracoccidioides brasiliensis (AgPb) e sobre a atividade fungicida dessas células desafiadas com a cepa Pb18 de P.brasiliensis. Monócitos do sangue periférico de indivíduos saudáveis foram cultivados na ausência de estímulo (controle), com AgPb (100ug/mL) ou com associações de AgPb e GM-CSF (100 U/ml) com as citocinas: IFN-γ (300UI/mL), IL-10 (50U/mL), TGF- β1 (250pg/mL) ou TNF-α (50U/mL). A formação de CGM foi avaliada após três dias de cultivo, estabelecendo-se o índice de fusão (IF) e a percentagem de CGM após fixação e coloração das células com May-Grunwald-Giemsa. Além disso, a atividade fungicida dessas células foi avaliada após 4 h de co-cultivo das CGM com 4 x 104 células leveduriformes viáveis da cepa Pb18 de P. brasiliensis, por plaqueamento das co-culturas em meio BHI-ágar e determinação da recuperação de fungos viáveis. O método estatístico empregado para comparação dos resultados foi análise de variância, com nível de significância de 5%. Os resultados mostraram que a incubação de monócitos com AgPb+GM-CSF+IFN-γ induziu IF significativamente mais elevados em relação a todas as demais culturas: controle, apenas estimulados com AgPb ou AgPb adicionado das demais citocinas. A adição de TNF- α+AgPb+GM-CSF não resultou em IF maiores do que os obtidos na cultura estimulada apenas com o AgPb, enquanto as citocinas IL-10 e TGF-β1 apresentaram efeito supressor... / Multinucleated giant cells (MGC) are characteristics cells present in granulomatous lesions induced by infectious agents and also may be modulated by cytokines produced by cells of the immune response. The present study evaluated the modulatory effect of interferon-gamma (IFN-γ) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) pro-inflammatory cytokines, and interleukin-10 (IL-10) and transforming growth factor beta (TGF-β1) anti-inflammatory cytokines on in vitro formation of MGC derived from human monocytes, stimulated with Paracoccidioides brasiliensis antigen (PbAg) and on fungicidal activity of these cells challenged with the Pb18 strain of P.brasiliensis. Peripheral blood monocytes obtained from healthy individuals were cultured for three days without stimulus (control) or with PbAg (100 ug/mL) or with association of PbAg and granulocyte macrophage colony stimulator factor (GMCSF (100 U/mL) with the following cytokines: IFN-γ (300 UI/mL), IL-10 (50 UI/mL), TGF-β1 (250 pg/mL) or TNF-α (50 UI/mL). The generation of MGC was evaluated by fusion index (FI) and the percentage of MGC formation after cell fixing and May-Grumwald-Giensa staining. Fungicidal activity of monocytederived MGC was evaluated 4h after co-culture of MGC with 4 x 104 viable yeast cells of Pb18 strain, by plating the cultures in BHI-agar and determination of viable fungi recovery. The statistical method employed for the comparison of the results was analysis of variance with the significance set at p< 0.05. The results showed that the incubation of monocytes with PbAg+GM-CSF+IFN-γ induced FI significantly higher than those observed in all the other cultures, such as control cultures, cultures stimulated with PbAg only or cultures stimulated with PbAg associated with the other cytokines. Stimulation with PbAg+TNF+GM-CSF did not result in FI higher than those obtained in the culture stimulated with PbAg only... (Complete abstract click electronic access below)

OBJETIVO: Determinar a freqüência da pneumonia adquirida na comunidade (PAC) por pneumococo, através do teste de detecção de antígeno urinário para Streptococcus pneumoniae em adultos imunocompetentes hospitalizados. Avaliar rendimento de exame de escarro e hemoculturas, bem como descrever aspectos clínicos, radiológicos, epidemiológicos e prognósticos associados à PAC. MÉTODOS: Durante um período de 17 meses, foram estudados, prospectivamente, 30 pacientes consecutivos com diagnóstico de PAC. RESULTADOS: Dezessete (57%) pacientes eram homens, a idade média foi de 49 anos, 14 (48,3%) apresentavam comorbidades, 17 (57%) pertenciam às classes IV e V de Fine e 11 (36,7%) pacientes foram admitidos em unidade de terapia intensiva (UTI). Um agente etiológico foi identificado em 19 dos 30 casos (63%). O Streptococcus pneumoniae foi identificado em 14 casos(47%) e representou 74% dos diagnósticos etiológicos obtidos. O teste imunocromatográfico de membrana (BINAX NOW) identificou S. pneumoniae em 11 dos 30 casos (36,7%), e foi positivo em 33% dos casos de etiologia desconhecida através de métodos convencionais de escarro e hemoculturas. O uso de antimicrobianos previamente à admissão hospitalar ocorreu em 31% dos casos e foi significativamente associado com etiologia desconhecida. Teste imunocromatográfico de membrana não foi afetado pelo uso de antibióticos previamente à admissão hospitalar e pacientes com teste positivo tiveram maior tempo de permanência hospitalar. CONCLUSÕES: Em nosso estudo, o teste de detecção de antígenos urinários para S. pneumoniae (BINAX NOW) demonstrou ser um instrumento diagnóstico útil na avaliação de pacientes com pneumonia adquirida na comunidade causada por penumococo. / PURPOSE: The aim of this study was to determine the frequency of pneumococcal community-acquired pneumonia by using the Binax NOW Streptococcus pneumoniae urinary antigen test in immunocompetents adults patients admitted to the hospital. To evaluate the performance of sputum and blood cultures to determine the pneumococcal etiology. To describe the clinical, epidemiological, radiological and prognostic features. METHODS: During a 17-month period, all consecutive patients with clinical and radiological diagnosis of CAP were prospectively enrolled in the study. RESULTS: The study group consisted of 30 patients (17 males and 13 females). The mean age of the patients was 49 years; most patients had underlying diseases (14 patients, 48,3%), 17 (57%) patients belonged to IV and V Fine Index, and 11 (36,7%) patients were admitted to intensive care unit (ICU). An etiologic agent was identified in 19 cases (63%). Streptococcus pneumoniae was identified in 14 patients (47%) and was accounts for 74% of cases where an etiologic diagnosis was made. The immunochromatographic test (BINAX NOW) was positive in 11 patients (36,7%) and recognized 33% of the cases in whom no pathogen was identified by conventional methods. Prior antimicrobial treatment was observed in 31% of cases, and was significantly associated with unknown etiology. In contrast, BINAX NOW antigen assay performance was not affected by prior antibiotic therapy. Patients with a positive immunochromatographic test were significantly associated with most prolongated hospital stay. CONCLUSIONS: In our study, urinary antigen test for detection of Streptococcus pneumoniae (BINAX NOW), proved to be a useful diagnostic tool in the evaluation of the patients with pneumococcal community-acquired pneumonia.

Orientador: Luis Antonio Mathias / Banca: Anna Monteiro Correia Lima / Banca: Samir Issa Samara / Banca: Raul José Silva Gírio / Banca: Raphaella Barbosa Meirelles Bartoli / Resumo: Com o objetivo de analisar as diferentes formas de interpretação dos resultados em pesquisas epidemiológicas com Leptospira spp., em quatro espécies de hospedeiros, as concordâncias entre os resultados da soroaglutinação microscópica (SAM) contra 24 sorovariedades foram testadas por meio do coeficiente Kappa. Os resultados obtidos com o cálculo clássico da soroprevalência, o método da sorovariedade mais provável (SMP) com 24 e oito antígenos e três variações do SMP foram comparados por meio da intersecção entre os intervalos de confiança de 95%. As concordâncias entre sorovariedades nos resultados da SAM indicam que a maioria das coaglutinações ocorre dentro do esperado pelo acaso e que não é possível atribuí-las apenas a reações cruzadas. O SMP resultou em soroprevalências menores que as obtidas pelo método clássico. Quanto mais antígenos são utilizados na SAM, menores serão a soroprevalências para cada sorovariedade, demonstrando que a bateria de antígenos interfere nos resultados. As diferentes formas de calcular o resultado do SMP mostraram ser coeficientes diferentes, que podem confundir os leitores, caso não sejam bem definidos nos trabalhos. Conclui-se que o método clássico de cálculo da soroprevalência seria o mais indicado, respeitando-se as limitações da SAM na conclusão das pesquisas. / Abstract: Aiming to analyze the different ways of interpreting the results of epidemiological research with Leptospira spp. in four host species, the agreement between the results in the microscopic agglutination test (MAT) against 24 serovars was tested by the Kappa coefficient. The results with the classic seroprevalence method, the most likely serovar method (SMP) with 24 and eight antigens and three variations of the SMP were compared by the intersection of the 95% confidence intervals. Agreements between serovars in the results of MAT indicate that most co-agglutinations occur randonly, and cross-reactions can not assign as the only cause of them. The SMP resulted in lower seroprevalences than those obtained by the classical method. The more antigens are used in MAT, lower the seroprevalences for each serovar, demonstrating that the antigen battery interferes with the results. The different ways of calculating the result of the SMP proved to be different coefficients, which may confuse readers, if they are not well defined in the research. It was concluded that the classic seroprevalence would be the most appropriate method of calculation, respecting the limitations of the MAT in the research's conclusions. / Doutor

Resumo: A tuberculose é uma doença infecto-contagiosa que ainda hoje representa um grave problema de saúde pública. O conhecimento e aplicação das técnicas diagnósticas, bem como a correta interpretação dos seus resultados, são fundamentais para o rápido controle da doença. A introdução de métodos diagnósticos, sensíveis, precisos e de baixo custo pode contribuir para a diminuição do número de casos a nível mundial. Nos últimos tempos houve um grande avanço no desenvolvimento de testes imunodiagnósticos com o surgimento dos anticorpos monoclonais e o aprimoramento na analise e identificação dos principais antígenos responsáveis pela ativação do sistema imunológico na presença do agente causador da tuberculose. Tais antígenos podem ser preparados em larga escala por síntese protéica e tecnologia recombinante, aumentando a especificidade do teste. O objetivo deste trabalho foi analisar o custo de produção de um kit diagnóstico utilizando a proteína recombinante ESAT 6 de Mycobacterium tuberculosis bem como padronizar e avaliar o reconhecimento desta proteína recombinante por anticorpos séricos da classe IgG em pacientes portadores de tuberculose doença através de método imunoenzimático indireto (ELISA). Utilizou-se como controle positivo para esta análise amostras de soro de pacientes em início de tratamento, com diagnóstico confirmado pelos métodos convencionais de baciloscopia, cultura, raios-X e PPD. Verificou-se que a proteína recombinante ESAT 6 foi reconhecida pelos anticorpos IgG séricos destes pacientes e apresentou reprodutibilidade satisfatória quando utilizada como antígeno de reação em concentração de 500?g por cavidade, numa diluição de amostra de 1:25 e concentração do conjugado de 1:10000. O cálculo do custo de produção de um kit diagnóstico ELISA utilizando esta proteína recombinante apresentou um valor aproximado de R$ 0,18 por análise o que torna o teste altamente viável para ser implementado em saúde pública quando comparado com o custo dos testes utilizados rotineiramente.

Banca: Mario Tsunezi Shimizu / Banca: Olga Fichman / Banca: Esther Birman / Banca: Luiz Jacinto da Silva / Banca: Terezinha de Oliveira Nogueira / Resumo: Anticorpos naturais para antígenos próprios e exógenos foram analisados pela técnica de ELISA, em 60 soros de pacientes cronicamente infectados pelo T. cruzi e, em 40 soros de indivíduos sofrendo de uma micose profunda, freqüentemente encontrada na América Latina (Paracoccidioimicose). Cerca de 80% dos indivíduos do primeiro grupo tinham níveis significativamente elevados de anticorpos antilaminina (M=4,75, DP±1,88) quando comparados com os controles saudáveis e, diferentes especificidades de anticorpos estavam associadas com antilaminina nos soros chagásicos. Foram observados anticorpos reativos com as proteínas do citoesqueleto, especialmente com a banda 3 e seus peptídeos, como o de 62 kDa. Por meio de cromatografia, em Proteína-A - Sepharose, mostramos que uma parte significante do antiGal natural pode estar ligada por sua região Fab a outra molécula de imunoglobulina e/ou a sítios alternativos de ligação na Proteína A. O achado de lgG antiGal nos imunocomplexos reforçam a primeira hipótese. Todavia, é possível que algumas lgG aniiGal pertençam ao subgrupo VH111 de imunoglobulinas. Entre os 40 soros de PCM examinados, a maioria tinha níveis normais de anticorpos naturais. Todavia, 30% dos pacientes crônicos apresentavam aumentos de pelo menos uma especificidade de anticorpo natural, tal como antiactina, antimiosina e antiGal. Na forma juvenil os anticorpos antiactina estavam aumentados de 2,4 vezes (1,9 a 5,3 vezes), sugerindo uma associação com a doença disseminada. lmunocomplexos foram pesquisados nos soros de PCM utilizando a técnica de precipitação com polietileno glicol 6000. Nos imunocomplexos Isolados foram encontrados principalmente anticorpos específicos para antígenos solúveis de P. brasiliensis / Abstract: Using ELISA technique, natural antibodies against self and non self antigens were determined in 80 patients chronically intected by T. cruzi and 40 individuals suffering from a deep mycosis frequentely found in Latin Amarica (Paracoccidioidomycosis - PCM). Two forms of PCM were investigated: adult forms and juvenil type of disease. Eighty percent (80%) of the former group had significantly elevated anti-laminin antibody levels (M=4.7,SD±1.8) compared with healthy controls and different specificities of antibody were associated with anti-laminin in pathological sera. A notable binding to cytoskeletal proteins was observed, specially with band 3 and their peptides derivates, such as 62 kDa peptide. By means of Protein A chromatography we were able to show that natural anti-Gal antibodies may be bound by their Fab region to other immunoglobulins and/or to Protein A by alternative sites of binding. The finding of lgG anti-Gal antibodies in circulating immune complexes isolated from chagasic sera supported the first alternative. However, it is possible that some of lgG anti-Gal antibodies, belong to VH111 subgroup of immunoglobulins, that bind directly to Protein A. Among the 40 sera from PCM examined, the majority was considered as not exhibiting a signilicantly higher binding than normal sera to antigens tested. However thirty percent (30%) of the chronic patients had an increased levels of natural antibodies at least for one specificity such as actyn, myosin and Gala1,3Gal epitopes. ln juvenil type of PCM the mean value found for actyn was also increased 2,42 (range 1,0 to 5,3). Utilizing the polyethylene glicol precipitation the presence of circulating immune complexes was investigated in PCM sera. Specific antibodies for soluble antigens from P. brasiliensis and natural antibodies against myoglobin, myosin and Gala1,3 Gal epitopes were characterized

OBJETIVO: Determinar a freqüência da pneumonia adquirida na comunidade (PAC) por pneumococo, através do teste de detecção de antígeno urinário para Streptococcus pneumoniae em adultos imunocompetentes hospitalizados. Avaliar rendimento de exame de escarro e hemoculturas, bem como descrever aspectos clínicos, radiológicos, epidemiológicos e prognósticos associados à PAC. MÉTODOS: Durante um período de 17 meses, foram estudados, prospectivamente, 30 pacientes consecutivos com diagnóstico de PAC. RESULTADOS: Dezessete (57%) pacientes eram homens, a idade média foi de 49 anos, 14 (48,3%) apresentavam comorbidades, 17 (57%) pertenciam às classes IV e V de Fine e 11 (36,7%) pacientes foram admitidos em unidade de terapia intensiva (UTI). Um agente etiológico foi identificado em 19 dos 30 casos (63%). O Streptococcus pneumoniae foi identificado em 14 casos(47%) e representou 74% dos diagnósticos etiológicos obtidos. O teste imunocromatográfico de membrana (BINAX NOW) identificou S. pneumoniae em 11 dos 30 casos (36,7%), e foi positivo em 33% dos casos de etiologia desconhecida através de métodos convencionais de escarro e hemoculturas. O uso de antimicrobianos previamente à admissão hospitalar ocorreu em 31% dos casos e foi significativamente associado com etiologia desconhecida. Teste imunocromatográfico de membrana não foi afetado pelo uso de antibióticos previamente à admissão hospitalar e pacientes com teste positivo tiveram maior tempo de permanência hospitalar. CONCLUSÕES: Em nosso estudo, o teste de detecção de antígenos urinários para S. pneumoniae (BINAX NOW) demonstrou ser um instrumento diagnóstico útil na avaliação de pacientes com pneumonia adquirida na comunidade causada por penumococo. / PURPOSE: The aim of this study was to determine the frequency of pneumococcal community-acquired pneumonia by using the Binax NOW Streptococcus pneumoniae urinary antigen test in immunocompetents adults patients admitted to the hospital. To evaluate the performance of sputum and blood cultures to determine the pneumococcal etiology. To describe the clinical, epidemiological, radiological and prognostic features. METHODS: During a 17-month period, all consecutive patients with clinical and radiological diagnosis of CAP were prospectively enrolled in the study. RESULTS: The study group consisted of 30 patients (17 males and 13 females). The mean age of the patients was 49 years; most patients had underlying diseases (14 patients, 48,3%), 17 (57%) patients belonged to IV and V Fine Index, and 11 (36,7%) patients were admitted to intensive care unit (ICU). An etiologic agent was identified in 19 cases (63%). Streptococcus pneumoniae was identified in 14 patients (47%) and was accounts for 74% of cases where an etiologic diagnosis was made. The immunochromatographic test (BINAX NOW) was positive in 11 patients (36,7%) and recognized 33% of the cases in whom no pathogen was identified by conventional methods. Prior antimicrobial treatment was observed in 31% of cases, and was significantly associated with unknown etiology. In contrast, BINAX NOW antigen assay performance was not affected by prior antibiotic therapy. Patients with a positive immunochromatographic test were significantly associated with most prolongated hospital stay. CONCLUSIONS: In our study, urinary antigen test for detection of Streptococcus pneumoniae (BINAX NOW), proved to be a useful diagnostic tool in the evaluation of the patients with pneumococcal community-acquired pneumonia.

Seminario de Título entregado a la Universidad de Chile en cumplimiento parcial de los requisitos para optar al Título de Ingeniería en Biotecnología. / El cáncer de vesícula biliar (CVB) es una enfermedad poco frecuente a nivel mundial, no obstante, países como India, Japón y Chile poseen una elevada tasa de incidencia. En nuestro país, el CVB representa una de las principales causas de muerte por cáncer en mujeres, particularmente en la etnia Mapuche. Los principales factores de riesgo se asocian con la colelitiasis, el género y factores genéticos. Debido a que sus síntomas son inespecíficos en estadios tempranos, esta enfermedad posee un mal pronóstico al momento del diagnóstico. Los tratamientos actuales son la cirugía y la quimioterapia, ambos ineficaces en estadios avanzados. Debido a lo anterior, se hace necesario profundizar el conocimiento acerca de las características del cáncer de vesícula biliar con el fin de desarrollar terapias más eficaces. Una estrategia reportada en varias publicaciones ha sido la búsqueda e identificación de marcadores moleculares que han sido descritos como antígenos asociados a tumor (AAT) en otros cánceres, debido principalmente a que se ha demostrado su presencia en la tumorigénesis y progresión tumoral, por lo que pueden ser utilizados como blancos para dirigir inmunoterapias antitumorales. De esta forma, en esta tesis planteamos que la expresión de los marcadores moleculares; erbB2, Survivina, MAGE1, MUC1, CEA, WT1 y CA19-9 se correlaciona positivamente con el progreso de la enfermedad en los distintos estadios de pacientes chilenos con CVB y podrían constituir candidatos como blancos terapéuticos en el CVB. Para ello se determinó mediante inmunohistoquímica la expresión de cada uno de estos AAT mencionados en biopsias de tumores de 16 pacientes con diversos estadios de CVB. Nuestros resultados mostraron que un alto porcentaje de las biopsias de pacientes con CVB expresan los diferentes AAT: erbB2 (14/16), Survivina (14/16), MAGE1 (14/16), MUC1 (12/16), CEA (11/16), CA19-9 (11/16) y WT1 (14/16). Además, observamos que la expresión de los AAT evaluados es independiente del estadio en que se encontraban los pacientes. Por último, se observó que la expresión de CA19-9 en tumores se asociaría una mayor sobrevida post-diagnosis en pacientes con CVB, aunque este hallazgo debe ser confirmado estadísticamente. Esta tesis constituye un aporte en el estudio de la expresión de AAT en CVB en pacientes. Por otro lado, los resultados obtenidos, si se confirman en un número mayor de pacientes, nos permitirían proponer a los AAT estudiados como posibles blancos terapéuticos contra CVB, ya sea utilizándolos como fuentes de antígenos en inmunoterapias celulares o a través de su inhibición mediante la utilización de anticuerpos monoclonales. / Gallbladder cancer (CVB) is a rare disease worldwide, however, countries such as India, Japan and Chile have a high incidence rate. In our country, the CVB represents one of the main causes of cancer death in women, particularly in the Mapuche ethnic group. The main risk factors are associated with cholelithiasis, gender and genetic factors. Because its symptoms are nonspecific in early stages, this disease has a poor prognosis at the time of diagnosis. The current treatments are surgery and chemotherapy, both ineffective in advanced stages. Due to the above, it is necessary to deepen the knowledge about the characteristics of gallbladder cancer in order to develop more effective therapies. A strategy reported in several publications has been the search and identification of molecular markers that have been described as tumor-associated antigens (AAT) in other cancers, mainly because their presence in tumorigenesis and tumor progression has been previously demonstrated. For this reason, they can be used as targets to direct anti-tumor immunotherapies. In this way, we propose that the expression of molecular markers; erbB2, Survivina, MAGE1, MUC1, CEA, WT1 and CA19-9 correlate positively with the progress of the disease in the different stages of Chilean patients with CVB and could constitute candidates for ATT also for the CVB. To do this, the expression of each of these mentioned AATs was determined in tumor biopsies of 16 patients with different stages of CVB using immunohistochemistry. Our results showed that a high percentage of biopsies from patients with CVB express the different AATs: erbB2 (14/16), Survivin (14/16), MAGE1 (14/16), MUC1 (12/16), CEA (11 / 16), CA19-9 (11/16) and WT1 (14/16). In addition, we observed that the expression of evaluated TAA is independent of the stage in which the patients were. Finally, it was observed that the expression of CA19-9 in tumors would be associated with greater post-diagnosis survival in patients with CVB, although this finding must be confirmed statistically. This thesis constitutes a contribution in the study of the expression of AAT in CVB in patients. On the other hand, obtained results, if confirmed in a larger number of patients, would allow us to propose the TAA studied as possible therapeutic targets against CVB, either using them as antigen sources in cellular immunotherapies or through their inhibition by using of monoclonal antibodies.

Orientador: Sofia Rocha Lieber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-23T05:57:47Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beck_SandraTrevisan_M.pdf: 8682564 bytes, checksum: 567844e2e230e3234538dc17848ea7b0 (MD5) Previous issue date: 1998 / Resumo: Convencionalmente, a sensibilização aos antígenos HLA é definida pelo nível de reatividade do soro do paciente contra painel de linfócitos de pelo menos 30 indivíduos HLA distintos, empregando-se o método de citotoxicidade dependente de complemento (COC). A necessidade de obtenção de linfócitos viáveis torna o método difícil de ser processado num curto espaço de tempo. O presente trabalho teve por objetivos: a padronização do método CELlSA, passível de automação, utilizando-se suspensões desidratadas de linfócitos T, armazenadas em microplacas a -20°C; e a avaliação de sua sensibilidade e especificidade em relação ao método de COC e potencializado com antigamaglobulina humana (COC-AGH). Partindo de soros controles HLA-positivos e HLA-negativos, foram avaliados os seguintes pontos: tipo de placas poliestireno disponíveis no mercado; tampões bloqueadores de sítios inespecíficos; concentração do conjugado e métodos de tratamento do soro, descritos a seguir. Com o uso de solução bloqueadora constituída de tampão TRIS/HCL (pH 7,6), 0,1% de Triton-X-100, 1% de soro de coelho e 3% de leite em pó desnatado, os três tipos de placas avaliadas mostraram resultados semelhantes. Recomenda-se portanto, o uso de SX104 linfócitos por escavação (SOµ I de 1X106/PBS), devido ao fato de que concentrações maiores resultaram em aumento de reações inespecíficas e concentrações menores diminuíram a sensibilidade do teste. Antes da realização dos testes, as amostras de soro devem ser previamente congeladas, posteriormente tratadas com trombina e centrifugadas, pois soros de alguns pacientes com desordem de coagulação, apresentam restos de fibrina, mesmo após a retração do coágulo, levando a resultados falsos-positivos. A comparação de 226 provas cruzadas revelou 75,2 % de concordância entre os métodos CELlSA e COC e 81,4% entre os métodos CELlSA e COC-AGH, utilizando-se soros de gestantes no primeiro trimestre de gestação e pacientes renais crônicos politransfundidos. Em relação à boa ou à má evolução do enxerto renal, não foi possível avaliar a relevância de aloanticorpos detectados pelos métodos CELlSA ou COC-AGH, devido ao pequeno número de pacientes transplantados, incluídos no estudo. Finalmente conclui-se que o método de CELlSA se mostrou útil para a pesquisa de anticorpos anti-linfocitários, com sensibilidade compatível com o método COC potencializado por AGH. Entretanto, anticorpos da classe IgM ou de baixa avidade não seriam detectados pelo método CELlSA. Este fato, porém, não invalida o objetivo proposto, de determinação do nível de RCP na amostra pré-transplante. O método também pode ser empregado, rotineiramente, para acompanhar a evolução da RCP em amostras de soro de pacientes renais crônicos, colhidas ao longo do tempo. Quando não for possível a caracterização das especificidades, recomenda-se a realização da RCP pelo método COC-AGH, que, embora mais trabalhoso e dependente de células viáveis, é, como o CELlSA, nitidamente mais sensível que o método COC clássico / Abstract: Conventionally, HLA allosensitization is defined by the reactivity levei of the patient's serum against a panel of Iymphocytes of at least 30 distinct HLA individuais (RCP), by the classic complement Iymphocytotoxicity assay (COC). This method is difficult to process in a short period of time due to the need of obtainig viable Iymphocytes. The aim of the presente work was to standardize the CELlSA method, with possible automation, using dehydrated suspensions of T Iymphocytes, stored on microplates at -200 and to evaluate their sensitivity and specificity for COC and potencialized with human antiglobulin (COC-AHG). Based on HLA positive and HLA negative control sera, the following topics were evaluated: types of microtiter plates available on market, blocking buffers for undetermined sites, conjugate concentration and serum treatment methods. When a blocking solution composed of TRIS-HCL(pH 7,6), 0,1% Triton-x-100, 1% rabbit serum and 3% non fat milk powder, was used the tree types of plates which were evaluated presented similar results. We recommend the use of 5x104 Iymphocytes per well (SOµ of 1x1061PBS), as higher concentration resulted in an increase in non specific reactions and lower concentration a decrease the sensibility of the test. Sefore the tests are carried out, the serum samples should be frozen, and afterwards treated with thrombin and centrifuged, due to the fact that serum of some patients with coagulation disorders may present fibrin clots even after clot retraction, and this could lead to false positive results. The comparison of 226 crosmatches tests revealed that there was a concordance of 75,2% between CELlSA and COC methods and a of 81,4% between CELlSA and COC-AHG methods, using the serum of pegnant women in the first trimester and of poli-transfused chronic renal patients. It was not possible to evaluate the relevance of the all oantibodies detected by CELlSA and COG.AGH methods in graft outcome due to the small number of transplanted patients included in this stud. Finally we conclude that the CELlSA method was useful in the detection of Iymphocyte alloantibodies, presenting an equivalent sensitivity to the potencilized COC method (AHG protocol). However IgM class antibody or low affinity antibodies would not be detected by the CELlSA method, this fact though, does not invalidate the purpose of this work, which was the determination of the RCP level in pre-transplantation samples. The method can be used, routinely, to follow-up the evolution of RCP in the serum samples of chronic renal patients, collected at different times. When the identification of HLA specificities is not possible, we recommend to perform RCP using the COG.AHG method, which in spite of being laborious and dependent on viable cells, is, as CELlSA , clearly more sensitive than the classic COC method / Mestrado / Fisiologia / Mestre em Ciências Biológicas