Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e do Desenvolvimento, Florianópolis, 2015. / Made available in DSpace on 2016-05-24T17:51:53Z (GMT). No. of bitstreams: 1 337735.pdf: 10736659 bytes, checksum: 42e8e2ea8991b610be6a882697f3ee00 (MD5) Previous issue date: 2015 / A formação de vasos sanguíneos compreende processos fundamentaisna embriogênese, ocorrendo inicialmente por vasculogênese, seguidapor angiogênese. Falhas no equilíbrio fisiológico entre indutores pró- eantiangiogênicos podem contribuir com processos fisiopatológicos,referidos como doenças angiogênicas. Plantas medicinais como o Cissusverticillata L., sobre a qual foram reportadas ações antirreumática eantiinflamatória; hipoglicemiante; vasoconstrictora e antimitótica, sãoutilizadas pela medicina popular, no Brasil. Foram estudados os efeitosdos extratos foliares aquoso (EACv) e hidroalcóolico (EHCv) dessaespécie sobre a formação de vasos, por meio de ensaios in vivo(embriões de Gallus domesticus e Danio rerio; camundongos adultos daespécie Mus musculus). E in vitro (com células endoteliais da veiaumbilical humana-HUVEC). Os resultados mostram a presença deflavonoides na composição dos extratos, e ação antioxidante (29-59%).In vivo os extratos, isoladamente ou associados a FGFb ou VEGF-A,retardaram o crescimento dos embriões de D. rerio e G. domesticus, enestas espécies inibiram a vasculogênese e a angiogênese nasmembranas vitelínica e corioalantóica. Os extratos isolados não inibirama angiogênese em camundongos adultos, mas nos três modelos aassociação de extratos+FGFb ou VEGF-A foi capaz de reverter o efeitoangiogênico destes fatores. Em células HUVEC os extratos de C.verticillata reduziram a viabilidade celular e o brotamento vascularestimulado por FGFb e VEGF-A. No entanto, a não efetividade sobremecanismos de proliferação, migração, tubulogênese e modulação deVEGFR2, apontam a necessidade de estudos adicionais paradeterminação dos alvos moleculares do EACv e EHCv. à possívelconcluir que estes inibem vasculogênese e angiogênese embrionária, eque tais ações estariam relacionadas à inibição da viabilidade e aobloqueio do brotamento angiogênico sobre células endoteliais, bemcomo à capacidade dos EACv e EHCv de reverterem a potente atividadede fatores de crescimento angiogênicos, verificados no presente estudo.<br> / Abstract : The formation of blood vessels includes fundamental processes inembryogenesis, taking place through the vasculogenesis, followed ofangiogenesis. Failures in the physiological balance between pro- andantiangiogenic inductors can contribute to pathophysiological processesreferred as angiogenic diseases. Medicinal plants such as Cissusverticillata L. have been reported are used in folk medicine in Brazil asantirheumatic, anti-inflammatory hypoglycemic, vasoconstrictor andantimitotic actions. The effects of aqueous (AECv) and hydroalcoholic(HECv) leaf extracts of C. verticillata on the blood vessels formationwere studied by assaying in vivo (of Gallus domesticus and Danio rerioembryos as well in adults mice of Mus musculus). In vitro, assays withendothelial cells from human umbilical vein (HUVEC) experimentalmodels. The findings show the presence of flavonoids in both extractscomposition and also an antioxidant action (29-59%). Whenadministered in vivo the extracts, alone or associated with FGF orVEGF-A, have slowed the embryonic growth of D. rerio and G.domesticus, and (in this last species) inhibited vasculogenesis andangiogenesis in the yolk and chorioallantoic membranes. The extractsalone did not inhibited advanced angiogenesis, in M. musculus adults,however, in the three animal models the association of extracts + FGFbor VEGF-A was capable to reverse the angiogenic effect of theseexogenous growth factors. There was verified a decrease in cell viabilityand the vascular sprouting as stimulated by FGFb and VEGF-A, inHUVEC. However, the non-effectiveness of important angiogenicmechanisms, such as proliferation and cell migration; tubulogenesis andVEGFR2 receptor modulation, indicate that more studies in order todetermine the molecular targets of the extracts remains to be performed.In conclusion, the findings show that the extracts inhibit embryonicvasculogenesis and angiogenesis, and also that such actions are possiblyrelated with decrease of viability and the blockade of angiogenicsprouting on the endothelial cells, as well the capacity of both extracts toreverse the potent activity of angiogenic growth factors, as observed inthe present study.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-11T08:45:17Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2070709 bytes, checksum: 8aca4e1bccb3e3a726679695fe3ab253 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-11T08:45:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 2070709 bytes, checksum: 8aca4e1bccb3e3a726679695fe3ab253 (MD5) Previous issue date: 2014-08-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Serine-Arginine Protein Kinase 2 - SRPK2 é uma cinase reguladora de fatores de splicing não-snRNPs (proteínas SR), e de fatores snRNPs (U4⁄U6-U5 tri-snRNP). SRPK2 regula as proteínas SR fosforilando-as em seus resíduos de serina e recrutando- as para a formação do spliceossomo, enquanto atua na formação do complexo U4⁄U6- U5 tri-snRNP, envolvido na seleção do sítio de splicing γ’. As interações com fatores snRNP e não-snRNP são conhecidas e bem estabelecidas funcionalmente, no entanto, pouco se sabe sobre proteínas que regulam o funcionamento da SRPK2, e sobre demais alvos de fosforilação. As proteínas SRPKs possuem seu domínio cinase divido em dois por uma região espaçadora de grande flexibilidade estrutural, passível de interação. Portanto, possível responsável pela seleção de substratos e/ou alvo de regulação. Nosso objetivo com este trabalho foi encontrar novas interações proteicas de SRPK2 através de sua região espaçadora. A técnica escolhida foi o duplo-híbrido em leveduras, no qual estas foram cotransformadas com o plasmídeo pBTM116K/S-SRPK2 trp1 e com uma biblioteca de cDNAs de leucócitos humanos em pACT2 leu2. O experimento foi processado em meio restritivo SD–TRP –LEU –HIS, acrescido de 30mM de 3AT e mantido em estufa 30°C por 120 horas. Ao final deste período, foi verificado o crescimento de 119 colônias de leveduras, submetidas a diferentes testes de ativação dos genes repórteres his3 e lacZ. Os resultados destes testes nos levaram a seleção de 42 clones, que tiveram seus DNAs plasmidiais extraídos, sequenciados e analisados pela ferramenta Blast do NCBI. As proteínas codificadas por estes genes estão funcionalmente relacionadas a processos celulares como biogênese ribossomal, migração, diferenciação, angiogênese, proliferação, sobrevivência e ciclo celular. Estes resultados sugerem novos mecanismos moleculares para a atuação da SRPK2 no processo tumorigênico. / Serine-Arginine Protein Kinase 2 - SRPK2 is a regulator kinase of non-snRNP splicing factors (SR proteins) and of snRNPs factors (U4⁄U6-U5 tri-snRNP). SRPK2 regulates SR proteins phosphorylating them on their serine and recruiting them for the formation of the spliceosome, while acts on the tri-snRNP U4/U6-U5 complex assembly, involved in the splicing γ’ site selection. The interactions with snRNP and non-snRNP factors are known and well-established functionally, however, little is known about the proteins that regulate the functioning of SRPK2, and about other targets of phosphorylation. The SRPKs proteins have their kinase domain divided into two by a spacer region of great structural flexibility, believable of interaction. Therefore, possible responsible for selection of substrates and/or aim of regulation. Our aim with this work was to find new protein interactions of SRPK2 by its space region. The technique chose was two-hybrid yeast, in which yeasts were cotransfected with pBTM116K/S-SRPK2 trp1 plasmid and a human leukocyte cDNA library in pACT2 leu2. The experiment was processed in restrictive medium SD –TRP –LEU –HIS, plus 30 mM of 3AT and keep in a incubator 30°C for 120 hours. At the end of this period, it was found the growth of 119 yeast colonies, subjected a different tests of activation of reporter genes his3 and lacZ. The results of these tests led to the selection of 42 clones, which had its plasmid DNA extracted, sequenced and analyzed by the NCBI Blast tool. The proteins encoded by these genes are functionally related in cellular processes as ribosome biogenesis, migration, differentiation, angiogenesis, proliferation, survival and cell cycle. These results suggest new molecular mechanisms for the performance of SRPK2 in tumorigenic process. / Sem lattes

A Educação Superior Brasileira passou nos últimos anos por uma verdadeira revolução, o que nos leva a pensar na necessidade de se fazer uma reflexão acerca dos métodos de ensino que são adotados nos cursos superiores. Temos atualmente uma grande variedade de práticas pedagógicas que podem ser adotadas, sobretudo as digitais que estão cada vez mais presentes no universo de alunos e professores. No entanto, ainda é comum, sobretudo no ensino superior, o uso exclusivo de aulas expositivas como ferramenta didática, onde o aluno assume uma postura passiva em relação ao seu aprendizado, e o professor o papel de detentor do saber e transmissor do conhecimento. Esse tipo de prática é especialmente observado nos cursos das áreas de saúde e biológicas, onde a maioria das disciplinas são muito técnicas e as aulas são praticamente teórico-expositivas. Neste contexto pode ser incluída a disciplina de Biologia Celular, a qual é básica para esses cursos e envolve o estudo de estruturas e processos microscópicos, de difícil visualização, interpretação e imaginação. Para auxiliar no ensino dessa disciplina desenvolvemos neste trabalho um conjunto de animações e esquemas, utilizando o programa Adobe Flash CS5 Professional, sobre os conteúdos comumente abordados nessa disciplina, e criamos o software BioCell UNIFAL-MG. Com o material aqui produzido desenvolvemos uma estratégia de ensino, utilizada nas aulas de Biologia Celular do curso de Licenciatura em Biologia da Universidade Federal de Alfenas-MG, na qual os alunos tiveram contato com as animações e os esquemas produzidos em dois momentos distintos. O primeiro durante as aulas teóricas da disciplina, que para isso foram reformuladas para inclusão do material produzido, e o segundo momento durante monitorias oferecidas ao longo do semestre no laboratório de informática, onde os alunos podiam estudar livremente utilizando o software. Ao final do semestre o método desenvolvido foi avaliado pelos alunos, através da resposta de um questionário fechado, o qual foi avaliado através de análises estatísticas, e de um instrumento de percepção aberto. A maioria dos alunos aprovou o método e isso foi comprovado após avaliação de aspectos como “Qualidade do Material” e o “Aprendizado com o material desenvolvido”, sendo que a assertiva “As animações apresentadas facilitam o entendimento” foi a de melhor resultado dentre todas as analisadas. Os resultados obtidos nos permitem concluir que o uso de animações pode auxiliar no aprendizado dessa disciplina, tornando sua compreensão mais simples, e que há uma grande demanda por parte dos alunos por novas estratégias pedagógicas para o ensino em nível superior na UNIFAL-MG / Nowadays there was a revolution in he Brazilian High Education leading us to start to introducing new teaching methods in the University courses. We currently have a wide range of pedagogical practices that can be adopted, especially digital ones that are increasingly in the students and teachers universe. However, it is still common, especially in high education, the use of only lectures as a teaching tool, where the student assumes a passive stance in relation to their learning, and the teacher is assumed as a knowledge holder and a simple information transmitter. This type of practice is especially observed in health and biology areas, where the majority of subjects are very technical and the classes are main expositive. Cell Biology teaching is included in this context, as a basic discipline for these courses and involves the study of microscopic structures and processes which it is very difficulty to learn just from static images and texts. To assist in his kind of discipline, we developed in this work an animations and layouts set using Adobe Flash Professional CS5 on the contents commonly addressed in this discipline, and created the BioCell Unifal- MG software. With the material here produced, we developed a teaching method used in the Unifal-MG Biology course, which students had contact with the animations and diagrams showed during lectures and offered tutoring throughout the semester in the computer lab, where they could freely studied using the software. At the end of the semester the developed methodology was evaluated by an attitudinal measure scale instrument. The majority Most f the students approved the method and this was confirmed by the evaluation of points as “Material quality” and “Learning with the developed material ”, been the assertive “the animations make easy to me understand” the best evaluated by the students. The results allow us to conclude that the animation used helps in the cell biology learn and that the students are very interested in known new teaching strategies in the UNIFAL-MG.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 383266.pdf: 823319 bytes, checksum: 310fb137797fb2ab616c91d119b2c6fa (MD5) Previous issue date: 2006-09-27 / A espectroscopia de infravermelho (IV) permite caracterizar molecularmente tecidos e flu?dos, uma vez que seus espectros s?o caracter?sticos e atuam como uma impress?o digital. O r?pido desenvolvimento da t?cnica de infravermelho na ?ltima d?cada tem aberto novas portas para o progn?stico e diagn?stico de patologias facilitando a procura de melhores tratamentos. Atualmente, o infravermelho (IV) vem sendo utilizado nos mais diversos modelos experimentais de sistemas biol?gicos. A sepse provoca mudan?as no ambiente celular e em suas trocas i?nicas, afetando o funcionamento da mitoc?ndria e aumentando a forma??o de esp?cies reativas de oxig?nio (EROs). O ?xido n?trico (NO) ? considerado um marcador da forma??o de radicais livres produzidos, enzimaticamente ou n?o, nos tecidos. O aumento dos radicais livres promove a oxida??o de res?duos de amino?cidos, aumentando a forma??o de grupos carbon?licos (CO) prot?icos que atuam como biomarcadores do estresse oxidativo. Devido a esses fatores, entre outros, as mitoc?ndrias e seus complexos v?m sendo avaliados pela espectroscopia de infravermelho nas regi?es das bandas de amidas I (espectro entre 1615 cm -? e 1700cm -?, referente a liga??es C=O) e II (espectro entre 1500 cm -? e 1600 cm -?, referente a liga??es C-H), caracter?stico de prote?nas, com o objetivo de observar altera??es que possam ocorrer nestas organelas. No presente trabalho de mestrado, nosso objetivo principal foi analisar as altera??es em mitoc?ndrias hep?ticas causadas pela sepse induzida por CLP em ratos (Rattus novergicus var. Wistar) atrav?s do FTIR-ATR. O experimento foi contemplado pela extra??o das mitoc?ndrias hep?ticas atrav?s de diferentes gradientes de centrifuga??o em meios contendo sacarose, heppes e EGTA. A dosagem de NO s?rico foi feita atrav?s da metodologia de Griess. Nossos resultados apresentaram diferen?as significativas nas bandas de amida I do espectro de infravermelho do grupo s?ptico em rela??o ao controle, controle anestesia e sham. As mesmas diferen?as foram percebidas para a dosagem de NO s?rico.

A ativação dos fagócitos é crítica para a defesa contra vários patógenos, por isso a importância de estudos que desenvolvam alternativas para a ativação dessas células. Nosso estudo visou investigar os efeitos do BAY 41-2272 na ativação de fagócitos. Para este propósito avaliamos a fagocitose, liberação de superóxido e atividade microbicida. Foram usados PBMC, neutrófilos e a linhagem celular THP-1, cultivadas na presença ou ausência de BAY 41-2272 (1mM ou 3mM) por 1h ou 48h a 37°C. A liberação de superóxido foi avaliada pelo ensaio da redução do citocromo c inibido especificamente pela superóxido dismutase; a fagocitose foi analisada através da co-cultura com partículas de Zymosan e contagem das células com partículas englobadas; e a atividade microbicida foi mensurada por meio da co-cultura com E. coli enteropatogênica seguida pela contagem das CFU formadas pelas bactérias recuperadas dos fagócitos. Além disso, fizemos a dosagem de IL-12, IFN-g e TNF-a e a análise da expressão gênica do gene CYBB. Todos os tipos celulares responderam aos tratamentos. Os PBMC, neutrófilos e THP-1 tratados com BAY 41-2272 produziram significativamente mais superóxido (cerca de 50% mais), e apresentaram significativamente maior atividade fagocítica (cerca de 54% mais), microbicida (cerca do dobro) comparados ao grupo controle não tratado, além de produzir TNFa. Ainda, o tratamento com o fármaco aumentou a expressão do gene da gp91phox nas THP-1 e PBMC. BAY 41-2272, especialmente na dose de 3mM, mostrou um grande potencial na ativação dos fagócitos em vários aspectos. Este potencial pode ser explorado na busca por novas terapias destinadas ao controle de infecções, principalmente no caso das imunodeficiências. / Phagocyte activation is critical role for host defense against several pathogens, so that studies developing alternatives for activating these cell are very important. We investigated the effects of BAY 41-2272 on phagocytes activation. For this purpose we evaluated several aspects indicating cellular activation, as phagocytosis, superoxide release and microbicidal activity. We used PBMC, neutrophils and THP-1 cell lineage cultured or not with BAY 41-2272 (1mM and 3mM) for 1h or 48h at 37°C. Superoxide release was tested by superoxide dismutase-inhibitable cytochrome c reduction assay; phagocytosis was evaluated through co-culture with zymosan particles and counting of ingested particles; and microbicidal activity was measured through co-incubation with enteropathogenic E. coli followed by counting of CFU from recovered bacteria from phagocytes. We analyzed the IL-12, IFN-g and TNF-a cytokine production and gp91phox gene expression. All cell types showed a response to treatments. PBMC, PMN and THP-1 treated with BAY 41-2272 produced significantly more superoxide (about 50% more), and presented significantly more phagocytic (about 54% more), microbicidal (about twice) activity than control group and production more TNF-a than control group. The expression of CYBB gene was more expressed on treated cells than control. BAY 41-2272, especially at 3mM, showed a great potential in activation of phagocytes in several aspects. This potential should be investigated at the light of new therapies seeking infection control, mainly in immunodeficiency.

Caulobacter crescentus é uma bactéria gram-negativa que dá origem a duas células filhas a cada divisão celular, a célula móvel e a célula talo, que se distinguem por sua morfologia, programa de desenvolvimento e capacidade de replicação do DNA. O gene alkB de C. crescentus foi identificado num clone que contém os genes de choque térmico dnaK e dnaJ (Gomes et al, 1990). Em E. coli, o gene alkB mostrou estar envolvido, juntamente com os genes alkA e ada, no reparo de lesões do DNA causadas por agentes alquilantes (Teo et al, 1986). O gene alkB de E coli forma um operon com o gene ada, sendo que o gene ada precede o gene alkB. A expressão de ambos os genes é induzida por doses não letais de agentes alquilantes, a nível de transcrição. A seqüência de aminoácidos deduzida da seqüência de nucleotídeos do gene alkB de Caulobacter crescentus mostrou uma identidade de 42,5 % com a proteína AlkB de E. coli (Kondo et al, 1986). Ao contrário do que ocorre em E.coli, este gene não faz parte de um operon com o gene ada e sua expressão não é induzida por agentes alquilantes. Através do ensaio de proteção à nuclease S1 foi demonstrada a existência de um único início de transcrição para este gene. Para medir o nível de expressão do gene alkB foi construída a fusão de transcrição alkB-placZ/290, onde o vetor repórter de transcricão (placZ/290) (Gober & Shapiro, 1992) contendo o gene da (&#946;-galactosidase sem o seu promotor foi ligado ao fragmento Sall/Stul (0,3 kb) que contém apenas a região promotora do gene alkB. Observou-se que a transcrição do gene alkB é regulada durante o ciclo celular de Caulobacter crescentus, apresentando níveis máximos na célula talo. Verificou-se ainda, através do experimento de dupla sincronia, que a proteína AlkB de C. crescentus sintetizada na célula prédivisional é segregada tanto para a célula móvel como para a célula talo, não apresentando um padrão polar de expressão. A resposta adaptativa a agentes alquilantes foi demonstrada em C. crescentus pela detecção de um aumento na sobrevivência aos efeitos letais dos agentes alquilantes em células pré-tratadas com baixas doses destes agentes e pela identificação de uma proteína induzida por agentes alquilantes utilizando anticorpos monoclonais anti-Ada de E. coli. / Caulobacter crescentus is a gram-negative bacterium that yields two different progeny cells at each division cycle, the swarmer cell and the stalked cell, which differ in structure, developmental program and ability to replicate DNA. The alkB gene in Caulobacter crescentus was identified in a clone which contains also the heat shock genes dnaK and dnaJ (Gomes et al, 1990). In Escherichia coli the alkB gene has been shown to be involved, with alkA and ada, in the pathway for repair of DNA alkylation damage (Teo et al, 1986). The E. coli alkB gene forms an operon with the ada gene, being downstream of it. The addition of the alkylating agent MMS to E. coli cultures induces the expression of both ada and alkB, at the level of transcription. The aminoacid sequence deduced from the nucleotide sequence of the C. crescentus alkB gene has shown 42,5% identity with the AlkB protein of E. coli (Kondo et al, 1986). Contrary to what happens in E. coli, the alkB gene of Caulobacter cescentus does not form an operon with the ada gene and its expression is not induced by alkylating agents. S1 nuclease protection assays have shown the presence of a single start of transcription for the alkB gene. To investigate the expression of the alkB gene during the cell cycle of the bacterium, its regulatory region was fused to a promoterless lacZ gene present in the vector placZJ290 (Gober & Shapiro, 1992), and &#946;-galactosidase activity and synthesis, directed by the alkB gene promoter, were determined. It was observed that expression of the alkB gene is cell cycle controlled in Caulobacter. The placZJ290 transcriptional fusion with alkB, expressed in predivisional cells did not display a polar pattern of segregation in Caulobacter crescentus. &#946;-galactosidase synthesized in predivisional cell was partitioned in equal amounts to both cell types after cell division. An adaptive response to alkylation damage has been demonstrated in C. crescentus. The response was detected by the increased resistance to cell killing of pretreated cells with low doses of methylating agents, followed by exposure to higher doses of these agents, and by cross-reactivity of an inducible protein of 39 kDa with E. coli anti-Ada monoclonal antibodies.

Submitted by Caroline Xavier (caroline.xavier@pucrs.br) on 2017-06-01T15:01:05Z No. of bitstreams: 1 TES_LISIANI_SAUR_COMPLETO.pdf: 5532574 bytes, checksum: 990865e2748aa19880737e88991ec082 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-01T15:01:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 TES_LISIANI_SAUR_COMPLETO.pdf: 5532574 bytes, checksum: 990865e2748aa19880737e88991ec082 (MD5) Previous issue date: 2017-01-12 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Funda??o de Amparo ? Pesquisa do Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS) / Post-traumatic stress disorder (PTSD) is a neuropsychiatric condition related to exposure to a traumatic event. It is clinically characterized by several debilitating symptoms including frequent re-experiencing of the traumatic event, avoidance bahavior, hypervigilance, and cognitive and mood changes among others. Not all individuals exposed to severe traumatic experiences develop PTSD. This psychopathology affects a vulnerable subpopulation of individuals confronted with a stressful experience that exceeds their capacity to cope. In this sense, it has been argued that PTSD can be considered a fear-related disorder. Thus, the brain regions most widely studied in this psychopathology are the prefrontal cortex, the hippocampus and the amygdala, because they are related to the storage and consolidation of new memories including emotional memories, such as fear and anger. Due to the complex clinical presentation of PTSD and its very variable symptoms, it is considered a condition to treat. Ketamine is an NMDA receptor antagonist that has shown promising effects in the treatment of depression. However, because it produces dissociative and psychotic effects, there is a concern this drug might be related with increased PTSD symptoms. One of the most widely used animal models to mimic the behavioral and neurochemical changes of PTSD is the inescapable footshock. In the first part of this study, we observed significant behavioral and histological changes caused by exposure to footshock. Animals with PTSD exhibited longer freezing bouts when re-exposed to the same aversive context, as well as increased pellet production. In addition, important changes were observed in astrocytes from the hippocampal CA1 region of these animals, such as decreased astrocytic density, ramification and fewer primary processes. Furthermore, the polarity of the astrocytes was also changed when compared to control animals. In the second part of this study, we analyzed the effects of ketamine on this animal model. Since not all animals have the same response during the re-exposure to aversive environment, that is, the animals have individual differences in their susceptibility to traumatic stress, we decided to separate the animals with PTSD into two groups: those with an extreme behavioral response (EBR) and those with a minimal behavioral response (MBR). Furthermore, the glucose metabolism and the BDNF levels in the frontal cortex, hippocampus and amygdala were analyzed 8 and 9 days after PTSD induction, respectively. BDNF levels were analyzed through biochemical assays and glucose metabolism was analyzed by 18F-FDG-microPET, which measures the glucose uptake in tissues, in other words, the metabolic demand. We observed that animals with PTSD classified as EBR showed an increase in freezing behavior and the treatment with ketamine worsened that behavioral response, that is, the ketamine worsened the PTSD symptoms. However, no changes were observed in BDNF levels or glucose metabolism. These results demonstrate that footshock as an animal model of PTSD induced significant behavioral and astrocytic alterations. We also observed that ketamine worsened the PTSD symptoms and that, as is the case with humans, not all individuals that are exposed to a traumatic stress develop PTSD. However, this animal model does not seem to be related to long-term changes in BDNF levels or glucose metabolism. / O transtorno do estresse p?s-traum?tico (Post-Traumatic Stress Disorder - PTSD) ? uma doen?a neuropsiqui?trica relacionada ? exposi??o a um acontecimento traum?tico. O PTSD ? caracterizado clinicamente por uma s?rie de sintomas debilitantes incluindo a reviv?ncia frequente do evento traum?tico, fuga de est?mulos associados ao trauma, hipervigil?ncia, mudan?as de cogni??o e humor entre outros. Nem todos os indiv?duos expostos a graves experi?ncias traum?ticas desenvolvem PTSD, esta psicopatologia afeta uma subpopula??o de indiv?duos vulner?veis cuja exposi??o a uma experi?ncia estressante excede sua capacidade de adapta??o. Neste sentido, foi argumentado que o PTSD pode, pelo menos em parte, ser um dist?rbio relacionado ao medo. Assim, as regi?es encef?licas mais amplamente estudadas nesta psicopatologia s?o o c?rtex pr?-frontal, o hipocampo e a am?gdala, pois s?o regi?es relacionadas com os processos de armazenamento e consolida??o de novas mem?rias incluindo mem?rias emocionais, tais como de medo e raiva. Devido ? complexa apresenta??o cl?nica do PTSD e a sua sintomatologia muito vari?vel esta ainda ? uma doen?a classificada como de dif?cil tratamento. A cetamina ? um f?rmaco antagonista de receptores NMDA que tem demonstrado promissores efeitos no tratamento da depress?o, entretanto, por ser uma droga que produz efeitos dissociativos e psic?ticos, existe a preocupa??o de que esta droga possa estar relacionada com o aumento dos sintomas do PTSD. Um dos modelos animais mais amplamente utilizados para mimetizar as altera??es comportamentais e neuroqu?micas do PTSD ? o choque inescap?vel ?nico. Na primeira parte do trabalho observamos importantes altera??es comportamentais e histol?gicas provocadas pela exposi??o ao choque nas patas. Os animais com PTSD apresentaram um maior comportamento de ?freezing? quando reexpostos ao mesmo contexto aversivo, bem como maior produ??o de bolos fecais. Al?m disso, importantes altera??es foram observadas nos str?citos da regi?o CA1 do hipocampo destes animais como: diminui??o na densidade, arboriza??o e quantidade de processos prim?rios. Ademais, a polaridade astrocit?ria tamb?m foi alterada em rela??o aos animais controle. Na segunda parte do trabalho analisamos os efeitos da cetamina sobre este modelo animal. Como nem todos os animais apresentam a mesma resposta durante a reexposi??o ao contexto aversivo, ou seja, os animais apresentam diferen?as individuais na sua susceptibilidade ao estresse traum?tico, n?s decidimos separar os animais com PTSD em dois grupos: aqueles que apresentaram uma resposta comportamental exagerada (Extreme Behavioral Response - EBR) e aqueles que apresentaram uma resposta comportamental m?nima (Minimal Bahavioral Response - MBR). Al?m disso, o metabolismo da glicose e os n?veis de BDNF no c?rtex frontal, hipocampo e am?gdala foram analisados oito e nove dias ap?s a indu??o do PTSD, respectivamente. Os n?veis de BDNF foram analisamos atrav?s ensaios bioqu?micos e o metabolismo da glicose foi analisado por meio do 18FFDG- microPET que avalia o consumo da glicose nos tecidos. Observamos que os animais com PTSD classificados como EBR apresentaram um aumento no comportamento de freezing e que o tratamento com cetamina piorou a resposta comportamental, ou seja, a cetamina agravou os sintomas do PTSD. Entretanto, nenhuma altera??o foi observada nos n?veis de BDNF e no metabolismo da glicose. Estes resultados demonstram que o choque nas patas, como modelos de PTSD em animais, induz importantes altera??es comportamentais e astrocit?rias. Observamos tamb?m que a cetamina piora os sintomas do PTSD e que, tal qual observado em humanos, nem todos os indiv?duos expostos a um estresse traum?tico desenvolvem os sintomas. Contudo, este modelo experimental de PTSD parece n?o estar relacionado com altera??es de longo-prazo nos n?veis de BDNF e metabolismo da glicose.

Made available in DSpace on 2015-04-14T14:51:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 442543.pdf: 1310049 bytes, checksum: b871097892a0a347db7e651a3cb4154d (MD5) Previous issue date: 2012-08-17 / Liver fibrosis is the wound healing response to repeated injury of the liver. It is characterized by disruption of the liver architecture associated with increased expression of extracellular matrix components. Hepatic stellate cells (HSCs) play a key role in the process of fibrogenesis. In normal liver, HSCs are quiescent and its main function is to store vitamin A. During liver injury, these cells undergo activation, become myofibroblasts and acquire fibrogenic properties. Capsaicin, the active ingredient of red pepper has been extensively studied in recent years for possessing a wide range of pharmacological properties, including analgesic, anti-inflammatory, antiproliferative and anticarcinogenic in a variety of cell types. Therefore, the aim of this study was to investigate the in vitro effects of capsaicin on deactivation, differentiation and proliferation of HSCs, besides studying the possible mechanisms involved. The results showed that capsaicin is capable of inducing the quiescent phenotype in HSCs via PPAR&#947; activation and blockage of TGF-&#946; signaling. Increased levels of antifibrotic cytokines (IFN-&#947; and IL-10) and the reduction of pro-inflammatory and pro-fibrotic mediators (COX-2, MCP-1, type I collagen) showed that capsaicin inhibits the activation and migration of these cells. Furthermore, the mechanism used by capsaicin to inhibit cell proliferation is via cell cycle arrest. These findings demonstrate that capsaicin has the potential to be a novel therapeutic agent in the treatment of liver fibrosis due to its antifibrogenic and antiproliferative actions. / A fibrose hep?tica ? a resposta cicatricial do f?gado a les?es repetidas, caracterizada pelo rompimento da arquitetura hep?tica associada ao aumento da express?o dos componentes da matriz extracelular. As c?lulas estreladas hep?ticas (HSCs) desempenham um papel-chave no processo de fibrog?nese. No f?gado normal, as HSCs encontram-se em sua forma quiescente de dep?sito de vitamina A. Durante a les?o hep?tica, essas c?lulas passam por uma ativa??o fenot?pica, tornam-se miofibroblastos e adquirem propriedades fibrog?nicas. A capsaicina, princ?pio ativo da pimenta vermelha, tem sido muito estudada nos ?ltimos anos por possuir uma extensa gama de propriedades farmacol?gicas, que incluem efeitos analg?sicos, anti-inflamat?rios, antiproliferativos e anticarcinog?nicos em uma variedade de tipos celulares. Por essa raz?o, o objetivo deste estudo foi investigar os efeitos in vitro da capsaicina na inativa??o, diferencia??o e prolifera??o das HSCs, al?m de estudar os poss?veis mecanismos envolvidos. Os resultados obtidos mostraram que a capsaicina ? capaz de induzir o fen?tipo quiescente nas HSCs via ativa??o de PPAR&#947; e bloqueio da sinaliza??o de TGF-&#946;. O aumento nos n?veis de citocinas antifibr?ticas (IFN-&#947; e IL-10) e a diminui??o de mediadores pr?inflamat?rios e pr?-fibr?ticos (COX-2, MCP-1, col?geno tipo I) comprovaram que a capsaicina inibe a ativa??o e migra??o dessas c?lulas. Al?m disso, o mecanismo utilizado pela capsaicina para inibir a prolifera??o celular ? via parada do ciclo celular. Essas descobertas mostram que a capsaicina tem potencial para ser um novo agente terap?utico no tratamento da fibrose hep?tica devido a suas a??es antifibrog?nicas e antiproliferativas.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-04-17T14:54:06Z No. of bitstreams: 1 467370 - Texto Completo.pdf: 6072599 bytes, checksum: 169f7ff123882c0b088732b04ad1956d (MD5) / Made available in DSpace on 2015-04-17T14:54:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 467370 - Texto Completo.pdf: 6072599 bytes, checksum: 169f7ff123882c0b088732b04ad1956d (MD5) Previous issue date: 2014-06-27 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Schistososmiasis is a chronic endemic infection caused by parasites of the genus Schistosoma, and it occurs in 74 countries in Africa, South America and Asia. The three main agents of this infection in humans are: Schistosoma mansoni and Schistosoma japonicum, that cause the hepatic-intestinal disease, and Schistosoma haematobium, responsible for the genitourinary infection. Despite the effective treatment like praziquantel, schistososmiasis remains as the second most prevalent parasitic disease in the world. Diagnosis of the intestinal schistososmiasis is achieved through the direct visualization of the eggs in fecal samples. The current method recommended by the World Health Organization in epidemiological studies is the Kato-Katz method. Despite it being simple and cheap, in areas of low endemicity this technique loose sensibility, leading to the occurrence of false-negative cases and underestimation of the prevalence in the studied area. Helmintex? is a coproparasitological method highly sensitive that allows the isolation of Schistosoma eggs from 30 grams of feces, based in the interaction between the eggs and paramagnetic microspheres in a magnetic field. However, this method demands time and specialized equipment, being of difficult manipulation in work field. The mechanism that promotes the interaction between the paramagnetic spheres with the Schistosoma eggs is not known. Considering the necessity of sensitive diagnostic tools of easy applicability in epidemiological studies in low endemicity areas, this work has the purpose to study the surface physical-chemical characteristics of S. mansoni and S. japonicum eggs, in order to enhance the efficiency of the Helmintex? method. S. mansoni and S. japonicum eggs were isolated from livers of experimentally infected mice. The eggs were submitted to morphological and structural analysis using Scanning and Transmission Electron Microscopy and elemental analysis using Energy Disperssion Spectroscopy. The magnetic susceptibility was determined using SQUID (Superconducting Quantum Interference Device) and the concentration of the chemical elements was determined through Atomic Emission Spectroscopy. Experiments to elucidate the interaction properties of the eggs of the eggs and the microspheres were conducted incubating the eggs from both species with different paramagnetic microspheres. The results show that the egg surface of both species is recovered by a dense layer of microspines, being those shorter and less spaced in S. mansoni. The eggs spontaneously bind the particles, with a greater preference for magnetic material. S. japonicum eggs have a higher affinity for paramagnetic microspheres than S. mansoni eggs. The presence of streptavidin in the surface of the microspheres enhances the affinity of both species for non-magnetic material, however it decreases the affinity for paramagnetic microspheres. Despite the presence of iron in the eggshell of S. mansoni and S. japonicum, the origin of the interaction does not seem to be magnetic, but, based in the difference of electrostatic charges present in the surface of the eggs and the microspheres. The continuity of this study is important to determine the physical-chemical characteristics of eggs from human feces, and it can lead to the upgrading and optimization of the Helmintex? method. Studies using Atomic Force Microscopy are in progress. / A esquistossomose ? uma infec??o cr?nica end?mica causada por parasitos do g?nero Schistosoma, e ocorre em pa?ses 74 pa?ses na ?frica, Am?rica do Sul e ?sia. Os tr?s principais agentes desta infec??o em humanos s?o: Schistosoma mansoni e Schistosoma japonicum, causadores da doen?a hepato-intestinal, e Schistosoma haematobium, respons?vel pela infec??o genitourin?ria. Apesar de haver tratamento efetivo como o praziquantel, a esquistossomose permanece como a segunda infec??o parasit?ria mais prevalente no mundo. O diagn?stico da esquistossomose intestinal ? feito atrav?s da direta visualiza??o dos ovos em amostras fecais. O m?todo atualmente recomendado pela Organiza??o Mundial de Sa?de em estudos epidemiol?gicos ? o m?todo de Kato-Katz. Apesar de simples e barato, em ?reas de baixa endemicidade esta t?cnica perde sensibilidade, levando ? ocorr?ncia de casos falso-negativos e subestima??o da preval?ncia da ?rea estudada. O Helmintex? ? um m?todo coproparasitol?gico altamente sens?vel que permite o isolamento de ovos de Schistosoma ? partir de 30 gramas de fezes, baseado na intera??o entre os ovos e esferas paramagn?ticas em um campo magn?tico. Entretanto, este m?todo demanda tempo e equipamentos especializados, sendo de dif?cil manipula??o em estudos de campo. O mecanismo que promove a intera??o das esferas paramagn?ticas com os ovos de Schistosoma n?o ? conhecido. Tendo em vista a necessidade de ferramentas diagn?sticas sens?veis e de f?cil aplicabilidade em estudos epidemiol?gicos em ?reas de baixa transmiss?o, este trabalho tem por objetivo estudar caracter?sticas f?sico-qu?micas da superf?cie dos ovos de S. mansoni e S. japonicum, afim de aprimorar a efici?ncia do m?todo Helmintex?. Ovos de S. mansoni e S. japonicum foram isolados de f?gados de camundongos experimentalmente infectados. Os ovos foram submetidos ? analise morfol?gica e estrutural utilizando Microscopia Eletr?nica de Varredura e Transmiss?o e an?lise elementar utilizando Espectroscopia por Dispers?o de Energia. A susceptibilidade magn?tica foi determinada utilizando-se o SQUID (Superconducting Quantum Interference Device) e a concentra??o dos elementos qu?micos foi determinada atrav?s de Espectroscopia por Emiss?o At?mica. Experimentos para elucidar as propriedades de intera??o dos ovos e das microesferas foram conduzidos incubando ovos de ambas as esp?cies com diferentes microesferas paramagn?ticas. Os resultados mostram que a superf?cie do ovo de ambas as esp?cies ? recoberta por uma camada densa de microespinhos, sendo estes mais curtos e menos espa?ados em S. mansoni. Os ovos espontaneamente ligam-se ?s part?culas, com maior prefer?ncia por material magn?tico. Os ovos de S. japonicum possuem maior afinidade pelas microsesferas paramagn?ticas do que os ovos de S. mansoni. A presen?a de estreptavidina na superf?cie das microesferas aumenta a afinidade de ambas as esp?cies por microesferas n?o-magn?ticas, por?m diminui a afinidade por microesferas paramagn?ticas. Apesar da presen?a de ferro na casca do ovo tanto de S. mansoni quanto de S. japonicum, a origem da intera??o n?o parece ser magn?tica, e sim, baseada na diferen?a de cargas eletrost?ticas presentes na superf?cie dos ovos e das microesferas. A continuidade deste estudo ? importante para determinar as caracter?sticas f?sico-qu?micas de ovos provenientes de fezes humanas, e pode levar ao aprimoramento e otimiza??o do m?todo Helmintex?. Estudos utilizando-se Microscopia de For?a At?mica encontram-se em andamento.

Submitted by Setor de Tratamento da Informa??o - BC/PUCRS (tede2@pucrs.br) on 2015-05-14T20:39:01Z No. of bitstreams: 1 468555 - Texto Completo.pdf: 8199104 bytes, checksum: 8319f77be38697b0864185d6a700fdf3 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-05-14T20:39:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 468555 - Texto Completo.pdf: 8199104 bytes, checksum: 8319f77be38697b0864185d6a700fdf3 (MD5) Previous issue date: 2015-03-10 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Cient?fico e Tecnol?gico - CNPq / Financiadora de Estudos e Projetos - Finep / Glioblastoma (grade IV) is among the most prevalent primary intracranial tumors and is considered a challenge in oncology and neurosurgery due to the highly aggressive nature, and the elevated mortality rates. The location of the tumor and its invasive nature avoid the standard-of-care therapy, which includes surgical resection followed by radiotherapy and chemotherapy. Nevertheless, the current gold standard treatment has not been effective to prevent tumor evolution, as indicated by the poor survival rates. In this context, we analyzed the GPCRs for kinin and the high-voltagegated calcium channels (VGCC) as feasible new therapeutic approaches in malignant gliomas. Thereby, the signaling triggered by bradykinin or the disruption of calcium signaling might contribute with pivotal mechanisms underlying glioma progression, such as cell proliferation. Therefore, the aim of this study was to further evaluate the relevance of B1 (B1R) and B2 (B2R) kinin receptors as well as the P/Q- and N-type VGCC in glioma development, by using in vitro and in vivo glioma model. Cell culture assay showed that the treatment with the selective B1R des-Arg9-BK (1-100 nM) and B2R BK (1-100 nM) agonists induced a marked enhancement of cell proliferation and viability through ERK1/2 and PI3K/Akt signaling, according to evaluation of U-138MG and U-251MG cell lines. Meanwhile, the incubation of either B1R SSR240612 (1-30 ?M) or B2R HOE-140 (1-100 ?M) antagonists induced a marked cell death with mixed apoptosis/necrosis characteristics. The in vivo mouse model of GL261-induced glioma of C57/BL6 or B1R and B2R knockout mice showed an uncontrolled tumor growing in KOB1R mice. Conversely, there was no significant change of the tumor development in KOB2R mice. Notably, the genetic ablation or the pharmacological combined antagonism of B1R and B2R (SSR240612; 25 nmol/site + HOE-140; 50 pmol/site) diminished the tumor progression as well as the mitotic index of the GL261-induced glioma. To understand the potential anti-tumor effects of the blockade of P/Q- and Ntype VGCC, we used animal-derived inhibitors namely PhTx3-3 (P/Q-type blocker) and Ph?1? (N-type blocker) from P. nigriventer, or MVIIC (P/Q-type blocker) and MVIIA (N-type blocker) from C. magus. The PhTx3-3 (0.3 - 100 pM), Ph?1? (0.3 - 100 pM) and MVIIA (0.3 - 100 pM) displayed a significant inhibitory effect on proliferation and viability of M059J, U-138MG and U-251MG glioma tested cell lines, and evoked cell death mainly with apoptosis characteristics. In the glioblastoma in vivo model, the Ntype VGCC blockade by either Ph?1? (50 pmol/site; i.c.v. and i.t.) or MVIIA (10pmol/site; i.c.v.) caused significant reductions of glioma growth and progression. Of note, the N-type inhibition by Ph?1? and MVIIA led to a marked increase of GFAPactivated astrocytes and Iba-1-positive microglia in the peritumoral area, which might be related to the inhibitory effects of immune system in tumor development. Using molecular and pharmacological approaches, our data provide clear evidence on the beneficial effects of the simultaneous inhibition of both B1R and B2R as well as the P/Q- and N-type blockade on glioma development. Thus, we propose that the combined selective antagonism of B1R and B2R, such as the P/Q-, and especially NP type high-VGCC inhibition could markedly modify the tumor progression, which might represent an attractive alternative for the treatment of malignant gliomas in the future. / O glioblastoma apresenta a maior incid?ncia entre todos os gliomas e se caracteriza como o mais agressivo e fatal (grau IV) dos tumores prim?rios do SNC. Atualmente o glioblastoma ? considerado uns dos grandes desafios da oncologia e da neurocirurgia, devido ao seu car?ter altamente agressivo. A sobrevida m?dia dos pacientes ? bastante baixa e o progn?stico ? desfavor?vel, j? que a grande maioria destes tumores apresenta um padr?o difuso e infiltrativo de crescimento, o que dificulta as abordagens atuais para a terapia tumoral. Neste estudo foram analisados os efeitos dos receptores da fam?lia dos GPCRs de cininas e dos canais de c?lcio voltagem dependentes (CCVD) como base para poss?veis alvos no tratamento dos gliomas malignos, a fim de caracterizar novas abordagens terap?uticas. O efeito da sinaliza??o desencadeada pela BK e da sinaliza??o Ca2+-dependente pode estar envolvida na regula??o do crescimento e progress?o dos gliomas e na migra??o das c?lulas tumorais. Neste sentido, este trabalho visou explorar o papel dos receptores B1 (B1R) e B2 (B2R) de cininas e da sinaliza??o de Ca2+ via CCVD tipo-P/Q e -N em modelo de glioma in vitro e in vivo. Ensaios em cultura celular utilizando as linhagens de glioma humano U-138MG e U-251MG demonstraram que a ativa??o dos B1R e B2R pelo uso dos agonistas desarg9-BK (1-100 nM) e BK (1-100 nM) aumentou a prolifera??o das linhagens celulares testadas, atrav?s da ativa??o das vias ERK1/2 e PI3K/Akt. Enquanto que a exposi??o aos antagonistas seletivos para estes receptores, SSR240612 (1-30 ?M) e HOE-140 (1-100 ?M), provocou intensa morte celular com caracter?sticas de necrose/apoptose. A parte in vivo compreendeu a t?cnica de implante das c?lulas GL261 de glioma (grau IV) em animais C57/BL6 e knockout para os B1R e B2R. A dele??o apenas do B1R provocou um importante crescimento tumoral nos animais knockout para este receptor, enquanto que os animais com dele??o de B2R n?o tiveram o desenvolvimento tumoral alterado. Notavelmente, tanto a dele??o g?nica como o antagonismo farmacol?gico combinado dos receptores B1 e B2 (SSR240612; 25 nmol/s?tio + HOE-140; 50 pmol/s?tio) diminuiu o crescimento tumoral e o ?ndice mit?tico dos gliomas implantados. Para compreender o envolvimento dos CCVD tipo-P/Q e -N na fisiopatologia dos gliomas foram utilizadas fra??es da toxina da aranha Phoneutria nigriventer (PhTx3-3 bloqueadora de canais do tipo-P/Q; Ph?1? bloqueadora de canais do tipo-N) e ?-conotoxinas provenientes do Conus magus (MVIIC bloqueadora de canais do tipo-P/Q; MVIIA bloqueadora de canais do tipo-N). Os experimentos in vitro evidenciaram que o bloqueio dos canais de Ca2+ tipo-P/Q e -N pelas toxinas PhTx3-3 (0.3 - 100 pM), Ph?1? (0.3 - 100 pM) e MVIIA (0.3 - 100 pM) inibiram a prolifera??o e a viabilidade das linhagens celulares M059J, U-138MG e U-251MG de glioma humano, com intensa caracter?stica de morte celular por apoptose. Os resultados utilizando o modelo de glioblastoma in vivo, demonstraram que ambas as toxinas bloqueadoras dos canais do tipo-N, Ph?1? (50 pmol/s?tio) e MVIIA (10 pmol/s?tio), foram efetivas em diminuir o crescimento e a progress?o tumoral nos animais tratados, com intensa ativa??o de astr?citos e micr?glia, destacando o poss?vel envolvimento do sistema imune na inibi??o do crescimento tumoral. Atrav?s do uso de ferramentas moleculares e farmacol?gicas, nossos resultados demonstraram o envolvimento importante tanto dos B1R e B2R de cininas, como dos CCVD tipo-P/Q e -N no desenvolvimento dos gliomas malignos. Desta maneira, podemos propor que o bloqueio farmacol?gico combinado de antagonistas seletivos para os receptores B1 e B2, assim como a inibi??o dos CCVD tipo-P/Q e -N surgem como potenciais alvos terap?uticos no manejo dos tumores cerebrais e podem representar alternativas promissoras no tratamento dos gliomas.