por fatores químicos e físicos, promovendo infecções hospitalares relacionadas ao uso de cateteres e demais instrumentos hospitalares, elevando os índices de mortalidade e morbidade de pacientes. Portanto, garantir a correta desinfecção capaz de impedir contaminações e infecções em ambientes hospitalares é de extrema importância. Para este fim, neste estudo explorou-se a seleção de uma substância capaz de marcar e ser biocida contra biofilmes fúngicos em superfícies de aço inox, a partir de nove candidatos benzimidazóis fluorescentes, com códigos NB1 a NB9 e oito sais imidazólicos de corantes azóicos, denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII. Desenvolveu-se para este fim um roteiro metodológico para determinar quais destas substancias são capazes de marcar e eliminar biofilmes de forma eficaz e segura. Os métodos utilizados para avaliar as substâncias foram (1) a Concentração Mínima Inibitória (MIC) conforme protocolo do CLSI M27-A3, (2) microscopias verificando capacidade das substâncias em marcar células, (3) ensaios com deposição sobre superfície do corpo de prova (placas de aço inox) com biofilme, (4) verificação da atividade biocida sobre biofilmes utilizando microscopias e (5) ensaios de citotoxicidade. Essas substâncias foram testadas frente a nove cepas de Candida spp., incluindo C. tropicalis, C. albicans e C. parapsilosis Na avaliação das substâncias, SI de corantes azóicos inibiram o crescimento celular de fungos, já o benzimidazol fluorescente NB7 apresentou atividades simultâneas de detecção e ação biocida sobre o biofilme. Todas as cepas testadas foram sensíveis a essa substância. Além disso, os biofilmes formados pelas cepas ATCC 18804 (C. albicans,) ATCC 22019 (C. parapsilosis) e ATCC 750 (C. tropicalis) na superfície de aço inox 304 sofreram ação biocida, quando expostas por 15 segundos a NB7, sendo um potencial sanitizante. / Biofilms provide an environment capable of protecting microbial cells from damage by chemical and physical factors of the immune system, and hinder the penetration of various antimicrobial agents, promoting nosocomial infections related to catheters, increasing mortality and morbidity of patients. Therefore, it is important to ensure proper hygiene to prevent contamination and infections in hospital environments. For this purpose, this study explored the identification of a substance that both detects and have biocide activity against fungal biofilms on stainless steel surfaces. Both nine fluorescent benzimidazole substances, coded NB1 to NB9 and eight imidazolium salts of azo dyes, named denominados C4MImErioCr, C10MImMO, C16MImMO, (C10)2MImMO, C4MImMO, C10MImORANGEII, C16MImORANGEII e (C10)2MImORANGEII were tested as candidates. These substances were tested applying a methodology developed to determine if a substance is able detecting and have biocide activity against fungal biofilms. Overall, this study involved the following methods: (1) Minimum Inhibitory concentration test following the CLSI protocol (M27-A3; the substances were tested against nine fungal strains, including C. tropicalis, C. albicans and C. parapsilosis.), (2) microscopy to determine the marker capacity, (3) spraying tests of the substances on surfaces (stainless steel) with fungal biofilms, (4) tests to verify the capability of the substances to both stain and were biocide against fungal biofilms, applying microscopic techniques and (5) cytotoxicity tests Within the set of seventeen substances, benzimidazole derivative NB7 was identified with the desired capabilities, staining and biocide activity against fungal biofilms at the same time. All tested fungal strains were sensible to this substance. A biocide activity was identified on the biofilms of ATCC 18804 (C. albicans), ATCC 22019 (C. parapsilosis) and ATCC 750 (C .tropicalis), grown on stainless steel 304, when exposed fifteen seconds to substance NB7. Although this substance showed being cytotoxic, it represents a promising candidate for sanitization purposes, including medical tools.

Na odontologia, o biofilme formado nas linhas d\'água de equipos odontológicos pode disseminar a contaminação microbiana na água. O objetivo desta pesquisa foi investigar a contaminação microbiana da água de abastecimento e de equipos odontológicos antes e após a implementação de um protocolo para melhoria e manutenção da qualidade microbiológica da água de equipos odontológicos, bem como desenvolver produtos antibiofilme com possível aplicabilidade nas linhas d\'água. A carga microbiana da água de 27 torneiras e equipos (reservatórios, seringas tríplice e alta rotação) de uma clínica odontológica foi avaliada por meio do sistema Petrifilm(TM) (bactérias aeróbias totais e fungos) e meios de cultura convencionais (enterobactérias e Legionella spp.) em duas etapas distintas, sendo a segunda análise realizada após a implementação de um protocolo para melhoria e manutenção da qualidade microbiológica da água dos equipos. Ainda, as atividades antibacteriana (concentração inibitória mínima - hipoclorito de sódio, ácido cítrico, bicarbonato de sódio, cloreto de sódio, dodecil sulfato de sódio, peróxido de hidrogênio, polissorbato 20 e quitosana) e antibiofilme (biomassa total e viabilidade celular) foram determinadas in vitro a partir de substâncias e produtos com possível aplicabilidade na desinfecção de linhas d\'água de equipos. As amostras de água das torneiras apresentaram carga bacteriana dentro do parâmetro estabelecido pela legislação brasileira, no entanto, as seringas tríplices e os alta rotação não. A implementação do protocolo para manutenção da qualidade microbiológica da água dos equipos demonstrou uma redução nas cargas bacteriana e fúngica apenas nos alta rotação. Enterobactérias e Legionella spp. não foram isoladas das amostras de água das torneiras e dos equipos. De acordo com a concentração inibitória mínima, o ácido cítrico, bicarbonato de sódio, cloreto de sódio, hipoclorito de sódio e peróxido de hidrogênio demonstraram as melhores atividades antibacterianas. As melhores atividades antibiofilme (biomassa total) foram do peróxido de hidrogênio a 5% (E. coli e P. aeruginosa), ácido cítrico a 30% (P. aeruginosa) e bicarbonato de sódio a 30% (S. aureus). Os produtos (Wanitox A e Wanitox B) desenvolvidos apresentaram atividade antibiofilme (viabilidade celular) contra a E. coli e S. aureus. Assim, os produtos desenvolvidos nesta pesquisa apresentaram possível aplicabilidade no enfrentamento do biofilme nas linhas d\'água de equipos odontológicos, que permanece como um dos grandes desafios na odontologia. Ainda, pesquisas adicionais são necessárias para o aperfeiçoamento e aplicabilidade destes produtos. / In dentistry, biofilm formed on dental unit waterlines can disseminate microbial contamination in water. The objective of this research was to determine the microbial contamination of water from supplies and dental units before and after the implementation of a protocol for improvement and maintenance of microbiological water quality of water from dental units as well as to develop antibiofilm products with possible applicability in waterlines. The microbial load of water from 27 taps and dental units (reservoirs, air-water syringes and high-speed turbines) in a dental clinic was evaluated through a Petrifilm(TM) system (total aerobic bacteria and fungi) and conventional culture mediums (enterobacteria and Legionella spp.) in two distinct stages, being the second analysis performed after the implementation of a protocol for improvement and maintenance of microbiological water quality of water from dental units. Moreover, the antibacterial (minimum inhibitory concentration - sodium hypochlorite, citric acid, sodium bicarbonate, sodium chloride, sodium dodecyl sulfate, hydrogen peroxide, polysorbate 20 and chitosan) and antibiofilm (total biomass and cell viability) activities were determined in vitro from substances and products with possible applicability in disinfection of dental unit waterlines. The water samples from taps presented bacterial load within the parameter established by Brazilian legislation; however, air-water syringes and high-speed turbines did not. The protocol implementation for maintenance of microbiological water quality of water from dental units showed a decrease on bacterial and fungal loads only on high-speed turbines. Enterobacteria and Legionella spp. were not isolated from water samples from taps and dental units. According to minimum inhibitory concentration, citric acid, sodium bicarbonate, sodium chloride, sodium hypochlorite and hydrogen peroxide showed the best antibacterial activities. The best antibiofilm activities (total biomass) were from 5% hydrogen peroxide (E. coli and P. aeruginosa), 30% citric acid (P. aeruginosa) and 30% sodium bicarbonate (S. aureus). The developed products (Wanitox A and Wanitox B) showed antibiofilm activity (cell viability) against E. coli and S. aureus. Thus, the products developed in this research presented a possible applicability in confrontation with biofilm on dental unit waterlines, and this remains as a major challenge in dentistry. Besides, additional researches are necessary for enhancement and applicability of these products.

A formação de biofilmes é um fator preocupante para indústria de alimentos, pois pode comprometer a sanitização de superfícies de contato e aumentar o risco de contaminação por patógeno em alimentos processados. L. monocytogenes é uma bactéria de ampla distribuição no ambiente e com capacidade de formar biofilmes e sobreviver por longos períodos em condições adversas. Esta bactéria pode causar doenças em pessoas imunocomprometidas e mulheres grávidas manifestando-se por infecções do sistema nervoso central, abortos e nascimentos prematuros. Vários estudos têm demonstrado que algumas bactérias podem sofrer transição para o estado viável mas não cultivável em resposta ao estresse. Considerando-se a importância da garantia da segurança e qualidade dos alimentos, há necessidade de desenvolvimento e de padronização de técnicas rápidas para a quantificação de células viáveis de L. monocytogenes em alimentos e biofilmes. Neste estudo foi avaliada a formação de biofilmes e viabilidade celular de Listeria monocytogenes em condições de estresse. Foram utilizadas técnicas de semeadura em placa e quantificação direta por microscopia de fluorescência com os corantes cloreto de 5-ciano-2,3-di-(p-tolil) tetrazólio (CTC) e 4,6-diamino-2- fenilindol (DAPI). Foram também realizados ensaios preliminares para padronização da Reação da Polimerase em Cadeia em tempo real (PCR em tempo real) com amostras previamente tratadas com brometo de etídio monoazídico (EMA). Os resultados obtidos demonstraram que o método de semeadura em placa foi adequado somente para a enumeração de células viáveis de L. monocytogenes em biofilmes enquanto que o método de enumeração por microscopia de fluorescência com CTC-DAPI permitiu quantificar bactérias no estado viável e viável mas não cultivável. Também foi observado que a presença de bacteriocinas de L. sakei 1 e L. mensenteroides 11 causou a diminuição na viabilidade e formação de biofilmes por L. monocytogenes. Os resultados preliminares utilizando culturas puras de L. monocytogenes demonstraram que o tratamento com brometo de etídio monoazídico (EMA) antes da análise por PCR em tempo real reduziu a amplificação do DNA de células mortas em 1 log de UFC por mL. No entanto dependendo da concentração utilizada, pode ocorrer também a inibição da amplificação de células viáveis de L. monocytogenes. Os resultados do presente trabalho indicaram que a microscopia de fluorescência é comparável à placa para análise de células de L. monocytogenes não estressadas. Entretanto, para a quantificação de L. monocytogenes submetida a estresse, é desejável a utilização de corantes de viabilidade celular. O método de PCR em tempo real com pré-tratamento com EMA é promissor mas, ainda necessita de maior padronização para avaliação de sua aplicabilidade na determinação seletiva de células viáveis de L. monocytogenes. / Biofilm formation is of great concern for food industry because it may compromise sanitization of surfaces and increase contamination risk of processed foods by bacterial pathogens. L. monocytogenes is an ubiquitous bacterium which is able to form biofilms and to survive for long periods under adverse conditions. L. monocytogenes may cause disease in immunocomprommised people and pregnant women, manifesting as central nervous system infections, abortion and premature birth. Some bacteria can undergo transition to viable but non-cultivable state in response to stress and it is important to study techniques for rapid quantification of viable cells of L. monocytogenes in foods. In this study biofilm formation and cell viability of Listeria monocytogenes were studied in stress conditions by plate counting, direct quantification by fluorescence microscopy with double staining dyes 5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride (CTC)/4\'-6 diamino-2 phenylindole (DAPI). Preliminary experiments with real time polymerase chain reaction and treatment with ethidium bromide monoazide (EMA) were also performed. The results showed that plate count method was suitable for enumeration only of viable cells of L. monocytogenes in biofilms since, fluorescence microscopy with CTC-DAPI yielded higher counts, probably due to the presence of viable but nonculturable cells. It was also observed that the presence of bacteriocins of L. sakei 1 and L. mensenteroides 11 decreased viability and formation of biofilm by L. monocytogenes. Results obtained with pure cultures of L. monocytogenes showed that the treatment with ethidium bromide monoazide (EMA) before real time PCR detection, reduced DNA amplification of dead cells in 1 log CFU per mL, but depending on the concentration used, EMA also inhibited amplification of viable cells of L. monocytogenes. The results indicated that plate counting and fluorescence microscopy are equivalent for enumeration of non-stressed L. monocytogenes cells. However, the use of double staining with fluorescence microscopy is a more suitable method if stressed cells are present. The EMA-real time PCR is a promissing tool for rapid evaluation of viable L. monocytogenes, but it needs further standartization.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / Este trabalho descreve algumas das pesquisas multidisciplinares realizadas pelo Departamento de FÃsica da Universidade Federal do Cearà (UFC), envolvendo o aproveitamento de resÃduos e a utilizaÃÃo da microscopia de forÃa atÃmica (AFM) na caracterizaÃÃo de estruturas biolÃgicas. TrÃs resÃduos foram estudados: o bagaÃo do caju, as cinzas de carvÃo mineral e as conchas de mexilhÃo Perna perna. No primeiro, foi feita a caracterizaÃÃo das cinzas originadas da queima do pedÃnculo do caju, destacando os compostos gerados neste processo: KHCO3 e K2SO4. Ambos sÃo importantes na indÃstria farmacÃutica e na produÃÃo de adubos fosfatados. No segundo, foi demonstrado o uso das cerÃmicas produzidas a partir das cinzas volantes de carvÃo mineral originadas da termelÃtrica Presidente MÃdici (RS), como substratos para a imobilizaÃÃo da invertase responsÃvel pela produÃÃo de aÃÃcar invertido. Esta aplicaÃÃo tem uso direto na produÃÃo de bebidas, medicamentos e cosmÃticos. Finalmente no terceiro, foram estudadas as alteraÃÃes na composiÃÃo, topografia da superfÃcie e dureza das conchas de mexilhÃo Perna perna tratadas termicamente. O nÃcar (ou superfÃcie perolada) de mexilhÃes tem sido usado como biomaterial na regeneraÃÃo Ãssea, tendo que sofrer processos de esterelizaÃÃo (normalmente tÃrmicos). Por isso, a importÃncia do estabelecimento de regiÃes de estabilidade mecÃnica, estrutural e composicional durante estes processos. No uso do microscÃpio de forÃa atÃmica para estudar estruturas biolÃgicas, destacou-se a importÃncia desta tÃcnica na caracterizaÃÃo do desenvolvimento de biofilmes de Enterococcus faecalis, freqÃentemente encontrada em casos clÃnicos; e a anÃlise nanoestrutural da esporopolinina de grÃos de pÃlen de Ilex Paraguarinsis St. Hill. A esporopolinina à um dos biopolÃmeros mais resistente que existe, sendo do interesse crescente dos cientistas e engenheiros de materiais.

A assistência em Unidade de Terapia Intensiva (UTI) é constantemente desafiada por infecções, que resultam no aumento da morbimortalidade, no tempo de internação e nos custos. Objetivos: avaliar os paciente críticos com tubo endotraqueal submetidos à ventilação mecânica na perspectiva clínica e microbiológica com a finalidade de determinar a dispersão de Staphylococcus aureus, Staphylococcus coagulase-negativa e Pseudomonas aeruginosa na assistência respiratória destes pacientes. Assim, analisou aspectos quantitativos, perfil de sensibilidade aos antibióticos, similaridade genética e formação de biofilme em tubo traqueal considerando a presença ou não de PAVM. Trata-se de um estudo observacional prospectivo realizado na UTI de um hospital de emergência no interior do Estado de São Paulo. A coleta de dados clínicos envolveu pacientes adultos com período 48 horas de intubação endotraqueal em ventilação mecânica mediante consentimento do responsável. As amostras foram procedentes da saliva, secreção traqueal e tubo traqueal dos referidos pacientes; e da luvas utilizadas na aspiração do tubo endotraqueal. Utilizou-se no processamento das amostras recursos clássicos e avançados da microbiologia como Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequence (ERIC-PCR), Eletroforese em Campo Pulsado e a microscopia eletrônica de varredura. A análise estatística pelo SPSS foi subsidiada em medidas de tendência central, tabelas de contingências, regressão múltipla e kappa, p<0,05. Na avaliação clínica dos 44 pacientes críticos, 34 (77,32%) eram masculinos, idade média de 39,9, e o motivo de hospitalização 19 (43,2%) foi devido à traumas. O período de hospitalização foi em média 10,9 dias (DP 9,3) e de permanência do tubo endotraqueal de 6,6 dias (DP 3,3). A ocorrência de infecção hospitalar foi de 31,2%, sendo que 15 (34,1%) eram PAVM; e 34,5% representaram o percentual de óbito. O período de permanência do tubo endotraqueal 8 dias foi fator de risco para PAVM (RR 4,00, p < 0,001) e regressão múltipla. Na análise microbiológica verificou-se que a presença das cepas foi variável em termos quantitativos segundo sua procedência. Houve predominância de contaminação nas luvas direitas com as cepas de Staphylococcus coagulase-negativa. A prevalência de resistência a oxacilina foi de 16,1% para Staphylococcus aureus e 22,6% Staphylococcus coagulasenegativa. Em termos de similaridade genética observou-se apenas um caso de Pseudomonas aeruginosa isoladas da saliva e tubo traqueal de um mesmo paciente. E, em 12 cepas evidenciou-se uma forte relação genética procedentes da saliva, do tubo traqueal. Dos Staphylococcus aureus e Staphylococcus coagulase-negativa ambos resistente a oxacilina foram similares as cepas procedentes da saliva e secreção traqueal. O biofilme presente nos 30 tubos apresentou estruturas celulares e microbianas específicas como: hemácias, rede de fibrina, leucócitos, além de cocos, bacilos, filamentos e leveduras, dentre outras. Embora com número reduzido de amostras os resultados sinalizaram para a possibilidade de dispersão microbiana endógena tendo a cavidade orofaríngea como o principal reservatório. Outras investigações em diferentes UTIs, em termos de microbiota, condições clínicas e institucionais são promissoras para que se possa de fato ampliar as evidências em torno do risco de infecção respiratória do paciente crítico em ventilação mecânica. / Care in Intensive Care Units (ICU) is constantly challenged by infections, which result in the increase of morbimortality, hospitalization length of stay and costs. Objectives: to assess critical patients with endotracheal tube on mechanical ventilation in the clinical and microbiological perspective, aiming to determine the diffusion of Staphylococcus aureus, coagulase-negative Staphylococcus and Pseudomonas aeruginosa in respiratory care to these patients. Quantitative aspects, sensitivity profile to antibiotics, genetic similarity and biofilm formation in tracheal tube considering the presence of mechanical ventilator-associated pneumonia (MVAP) were analyzed. It is an observational and prospective study carried out in the ICU of an emergency hospital in the interior of the state of São Paulo. Collection of clinical data involved adult patients in a period 48 hours of endotracheal intubation in mechanical ventilation, with the consent of the responsible person. Samples were collected from saliva, tracheal secretion and tracheal tube of the mentioned patients; and from the gloves used in aspiration of the endotracheal tube. Classic and advanced microbiological resources such as Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus Sequence (ERIC-PCR), Pulsed-Field Electrophoresis and electron scanning microscopy were used to analyze samples. Statistical analysis was done using SPSS and was supported by central tendency measures, contingency tables, multiple regression and kappa, p<0.05. The clinical evaluation showed that, of the 44 critical patients, 34 (77.32%) were male, with average age of 39.9 years. Trauma was the reason for hospitalization of 19 (43.2%) patients. The average period of hospitalization was 10.9 days (SD 9.3) and the period with endotracheal was 6.6 days (SD 3.3). The occurrence of cross infection was 31.2%, of which 15 (34.1%) were MVAP; and 34.5% represented the percentage of deaths. Length of stay of endotracheal tube 8 days was risk factor for MVAP (RR 4.00, p < 0.001) and multiple regression. Microbiological analysis showed that the presence of strains varied in quantitative terms according to their origin. There was predominance of contamination in right gloves with strains of coagulase-negative Staphylococcus. The prevalence of oxacillin resistance was 16.1% for Staphylococcus aureus and 22.6% for coagulase-negative Staphylococcus. As to the genetic similarity, it was observed only one case of Pseudomonas aeruginosa isolated from the saliva and tracheal tube of a same patient. In 12 strains, strong genetic relation from saliva and tracheal tube was evidenced. Staphylococcus aureus and coagulase-negative Staphylococcus, both oxacillin resistant, were similar to strains from saliva and tracheal secretion. Biofilm present in 30 tubes presented specific cellular and microbial structures, such as: red cells, fibrin network, leukocytes, besides cocci, rods, threads and yeasts, among others. Although with a reduced number of samples, results show the possibility of endogenous microbial diffusion, with the oropharynx cavity as the main reservoir. Further research in different ICUs, in terms of microbiota, clinical and institutional conditions, can broaden evidences regarding the risk of respiratory infection of critical patients on mechanical ventilation.

A formação de biofilmes é um fator preocupante para indústria de alimentos, pois pode comprometer a sanitização de superfícies de contato e aumentar o risco de contaminação por patógeno em alimentos processados. L. monocytogenes é uma bactéria de ampla distribuição no ambiente e com capacidade de formar biofilmes e sobreviver por longos períodos em condições adversas. Esta bactéria pode causar doenças em pessoas imunocomprometidas e mulheres grávidas manifestando-se por infecções do sistema nervoso central, abortos e nascimentos prematuros. Vários estudos têm demonstrado que algumas bactérias podem sofrer transição para o estado viável mas não cultivável em resposta ao estresse. Considerando-se a importância da garantia da segurança e qualidade dos alimentos, há necessidade de desenvolvimento e de padronização de técnicas rápidas para a quantificação de células viáveis de L. monocytogenes em alimentos e biofilmes. Neste estudo foi avaliada a formação de biofilmes e viabilidade celular de Listeria monocytogenes em condições de estresse. Foram utilizadas técnicas de semeadura em placa e quantificação direta por microscopia de fluorescência com os corantes cloreto de 5-ciano-2,3-di-(p-tolil) tetrazólio (CTC) e 4,6-diamino-2- fenilindol (DAPI). Foram também realizados ensaios preliminares para padronização da Reação da Polimerase em Cadeia em tempo real (PCR em tempo real) com amostras previamente tratadas com brometo de etídio monoazídico (EMA). Os resultados obtidos demonstraram que o método de semeadura em placa foi adequado somente para a enumeração de células viáveis de L. monocytogenes em biofilmes enquanto que o método de enumeração por microscopia de fluorescência com CTC-DAPI permitiu quantificar bactérias no estado viável e viável mas não cultivável. Também foi observado que a presença de bacteriocinas de L. sakei 1 e L. mensenteroides 11 causou a diminuição na viabilidade e formação de biofilmes por L. monocytogenes. Os resultados preliminares utilizando culturas puras de L. monocytogenes demonstraram que o tratamento com brometo de etídio monoazídico (EMA) antes da análise por PCR em tempo real reduziu a amplificação do DNA de células mortas em 1 log de UFC por mL. No entanto dependendo da concentração utilizada, pode ocorrer também a inibição da amplificação de células viáveis de L. monocytogenes. Os resultados do presente trabalho indicaram que a microscopia de fluorescência é comparável à placa para análise de células de L. monocytogenes não estressadas. Entretanto, para a quantificação de L. monocytogenes submetida a estresse, é desejável a utilização de corantes de viabilidade celular. O método de PCR em tempo real com pré-tratamento com EMA é promissor mas, ainda necessita de maior padronização para avaliação de sua aplicabilidade na determinação seletiva de células viáveis de L. monocytogenes. / Biofilm formation is of great concern for food industry because it may compromise sanitization of surfaces and increase contamination risk of processed foods by bacterial pathogens. L. monocytogenes is an ubiquitous bacterium which is able to form biofilms and to survive for long periods under adverse conditions. L. monocytogenes may cause disease in immunocomprommised people and pregnant women, manifesting as central nervous system infections, abortion and premature birth. Some bacteria can undergo transition to viable but non-cultivable state in response to stress and it is important to study techniques for rapid quantification of viable cells of L. monocytogenes in foods. In this study biofilm formation and cell viability of Listeria monocytogenes were studied in stress conditions by plate counting, direct quantification by fluorescence microscopy with double staining dyes 5-cyano-2,3-ditolyl tetrazolium chloride (CTC)/4\'-6 diamino-2 phenylindole (DAPI). Preliminary experiments with real time polymerase chain reaction and treatment with ethidium bromide monoazide (EMA) were also performed. The results showed that plate count method was suitable for enumeration only of viable cells of L. monocytogenes in biofilms since, fluorescence microscopy with CTC-DAPI yielded higher counts, probably due to the presence of viable but nonculturable cells. It was also observed that the presence of bacteriocins of L. sakei 1 and L. mensenteroides 11 decreased viability and formation of biofilm by L. monocytogenes. Results obtained with pure cultures of L. monocytogenes showed that the treatment with ethidium bromide monoazide (EMA) before real time PCR detection, reduced DNA amplification of dead cells in 1 log CFU per mL, but depending on the concentration used, EMA also inhibited amplification of viable cells of L. monocytogenes. The results indicated that plate counting and fluorescence microscopy are equivalent for enumeration of non-stressed L. monocytogenes cells. However, the use of double staining with fluorescence microscopy is a more suitable method if stressed cells are present. The EMA-real time PCR is a promissing tool for rapid evaluation of viable L. monocytogenes, but it needs further standartization.

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de soluções químicas de higienização hipoclorito alcalino e solução experimental à base de mamona (Ricinus communis) frente ao controle do biofilme de próteses totais (Análise Clínica) e aos efeitos adversos sobre a resina acrílica termicamente ativada (Análise Laboratorial). Foram testadas as soluções: Grupo I- Solução salina (controle); Grupo II- Hipoclorito de sódio 0,10%; Grupo III- Hipoclorito de sódio 0,20%; Grupo IV- Solução de mamona 8%. Para a Análise Clínica (propriedade de remoção de biofilme e ação antimicrobiana) foram recrutados 50 pacientes com Estomatite Protética e 47 com mucosa palatina saudável, os quais foram orientados a escovar suas próteses (escova específica para prótese e sabonete neutro) três vezes ao dia e imergí-las (20 minutos), uma vez ao dia, nas soluções citadas. De acordo com uma sequência aleatorizada, cada solução foi utilizada por 14 dias, com um período de 7 dias de wash out entre elas, durante o qual os pacientes realizaram sua higienização habitual. As avaliações foram realizadas antes (Baseline) e após os 14 dias de uso de cada solução. Para a propriedade de remoção de biofilme, a superfície das próteses superiores foram evidenciadas (vermelho neutro 1%) e fotografadas (Canon EOS Digital Rebel). As fotografias foram processadas (Adobe Photoshop 5.5) e a área recoberta por biofilme foi mensurada por meio de software (Image Tool 3.00). A ação antimicrobiana foi avaliada por meio da contagem de unidades formadoras de colônia (UFC) de cepas do gênero Candida spp.. Para coleta do biofilme, as próteses superiores foram escovadas (escova Tek e solução salina) por 2 minutos, sendo a suspensão transferida para tubos de ensaio. Após diluições decimais (100 até 10-3), alíquotas (50 &mu;L) de cada diluição foram cultivadas em placas de Petri contendo ágar Chromagar (Difco Laboratories Inc., Detroit, Michigan, EUA), para posterior incubação (aerobiose) por 48hs e contagem do número de colônias e cálculo dos valores de UFC/mL. Para a Análise Laboratorial, corpos de prova circulares (n=80) (16 x 4 mm) e retangulares (n=80) (65 x 10 x 3,3 mm) de resina acrílica termopolimerizável (Lucitone 550) foram imersos (20 minutos) nas soluções citadas. Antes e após as imersões, foram avaliados quanto à alteração de cor (Espectrocolorímetro Color Guide 45/0) e correlação dos dados de acordo com unidades NBS (NBS=&Delta;E* x 0,92), quanto à rugosidade de superfície - \"&mu;m\" (rugosímetro Surftest SJ-201P) e à resistência à flexão \"MPa\" (Máquina Universal de Ensaios DL 2000, EMIC). Os testes estatísticos empregados para remoção de biofilme e ação antimicrobiana foram o de Friedman, seguido pelo teste de Wilcoxon, corrigido de acordo com o método de Bonferroni (&alpha;=0,05) e Mann-Whitney (&alpha;=0,05) para comparar os grupos (com e sem Estomatite). Para a análise laboratorial foi feito o teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (&alpha;=0,05). Os resultados mostraram que, para a propriedade de remoção de biofilme, em ambos os grupos (com e sem Estomatite Protética), o grupo IV apresentou resultados intermediários e os grupos II e III foram os mais eficazes. A comparação dos grupos (pacientes com e sem Estomatite Protética) mostrou haver diferença significante apenas no baseline (p=0,025) com menores valores para os pacientes com mucosa palatina saudável. Foi verificada ação antimicrobiana frente Candida spp. dos grupos II e III em ambos os grupos de pacientes e o grupo IV no grupo de pacientes com mucosa palatina saudável, sendo que a comparação dos grupos (com e sem Estomatite Protética) mostrou diferença significante no baseline (p=0,002), grupo I (p<0,001) e grupo IV (p<0,001), com menores valores de posto médio para o grupo com mucosa palatina saudável. Para o estudo laboratorial, os resultados mostraram diferença significante entre as soluções para a alteração de cor (<0,001), com maiores valores para o grupo IV. Todas as alterações foram classificadas como leves segundo a NBS. Não houve diferença estatística entre as soluções para as propriedades de rugosidade de superfície (p=0,760) e resistência à flexão (p=0,547). Concluiu-se que as soluções de hipoclorito de sódio a 0,20% e 0,10% foram eftivas quanto à propriedade de remoção de biofilme e ação antimicrobiana, bem como não causaram efeitos adversos à resina acrílica, podendo ser empregados no controle do biofilme de próteses totais / This study evaluated denture cleansers efficacy in biofilm removal and antimicrobial action by a randomized crossover trial (\"in vivo\") and the adverse effects of heat-polymerized acrylic resin (\"in vitro\"). The employed solutions were: Group I- Saline (control); Group II- 0.10% Sodium Hypochlorite; Group III- 0.20% Sodium Hypochlorite; Group IV- 8% Castor oil solution (Ricinus comunnis). Ninety-seven complete denture wearers - fifty with Denture Stomatitis and forty-seven with oral healthy - were instructed to brush their dentures (specific brush and liquid soap) three times a day and to soak them (twenty minutes), once a day, for fourteen days. The dentures were soaked in solutions according a randomized sequence with a washout period (7 days), which patients were instructed to use their habitual hygiene. The data were collected at Baseline and after each solution usage. To evaluate the biofilm removal property, the internal surfaces of maxillary dentures were disclosed (1% neutral red) and photographed (Canon EOS Digital Rebel), the biofilm areas (total and stained) were quantified (Image Tool 3.0) and its percentage was calculated using the relation between biofilm area multiplied by 100, and total surface area of the denture\'s internal base. Antimicrobial action was evaluated by counting CFU/mL of characteristic Candida spp. colonies by a stereoscopic magnifier. To collected biofilm, the maxillary dentures internal surfaces were brushed (Tek brush and saline solution) for two minutes. The diluted resultant solutions (100 to 10-3) were cultured (50 &mu;L aliquots) inside Petri plaques containing Chromagar agar (Difco Laboratories Inc., Detroit, Michigan, EUA) for Candida spp.. For \"in vitro\" analyses, eighty disc-shaped (16 mm x 4 mm) and eighty rectangular specimens (65 mm x 10 mm x 3.3 mm) were prepared from heat-polymerized acrylic resin (Lucitone 550) and immersed into solutions for 20 minutes. Color data (&Delta;E) were determined by a colorimeter and also quantified according the National Bureau of Standards. A rugosimeter was used to measure roughness (&mu;m) and the flexural strength (MPa) was measured using a universal testing machine. For biofilm removal and antimicrobial action, data were analyzed by Wilcoxon test, corrected by Bonferroni method (&alpha;=0.05) and Mann-Whitney (&alpha;=0.05) was used to compare patients groups. For \"in vitro\" data were used Kruskal-Wallis, followed by Dunn test (&alpha;=0.05). The results for biofilm removal showed for both patients groups, intermediated values for group IV and groups II and III were the most effectives. Comparing patients groups, just baseline showed significant difference (p=0.025) and the lower values were for patients with oral healthy. Groups II and III showed antimicrobial action for Candida spp. and group IV was effective for oral healthy group. Comparing groups, baseline (p=0.002), group I (p<0.001) and group IV (p<0.001), showed significant difference and patients with oral healthy showed the lower values. The \"in vitro\" data showed significant differences to color alteration (<0.001). Group IV showed higher values, however, color changes caused by solutions were classified as \"slight\" by NBS. The statistical analysis showed no significant difference to surface roughness (p=0.760) and flexural strength (p=0.547) after the simulated period of immersion. It was concluded that 0.10% and 0.20% sodium hypochlorite solutions were effective not only to biofilm removal and antimicrobial action, but also did not cause adverse effects of acrylic resin, and could be used to control denture biofilm

Listeria monocytogenes é uma bactéria transmitida principalmente via alimentos, podendo causar infecções graves em pessoas imunodeprimidas e durante a gestação, devido à sua capacidade de sobreviver intracelularmente. A formação de biofilmes por L. monocytogenes é um fator preocupante para as indústrias de alimentos, pois biofilmes comprometem a sanitização de superfícies, aumentando os riscos de contaminação. Além disso, alguns estudos indicam que a capacidade de formação de biofilme pode estar correlacionada com a capacidade de algumas bactérias causarem doença. O controle de L. monocytogenes representa um desafio, especialmente em alimentos refrigerados e prontos para o consumo, pois esta bactéria é de natureza psicrotrófica, ubíqua e adapta-se rapidamente a diferentes condições ambientais, por meio da modulação da expressão de seus genes. O efeito das condições ambientais na expressão de genes de virulência de L. monocytogenes não é totalmente compreendido. Neste trabalho, isolados de L. monocytogenes de diversas origens foram avaliados quanto à sua capacidade de formar biofilmes, de aderir/invadir em células eucarióticas e também de expressar o gene internalina (int A), que está relacionado com o potencial de virulência. A presença de bacteriocinas de bactérias láticas (BAL) e incubação a 5°C foram os principais fatores que influenciaram a formação de biofilmes por L. monocytogenes, em comparação com caldo BHI (controle). Em geral, a adesão/invasão de células Caco-2 foram significativamente menores em pH baixo (4,5), incubação a 5°C e na presença de 0,3% Oxgall (sais biliares). Entretanto, dois isolados de L. monocytogenes (INCQS 353 e Reg 26c) apresentaram aumento nas taxas de invasão quando cultivados na presença de NaCl a 5% (P<0,05). Um isolado de L. monocytogenes (H-2) obtido de hortaliças apresentou a maior capacidade de formação de biofilme e de invadir células Caco-2, sugerindo que há uma possível relação entre a formação de biofilme e de potencial de virulência. No ensaio para avaliação da expresão do gene inlA, todos os isolados foram regulados negativamente pela presença de bacteriocinas, Oxgall 0,3%, pH 4,5 e incubação a 5°C. No entanto, para um isolado de L. monocytogenes (HU 471), a expressão do gene int A foi oito vezes maior na presença de sacarose, indicando que os componentes de alimentos podem aumentar a virulência e o potencial de infecção de L. monocytogenes. / Listeria monocytogenes is a bacterium transmitted mainly by foods and can cause serious infections in immunocompromised individuals and in pregnant woman due to their ability to survive intracellularly. The biofilm formation by L. monocytogenes is a concern for the food industry because microorganism in biofilms may survive after treatment with sanitizers and increases the risk of food contamination. In addition, some studies indicate that the ability of biofilm formation can be correlated with virulence potential. The control of L. monocytogenes is a challenge, especially in chilled and ready to eat foods since it has psychrotrophic nature, it is ubiquitous and can adapt quickly to different environmental conditions by modulating the expression of its genes.The effect of environmental conditions on gene expression and virulence of Listeria monocytogenes is not fully understood. In this report, L. monocytogenes isolates from diverse sources were evaluated for their ability to form biofilms, for adhesion/invasion of eukaryotic cells and also for differential expression of internalin A gene (int A), which is related to virulence potential. The presence of bacteriocins of latic acid bacteria (BAL) and incubation at 5°C were the main factors that influenced biofilm formation by L. monocytogenes, in comparison with BHI broth (control). In general, adhesion and invasion of Caco-2 cells were significantly lower in low pH (4.5), incubation at 5°C and in presence of Oxgall 0.3% (bile salts). On the other hand, two L. monocytogenes isolates (INCQS 353 and Reg 26c) showed higher invasion rates when cultivated in the presence of NaCl 5% (P<0.05). One L. monocytogenes (H-2) isolated from minimally processed leafy vegetables showed the strongest ability to form biofilm and to invade Caco-2 cells, under selected conditions, suggesting there may be a relationship between biofilm formation and virulence potential. For the vast majority of isolates, expression of int A gene were down regulated by the presence of bacteriocins, Oxgall 0.3%, pH4.5 and incubation at 5°C. Nonetheless, for one L. monocytogenes isolate (HU 471) expression of int A gene was eight times higher in presence of sucrose, indicating that food components can increase the infectiveness of L. monocytogenes.

A oviposição é um estágio vulnerável do ciclo de vida de carrapatos. Rhipicephalus microplus, como todos Ixodidae e Argasidae, possui uma glândula especializada, o órgão de Gené, que produz uma cera que é depositada na superfície do ovo durante a oviposição. Além de restringir a perda excessiva de água, a cera atua como uma barreira contra o ataque de organismos invasores. Em R.microplus, como em outros carrapatos, há poucos estudos demonstrando atividade antimicrobiana em ovos. Ainda mais, não há na literatura relato de atividade antibiofilme em ovos de carrapatos e nem mesmo em qualquer outro artrópode. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a hipótese da existência de mecanismos de defesa em ovos de R. microplus contra biofilmes bacterianos. O extrato água/metanol da cera dos ovos apresentou atividade contra o biofilme de Pseudomonas aeruginosa sem afetar a sua viabilidade. Esse extrato também demonstrou efeito antibiótico contra Staphylococcus epidermidis. Nós identificamos a molécula com ambas atividades (antibiofilme e antibiótica) como N-(3-sulfooxy-25-cholest-5-en-26-oyl)-L-isoleucina (boophiline). Na busca por possíveis mecanismos responsáveis pelo efeito antibiofilme de boophiline contra P. aeruginosa, 14 genes foram analisados por qRT-PCR. Boophiline inibe a expressão de fliC (flagelo) e cdrA (componente estrutural da matriz), cujos produtos são necessários para a formação do biofilme de P. aeruginosa. Monosfosfato de guanosina dimérico cíclico (c-di-GMP) é um importante segundo mensageiro característico de bactérias Gram-negativas. Altos níveis intracelulares de c-di-GMP promovem o estilo de vida séssil enquanto baixos níveis induzem o comportamento móvel. De acordo com essa afirmação, nós encontramos que boophiline aumenta a motilidade swarming de P. aeruginosa. Desta forma, nos questionamos se o mecanismo de ação de boophiline estaria envolvido com c-di-GMP já que o sistema quorum sensing não foi afetado pela molécula. Interessantemente, quando os níveis de c-di-GMP foram aumentados pela superexpressão de uma diguanilato ciclase, boophiline não inibiu efetivamente a formação de biofilme. Uma explicação para esse resultado é que boophiline interfere em uma via específica regulada por c-di-GMP, o que explicaria não termos obtido um decréscimo no nível total deste segundo mensageiro. Contrariamente, boophiline foi bactericida contra S. epidermidis. Mudanças morfológicas significativas foram observadas em células tratadas com a molécula, as quais foram severamente danificadas. Boophiline levou a formação anormal de septo, rompimento da membrana bacteriana e extravasamento do material intracelular. Adicionalmente avaliamos o potencial antibiofilme e anti-protozoário de filtrados de cultura obtidos de bactérias isoladas de tecidos de R. microplus. Quatorze filtrados de cultura bacteriano apresentaram notável atividade contra o biofilme de P. aeruginosa e S. epidermidis e foram citotóxicos contra Tritrichomonas foetus. Nosso trabalho é pioneiro em demonstrar a existência de proteção contra biofilmes em ovos de carrapatos bem como de bactérias associadas a carrapatos como produtoras de moléculas bioativas. Além disso, nós demonstramos que boophiline é uma nova molécula antibiofilme, sendo a primeira vez relatado na literatura que um composto age inibindo cdrA. Os dados obtidos em nosso estudo poderiam estimular novas abordagens em áreas como fisiologia e controle de artrópodes, genética e fisiologia de microrganismos e controle de biofilmes. / The oviposition is a vulnerable stage of the tick life cycle. Rhipicephalus microplus, as all Ixodidae and Argasidae, has a specialized gland, the Gene’s organ, which produce a wax that is smeared on egg surface during oviposition. In addition to restricting excessive water loss, wax acts as a barrier to attack by invading organisms. In R. microplus, as in other ticks, there are few studies showing antimicrobial activity in eggs. Moreover, there is no report of antibiofilm activity in tick eggs nor in any other arthropod. The objective of our study was to evaluate the hypothesis of the existence of defense mechanisms against bacterial biofilms in R. microplus eggs. The eggs wax water/methanol extract showed activity against Pseudomonas aeruginosa biofilm without affecting its viability. This extract also presented an antibiotic effect against Staphylococcus epidermidis. We have identified the molecule anti-biofilm and antibiotic as N-(3-sulfooxy-25-cholest-5-en-26-oyl)-L-isoleucine (boophiline). In the search for possible mechanisms responsible by antibiofilm effect of boophiline against P. aeruginosa, 14 genes were evaluated by qRT-PCR. We showed that boophiline inhibits the expression of fliC (flagellum) and cdrA (matrix structural component), whose products are necessary for biofilm formation in P. aeruginosa. Bis-(3’–5’)-cyclic dimeric guanosine monophosphate (c-di-GMP) is an important second messenger, characteristic of Gram-negative bacteria. High intracellular levels of c-di-GMP promote a sessile mode of growth, while low levels promote motile behavior. In line with this, we found that boophiline increases swarming motility, which raised the question whether it acts by altering c-di-GMP levels. Interestingly, when c-di-GMP levels were increased by overexpression of a diguanilate cyclase, boophiline no longer inhibited biofilm formation. One explanation for these results is that boophiline interferes with a specific c-di-GMP-regulated pathway, which would explain we have not obtained a decrease in the total level of this second messenger. Conversely, boophiline had a bactericidal effect against S. epidermidis. Significant morphological changes were observed in the boophiline-treated cells, which appeared to be severely damaged. Boophiline was found to cause abnormal septum formation, bacterial membrane disruption, and extravasation of intracellular material. Additionally, our work also aimed to evaluate the potential antibiofilm and anti-protozoa of culture filtrates obtained from bacteria isolated of R. microplus tissues. Fourteen bacterial culture filtrates showed remarkable activity against of P. aeruginosa and S. epidermidis biofilms, and were cytotoxic against Tritrichomonas foetus. Our work is pioneer in demonstrating the existence of protection mechanisms in tick eggs against biofilms, and ticks-associated bacteria as producers of bioactive molecules. Furthermore, we demonstrated that boophiline is a new antibiofilm molecule, and is the first reported in the literature that a molecule inhibits cdrA. The data obtained in our study could stimulate new approaches in areas such as the physiology and control of arthropods, the genetics and physiology of microorganisms, and biofilm control.

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Instituto Nacional de Controle de Qualidade em Saúde / S. epidermidis é o principal agente de infecções associadas a dispositivos médicos implantados, sendo sua habilidade para formar biofilme em superfícies inertes o fator determinante para a persistência desse micro-organismo. Neste estudo avaliamos 52 isolados clínicos desta espécie quanto à susceptibilidade a antimicrobianos, produção de biofilme/natureza química, presença de genes relacionados à virulência (atlE, capB,aap, embp, bhp, IS256 e IS257), e o efeito de concentrações subinibitórias (sub-CIMs) de etanol e clorexidina na produção de biofilme. Além disso, algumas das amostras biofilme-positivas foram estudadas quanto ao efeito de sub-CIMs destes antissépticos na expressão de icaA, icaR, sigB e sarA. Mais de 60% das amostras apresentaram resistência para ≥ 10 drogas e as amostras produtoras de biofilme mostraram, no geral, maior percentual de resistência a antimicrobianos. No teste em placa de microtitulação (MTP), 23 amostras foram produtoras de biofilme, sendo 14 de natureza polissacarídica, 8 proteica e 3 indeterminada. No teste em Ágar Vermelho Congo, somente amostras produtoras de biofilme polissacarídico apresentaram reação positiva. Genes do operon ica foram detectados em 23 isolados, sendo 17 destes classificados como produtores e 6 como não produtores de biofilme no MTP. A frequência dos outros genes relacionados à produção de biofilme foi: embp (69%), aap (29%) e bhp (12%), não sendo detectada correlação entre estes e a produção de biofilme do tipo PIA-independente. Os genes aap (29%) e IS256 (23%) mostraram correlações significativas com: produção de biofilme, presença de ica, perfil biofilme+/ica+, e produção de nível forte de biofilme. O gene IS256 foi ainda correlacionado significativamente com resistência a alguns antimicrobianos. Sub-CIMs de etanol (2 e/ou 4%) determinaram aumento na produção de biofilme em 15 das 17 amostras PIA-dependentes e nas 8 PIA-independentes, mas não induziram produção de biofilme em amostras originalmente não produtoras. Ao contrário do etanol, sub-CIMs de clorexidina não somente não induziram produção, como determinaram redução da produção de biofilme nas amostras biofilme-positivas. Nas amostras PIA-dependentes, o etanol (1%) acarretou aumento da expressão relativa de icaA e redução da expressão de icaR, além de aumento da expressão dos reguladores globais (sarA e sigB), enquanto a amostra PIA-independente mostrou redução na expressão destes reguladores globais. Ao contrário do etanol, a clorexidina (0,5 μg/mL) determinou aumento da expressão de icaR e redução de icaAnas amostras PIA-dependentes, além de redução na expressão de sarA e sigB na amostra PIA-independente. Os resultados indicaram que a produção de biofilme mostrou-se associada com alguns dos potenciais marcadores de virulência, sendo também evidenciada associação de alguns desses marcadores com resistência a certos antimicrobianos. As amostras PIA-dependentes foram prevalentes, destacando-se, porém, o encontro de número expressivo de amostras PIA-independentes. Os genes aap,embp e bhp não se mostraram correlacionados com a produção de biofilme proteico, indicando existência de outros mecanismos envolvidos na formação desse tipo de biofilme. Nas amostras PIA-dependentes, etanol e clorexidina mostraram efeitos opostos na expressão de icaA e icaR, corroborando dados fenotípicos previamente obtidos, e enfatizando a necessidade de ampliação do estudo da clorexidina, tendo em vista o potencial de aplicação prática deste achado. / S. epidermidis is the main agent of infections associated with implanted medical devices, being its ability to form biofilms on inert surfaces the determinant factor for the persistence of this microorganism. Fifth two clinical isolates of this species were evaluated for susceptibility to antimicrobials, biofilm production/chemical nature, presence of genes related to virulence (atlE, capB, aap, embp, bhp, IS256 andIS257), and the effect of subinibitory concentrations (sub-MICs) of ethanol and chlorhexidine in biofilm production. Moreover, some of biofilm-positive samples were studied for the effect of sub-MICs of these antiseptics in the expression of icaA, icaR, sigB and sarA. Over 60% of the samples showed resistance to ≥ 10 drugs and biofilm producers showed, in general, a higher percentage of antimicrobial resistance. In microtiter plate test (MTP), 23 strains were biofilm producers, being 4 of polysaccharide nature, 8 proteinaceous and 3 undetermined. In Congo Red Agar test, only biofilm polysaccharide producer strains showed a positive reaction. ica operon genes were detected in 23 isolates, being 17 of these classified as producers and 6 as non-biofilm producers in MTP. The frequency of other production-related biofilm genes was: embp (69%), aap (29%) and bhp (12%), no being detect a correlation between them and the production of PIA-independent biofilm. The aap (29%) and IS256 (23%) genes showed significant correlations with: biofilm production, presence of ica biofilm, biofilm+/ica+ profile, and strong level of production of biofilm. The IS256 gene was also significantly correlated with resistance to some antibiotics. Sub-MIC of ethanol (2 and / or 4%) led to an increase in biofilm production in 15 of 17 samples PIA-dependent and in the 8 PIA-independent, but did not induce biofilm production in not originally producing samples. Unlike ethanol, sub-MICs of chlorhexidine not only did not induce production as determined reduction of biofilm production in biofilm-positive samples. In PIA-dependent strains, ethanol (1%) caused an increase in the relative expression of icaAand reduced expression of icaR, in addition to increased expression of global regulators (sarA and sigB), while the PIA-independent strain showed reduction in the expression of these global regulators. Unlike ethanol, chlorhexidine (0.5 mg/mL) determined increased expression of icaR and reduction of icaA in PIA-dependent strains, besides a reduction in the expression of sarA and sigB in the PIA-independent strain. The results indicated that biofilm production was associated with some of potential virulence markers, and also evidenced some combination of these markers and resistance to certain antibiotics. The PIA-dependent strains were prevalent, highlighting, however, the encounter of significant number of PIA-independent strains. The aap, embp and bhp genes were not correlated with the production of proteinaceous biofilm, indicating the existence of other mechanisms involved in the formation of such biofilms. In PIA-dependent strains, ethanol and chlorhexidine showed opposite effects on the expression of icaA and icaR, corroborating phenotypic data previously obtained, and emphasizing the need to expand the study of chlorhexidine, in view of the potential of practical application of this finding.