Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-04-04T14:47:24Z No. of bitstreams: 1 raquelcristinatostes.pdf: 5129752 bytes, checksum: 56eee034002e91d6ed4e44f4fcdbf708 (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-04-24T03:56:36Z (GMT) No. of bitstreams: 1 raquelcristinatostes.pdf: 5129752 bytes, checksum: 56eee034002e91d6ed4e44f4fcdbf708 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-24T03:56:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 raquelcristinatostes.pdf: 5129752 bytes, checksum: 56eee034002e91d6ed4e44f4fcdbf708 (MD5) Previous issue date: 2013-02-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A malária é uma das doenças mais comuns entre as aves e vem causando danos às espécies em todo o mundo, podendo em muitos casos ser fatal. Pode causar alterações fisiológicas em diferentes órgãos, as quais podem ser caracterizadas por análises bioquímicas e por análises histopatológicas. Assim, os objetivos do presente trabalho foram verificar a prevalência e parasitemia de parasitos maláricos em aves silvestres em cativeiro da Mata Atlântica em Minas Gerais e realizar a caracterização bioquímica sérica e histopatológica das aves infectadas. Para isso, foram coletadas amostras de sangue de 119 aves e feitos esfregaços sanguíneos para cálculo da prevalência e parasitemia. Foi utilizada ainda a biologia molecular para cálculo da prevalência, comparando os resultados à microscopia. Para as análises bioquímicas e histopatológicas foram utilizadas seis aves infectadas e eutanasiadas pelo IBAMA. A prevalência média nas análises microscópicas foi de 83,19% e a parasitemia de 1,51%, enquanto que na biologia molecular foi de 82,5%. Os cortes histológicos demonstraram alterações no fígado, rins, baço e coração, provavelmente secundárias à infecção malárica, destacando-se no fígado, baço e rins a presença de pigmentação acastanhada, sugestiva de pigmento malárico ou hemozoína. Os valores das análises bioquímicas, valores da enzima ALT e de proteínas totais foram aparentemente mais altos em aves com parasitemia maior, diferente dos valores da AST, que foram aparentemente normais. É necessário considerar que parâmetros bioquímicos podem ser alterados por fatores internos e externos, o que pode explicar a diferença dos valores das enzimas encontrados no presente estudo com valores para outras espécies relatados na literatura. Sugere-se estudos visando estabelecer valores de referência de análises bioquímicas, que podem ser utilizadas como ferramenta para caracterização da saúde das aves silvestres. / Malaria is one of the most common diseases among birds and has caused damage to the species in all the world and can often be fatal. It can cause physiological changes, which can be characterized by biochemical and histopathological analysis. The aim of this study were to determine the prevalence and the parasitemias and malarial parasites in captive wild birds from Floresta Atlântica in Minas Gerais and to characterize serum biochemistry and histopathology of infected birds. For this, blood samples were collected from 119 birds, prepared blood smears for estimating the prevalence and the parasitemias. For biochemical analysis and histopathological features were analyzed six and infected birds. The mean prevalence in blood smears was 83.19% and mean parasitemia 1.51%, while in the molecular biology was 82,5%. Histological sections demonstrated alterations in liver, kidney, spleen and heart, probably by to malaria infection. In the liver, spleen and kidneys the presence of brownish pigmentation, suggestive of malarial pigment, the hemozoin. The values enzyme ALT and total proteins were apparently higher in birds with parasitemia greater than those of AST values that were apparently normal. You must consider that biochemical parameters can be changed by internal and external factors, which may explain the difference in the values of enzymes found in the present study with values for other species reported in the literature. It is suggested studies to establish reference values for biochemical analysis, which may be used as a tool to characterize the health of the birds.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-05-10T14:43:51Z No. of bitstreams: 1 luisadeoliveira.pdf: 1689764 bytes, checksum: 7af6e626808d1ab5d4fc1de9be514aaa (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T15:08:15Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luisadeoliveira.pdf: 1689764 bytes, checksum: 7af6e626808d1ab5d4fc1de9be514aaa (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-05-17T15:08:48Z (GMT) No. of bitstreams: 1 luisadeoliveira.pdf: 1689764 bytes, checksum: 7af6e626808d1ab5d4fc1de9be514aaa (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-17T15:08:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 luisadeoliveira.pdf: 1689764 bytes, checksum: 7af6e626808d1ab5d4fc1de9be514aaa (MD5) Previous issue date: 2014-10-10 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Hemosporídeos de aves silvestres são considerados importantes agentes etiológicos e podem causar danos às populações dos hospedeiros. O presente estudo teve como objetivos: determinar a prevalência e a parasitemia para Plasmodium spp. e Haemoproteus spp. de Passeriformes da Mata Atlântica de Minas Gerais, por meio de dois métodos de diagnóstico, microscopia e nested PCR e caracterizar morfologicamente a espécie Plasmodium (Haemamoeba) lutzi Lucena, 1939. Amostras de sangue foram obtidas por punção da veia braquial para preparação de esfregaços que foram fixados em metanol e corados em Giemsa. Foram amostradas 237 aves pertencentes a 18 famílias e 56 espécies da ordem Passeriformes provenientes do IBAMA e capturadas no Jardim Botânico da Universidade Federal de Juiz de Fora (JB-UFJF). A prevalência para Plasmodium spp. foi 63,63% em aves do IBAMA e 26,25% em aves do JB-UFJF, apenas três indivíduos encontraram-se parasitados por Haemoproteus spp., sendo dois (2,5%) provenientes do IBAMA e um (0,62%) do JB-UFJF. A parasitemia média encontrada para Plasmodium spp./Haemoproteus spp. foi de 0,08 (± 0,08) no IBAMA e 0,05 (± 0,04) no JB-UFJF. O maior grau de parasitemia média foi registrado nas espécies Turdus albicollis, Zonotrichia capensis (0,22%), Turdus rufiventris (0,18% ± 0,29), Gnorimopsar chopi (0,1% ± 0,07) no IBAMA e Turdus rufiventris (0,17 % ± 0,13), Arremon semitorquatus (0,11% ± 0,13) no JB-UFJF. Foi identificada em uma das aves (A. semitorquatus), a presença da espécie Plasmodium (H.) lutzi, a qual foi morfologicamente caracterizada. A prevalência registrada é considerada alta, entretanto verificou-se uma baixa parasitemia, o que pode estar relacionado à evolução crônica da infecção. Infecções agudas por Plasmodium spp. levam ao aparecimento de sinais clínicos com expressão rápida dos sintomas, sendo que nos casos mais graves pode ocorrer a morte do hospedeiro. Visto a elevada prevalência, levantamentos acerca de infecções por hemoparasitos em aves silvestres podem ajudar na elaboração de estratégias de profilaxia e tratamento de doenças parasitárias para a conservação das espécies. / Hemosporidian wild birds are considered important etiological agents and can cause damage to populations of hosts. The present study aimed to: ¹determine prevalence and parasitemia for Plasmodium spp. and Haemoproteus spp. Passeriformes of the Atlantic Forest of Minas Gerais, through two diagnostic methods, microscopy and nested PCR; and caracterize morphologically the species Plasmodium (Haemamoeba) lutzi Lucena, 1939. Blood samples were obtained by puncturing the brachial vein for preparation of smears, fixed in methanol and stained with Giemsa. 237 birds belonging to 18 families and 56 species of the order Passeriformes from IBAMA were sampled and captured in the Botanical Garden of the Universidade Federal de Juiz de Fora (BG-UFJF). The prevalence of Plasmodium spp. in birds of IBAMA was 63.63% and 26.25% in birds of BG-FUJF, only three individuals were infected by Haemoproteus spp., two (2.5%) from IBAMA and one (0.62 %) of BG-FUJF. The average parasitemia found for Plasmodium spp./ Haemoproteus spp. was 0.08 (± 0.08) at IBAMA and 0.05 (± 0.04) in BG-UFJF. The highest degree of mean parasitaemia was recorded in the species Turdus albicollis, Zonotrichia capensis (0.22%), Turdus rufiventris (0.18% ± 0.29), Gnorimopsar chopi (0.1% ± 0.07) at IBAMA and Turdus rufiventris (0.17% ± 0.13), Arremon semitorquatus (0.11% ± 0.13) in BG-UFJF. Was identified in one of the birds (A. semitorquatus) by means of morphology, the presence of Plasmodium (H.) lutzi species, which was characterized morphologically. Registered prevalence is considered high, however a low parasitaemia was found, which may be related to chronic course of infection.. Acute infections with Plasmodium spp. lead to the onset of clinical signs with rapid symptom expression, and in severe cases death canoccurat the host. Since the high prevalence surveys about hemoparasites infections in wild birds can help in developing strategies for prophylaxis and treatment of parasitic diseases to species conservation.

Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-18T13:31:14Z No. of bitstreams: 1 rafaelavenanconimatoso.pdf: 1534422 bytes, checksum: 647314733191f67cf9c4d4e4d5641e6e (MD5) / Rejected by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br), reason: on 2017-08-24T11:28:54Z (GMT) / Submitted by isabela.moljf@hotmail.com (isabela.moljf@hotmail.com) on 2017-08-24T13:09:46Z No. of bitstreams: 0 / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2017-08-30T12:27:11Z (GMT) No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2017-08-30T12:27:11Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2017-02-20 / O objetivo deste estudo foi realizar caracterização multidisciplinar da espécie Haemoproteus (Haemoproteus) paramultipigmentatus e avaliar a prevalência de Haemoproteus spp. em aves Columbiformes coletadas na Mata Altântica da Zona da Mata mineira. Esse é o primeiro registro dessa espécie no Brasil e nos hospedeiros Columbiformes, Leptotila verreauxi e Columbina talpacoti. Algumas características morfológicas e morfométricas diferiram da descrição original, como por exemplo, a área do núcleo do eritrócito parasitado por macrogametócitos, gametócitos podem tocar a membrana e o núcleo do eritrócito ao mesmo tempo, área do microgametócitos e presença de vacúolos em gametócitos jovens. As linhagens H. paramultipigmentatus obtidas neste estudo, se agruparam em um clado monofilético, com elevado valor de suporte (98/1.0), contendo outras linhagens desta espécie obtidas em estudos prévios. Dentre as 76 aves analisadas (63 C. talpacoti, 13 L. verreauxi), 48 estavam parasitadas por Haemoproteus spp. (prevalência total de 63,15%) e dessas, 26 estavam parasitadas pela espécie H. paramultipigmentatus (prevalência de 34,21%). Foram estimados também dados inéditos sobre prevalência, parasitemia e agregação de Haemoproteus paramultipigmentatus para os 24 meses de coletas das aves, realizadas na seca e chuva sendo a prevalência no período de seca menor 24,32% que no período chuvoso 40,47%. O índice de agregação na seca (0,821) foi maior que aquele registrado no verão (0,762). O trabalho apresenta novos dados sobre hospedeiros, morfologia, biologia molecular, filogenia e ecologia para uma população H. paramultipigmentatus encontrada na Mata Atlântica e ressalta importância de caracterizações multidisciplinares para conhecimento da diversidade de hemosporídeos aviários. / The aim of this study was to realize a multidisciplinary characterization of Haemoproteus (Haemoproteus) paramultipigmentatus and to evaluate the prevalence of Haemoproteus spp. in Columbiform birds, collected in Atlantic Forest, Zona da Mata, Minas Gerais. This, is the first record of this species in Brazil and in the Columbiformes species, Leptotila verreauxi and Columbina talpacoti. Some characteristics morphological and morphometric differed from the original description, such as: the area of the nucleus in erythrocyte parasitized by macrogametocytes, gametocytes touching envelope and erythrocyte nucleus at the same time, microgametocytes area and the presence of vacuoles in young gametocytes. H. paramultipigmentatus lineages obtained in this study, were grouped in a monophyletic clade, with a high support value (98 / 1.0), containing other lineages of this species, obtained in previous studies. Among the 76 birds analyzed (63 C. talpacoti, 13 L. verreauxi), 48 were parasitized by Haemoproteus spp. (Total prevalence 63.15%). Of these, 26 were parasitized by H. paramultipigmentatus (prevalence of 34.21%). It was also estimated, for the first time, data on prevalence, parasitemia and aggregation of Haemoproteus paramultipigmentatus, during 24 months. These data were carried out in the dry and rainy seasons. The prevalence in the period of dry is smaller (24.32%) than in the rainy (40,47%). The aggregation index in dry (0.821) was higher than that registered in rainy (0.762). This study presents new data on host, morphology, molecular biology, phylogeny, and ecology for an H. paramultipigmentatus population found in the Atlantic Forest and emphasizes the importance of multidisciplinary characterizations to know the diversity of avian hemosporids.

Orientador: Wanderley Dias da Silveira / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-24T14:02:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DaSilva_LiviaPilattiMendes_M.pdf: 1602121 bytes, checksum: 21e5b9daa8ce74359c48e82c96cf7a13 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Linhagens de Escherichia coli patogênica para aves causam doenças extraintestinais em aves, levando a perdas econômicas consideráveis para a indústria avícola em todo o mundo. Fatores de virulência ainda não conhecidos podem apresentar papéis importantes na patogenicidade, os quais podem ser significativos para o desenvolvimento de medidas de controle de processos infecciosos dessas linhagens. Invasinas permitem que o patógeno invada células hospedeiras, sobrepujando as defesas do hospedeiro, por interagir com receptores específicos na superfície celular. Baseando-se em análises do genoma da linhagem APEC SEPT362, detectou-se a presença de uma provável invasina, homóloga ao gene ychO, ainda não caracterizado, da linhagem E. coli str. K-12 substr. MG1655, sendo seu efeito na patogenicidade estudado. Neste trabalho, a linhagem SEPT362 deficiente para ychO reduziu a taxa de mortalidade em pintos, a adesão a células de fibroblasto de embrião de galinha (FEG), a invasão em células fibroblasto de embrião de galinha (CEC-32), a sobrevivência em macrófagos de aves (HD11), a formação de biofilme e a motilidade. Esses resultados sugerem, pela primeira vez, que o gene ychO codifica para uma invasina e que tem papel na patogenicidade da linhagem APEC SEPT362. Além dos diversos fatores de virulência, o estudo de diferentes tipos de sinais extracelulares que medeiam a comunicação entre bactérias e regulam a expressão gênica abre grandes possibilidades no estudo de mecanismos de patogenicidade e possíveis meios de interferir nos mesmos, transformando organismos patogênicos em organismos não virulentos. Quorum sensing (QS) é um mecanismo dependente da densidade celular bacteriana que as permitem agir como complexos multicelulares, aumentando suas chances de sobrevivência no meio ambiente. O sistema QS autoindutor 2 (AI-2) é um sistema de comunicação universal de bactérias mediado pelo AI-2, produzido pela ação da enzima LuxS. O sistema QS autoindutor 3 (AI-3) é um sistema que pode também mediar a comunicação entre reinos, sendo regulado pela hisitidina quinase QseC. Neste contexto, mutantes para os genes luxS e qseC foram construídos na linhagem SEPT362. A linhagem deficiente para luxS apresentou uma redução significativa na adesão a células FEG, devido a um papel do gene na regulação da fímbria do tipo 1. A linhagem deficiente para qseC teve uma menor taxa de mortalidade em pintos e uma redução significativa na adesão a células FEG, pela falta da fímbria do tipo 1 no mutante / Abstract: Avian pathogenic Escherichia coli strains cause extraintestinal diseases in poultry, leading to substantial economic losses to the poultry industry worldwide. Virulence factors not yet known may play important roles in pathogenicity, which may be significant for measures control development of infectious processes of these strains. Invasins allow the pathogen to invade host cells, overcoming host defenses by interacting with specific cell surface receptors. Based on analysis of APEC SEPT362 strain genome detected the presence of a putative invasin gene homologous to ychO, not yet characterized, of E. coli str. K-12 substr. MG1655, and its effect on pathogenicity was studied. In this work, the SEPT362 strain deficient for ychO reduced the mortality rate in chicks, the adherence to chicken embryo fibroblast (CEF) cells, the invasion of chicken embryo cells (CEC-32), the survival in poultry macrophages (HD11), the motility and biofilm formation. These results suggest, for the first time, that ychO gene encodes for an invasin and plays a role in APEC SEPT362 pathogenicity. In addition to the many virulence factors, the study of different types of extracellular signals that mediate communication between bacteria and regulate gene expression opens up great possibilities to study pathogenic mechanisms and possible ways to interfere in it, transforming pathogenic organisms into non-virulent organisms. Quorum sensing (QS) is a mechanism dependent on the bacterial cell density that enables them to act as multicellular complexes, increasing their chances of survival in the environment. The QS system autoinducer 2 (AI- 2) is a universal communication system of bacteria mediated by AI- 2 produced by the action of the enzyme LuxS. The QS system autoinducer 3 (AI- 3) is a system that can also mediate communication between realms, being regulated by kinase QseC. In this context, mutants for the luxS and qseC genes were built in SEPT362 strain. The strain deficient for luxS showed a significant reduction in CEF cell adhesion due to a role in the regulation of gene type 1 fimbriae. The deficient strain for qseC had a lower rate of mortality in chicks and a significant reduction in cell adhesion to CEF, due to a lack of type 1 fimbriae in the mutant / Mestrado / Genetica de Microorganismos / Mestra em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Wanderley Dias da Silveira, Marcelo Brocchi / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-25T05:13:36Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Paiva_JacquelineBoldrinde_D.pdf: 5619127 bytes, checksum: 79177e4233fdbb891e6530eb0f3438bd (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: Escherichia coli patogênica para aves (APEC) é responsável por inúmeras perdas no setor avícola mundial, por causar uma série de doenças nas aves que se apresentam de forma sistêmica ou localizada as quais são, coletivamente, denominadas colibacilose. Os mecanismos de virulência destas linhagens patogênicas para aves e, possivelmente, patogênicas para seres humanos ainda não foram totalmente elucidados. Este trabalho foi desenvolvido com o intuito de estudar genes possivelmente envolvidos com a patogenicidade de uma linhagem APEC causadora de Síndrome da Cabeça Inchada (SCI-07) ONT:H31, a partir de resultados obtidos em um microarranjo realizado in vitro, o qual comparou a linhagem em estudo à linhagem padrão E. coli EHEC 8624 (linhagem enterohemorrágica). Nove genes, detectados como sendo super-expressos no microarranjo, nas condições estudadas, foram selecionados para construção de mutantes nulos e de seus complementos [feoA (transporte de ferro), nirC (transportador de nitrito), flgE ( gancho flagelar), tyrR (regulador de transcrição da síntese de aminoácidos aromáticos), potF (subunidade periplasmática do transportador putrescina), yehD (possível fimbria), bfr (bacterioferrina), csgA ( subunidade principal da curlina) e entD (enteroquelina)]. Os mutantes construídos foram avaliados quanto as suas capacidades de adesão e invasão em cultivos celulares, e quanto ao seu potencial patogênico em aves de um dia de idade em comparação à cepa selvagem. As linhagens ?bfr, ?csgA e ?nirC apresentaram diminuição da capacidade de adesão em fibroblastos de aves (linhagem FEG) em comparação à linhagem selvagem em ambos os modelos adotados: na presença e ausência de alpha-D-mannopyranoside; a linhagem ?potF apresentou diminuição da adesão apenas na ausência de alpha-D-mannopyranoside. Os mutantes ?csgA e ?tyrR apresentaram redução na capacidade de invadir linhagem de células de trato respiratório humano (linhagem Hep-2). Nenhum mutante avaliado mostrou alteração na capacidade de invadir fibroblastos de aves (linhagem CEC-32). Os mutantes ?flgE e ?tyrR mostraram diminuição na capacidade de invadir e sobreviver em macrófagos de aves (linhagem HD11). A motilidade das linhagens mutantes ?csgA, ?bfr, ?yehD, ?potF, ?entD, ?nirC e ?feoA foi aumentada enquanto o mutante ?tyrR mostrou redução de motilidade e o mutante ?flgE tornou-se imóvel. Nenhuma linhagem mutante obtida mostrou a mesma capacidade da linhagem selvagem em causar mortalidade em aves de um dia; ?feoA tornou-se hipervirulenta e todos os demais mutantes apresentaram atenuação em diferentes graus, sendo a linhagem ?entD totalmente atenuada e, portanto, promissora quanto ao seu uso como linhagem vacinal.para o combate à colibacilose em aves, ou como linhagem carreadoras de epítopos presentes em outras linhagens APEC / Abstract: Avian Pathogenic Escherichia coli (APEC) is responsible for significant economic loses in the poultry industry worldwide, by cause a range of systemic or localized diseases in poultry collectively termed colibacillosis. The virulence mechanisms of these pathogenic strains for poultry and possibly pathogenic for humans have not been fully elucidated. This work was developed in order to study genes potentially involved in the pathogenicity of an APEC strain isolated from a Swollen Head Syndrome case (SCI- 07) ONT:H31; since the results obtained in a microarray performed in vitro, which compared the SCI-07 strain to the standard strain E. coli 8624 EHEC (enterohemorrhagic strain). Nine overexpressed genes in microarray under the conditions studied were selected for construction of null mutants and their complements [feoA (iron transport), nirC (nitrite transporter), flgE (flagellar hook), tyrR (transcriptional regulator of the aromatic amino acids biosynthesis), potF (periplasmic putrescine transporter subunit), yehD (putative adhesin), bfr (bacterioferritin), csgA (major curling subunit) and entD (enterochelin)]. The mutants constructed were evaluated for their capacity for adhesion and invasion in cell cultures, and for its pathogenic potential in one-day-old chickens in comparison to the wild type strain (WT). The ?bfr, ?csgA and ?nirC strains showed decreased adhesion capacity on avian fibroblasts (CEF cells) compared to the WT in both models adopted: in the presence and absence of alpha-D-mannopyranoside, the ?potF strain showed decrease on adhesion only in the absence of alpha-D-mannopyranoside. The ?csgA and ?tyrR mutants had reduced ability to invade human larynx cell line (Hep-2 cells). No mutant showed changes in the capacity of invade avian fibroblasts birds (CEC-32cells). The ?flgE and ?tyrR mutants showed decreased ability to invade and survive into avian macrophages (HD11 cells). The motility of mutant strains ?csgA, ?bfr, ?yehD, ?potF, ?entD, ?nirC and ?feoA was increased while the ?tyrR mutant showed reduced motility and the mutant ?flgE became nonmotile. No mutant strain showed the same capacity of the WT in cause mortality in one-day-old chickes; ?feoA became hipervirulenta and all other mutants showed attenuation in different degrees, including the ?entD that was completely attenuated and a promising vaccine candidate strain to combat colibacillosis in poultry, or as a carrier strain of epitopes present in other APEC strains / Doutorado / Genetica de Microorganismos / Doutora em Genética e Biologia Molecular

Orientadores: Clarice Weis Arns, Fernando Rosado Spilki / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-22T19:38:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silva_LucianaHelenaAntoniassida_D.pdf: 3352165 bytes, checksum: 1c8836441214fc41a7890899268f1163 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Os membros da família Paramyxoviridae são vírus que causam infecções em humanos e animais de importância econômica global. Entre os membros desta família incluem patógenos de importância mundial para os humanos, como o vírus respiratório sincicial humano (hRSV), o metapneumovírus humano (hMPV) e vírus de importância em Medicina Veterinária, como o vírus respiratório sincicial bovino (bRSV) e o metapnemovírus aviário (aMPV). Os membros da família Paramyxoviridae, subfamília Pneumovirinae são vírus envelopados, não-segmentados dotados de genoma de RNA de fita simples com sentido negativo. Na primeira parte do estudo, desenvolvemos um adenovírus recombinante expressando a proteína F do aMPV. A expressão da proteína F foi determinada por Western Blot. Os níveis de transcrição do gene F foram avaliados por RT-PCR em tempo real, em células HEK-293 e células HEP-2. Foi realizada a imunização experimental de Ad-aMPV-F e foi analisada a indução de resposta de anticorpos em camundongos BALB/c. Os títulos de anticorpos neutralizantes foram detectados após a imunização com Ad-aMPV-F. Na segunda parte do trabalho o objetivo foi à construção de adenovírus recombinantes expressando a proteína F do bRSV. A proteína F parece ser um antígeno ideal para fins de diagnóstico. Utilizando anticorpo anti-V-5, uma banda de ~90 kDa foi detectada no sobrenadante de cultura de células HEK-293 infectadas com Ad-bRSV-F. Na terceira parte do estudo, o objetivo foi à construção de dois vetores adenovirais expressando as proteínas G do aMPV e bRSV, a expressão destas proteínas em células HEK-293 infectadas foi analisada pela expressão do gene repórter, da proteína verde fluorescente (GFP) / Abstract: The members of the family Paramyxoviridae are viruses that cause infectious in human and animals of importance to global economics. Among the member of this family include pathogens of importance global for humans such as human respiratory syncytial virus (hRSV), the human and metapneumovirus (hMPV) and of viruses importance in veterinary medicine, such as bovine respiratory syncytial virus (bRSV) and avian metapnemovírus (aMPV). The members of the Paramyxoviridae are enveloped, non-segmented viruses, with negative-sense single stranded genomes. In the first part of the study, we developed a recombinant adenovirus expressing the F protein of AMPV. The expression of F gene was determined by Western Blot. The levels of transcription were evaluated by RT-PCR in real time in HEK-293 cells and HEP-2 cells. Immunization experiment was carried out Ad-AMPV-F was analyzed and the induction of antibody response in BALB/c mice. The neutralizing antibody titers detected after immunization with Ad-AMPV-F. In the second part, the objective was to construct recombinant adenoviruses expressing the F protein of bRSV. Protein F appears to be an ideal antigen for diagnostic purposes. Using the anti-antibody AdV-5, a single band of ~ 90 kDa was detected in the culture supernatant in 293 cells infected with Ad-bRSV-F. In the third part of the study, the objective was to build two adenoviral vectors expressing the G protein of aMPV and bRSV and the expression of these proteins in infected HEK-293 cells were analyzed for expression of the reporter gene, green fluorescent protein (GFP) / Doutorado / Microbiologia / Doutora em Genética e Biologia Molecular

Made available in DSpace on 2014-08-20T13:32:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-10-02 / Avian Necrotic Enteritis (NE) is an acute enterotoxaemia caused by Clostridium perfringens A and C. The control of the disease is based on antibiotics added to animal feed. The ban of this practice by consumer markets, considered the biggest challenge to industrial aviculture, demanded the adoption of other alternatives for its control, among others, immunization with recombinant vaccines. The aim of this work was to produce and evaluate C. perfringens recombinant α toxin (rAT) vaccines adjuvanted with either Al(OH)3 (rAT+Al(OH)3 or recombinant B subunit of the heat-labile enterotoxin of Escherichia coli (rLTB) (rAT+rLTB), and a chimeric protein containing the α toxin fused to rLTB (rLTB-AT). The rAT+Al(OH)3 was innocuous and protected mice against a challenge with native α toxin (sT), and it was immunogenic and did not affect productivity parameters in broilers. The rAT+rLTB showed a dose-protection relationship in mice, while rLTB-AT did not protect mice against sT challenge. The rAT could be an alternative for controlling NE. / A Enterite Necrótica Aviar (ENA) é uma enterotoxemia aguda, causada pelos Clostridium perfringens A e C, cujo controle baseia-se na adição de antibióticos na ração. A restrição dessa prática pelo mercado consumidor, que tornou seu controle o maior desafio para o setor avícola, exigiu a adoção de novas estratégias para o controle, entre elas a imunização. Vacinas recombinantes vêm despertando grande interesse entre pesquisadores e empresas do setor. O objetivo deste trabalho foi elaborar vacinas de toxina α recombinante de C. perfringens (rAT) utilizando como adjuvantes Al(OH)3 (rAT+Al(OH)3) e subunidade B recombinante da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (rLTB) (rAT+rLTB), e construir e avaliar uma proteína quimérica contendo rAT fusionada a rLTB (rLTB-AT). A rAT+Al(OH)3 foi inócua e protetora contra agressão de toxina α nativa (sT) em camundongos, e imunogênica em frangos de corte, sem afetar a produtividade. A rAT+rLTB demonstrou relação dose-proteção em camundongos, entanto a rLTB-AT não protegeu camundongos contra agressão de sT. A rAT demonstrou ser uma alternativa para controlar a ENA. Palavras-chave: Enterite Necrótica Aviar, Clostridium perfringens A, toxina α recombinante, vacinas.

The plumage colour and patterns of birds have interested biologists for a long time.Why are some bird species all black while others have a multitude of colours? Does ithave anything to do with sexual selection, predator avoidance or social signalling?Many questions such as these have been asked and as many hypotheses about thefunctional role of the plumage have been formed. The problem, however, has been toprove any of these. To test these hypotheses you need to analyse the bird plumagesand today such analyses are still rather subjective. Meaning the results could varydepending on the individual performing the analysis. Another problem that stemsfrom this subjectiveness is that it is difficult to make quantitative measurements of theplumage colours. Quantitative measurements would be very useful since they couldbe related to other statistical data like speciation rates, sexual selection and ecologicaldata. This thesis aims to assist biologists with the analysis and measurement of birdplumages by developing a MATLAB toolbox for this purpose. The result is a wellstructured and user friendly toolbox that contains functions for segmenting, resizing,filtering and warping, all used to prepare the images for analysis. It also containsfunctions for the actual analysis such as basic statistical measurements, principalcomponent analysis and eigenvector projection.

La grippe, infection respiratoire virale fréquente, est due aux virus Influenza. Leur génome est constitué par huit molécules d’ARN de polarité négative retrouvés sous la forme de complexe ribonucléique (RNPv). Au cours du cycle viral, il a été démontré que les régions terminales des segments de gène étaient cruciales pour l’incorporation sélective des huit RNPv à l’intérieur des particules virales. Par des techniques d’interaction in vitro et de tomographie électronique, nous avons montré que les segments de gène du virus H3N2 interagissaient entre eux par des interactions ARN/ARN impliquant leurs régions de packaging. Nos résultats suggèrent que la mise en place de ce réseau permettrait la formation d’un complexe supra macromoléculaire multi-segmenté permettant l’incorporation d’un jeu complet des huit RNPv dans les particules virales néosynthetisées. En raison de la nature segmentée du génome viral, des phénomènes de réassortiment génétique peuvent avoir lieu lors d’une co-infection. Afin de définir les mécanismes responsables de la restriction observée lors de ce phénomène, nous avons évalué le taux de réassortiment génétique in vitro entre le virus humain H3N2 et le virus aviaire H5N2. Nos résultats suggèrent que le mécanisme gouvernant l’incorporation sélective des segments de gènes, régulerait le réassortiment génétique. Nous avons montré que la modulation de l’interaction ARN/ARN entre les segments de gènes HA et M permet d’augmenter le taux d’incorporation du segment de gène HA H5 dans le fond génétique du virus humain, prérequis pour l’émergence de virus pandémique / The Flu is a frequent viral infectious disease caused by the Influenza viruses. Their genomes are composed by eight negative single-stranded RNA organised as vRNPs. During the viral cycle, the terminal non-coding and coding regions of viral genome have been shown to be crucial for the selective incorporation of a complete set of the eight vRNPs into influenza viral particles. Band shift assay and electron tomography allowed us to show that all gene segments interact together by RNA/RNA interactions involving their packaging region. Our results suggest that the eight genomic vRNAs are selected and packaged as an organized supramolecular complex held together between identified packaging regions into neosynthesized virions. Due to genome segmented nature, genetic reassortment can occur during co-infection. In order to identify molecular mechanisms responsible for the observed restriction during the genetic reassortment, we have developed a new competitive reverse genetic strategy allowing us to evaluate the genetic reassortment between H3N2 and H5N2 viruses. Our results suggest that mechanism controlling the packaging should regulate genetic reassortment. We have shown that the modulation of RNA/RNA interaction between HA and M gene segment have allowed us to increase HA H5 gene segment incorporation rate into a viral human genetic background, prerequisite for pandemic virus emergency

The eyesight of birds is essential for their survival in a free environment; tiny alteration in this organ may cause loss of vision, consequently the difficulty or even the impossibility to hunt, move or protect themselves from predators; due to these particularities, the objective of this paper was to know the normal rate of intra-ocular pressure (IOP) and to identify the ocular anatomy through sonographic biometry in B-scan through transpalpebral way, so the ophthalmic examination can be complete and reliable. It was valued the IOP of 15 Toco Toucans (Ramphatos toco) and 15 Red-breasted Toucan (Ramphastos dicolorus) through applanation tonometry, using a Tono-Pen VET® tonometer and executed sonographic biometry ocular in 5 Toucans Toco and in 5 Red-breasted Toucan. The IOP from Toco Toucans, reliable in 95% got the media between 13,79 mmHg to17,61 mmHg, while the Red-breasted Toucan got the IOP between 12,05 mmHg and 16,81 mmHg. The ocular ultrasound eye was efficient as it could identify the previous segment, the lens, the posterior segment, positioning of the retina, Pecten and retrobulbar space. The Toco Toucans sonographic biometry obtained the bulbar average axial length of 1,66 cm, axial shaft of anterior segment 0,25 cm, shaft axial lens 0,35 cm axial shaft of posterior segment 1,05 cm, transverse shaft of the posterior segment 2,20 cm, transverse shaft of the lens 1,21 cm, and in Red-breasted Toucan the bulbar average axial length of 1,29 cm, axial shaft of anterior segment 0,10 cm, axial shaft lens 0,40 cm axial shaft of posterior segment 0,79 cm, shaft transverse of the posterior segment 1,39 cm, shaft transverse of the lens 0,99 cm. It follows that it is possible to measure IOP by tonometry with Tono-pen VET® tonometer and ocular sonographic biometry the B-scan transpalpebral, route is feasible for these species. / A visão das aves é fundamental para a sua sobrevivência em vida livre, pequenas alterações neste órgão, podem levar a perda da acuidade visual, consequentemente dificuldade ou mesmo impossibilidade em caçar, se locomover ou se defender de predadores. Devido a estas particularidades, o objetivo deste trabalho foi o de conhecer o valor normal da pressão intraocular (PIO) e identificar a anatomia ocular por meio da ecobiometria em modo B pela via transpalpebral, tornando o exame oftálmico mais completo e fidedigno. Foi avaliada a PIO de 15 Tucanos-toco (Ramphastos toco) e de 15 Tucanos-de-bico-verde (Ramphastos dicolorus) por meio da tonometria de aplanação, usando o tonômetro Tono-Pen VET®. Foi realizado ecobiometria ocular em 5 Tucanos-toco e 5 Tucanos-de-bico-verde. A PIO dos Tucanos-toco com 95% de confiança teve uma média entre 13,79 mmHg e 17,61 mmHg, já os Tucanos-de-bico-verde tiveram a PIO entre 12,05 mmHg e 16,81 mmHg. A ecografia ocular se mostrou eficiente pois foram identificados o segmento anterior, a lente, o segmento posterior, o posicionamento da retina, o pécten e o espaço retrobulbar. Na ecobiometria foram obtidos nos Tucanos-toco média do eixo axial bulbar de 1,66 cm, eixo axial do segmento anterior 0,25 cm, eixo axial do segmento posterior 1,05 cm, eixo transversal do segmento posterior 2,20 cm, eixo axial da lente 0,35 cm e eixo transversal da lente 1,21 cm, e nos Tucanos-de-bico-verde a média do eixo axial bulbar de 1,29 cm, eixo axial do segmento anterior 0,10 cm, eixo axial do segmento posterior 0,79 cm, eixo transversal do segmento posterior 1,39 cm, eixo axial da lente 0,40 cm e eixo transversal da lente 0,99 cm. Conclui-se que é possível mensurar a PIO por meio da tonometria de aplanação com o tonômetro Tono-pen VET® e que a ecobiometria ocular, em modo B pela via transpalpebral é viável para estas espécies.