Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2013. / Made available in DSpace on 2014-08-06T17:17:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 325597.pdf: 1891302 bytes, checksum: 73e6e93a7ecfb558a85d9aac97cd3495 (MD5) Previous issue date: 2013 / O câncer é caracterizado pelo crescimento desordenado de células anormais em tecidos e órgãos, podendo vir a espalhar-se por outras regiões do organismo. As células neoplásicas adquiriram a propriedade de proliferação além dos limites normais e de resistência à apoptose. O entendimento dos mecanismos moleculares de morte das células tumorais se faz necessário para o avanço em direção ao desenvolvimento de compostos antineoplásicos com maior citotoxicidade e maior seletividade para as células tumorais. A utilização de modelos celulares de leucemia na busca de novas terapias antitumorais torna-se interessante, uma vez que as linhagens celulares possibilitam a obtenção de resultados mais rápidos na prospecção de novos agentes antitumorais. Estudos anteriores demonstram que os sais de isotiourônio (SIs) apresentam atividade antibacteriana, antifúngica e antinflamatória, porém pouco ainda se sabe sobre uma possível atividade antitumoral. As tiazinodionas (TDs) são análogos das tiazolidinedionas, conhecidas pela atividade antihiperglicêmica já bem caracterizada e mais recentemente tem sido descrita a atividade antitumoral em diversos tipos de câncer como cólon, mama, pulmão. Diante deste cenário, o objetivo desse trabalho foi pesquisar novos potenciais agentes antileucêmicos a partir de sais de isotiourônio e tiazinodionas e investigar o mecanismo de morte celular induzida por estes compostos. Observou-se que os sais de isotiourônio MF 04, MF05, MF06, MF07 e MF08 apresentaram concentração citotóxica para 50% das células (CC50) na faixa de 3 a 12 µM com índice de seletividade = 2 para as células de leucemia. Além disso, esses compostos parecem induzir à morte celular através da indução do estresse metabólico com produção de espécies reativas de oxigênio (EROs) e perda do potencial de membrana mitocondrial. O composto MF08 que apresentou a menor CC50 e maior índice de seletividade em células de leucemia, além de causar alterações morfológicas que sugerem morte celular por mitose catastrófica. Por esse motivo, novos compostos derivados desse SI foram sintetizados, mas os mesmos apresentaram atividade inferior à molécula de origem. As tiazinodionas 1a e 1g apresentaram CC50 de 35 e 28 µM respectivamente e índice de seletividade em torno de 3. O mecanismo de morte envolvido na ação das tiazinodionas está relacionado a produção de EROs, perda de potencial de membrana mitocondrial e alteração nos níveis de cálcio intracelular sugerindo um estresse de retículo endoplasmático e ativação das caspases-12 e -3 culminando em apoptose. Considerando os compostos testados, ambas as classes mostram-se promissoras para estudos pré-clínicos.<br> / Abstract : Cancer is characterized by abnormal growth of normal cells in tissues and organs that can spread to other regions. Neoplastic cells acquired the property of proliferation beyond normal limits and apoptosis resistance. It is important to better understand the molecular mechanisms of tumoral cell death in order to promote the development of new antineoplastic compounds with higher toxicity and selectivity. Leukemia cell models in new antitumoral research are interesting due to their easy handling and feasibility. Previous studies showed that isothiouronium salts presented antibacterial, antifungal and anti-inflammatory activities, but the antitumoral activity is still unclear. The thiazinediones are thiazolidinediones analogs wich have its antihyperglycemic activity well characterized and recent studies presented their antitumoral activity in several types of cancer as colon, breast and lung. In this scenario, the aim of this work was to investigate new potential antileukemic agents by isothiouronium salts and thiazolidinediones derivatives and explore the cell death mechanism induced by them.. It was observed that isothiouronium salts MF 04, MF05, MF06, MF07 and MF08presented a range of 3 to 12µM of the cytotoxic concentration to reach 50% of cell death (CC50) and a selectivity index of = 2 to leukemia cells. Furthermore, these compounds seem to induce cell death by metabolic stress with reactive oxygen species production (ROS) and loss of mitochondrial membrane potential. Compound MF08 presented the lowest CC50 and higher selectivity index in leukemia cells and morphologic alterations suggest that it may induce mitotic catastrophe cell death pathway. Therefore novel compounds derived from MF08 where synthetized but it was observed inferior activity compared to original molecule. Thiazinediones 1a and 1g presented CC50 of 35 and 28µM respectively and selectivity index nearby 3. The mechanism of action of thiazinediones is related to ROS production, loss of mitochondrial membrane potential and calcium imbalance suggesting a endoplasmic reticulum stress and caspases -12 and 3 activation culminating in apoptosis cell death. Considering the tested compounds, both groups seem to be promising to further pre-clinical trials.

Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T05:04:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 339987.pdf: 3371871 bytes, checksum: 0236decf0594051bc0eccebfd98d80d4 (MD5) Previous issue date: 2016 / O câncer de pulmão é um dos tumores malignos mais comuns e com maior taxa de mortalidade, indicando a necessidade da busca por intervenções terapêuticas mais eficientes. As cucurbitacinas são triterpenos tetracíclicos poliidroxilados, reconhecidas como compostos com promissora atividade antitumoral. O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos antitumorais de um novo derivado semissintético da cucurbitacina B, a DACE, em esquemas de tratamento combinado com três fármacos antineoplásicos: cisplatina, irinotecano e paclitaxel, frente a uma linhagem de células de câncer de pulmão humano (A549). A DACE apresentou efeito sinérgico com todos os fármacos testados e as combinações mais efetivas induziram bloqueio da fase G2/M do ciclo celular por modular a expressão de p53 e survivina, além de induzir alterações na homeostase do citoesqueleto e morte celular via apoptose. Os tratamentos combinados inibiram completamente o potencial clonogênico das células A549, sem interferir na proliferação de fibroblastos saudáveis de pulmão humano (MRC-5). A DACE inibiu a migração e invasão das células A549, sendo que os tratamentos combinados modularam vias de sinalização relacionadas com os processos de migração celular e metástase. O efeito antiproliferativo da DACE associado com os fármacos foi potencializado pela L-butionina-sulfoximina, e atenuado pela N-acetilcisteína, indicando possível envolvimento da via oxidativa neste efeito. Os efeitos citotóxicos dos tratamentos combinados também foram reduzidos por um inibidor de caspases, indicando que a morte celular via apoptose é dependente da ação de caspases. Após esta etapa, foi selecionada a associação mais promissora [DACE+paclitaxel (PAC)] para ser testada com modelo xenográfico ectópico de tumor de pulmão com células A549. Após trinta dias da inoculação das células tumorais nos animais, pode ser observado o desenvolvimento dos tumores, os quais foram detectados e monitorados por meio de imagens cintilográficas com a administração do radioisótopo 99mTc-HYNIC-ßAla-Bombesina(7-14). Após o tratamento dos animais, foi observado que a associação DACE+PAC foi o esquema de tratamento mais promissor porque inibiu o crescimento dos tumores e reduziu a massa tumoral residual viável do tecido tumoral, em comparação com os tratamentos individualmente. Além disso, o tratamento combinado não induziu danos compatíveis com hepatotoxicidade e nefrotoxicidade. O conjunto destes dados comprova que a associação DACE+PAC exerceu ação antitumoral mais promissora, tanto in vitro como in vivo, com baixa toxicidade para tecidos não tumorais, sendo esse esquema também menos susceptível ao desenvolvimento de resistência.<br> / Abstract : In addition to the higher mortality rate, lung cancer is also one of the most common malignant tumors, which increases the need for more effective therapeutic interventions. Cucurbitacines are tetracyclic triterpenoids polyhydroxy recognized as compounds which present promising antitumor activity. The aim of this study was to evaluate the antitumor effects of a new semi-synthetic derivative of cucurbitacin B, DACE, combined with three anticancer drugs: cisplatin, irinotecan and paclitaxel, against a cell line of human lung cancer cells (A549). DACE showed synergistic effects with all drugs tested and the most active combinations induced antiproliferative effects by cell cycle G2/M arrest, modulated the p53 and survivin expression, as well as induced alterations in cytoskeletal homeostasis and led to cell death via apoptosis. The combined treatments completely inhibited the clonogenic potential of A549 cells and did not harm the cell proliferation of nontumoral human lung fibroblasts (MRC-5). DACE treatment also inhibits migration and invasion of A549 cells, and the combined treatments modulate signaling pathways related to cell migration and metastasis processes. The antiproliferative effect of DACE associated with the drugs was enhanced by L-butionine sulfoximine, and attenuated by N-acetylcysteine, indicating a possible involvement of oxidative pathway in these effects. The cytotoxic effects of the combined treatments were also reduced by a caspase inhibitor, indicating an activity caspase-dependent cell death. Therefore, the most promising combination [DACE + Paclitaxel (PAC)] was selected to be evaluated with an ectopic xenograft model of A549 lung cancer cells. Thirty days after the tumor cell inoculation in the animals, the tumor development was detected and monitored through scintigraphic images with the radioisotope 99mTc-HYNIC-ßAla-Bombesin(7-14) administration. After the treatment of the animals, the combined scheme with PAC + DACE was the most promising treatment regimen because it inhibited tumor growth and reduced residual viable tumor tissue, when compared to the individual treatments. Furthermore, the combined treatment did not induce damage compatible with hepatotoxicity and nephrotoxicity. In summary, the set of these data shows that the combined therapy with DACE + PAC showed both in vitro and in vivo most promising antitumor activity, with low toxicity to nontumor tissues, and the development of resistance to the combined treatment was less likely to occur.

Made available in DSpace on 2015-12-10T14:22:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015. Added 1 bitstream(s) on 2015-12-10T14:28:29Z : No. of bitstreams: 1 000854483.pdf: 2110105 bytes, checksum: ae3b47c9a0f96887f435022d5e4dd526 (MD5) / O Carcinoma de Próstata é frequente causa de morbi-mortalidade nas populações ocidentais, tendo alta frequência no Brasil. É a neoplasia mais comum do homem, e a segunda causa de óbito, precedido pelo câncer de pulmão. Sua incidência vem aumentando continuamente nas últimas décadas devido ao aumento da perspectiva de vida e ao estilo de vida ocidental. A apoptose é mecanismo de morte celular que ocorre em diversos processos fisiológicos. Sabe-se que neoplasias tem progressiva resistência à apoptose. Esta é regulada pelas caspases, enzimas efetoras da apoptose, cuja ativação é rigorosamente controlada pelas proteínas inibidoras da apoptose, as IAPs, que por sua vez tem atividade modulada por moléculas inibidoras de IAPs, sendo a SMAC/Diablo a principal e a mais estudada. Neste trabalho estudamos a relação entre as IAPs e SMAC nos carcinomas prostáticos e sua correlação com o Índice Apoptótico (IA), proliferação celular, imuno-expressão da proteína p53 e taxa de sobrevida dos pacientes. Foram confeccionados blocos de parafina de TMA com tecido de câncer prostático de pacientes operados no Hospital das Clinicas da Faculdade de Medicina de Botucatu de 1980 a 2000. Estes foram submetidos à reação imuno-histoquímica para Survivina, XIAP, SMAC, p53, Caspase 3 Clivada (índice apoptótico) e Ki67 (índice de proliferação celular). As laminas foram lidas por dois patologistas, sendo obtidas graduações de intensidade de imuno-expressão e/ou percentuais de positividade celular. Esses resultados foram correlacionados com a graduação de Gleason, categorias prognósticas (ISUP) e dados de sobrevida dos pacientes. Houve correlação entre a diferenciação da neoplasia e o índice de proliferação celular. A intensidade da marcação para p53 também esteve associada ao grau de diferenciação neoplásica. A sobrevida dos pacientes foi maior nos casos com menor ki67 e menores Gleason e Categorias Prognósticas / Prostate carcinoma is a frequent cause of morbidity and mortality in Western populations, with high frequency in Brazil. It is the most common cancer among men and the second leading cause of death, preceded by lung cancer. Its incidence has increased continuously in recent decades due to increased life expectancy and the western lifestyle. Apoptosis is a cell death mechanism that occurs in many physiological processes. It is known that tumors show progressive resistance to apoptosis. It is regulated by caspases, apoptosis effector enzymes, whose activation is strictly controlled by Innibitors of Apoptosis Proteins, IAPs, which in turn are modulated by IAP activity inhibitory molecules, with SMAC/Diablo being the main one and the most studied. We studied the relationship between IAPs (XIAP and Survivin) and SMAC in prostatic carcinomas and its correlation with the Apoptotic Index (AI), cellular proliferation, immunohistochemistry expression of protein p53 and patient survival rate. TMA paraffin blocks were made with prostate cancer tissue from patients operated at the Clinics Hospital, Botucatu School of Medicine, from 1980 to 2000. These were submitted to immunohistochemical reaction to Survivin, XIAP, SMAC, p53, cleaved Caspase 3 (apoptotic index) and Ki67 (cell proliferation index). The slides were read by two pathologists, wich graduated the intensity and percentage of positive cells according to immuno-expression of each marker. These results were correlated with the Gleason grade, prognostic categories (ISUP) and patient survival data. A correlation was verified between tumor differentiation and the cell proliferation rate. The intensity of p53 reaction was also associated with the degree of neoplastic differentiation. Patient survival was higher in cases with lower ki67 labelling and lower Gleason and Prognostic Categories grading

Submitted by BRUNA DE OLIVEIRA VASCONCELOS null (bruna.olivasco@gmail.com) on 2016-04-19T22:29:05Z No. of bitstreams: 1 dissertacao_bruna_de_oliveira_vasconcelos.pdf: 2275149 bytes, checksum: 4d00665f221aeffea15e3edda524b5d2 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-04-26T13:25:40Z (GMT) No. of bitstreams: 1 vasconcelos_bo_me_dra.pdf: 2275149 bytes, checksum: 4d00665f221aeffea15e3edda524b5d2 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-26T13:25:40Z (GMT). No. of bitstreams: 1 vasconcelos_bo_me_dra.pdf: 2275149 bytes, checksum: 4d00665f221aeffea15e3edda524b5d2 (MD5) Previous issue date: 2016-02-23 / A placenta dos mamíferos é um órgão transitório formado pela justaposição entre os tecidos maternos e fetais, sendo responsável pelas trocas fisiológicas entre a mãe e o feto e pela síntese de hormônios fundamentais para a manutenção da gestação. Para o crescimento placentário e a nutrição fetal é necessário um delicado equilíbrio entre proliferação e morte das células placentárias. Essas células possuem propriedades específicas em relação a suas funções metabólicas, endócrinas e angiogênicas sendo fundamentais para o desenvolvimento adequado do concepto ao longo da prenhez e seu nascimento. Gestações de animais clonados frequentemente apresentam anormalidades como hidroâmnio, hidroalantoide, edema placentário, retenção de placenta e abortos. Neste estudo, foi avaliada a ocorrência de apoptose (morte celular) em placentônios provenientes de conceptos bovinos transgênicos clonados (n=5) e de gestações naturais (n=18), nos períodos de 60 e 90 dias de gestação, que tiveram seu desenvolvimento interrompido para remoção do útero gestante. As amostras de placentônio foram segmentadas e fixadas em solução aquosa de paraformoldeído a 4% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M e pH 7.4, para verificação da morfologia pela coloração HE e realização da técnica de imunoistoquímica. Os resultados obtidos foram comparados entre bovinos clonados transgênicos e de gestações naturais. Todos os grupos e idades gestacionais analisados apresentaram a mesma composição celular com epitélio uterino simples cúbico onde nota-se a presença de células trofoblásticas gigantes mononucleadas e células trofoblásticas gigantes binucleadas migradas do epitélio fetal, estroma endometrial bem desenvolvido, epitélio trofoblástico com células cuboides típicas de epitélio e quantidade acentuada de células trofoblásticas gigantes e gigantes binucleadas migrando para o epitélio materno e mesênquima. Em todos os grupos e períodos gestacionais, o epitélio materno apresentou maior marcação positiva para apoptose. Aos 60 dias a marcação positiva no epitélio uterino das gestações manipuladas foi menos evidente em relação às de gestações naturais, assim como aos 90 dias, que apresentou maior imunorreatividade em comparação aos 60 dias e dos animais de gestação natural sobre os manipulados. Na ultima idade gestacional foi possível observar reação em padrão de fileiras no epitélio uterino e para ambos os grupos não foram encontradas marcações nos tecidos fetais. Neste estudo foi demonstrado desequilíbrio nos padrões de apoptose nos conceptos bovinos clonados transgênicos, pois no início da gestação (60 dias) apresentaram menor atividade apoptóticas e aos 90 dias um aumento, podendo ser este fato um dos fatores que levam às anormalidades placentárias. Desse modo os resultados da verificação da apoptose, nas fases de gestação estudadas, e seu entendimento são importantes para a compreensão de possíveis falhas no desenvolvimento gestacional em técnicas avançadas de manipulação embrionárias, como a produção de animais transgênicos e clonados. / The placenta in mammals is a transitional organ formed by the justaposition between maternal and fetal tissues, it is responsible for physiological exchanges between mother and fetus and the synthesis of hormones essential for maintaining gestation. For the fetal placental growth and nutrition are requires a delicate balance between proliferation and death cells of the placenta. These cells have specific properties in relation to its metabolic functions, endocrine and angiogenic and it is critical to the proper development of the fetus throughout pregnancy and birth. Cloned animals often have abnormal pregnancies as hidroamnion, hidroalantois, placental edema, retained placenta and abortion. In this study, placentomes the occurrence of apoptosis (death cells) was avaluate from fetuses cloned transgenic cattle (n = 5) and natural pregnancies (n = 18) in periods of 60 and 90 days of gestation that had their intermited development to remove the pregnant uterus. Placentome samples were segmented and fixed in aqueous 4% paraformaldehyde in sodium phosphate buffer (PBS) pH 7.4 and 0.1M, to check the morphology of HE staining and the immunohistochemistry. The results were compared between transgenic cloned cattle and natural gestations. In all groups and gestational ages analyzed showed the same cellular composition with simple cubic uterine epithelium, it is noted the presence of trophoblast giant cells mononuclear and giant trophoblast cells binucleated migrated from fetal epithelium, endometrial stroma well developed, trophoblastic epithelium with typical cuboid cell epithelium and severe amount of giants and giant binucleated trophoblastic cells migrating into maternal epithelium and mesenchyme. All groups and gestational periods, maternal epithelium showed higher positive staining for apoptosis. At 60 days the positive staining in the uterine epithelium is less evident manipulated pregnancies in relation to natural pregnancies as well as at 90 days, with the highest immunoreactivity when it is compared to 60 days and in the animals of natural pregnancy in ratio to manipulated animals. In the last gestational age was observed in response pattern rows in the uterine epithelium and both groups fetal side tags were not found either in or on the epithelium and mesenchyme. This study demonstrated an imbalance in apoptosis patterns in transgenic cloned cattle fetuses as early in pregnancy (60 days) showed less apoptotic activity and an increase at 90 days and may be this fact one of the factors leading to placental abnormalities. Thereby the results of the verification of apoptosis at the stages of pregnancy studied and comprehension are important for the understanding of possible failure in gestational development in advanced embryonic manipulation techniques, such as the production of transgenic and cloned animals.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:25:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-03Bitstream added on 2014-06-13T20:32:58Z : No. of bitstreams: 1 lima_rs_me_botib.pdf: 532125 bytes, checksum: 43ee357752dc07c85fbf032817d7466d (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O estresse térmico materno compromete a fertilidade de vacas leiteiras. Os oócitos nas fases de vesícula germinativa (VG) e maturação são susceptíveis aos efeitos deletérios causados pelo estresse térmico, entretanto os mecanismos celulares desencadeados pela temperatura elevada são pouco conhecidos. Os danos celulares induzidos pelo estresse térmico podem ser manipulados por amplo espectro de fatores biológicos, incluindo o fator de crescimento semelhante à insulina- I (IGF-I). Dessa forma, os objetivos gerais desta proposta foram caracterizar as alterações celulares e de desenvolvimento induzidas pela temperatura elevada em oócitos na fase de VG e avaliar o papel termoprotetor do IGF-I neste contexto. Para tanto, os experimentos 1 e 2 visaram estabelecer o modelo de bloqueio meiótico in vitro. No primeiro experimento foram avaliadas concentrações crescentes (50; 75; 100; 150 e 200 μM) do bloqueador meiótico roscovitina. A porcentagem de oócitos em VG (taxa de bloqueio meiótico) foi baixa em todas as doses de roscovitina testadas. No segundo experimento foram avaliadas diferentes concentrações de butirolactona (0; 12,5; 25; 50 e 100 μM) em meio de inibição meiótica contendo 0 ou 3 mg/ml de albumina sérica bovina (BSA) na porcentagem de oócitos em VG e na porcentagem de oócitos em metáfase II (taxa de reversão do bloqueio meiótico após a maturação in vitro). A eficiência do bloqueio meiótico foi alta para todas as doses de butirolactona avaliadas, exceto 12,5 μM de butirolactona com BSA. De maneira similar, a porcentagem de oócitos em MII foi alta para todos os tratamentos, exceto para dose de 100 μM de butirolactona sem BSA, indicando possível efeito tóxico desta concentração. Com base nestes resultados o modelo de inibição meiótica utilizado para todos os demais experimentos fez uso... / Maternal heat stress compromises fertility of lactating dairy cows. Germinal vesicle stage (GV) and mature oocytes are susceptible to deleterious effects of maternal heat stress. However, the cellular mechanisms triggered by elevated temperature are not well known. The cellular damage induced by heat stress can be manipulated by a wide range of biological factors, such as insulin-like growth factor-I (IGF-I). Therefore, overall objectives of this proposal were to characterize cellular and developmental changes induced by elevated temperature on GV oocytes and evaluate the role of IGF-I in this context. Experiments 1 and 2 aimed to establish an in vitro meiotic arrest model. The first study evaluated the effect of increasing concentrations (50, 75, 100, 150 and 200 μM) of the meiotic inhibitor roscovitine. The percentage of GV oocytes (rate of meiotic arrest) was low at all roscovitine doses tested. In the second experiment different butyrolactoneconcentrations (0, 12.5, 25, 50 and 100 uM) were evaluated in meiotic inhibition medium containing 0 or 3 mg/mL bovine serum albumin (BSA) in percentage of GV oocytes and percentage of metaphase II oocytes (rate of meiotic arrest reversibly after in vitro maturation). Meiotic arrest efficiency was high for all butyrolactone doses tested, except 12.5 μM butyrolactone with BSA. Similarly, the percentage of MII oocytes was high for all doses, except for 100 μM butyrolactone without BSA, indicating a possible toxic effect of this concentration. Based on these results the meiotic arrest model used for all subsequent experiments used 12.5 μM butyrolactone in the absence of BSA. The third experiment evaluated the effect of various IGF-I concentrations (0, 12.5, 25, 50 and 100 ng/ml) on heat-induced DNA fragmentation on GV oocyte. In the absence of IGF-I, heat shock of 41°C for 14 hours increased... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-05-27Bitstream added on 2014-06-13T20:41:35Z : No. of bitstreams: 1 camplesi_ac_dr_botfmvz.pdf: 1535535 bytes, checksum: 282f08aabaf70f1006455025035703e8 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O uso de antiinflamatórios não esteroidais (AINEs) aumentou significativamente na clínica médica de pequenos animais após a descoberta de AINEs seletivos, e isso resultou em uma elevação da incidência de intoxicações por estes medicamentos. O presente estudo teve como objetivo avaliar a histologia e o índice apoptótico hepático, níveis de citocinas séricas e fibrinogênio plasmático nos ratos tratados com diclofenaco, meloxicam e firocoxibe. Utilizaram-se 90 animais que foram divididos em seis grupos de 15 animais cada: G1 - controle: 0,3mL/100g de solução fisiológica; G2 - diclofenaco de sódio: 15mg/kg; G3 – meloxicam: 2mg/kg; G4 – meloxicam: 10mg/kg; G5 – firocoxibe: 5mg/kg; G6 – firocoxibe: 25mg/kg. A medicação foi realizada por meio de gavage, a cada 24 horas, por cinco dias. Após a eutanásia dos ratos, foram colhidos materiais para dosagens de fibrinogênio e citocinas, análise histopatológica e de apoptose hepática. Os ratos tratados com diclofenaco, meloxicam e firocoxibe não apresentaram diferença estatística em relação aos índices apoptóticos hepáticos. A concentração sérica de TNF- foi semelhante em todos os grupos avaliados, e a IL-10 foi maior nos grupos tratados com os AINEs quando comparada ao grupo de solução fisiológica. O fibrinogênio plasmático elevou-se nos ratos tratados com diclofenaco e com meloxicam. As alterações histopatológicas foram mais frequentemente observadas nos animais que receberam diclofenaco e alterações leves, com o uso de meloxicam e firocoxibe. O meloxicam e o firocoxibe foram considerados AINEs seguros, pois não causaram alterações significativas nos ratos tratados com a dose recomendada e discreto grau de toxicidade no grupo tratado com cinco vezes a dosagem / The employ of non-steroidal anti-inflammatory drugs increased significantly in medical clinic of small animals after the discovery of NSAID selected and this effected in an increase of times of intoxications by these medicines. The present study aims to evaluate the histology and the hepatic apoptotic index, quantify serum dosage of cytokines and plasmatic fibrinogen in rats deal with diclofenac, meloxicam and firocoxibe. It were used 90 animals which they’re divided in six groups with 15 animals each one. G1- control: 0.3mL/100g physiologic solution; G2- diclofenac: 15mg/kg (positive control); G3- meloxicam: 2mg/kg; G4- meloxicam: 10mg/kg; G5- firocoxib: 05mg/kg; G6- firocoxib: 25mg/kg. Medication was administered though gavage every 24 hours by five days. After euthanasia of these rats, were cropped materials to dosing of fibrinogen, cytokines, hipathology and hepatic apoptosis. The rats which were under care with diclofenac, meloxicam and firocoxibe didn’t show difference statistics in report to the hepatic apoptotic index. TNF- serum concentration was similar to all groups and IL-10 concentration was higher on the groups which were under care with the AINEs when were compared with the group of physiological solution. The plasma fibrinogen is elevated in rats treated with diclofenac and meloxicam. The most frequency histopathological changes were observed in animals that received diclofenac and mild changes, with the use of meloxicam and firocoxib. Meloxicam and firocoxib cam be considered NSAIDs safe, because they didn’t cause significatives alterations in the rats treated with the recommended dose and a slight degree of toxicity in the group treated with five times the dosage

Orientador: Prof. Dr. Renato Tambara Filho / Co-orientador: Prof. Dr. Jorge Matias Fouto / Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Clínica Cirúrgica. Defesa: Curitiba, 31/07/2015 / Inclui referências : f.51-57 / Área de concentração : Clínica cirurgia / Resumo: A produção espermática é um processo delicado. Embora ocorra em um ambiente isolado, pode sofrer influência de inúmeros fatores, entre eles medicamentos imunossupressores. Como estas drogas são utilizadas por pacientes em idade reprodutiva, é essencial o conhecimento de seus efeitos sobre a espermatogênese. Objetivos: comparar os efeitos de dois imunossupressores, Tacrolimus (TCL) e Micofenolato Mofetil (MMF), na espermatogênese de ratos em idade reprodutiva. Material e métodos: foram utilizados 40 animais, divididos em quatro grupos. Grupo Tacrolimus (TCL) recebeu 1mg/Kg/peso de Tacrolimus, Grupo Micofenolato recebeu 30mg/Kg/peso de Micofenolato Mofetil (MMF), Grupo Sham recebeu SF 0,9%, Grupo Controle, não recebeu qualquer tipo de intervenção. O estudo teve duração de 100 dias, ao final foram realizadas análises morfométrica, histomorfométrica e de apoptose do tecido germinativo. Resultados: Observou-se uma diminuição da área tubular no grupo tratado com TCL quando comparado com aos demais grupos, bem como redução no grupo MMF, quando comparado com os grupos sham e controle. Houve redução da altura do epitélio germinativo do grupo TCL, quando comparado aos demais, bem como diminuição no grupo MMF, em relação aos grupos sham e controle. A análise de apoptose demonstrou aumento da porcentagem de células apoptóticas nos grupos tratados com imunossupressores, sendo mais significativa no grupo TCL. Conclusões: O uso de TCL e MMF por ratos, em idade reprodutiva, por um período longo de tempo, ocasionou redução da área tubular total e da altura do epitélio germinativo; aumento do índice de apoptose de células germinativas. As alterações foram mais significativas nos animais tratados com TCL em relação àqueles tratados com MMF. / Abstract: Sperm production is a delicate process, governed by a strict endocrine control. Although it occurs in an isolated environment, can suffer influence of multiple factors, including medications such as immunosuppressants. As these drugs are used by patients of reproductive age, it is essential to know its effects on spermatogenesis. Objectives: to compare the effects of two immunosuppressants, tacrolimus (TCL) and Mycophenolate mofetil (MMF) in spermatogenesis of rats on reproductive age. Material and methods: the study was done in 40 animals, divided into four groups. Group tacrolimus received 1 mg/kg weight of tacrolimus (TCL), Group mycophenolate received 30mg/kg mycophenolate mofetil (MMF), Group SHAM received the same volume of 0.9% saline, Group control did not receive any intervention. The experiment lasted 100 days, at the end was held morphometric analysis, histomorphometric analysis and apoptosis of germinal tissue. Results: On histomorphometric analysis, a decrease in tubular area was observed in the group treated with TCL compared with MMF, sham and control groups, and reduction in MMF group compared with sham and control groups. There was a reduction of the height of the germinal epithelium of the TCL group, when compared to MMF, sham and control groups, and decrease in the MMF group compared to sham and control groups. Apoptosis analysis showed increased in Apoptotic cells counts in the groups treated with immunosuppressants, more pronounced on TCL group. Conclusions: Use of TCL and MMF by mice in reproductive age for a long period of time caused decrease in total tube area and the height of the germinal epithelium; increased germ cell apoptosis index. The changes were more significant in animals treated with TCL compared those treated with MMF.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:26Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-03-19Bitstream added on 2014-06-13T18:45:08Z : No. of bitstreams: 1 suzano_smc_dr_botfmvz.pdf: 792535 bytes, checksum: 341e0556c5295f46fbb2bb9df3f5d9c3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O estudo dos linfomas caninos além de abordar a classificação morfológica e imunofenotípica necessita ser ampliado para que se tenha a avaliação da cinética celular. Esta verificação só pode ser feita com segurança quando são avaliados não só os parâmetros que indicam a taxa de proliferação celular, mas também aqueles relacionados a apoptose, bem como a expressão de proteínas responsáveis por este evento. No homem, muitas vezes a determinação da taxa de proliferação e os marcadores de apoptose têm influência preponderante no prognóstico e no tratamento destas neoplasias e o mesmo deve ocorrer nos linfomas caninos, uma vez que os linfomas nesta duas espécies possuem comportamento biológico muito semelhante. Nesta pesquisa, foram utilizados 40 casos de linfomas caninos. Estes foram classificados de acordo com as classificações de Kiel e Working Formulation (WF), e realizada a imunofenotipagem utilizando marcadores para linfócito T (CD3) e para linfócitos B (CD79a). A proliferação celular foi avaliada pelos métodos de contagem dos AgNORs e células imunopositivas para Ki-67 (MIB-1) e o índice apoptótico foi avaliado pela caspase-3. Foi verificada também a expressão do p-53 mutante. De acordo com as classificações de Kiel e WF os linfomas de alto grau foram os mais freqüentes, a imunofenotipagem mostrou a mesma freqüência de linfomas T e B. Quando avaliada a proliferação celular, houve diferença significativa entre os linfomas de alto e baixo grau tanto pelo método do AgNOR como pela expressão do KI-67 (MIB-1), mas sem significância em relação ao imunofenótipo. Entre as neoplasias de alto grau de malignidade a média de número de NORs por núcleo de célula neoplásica foi de 1,37 0,32, e nos casos de baixo grau de 0,98 0,36. De acordo com o KI-67 a média... / Lymphoma studies deals with morphological classification and immunophenotypic features, but they have to be amplified for cellular kinetics evaluation. This evaluation can only be safely made, when not only proliferative index are evaluated, but also when apoptosis and some proteins involved in this processes are studied. In men the proliferative index and apoptosis markers have, most of the time, important influence in neoplasia prognosis and treatment, and the same thing should happen with canine lymphoma, once lymphoma in humans and dogs share similarities in biological behavior. In this work it was used 40 canine lymphomas were classified according to Kiel and Working Formulation (WF) methods and immunophenotype was achieved with T lymphocyte marker (CD3) and B lymphocyte marked (CD79a). Cellular proliferation was evaluated by AgNORs and Ki-67 (MIB-1) and apoptotic index by caspase-3. Mutant p-53 expression was also verified. According to Kiel and WF classification system, high grade lymphomas were more frequent and T and B lymphoma showed the same frequency. When cellular proliferation was evaluated, there was a significant difference between high grade and low grade lymphomas by AgNOR and Ki-67 (MIB-1) methods, but did not differ when comparing immunophenotype. Among high grade malignancy lymphomas the NORs medium number per cell nucleoli was 1.37 0.32 and in low grade was 0.98 0.36. Concerning Ki-67 the positive cellular percentual was 43.19% 19.01 e 14.09% 11.74 in high and low grade, respectively. Apoptotic index and p53 expression did not show differences between high and low grade lymphoma, neither when comparing immunophenotype.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:35:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-08-09Bitstream added on 2014-06-13T19:45:10Z : No. of bitstreams: 1 000735059.pdf: 4335227 bytes, checksum: 7137c59ad39313bbb60a087cc2ad7500 (MD5) / O forskolin eleva as concentrações de adenosina monofosfato cíclica (cAMP) por meio da ativação da adenilato ciclase. Esse experimento possuiu o objetivo de utilizar o forskolin para melhorar a produção in vitro (PIV) de embriões bovinos. No Experimento I o forskolin foi adicionado no meio de maturação in vitro (MIV) com o objetivo de bloquear a meiose nuclear induzindo sua sincronização com a maturação citoplasmática. O Experimento II possuiu o objetivo de induzir uma lipólise química em embriões do D 6 a partir da utilização do forskolin, diminuindo sua sensibilidade após a vitrificação. No Experimento I, os oócitos permaneceram em meio MIV durante 6 horas na presença de três concentrações de forskolin: 0,025 mM; 0,05 mM; 0,1 mM e em seguida foram cultivados em meio MIV livre de forskolin por 18 horas. Após esse tempo os oócitos foram fertilizados e cultivados in vitro. Foi avaliado o estágio de maturação nuclear, a atividade e distribuição mitocondrial, a ultraestrutura oocitária, contagem do número de células e a apoptose celular. O tratamento com forskolin por 6 horas não resultou em atraso na quebra da vesícula germinativa em relação ao controle. Entretanto, após a retirada do bloqueio e maturação por 18 horas um maior número de oócitos tratados com 0,1 mM de forskolin se encontrou em MI (P<0,05). Não houve diferença com relação a atividade e distribuição mitocondrial nos oócitos, no entanto a maior concentração da droga levou a alterações ultraestruturais nos oócitos, com excesso de metabolização lipídica e desorganização do citoesqueleto. Apesar disso, não se observou diferença na taxa de produção de blastocistos avaliados no D 7, bem como no número total de células íntegras dos embriões. Entretanto, observou-se uma maior taxa de apoptose no grupo de blastocistos produzidos a partir de oócitos bloqueados com a maior concentração... / The forskolin raises concentrations of cyclic adenosine monophosphate (cAMP) through the activation of adenylate cyclase. This experiment aimed the use of forskolin to enhance in vitro production (IVP) of bovine embryos. In Experiment I, forskolin was added in the medium of in vitro maturation (IVM) with the objective of blocking nuclear meiosis inducing your synchronization with cytoplasmic maturation. Experiment II aimed to induce lipolysis chemical in D 6 embryos from the use of forskolin, decreasing its sensitivity after vitrification. In the first experiment, the oocytes remained in IVM medium for 6 hours in the presence of three concentrations of forskolin: 0.025 mM, 0.05 mM, 0.1 mM and then were cultured in medium free forskolin for 18 hours. After this time the oocytes were in vitro fertilized and cultured. We assessed the stage of nuclear maturation, activity and distribution mitochondrial, ultrastructure oocyte, total number of cells and apoptosis. The treatment with forskolin for 6 hours did not resulted in delay in VCBD in relation to control group. However, after the removal of the drug and maturation for 18 hours a higher number of oocytes treated with 0.1 mM of forskolin were still in MI (P<0.05). No differences in relation to mitochondrial activity and distribution were observed between groups. However the higher concentration of the drug induced ultrastructural damage to oocytes, with excess of lipid metabolization and cytoskeleton disorganization. Nevertheless, no statistical differences were observed on blastocyst production and on the number of total cells. Despite of that, a higher rate of ...

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-26Bitstream added on 2015-04-09T12:48:05Z : No. of bitstreams: 1 000814027.pdf: 639185 bytes, checksum: 58b0070f364504228c4ce4c4573e53d4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O herpesvirus bovino tipo 5 (BoHV-5) é um α-herpesvirus responsável por uma doença neurológica em bovinos jovens e também, ocasionalmente incriminado em alterações reprodutivas. Apesar de vários estudos descreverem as vias do processo de apoptose induzidos por infecções virais, pertencendo à família Herpesviridae, poucas informações estão disponíveis sobre as vias intrínsecas da morte celular programada em interações entre BoHV-5 e seus hospedeiros. O BoHV-5 foi capaz, no presente estudo, de replicar e de produzir efeitos citopátcos, caracterizados por um aumento e fusão celular, tanto em células mesenquimais como nas epiteliais. Os antígenos virais foram detectados em células infectadas pela reação de imunofluorescência nos períodos pós-infecção (p.i) compreendido 48 à 96 h. De acordo com a observação dos períodos p.i., entre 48 e 72 h sinais intensos de fluorescência foram observados para a proteína anti-apoptótica BCL-2 e comparação à proteína apoptótica Bax. As células infectadas revelaram um aumento do fenótipo BCL-2 entre 48 e 96 h p.i por citometria de fluxo. Entre 48 a 96 h p.i a expressão de RNA mensageiro relacionado a proteína Bax não foi verificada em nenhuma célula infectada. Ao contrário, a expressão do RNA mensageiro relacionado a proteína BCL-2 foi quantificada em Log 10 1,6 x 10 2 cópias de fita complementar de DNA (cDNA) em todos os p.i. O BoHV-5 quando está em fase de replicação nas células mesenquimais parece modular a expressão e respectiva transcrição gênica da proteína BCL-2, no sentido de aumentar a produção de partículas virais / Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is α-herpesvirus responsible for neurological disease in young cattle and also occasionally incriminated in reproductive disorders.In spite of many studies describing the apoptotic pathways induced by viruses belonging to the family Herpesviridae, scare information about intrinsic programmed cell death pathway in host-BoHV-5 interactions is currently available. BoHV-5 was able to replicate and to produce cytopathology characterized by cellular swelling and cell fusion on both mesenchymal and epithelial cell lines. Viral antigens were detected in infected cells by immunofluorescence assay at 48 to 96 h post-infection (p.i.). According to sequential p.i observation, at 48 to 72 h p.i. higher fluorescent signals were visible for anti-apoptotic BCl-2 antigens in comparison to Bax, considered a proapoptotic protein. Infected cells revealed an increase of BCl-2 phenotype population from 48 to 96 h p.i. by flow cytometric analysis. At 48 to 96 h p.i. Bax mRNA was not expressed among of any infected cell monolayers. In contrast, BCl-2 mRNA was quantified Log10 1,6 x 102 cDNA copies at all p.i. for both cells. BoHV-5 replication seems to modulate BCl-2 expression and respective gene transcription in order to enhance production of progeny virus / FAPESP: 22010/52465-9