Orientadora : Profa. Dra. Marilis Dallarmi Miguel / Coorientador : Prof. Dr. Obdulio Gomes Miguel e Profa.Dra. Deise Prehs Montrucchio / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa: Curitiba, 09/06/2017 / Inclui referências : f. 118-133 / Resumo: O objetivo deste trabalho foi realizar isolamento de compostos e avaliação do potencial biológico e farmacológico da espécie Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl. (Scrophulariaceae), conhecida popularmente como verbasco ou barbasco, encontrada, principalmente, na região sul do Brasil, é usada na medicina tradicional como anti-hemorroidal, antitussígena, analgésica, sudorífera, emoliente e antireumática. Foram isolados compostos das frações hexânica das raízes e acetato de etila das partes aéreas. O método analítico de quantificação do marcador verbascosídeo foi validado, utilizando-se o extrato bruto das partes aéreas. As atividades larvicida sobre Aedes aegypti e alelopática sobre a germinação e crescimento de Lactuca sativa L. e Allium cepa L. foram avaliadas com extratos brutos e frações das partes aéreas e raízes. O potencial antioxidante dos extratos brutos foi avaliado através dos ensaios de captura dos ânions superóxido e óxido nítrico. As atividades farmacológicas antinociceptiva, anti-inflamatória, gastroprotetora, motilidade gastrointestinal e a toxicidade subcrônica foram avaliadas com o extrato bruto das partes aéreas em camundongos Swiss. O composto isolado da fração hexânica das raízes foi identificado como ácido triacontanoico e a mistura de isômeros isolada da fração acetato de etila das partes aéreas foi identificado como martinosídeo (trans e cis). Os extratos brutos das partes aéreas e raízes foram capazes de capturar o ânion superóxido e mais eficazes na inibição do radical óxido nítrico do que o padrão ácido gálico. Algumas frações e extratos brutos apresentaram efeitos inibitórios e estimulantes na germinação e crescimento de Lactuca sativa L. e Allium cepa L. e toxicidade sobre as larvas de Aedes aegypti. O extrato bruto das partes aéreas, nas doses de 600 e 900 mg/kg, apresentou efeito anti-inflamatório em 3 e 4 horas no teste de edema de pata induzido por carragenina e diminuição da migração de leucócitos na cavidade peritonial no teste de peritonite induzida por carragenina. Nos testes antinociceptivos, formalina e ácido acético, o extrato bruto apresentou potencial analgésico nas doses de 600 e 900 mg/kg e demonstrou significativo efeito protetor sobre a úlcera gástrica induzida por etanol acidificado. Não teve ação sobre a motilidade gastrointestinal. O extrato na dose de 900 mg/kg apresentou baixa toxicidade no teste subcrônico avaliado em camundongos fêmeas. Estes efeitos podem estar relacionados aos compostos fenilpropanoides, que possuem propriedades antioxidantes e são capazes de inibir enzimas e mediadores inflamatórios. Devido ao potencial farmacológico e antioxidante observado para a espécie Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl, torna-se interessante a realização de testes para comprovar sua segurança e eficácia, para futuro desenvolvimento de um fitoterápico. Palavras-chave: Aedes aegypti. Antioxidante. Anti-inflamatório. Antinociceptivo. Gastroprotetor. Motilidade gastrointestinal. / Abstract: The objective of this work was to isolate compounds and evaluate the biological and pharmacological potential of Buddleja stachyoides Cham. & Schlitdl. (Scrophulariaceae), popularly known as mullein or barbasco, found mainly in southern Brazil, is used in traditional medicine as anti-hemorrhoidal, antitussive, analgesic, sudorific, emollient and antirheumatic. Compounds of the hexane fractions of the roots and ethyl acetate of the aerial parts were isolated. The analytical method of quantification of the verbascoside marker was validated, using the crude extract of the aerial parts. The larvicidal activities against Aedes aegypti and allelopathic on the germination and growth of Lactuca sativa L. and Allium cepa L. were evaluated with crude extracts and fractions of the aerial parts and roots. The antioxidant potential of the crude extracts was evaluated through the superoxide anion and nitric oxide capture assays. The antinociceptive, anti-inflammatory, gastroprotective, gastrointestinal motile and subchronic toxicity activities were evaluated with the crude extract of the aerial parts in Swiss mice. The compound isolated from the hexane fraction of the roots was identified as triacontanoic acid and the mixture of isomers isolated from the ethyl acetate fraction of the aerial parts was identified as martynoside (trans and cis). The crude extracts of the aerial parts and roots were able to capture the superoxide anion and more effective in inhibiting the nitric oxide radical than the standard gallic acid. Some crude fractions and extracts had inhibitory and stimulating effects on the germination and growth of Lactuca sativa L. and Allium cepa L. and toxicity against Aedes aegypti larvae. The crude extract of the aerial parts, at doses of 600 and 900 mg/kg, showed anti-inflammatory effect in 3 and 4 hours in the paw edema test induced by carrageenan and decreased leukocyte migration in the peritoneal cavity in the induced peritonitis test by carrageenan. In the antinociceptive, formalin and acetic acid tests, crude extract showed analgesic potential at doses of 600 and 900 mg/kg and showed a significant protective effect on gastric ulcers induced by acidified ethanol. It had no action on gastrointestinal motility. The extract at the dose of 900 mg/kg showed low toxicity in the subchronic test evaluated in female mice. These effects may be related to phenylpropanoid compounds, which have antioxidant properties and are capable of inhibiting inflammatory enzymes and mediators. Due to the pharmacological and antioxidant potential observed for the species Buddleja stachyoides Cham. & Schltdl, it is interesting to carry out tests to prove its safety and efficacy, for the future development of a herbal medicine. Key-words: Aedes aegypti. Antioxidant. Anti-inflammatory. Antinociceptive. Gastroprotective. Gastrointestinal motility.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-04-20Bitstream added on 2014-06-13T19:45:09Z : No. of bitstreams: 1 rodello_l_dr_botfmvz.pdf: 811998 bytes, checksum: 326e99e01eaabf8835bc27b587a40a8c (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Objetivou-se estudar as implicações da redução na proporção de gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite e testar a prevenção do estresse oxidativo utilizando os antioxidantes Trolox®, Catalase ou Glutationa no processo de criopreservação de sêmen ovino. No Experimento 1, determinou-se o efeito da redução na proporção da gema de ovo no meio diluidor Glicina-Gema-Leite, utilizando-se quatro ejaculados de cada carneiro das raças Santa Inês (n=4) e Dorper (n=4), colhidos por meio de vagina artificial. Após as avaliações macro e microscópicas, o sêmen foi mantido sob temperatura de 32oC e diluído para atingir-se concentração de 400 x 106 espermatozóides/mL no meio Glicina- Gema-Leite contendo 20% (GGL20), 15% (GGL15), 10% (GGL10) ou 5% (GGL5) (v/v) de gema de ovo. O sêmen foi envasado em palhetas de 0,25 mL, e em seguida, as amostras foram refrigeradas e congeladas em sistema com controle automatizado. A descongelação foi feita em banho-maria à 40oC/20 segundos. A cinética espermática foi determinada em sistema computadorizado de análise de sêmen (CASA) e a integridade total das membranas espermáticas pela combinação dos fluorocromos diacetato de carboxifluoresceína (DIC) e iodeto de propídio (IP). Na análise pósdescongelação, as motilidades total (MT) e progressiva (MP) nos tratamentos GGL10 e GGL5 foram maiores (P<0,05) do que no GGL20. A VAP foi menor em GGL20 dos demais meios (P<0,05) e a VSL foi maior em GGL5 do que em GGL20 (P<0,01). A VCL e o ALH apresentaram maiores valores no GGL10 e GGL5 do que no GGL15 e GGL20 (P<0,01). O BCF no GGL5 foi maior (P<0,05) do que nos demais diluidores e o sêmen criopreservado nos meios GGL10 e GGL5 apresentaram maior percentual de espermatozóides com membranas íntegras do que no meio GGL20 (P<0,05). Frente aos resultados obtidos, o GGL5 foi utilizado como meio base no experimento seguinte. No Experimento 2,... / The objective of the study was the implications of the reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-Yolk-Milk and to test the prevention of oxidative stress using antioxidants Trolox, Catalase or glutathione in the process of cryopreservation of ovine semen. In Experiment 1, we determined the effect of reduction in the proportion of egg yolk in the extender Glycine-yolk-milk, using four ejaculates from each ovine of Santa Inês breed (n=4) and Doper breed (n=4), collected using artificial vagina. After the assessment, macro and microscopic, semen was kept at a temperature of 32oC and diluted to achieve concentrations up to 400 x 106 sperm / mL in the extender Glycine-yolk-milk containing 20% (GGL20), 15% (GGL15), 10% (GGL10) ou 5% (GGL5) (v/v) of egg yolk. The semen was stored in straws of 0.25 mL, and then, samples were refrigerated and frozen in system with automated control. Thawing was done in a water bath to 40oC/20 seconds. The kinetics was determined in sperm computerized semen analysis (CASA) and the overall integrity of sperm membranes by the combination of fluorochromes carboxyfluorescein diacetate (DIC) and propidium iodide (IP). In analyzing post-thawing, motilities total (MT) and progressive (MP) in the treatments GGL10 and GGL5 were higher (P <0.05) than in GGL20. The VAP was lower in GGL20 of other means (P <0.05) and VSL was higher in GGL20 than in GGL20 (P <0.01). The VCL and ALH showed higher values in GGL10 and GGL5 than in GGL15 and GGL20 (P <0.01). The BCF in GGL5 was higher (P <0.05) than in the other extenders and cryopreserved semen in the environments GGL10 and GGL5 showed higher percentages of spermatozoon with intact membranes than in the extender GGL20 (P <0.05). Given our results, the GGL5 was used as a base extender in the experiment following. In Experiment 2, ...(Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2015-07-13T12:10:22Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-16. Added 1 bitstream(s) on 2015-07-13T12:25:19Z : No. of bitstreams: 1 000836384.pdf: 412403 bytes, checksum: 5c3371fcf3a2491bbc23d94ad1d0711f (MD5) / O tom avermelhado de alguns peixes age como um fator distintivo em relação ao pescado convencional de carne branca, agregando valor e propiciando o surgimento de um novo produto. Por esse motivo, o estudo de fontes pigmentantes para utilização em dietas de peixes de importância econômica é assunto de considerável interesse para a aquicultura e a indústria de alimentos. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de diferentes fontes de carotenoides adicionados à ração de tilápias sobre o desempenho zootécnico e as características de qualidade dos filés. Novecentas e sessenta tilápias (Oreochromis niloticus) pesando entre 10 - 30 g foram distribuidas em 24 tanques e, após um período de adaptação, receberam as rações experimentais durante 80 dias. Os tratamentos foram constituídos de um grupo controle, correspondente a uma dieta basal sem aditivos pigmentantes, um grupo contendo astaxantina e quatro grupos contendo diferentes concentrações da biomassa de Rubrivivax gelatinosus como aditivo pigmentante. As variáveis analisadas incluíram consumo de ração, ganho de peso e conversão alimentar aparente das tilápias e pH, composição centesimal, concentração de carotenoides e cor dos filés. Os índices zootécnicos não diferiram estatisticamente, indicando que o uso dos pigmentantes não causou prejuízo ao desempenho produtivo. Os teores de umidade dos grupos que receberam pigmentantes foram inferiores aos encontrados nos filés do grupo controle, sendo este resultado relevante para a estabilidade microbiológica. O teor proteico dos filés dos grupos suplementados com biomassa bacteriana foi superior ao do grupo controle e os valores de pH, cinzas e lipídeos não variaram entre os tratamentos. A luminosidade e a intensidade de amarelo dos filés não diferiram entre os grupos e todos os tratamentos contendo pigmentantes provocaram aumento na intensidade...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / The reddish hue of some fish acts as a distinctive factor from traditional white flesh, adding value to the product and providing a new product to consumer market. Because of that, the investigation on pigmenting sources for the diets of fish with economic importance is a matter of great interest for aquaculture and food industry. The aim of this work was to evaluate the effects of different carotenoids sources in tilapia fish diets on animals' performance and fillets characteristics. Nine hundred sixty tilapias (Oreochromis niloticus) weighing 10 - 30 g were distributed in 24 tanks and, after an adaptation time, they received the experimental diets for 80 days. Treatments consisted of one control group receiving a basal diet with no pigment, one group receiving asthaxanthin and four groups receiving different concentrations of Rubrivivax gelatinosus biomass as the pigmenting ingredient. Variables analyzed included feed consumption, weight gain and feed conversion for the animals and pH, proximate composition, carotenoids content and color for the fillets. Productive parameters did not differ statistically, showing that the use of the pigments did not cause any damage to animals' performance. Moisture contents of the fillets from the groups that received pigments were lower than those in the fillets from control group, what represents an important factor for the product conservation. The protein contents of the fillets from diets supplemented with the bacterial biomass were higher than those in control group while pH, ash and lipids did not vary among treatments. Lightness and yellowness did not differ among the groups but redness and carotenoids contents were higher for the fillets from all groups that received the pigments than for the control group. So, it can be concluded that the use of the pigmenting ingredients did not alter productive parameters but increased...(Complete abstract eletronic access below)

Made available in DSpace on 2015-08-20T17:10:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-27. Added 1 bitstream(s) on 2015-08-20T17:25:53Z : No. of bitstreams: 1 000840367_20160601.pdf: 108814 bytes, checksum: 71703ce0ff9e91fa2739e86d0b3b6a4b (MD5) Bitstreams deleted on 2016-06-02T14:22:25Z: 000840367_20160601.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2016-06-02T14:23:08Z : No. of bitstreams: 1 000840367.pdf: 636107 bytes, checksum: 8ac9a4b0c7f07da9a4cd86bede060d5a (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / O consumo regular de frutas, hortaliças e grãos com altos teores de substâncias antioxidantes, como os compostos fenólicos, vitamina C e Carotenoides, tem sido associado a diversos benefícios à saúde humana. Sua presença na alimentação pode auxiliar na proteção do organismo contra o estresse oxidativo, evitando e prevenindo assim, uma série de distúrbios crônico-degenerativos. Em vegetais pode ocorrer variação no conteúdo de compostos bioativos, dependendo da variedade genética, condições de cultivo, clima, estádio de maturação e fatores de pós-colheita. O objetivo deste trabalho foi avaliar três cultivares de alface (Lactuca sativa L.), sendo elas a alface americana, crespa e lisa, e também três variedades de condimentos, sendo eles o coentro (Coriandrum sativum L.), a salsa (Petroselinum crispum, (Mill.) Nym.) e a cebolinha (Allium fistulosum L.) cultivados em dois períodos quanto ao conteúdo de compostos fenólicos totais (CFT), capacidade antioxidante total (CAT), ácidos fenólicos e flavonoides, clorofilas e Carotenoides. Três lotes de cada amostra foram adquiridos no comércio local de Araraquara-SP em dois períodos de cultivo: agosto de 2013 [1º período]; e janeiro/fevereiro de 2014 [2º período] e suas folhas (partes comestíveis) foram secas para as determinações. As análises foram realizadas individualmente em triplicata e os resultados expressos em média ± desvio padrão. O coentro, a alface lisa e a alface crespa apresentaram teores elevados de CFT e CAT. Poucas hortaliças apresentaram diferença entre o período de cultivo nas análises realizadas, com destaque para o coentro. O teor de clorofila total dos condimentos foi maior nas amostras analisadas no 2º período. Entre as três variedades de alface, a alface crespa apresentou os maiores teores de CFT e CAT enquanto que a alface americana apresentou os menores. Conclui-se que é de grande importância o conhecimento dos diferentes... / Regular consumption of fruits, vegetables and grains rich in antioxidants, such as phenolic compounds, vitamin C and carotenoids, has been associated with many benefits to human health. His presence in the diet can help in protecting the body against oxidative stress, avoiding and preventing so, a number of chronic degenerative disorders. In plants there can be variations in the content of bioactive compounds, depending on the genetic variety, growing conditions, climate, maturity stage and postharvest factors. The objective of this study was to evaluate three lettuce cultivars (Lactuca sativa L.), which were the lettuce american, curly and smooth, and also three varieties of condiments, coriander (Coriandrum sativum L.), parsley (Petroselinum crispum (Mill.) Nym.) and spring onion (Allium fistulosum L.) cultivation in two periods on the content of phenolic compounds (TPC), total antioxidant capacity (TAC), phenolic acids and flavonoids, chlorophyll and carotenoids. Three lots of each sample were acquired in the local market of Araraquara-SP in two cultivation periods: August 2013 [1º period]; and January/February 2014 [2º period] and its leaves (edible parts) were dried for determination. Analyses were performed individually in triplicate and the results expressed as mean ± standard deviation. Coriander, Smooth lettuce and Curly lettuce showed high levels of and TAC. Few vegetables showed differences between the cultivation period in the analyzes, especially coriander. The total chlorophyll content of condiments was higher in the samples analyzed in the 2º period. Among the three varieties of lettuce, the curly lettuce showed the highest TPC and TAC levels while the cabbage lettuce had the lowest. It follows that it is of great importance to know the different bioactive compounds present in the vegetables and the variation of their content in the analyzed cultivation ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-06-26Bitstream added on 2014-12-02T11:21:12Z : No. of bitstreams: 1 000792910.pdf: 4471223 bytes, checksum: 7984f0cbb04487dc2bf9eb6779ba8d2f (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Estudos anteriores demonstraram que o tratamento de ratos diabéticos com 90 mg de curcumina/kg de peso corporal (pc) incorporada ao iogurte, durante 31 dias, melhorou diversos parâmetros fisiológicos e bioquímicos alterados no diabetes, em relação aos animais diabéticos tratados somente com água ou iogurte. Contudo, a baixa biodisponibilidade da curcumina tem estimulado a investigação de alternativas para melhorar seu efeito farmacológico. Também tem sido demonstrado que a piperina promove aumento na biodisponibilidade de determinados fármacos, quando co-administrados por via oral, inclusive da própria curcumina. O objetivo deste estudo foi investigar as atividades antidiabética e antioxidante da curcumina (90 mg/kg pc) isoladamente ou em associações com piperina (20 ou 40 mg/kg pc) incorporada em iogurte, em ratos diabéticos induzidos por estreptozotocina (STZ). Ratos machos (10 animais/grupo) em modelo de diabetes estreptozotocínico foram tratados por via oral durante 45 dias com: iogurte (DIOG); com insulina (4U/dia, DINS, via subcutânea); 90 mg de curcumina/kg pc incorporada em iogurte (DC90), 20 ou 40 mg de piperina/kg pc (DP20 e DP40, respectivamente) e associações de 90 mg de curcumina/kg pc e 20 ou 40 mg de piperina/kg pc (DC90P20 e DC90P40, respectivamente). Os parâmetros fisiológicos: peso corporal, consumo de ração. ingestão hídrica e volume urinário e parâmetros bioquímicos: glicemia, glicosúria, ureia urinária e proteinúria foram analisados semanalmente, enquanto os parâmetros relacionados ao perfil lipídico (triacilgliceróis, colesterol total e colesterol-HDL) e de função hepática (ALT, AST e ALP) foram analisados quinzenalmente. Após a eutanásia, também foram removidos e pesados os músculos esqueléticos soleus e extensor digitorum longus (EDL), e os tecidos adiposos epididimal e retroperitoneal e ainda o fígado foi retirado para determinação da atividade de enzimas antioxidantes e de ... / Previous studies showed that the treatment of diabetic rats with 90 mg of curcumin/kg body weight (bw) incorporated into yoghurt, for 31 days, improved several physiological and biochemical parameters altered in diabetes, compared to diabetic animals treated only with water or yoghurt. However, the low bioavailability of curcumin has stimulated the research of alternatives to improve its pharmacological effect. It has also been shown that piperine promotes an increase in the bioavailability of certain drugs when co-administered orally, including curcumin. The aim of this study was to investigate the antidiabetic and antioxidant activities of curcumin (90 mg/kg bw) alone or in combination with piperine (20 or 40 mg/kg bw) incorporated into yoghurt in diabetic rats induced by streptozotocin (STZ). Male rats (10 animals/group) under estreptozotocin diabetes model were orally treated for 45 days with: yoghurt (DYOG); insulin (4U/day, DINS, subcutaneously); 90 mg/kg curcumin incorporated into yoghurt (DC90), 20 or 40 mg/kg piperine (DP20 and DP40, respectively) associations of 90 mg of curcumin/kg bw and 20 or 40 mg of piperine/kg bw (DC90P20 and DC90P40, respectively) and The physiological parameters: body weight, food and water intake and urinary volume, and the biochemical parameters: glycemia, glycosuria, proteinuria and urinary urea were analyzed weekly, while the parameters related to lipid profile (triglycerides, total cholesterol and HDL-cholesterol) and liver function (ALT, AST and ALP) were analyzed at every 15 days. After euthanasia, it were removed and weighed the skeletal muscles soleus and extensor digitorum longus (EDL) and the epididymal and retroperitoneal white adipose tissues; liver was also removed to determine the activity of antioxidant enzymes and the levels of oxidative stress biomarkers. The treatment of diabetic rats with curcumin incorporated into yoghurt improved all parameters related to this experimental model of ...

Made available in DSpace on 2014-12-02T11:16:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-03-18Bitstream added on 2014-12-02T11:21:10Z : No. of bitstreams: 1 000796853.pdf: 1085015 bytes, checksum: 720ee06f577c4d99a99e7e924fc387ec (MD5) / Os objetivos deste estudo foram avaliar os efeitos da utilização do ascorbato de sódio e alfatocoferol na dentina de dentes tratados endodonticamente, através da avaliação da resistência das coroas dentais à fratura, mensuração da formação intradentinária da camada hibrida e sua repercussão sobre a resistência de união de um sistema adesivo. No primeiro estudo, foram utilizados cinquenta incisivos bovinos endodonticamente tratados, distribuídos em cinco grupos (n = 10). Sendo, G1 controle, G2: somente restaurados com resina composta, G3: clareado com peróxido de hidrogênio a 38% e restaurado imediatamente, G4: clareado e tratado com ascorbato de sódio a 10%, G5: clareado e tratado alfatocoferol. Os espécimes foram submetidos ao teste mecânico de resistência à fratura, sendo que G1 apresentou maior resistência à fratura que os demais grupos. Não foi observada diferença estatística entre os demais grupos (p > 0,05). No segundo estudo, foram utilizados quarenta incisivos bovinos tratados endodonticamente, divididos em quatro grupos (n = 10): G1 restaurado (controle), G2 clareado e restaurado imediatamente, G3 clareado, tratado com ascorbato de sódio a 10% e restaurado imedimediata, G4 clareado, tratado com alfatocoferol 10% e restaurado imediata. O protocolo de clareamento e a utilização dos agentes antioxidantes foram iguais ao do experimento 1. Somente a porção coronária seccionada, no sentido vestíbulo-lingual de cada espécime foi utilizada para análise em microscópio laser confocal com aumento de 1024X. Os dados obtidos foram submetidos aos testes de Kruskal-Wallis e Dunn (p =0,05). A extensão intradentinária da formação da camada hibrida foi significantemente maior em G1 e G3, em relação a G2 e G4 (p < 0,05). Entre G1 e G3 e G2 e G4 não houve diferenças estatisticamente significantes (p > 0,05). No terceiro estudo, a superfície vestibular de cada espécime foi desgastada e incluída em resina... / This study evaluated the effects of sodium ascorbate and alphatocopherol on fracture resistance, mensuration of the hybrid layer formation and bond strength of an adhesive system used in endodontically treated teeth. The first study used fifty endodontically treated bovine incisors, divided into five groups (n = 10): G1: control; G2: restoration with composite resin; G3: bleaching with 38% hydrogen peroxide and immediate restoration; G4: bleaching, application of 10% sodium ascorbate and restoration; G5: bleaching, alphatocopherol application and restoration. The specimens were subjected to fracture resistance mechanical testing. The obtained data were analyzed by ANOVA and Tukey test,at significance level of 5%. G1 showed higher fracture resistance than the other groups. No statistical difference were found among other groups (p> 0.05).The second study used forty endodontically treated bovine incisors, divided into four groups (n = 10): G1: restoration; G2: bleaching and immediate restoration; G3: bleaching, use of 10% sodium ascorbate and immediate restoration; G4: bleaching, use of 10% alphatocorol and immediate restoration. The bleaching protocol and antioxidant application were similar to experiment 1. The coronal portion was sectioned at buccolingual direction and analyzed by confocal laser microscope at magnification 1024X. The data were subjected to Kruskal-Wallis and Dunn test (p = 0.05). The intradentin extension of the hybrid layer formation was significantly greater in G1 and G3 in relation to G2 and G4 (p <0.05). No statistically significant differences were found between G1 and G2 and G3 and G4 (p> 0.05). The third study used 40 specimens, divided into four groups (n = 10), similar to protocols described in experiment 2. The buccal surface of each specimen was ground and included in acrylic resin in the PVC cylinder. Composite resin cylinders were made and bonded to the underlying dentin after adhesive system application...

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade em Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2017. / Submitted by Fernanda Percia França (fernandafranca@bce.unb.br) on 2017-03-29T19:02:21Z No. of bitstreams: 1 2017_LorenaFerreiraGomes_Parcial.pdf: 226967 bytes, checksum: d00af9fafbe2e2bd391079ffd56e7e47 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana(raquelviana@bce.unb.br) on 2017-04-18T18:33:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2017_LorenaFerreiraGomes_Parcial.pdf: 226967 bytes, checksum: d00af9fafbe2e2bd391079ffd56e7e47 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-18T18:33:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2017_LorenaFerreiraGomes_Parcial.pdf: 226967 bytes, checksum: d00af9fafbe2e2bd391079ffd56e7e47 (MD5) / O Brasil possui a maior biodiversidade vegetal do mundo. Porém, apesar de tamanha riqueza, muitas espécies vegetais ainda não foram estudas química e biologicamente. Miconia chamissois (Melastomataceae) é uma espécie frequentemente encontrada no bioma Cerrado e é descrita basicamente pelos benefícios ecológicos. Seu potencial químico e biológico é pouco explorado. Assim, o objetivo desde trabalho foi estudar, preliminarmente, os compostos presentes no extrato aquoso das folhas de M. chamissois, sua ação citotóxica e atividades antioxidante, antimicrobiana e de inibição enzimática. O estudo fitoquímico foi realizado pelas técnicas de Cromatografia em camada delgada (CCD) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Os teores de polifenóis e flavonoides foram determinados com reagente de Folin e cloreto de alumínio, respectivamente. A atividade antioxidante foi avaliada pelos métodos DPPH e fosfomolibdênio. Os métodos de microdiluição em caldo e difusão em disco foram utilizados para determinação da atividade antimicrobiana frente à Staphylococcus aureus, Escherichia coli e Candida albicans. A atividade de inibição da tirosinase e α-amilase foram determinadas. A citotoxicidade do extrato foi avaliada frente às linhagens celulares de queratinócito humano (HaCat), fibroblasto de camundongo (L929) e macrófago de camundongo (Raw 264.7) pelo método do MTT. É sugerido a presença de compostos devidos da vitexina. O extrato aquoso de M. chamissois apresentou atividade antioxidante, equivalente a 18,35 μg/mL de ácido ascórbico pelo método fosfomolibdênio e IC50 de 2,91 μg/mL pelo método DPPH. Inibição do crescimento de S. aureus foi observado em ambos os métodos e a inibição do crescimento de C. albicans foi observada apenas frente ao método de microdiluição. Os valores de IC50 encontrados para a inibição da tirosinase e α-amilase foram de 183,2 e 15,06 μg/mL, respectivamente. O extrato não apresentou citotoxicidade frente às linhagens avaliadas. Os resultados encontrados sugerem potencial biológico do extrato aquoso de M. chamissois, sendo necessários mais estudos para a elucidação dos compostos presentes na espécie. / Brazil has the largest plant biodiversity in the world. However, despite such wealth, many plant species have not yet been studied chemically and biologically. Miconia chamissois (Melastomataceae) is a species frequently found in the Cerrado biome and is basically described by its ecological benefits. Its chemical and biological potential is little explored. The aim of this work was to study, preliminarily, the compounds present in the aqueous extract of the leaves of M. chamissois, its cytotoxic action and antioxidant, antimicrobial and inhibitory enzymatic activities. The phytochemical study was performed by the techniques of thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). The total polyphenols and flavonoids contents were determined with Folin reagent and aluminum chloride, respectively. The antioxidant activity was evaluated by DPPH and phosphomolybdenum methods. Broth microdilution and disk diffusion methods were used to determine the antimicrobial activity against Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans. The extract cytotoxicity was evaluated against human keratinocyte (HaCat), mouse fibroblast (L929) and mouse macrophage (Raw 264.7) cell lines by the MTT method. The presence of due vitexin compounds is suggested. The aqueous extract of M. chamissois presented antioxidant activity, equivalent to 18.35 μg/mL of ascorbic acid by the phosphomolybdenum method and presented IC50 of 2.91 μg/mL by DPPH method. Inhibition of S. aureus growth was observed in both methods and inhibition of C. albicans was observed only in the microdilution method. The IC50 values found for tyrosinase and α-amylase were 183.2 and 15.06 μg/mL, respectively. The extract did not present cytotoxicity against cell lines evaluated. The results suggest a biological potential of M. chamissois aqueous extract, and further studies are needed to elucidate the compounds present in the species.

O estresse oxidativo tem um papel importante no desenvolvimento de diferentes doenças inflamatórias agudas, mas intervenções que diminuem a geração ou os efeitos das espécies reativas de oxigênio têm papel controvérsio em modelos animais e humanos. Neste trabalho avaliamos os efeitos de uma combinação de antioxidantes (N-acetilcisteína e deferoxamina) em diferentes modelos animais de doenças inflamatórias agudas: sepse induzida por ligação cecal e perfuração (CLP), insuficiência hepática aguda e lesão pulmonar aguda. No modelo de CLP os ratos tratados com antioxidantes apresentaram uma significativa redução na atividade de mieloperoxidase (como marcador de infiltração neutrofílica) e uma menor quantidade de espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico em diferentes órgãos envolvidos na resposta à sepse.A produção mitocondrial de superóxido foi significativamente diminuída pelo tratamento antixodante. Além disto o tratamento melhora o equilíbrio entre superóxido dismutase e catalase e melhora a sobrevida dos animais submetidos a CLP. No modelo de insuficiência hepática aguda o tratamento com antioxidantes significativamente diminui o dano oxidativo hepático e no sistema nervoso central, atenua marcadores de insuficiência hepática e melhora a sobrevida dos animais. No modelo de lesão pulmonar aguda o tratamento com N-acetilcisteína e deferoxamina diminui o conteúdo de proteínas do lavado bronco-alveolar, assim como o influxo de células inflamatórias, marcadores de dano oxidativo e citocinas inflamatórias.Em conclusão, nossos dados demonstram pela primeira vez que o tratamento com N-acetilcisteína e deferoxamina é superior ao uso isolado destes antioxidantes em diferentes modelos animais de doenças inflamatórias agudas. Este efeitos é parcialmentesecundário a uma diminuição do estresse oxidativo, disfunção mitocondrial e resposta inflamatória no rato. / Oxidative stress plays an important role in the development of acute inflammatory diseases, but interventions that reduce the generation or the effects of reactive oxygen species exert controversial effects in animal models and in humans. Here we have evaluated the effects of a combination of antioxidants (N-acetylcysteine plus deferoxamine) in a murine model of polymicrobial sepsis induced by cecal ligation and puncture (CLP), in a murine model of acute hepatic failure and in a murine model of acute lung injury. In the CLP model of sepsis rats treated with antioxidants had significantly lower myeloperoxidase activity (as an index of neutrophil infiltration) and thiobarbituric acid reactive species formation in several organs involved in septic response. Mitochondrial superoxide production was significantly reduced by antioxidant treatment. Furthermore, antioxidants significantly improved the balance between catalase and superoxide dismutase activities, and improved survival to 66%. In the acute hepatic failure model, N-acetylcysteine plus deferoxamine treatment significantly attenuated hepatic and central nervous system oxidative damage, attenuated markers of hepatic failure and improves survival to 80%. In the acute lung injury model, N-acetylcysteine plus deferoxamine decreased bronchoalveolar lavage fluid protein, inflammatory cells, oxidative damage variables, and proinflammatory cytokines. In conclusion, our data provide the first experimental demonstration that N-acetylcysteine plus deferoxamine is superior to each antioxidant used alone in different animal models of acute inflammatory diseases. This effect is partially secondary to a decrease in oxidative stress, mitochondrial dysfunction and inflammatory response in the rat.

O antioxidante resveratrol, uma fitoalexina encontrada, principalmente em uvas e também em quantidades significativas em vários tipos de vinho tinto, é um promissor produto natural, com atividades antitumoral, cardioprotetora e neuroprotetora. O objetivo do presente estudo foi investigar em células de glioma C6 o efeito do resveratrol sobre proliferação celular e alguns parâmetros específicos relacionados a astrócitos (captação de glutamato, glutamina sintetase e secreção de S100B), comumente associados com o papel protetor dessas células. Além disso, foi investigado o efeito genoprotetor do resveratrol em condições de estresse oxidativo induzido por peróxido de hidrogênio (H2O2) em células C6. A proliferação celular foi significativamente reduzida após tratamento com 100 e 250 μM de resveratrol. Uma rápida incubação com resveratrol (1 h) induziu um aumento linear na captação de glutamato e na atividade da glutamina sintetase. O dano ao DNA foi medido pelo ensaio Cometa. Para investigar os efeitos do resveratrol sobre o dano ao DNA induzido por H2O2 utilizou-se dois modelos de indução de estresse oxidativo. A mudança de parâmetros gliais pode contribuir para o papel protetor de astrócitos em condições de injúria cerebral, reforçando o uso deste composto no arsenal terapêutico contra doenças neurodegenerativas e desordens isquêmicas. Resveratrol também foi capaz de prevenir o dano oxidativo ao DNA celular, provavelmente, devido a suas propriedades antioxidantes, isto pode ser importante para proteger o DNA em doenças relacionadas com estresse oxidativo. / The antioxidant resveratrol, a phytoalexin found mainly in grapes and also substantial amounts in several types of red wine, is a promising natural product with anticancer, cardio-protective and neuroprotective activities. The objective of the present study was to investigate in C6 glioma cells, the effect of resveratrol on cell proliferation, cell death and some specific parameters of astrocyte activity (glutamate uptake, glutamine synthetase and secretion of S100B) commonly associated with the protective role of these cells. Furthermore, it was investigated the genoprotective effects of resveratrol under conditions of oxidative stress induced by hydrogen peroxide (H2O2) in C6 cells. Cell proliferation was significantly decreased following treatment with 100 and 250 μM resveratrol. Short-term (1 h) of resveratrol exposure induced a linear increase in glutamate uptake and in glutamine synthetase activity. DNA damage was assessed by the comet assay. For investigate the effects of resveratrol against oxidative stress induced by H2O2 on DNA damage, two models of oxidative stress induction were used. Changes in glial activities can contribute to the protective role of astrocytes in brain injury conditions, reinforcing the use of this compound in the therapeutic arsenal against neurodegenerative diseases and ischemic disorders. Resveratrol was able to prevent oxidative damage to cellular DNA, probably, due to its antioxidant properties, it may be important in diseases for protecting against DNA damage through oxidative stress.

A dor neuropática ocorre como resultado de uma lesão ao sistema nervoso. Clinicamente, sua causa está relacionada, na maioria dos casos, ao comprometimento dos nervos periféricos, por isso a utilização de modelos animais de lesão nervosa periférica é amplamente aceita para o seu estudo. A medula espinal representa o centro de processamento primário da informação nociceptiva e a fisiopatologia da dor neuropática envolve principalmente o mecanismo de sensibilização central. Esse fenômeno é caracterizado pelo aumento na resposta das células do corno dorsal espinal aos estímulos aferentes. Diversas moléculas estão envolvidas nesse mecanismo e, recentemente, as espécies ativas do oxigênio (EAO) têm sido sugeridas como possíveis mediadores da dor neuropática. Para verificar essa relação, o presente estudo avaliou os efeitos temporais da secção do nervo ciático sobre marcadores de estresse oxidativo e nitrosativo e de defesas antioxidantes na medula espinal lombossacral de ratos, bem como a ativação da Akt. Os animais foram dividos nos grupos denervado (secção do nervo ciático), sham (o nervo foi exposto, porém, não seccionado) e controle (sem nenhum procedimento cirúrgico). Inicialmente os animais foram testados quanto à hiperalgesia térmica através do teste da placa quente. Foi demonstrado que 3 dias após a lesão, os animais sham e denervados apresentaram-se hiperalgésicos, mas aos 7 dias apenas os denervados ainda exibiam esta resposta. Aos 15 dias após a lesão, a hiperalgesia já havia sido revertida em todos os grupos estudados. As defesas antioxidantes enzimáticas foram avaliadas pela medida da atividade e da expressão das enzimas superóxido dismutase (SOD) e catalase. A atividade da catalase reduziu aos 3 e 7 dias após a cirurgia nos animais sham e denervados, e a atividade da SOD diminuiu apenas nos animais denervados no período de 7 dias após a lesão. A expressão dessas enzimas, medida por Western blot, não apresentou variações. Para a determinação de lipoperoxidação foi realizada a medida das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS), a qual não apresentou diferenças entre os grupos estudados. Esses resultados iniciais sugerem que o procedimento cirúrgico, por estimular os aferentes nociceptivos dos tecidos relacinados, é suficiente para diminuir a atividade antioxidante enzimática da medula espinal, porém, essas alterações são mais expressivas nos animais submetidos à axotomia. Após, foi realizado o estudo de outras enzimas antioxidantes, a glutationa peroxidase (GPx) e a glutationa-S-transferase (GST), e também do principal antioxidante não-enzimático, a glutationa (GSH). A atividade da GST na medula não foi alterada pela lesão nervosa, e a atividade da GPx aumentou 3 dias após a cirurgia nos grupos sham e denervado, juntamente com a redução do conteúdo de glutationa. A queda da glutationa deve ser atribuída à maior atividade da GPx, que a utiliza como substrato na redução do peróxido de hidrogênio (H2O2) a água. Nessa etapa, foi determinada ainda a expressão da óxido nítrico sintase neuronal (nNOS) e a medida dos metabólitos do óxido nítrico (NOx). A expressão da nNOS mostrou-se aumentada 7 dias após a lesão nos animais denervados. A formação de NOx foi maior nos períodos de 1, 7 e 15 dias após a axotomia. Esses resultados sustentam o envolvimento do óxido nítrico na dor neuropática. Na última parte deste trabalho foi realizada a medida da concentração do H2O2 na medula espinal, que apresentou aumento nos animais sham e denervados 1, 7 e 15 dias após a cirurgia. Também foi avaliada, por Western blot, a expressão dos adutos de Michael formados pelo 4- hidroxinonenal (HNE) e da Akt total e fosforilada. Aos 7 dias após a lesão nervosa houve um aumento na expressão da Akt total e dos adutos de Michael formados pelo HNE. A Akt fosforilada apresentou um aumento na sua expressão 1, 3 e 7 dias após a axotomia. Como o HNE é um produto da lipoperoxidação, pode-se afirmar que a lesão nervosa estimula este processo na medula espinal. A ativação da Akt, entretanto, pode ser um indicativo de proteção para as células nervosas, pois esta proteína participa de cascatas de sinalização relacionadas à sobrevivência celular. A partir do presente trabalho pode-se concluir que a estimulação nociceptiva induzida pela cirurgia causa alterações em sistemas antioxidantes como a catalase, a GSH e a GPx, bem como na produção de H2O2 na medula espinal, o que não é específico da lesão neuropática. Contudo, a dor neuropática está relacionada com a redução da atividade da SOD e o aumento na produção de HNE e de NO. Assim, após a lesão nervosa ocorre formação de EAO, as quais podem atuar como sinalizadores na modulação do processamento nociceptivo na medula espinal e, talvez, interferir em mecanismos neuroprotetores, como, por exemplo, pela ativação da Akt. / Neuropathic pain occurs as result of nervous system injury. Clinically, in almost all cases, its etiology is related to impairment of peripheral nerves. Thus, animal models of peripheral nerve injury are widely accepted to neuropathic pain studies. The spinal cord is the center of primary processing of the nociceptive information and the pathophysiology of the neuropathic pain involves mainly a central sensitization mechanism. This phenomenon is characterized by an increased response of spinal dorsal horn cells to afferent stimulus. Many molecules are involved in this mechanism and, recently, reactive oxygen species (ROS) have been suggested as putative mediators of neuropathic pain. In order to verify this relationship, the present study evaluated the temporal effects of sciatic nerve transection on oxidative and nitrosative stress markers, antioxidant defenses and Akt activation in the lumbossacral spinal cord of rats. Animals were divided in three groups: naïve, sham and sciatic nerve transection (SNT). Initially, hot plate test was performed to evaluate hyperalgesia. It was demonstrate hyperalgesia 3 days after injury in sham and SNT groups. At 7 days, only SNT animals exhibited this response and 15 days after injury the hyperalgesia was reverted in all groups. The enzymatic antioxidant defenses were evaluated by means of superoxide dismutase (SOD) and catalase activities and expression. The catalase activity was decreased at 3 and 7 days after surgery in sham and SNT group, and SOD activity was reduced only in SNT rats at 7 days after injury. No changes were observed in SOD and catalase expression, measured by Western blot. In order to evaluate lipid peroxidation (LPO), thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) were analyzed, and no differences among the groups were shown. These results demonstrated that the injury modifies antioxidant enzymatic activity in spinal cord. Afterwards, other antioxidant enzymes, glutathione peroxidase (GPx) and glutathione-S-transferase (GST) and the main non-enzymatic antioxidant, glutathione (GSH), also were studied. GST activity was not changed after nerve injury. There was an increase in GPx activity and a decrease in GSH content 3 days after surgery in both sham and SNT groups. The decrease in GSH may be attributed to the increase in GPx activity, since GSH is necessary to reduction of hydrogen peroxide (H2O2) to water catalyzed by GPx. The expression of neuronal nitric oxide synthase (nNOS) and the determination of nitric oxide metabolites (NOx) also were conducted. nNOS expression increased 7 days after SNT. NOx production was higher at 1, 7 and 15 days after axotomy. These results emphasize the involvement of nitric oxide in neuropathic pain. In the last part of this study, the measurement of H2O2 in spinal cord was conducted, showing an increase in sham and SNT animals at 1, 7 and 15 days after surgery. It was also evaluated, by Western blot, the 4-hydroxy-2-nonenal (HNE)-Michael adducts and the total and phospho-Akt. At 7 days, there was an increase in total-Akt expression and HNE-Michael adducts. Phospho-Akt expression increased 1, 3 and 7 days after axotomy. HNE is a lipid peroxidation product, thus, may be suggested that nerve injury stimulates this process in spinal cord. However, the Akt activation may be a means of protection to nerve cells, since this protein participate of signal cascades related to cell survival. In summary, the results of present study show that the peripheral nerve injury interferes in the systems related to oxidative stress, besides activate cell survival mechanisms. In conclusion, nociceptive stimulation induced by surgery causes changes in antioxidants systems such as catalase, GSH and GPx, as well in H2O2 production in spinal cord, which is not specific to neuropathic injury. However, neuropathic pain is related with SOD activity decrease and HNE and NO production increase. Thus, after nerve injury occur ROS formation which can act as signaling molecules in nociceptive processing modulation in spinal cord and, maybe, interferes in neuroprotection mechanisms, such as Akt activation.