Made available in DSpace on 2014-06-12T22:58:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3167_1.pdf: 1175985 bytes, checksum: 9509341429c9fdb3aa18127a0e3cbb23 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2011 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / O aumento da procura dos consumidores por alimentos saudáveis tem impulsionado um novo nicho da indústria de alimentos para o desenvolvimento de produtos com propriedades funcionais. Inseridos neste grupo estão os alimentos probióticos que veiculam microrganismos vivos que ao aderirem ao epitélio intestinal passam a promover uma série de benefícios à saúde do hospedeiro. O processamento de alimentos probióticos requer uma série de cuidados já que a matriz alimentar que veicula as cepas adicionadas deve oferecer condições favoráveis para manutenção da viabilidade das células até a chegada no trato gastrintestinal do consumidor. Aliando-se a nova tendência da indústria alimentícia com a necessidade de criar produtos derivados do leite de cabra com valor de mercado desenvolveu-se neste estudo diferentes tipos de queijos de coalho caprino adicionado de bactérias láticas probióticas. Foram realizados cinco ensaios diferentes: Q1 Controle - L. lactis subsp. lactis + L. lactis subsp. cremoris; Q2 - L. acidophilus; Q3 - L. paracasei; Q4 - Bifidobacterium lactis e Q5 Cultura mista - L. acidophilus + L. paracasei + Bifidobacterium lactis, para verificar se as bactérias adicionadas isoladamente ou em co-cultura interferiam de alguma forma nas características físico-químicas, microbiológicas, sensoriais e funcionais do queijo de coalho caprino. O processamento tecnológico adotado permitiu produzir queijos com qualidade microbiológica satisfatória do ponto de vista sanitário, e com potencial probiótico já que foram observadas contagens superiores a 106 - 107 UFC/g de bactérias láticas em todos os queijos analisados. Das propriedades tecnológicas avaliadas, houve maior atividade proteolítica das bactérias inoculadas em co-cultura no Q5. Para a capacidade de derretimento observou-se redução do diâmetro ao invés de derretimento. O perfil de textura experimental revelou um aumento da dureza de todos os queijos ao longo do armazenamento, concomitante a um aumento nos parametros secundários de gomosidade e mastigabilidade. O teste de cor revelou queijos possuindo alta luminosidade (L *), com predomínio do componente amarelo (b *). Dos ensaios físico-químicos em alguns parâmetros avaliados houve diferença estatística significativa (p<0,05) que refletiram na qualidade final do queijo como o teor de lactose que para o Q1 foi significativamente menor quando comparado aos demais tratamentos. Em conseqüência também se observou aumento (p<0,05) da acidez do queijo Q1 o que pode ser indício de sua menor aceitação em todos os parâmetros sensoriais avaliados no teste afetivo de aceitabilidade. Entre os tratamentos avaliados o Q5 foi o mais bem colocado no teste de aceitação, intenção de compra e ordenação-preferência. Os resultados obtidos sugerem o queijo de coalho caprino como um bom carreador para bactérias láticas probióticas sendo considerado um alimento potencialmente probiótico

Orientador : Jose Aristodemo Pinotti / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-07-14T12:50:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cunha_AntonioCarlosdeMoura_D.pdf: 1173131 bytes, checksum: 1f3b49b2d72221810098f1ae16ded591 (MD5) Previous issue date: 1976 / Resumo: Estudou-se o material obtido da cavidade uterina de 63 puérperas, sob o ponto de vista bacteriológico. Destas, 41 foram consideradas normais (grupo I) e, a colheita do material realizada no terceiro dia pós-parto (normal, fórcipe ou cesárea. As demais 22 pacientes (grupo II) eram portadoras de endometrite, sendo a colheira praticada quando do diagnóstico da infecção. O número total de culturas efetuadas foi de 94 das quais 31 do canal cervical, para a avaliação do método de colheita. A diferença marcante dos achados (67,7%) entre colo e corpo, validou o método transcervical de colheita aqui empregado. Empregou-se técnica especial de transporte e de cultura para germes anaeróbios, respectivamente, mini-jarra e "GasPak". Foram obtidas 23 diferentes bactérias anaeróbias ou aeróbias, patogênicas ou não, que se distribuiram de igual modo nos grupos I e II, e não houve predominância de qualquer espécie de bactéria em qualquer grupo, segundo nos informou a análise estatística. O número médio das diferentes bactérias por cultura foi 2,2 e 2,4, respectivamente em pacientes normais e infectadas. Floras mistas de aeróbios mais anaeróbios, constituiram o achado predominante, tanto no grupo I (4l,4%), quanto no II (45,5%). Ênfase especial se deu ao encontro de 37,2% e de 47,6% de germes anaeróbios, respectivamente, nos grupos I e II. Por fim, confronta o autor seus resultados com os fornecidos pela literatura pertinente e, atenta para a importância dos germes anaeróbios como agentes causais de infecção puerperal / Abstract: Not informed / Doutorado / Doutor em Medicina

Orientador: Brenda Paula Figueiredo de Almeida Gomes / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:02:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinheiro_ErickaTavares_D.pdf: 6781535 bytes, checksum: 922a6f6d42935816319b3755f08328b6 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: O presente estudo teve por objetivos: identificar a microbiota de canais radiculares de dentes com insucesso do tratamento endodôntico, e testar, in vitro, a suscetibilidade de cepas de Enterococcus faecalis a diferentes antibióticos. Sessenta dentes tratados endodonticamente com lesões periapicais persistentes foram selecionados para esse estudo. Durante o retratamento endodôntico, o material obturador foi removido e foi realizada a coleta microbiológica dos canais radiculares. Foram utilizados meios de transporte, cultura e incubação que propiciam o crescimento de bactérias anaeróbias estritas. Vinte e uma cepas de Enterococcus faecalis foram testadas quanto à suscetibilidade aos seguintes antimicrobianos: benzilpenicilina, amoxicilina, amoxicilina + ácido clavulânico, clindamicina, eritromicina, azitromicina, vancomicina, cloranfenicol, tetraciclina, doxiciclina, ciprofloxacino e moxifloxacino. As concentrações inibitórias mínimas (CIMs) dos agentes antimicrobianos foram determinadas pelo método do E-test. As cepas também foram testadas quanto à produção de beta-lactamase utilizando nitrocefin. Microrganismos foram isolados em 51 casos. A maioria dos canais apresentava somente 1 ou 2 espécies bacterianas. Do total de espécies bacterianas isoladas, 57,4% eram bactérias anaeróbias facultativas e 83,3% Gram-positivas. Enterococcus faecalis foi a espécie bacteriana mais freqüentemente isolada. Bactérias anaeróbias estritas representavam 42,6% das espécies e, entre eles, Peptostreptococcus spp. foram os mais isolados. Associações significantes foram encontradas entre dor ou história de dor e infecções anaeróbias e polimicrobianas (p<0,05). Todas as cepas de Enterococcus faecalis foram sensíveis, in vitro, às penicilinas, entretanto as CIMs de amoxicilina e amoxicilina + ácido clavulânico (CIM90= 0,75 µg/ml) foram menores do que as de benzilpenicilina (CIM90= 3.0 µg/ml). Todas as cepas também foram sensíveis a vancomicina e moxifloxacino, enquanto 95,2% foram sensíveis a cloranfenicol. Entre os isolados, 85,7% foram sensíveis a tetraciclina e doxiciclina, e 80,9% a ciprofloxacino. As CIMs de eritromicina variaram de 0,38 a >256 µg/ml, com apenas 28,5% das cepas sensíveis (CIM =0.5 µg/ml). Suscetibilidade limitada também foi verificada com azitromicina, que foi ativa contra somente 14,2% dos isolados. Nenhuma cepa produziu beta-lactamase. Concluímos que a microbiota dos canais de dentes tratados endodonticamente é composta por um número limitado de espécies microbianas, predominantemente Gram-positivas. Anaeróbios facultativos, especialmente Enterococcus faecalis, são os microrganismos mais comumente isolados, entretanto, infecções polimicrobianas e anaeróbios estritos são freqüentemente encontrados em canais de dentes tratados endodonticamente com sintomatologia clínica. As cepas de Enterococcus faecalis foram sensíveis, in vitro, a amoxicilina, amoxicilina associada ao ácido clavulânico, vancomicina e moxifloxacino. A maioria dos isolados foi sensível aos antibióticos: cloranfenicol, tetraciclina, doxiciclina, ou ciprofloxacino. Eritromicina e azitromicina foram menos eficazes / Abstract: The objectives of the present study were to identify the microbial flora within root canals of teeth with failed root canal treatment, and to test, in vitro, the susceptibility of Enterococcus faecalis isolates. Sixty root-filled teeth with persisting periapical lesions were selected for this study. During nonsurgical endodontic re-treatment, the root-filling material was removed and the canals were sampled. Microbial sampling, isolation and species determination were performed using advanced microbiologic techniques for anaerobic species. Additionally, 21 Enterococcus faecalis isolates were tested for their antibiotic susceptibilities to benzylpenicillin, amoxicillin, amoxicillin-clavulanic acid, erythromycin, azithromycin, vancomycin, chloramphenicol, tetracycline, doxycycline, ciprofloxacin and moxifloxacin. Minimal inhibitory concentrations (MICs) for the antimicrobial agents were determined using the E-test System. The strains were also tested for ß-lactamase production with nitrocefin. Microorganisms were recovered from 51 teeth. In most cases, one or two strains per canal were found. Of the microbial species isolated, 57.4% were facultative anaerobic species and 83.3% Gram-positive microorganisms. Enterococcus faecalis was the bacterial species most frequently recovered. Obligate anaerobes accounted for 42.6% of the species and the most frequently isolated genera was Peptostreptococcus. Significant associations were observed between pain or history of pain and polymicrobial infections or anaerobes (p<0.05). All Enterococcus faecalis strains were susceptible to penicillins in vitro, however, the MICs of amoxicillin and amoxicillinclavulanic acid (MIC90= 0.75 µg/ml) were lower than for benzylpenicillin (MIC90= 3.0 µg/ml). All strains studied were also susceptible to vancomycin and moxifloxacin, while 95.2% were susceptible to chloramphenicol. Among the isolates, 85.7% were susceptible to tetracycline and doxycycline, and 80.9% to ciprofloxacin. The MIC of erythromycin ranged from 0.38 to >256 µg/ml; only 28.5% of the strains were susceptible (MIC =0.5 µg/ml). Limited susceptibility was also observed with azithromycin which was active against only 14.2% of isolates. No strains produced ß-lactamase. Therefore, it was concluded that the microbial flora in canals after failure of root canal treatment were limited to a small number of predominantly Gram-positive microbial species. Facultative anaerobes, especially Enterococcus faecalis, were the most commonly isolated microorganisms, however, polymicrobial infections and obligate anaerobes were frequently found in canals of symptomatic root-filled teeth. Enterococcus faecalis isolates were completely susceptible, in vitro, to amoxicillin, amoxicillin-clavulanic acid, vancomycin, and moxifloxacin. Most isolates were susceptible to chloramphenicol, tetracycline, doxycycline, or ciprofloxacin. Erythromycin and azithromycin were least effective / Doutorado / Endodontia / Doutor em Clínica Odontológica

Submitted by Israel Vieira Neto (israel.vieiraneto@ufpe.br) on 2015-03-05T17:54:33Z No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Leila Barros Araújo.pdf: 2405626 bytes, checksum: a448c1457dc45f59cc3518f2e48fedd4 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-05T17:54:33Z (GMT). No. of bitstreams: 2 DISSERTAÇÃO Leila Barros Araújo.pdf: 2405626 bytes, checksum: a448c1457dc45f59cc3518f2e48fedd4 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014-07-29 / Os aterros sanitários são grandes emissores de gás metano, por isso, devem possuir sistemas capazes de diminuir as emissões através do aproveitamento, queima e/ou drenagem do metano. Neste sentido, as camadas de cobertura contribuem para reduzir as emissões fugitivas que escapam por elas. Assim, são realizados estudos para encontrar camadas alternativas com o uso de compostos orgânicos, que através das bactérias metanotróficas, podem oxidar o metano, aumentando a eficiência da camada, como realizado nessa pesquisa. O presente trabalho objetivou analisar a eficiência da oxidação do metano, através da amostragem dos gases em diferentes pontos de uma coluna experimental, simulando a camada de cobertura utilizada em uma célula experimental de um aterro sanitário. A coluna foi confeccionada com segmentos de tubo plástico rígido com diâmetro interno de 15 cm e altura total de 75 cm. A coluna foi preenchida com 30 cm de solo compactado sobreposta com 30 cm de mistura de 50% de solo mais 50% de composto orgânico e instrumentada com sensores para medir temperatura, condutividade elétrica e umidade, com os dados armazenados em datalogger. O fluxo de gás metano injetado foi de 0,5 NL/h controlado por rotâmetros e feita leitura dos gases com o detector portátil de gases. Após os ensaios, foi verificado que a mistura de solo+composto utilizada mostrou-se adequada para a oxidação, mas não se pode concluir que todo o gás metano foi oxidado, e sim que há uma tendência de oxidação na camada, onde a coluna reteve, em média, 60% do gás metano injetado.

O Atlântico Sul está entre os menos estudados dos oceanos, em relação às suas comunidades microbianas, apesar da importância ecológica e do interesse biotecnológico nos micro-organismos marinhos. Este potencial biotecnológico inclui a produção de enzimas como as lípases de endoglicanases, que podem ser utilizadas na produção de biocombustíveis, no processamento têxtil e na suplementação de detergentes. Neste contexto, o presente trabalho objetivou o isolamento, identificação filogenética e avaliação das atividades lipolíticas e endoglucanolíticas de bactérias cultivadas de sedimentos do leste do Oceano Atlântico Sul, e de águas da região da Elevação do Rio Grande. Para isto, oito amostras de sedimento e dezesseis de água foram coletadas em novembro de 2009 e novembro de 2011, para as referidas regiões do Oceano Atlântico Sul. Os micro-organismos foram cultivados e identificados pela análise de sequências de genes de RNA ribossômico 16S. Posteriormente, as atividades lipolíticas e endoglucanolíticas foram determinadas em ensaios em placas com diferentes substratos tais como Tween20, Tween40, Twen60, Tween80 para a atividade lipolítica, e carboximetilcelulose para a atividade endoglucanolítica. No total 212 linhagens foram isoladas e 138 foram identificadas filogeneticamente das duas áreas de estudo, em cinco classes diferentes e trinta gêneros, sendo as classes Gammaproteobacteria e Bacilli as mais freqüentes, assim como os gêneros Halomonas e Bacillus. Os sedimentos apresentaram maior diversidade em nível de espécie, enquanto que nas amostras pelágicas a diversidade foi maior em nível de gênero e classe. Dezoito linhagens isoladas parecem pertencer a espécies ainda não descritas de bactérias. As 212 linhagens foram testadas quanto às atividades enzimáticas. Mais que metade destes organismos apresentou algum tipo de atividade lipolítica, enquanto que a atividade endoglucanolítica foi restrita a dez linhagens. O método de isolamento direto em meio sólido contendo lipídeos foi o mais apropriado para a prospecção de bactérias lipolíticas. Os resultados deste trabalho atestam a necessidade de estudos sobre a microbiota marinha cultivável, bem como seu potencial para a obtenção de enzimas com uso industrial. / The South Atlantic is among the less studied oceans concerning its microbial communities, despite the ecological importance and the biotechnological interest related to marine microorganisms. In this context, the present work aimed the isolation, phylogenetic identification and evaluation of the lipolytic and endoglucanolytic activities of bacteria from sediments of the Eastern South Atlantic and waters from the Rio Grande Rise Region. For this, eight sediment samples and sixteen water samples were collected in two cruises conducted on November/2009 and November/2011 to the specified areas. Microorganisms were cultivated and identified by 16S rRNA sequences analysis. Lipolytic and endoglucanolytic activities were evaluated on plate assays with different substrates (Tween20, Tween40, Twen60, Tween80 for lypotytic activity, and carboximethilcellulose for endoglucanolytic activity). 138 bacteria were phylogenetically identified from the two studied areas in five different classes and thirty genera. The classe Gammaproteobacteria and Bacilli and the genera Halomonas and Bacillus were the most frequent identified. Higher species-level diversity was detected in sediments, but a higher genus- and class-level diversity was present on waters samples. Eighteen strains seem to belong to no yet described bacterial species. Two hundred and twelve strains were tested for the enzymatic activities. More than a half of the bacteria showed some kind of lipolysis, while the endoglucanolytic activity was restricted to ten strains. The direct isolation in solid media containg a lipidic substrate was the best method to prospect lipolytic bacteria. The results of this work attest the necessity of studies on the cultivable marine microbiota, as well as their potential for the prospection of industrially relevant enzymes.

Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2016. / Made available in DSpace on 2016-09-20T04:20:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 341386.pdf: 1065093 bytes, checksum: 934536c1eda5f8ff8b394598fb1e2b66 (MD5) Previous issue date: 2016 / As linguiças curadas cozidas embaladas à vácuo possuem um tempo de vida determinado pela indústria de 90 dias, porém o produto sofre deterioração no decorrer da vida de prateleira, ocasionando manifestações de clientes e devoluções do produto. O principal objetivo deste artigo é a avaliação da vida de prateleira deste produto, conservado em temperatura ambiente, sendo testado um conservante diferenciado como uma possível forma de controle da contaminação microbiana superficial do mesmo. Para isso utilizou-se uma mistura comercial de ácidos orgânicos com a função de regulador de acidez, o qual contêm os ácidos láurico, cítrico, lático, acético, ascórbico e seus sais de ácidos graxos. Esse foi pulverizado sobre as linguiças, em seguida embaladas a vácuo e avaliadas quanto às características físico-sensoriais de cor, odor e aparência, bactérias láticas e pH. Características físico-sensoriais diferentes do padrão definido para o produto, como perda de vácuo, diferença de coloração ou presença de slime (liquido liberado pelo produto que se torna viscoso e esbranquiçado pela presença de bactérias acido láticas), foram estabelecidas como cruciais para abertura da embalagem e posterior avaliação de bactérias láticas e pH do produto. Os critérios utilizados para determinar que o produto se apresentava impróprio para consumo foram: presença de slime, pH< 6,2 e contagem de bactérias láticas > 106 UFC/g. Através do modelo probabilístico de Weibull foram comparados T1 (produto com o conservante de superfície, composto pelo regulador de acidez) e T2 (produto sem adição do regulador de acidez). Alcançando resultados positivos para T1, onde 41,3% dos pacotes ainda estavam íntegros e aceitáveis após 90 dias, tendo algumas amostras alcançado 187 dias de validade, apresentando-se físico-sensorialmente e microbiologicamente de acordo com o produto padrão. Enquanto que para T2 apenas 7,6% das amostras tiveram sobrevivência acima de 90 dias.<br> / Abstract : The cured cooked sausages vacuum packed have a given life span by 90 days industry, but the product deteriorates during the shelf life, resulting in manifestations of customers and product returns. The main purpose of this article is to evaluate the shelf life of this product, stored at room temperature and tested a different preservative as a possible way to control microbial contamination of the surface of it. For this we used a commercial mixture of organic acids with acidity regulator function, which contain lauric, citric, lactic, acetic, ascorbic acid and its salts of fatty acids. This was sprayed on the sausages, then vacuum packed and evaluated for physical and sensory characteristics of color, odor and appearance, lactic acid bacteria and pH. different physical and sensory characteristics of the pattern defined for the product, such as loss of vacuum, color difference, or the presence of slime (liquid released by the product becomes sticky and whitened by the presence of acid bacteria lactic acid) have been established as a key for opening the packaging and subsequent evaluation of lactic acid bacteria and pH of the product. The criteria used to determine that the product is presented unfit for consumption were: slime presence, pH <6.2, Lactic bacteria count> 106 UFC/g. Through the Weibull probability model were compared T1 (product surface preservative, comprising the acidity regulator) and T2 (a product without the addition of acidity regulator). Achieving positive results for T1, where 41.3% of the packages were still intact and acceptable after 90 days, with some samples reached 187 days of validity, performing physical and sensory and microbiologically according to the standard product. While only 7.6% for T2 samples were survival over 90 days.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-03T16:17:32Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 584533 bytes, checksum: fd4ac14e1e677e1fdd9f3ee4f74281df (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-03T16:17:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 584533 bytes, checksum: fd4ac14e1e677e1fdd9f3ee4f74281df (MD5) Previous issue date: 2015-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Os vírus que infectam bactérias são denominados bacteriófagos, sendo também referidos como “fagos”. Os bacteriófagos que infectam bactérias fitopatogênicas, tem despertado crescente interesse devido ao seu potencial para o biocontrole. A bactéria Gram negativa Xanthomonas campestris pv. campestris, é o agente causal da podridão negra das brássicas (Brassicaceae), sendo responsável por perdas econômicas, resultantes do difícil controle. Assim, este trabalho teve como objetivo realizar o isolamento e a caracterização biológica e molecular de bacteriófagos infectando Xanthomonas campestris pv. campestris. Para isso, plantas da família Brassicaceae apresentando sintomas da podridão negra e solo rizosférico, foram coletados em campos de cultura em Coimbra-MG e triados para a presença de bacteriófagos adotando a técnica de formação de placas de lise por meio da sobrecamada de ágar. Das nove amostras analisadas, uma amostra apresentou placas de lise persistente nos quatro ciclos de propagação. O fago foi denominado Xacp1 e apresentou cabeça icosaédrica de aproximadamente 30 ± 5 nm de diâmetro e uma cauda curta com 6 ± 0,2 nm de comprimento e 7 ± 0,2 nm de diâmetro. O bacteriófago possui ácido nucleico composto por uma única molécula de DNA fita dupla (dsDNA) com tamanho estimado em 65 Kpb. De acordo com a morfologia e tipo de genoma, o bacteriófago Xacp1 foi classificado na família Podoviridae (Ordem Caudovirales). A sequencia do genoma completo do fago está sendo analisada e será utilizada para estudar o relacionamento filogenético com outros bacteriófagos que infectam Xanthomonas campestris. O bacteriófago mostrou capacidade em infectar apenas isolados de Xanthomonas vcampestris pv. campestris no teste de susceptibilidade, apresentando placas de lise com coloração, tamanho e formato padrão. Isolados bacterianos relacionados e não relacionados a Xanthomonas campestris pv. campestres não foram suscetíveis à infecção. Em conjunto esses resultados demostram que Xacp1 apresentou características ideais de especificidade e virulência que motivam futuros estudos para sua utilização como uma ferramenta biotecnológica para a utilização no biocontrole da podridão negra em brássicas. / Viruses that infect bacteria are termed bacteriophages, and also referred to as “phage”, or “bacteriovírus”. The bacteriophages that infect bactéria plant pathogens, has attracted increasing interest due to its potential for biocontrol. The gram-negative bacterium Xanthomonas campestris pv. campestris is causal agent of black rot of crucifers (Brassicaceae), accounting for economic losses resulting from difficult to control. This study had objective perform the isolation and molecular characterization of biological and bacteriophage infecting Xanthomonas campestris pv. campestris. For this, plants of the family Brassicaceae showing symptoms of black rot and rhizosphere soil were collected in crop fields in Coimbra-MG and screened for the presence bacteriophage adopting the technique of forming plaques by agar overlay. The analyzed nine samples, one sample showed signs of Persistent lysis in four cycles of the spread. The phage was named φXacp1 and icosahedral head showed approximately 30 ± 5 nm in diameter and a tail short-± 5 nm in length and 0.7 ± 0.3 4 nm diameter. The bacteriophage has nucleic acid consists of a single double stranded DNA molecule (dsDNA) with size estimated at 65 kbp. According to the morphology and type of genome, bacteriophage φXacp1 scored in Podoviridae family (Order Caudovirales). The sequence the complete genome of the phage is being analyzed and will be used to study the phylogenetic relationships with other bacteriophages that infect Xanthomonas campestris. The bacteriophage showed ability to infect only Xanthomonas campestris pv. campestris in susceptibility testing, presenting plaques staining, size and pattern shape. Isolated bacterial related and unrelated to Xanthomonas campestris. Country were not susceptible to infection. viiTogether these results demonstrate that φXacp1 presented ideal characteristics of specificity and virulence that motivate future studies for its use as a biotechnological tool for use in biocontrol of black rot in crucifers.

Submitted by Reginaldo Soares de Freitas (reginaldo.freitas@ufv.br) on 2015-11-19T15:32:51Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 915978 bytes, checksum: da5fcdc42ee99fb9c029e78a1ab116a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-19T15:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 915978 bytes, checksum: da5fcdc42ee99fb9c029e78a1ab116a9 (MD5) Previous issue date: 2015-06-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Objetivou-se avaliar o efeito de classe sexual e de níveis dietéticos de proteína bruta sobre o consumo e a digestibilidade total dos constituintes das dietas, o balanço de compostos nitrogenados, as quantidades de ureia filtrada e reabsorvida nos rins e excretada na urina em bovinos Nelore. Avaliou-se, também, a produção de proteína microbiana e a reciclagem qualitativa da ureia. Foram utilizados oito animais da raça Nelore, sendo quatro novilhos inteiros e quatro novilhas, com peso corporal (PC) médio inicial de 333,5±24,4 e 292±12,9 kg, respectivamente, fistulados no rúmen, distribuídos em dois Quadrados Latino (QL) 4 x 4. As dietas, contendo 50% de silagem de milho e 50% de concentrado na base da matéria seca (MS), foram fornecidas duas vezes ao dia, ad libitum e foram constituídas de quatro níveis de proteína bruta (PB): 9,0; 11,0; 13,0 e 15,0 % na base da MS, correspondendo a 65,91; 68,32; 70,00 e 71,35% de PDR. Cada período experimental teve duração de 14 dias, com sete dias de adaptação e sete dias para procedimentos e coletas de amostras de alimentos, sobras, sangue, digesta e fluido ruminais, urina e fezes. Para avaliar a reciclagem de ureia, utilizou-se infusão intravenosa de 15N15N-ureia, na dose diária de 220 mg de 15N-ureia, por 72 horas. As variáveis dependentes foram avaliadas de acordo com o delineamento em QL 4 x 4 e a comparação entre níveis dietéticos de PB foi realizada através da decomposição ortogonal da soma dos quadrados associada às fontes de efeito linear, quadrática e cúbica. Essas análises foram conduzidas utilizando o procedimento MIXED do SAS, assumindo-se variâncias homogêneas entre as dietas. Não houve efeito de interação (P > 0,05) entre as classes sexuais e níveis dietéticos de PB para qualquer das variáveis avaliadas neste estudo. A classe sexual e os níveis dietéticos de PB não afetaram (P > 0,05) os consumos de MS, matéria orgânica (MO), MO digerida (MOD), extrato etéreo (EE) e carboidratos não fibrosos (CNF), em kg/dia, nem os consumos de MS e da fibra insolúvel em detergente neutro corrigida para cinzas e proteína (FDNcp), em função do PC. Não houve efeito de classe sexual (P > 0,05), mas houve efeito linear de níveis dietéticos de PB (P < 0,05) sobre os consumos de PB e de NDT e sobre as digestibilidade totais de PB e de FDNcp. A excreção fecal de N foi maior em machos do que em fêmeas (P < 0,05) e foi afetada linearmente (P < 0,05) pelos níveis dietéticos de PB. O consumo, as excreções urinárias de N-total, ureia e N- ureico, o N retido, a relação NU:NT e a concentração plasmática de N-ureico não apresentaram efeito de classe sexual (P > 0,05), mas foram afetadas linearmente pelos níveis dietéticos de PB (P < 0,05). Entretanto, esses efeitos não foram suficientes (P > 0,05) para resultar em diferenças no N retido expresso em função do N ingerido sendo em média 26,05 % do N ingerido. Não houve efeito de classe sexual (P > 0,05) ou de níveis dietéticos de PB (P > 0,05) sobre a excreção urinária de creatinina cuja média foi de 23,2 mg/kg PC nem sobre a taxa de filtração glomerular com média de 1,84 mL/min/kg PC. Não houve efeito da classe sexual (P > 0,05), contudo, houve efeito linear crescente de níveis dietéticos de PB (P < 0,05) sobre as quantidades de ureia filtrada, reabsorvida e a excreção fracional de ureia. Considerando a excreção urinária de ureia (Ŷ) em função da ingestão de N (X), em g/dia, obteve-se a equação Ŷ = 0,5606X. Relacionando-se a concentração plasmática de N-ureico (Ŷ, mg/dL) e a ingestão de N (X, g/dia), obteve-se a equação: Ŷ = 0,1234X, enquanto a regressão Ŷ = 3,9293X foi obtida relacionando-se a excreção urinária de ureia (Ŷ, g/dia) e a concentração plasmática N-ureico (X, mg/dL). A relação entre a excreção fracional de ureia (Ŷ) e a ingestão de N (X, g/dia) foi descrita pela equação: Ŷ = 0,3684(1-e-0,0105X). Houve efeito linear de níveis dietéticos de PB (P < 0,05) sobre a produção de Nmic e sobre N degradado ingerido. A eficiência de utilização do N ingerido não foi afetada (P > 0,05) pelas classes sexuais ou pelos níveis dietéticos de PB. Em relação à eficiência microbiana houve efeito de classe sexual (P < 0,05), quando expressa em função da MOD, mas esse efeito não foi significativo (P > 0,05) quando expressa em função do consumo de NDT. Ajustando-se a produção de PBmic (g/dia) em função dos consumos de PB (kg/dia) e de NDT (kg/dia) obteve-se a seguinte equação: PBmic = 179,98 + 37,6030 x NDT + 0,2577 x PB. A excreção fecal de N pode ser estimada por: N fecal = -46,807 + 3,0662 x NDT (kg/dia) + 0,1579 x Ning (g/dia) + 0,1697 x PC (kg). A excreção urinária de N (g/dia) pode ser predita pela equação: N urinário = -1,8803 – 7,6528 x NDT + 0,5401 x Ning. A regressão Ŷ = 36,51 + 0,405X foi ajustada considerando-se a produção de Nmic (Ŷ, g/dia) e a ingestão de N (X, g/dia). Não houve efeito de classe sexual (P > 0,05) sobre a concentração de NH3 ruminal, os teores de 15N-NH3 ruminal e os teores e excreção diária de 15N fecal. Houve efeito linear crescente de níveis dietéticos de PB (P < 0,05) sobre a concentração de NH3 ruminal, os teores de 15 N-NH3 ruminal e os teores 15 N nas fezes. Entretanto, não houve efeito dos níveis dietéticos de PB (P > 0,05) sobre a excreção diária de 15 N fecal sendo em média 17,75 mg/dia. As regressões Ŷ = 23,6183e0,0104X e Ŷ = 0,2416e-0,0145X foram ajustadas a partir da concentração ruminal de amônia (Ŷ, mg/dL) e os teores de 15 N-NH3 (Ŷ, %) em função da ingestão de N (X, g/dia), respectivamente. Os teores de 15 N fecal (Ŷ, %) foram avaliados em função da ingestão de N (X, g/dia), obtendo-se a seguinte regressão: Ŷ = 0,08878 – 0,00034X. Não houve interação tripla (P > 0,05) entre as classes sexuais, os níveis dietéticos de PB e as fases de bactérias, BAL e BAP sobre os teores de N-total microbiano nem sobre os teores de 15 N nas bactérias ruminais, nem diferença (P > 0,05) entre as fases BAL e BAP para as variáveis quantificadas. As interações duplas entre as variáveis independentes não foram significativas (P > 0,05), assim como os efeitos individuais (P > 0,05), com exceção dos níveis dietéticos de PB sobre os teores de N-total e de 15 N nas bactérias ruminais. Houve efeito cúbico (P < 0,05) dos níveis dietéticos de PB sobre os teores de N-total microbiano e efeito quadrático (P < 0,05) sobre os teores de 15 N nas bactérias ruminais. Foram ainda observados efeito linear decrescente dos níveis dietéticos de PB (P < 0,05) sobre a produção diária de 15 Nmic expressa em mg/dia. As regressões Ŷ = 1,0740X e Ŷ = 1,0512X foram obtidas para BAL e BAP, respectivamente, em que Ŷ representa os teores de 15N nas bactérias ruminais (%) e X, os teores de 15N-NH3 ruminal (%). Considerando- se os teores de 15N fecal (Ŷ, %) e teores de 15N (X, %) nas fases BAL e BAP, as seguintes regressões foram obtidas: Ŷ = 0,2927X e Ŷ = 0,2668X, respectivamente. Não houve efeito individual de classe sexual (P > 0,05) sobre os percentuais de 15 N infundido no plasma que foi recuperado nas fezes ou nas bactérias. Também não houve efeito de níveis dietéticos de PB (P > 0,05) sobre os percentuais de 15 N infundido no plasma que foi recuperado nas fezes, sendo em média 8,06%. Entretanto, houve efeito linear decrescente dos níveis dietéticos de PB (P < 0,05) sobre os percentuais de 15 N infundido no plasma recuperados nas bactérias, que variaram de 15,13 a 35,23. Conclui-se que a produção de proteína microbiana não é afetada pela classe sexual, mas aumenta linearmente com os consumos de PB e de NDT. BAL e BAP possuem mesmo teor de N-total e de N- ureico infundido recuperado. As concentrações de 15 N-NH3 no rúmen e 15 N nas bactérias são maiores para os menores níveis de PB dietéticos. Ocorre maior recuperação do N-ureico infundido por via intravenosa na proteína microbiana produzida em dietas com menor teor de PB. / This study was designed to evaluate the effect of animal categories and levels of dietary crude protein on intake and total digestibility of constituents of diets, N balance, the urea quantity filtered and reabsorbed in the kidney and excreted by urine in Nellore cattle. Additionaly, microbial protein production and qualitative urea recycling were evaluated. Eight ruminal fistulated Nellore animals, being four steers (333.5±24.4 kg of initial BW) and four heifers (292±12.9) were used in a 4 x 4 balanced Latin square (LS). The diets with 50% of corn silage and 50% of concentrate based on dry matter (DM) were offered daily, ad libitum, and were formulated to deliver four level of crude protein (CP): 9.0, 11.0, 13.0 and, 15.0 %, corresponding to 65.91, 68.32, 70.00 and, 71.35 % of RDP. Each experimental period lasted 14 days and consisted of 7 days of adaptation to the diet and 7 days of proceedings and sample collection of feed, orts, blood, ruminal digesta and fluid, urine and feces. Urea recycling was evaluated using infusion of ureia indwelling jugular vein in the daily dose of 220 mg of 15 15 N15N- N-ureia for 72 hours. Dependent variables were evaluated according to LS design 4 x 4 and comparisons among dietary CP levels were carried out through orthogonal decomposition os the sum of squares associated to this source of variation in linear, quadratic and cubic effects. The analyses were conducted using the MIXED procedure of SAS (version 9.4), assuming homogeneous variances among diets. There was no interaction effect (P > 0.05) between animal categories and levels of CP dietary to any variables evaluated in this study. There was no effect (P > 0.05) from animal categories or levels of CP dietary on intake of DM, organic matter (OM), digested OM (dOM), ether extract (EE) and non-fibrous carbohydrates (NFC), in kg/day, neither on DMI and neutral detergent fiber corrected for ash and nitrogenous compounds (NDFap) in BW function. There was no effect (P > 0.05) from animal categories, but there was increased linear effect (P < 0.05) from levels of CP dietary on CP and TDN intake and on CP and NDFap digestibilities. N fecal excretion was greater in males than females (P < 0.05) and was also increased linearly (P < 0.05) as the dietary CP increased. There was no effect (P > 0.05) on intake, urinary excretion of total-N, urea and N-urea, N retained, relationship NU:TN and plasmatic concentration of N-urea (PUN) from animal categories, but those variables increased linearly (P < 0.05) as the dietary CP increased. However, those effects were not able (P > 0.05) to change N retained related to N intake that was 26.05 % g of N retained/g of N intake. There was no effect from animal categories (P > 0.05) neither from dietary CP (P > 0.05) on creatinine urinary excretion whose average was 23.2 mg/kg BW and on glomerular filtration rate with 1.84 mL/min/kg PC as average. There was no effect (P > 0.05) from categories animal, however the quantities of urea filtered, reabsorved and fraccional excretion increased linearly as dietary CP increased. Considering the urea urinary excretion (Ŷ) in function of N intake (X), in g/day, the equation Ŷ = 0.5606X was obtained. Regarding to PUN (Ŷ, mg/dL) and N intake (X, g/dia), the equation Ŷ = 0.1234X was obtained, while the equation Ŷ = 3.9293X was obtained regarding to urea urinary excretion (Ŷ, g/dia) and PUN (X, mg/dL). The relationship between urea fractional excretion (Ŷ) and N intake (X, g/day) was described on equation: Ŷ = 0.3684(1-e-0.0105X). There was increased linear effect (P < 0.05) from dietary CP on Nmic production. The efficiency of N utilization of N intake did not change (P > 0.05) from animal categories neither from dietary CP. Regard to microbial efficiency, there was linear effect (P < 0.05) from animal categories, when it was expressed in dOM function, but this effect was no observed (P > 0.05) when it was expressed in TDN intake function. CPmic (g/day) was adjusted using CP and TDN intake (kg/day) according to the follow equation: CPmic = 179.98 + 37.6030 x TDN + 0.2577 x CP. While fecal N excretion was estimated by: N-fecal = -46.807 + 3.0662 x TDN (kg/day) + 0.1579 x Nintake (g/day) + 0.1697 x BW (kg). N urinary excretion can be predicted from equation: N urinary = -1.8803 – 7.6528 x TDN + 0.5401 x Nintake. The equation Ŷ = 36.51 + 0.405X was adjusted regarding to Nmic production (Ŷ, g/day) and N intake (X, g/day). There was no effect (P > 0.05) from animal categories on ruminal NH3 concentration, the proportion of ruminal 15N-NH3 and the proportion and daily excretion of fecal 15N. The ruminal NH3 concentration, the proportion of 15 N-NH3 ruminal and the proportion of fecal 15 N increased linearly (P < 0.05) as dietary CP increased. However, there was no effect (P > 0.05) from dietary CP on 15 N fecal daily excretion whose average was 17.75 mg/day. The equations Ŷ = 23.6183e0.0104X and Ŷ = 0.2416e-0.0145X were adjusted from ruminal NH3 concentration (Ŷ, mg/dL) and 15N-NH3 proportion (Ŷ, %) as function of N intake (X, g/day), respectively. The proportion of fecal 15 N (Ŷ, %) was evaluated as a function of N intake (X, g/day), according to the follow equation: Ŷ = 0.08878 – 0.00034X. There was no triple interaction (P > 0.05) among animal categories, levels of dietary CP and bacterial phasis liquid-associated bacteria (LAB) and particule-associated bacteria (PAB), on the proportion of microbial total-N neither on the proportion of 15N in the ruminal bacteria. There was also no difference (P > 0.05) between LAB and PAB phases to the variables measured. Double interaction between the independent variables was not significant (P > 0.05), as well as individual effects (P > 0.05), except from dietary CP level on the proportion os total-N and 15N in the ruminal bacteria. There was cubic effect (P < 0.05) from dietary CP on microbial total-N and quadratic effect (P < 0.05) on 15N proportion in the ruminal bacteria. There were also observed decreased linear effect from dietary CP (P < 0.05) on 15 Nmic daily production in mg/day. The equations Ŷ = 1.0740X and Ŷ = 1.0512X were obtained to LAB and PAB, respectively, in which Ŷ means 15N proportion in the ruminal bacteria (%) and X, ruminal 15 N-NH3 proportion (%). Considering the proportion of fecal and the proportion of 15 15 N (Ŷ, %) N in LAB and PAB (X, %) the follow equations were obtained: Ŷ = 0.2927X and Ŷ = 0.2668X, respectively. There was no individual effect (P > 0.05) from animal categories on the proportion of 15 N infused in the plasma recovered in feces or in bacteria. There was also no effect (P > 0.05) from dietary CP on the proportion of 15N infused in the plasma and recovered in feces, average of 8.06%. However, there was decreased linear effect (P < 0.05) from dietary CP on the proportion recovered in bacterias. From this it can be conclude that the microbial protein production is not affected by animal categories, but increases linearly as CP and TDN intake increase. LAB and PAB have the same proportion of total-N and recovery of N-urea infused. Ruminal 15 N-NH3 concentration and bacterial 15N increase as dietary CP decreases. There is higher recovery of N-urea infused in the microbial protein production in diets with low CP level.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-20T15:37:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 645596 bytes, checksum: 2601306f7e9b080f344daa3613e6e9de (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-20T15:37:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 645596 bytes, checksum: 2601306f7e9b080f344daa3613e6e9de (MD5) Previous issue date: 2015-02-24 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Avaliou-se o perfil fermentativo, a composição química e as populações microbianas de silagens de alfafa emurchecida ou não, tratadas com inoculante bacteriano em diferentes períodos de fermentação; bem como o isolamento, a identificação e a caracterização das bactérias do ácido lático (BAL) das silagens não inoculadas. Foi utilizado um esquema fatorial 2 × 2 × 6, ausência ou presença de emurchecimento (E), com e sem inoculante bacteriano (I) e seis períodos de fermentação (P) (1, 3, 7, 14, 28 e 56 dias), no delineamento inteiramente casualizado, com três repetições. A alfafa foi colhida aos 50 dias de rebrotação e picada em partículas de 1,5 cm. A alfafa foi emurchecida por 6h, no campo, no material submetido a esse tratamento. O inoculante usado foi o Sil-All® 4x4 W.S. (Alltech, Brasil), aplicado na taxa de 10 5 UFC/g (5 g/t de forragem). Após a aplicação dos tratamentos, a forragem foi ensilada em sacos plásticos de 25 × 35 cm e selados a vácuo. O emurchecimento da alfafa reduziu a capacidade tampão e as concentrações de carboidratos solúveis em água e aumentou o teor de MS da forragem de 133,9 g/kg MS para 233,4 g/kg MS, antes da ensilagem. Foi observado efeito (P < 0,05) de E sobre os teores de MS, PB, NIDA e FDN das silagens aos 56 dias de fermentação. As populações de BAL e fungos não foram afetadas por nenhum dos fatores estudados, enquanto as populações de enterobactérias e leveduras foram afetadas (P < 0,05) pelo P. O pH e a concentração de nitrogênio amoniacal foram afetados (P < 0,05) pela interação E × P, registrando-se menores valores destas variáveis nas silagens emurchecidas. Também foi observado efeito (P < 0,05) da interação E × P sobre o conteúdo dos ácidos lático, acético e propiônico, sendo registrados menores valores de ácido acético nas silagens emurchecidas em todos os períodos de fermentação. Menores concentrações de ácido propiônico também foram encontradas nas silagens emurchecidas. Excetuando o 1o dia de fermentação, foram observadas maiores concentrações de ácido lático nas silagens emurchecidas, no entanto, a partir do 7o dia, a concentração deste ácido decresceu em ambas as silagens emurchecidas ou não. A adição de inoculante bacteriano na presença ou não do emurchecimento, não promove melhorias no x processo fermentativo de silagem de alfafa com elevada umidade. A população de BAL na planta e nas silagens de alfafa submetidas ou não ao emurchecimento é diversa em nível de espécies, o Lactobacillus plantarum é a espécie predominante e apresenta comportamento distinto ao longo dos períodos de fermentação nas silagens não emurchecidas e emurchecidas. / We aim with this study to evaluate the fermentation characteristics, chemical composition and microbial populations of wilted or unwilted alfalfa silage treated with bacterial inoculant in different periods of fermentation as well as the isolation, identification and characterization of lactic acid bacteria (LAB) from non-inoculated silage. We analyzed the data as a 2 × 2 × 6 factorial arrangement with the effects of wilting (W) (absence or presence), bacterial inoculant (I) (with and without) and period (P) (1, 3, 7, 14, 28 and 56 days), and their interaction in a completely randomized design with three replications. We harvested the alfalfa at 50 days of regrowth, chopped into particles of 1.5 cm and wilted for 6 hours in the field before ensiling. The commercial inoculant used was Sil-All® 4x4 W.S. (Alltech, Brazil), applied at the rate of 10 5 CFU/g of fresh forage. After the treatments forage was packed in plastic bags of 25 × 35 cm and sealed by using vacuum sealer. Wilting of alfalfa reduced buffering capacity and water soluble carbohydrate concentrations and increased the dry matter (DM) content of the forage 133.9 g/kg DM to 233.4 g/kg DM before ensiling. There was effect (P < 0.05) of W on the DM, crude protein, neutral detergent fiber and acid detergent insoluble nitrogen in the silages at 56 d. Populations of LAB and molds were not affected by any of the effects studied, however the populations of enterobacteria and yeasts were affected (P < 0.05) by P. The pH and ammonia nitrogen concentration were affected by the interaction W × P (P < 0.05), registering lower values of these variables on wilted silages. There was effect (P < 0.05) of the interaction W × P on the concentrations of lactic, acetic and propionic acid, resulting in lower values of acetic acid in the wilted silages in all fermentation periods. Lower concentrations of propionic acid were found in wilted silages. Except for the 1st day of fermentation, we observed higher concentrations of lactic acid in the wilted silages, however in both wilted and unwilted silages the values decreased from the 7th d of ensiling. The addition of inoculant in presence or absence of wilting, does not improve the fermentation process of alfalfa silage with high moisture content. The populations of LAB in the wilted or unwilted fresh-alfalfa and in the silages are diverse in species levels and the xii Lactobacillus plantarum is the predominant specie and presents different dynamic appearance over the fermentation period between unwilted and wilted silages.

Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-23T15:39:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177179 bytes, checksum: dec9ea9972e24062fd20a5915e37c787 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T15:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177179 bytes, checksum: dec9ea9972e24062fd20a5915e37c787 (MD5) Previous issue date: 2015-07-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A estocagem de leite cru sob temperatura de refrigeração não impede o crescimento de bactérias psicrotróficas produtoras de proteases termorresistentes que comprometem a qualidade e reduzem a vida de prateleira de produtos lácteos. Para minimizar os problemas tecnológicos resultantes da atividade proteolítica, é desejável que proteases sejam detectadas e quantificadas em leite cru por um método rápido. No entanto, não existe um método eficiente para este fim. Este trabalho teve como objetivos identificar as espécies psicrotróficas com potencial de deterioração predominantes em leite cru brasileiro; identificar e caracterizar as proteases resistentes ao calor produzidas por esta microbiota e desenvolver um método rápido para detectar estas proteases em amostras de leite. As condições de armazenamento sob refrigeração foram simuladas e as bactérias psicrotróficas proteolíticas foram isoladas. As bactérias produtoras de proteases termorresistentes foram agrupadas após análise por Rep-PCR. Os testes bioquímicos e o sequenciamento dos genes rDNA 16S e rpoB foram utilizados para identificar representantes de cada grupo. Uma protease termorresistente produzida por Serratia liquefaciens foi caracterizada e o gene que codifica esta enzima foi identificado após análise dos peptídeos trípticos da protease por espectrometria de massa. Placas de microtitulação revestidas com caseína marcada com biotina foram utilizadas para quantificar a atividade proteolítica de amostras de leite e de proteases diluídas em solução tampão. Os isolados bacterianos altamente proteolíticos foram separados em oito grupos diferentes e quatro padrões únicos. Os isolados com potencial proteolítico são correspondentes à espécie Serratia liquefaciens e ao gênero Pseudomonas. Isolados de S. liquefaciens podem produzir uma metaloprotease termorresistente ao tratamento de 95 °C por 8,45 min, identificada como Ser2, com massa molar de, aproximadamente, 52 kDa e semelhante à protease AprX de Pseudomonas spp. Embora sequências de nucleotídeos do gene ser2 sejam conservadas entre os isolados de S. liquefaciens, o potencial de deterioração das estirpes é heterogêneo indicando diferenças nos níveis de expressão gênica, enzima viii ou modificações pós-transcricionais. O imunoensaio desenvolvido neste estudo foi eficiente para a quantificação da atividade de tripsina, papaína, pepsina, termolisina e protease de pâncreas bovino. No entanto, novas pesquisas devem ser realizadas para minimizar a influência dos componentes da amostra de leite nesta técnica para permitir a detecção acurada de proteases. Este trabalho destaca o elevado potencial de deterioração da microbiota encontrada em amostras de leite cru, além do desenvolvimento de um ensaio promissor, útil para a indústria de lacticínios, para detecção e quantificação de atividade proteolítica resultante das práticas agrícolas inadequadas nas propriedades produtoras de leite. / The storage of raw milk at cold temperatures does not prevent growth of psychrotrophic bacteria, which can produce heat-resistant proteases that compromise the quality and reduce the shelf life of dairy products. To minimize the technological problems resulting from proteolytic activity, these enzymes should be detected and quantified in raw milk before processing by a rapid method. However, there is no efficient method for this purpose. This work aimed to identify the predominant psychrotrophic species with spoilage potential in Brazilian raw milk, to identify and characterize the heat-resistant proteases produced by this microbiota and to developed a rapid method to detect these proteases in raw milk samples. The cold storage conditions were simulated and the psychrotrophic proteolytic bacteria isolated. The heat-resistant protease-producing bacteria were typing by Rep-PCR and clustered. Biochemical tests, 16S rDNA and rpoB gene sequencing were used for identifying one representative isolate from each cluster. The heat-resistant protease produced by Serratia liquefaciens was characterized. The encoding gene was identified after mass spectrometry analysis of tryptic peptides from the heat-resistant protease. The biotinylated casein was coated on microtiter plates and used as substrate to quantify proteolytic activity in solution and milk samples. Highly proteolytic strains were identified and characterized. The isolates were separated into eight different clusters and four solitary fingerprints. The most proteolytic isolates belonged to Serratia liquefaciens and Pseudomonas species. The S. liquefaciens isolates may produce Ser2, which is a a metalloprotease resistant to the heat treatment of 95 °C for 8.45 min. This metalloprotease showed a molecular weight of approximately, 52 kDa and a heat- resistance similar to AprX from Pseudomonas spp. Although nucleotide sequences of ser2 gene were conserved among S. liquefaciens isolates, the spoilage potential among them was heterogeneous indicating differences in enzyme expression levels or post-transcriptional modifications. The developed immunoassay was efficient for quantification of trypsin, papain, pepsin, thermolysin and protease from bovine x pancreas activity. However, further research should be performed to minimize the influence of milk components on the developed assay for detecting proteases in milk samples. This work highlighted the poor conditions of hygiene in milk farms and the high spoilage potential of the microbiota found in raw milk samples besides the development of a promising assay for detection and quantification of proteolytic activity useful for dairy industry.