Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2002Bitstream added on 2014-06-13T20:11:15Z : No. of bitstreams: 1 balasteghin_kt_me_botfm.pdf: 1114141 bytes, checksum: 3ab0175e5ca54d8147ef41637a8b3cd5 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A instabilidade vesical é uma patologia bastante comum na prática urológica, porém sua etiopatogenia é pouco conhecida. A utilização de seres humanos na investigação de suas causas é restrita, principalmente devido aos problemas éticos. Nosso objetivo foi estudar as alterações histopatológicas e imunohistoquímicas decorrentes da obstrução parcial da bexiga. Foram utilizados 30 coelhos machos, divididos em grupo G1 (controle clínico, n=15) e grupo G2 (obstruído, n=15). No grupo G2 foi realizada obstrução parcial da bexiga usando um bracelete ajustável de polietileno e foram considerados os animais que desenvolveram contrações involuntárias do detrusor (CID). Foram submetidos a dosagem de uréia e creatinina plasmática, cultura de urina e estudo cistométrico em 2 momentos, inicial (M1) e final (M2) após 4 semanas da obstrução. Após este período, os coelhos foram sacrificados e a bexiga retirada para realização de estudo histopatológico e imunohistoquímico. Observou-se um aumento significativo do peso corporal dos coelhos nos diferentes momentos. O peso da bexiga foi 2,5 vezes maior no grupo G2 comparado com o grupo G1 (controle clínico). Não houve diferença estatisticamente significativa na análise da uréia plasmática. A creatinina plasmática foi significativamente maior no grupo G2 (obstruído) em comparação com o grupo G1 no momento final. Detectou-se cultura positiva em 40% dos casos no momento M1 (inicial) e 50% no M2 (final). A análise do estudo urodinâmico demonstrou aumento significativo da capacidade vesical no momento M2 no grupo G2. Não houve diferença estatisticamente significativa na pressão máxima do detrusor e na complacência vesical nos diferentes momentos. Verificou-se persistência das contrações involuntárias do detrusor em todos os animais... / The bladder instability is a very common problem in urology, however its etiology is rather unknown. The use of human beings is limited in the study of detrusor instability, specially because of ethical problems. For this reason we have proposed an experimental study of the bladder instability in rabbits due to partial bladder outlet obstruction. Thirty male rabbits were divided in G1 (control group) and G2. The animals in G2 had their bladder obstructed by using an adjustable polyethylene ring. Both groups were submitted to cystometrical evaluations in two moments: initial (before surgery) and final (after 4 weeks of obstruction). After this period, the rabbits were sacrificed, their bladder was removed and the alterations evaluated in the histologic and immunohistochemical study. The results showed an increase in the body weight of the rabbits and the bladder was 2.5 times heavier than the control group. There was no significative statistical difference in the plasmatic urea analysis. The results showed significative statistical difference between the groups in the final moment (the final moment was superior than the initial moment in G1). There was positive culture in 40% of the cases in M1 and 50% in M2. The analysis of the urodynamics study presented an increase in the bladder capacity in M2, G2. There was no significative statistical difference in the detrusor maximum pressure and in the bladder compliance. We could detect the persistence of the detrusor spontaneous contractions in all the animals in G2 in M2. The histological study showed 13% of epithelium ulceration and 40% of submucosal fibrosis in the obstructed animals. All the rabbits in G2 presented adventitious fibrosis. The inflammatory reaction was significatively bigger in G2. There was no statistical difference in the analysis of the intermuscular fibrosis. The results showed 54% of... (Complete abstract click electronic address below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:43Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-07-06Bitstream added on 2014-06-13T20:50:58Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_tc_me_jabo.pdf: 2166341 bytes, checksum: 3506a5bd81e793c204aacdd18020a595 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Neste estudo, implantou-se peritônio bovino ou biomembrana de látex natural em defeito (1,5 x 1,5 cm) induzido na parede ventral da bexiga de coelhos, com o intuito de se avaliar o processo de reparação tecidual no que se refere à biocompatibilidade, capacidade de reparação e possíveis complicações. Utilizaram-se 36 coelhos, albinos, raça Nova Zelândia Branco, adultos, machos inteiros, divididos em grupos experimentais: grupo Biomembrana (GB), grupo peritônio bovino (GP) e grupo controle (GC), cada um com 12 animais. Aos sete, 14, 30 e 60 dias de pós-operatório, os animais foram eutanasiados mediante o emprego de uma dose elevada de tiopental sódico para avaliações macroscópica e histopatológica da interface do implante com o tecido nativo. Macroscopicamente, em ambos os grupos (GB, GP e GC), observaramse, em todos os períodos, aderências de estruturas adjacentes ao local do implante, presença de cálculos e ausência de sinais de rejeição. No grupo biomembrana, aos 30 e 60 dias de pós-operatório, constatou-se a presença do biocompósito solto na luz vesical. Sob microscopia de luz, aos sete dias verificaram-se intensa reação inflamatória, neovascularização e presença de fibroblastos proliferados. Aos 14 dias não havia epitélio, porém observaram-se escassos feixes musculares, intensa neovascularização, fibroblastos e infiltrado inflamatório. No grupo GP, aos 30 dias de observação, o implante estava presente, havia fibroblastos, feixes de fibras musculares, moderada população inflamatórias e ausência de epitélio e de lâmina própria. No grupo GB, neste mesmo período, todas as camadas vesicais estavam reconstituídas. Em ambos os grupos, aos 60 dias de pós-operatório, todas as camadas vesicais encontravam-se reparadas e a membrana peritônio bovino não foi observada. No grupo GC, em todos os tempos de avaliação verificou-se integridade... / In this study, bovine peritoneum or biomembrane of natural latex were utilized to replace a section of ventral face of the bladder of rabbits, with purpose of evaluation of the tissue repair process in regard of its biocompatility, scar formation ability and possible complications. Thirty-six New Zealand rabbits, adult and entire males were divided in three experimental groups: biomembrane group (GB), bovine peritoneum group (GP) and control group (GC), each one with 12 animals. The animals were euthanized at seven, 14, 30 and 60 days post operative, by use of an elevated dosage of sodium tiopental, followed by macroscopic and histopathological analysis of the implant interface with the native tissue. Macroscopically, in both groups (GB, GP and GC), it was observed, in all time periods, structure adherence to the implant site, presence of calculi and absence of rejection signs. In the GB group, since 30 until 60 days of post operative, it was evidenced the presence of the biomembrane inside the bladder. Under light microscopy, at seven days, there were intense inflammatory reaction, new vessels and proliferated fibroblasts. In 14 days, there was no urotelium, however it saw muscle fibers, intense inflammatory cells, new vessels and fibroblasts. In the GP group, at 30 days the implant was still present, there were fibroblasts, muscle fibers, moderate population of inflammatory cells and absence of urotelium and sheath. In the GB group, in the same time period, all the vesical layers were reconstituted. In both groups, at 60 days of post operative, bladder wall was repaired and the bovine peritoneum membrane was not observed. In the GC group, all the evaluation times, integrity of the vesical wall was verified... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-05-14Bitstream added on 2014-06-13T19:09:55Z : No. of bitstreams: 1 rossetto_vjv_me_botfmvz_parcial.pdf: 44582 bytes, checksum: 3c3725afe05c19146568796a0ee21ac3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As indicações para a cirurgia reparadora da bexiga abrangem traumas graves com perda tecidual extensa, neoplasias, cistites intersticiais, disfunções neurológicas e anormalidades congênitas. Devido a inúmeras complicações associadas às técnicas de cistoplastia com o emprego de segmentos gastrointestinais, o presente estudo teve como objetivo analisar comparativamente a reparação anatômica da bexiga de cães utilizandose a submucosa intestinal suína (SIS) acelular e semeada com células musculares lisas homólogas (CMLH), bem como avaliar as possíveis complicações e efeitos colaterais inerentes a cada um dos tipos de enxerto empregados. Para tal foram utilizados 10 cães adultos, fêmeas, subdivididos em dois grupos, sendo: Grupo Controle (GC), constituído por cinco animais submetidos à cistoplastia com SIS; e Grupo Tratado (GT), constituído por cinco animais submetidos à cistoplastia com SIS semeada com CMLH. As células foram obtidas a partir de fragmentos de espessura completa, provenientes de bexigas de cães que vieram a óbito por motivos não infecciosos ou neoplásicos, cultivadas e expandidas in vitro. Em todos os grupos foi criado um defeito de 3 cm x 2 cm, preservando-se a região do trígono vesical, o qual foi reparado pelos respectivos implantes. Os cães de ambos os grupos foram submetidos à biópsia cirúrgica com 60 dias de pós-operatório, sendo essas obtidas da área central do tecido neoformado e da adjacência entre o mesmo e a bexiga original. Após a implantação dos enxertos, os animais foram avaliados por meio de exames clínico, ultrassonográfico abdominal e laboratoriais. Todas as amostras foram destinadas à avaliação histológica pelas colorações de H/E e Tricromio de Masson, analisadas com um fotomicroscópio Nikon conectado ao sistema de análise de imagem ImageJ. Não foram... / Not available

Orientador: Maria Luiza Cotrim Sartor de Oliveira / Coorientador: Mirielen Garcia Nascimento e Pontes / Banca: Maria Lucia Zaidan Dagli / Banca: Daniela Carvalho dos Santos / Resumo: Não disponivel / Abstract: Diuron is a substituted urea herbicide, carcinogenic to the rat urinary bladder at high dietary levels (2500 ppm). Different scanning electron microscopy (SEM) processing methods resulted in differing observations of early urothelial changes induced by exposure to this herbicide. This study evaluated the influence of SEM processing methods on the detection of urothelial alterations induced by diuron. Male Wistar rats were divided into 3 groups: control (basal diet), 7.1% Sodium Saccharin (NaS) (positive control) and 2500 ppm diuron, and fed for 7 days or 15 weeks. Urinary bladders were fixed with Bouin's or glutaraldehyde fixative and processed by critical point drying (CPD) or by hexamethyldisilazane (HMDS) for comparison of the cytotoxic and proliferative changes induced by diuron in the urothelium. Histological and cell proliferation evaluations were also performed. After seven days, no differences in the incidence of histological urothelial lesions or labeling indices were detected among the groups; however, the incidence of urothelial lesions after 15 weeks was significantly increased in the animals fed diuron or NaS. After seven days or 15 weeks, the severity of urothelial alterations was significantly higher in animals fed with diuron. Both fixative and drying methods allowed for the identification of prenecrotic swollen superficial cells in the urothelium after seven days exposure to 2500 ppm diuron. Our results confirmed that the presence of prenecrotic swollen cells in the urothelium is an early key event due to diuron cytotoxicity and is not an artifact related to the processing methods used / Mestre

Orientador: Cláudia Aparecida Rainho / Banca: Marcos Vinícius de Marcos Gomes / Banca: José Carlos Souza Trndade Filho / Resumo: Os padrões anormais de metilação do DNA, especialmente a hipermetilação de genes com provável função supressora de tumor, representam um dos mais promissores marcadores moleculares do câncer por levarem à inativação funcional de genes críticos. Estudos prévios documentaram altos níveis de expressão do gene H19 em carcinoma de bexiga recorrentes. O gene H19 é regulado por imprinting, está localizado em 11p15.5 adjacente ao gene IGF2 (insulin-like growth factor 2 - somatomedin A) e codifica um transcrito não codificador de proteínas (micro RNA miR-675). Uma região que atua de forma coordenada no controle da expressão desses genes, chamada DMR (Differentially Methylated Region), atua na determinação do imprinting recíproco e na expressão mutuamente exclusiva dos genes IGF2 e H19. Ela encontra-se não metilada no homólogo materno e metilada no homólogo paterno e contém sete regiões de ligação da proteína CTCF (proteína bloqueadora do acentuador), que é sensível à metilação do DNA. Um relato prévio da literatura sugeriu que somente o sexto sítio de ligação do fator CTCF apresenta metilação parental específica. Este achado foi correlacionado com o padrão de expressão regulado por imprinting dos genes IGF2 e H19 em câncer de bexiga. No presente estudo, o padrão de metilação alelo-específico do gene H19 foi determinado em duas regiões distintas: no sexto sítio de ligação do fator CTCF contido na DMR e no primeiro éxon do gene H19 utilizando-se três abordagens diferentes: MSRE-PCR-RFLP (Methylation Sensitive Restriction Enzyme - Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism), qMSP (quantitative real time Methylation Specific Polymerase Chain Reaction) para o sexto sítio e MSP-CTPP (Methylation Specific Polymerase Chain Reaction with Confontring Two Pair-Primers) para a região do primeiro éxon em 52 amostras de tecidos... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Abnormal patterns of DNA methylation, especially hypermethylation of genes demonstrating tumoral suppressor functions represent one of the most promising molecular markers of cancer because they can lead to functional inactivation of critical genes. Previous studies have documented high levels of H19 gene expression in recurrent bladder carcinomas. The H19 gene is regulated by imprinting, is located at 11p15.5 adjacent to the IGF2 gene (insulin-like growth factor 2 - somatomedin A) and encodes a non-coding transcript (micro RNA miR-675). A Differentially Methylated Region (DMR) region acts in a coordinated manner to control the expression of the IGF2 and H19 genes by determining their reciprocal imprinting and mutually exclusive expression patterns. The H19-DMR contains seven potential CTCF-binding sites. These sites are located upstream to the transcriptional initiation site, and the gamete-specific methylation acts as an insulator by precluding CTCF binding in the paternal allele. A previous literature report have suggested that only the sixth CTCF-binding site shows parental specific methylation. This finding was correlated with the imprinting expression pattern of IGF2 and H19 genes in bladder cancer. In the present study, the allele-specific methylation pattern of the H19 gene was evaluated in two distinct target regions: the sixth CTCF-binding site located in the DMR and the first exon of the H19 gene using three different approaches: MSRE-PCR-RFLP (Methylation Sensitive Restriction Enzyme - Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism), qMSP (quantitative real time Methylation Specific Polymerase Chain Reaction) for the sixth CTCF-binding site, and the first exon of the H19 gene was analyzed by MSP-CTPP (Methylation Specific Polymerase Chain Reaction with Confronting Two-Pair Primers) in 52 samples of bladder tumors matched to normal adjacent tissues obtained... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Cláudia Valéria Seullner Brandão / Coorientador: Lígia Souza Lima Silveira da Mota / Banca: Juliany Gomes Quitzan / Banca: Bruno Watanabe Minto / Resumo: As indicações para a cirurgia reparadora da bexiga abrangem traumas graves com perda tecidual extensa, neoplasias, cistites intersticiais, disfunções neurológicas e anormalidades congênitas. Devido a inúmeras complicações associadas às técnicas de cistoplastia com o emprego de segmentos gastrointestinais, o presente estudo teve como objetivo analisar comparativamente a reparação anatômica da bexiga de cães utilizandose a submucosa intestinal suína (SIS) acelular e semeada com células musculares lisas homólogas (CMLH), bem como avaliar as possíveis complicações e efeitos colaterais inerentes a cada um dos tipos de enxerto empregados. Para tal foram utilizados 10 cães adultos, fêmeas, subdivididos em dois grupos, sendo: Grupo Controle (GC), constituído por cinco animais submetidos à cistoplastia com SIS; e Grupo Tratado (GT), constituído por cinco animais submetidos à cistoplastia com SIS semeada com CMLH. As células foram obtidas a partir de fragmentos de espessura completa, provenientes de bexigas de cães que vieram a óbito por motivos não infecciosos ou neoplásicos, cultivadas e expandidas in vitro. Em todos os grupos foi criado um defeito de 3 cm x 2 cm, preservando-se a região do trígono vesical, o qual foi reparado pelos respectivos implantes. Os cães de ambos os grupos foram submetidos à biópsia cirúrgica com 60 dias de pós-operatório, sendo essas obtidas da área central do tecido neoformado e da adjacência entre o mesmo e a bexiga original. Após a implantação dos enxertos, os animais foram avaliados por meio de exames clínico, ultrassonográfico abdominal e laboratoriais. Todas as amostras foram destinadas à avaliação histológica pelas colorações de H/E e Tricromio de Masson, analisadas com um fotomicroscópio Nikon conectado ao sistema de análise de imagem ImageJ. Não foram... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Not available / Mestre

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste trabalho é apresentar um estudo estrutural e ontogenético do úraco em fetos humanos normais e da bexiga de fetos humanos normais e anencéfalos durante o segundo trimestre gestacional. Cinquenta e nove fetos foram utilizados, 47 normais (22 do sexo masculino e 25 do sexo feminino) e 12 anencéfalos (5 do sexo masculino e 7 de sexo feminino) com idade variando entre 13 e 23 SPC. Os componentes fibrosos da matriz extracelular, o tecido muscular e a luz do úraco foram analisados através de métodos estereológicos e bioquímicos. A luz do úraco encontrava-se fechada na 18 SPC nos sexos masculino e feminino. O epitélio de transição no úraco foi facilmente identificO objetivo deste trabalho é apresentar um estudo estrutural e ontogenético do úraco em fetos humanos normais e da bexiga de fetos humanos normais e anencéfalos durante o segundo trimestre gestacional. Cinquenta e nove fetos foram utilizados, 47 normais (22 do sexo masculino e 25 do sexo feminino) e 12 anencéfalos (5 do sexo masculino e 7 de sexo feminino) com idade variando entre 13 e 23 SPC. Os componentes fibrosos da matriz extracelular, o tecido muscular e a luz do úraco foram analisados através de métodos estereológicos e bioquímicos. A luz do úraco encontrava-se fechada na 18 SPC nos sexos masculino e feminino. O epitélio de transição no úraco foi facilmente identificado em fetos com idade inferior a 17 SPC, nos quais a luz encontrava-se aberta. Nos fetos com idade ≥ 18 SPC, não foram visualizados o epitélio porque a luz encontrava-se fechada. Ocorreu um aumento estatisticamente significativo de tecido conjuntivo nas bexigas de fetos anencéfalos e uma redução também significativa do tecido muscular na bexiga dos fetos anencéfalos em comparação com os normais. A análise bioquímica mostrou um aumento na concentração de colágeno total nas bexigas dos fetos anencéfalos em comparação com os fetos normais. O fechamento da luz do úraco ocorre na 17 SPC. Após o fechamento, observa-se a ausência de epitélio de transição em seu interior, uma diminuição de tecido musculae e um aumento de colágeno tipo I, o que pode indicar uma remodelagem na formação do tecido fibroso. Os dados obtidos podem ser utilizados no estudo do desenvolvimento do úraco e da drenagem do tracto urinário embrionário. As alterações estruturais observadas na bexiga podem sugerir a existência de alterações funcionais na bexiga dos fetos anencéfalos.ado em fetos com idade inferior a 17 SPC, nos quais a luz encontrava-se aberta. Nos fetos com idade ≥ 18 SPC, não foram visualizados o epitélio porque a luz encontrava-se fechada. Ocorreu um aumento estatisticamente significativo de tecido conjuntivo nas bexigas de fetos anencéfalos e uma redução também significativa do tecido muscular na bexiga dos fetos anencéfalos em comparação com os normais. A análise bioquímica mostrou um aumento na concentração de colágeno total nas bexigas dos fetos anencéfalos em comparação com os fetos normais. O fechamento da luz do úraco ocorre na 17 SPC. Após o fechamento, observa-se a ausência de epitélio de transição em seu interior, uma diminuição de tecido musculae e um aumento de colágeno tipo I, o que pode indicar uma remodelagem na formação do tecido fibroso. Os dados obtidos podem ser utilizados no estudo do desenvolvimento do úraco e da drenagem do tracto urinário embrionário. As alterações estruturais observadas na bexiga podem sugerir a existência de alterações funcionais na bexiga dos fetos anencéfalos. / The objective of this work is to present an ontogenetic and structural study of the urachus in normal human fetuses and of the bladder in normal and anencephalic fetuses during the second gestational trimester. Fifty nine fetuses were used, 47 normal (22 male and 25 female) and 12 anencephalic (5 male and 7 female) with ages between 13 and 23 weeks post conception (WPC). Stereological and biochemical methods were used to analyse the extracellular matrix fibrous components, smooth muscle and the urachal lumen. The urachal lumen was closed at the 18th WPC in both males and females. The transitional epithelium in the urachus was clearly identified in fetuses until the 17th WPC, in which the urachal lumen was open. In fetuses aged ≥ 18 WPC, the urachal epithelium was not visualized because the urachal lumen was closed. We observed a significant increase in the Vv of connective tissue in the bladders of anencephalic fetuses and a significant decrease in the Vv of smooth muscle cells in the bladders of anencephalic fetuses when compared to normal fetuses. The biochemical analyses showed a higher concentration of total collagen in the bladders of anencephalic fetuses when compared to normal fetuses. Urachal lumen closing occurs in the 17th WPC. After the lumen closing, we notice an absence of the transitional epithelium in its interior, a decrease in the amount of smooth muscle and an increase in type I collagen, which indicates a characteristic remodeling in fibrous tissue formation. The data obtained in the present study can be used as basic knowledge related to the development of the urachus and embryonic urinary tract drainage. The structural alterations of the bladder found in this study can suggest the existence of functional alterations in the bladder of anencephalic human fetuses.

O câncer de bexiga é a segunda neoplasia urogenital mais comum, atinge mais os homens e está relacionado principalmente com o fumo. Os tratamentos atualmente utilizados não são suficientemente efetivos, permitindo os diversos casos de recorrência, progressão do tumor e/ou morte do paciente. Assim, as pesquisas realizadas continuam buscando tratamentos mais efetivos. Diversos estudos revelam o envolvimento do sistema purinérgico na tumorigênese da bexiga, no âmbito das ectonucleotidases, há evidências de alterações em duas delas na progressão do câncer de bexiga: a NTPDase3 e a ecto-5’-NT/CD73. O urotélio normal dos camundongos expressa a NTPDase3 que é expressa em linhagem de câncer de bexiga de grau 1 (RT4), mas não em linhagem de grau 3 (T24). Já a ecto-5’-NT/CD73, não é expressa no urotélio normal de camundongos e tem baixa atividade em linhagem de câncer de bexiga de grau 1 (RT4) em comparação a linhagem de grau 3 (T24), evidenciando a possível participação destas proteínas na progressão do câncer de bexiga. Dessa forma, o objetivo desta tese foi investigar o envolvimento da NTPDase3 e da ecto-5'-NT/CD73 na progressão e malignidade do câncer de bexiga. A fim de caracterizar a expressão dessas enzimas durante a progressão do estabelecimento do câncer de bexiga, camundongos Balb-c receberam N-butil-N-(hidroxibutil)-nitrosamina (BBN) 0,05% em sua água de beber por 4, 8, 12, 18 e 24 semanas. Nas primeiras 8 semanas as bexigas dos animais apresentaram características de inflamação, em 12 semanas iniciaram as transformações neoplásicas que em 24 semanas caracterizaram câncer. NTPDase3 teve sua expressão diminuída nesse processo, enquanto a ecto-5’-NT/CD73 passou a ser expressa e sua expressão foi significativamente maior no utrotélio cancerígeno. A fim de verificar se a atividade das enzimas acompanhava as alterações de expressão, o câncer de bexiga foi induzido pela BBN em ratos Wistar por 24 semanas. As hidrólises de ATP e ADP são maiores nas bexigas dos animais controle do que no urotélio tumoral dos animais concordando com a expressão da NTPDase3. Por fim, no intuito de verificar o envolvimento dessas duas enzimas na malignidade do câncer de bexiga, a NTPDase3 foi superexpressa na linhagem T24, por transfecção com pcDNA3, e a ecto-5’-NT/CD73 foi silenciada utilizando o sistema CRISPR/Cas. Os clones de cada tranfecção foram caracterizados mostrando o sucesso de ambas transformações genéticas. As transfecções não alteraram significativamente as respostas purinérgicas testadas e os experimentos de implante tumoral in vivo mostram que a ecto-5’-NT/CD73 está provavelmente envolvida na malignidade dessa neoplasia. / The bladder cancer is the second most prevalent tumor of genitourinary tract. It is more common among men and it is mainly associated with smoking. The current treatments are not efficient enough to avoid the cases of tumor recurrence, progression and pacient death. So, the researches follow the pursuit of more effective treatments. Many studies have shown the involvement of purinergic system in the bladder tumorigenesis, in relation to the ectonucleotidases, there is evidence of the engagement of two of them, the NTPDase3 and the ecto05’-Nucleotidase/CD73. The health urothelium expresses NTPDase3, which is also expressed in a bladder cancer cell line of grade 1 (RT4) but it is not expressed in bladder cancer cell line of grade 3 (T24). While ecto-5’-NT/CD73 does not is expressed in the health urothelium of mice and presents a low activity in a bladder cancer cell line of grade 1 front of a high activity in a bladder cancer cell line of grade 3, highlighting the possible role of these proteins in the bladder cancer progression. In this way, the aim of this thesis was to investigate the involvement of NTPDase3 and ecto-5'-NT/CD73 in bladder cancer progression and malignancy. To investigate the enzymes expression during the progress of bladder cancer establishment, Balb-c mice received 0,05% of N-butyl-N-(hydroxybutyl)-nitrosamine (BBN) in its drinking water during 4, 8, 12, 18 and 24 weeks. Until the first 8 weeks just inflammation was observed in mice bladder, at 12 week beginning the neoplastic alterations that culminated in cancer after 24 weeks of induction. The NTPDase3 expression was decreased in this process while ecto-5’-NT/CD73 showed up and was significantly enhanced in cancerous urothelium. To verify if the enzyme activities were in agreement with their expression changes, bladder cancer was induced in Wistar rats with BBN for 24 weeks. The ATP and ADP hydrolysis was higher in the urothelium of control animals than in the cancerous urothelium, in accordance with NTPDase3 expression. Finally, in order to verify the involvement of these two enzymes in bladder cancer malignancy, NTPDase3 was overexpressed in T24 bladder cancer cell line, through transfection with pcDNA3, and ecto-5’-NT/CD73 was silenced with CRISPR/Cas system. The clones of each transfection were featured showing the success of both cell genetic transformations. The transfections did not significantly change the tested purinergic answers and the experiments of in vivo tumor implant shows that ecto-5’-NT/CD73 is probably involved in bladder cancer malignancy.

Resumo não disponível.

As plantas são importantes fontes de produtos naturais com atividade biológica que diferem quanto a estrutura e propriedades biológicas. Uma das atividades biológicas dos componentes naturais que tem recebido grande atenção é a capacidade de exercer atividade antitumoral em diferentes tipos de câncer. A boldina é um alcaloide encontrado abundantemente nas folhas e cascas do boldo (Peumus boldus Mol), uma árvore de pequeno porte originária do Chile. Entre outras propriedades, já foi demonstrado que a boldina exerce feito antitumoral em linhagens de glioma in vitro. Neste contexto, o presente estudo avaliou os efeitos do tratamento com boldina em modelos experimentais de gliomas e câncer de bexiga. Boldina foi capaz de diminuir o crescimento celular das linhagens C6 e U-138 MG, por induzir parada do ciclo celular na fase G2/M e/ou apoptose. Estes achados parecem estar associados à inativação da proteína AKT e ativação da proteína GSK-3β. Além disso, a eficácia de boldina também está relacionada com uma diminuição na atividade da proteína ERK. Estes resultados nos levaram a investigar o efeito da boldina em um modelo experimental de glioma em ratos in vivo. O tratamento com 50 mg/Kg/dia de boldina i.p. por 10 dias reduziu significativamente o volume dos tumores implantados nos ratos. Adicionalmente, a análise patológica mostrou que as características de malignidade, como necrose, hemorragia e proliferação, diminuíram nos tumores dos ratos tratados. Experimentos toxicológicos com ratos sadios tratados com 50 mg/Kg/dia de boldina i.p. por 14 dias não revelaram sinais de toxicidade tecidual, danos gastrointestinais ou alteração de atividade de enzimas hepáticas. Ademais, a análise do efeito de boldina em um modelo de câncer de bexiga in vitro, mostrou resultados similares como os observados nas linhagens de glioma. Boldina diminui o crescimento celular da linhagem T24 e induziu parada em G2/M e apoptose. Estes achados também estão relacionados com diminuição da atividade das proteínas AKT e ERK, e aumento de atividade de GSK-3β. Juntos, nossos resultados propõem um novo componente natural, o alcaloide boldina, para o desenvolvimento de um novo agente anticâncer, o qual poderá ser usado em conjunto com os regimes de quimioterapia já estabelecidos. / Plants are important sources of biologically active natural products which differ in terms of structure and biological properties. One of the biological activities of plant compounds that has attracted great interest is the ability to exert antitumoral activity in different types of cancer. Boldine is an alkaloid that occurs abundantly in the leaves and barks of boldo (Peumus boldus Mol.) a widely distributed native tree of Chile. Among other properties, boldine has been shown to exert antitumoral activity against glioma cell lines cells in vitro. Within this context, the present study was designed to evaluate the effects of boldine treatment in experimental models of gliomas and bladder cancer. Boldine was able to diminish the cell growth of C6 and U-138 MG cell lines, by inducing cell cycle arrest at G2/M phase and/or apoptosis. These findings appear to be associated to the inactivation of AKT protein and activation of GSK-3β protein. Additionally, the efficacy of boldine is also correlated with decrease in ERK activity. These results lead us to investigate the effect of boldine in an in vivo rat glioma experimental model. Treatment with 50 mg/Kg/day of boldine i.p. for 10 days significantly diminished the volume of implanted gliomas in rats. Additionally, pathological analysis demonstrated that malignant characteristics, such as necrosis, hemorrhage and proliferation, appeared to be lower in boldinetreated rats. Toxicological experiments with healthy rats treated with 50 mg/Kg/day of boldine i.p for 14 days did not reveal signals of tissue toxicity, gastrointestinal damage or alteration in the activity of hepatic enzymes. Moreover, the analysis of boldine effect in a model of bladder cancer in vitro, showed similar results to those observed in glioma cell lines. Boldine diminished the T24 cell growth and induced G2/M arrest and apoptosis. These findings were also related to decrease in AKT and ERK activities and increase in GSK-3β activity. Taken together, our results propose a novel natural compound, the alkaloid boldine, for the development of a new anticancer agent, which could be used in conjunction with the established quemotherapies regimens.