Submitted by Maria Beatriz Vieira (mbeatriz.vieira@gmail.com) on 2017-08-25T16:00:45Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) dissertacao_karen_silva_leal.pdf: 538927 bytes, checksum: 188167bf7d281218897286c3f36f6a7f (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T20:58:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_karen_silva_leal.pdf: 538927 bytes, checksum: 188167bf7d281218897286c3f36f6a7f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-08-28T20:58:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 dissertacao_karen_silva_leal.pdf: 538927 bytes, checksum: 188167bf7d281218897286c3f36f6a7f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-08-28T20:58:56Z (GMT). No. of bitstreams: 2 dissertacao_karen_silva_leal.pdf: 538927 bytes, checksum: 188167bf7d281218897286c3f36f6a7f (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2013-03-04 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / O Mycobacterium bovis BCG é utilizado mundialmente como vacina contra tuberculose há mais de meio século, com altos níveis de segurança. O BCG possui características que o tornam um promissor vetor para a produção de vacinas recombinantes multivalentes. Modificações genéticas podem aprimorar as propriedades imunogênicas e adjuvantes do BCG. Uma dessas modificações permite que o BCG escape do endossoma de células apresentadoras de antígenos. Desta maneira, os imunógenos de BCG acessam vias de apresentação cruzada de antígenos, ampliando a sua imunogenicidade. Este trabalho teve como objetivo desenvolver uma cepa de BCG ΔleuD expressando listeriolisina (Hly) de Listeria monocytogenes e avaliar seu potencial citotóxico na linhagem celular 5637 de câncer de bexiga. Para isso, o BCG ΔleuD foi transformado com o plasmídeo recombinante pUP410 contendo o gene hly. A cepa obtida demonstrou um nível de citotoxicidade similar à cepa BCG Pasteur parental, quando avaliada na linhagem celular de câncer de bexiga. Esta cepa necessita ser avaliada em outras linhagens de câncer para comprovar seu possível efeito citotóxico potencializado. / Mycobacterium bovis BCG has been used worldwide as a vaccine against tuberculosis for over fifty years with an outstanding safety record. BCG has features that make it a promising vector for production of recombinant multivalent vaccines. Genetic modification can enhance the adjuvant and immunogenic properties of BCG. One of these modifications would allow BCG to escape the endosome of antigen presenting cells. Therefore, theimmunogens of BCG can access antigens cross priming routes, increasing their immunogenicity. The aim of this work was to develop a strain of BCG ΔleuD expressing listeriolysin (Hly) of Listeria monocytogenes and evaluate its cytotoxic potential on cell line 5637 of bladder cancer. Thus, BCG ΔleuD was transformed with recombinant plasmid pUP410 containing the hly coding sequence. The recombinant BCG strain expressing listeriolysin showed a similar level of cytotoxicity when compared to the parental BCG Pasteur. This strain needs to be evaluated in other cancer lines in order to confirm its possible potentiated cytotoxic effect.

Urinary glycosaminoglycan (GAG) excretion is altered in a number of urinary tract disorders, and the excretion pattern may be associated with disease state and/or outcome. GAG excretion in children with neurogenic bladder secondary to myelomeningocele (MMC) may be affected, but existing data lack more detailed demographics and does not correlate excretion pattern with severity of bladder dysfunction. Here we analyzed GAG excretion in a well defined group of children with MMC and correlated the results with cystometric score. Urine specimens from 17 patients (10 boys, 7 girls) mean age SD, 4.6 2.9 years) were obtained during cystometry. Control specimens were from 18 normal children (13 boys, 5 girls) (6.9 2.2 years). All children were free from urinary infection, had normal renal function, and were not under pharmacological treatment. Total urinary GAG was assayed as &#956;g hexuronic acid/mg urinary creatinine, and sulfated GAGs were determined by agarose gel electrophoresis. Cistometry was done using a Dynapack MPX816 (Dynamed, São Paulo, Brazil), from wich a cystometry score was calculated according to a recent procedure [14]. There were no significant differences in total GAG excretion between male and female individuals in the MMC (0.913 0.528 vs 0.867 0.434, p>0.05) and control (0.546 0.240 vs 0.699 0.296, p>0.05) groups. Also, urinary GAG did not correlated with age in the MMC (r = -0.28, p>0.05) and control (r= - 0.40, p>0.05) groups. However, MMC patients excreted 52% more GAG than controls (0.894 0.477 vs 0.588 0.257, P<0.04). In these patients, total GAG excretion was not associated with vesical compliance alone (r= - 0.18, p>0.05), but was significantly and negatively correlated (r= -0.56, p<0.05) with cystometric score. On average, MMC patients with worst scores (<9) excreted 81% more GAG than those with better scores (>9) (1.157 0.467 vs 0.639 0.133, p<0.04). Chondroitin sulfate prevailed in both groups, but there were no significant differences between them. GAG excretion in MMC patients is significantly greater than in normal children and higher values correlate with a more severely compromised bladder function. Evidences from animal models of MMC suggest that an altered detrusor is associated with higher vesical extracellular matrix turnover, wich might explain higher GAG excretion in MMC patients. In addition, these results indicate that urinary gAG excretion might be used as an adjuvant factor for the characterization of vesical dysfunction in patients with neurogenic bladder. / A excreção urinária de glicosaminoglicanos (GAG) está alterada em várias patologias do trato urinário; o padrão de excreção pode estar associado com o estado da doença. A excreção urinária de GAG em crianças com bexiga neurogênica (BN) secundária a mielomeningocele (MMC) pode também estar alterada, mas até a presente data não há detalhamento epidemiológico dos pacientes e não se correlacionou o padrão de excreção com grau de disfunção vesical. Analisamos a excreção urinária de um grupo bem definido de crianças com MMC e correlacionamos os resultados com escore cistométrico. As amostras de urina de 17 pacientes com MMC, 10 meninos e 7 meninas (média de idade DP de 4,6 2,9 anos) foram obtidas durante o exame cistométrico. As amostras do grupo controle foram obtidas de 18 crianças normais, 13 meninos e 5 meninas (6,9 2,2 anos). Todas as crianças não estavam com infecção urinária, tinham função renal normal e não estavam sob tratamento farmacológico. A quantificação do GAG urinário total foi expressa em &#956;g de ácido hexurônico / mg de creatinina e a proporção dos diferentes tipos de GAGs sulfatados foi obtida por eletroforese em gel de agarose. A avaliação cistométrica foi realizada utilizando aparelho de urodinâmica Dynapack modelo MPX816 (Dynamed, São Paulo, Brasil), a partir da qual o escore cistométrico foi calculado de acordo com procedimento recente publicado. [14]. Não observamos diferença significativa na excreção urinária de GAG total entre meninos e meninas tanto no grupo com MMC ( 0,913 0,528 vs 0,867 0,434, p>0,05) como no grupo controle (0,546 0,240 vs 0,699 0,296, p>0,05). Os resultados mostraram também que a excreção de GAG urinário não se correlacionou com a idade tanto no grupo com MMC ( r = -0,28, p> 0,05) como no grupo controle (r = -0,40, p> 0,05). Entretanto, a comparação dos dois grupos mostrou que o grupo com MMC excretava 52% a mais de GAG total que o grupo controle (0,894 0,477 vs 0,588 0,257, p <0,04). Nesses pacientes a excreção de GAG total não se correlacionou com a complacência vesical isoladamente (r = -0,18, p> 0,05) mas foi significativa e negativamente correlacionada ao escore cistométrico (r= -0,56, p<0,05). Em média, os pacientes com piores escores (<9) excretaram 81% a mais de GAG que os pacientes com melhor escore (>9) (1,157 0,467 vs 0,639 0,133, p<0,04). O sulfato de condroitin foi o GAG sulfatado predominante nos grupos neurogênico e controles (92,5 7,6% vs 96,4 4,8%, respectivamente, p> 0,05), enquanto o sulfato do heparan estava presente em quantidades marcadamente menores; o dermatam sulfato não foi detectado. A excreção urinária de GAG em pacientes com MMC é significativamente maior que a excreção das crianças normais e os altos valores encontrados estão correlacionados a um maior compromentimento da função vesical. Evidências em modelos animais com MMC induzida sugerem que alterações no detrusor estão associadas a um elevado turnover da matriz extra celular (MEC) vesical, o que pode explicar a elevada excreção de GAG nos pacientes com MMC. Além disso, esses resultados indicam que a excreção urinária de GAG pode ser usada como fator adjuvante para a caracterização da disfunção vesical em pacientes com MMC.

Lesões na inervação do trato urinário inferior ocasionado por traumatismo raquimedular afetam geralmente o músculo detrusor e o esfíncteres uretrais. Estas alterações acarretam problemas basicamente de incontinência urinária e aumento da pressão intravesical, decorrente deste traumatismo, trazendo consequências para o funcionamento do sistema urinário superior. Quantificar os elementos fibrosos da matriz extracelular e fibras musculares das bexigas neurogênicas hiper-reflexas comparando-as com bexigas normais. Foram utilizadas 6 amostras de bexigas neurogênicas de indivíduos que foram submetidos a cirurgia de reparação por cistoenteroplastia realizados pelo serviço de urologia do Hospital Municipal Souza Aguiar, estas amostras foram fixadas imediatamente em solução tamponada de formalina a 10%. O controle com amostras iguais as do estudo extraída de cadáveres cuja causa morte não relacionava-se ao sistema urogenital macroscópicamente. O material foi submetido as seguintes técnicas histoquímicas: H&E, van Gieson e Resorcina Fucsina resorcina de Weigert com prévia oxidação pela oxona. Imunohistoquímica: anti-elastina. A observação dos cortes corados pelo van Gieson demonstrou uma diminuição significativa do músculo liso de 13% e aumento do colágeno em 72% e as fibras do sistema elástico um aumento de 101%. Conclusão. Nas bexigas neurogênicas hiper-reflexas o músculo detrusor e os elementos fibrosos da matriz foram profundamente modificados. As fibras do sistema elástico foram as mais afetadas. / Lesions on lower urinary tract innervations caused by spinal cord injuries usually affect the detrusor muscle and urethral sphincter. Beside the smooth muscle fibers, the collagen fibers and elastic system fibers, fibrous components of the extracellular matrix of the bladder wall, are strongly related to vesicle bladder compliance. For this reason the aim of this work is to quantify the fibrous elements of the extracellular matrix and muscle fibers of the neurogenic bladder hyperreflexia. Samples of neurogenic bladder were obtained from six men who had previously undergone surgical repair. The control group samples (n=6) were similarly obtained from patients whose deaths were not related to the urogenital system. The samples were stained using the following histochemical techniques: H&E, Van Gieson, Weigert and Sirius Red. Sections stained with Sirius Red were observed under polarization light microscopy to characterize possible different kinds of collagen. Immunohistochemical technique was used to characterize and quantify the elastic system fibers. Quantification analysis was performed by stereological methods. An increase of 72% of the collagen was observed. Nevertheless, the most significant difference observed was the raising of 101% of the elastic system fibers. Contrary the smooth muscle fibers showed a decrease of 13%. In the neurogenic bladder with detrusor hyperreflexia the fibrous elements of the extracellular matrix and smooth muscle fibers were greatly modified. The elastic system fibers seem to be the most affected in this disease.

A complacência da bexiga depende de músculos lisos, fibras colágenas, fibras elásiticas e suas relações. O objetivo deste trabalho é determinar a composição da matriz extracelular em amostras de bexigas normais através de análise bioquímica de colágeno e glicosaminoglicanos em amostras obtidas de mulheres em diferentes grupos de idade, analisando separadamente as camadas urotelial e muscular. Avaliamos 17 amostras de bexiga divididas em três grupos: infância (N=5), menacme (N=6) e pós-menopausa (N=6). As bexigas foram analisadas para concentração de GAG total e colágeno e para análise qualitativa de GAG por eletroforese em gel de agarose. Na camada muscular, não houve diferença entre os grupos tanto para GAG quanto para colágeno. Na camada urotelial, a análise da concentração de colágeno não mostrou diferença entre os grupos, mas a concentração de GAG no grupo da pós-menopausa (0.21 0.12 &#956;g de ácido hexurônico/mg de tecido seco) apresentou diferença em relação aos grupos do menacme (1.78 1.62 &#956;g de ácido hexurônico/mg de tecido seco) e da infância ( 2.29 1.32 &#956;g de ácido hexurônico/mg de tecido seco).Nosso trabalho concluiu que a concentração de GAG está substancialmente diminuída na camada urotelial da bexiga de mulheres na pós-menopausa. / Bladder compliance is dependent on smooth muscle, collagen fibers, elastic fiber and their ratios. The luminal surface of the urothelium is covered by an adhering glycosaminoglycan (GAG) layer. The aim of this study was to determine the composition of the extracellular matrix (ECM) in normal samples of women bladders through biochemistry analysis of collagen and GAG on samples obtained from individuals from different age groups, analyzing separately the urothelial and muscular layers. We studied samples taken from bladders of 17 patients divided in three different groups: childhood (N=5), menacme (N=6) and menopause (N=6). Bladders were analyzed for total GAG and collagen concentration per mg dry tissue and for the contents of GAG species, as determined by agarose electrophoresis and reported as the percent of total sulfated GAG. In muscular layer, collagen and GAG concentration showed no difference between groups. In urothelial layer, collagen concentration showed no difference between groups but GAG concentration in menopause ( 0.21 0.12 &#956;g hexuronic acid /mg dry tissue) was different from menacme (1.78 1.62 &#956;g hexuronic acid /mg dry tissue) and childhood ( 2.29 1.32 &#956;g hexuronic acid /mg dry tissue). There was no difference between sulfated GAG in three groups.In conclusion, GAG concentration in urothelial layer was substantially lower in menopause women.

A radioterapia é frequentemente utilizada no tratamento de tumores da próstata, porém durante esse procedimento a bexiga sadia usualmente sofre efeitos colaterais. Através do uso de um modelo animal para irradiação pélvica, avaliamos se a suplementação nutricional com L-glutamina poderia prevenir possíveis danos na parede da bexiga, especialmente em suas camadas mais superficiais. Ratos Wistar adultos machos com idade entre 3 e 4 meses foram separados em grupos de 8 animais: grupo controle que não recebeu a irradiação; grupos somente irradiados que foram mortos 7 (R7) e 15 dias (R15) após a irradiação (dose única de 10 Gy na região pélvico-abdominal); grupos irradiados e suplementados com L-glutamina (0,65g/kg de peso por dia), que foram mortos 7 (RG7) ou 15 após a irradiação. Células e vasos sanguíneos da lâmina própria, bem como o urotélio, foram avaliados com métodos histológicos. No urotélio foram feitas análises da altura e densidade nuclear e na lâmina própria densidade celular, densidade vascular e o número de mastócitos. Os resultados mostraram que em R7, a altura e densidade nuclear do urotélio e a densidade celular da lâmina própria não foram alterados significativamente. Entretanto a densidade dos vasos sanguíneos foi reduzida em 48% (p<0,05) e essa alteração foi evitada pela glutamina (p <0,02). No grupo R15, a densidade celular do epitélio aumentou em 35% (p<0,02). A densidade celular da lâmina própria não apresentou diferença estatística entre os grupos. Os mastócitos na lâmina própria foram reduzidos em R7 e R15. Apesar de ainda reduzidos em RG7 em RG15 houve aumento no número desse tipo celular o que sugere uma ação positiva da glutamina. Células &#945;-actina positivas na lâmina própria formam uma camada suburotelial e foram identificadas como miofibroblastos. A espessura dessa camada aumentou em R7, mas foi semelhante ao controle em RG7, enquanto alterações em R15 e RG15 foram menos evidentes. Esses resultados mostraram que a utilização da L-glutamina antes e após a radioterapia deve ser considerada para uso humano na proteção da bexiga contra os efeitos da radiação. / Radiotherapy is often used to treat prostate tumors, but the normal bladder is usually adversely affected. Using an animal model of pelvic radiation, we investigated whether glutamine nutritional supplementation can prevent radiation-induced damage to the bladder, especially in its more superficial layers. Male rats aged 3 to 4 months were divided into groups of 8 animals each: controls, which consisted intact animals; radiated-only rats, which were sacrificed 7 (R7) or 15 (R15) days after a radiation session (10 Gy aimed at the pelvico-abdominal region); and radiated rats receiving L-glutamine supplementation (0.65 g/kg body weight/day), which were sacrificed 7 (RG7) or 15 (RG15) days after the radiation session. Morphological and morphometric analysis of the urothelium were made. Nuclear density, lamina propria cell density and mast cells numbers per area were counted. The results showed that, in R7, epithelial thickness, epithelial cell density, and cell density in the lamina propria were not significantly affected. However, density of blood vessels in R7 was reduced by 48% (p < 0.05) and this alteration was mostly prevented by glutamine (p < 0.02). In R15, density of blood vessels in the lamina propria was not significantly modified. However, epithelial thickness was reduced by 25% (p < 0.05) in R15, and this effect was prevented by glutamine (p < 0.01). In R15, epithelial cell density was increased by 35% (p < 0.02), but glutamine did not protect against this radiation-induced increase. Cell density in the lamina propria was likewise unaffected in R15. Density of mast cells in the lamina propria was markedly reduced in R7 and R15. The density was still reduced in RG7, but a higher density in RG15 suggested a glutamine-mediated recovery. Alpha-actin positive cells in the lamina propria formed a suburothelial layer and were identified as myofibroblasts. Thickness of this layer was increased in R7, but was similar to controls in RG7, while changes in R15 and RG15 were less evident. In conclusion, pelvic radiation leads to significant acute and post-acute alterations in the composition and structural features of the vesical lamina propria and epithelium. Most of these changes, however, can be prevented by glutamine nutritional supplementation. These results emphasize, therefore, the potential use of this aminoacid as a radioprotective drug.

Orientador: Márcia Rita Fernandes Machado / Banca: Antonio Carlos Alessi / Banca: Sheila Canevese Rahal / Resumo: Neste estudo, implantou-se peritônio bovino ou biomembrana de látex natural em defeito (1,5 x 1,5 cm) induzido na parede ventral da bexiga de coelhos, com o intuito de se avaliar o processo de reparação tecidual no que se refere à biocompatibilidade, capacidade de reparação e possíveis complicações. Utilizaram-se 36 coelhos, albinos, raça Nova Zelândia Branco, adultos, machos inteiros, divididos em grupos experimentais: grupo Biomembrana (GB), grupo peritônio bovino (GP) e grupo controle (GC), cada um com 12 animais. Aos sete, 14, 30 e 60 dias de pós-operatório, os animais foram eutanasiados mediante o emprego de uma dose elevada de tiopental sódico para avaliações macroscópica e histopatológica da interface do implante com o tecido nativo. Macroscopicamente, em ambos os grupos (GB, GP e GC), observaramse, em todos os períodos, aderências de estruturas adjacentes ao local do implante, presença de cálculos e ausência de sinais de rejeição. No grupo biomembrana, aos 30 e 60 dias de pós-operatório, constatou-se a presença do biocompósito solto na luz vesical. Sob microscopia de luz, aos sete dias verificaram-se intensa reação inflamatória, neovascularização e presença de fibroblastos proliferados. Aos 14 dias não havia epitélio, porém observaram-se escassos feixes musculares, intensa neovascularização, fibroblastos e infiltrado inflamatório. No grupo GP, aos 30 dias de observação, o implante estava presente, havia fibroblastos, feixes de fibras musculares, moderada população inflamatórias e ausência de epitélio e de lâmina própria. No grupo GB, neste mesmo período, todas as camadas vesicais estavam reconstituídas. Em ambos os grupos, aos 60 dias de pós-operatório, todas as camadas vesicais encontravam-se reparadas e a membrana peritônio bovino não foi observada. No grupo GC, em todos os tempos de avaliação verificou-se integridade... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this study, bovine peritoneum or biomembrane of natural latex were utilized to replace a section of ventral face of the bladder of rabbits, with purpose of evaluation of the tissue repair process in regard of its biocompatility, scar formation ability and possible complications. Thirty-six New Zealand rabbits, adult and entire males were divided in three experimental groups: biomembrane group (GB), bovine peritoneum group (GP) and control group (GC), each one with 12 animals. The animals were euthanized at seven, 14, 30 and 60 days post operative, by use of an elevated dosage of sodium tiopental, followed by macroscopic and histopathological analysis of the implant interface with the native tissue. Macroscopically, in both groups (GB, GP and GC), it was observed, in all time periods, structure adherence to the implant site, presence of calculi and absence of rejection signs. In the GB group, since 30 until 60 days of post operative, it was evidenced the presence of the biomembrane inside the bladder. Under light microscopy, at seven days, there were intense inflammatory reaction, new vessels and proliferated fibroblasts. In 14 days, there was no urotelium, however it saw muscle fibers, intense inflammatory cells, new vessels and fibroblasts. In the GP group, at 30 days the implant was still present, there were fibroblasts, muscle fibers, moderate population of inflammatory cells and absence of urotelium and sheath. In the GB group, in the same time period, all the vesical layers were reconstituted. In both groups, at 60 days of post operative, bladder wall was repaired and the bovine peritoneum membrane was not observed. In the GC group, all the evaluation times, integrity of the vesical wall was verified... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Submitted by PPG Engenharia e Tecnologia de Materiais (engenharia.pg.materiais@pucrs.br) on 2018-08-08T14:30:34Z No. of bitstreams: 1 Disserta??o Luisa Alban.pdf: 1572475 bytes, checksum: 51e47c0f80b15d05eda24af2e3b8fde5 (MD5) / Approved for entry into archive by Sheila Dias (sheila.dias@pucrs.br) on 2018-08-09T11:13:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Disserta??o Luisa Alban.pdf: 1572475 bytes, checksum: 51e47c0f80b15d05eda24af2e3b8fde5 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-08-09T11:23:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Disserta??o Luisa Alban.pdf: 1572475 bytes, checksum: 51e47c0f80b15d05eda24af2e3b8fde5 (MD5) Previous issue date: 2018-08-01 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The interest in nanostructures such as titanate nanotubes (TNTs) has grown notably in recent years due to their biocompatibility and economic viability, which makes them promising for application in the biomedical field. Quercetin (Qc) has been reported to have great potential as a chemopreventive agent widely used in the study of the treatment of diseases such as bladder cancer. Therefore, this work aimed to study the incorporation of quercetin in sodium TNTs (NaTNT) and zinc (ZnTNT), as well as characterize the nanostructures formed. In addition, it was intended to conduct Qc release tests and biological and antitumor activities in T24 lineage cells. The nanostructures of TNTs were synthesized and characterized by FTIR, MEVFEG, EDS, MET DRX and TGA techniques. The results showed that the nanostructures have a tubular structure and the exchange of Na+ ions by Zn2+, as well as the incorporation of quercetin in the structure do not alter this morphology. In addition, the interaction established between Zn and Qc increases the thermal stability of nanostructures. The release test showed that the maximum delivery of Qc occurs after 24h and the presence of Zn controls the release of the flavonoid. Biological assays have shown that the NaTNTQc and ZnTNTQc nanostructures decrease the cellular viability of T24 after 48h in high concentrations. Furthermore, NaTNT, NaTNTQc and ZnTNT reduce the number of T24 lineage cells when combined with irradiation after 48h showing that the combination of nanostructures and ionizing energy is an attractive object of study in the treatment of bladder cancer. / O interesse por nanoestruturas como nanotubos de titanatos (TNTs) tem crescido notavelmente nos ?ltimos anos devido a sua biocompatibilidade e viabilidade econ?mica, o que os tornam promissores para a aplica??o na ?rea biom?dica. A quercetina (Qc) tem sido relatada como tendo grande potencial como agente quimiopreventivo amplamente utilizada no estudo do tratamento de doen?as como c?ncer de bexiga. Neste sentido, este trabalho pretendeu estudar a incorpora??o de quercetina em TNTs de s?dio (NaTNT) e de zinco (ZnTNT), bem como, realizar a caracteriza??o das nanoestruturas formadas. Al?m disso, pretendeu-se conduzir testes de libera??o de Qc e atividades biol?gicas e antitumorais em c?lulas da linhagem T24. As nanoestruturas de TNTs foram sintetizadas e caracterizadas por t?cnicas de FTIR, MEV-FEG, EDS, MET DRX e TGA. Os resultados mostraram que as nanoestruturas apresentam estrutura tubular, e a troca de ?ons Na+ por Zn2+, bem como a incorpora??o de quercetina na estrutura n?o alteram esta morfologia. Al?m disso, a intera??o estabelecida entre o Zn e Qc aumenta a estabilidade t?rmica das nanoestruturas. O ensaio de libera??o mostrou que a entrega m?xima de Qc ocorre ap?s 24h e apresen?a de Zn controla a libera??o do flavonoide para o meio. Os ensaios biol?gicos mostraram que as nanoestruturas NaTNTQc e ZnTNTQc diminuem a viabilidade celular de T24 ap?s 48h em altas concentra??es. Ainda, NaTNT, NaTNTQc e ZnTNT reduzem o n?mero de c?lulas da linhagem T24 quando combinadas com irradia??o ap?s 48h mostrando que a combina??o entre as nanoestruturas e energia ionizante se apresenta como um objeto de estudo atrativo no tratamento de c?ncer de bexiga.

Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro / O objetivo deste trabalho foi analisar as alterações estruturais e bioquímicas na parede da bexiga resultante do tratamento crônico de ratos pré-púberes com altas doses de corticosterona. Foram estudados 26 ratos Wistar divididos em quatro grupos: T30 foi tratado com corticosterona até 29 dias de idade e morto no dia 30. T65 recebeu o mesmo tratamento, mas foi morto com 65 dias. Cada grupo tinha seu próprio controle (C30 e C65). Os animais foram tratados com injeções intraperitoneais diárias de corticosterona (2 mg/100g peso corporal) entre o 7 e 29 dias de vida. A bexigas foram removidas e processadas para inclusão em parafina. Foram estudados os seguintes elementos da parede vesical: Colágeno, músculo liso, fibras do sistema elástico, densidade vascular e do epitélio. Estes parâmetros foram analisados por métodos morfométricos, imunofluorescência e bioquímica. A densidade vascular na lâmina foi reduzida em 40% (p <0,05) no grupo T65. A organização do colágeno foi alterada em T30 e T65, apesar da concentração de colágeno total não ser alterada. O grupo T65 teve um aumento de fibras do sistema elástico. Não houve diferença na altura e na densidade de células epiteliais entre os grupos. Quanto à densidade de fibras musculares lisas, observamos um aumento de 19% (p <0,05) no grupo T65. A administração de corticosterona na fase pré-púbere provoca modificações estruturais na bexiga de ratos afetando de modo significativo o substrato morfológico sob qual repousa a fisiologia vesical. Foi observado também que estas modificações normalmente aparecem num tempo mais longo após o término do tratamento / The aim of this work was to analyze the structural and biochemical changes on the bladder wall resulting from the chronic treatment of prepubertal rats with high doses of corticosterone. This study included 26 male Wistar rats assigned to four groups: T30 was treated with corticosterone until 29 days of age and killed at day 30, while T65 group received the same treatment but was killed at day 65. Each group had its own control group (C30 and C65). For treated animals, daily intraperitoneal injections of corticosterone (2 mg/100g body weight) were administered between 7th and 29th day of life. Bladders were removed and collagen, smooth muscle, elastic fibers system, vascular density and epithelium were analyzed by morphometrical methods, immunofluorescence, and biochemistry.Vascular density in lamina propria was reduced by 40% (p<0.05) in group T65. Collagen organization was altered in T30 and T65, although total collagen concentration was unchanged. The T65 group had an increase in elastic system fibers. There was no difference in epithelial height and cell density between the groups. Concerning the smooth muscle fibers density we observed a 19% increase (p<0.05) in the T65 group. Our results show that prepubertal administration of corticosterone induces structural modifications in the bladder of rats

A bexiga urinária é exposta constantemente a substâncias potencialmente prejudiciais presentes na urina, cuja exposição crônica pode levar a diversas patologias. Dentre estas patologias está a cistite hemorrágica que é uma condição inflamatória grave da bexiga associada ao uso de fármacos quimioterápicos, como a ciclofosfamida. É descrito que a exposição em longo prazo à ciclofosfamida aumenta o risco de desenvolvimento do câncer de bexiga, o qual é caracterizado como sendo a segunda neoplasia mais comum do trato urinário e o sétimo câncer mais prevalente entre homens no mundo. Alterações na sinalização purinérgica têm sido evidenciadas em diferentes patologias associadas à bexiga urinária. De fato, o sistema purinérgico tem emergido como um potencial alvo a ser estudado. Portanto, nesta tese buscou-se avaliar o envolvimento da sinalização purinérgica em um modelo in vivo de cistite hemorrágica e em um modelo in vitro de câncer de bexiga. No intuito de identificar estratégias preventivas e tratamentos eficazes para reduzir a morbidade e a mortalidade associadas à cistite hemorrágica, a espécie Uncaria tomentosa foi investigada, devido a sua ampla utilização em casos de inflamação crônica e doenças do trato urinário. A partir dos estudos conduzidos in vivo, demonstramos que o tratamento sistêmico com a fração purificada de glicosídeos do ácido quinóvico de U. tomentosa foi capaz de prevenir os eventos nociceptivos e inflamatórios associados à cistite hemorrágica. A diminuição da expressão dos receptores P2X7, provavelmente pela inibição da migração dos neutrófilos ao local da inflamação foi observada, evidenciando propriedades anti-inflamatórias promissoras para esta fração podendo, no futuro, se tornar um agente terapêutico potencial no tratamento desta patologia. Para o câncer de bexiga músculo invasivo, a cistectomia radical é considerada o tratamento padrão, porém está associada à morbidade significativa. Na tentativa de proporcionar uma melhor qualidade de vida aos pacientes, o interesse por abordagens terapêuticas que visam à preservação da bexiga urinária tem aumentado. Neste sentido, a radioterapia tem recebido destaque por ser uma modalidade de tratamento já utilizada. Desta forma, investigamos os efeitos da radioterapia sobre a sinalização purinérgica em linhagem celular de câncer de bexiga humano T24. Dentre os receptores expressos pelas células T24, o receptor P2X6 apresentou aumento expressivo após a radioterapia. A partir da análise de pacientes com câncer de bexiga (Kaplan-Meier), evidenciamos a relação existente entre a alta expressão deste receptor e o aumento da taxa de sobrevivência. Na sequência, o provável envolvimento da família das ectonucleotidases nos efeitos da radioterapia na linhagem celular T24 também foi avaliado. Observamos que a sinalização purinérgica, principalmente via hidrólise do ATP à adenosina pela ação combinada de ectoenzimas demonstrou papel importante no tratamento radioterápico in vitro. A indução transitória da expressão da enzima ecto- 5’NT/CD73 pela radioterapia também foi observada, sendo a adenosina gerada a responsável por contribuir na morte celular. O papel crucial da ecto-5’NT/CD73 na radiossensibilização das células foi confirmado pela inibição farmacológica e pelo uso do nocaute da enzima. Em conjunto, os resultados in vitro demonstraram que a vantagem da radioterapia parece ser alcançada naqueles pacientes que expressam o receptor P2X6 e a enzima ecto-5’NT/CD73 na área tumoral, podendo no futuro, ambos serem considerados possíveis marcadores para prever a eficácia da resposta à radioterapia para o tratamento do câncer de bexiga. Por fim, a realização do ensaio radiométrico frente à ecto-5’NT/CD73 evidenciou o potente efeito inibitório do ácido ursólico sobre esta enzima, cujo potencial também foi confirmado frente à linhagem celular T24. / The urinary bladder is constantly exposed to potentially harmful substances in the urine, whose chronic exposure can lead to various diseases. Among these pathologies the hemorrhagic cystitis is a severe inflammatory condition of the bladder associated with the use of chemotherapeutic drugs, such as cyclophosphamide. It has been reported that long-term exposure to cyclophosphamide increases the risk of developing bladder cancer, which is characterized as being the second most common cancer of the urinary tract and the seventh most common cancer among men in the world. Alterations in the purinergic signaling have been shown in diseases associated with urinary bladder. In fact, the purinergic signaling has emerged as a potential target to be studied. Therefore, this thesis sought to evaluate the involvement of purinergic signaling in an in vivo model of hemorrhagic cystitis and in an in vitro model of bladder cancer. In order to identify preventive strategies and effective treatments to reduce morbidity and mortality associated with hemorrhagic cystitis, the Uncaria tomentosa species was investigated due to its wide use in cases of chronic inflammation and urinary tract diseases. From studies conducted in vivo, we demonstrated that systemic treatment with the quinovic acid glycosides purified fraction from U. tomentosa was able to prevent nociceptive and inflammatory events associated with hemorrhagic cystitis. The decreased expression of the P2X7 receptor was observed, most likely by the reduction of neutrophils migration to the site of inflammation. Therefore, this investigation has shown promising antiinflammatory properties for this fraction, which may in the future become a potential therapeutic agent for the treatment of this pathology. For bladder muscle invasive cancer, although radical cystectomy has been considered the standard treatment is still associated with significant morbidity. In an attempt to provide a better quality of life for patients, interest in therapeutic approaches aimed the preservation of the urinary bladder have increased. In this regard, the radiotherapy has been highlighted by being a treatment modality already used. Thus, we investigated the effects of radiation on the purinergic signaling in T24 human bladder cancer cell line. Among the receptors expressed by T24 cells, the P2X6 receptor showed significant increase after radiotherapy. From the analysis of patients with bladder cancer (Kaplan-Meier), we noticed the relationship between high expression of this receptor and increased survival rate. Following, the involvement of ectonucleotidases after irradiation exposure in T24 cell line was also evaluated. The purinergic signaling, mainly through hydrolysis of ATP to adenosine by the combined action of ectoenzymes, demonstrated important role in radiotherapy in vitro. The transient induction of ecto-5’NT/CD73 expression by radiotherapy was also observed, being the adenosine generated a possible responsible in T24 cell death. The crucial role of ecto-5’NT/CD73 in the radiosensitization of the cells was confirmed by pharmacological inhibition and the use of the enzyme knockout. Taken together, the in vitro results demonstrate that the benefit of radiation therapy appears to be achieved in those patients that express the P2X6 receptor and the enzyme ecto-5’NT/CD73 in the tumor area, and in the future both may be considered potential markers for predicting the effectiveness response to radiotherapy for the treatment of bladder cancer. Finally, the radiometric ecto-5’NT/CD73 assay showed the potent inhibitory effect of ursolic acid on this enzyme, whose potential was also confirmed through the T24 cell line.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Enfermagem, 2018. / Submitted by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-10-17T21:45:09Z No. of bitstreams: 1 2018_LarissaFaquimBazaga.pdf: 6077027 bytes, checksum: ce81f4f0aae5ce05345d472ac82afad1 (MD5) / Approved for entry into archive by Raquel Viana (raquelviana@bce.unb.br) on 2018-10-18T17:18:02Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2018_LarissaFaquimBazaga.pdf: 6077027 bytes, checksum: ce81f4f0aae5ce05345d472ac82afad1 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-18T17:18:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2018_LarissaFaquimBazaga.pdf: 6077027 bytes, checksum: ce81f4f0aae5ce05345d472ac82afad1 (MD5) Previous issue date: 2018-10-18 / Introdução: Os disrafismos medulares, especificamente a mielomeningocele (MMC) é uma das causas mais prevalentes para a ocorrência de incontinência urinária neurogênica (IUN), incluindo-se a bexiga neurogênica (BN). A reconstrução do trato urinário inferior por meio da cistoplastia de aumento é uma estratégia eficaz, e vem se tornando um procedimento relevante no manejo da BN, especialmente para se conseguir a continência urinária social. No caso de crianças com BN, a situação de cronicidade pode reduzir ou limitar a capacidade de autonomia e de autocuidado, tornando-as muitas vezes dependentes de seus familiares. Para esses cuidadores, há uma readaptação em seu cotidiano domiciliar, representada pelo contínuo aprendizado em relação aos principais cuidados a seus filhos. Desse modo, crianças com doenças crônicas demandam continuamente de cuidados em saúde, sendo comum o manejo de múltiplas comorbidades, o que impacta significativamente na qualidade de vida relacionada à saúde (QVRS) das mesmas e de seus cuidadores. Objetivo: Avaliar a QVRS de crianças com MMC submetidas à ampliação vesical nos anos de 2006-2016, e de seus cuidadores. Método: Estudo de método misto realizado por meio da aplicação do instrumento genérico denominado Pediatric Quality of Life Inventory (PEDsQLTM4.0) e de uma entrevista estruturada complementar de condição-específica, realizada em um hospital de Reabilitação de Brasília-DF. Resultados: Do perfil sócio-demográfico-clínico das 8 crianças participantes, a idade média variou de 12-16 anos, sendo 04 do sexo feminino e 04 do sexo masculino. Em relação ao nível da MMC, todas apresentavam em nível lombar, sendo que 62,5% eram deambuladores comunitários e 37,5% locomoviam-se por meio de cadeira de rodas. Todas as crianças realizavam o autocateterismo e 05 adquiriram continência e não faziam uso de fraldas, 02 ainda apresentavam perdas urinárias e 01 adquiriu continência, porém reportou sentir insegurança e medo de ter perdas urinárias e/ou fecais, o que a fazia usar fraldas em período integral. Em relação aos cuidadores, apenas 01 era representado pelo pai; a média de idade foi de 45 anos. Houve uma boa correlação entre os escores do PEDsQL da díade nos domínios “capacidade física” (rs = 0,71) e “atividade escolar” (rs = 0,90). Por outro lado, não foi observada correlação entre os escores para os domínios “aspecto emocional” (rs = 0,26) e “aspecto social” (rs = 0,52). A QV no momento pré-operatório foi afetada negativamente devido ao jejum prolongado e uso de sonda nasogástrica e, no pós-operatório, foi positivamente atribuída a aquisição da continência social, menor frequência de infecção do trato urinário (ITU) e maior independência das crianças. Conclusão: As díades relataram similaridade de percepção nos domínios “capacidade física” e “atividade escolar”, e não houve uma boa correlação no “aspecto emocional” e “aspecto social”. A percepção da QV das díades foi melhorada, principalmente associada a menor ocorrência de ITU além de melhora no convívio social, evidenciada por relato de melhora da continência urinária social, especificamente menor perda urinária nos intervalos entre os cateterismos. Desse modo, verificamos que o tratamento cirúrgico realizado por meio de ampliação vesical em pacientes pediátricos com BN melhorou os índices QVRS no período pós-operatório tardio. / Introduction: The spinal dysraphisms, specifically myelomeningocele (MMC), are one of the most prevalent causes for the occurrence of urinary incontinence (UI), including the neurogenic bladder (NB). The reconstruction of the lower urinary tract, by means of augmentation cystoplasty, is an effective strategy and has become a relevant procedure in the management of NB, especially to achieve social urinary continence. In the case of children with NB, the chronicity can reduce or limit the capacity for autonomy and self-care, causing them to become dependent on their family members. For these caregivers, there is an adaptation in daily life, represented by the continuous learning in relation to taking care of the child with NB. Thus, children with chronic diseases continually demand health care, being common the management of multiple comorbidities, which significantly impacts the health-related quality of life (HRQL) of the children and their caregivers. Objective: Evaluate the HRQL of children with MMC undergoing bladder enlargement in the years 2006-2016, and their caregivers. Method: A study of the method developed through the application of Pediatric Quality of Life Inventory of the generic instrument called (PEDsQL TM 4.0) and of a structured supplementary condition-specific interview, carried out in a rehabilitation hospital in Brasília-DF. Results: From the socio-demographic of the 8 participating children, the mean ages ranged from 12-16 years, in which 4 were female and 4 were male. With regards to the level of the MMC, all lumbar levels of which 62,5% were community and 37,5% were locomotive using a wheelchair. All children were self-catheterization and 5 gained continence and did not use diapers. Two children still presented urinary losses and one gained continence, but reported feeling insecurity and fear of having urinary and / or fecal losses, which made diapers necessary. In relation to the caregivers, only one was represented by the father, the mean age was 45 years. There was a good correlation between the PEDsQL scores of the dyad in the areas of "physical capacity" (r s = 0.71) and "school activity" (r s = 0.90). On the other hand, no correlation was observed between the scores for “emotional "(r s = 0.26) and" social aspect "(r s = 0.52). Pre-operative QOL was negatively affected by prolonged fasting and use of a nasogastric tube, and in the post-operative period, it was positively attributed to the acquisition of social frequency of urinary tract infection (UTI) and greater independence of children. Conclusion: The dyads reported perceptual similarity in the domains "capacity physics "and" school activity ", and there was no good correlation in the" emotional aspect" and "social aspect". The perception of QoL of the dyads was improved, mainly in association with a lower occurrence of UTI, as well as an improvement in social aspect by report of improvement in urinary continence, specifically lower losses in the intervals between catheterizations. In this way, the surgical treatment performed through bladder enlargement in pediatric patients with NB improved the HRQoL indexes in the late post-operative period. / Introduccion: Los disrafismos medulares, específicamente en la mielomeningocele (MMC) es una de las causas de mayor predominio en la incontinencia urinaria neurogénica (IUN), incluyendo la vejiga neurogénica (BN).La reconstrucción del trato urinario inferior a través de una cistoplastía de aumento es una estrategia eficaz y es un procedimiento relevante en el manejo de la BN, especialmente para conseguir continencia urinaria social. En el caso de los niños con BC, una situación crónica también puede reducir o limitar la autonomía o autocuidado, tornándolos dependientes de sus familiares. Para estos cuidadores, hay una readaptación en sus casas de lo cotidiano, representado por el continuo aprendizaje en relación a los principales cuidados de sus hijos. De esta forma, niños con enfermedades crónicas demandan cuidados de forma continua en temas de salud, siendo común el manejo de múltiples comorbilidades, que impactan significativamente en la calidad de vida relacionada a la salud (QVRS) de los niños y de sus cuidadores. Objetivos: Evaluar el QRVS de los niños con MMC sometidos a la ampliación vesical y el de sus cuidadores en el período 2006 a 2016. Métodos: Estudio de método mixto realizado a través de la aplicación del método genérico Pediatric Quality of Life Inventory (PEDsQLTM4.0) que es complementada con una entrevista estructurada de condicion-especifica,realizada en un hospital de Rehabilitación de Brasilia, DF. Resultados: El perfil socio-demográfico-clínico de los ocho niños que participaron es el siguiente: la edad (media) varió entre 12 e 16 años,cuatro niños de sexo masculino e cuatro niños de sexo femenino. En relación al nivel de MMC, todos presentaban nivel lumbar, de los cuales seis eran deambuladores comunitarios e dos usaban sillas de ruedas. Todos los niños realizaban auto-cateterismo, de los cuales cinco no adquirieron continencia y no usaban pañales; dos todavía presentaban pérdidas urinarias; y uno adquirió continencia pero usaba pañales de forma constante ya que reportó sentir inseguridad y miedo de tener pérdidas urinarias o fecales. Con respecto a los cuidadores, la edad media fue de 45 anos y solo uno de ellos era el padre del niño. Existe una fuerte relación entre los coeficientes do PEDsQL en los dominios “capacidad física” (rs= 0,71) e “actividad escolar” (rs= 0,90). Por otro lado, la correlación para los dominios “aspecto emocional” y “aspecto social” fueron (rs = 0,26) y (rs = 0,52) respectivamente. La QV en el momento preoperatorio fue afectada negativamente debido a una ayuna prolongada y al uso de una sonda gástrica y, en el posoperatorio, fue afectada positivamente por la adquisición de continencia social, reducción en la frecuencias de infecciones urinarias (ITU) y mayor independencia de los niños. Conclusión: Los pares relataron similaridad en la percepción en los dominios “capacidad física” y “actividad escolar”; no hubo una fuerte correlación entre “aspecto emocional” y “aspecto social”. La percepción de la QV de los pares fue mejorada, principalmente la que está asociada a una menor ocurrencia de ITU. Además hubo una mejora en la convivencia social, evidenciada por el relato de una mejora en la continencia urinaria social, por menor pérdidas urinarias en los intervalos definidos entre cateterismos. De esta forma, verificamos que la intervención quirúrgica de ampliación vesical en pacientes pediátricos con BN mejoró los indices QVRS en las fases tardías del posoperatorio.