Orientador: João Ruggiero Neto / Banca: Marcelo Andres Fossey / Banca: Tereza Pereira de Souza / Resumo: Estudos de visualização de GUVs por microscopias de fluorescência e contraste de fase, realizados com três mastoparanos (MP-1, N-MP-1 e MPX), evidenciam que alguns destes peptídeos induzem a formação de regiões densas na superfície das GUVS que foram atribuídas a agregacão ou segregação lipídica. Evidências experimentais anteriores mostraram que estes peptídeos apresentam atividade interfacial e suas cargas líquidas +2, +3 e +4 conferem atividade lítica preferencial em vesículas aniônicas, bem como atividade antimicrobiana contra bactérias Gram negativas e Gram positivas. A formação de domínios poderia ser um mecanismo lítico alternativo para a atividade interfacial. Segregação lipídica induzida por estes peptídeos foi então avaliada por calorimetria diferencial de varredura (DSC), observando-se o impacto destes peptídeos nas propriedades termotrópicas de misturas de lipídios que são miméticas de bactérias Gram negativas. As misturas binárias utilizadas foram POPE:DOPG (3:1) e DPPE:DPPG (4:1 e 1:4). A transição de fase gel-líquida cristalina da mistura POPE:DOPG em 20mM PIPES (140mM NaCl + 1mM EDTA, pH=7,4) foi centrada em 14 oC com um "ombro"em, apro-ximadamente, 16 oC indicando miscibilidade incompleta destes lipídios. Na razão molar de lipídio por peptídeo (L/P)=400, os três peptídeos estudados induziram aumento na temperatura de fusão (Tm) de suspensão de vesículas multilamelares. Destes peptídeos MP-1, com carga +2, mostrou a maior variação de Tm. As mudanças em Tm foram observadas ser dependente da relação L/P, sendo maior deslocamento de Tm em L/P=15. O aumento da temperatura de transição de fase indica interação preferencial destes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: GUVs visualization studies by fluorescence and phase contrast microscopies, carried out with three mastoparan peptides (MP-1, N-MP-1 and MPX) provided evidences that some of these peptides induce dense regions in the GUV's surfaces that were attributed to aggregation or lipid segregation. Previous experimental evidences showed that these peptides display inter-facial activity and their net charges +2, +3 and +4 confer preferential lytic activity in anionic vesicles as well as antimicrobial activity against Gram negative and Gram positive bacteria. The domain formation could be an alternative lytic mechanism for the interfacial activity. Lipid segregation induced by these peptides was then evaluated by differential scanning calorime-try (DSC), by observing the impact of these peptides on the thermotropic properties of lipid mixtures which are mimetics of the Gram negative bacteria. The binary mixtures used were POPE:DOPG (3:1) and DPPE:DPPG (4:1 and 1:4). The gel to liquid crystalline phase transi-tion of the mixture POPE:DOPG in 20 mM PIPES (140 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH7.4) was centered in 14 oC with a shoulder in approximately 16 oC indicating incomplete miscibility. At lipid to peptide molar ratio (L/P)=400 the three peptides studied induced increase of the melting temperature Tm of multilamelar vesicle suspensions. From these peptides MP-1, with charge +2, showed the largest variation of Tm. The changes in Tm were observed to be dependent on the L/P ratio, displacing to larger temperature for L/P =15 ratio. The increase in the of the phase transition temperature indicate preferential interaction of these peptides with the anionic com-ponent of the mixture leading to the formation of domains enriched with the other component (POPE) which, in pure state, has the largest Tm. Other three peptides... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000418143-Texto+Completo-0.pdf: 285814 bytes, checksum: 88313ad8173e10bd8abedb6c2a800e24 (MD5) Previous issue date: 2009 / Bloodstains are one of the major physical evidence to elucidate a crime. Diluted blood invisible to the naked eye can be detected using special reagents called presumptive tests. The effects of presumptive tests with luminol, Luminol 16®, Bluestar® Forensic and benzidine on the inhibition of human antiglobulin test, human hemoglobin immunochromatographic test and genotyping were evaluated in this study. All bloodstains were prepared by apllication of 2 μL drop of venous blood to squares of white cloth (100% cotton) and allowed to dry for 48 hours. Samples were then submitted to presumptive tests and dried for 48 hours before the inhibition of human antiglobulin and human hemoglobin immunochromatographic tests were evaluated. DNA was extractec by the organic method and quantified by Quantifiler® Human DNA Quantification (Applied Biosystems) at 48 hours, 7 days, 30 days or 120 days after reagents application. Samples treated with both luminol solutions or Bluestar® Forensic gave positive results at immunologic tests, indicating noninterference with human blood confirmatiry tests. Twenty samples treated with benzidine were negative for the inhibition of human antiglobulin test. Of the 20 bloodstains submitted to immunochromatographic test, 18 resulted negative, evidencing a deletery effect of benzidine over human blood confimatory tests. Real time PCR showed that 48 hours after benzidine solution application, DNA of samples was degraded. After 120 days of treatment, all treated samples had degraded DNA compared to the untreated material, to different extents. / Manchas de sangue são vestígios de grande importância para a elucidação de um crime. Sangue diluído, invisível a olho nu, ou em superfícies escuras, pode ser detectado utilizando reagentes especiais, através dos chamados "testes presuntivos". Os efeitos dos testes preliminares para sangue utilizando luminol, Luminol 16®, Bluestar® Forensic e benzidina sobre os métodos de inibição da antiglobulina humana, imunocromatográfico para hemoglobina humana e sobre o exame de DNA foram avaliados nesse trabalho. As manchas de sangue foram produzidas através da aplicação de 2 μL de sangue venoso em fragmentos de tecido branco (100% algodão). As amostras foram submetidas aos exames presuntivos e deixadas para secar por 48 horas antes da realização dos testes de inibição da antiglobulina humana e imunocromatográfico para hemoglobina humana. O DNA foi extraído pelo método orgânico e quantificado com Quantifiler® Human DNA Quantification (Applied Biosystems) em 48 horas, 7 dias, 30 dias ou 120 dias após a aplicação dos reagentes. As amostras tratadas com ambas as preparações de luminol ou com Bluestar® Forensic obtiveram resultado positivo nos exames imunológicos, mostrando que não influenciam nos testes confirmatórios para sangue humano. As 20 amostras tratadas com benzidina tiveram resultado negativo no teste de inibição da antiglobulina humana. Das 20 amostras submetidas ao teste imunocromatográfico, 18 obtiveram resultado negativo, evidenciando o efeito deletério da benzidina sobre os testes confirmatórios para sangue humano. Através de PCR em tempo real foi possível observar que, 48 horas após contato com a solução de benzidina, as amostras tiveram o DNA degradado. Todos os reagentes testados causaram degradação do DNA, em diferentes extensões, após 120 dias de sua aplicação.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000410668-Texto+Completo-0.pdf: 610134 bytes, checksum: 96d58c78aa5915846ec6c97a8caffdcb (MD5) Previous issue date: 2009 / The Tuberculosis (TB) is considered a threat to global public health; according to the World Health Organization, nearly two million people die annually due to this disease. One of the most importat features of this pathogen is its ability to persist in host tissues for a long period in a state of latency, also known as persistence. The importance of the state of latency to the bacillus survival has been an attractive factor towards the development of works to characterize in greater detail this phase of infection by M. tuberculosis. An understanding of the mode of action and the role of pyrimidine salvage pathway enzymes in M. tuberculosis could reveal new targets for the rational design of potent and selective anti-TB agents capable of, hopefully, preventing progression and reactivation of the disease. Cytidine deaminase (CDA; EC 3. 5. 4. 5), an evolutionarily conserved enzyme of the pyrimidine salvage pathway, catalyzes the hydrolytic deamination of cytidine and 2’-deoxycytidine to form uridine and 2’-deoxyuridine, respectively. The probable CDA gene (cdd, Rv3315c) from M. tuberculosis H37Rv was cloned, sequenced, and expressed in Escherichia coli BL21(DE3) cells. The purification protocol of recombinant M. tuberculosis CDA (MtCDA) yielded 35 mg of homogeneous protein from 10 g of cells. Mass spectrometry, N-terminal amino acid sequencing, and gel filtration chromatography confirmed the predicted molecular mass, identity, and oligomeric state of MtCDA, which was estimated to be 52. 99 kDa. These results and the ones for multiple sequence alignment suggest that MtCDA is a homotetramer in solution. Steady-state kinetic measurements yielded the following parameters: KM and kcat values of, respectively, 1004 μM and 4. 8 s-1 for cytidine, and 1059 μM and 3. 5 s-1 for 2'-deoxycytidine. The pH dependence of kcat and kcat/KM for cytidine indicates that the protonation of a single ionizable group with pKa value of 4. 3 abolishes activity, and protonation of a group with pKa value of 4. 7 reduces substrate binding. Crystals of CDA were obtained using the hanging-drop vapour-diffusion method. The demonstration that the Rv3315c locus encodes a protein having CDA activity in M. tuberculosis is the first step to understand the role of this gene product and should help the design of anti-TB agents and vaccines. / A tuberculose (TB) é considerada uma ameaça à saúde pública mundial; segundo a Organização Mundial da Saúde, cerca de dois milhões de pessoas morrem anualmente em conseqüência desta doença. Uma das características mais importantes do patógeno causador da TB é a sua capacidade de persistir nos tecidos do hospedeiro por um longo período em um estado de latência, também conhecido como persistência. A importância do estado de latência à sobrevivência do bacilo tem sido um atrativo fator para o desenvolvimento de trabalhos que caracterizem com maior profundidade esta fase da infecção por M. tuberculosis. O entendimento do modo de ação e o papel das enzimas da rota de salvamento de pirimidinas em M. tuberculosis poderia revelar novos alvos para o desenho racional de agentes anti-TB potentes e seletivos capazes de, se possível, prevenir a progressão e a reativação da doença. A citidina deaminase (CDA, EC 3. 5. 4. 5), uma enzima evolutivamente conservada da rota de salvamento das pirimidinas, catalisa a deaminacao hidrolítica de citidina e 2’-desoxicitidina para formar uridina e 2’-desoxiuridina, respectivamente. O provável gene da CDA (cdd, Rv3315c) de M. tuberculosis foi clonado, seqüenciado e expresso em células de Escherichia coli BL21(DE3). O protocolo de purificação da CDA recombinante de M. tuberculosis (MtCDA) produziu 35 mg de proteína homogênea a partir de 10 g de células. A análise de espectrometria de massas, seqüenciamento N-terminal e cromatografia por gel filtração confirmaram a massa molecular prevista, a identidade e o estado oligomérico de MtCDA, que foi estimada em 52,99 kDA. Estes resultados e os de alinhamento múltiplo de seqüências sugere que MtCDA é um homotetrâmero em solução. Medidas de cinética em estado estacionário da CDA geraram os seguintes parâmetros: valores de KM e kcat de, respectivamente, 1004 μM e 4,8 s-1 para citidina, e 1059 μM e 3,5 s-1 para 2'- desoxicitidina. A dependência dos valores de kcat e kcat/KM em função do pH para citidina indicam que a protonação de um único grupo ionizável com valor de pKa de 4,3 elimina a atividade, e a protonação de um grupo com pKa de 4,7 reduz a ligação ao substrato. Foram obtidos cristais de CDA utilizando o método de difusão de vapor em gota pendente. A demonstração de que o locus Rv3315c codifica uma proteína com atividade CDA em M. tuberculosis é o primeiro passo para entender o papel do produto deste gene e deverá ajudar no desenho de agentes anti-TB e vacinas.

Made available in DSpace on 2013-08-07T18:41:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 000399966-Texto+Completo-0.pdf: 2182806 bytes, checksum: b7ae0dc782e83e28c95813d364f5ef3b (MD5) Previous issue date: 2008 / The granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) is a hematopoietic cytokine that acts on cells of the neutrophil lineage causing proliferation and differentiation of committed precursor and activation of mature neutrophils. The hG-CSF is an 18. 8 kDa protein consisting of 174 amino acid polypeptide chain with two intra-molecular disulphide bonds and one free cysteine at residue 17. This biopharmaceutical has been widely used with success in oncology patients who receive high-dose chemotherapy. It is also used as treatment and prophylactically to improve the immune system in patients with HIV, pneumonia, diabetic foot infections, leukemia and febrile neutropenia. Based on this large clinical application, the recombinant hG-CSF has been produced in genetically engineered Escherichia coli and was approved for use in chemotherapyinduced neutropenia by the U. S Food and Drug Administration in 1991. Filgrastim (generic name of G-CSF) lost its patent protection in 2006 becoming a target of Brazilian pharmaceutical industries. Currently, Brazil is totally dependent of the importation of this biopharmaceutical. Therefore, the aim of this work is to develop a methodology for subsequent production of a national Filgrastim. In this work the granulocyte colonystimulating factor gene was assembled by PCR, Its amplicon was cloned into pET23a(+) expression vector using NdeI and BamHI, restriction enzymes. The overexpression was tested in different strains of E. coli cells and the best condition for expression of the protein was in the BL21(DE3) strain. In order to solubilize the inclusion bodies and purify the protein, many protocols have been tested. Finally, it was described an efficient protocol of isolation of inclusion bodies through a multi-step washing procedure and purification method of the recombinant protein from inclusion bodies using only a cationic exchange column. The immunoassay and N-terminal sequencing confirmed the identity of rhG-CSF. Characterization of homogeneous rhG-CSF using SEC-HPLC and RP-HPLC has shown similarity to the international standard. The biological activity assay, in vivo, has shown an equivalent biological effect to those obtained with the standard reference rhG-CSF. The protein rhG-CSF was produced through simple, cost effective and economically feasible process of rhG-CSF, which has extreme importance to the industrial process and healthcare community. / O fator estimulador de colônias de granulócitos (G-CSF) é uma citocina hematopoiética que age sobre a linhagem de neutrófilos promovendo proliferação e diferenciação de seus precursores e ativação dos neutrófilos maduros. O G-CSF é uma proteína com 18,8 kDa, constituída por 174 aminoácidos possuindo duas pontes dissulfeto intra-moleculares e uma cisteína livre no resíduo 17. Este biofármaco tem sido empregado com sucesso em pacientes com câncer que recebem altas doses de quimioterapia. Além disso, também tem sido usado como tratamento ou profilaticamente a fim de reforçar o sistema imune em pacientes com HIV, pneumonia, pacientes diabéticos com infecções nos pés, leucemia e neutropenia febril. Em função desta ampla aplicação clínica, hG-CSF recombinante tem sido produzido por engenharia genética em Escherichia coli e foi aprovado para uso em neutropenia provocada por quimioterapia pelo FDA em 1991. Filgrastima (nome genérico do G-CSF) teve sua patente expirada em 2006, tornando-se alvo das indústrias farmacêuticas. Atualmente, o Brasil é totalmente dependente da importação deste biofármaco. Logo, o objetivo deste estudo é desenvolver uma metodologia para a posterior produção de uma Filgrastima nacional. Neste trabalho, o gene para hG-CSF foi construído por PCR, clonado no vetor de expressão pET23a(+), usando as enzimas de restrição NdeI e BamHI. Os testes de superexpressão foram realizados em diferentes cepas de E. coli, mostrando a melhor condição de expressão na fração insolúvel na cepa BL21(DE3). Na tentativa de solubilizar os corpos de inclusão e purificar a proteína, inúmeros protocolos foram testados. Por fim, foi descrito um eficiente protocolo de isolamento e solubilização dos corpos de inclusão por um processo de múltiplos passos de lavagem e um método de purificação usando somente uma coluna cromatográfica de troca catiônica. A identidade da proteína foi confirmada por seqüenciamento N-terminal e Western blotting. A caracterização do rhG-CSF homogêneo, através de SEC-HPLC e RP-HPLC, mostrou resultados similares aos do padrão internacional. O teste de atividade biológica, in vivo, demonstrou que o rhG-CSF produzido tem potencial equivalente ao padrão internacional utilizado. A proteína foi produzida por um processo simples e econômico, sendo de extrema importância em um processo industrial, podendo trazer benefícios para a saúde da população.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-29Bitstream added on 2014-06-13T20:20:21Z : No. of bitstreams: 1 silva_lfi_me_botfm.pdf: 366320 bytes, checksum: b20723bbb3bc87f0ad3fe980c63f1375 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Poucos estudos avaliando o efeito da idade paterna nos resultados de RA tem sido descritos na literatura. A idade avançada do homem parece influenciar na função reprodutiva masculina em menor grau quando comparada com a idade da mulher, pelo simples fato da ocorrência de nascimentos de crianças de pais com idade entre 70 e 94 anos. O efeito da idade paterna na qualidade do sêmen tem sido discutido na literatura porém os resultados são contraditórios. Frente a tais contradições, este artigo de revisão tem como objetivo descrever e discutir os dados da literatura no que diz respeito a influência da idade paterna nos parâmetros seminais (volume, concentração, motilidade e morfologia) , nos danos do DNA espermático , nos resultados de rerpodução assistida (fertilização, desenvolvimento embrionário, implantação, gravidez, aborto e nascimentos) e em doenças genéticas / Few studies evaluating the effect of paternal age on the results of ART has been described in the literature. Advanced paternal age seems to influence the male reproductive function to a lesser degree than the female’s, as evidenced by the fact that babies have been fathered by aged 70 to 94 years. The effect of paternal age on semen quality has been discussed in the literature but the results are not consistent. Front these contradictions this review article aims to describe and discuss the literature data on the influence of paternal age on the semen parameters (volume, concentration, motility and morphology), sperm DNA damage, outcomes of ART (fertilization, embryo development, implantation, pregnancy, abortion and birth) and genetic disease

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:14Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-03-14Bitstream added on 2014-06-13T20:39:57Z : No. of bitstreams: 1 ortiz_rj_me_botib.pdf: 1189542 bytes, checksum: 04857e6dfde7c2b12ebae4a0e55e4065 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / A ordem Siluriformes compreende um imenso e diversificado grupo de peixes, distribuído nas regiões tropicais de todo o mundo. Apesar de bastante estudadas, as hipóteses de relacionamento entre as famílias nessa ordem ainda são contraditórias, inclusive aquelas que dizem respeito aos Doradidae. Os Doradidae compreendem uma famíla de bagres de água doce, endêmica da América do Sul, facilmente reconhecíveis pela presença de uma fileira de placas ósseas em ambos os lados do corpo e podem ser separados em dois grupos segundo a presença de barbilhão maxilar simples ou ramificado. Compõem um grupo reconhecidamente monofilético, cujas relações intra-genéricas são ainda pouco definidas. Os Doradidae apresentam um complexo produtor de som compartilhado com algumas outras famílias de Siluriformes com as quais guardam diferentes níveis de relações de parentesco. O estudo das relações de parentesco entre as diferentes famílias de Siluriformes, e também entre os diferentes gêneros e espécies de uma mesma família, em geral têm por base características osteológicas e de partes moles, além de dados moleculares. Sabe-se que as características sexuais das espécies e conseqüentemente o tipo de espermatogênese e de espermiogênese, e a morfologia dos espermatozóides podem conter traços filogenéticos e serem úteis nas análises cladísticas. Portanto, nesse estudo, descreveu-se a espermatogênese, a espermiogênese e os caracteres ultraestruturais dos espermatozóides, de representantes da família Doradidae. Descreveu-se também a espermatogênese, a espermiogênese e os caracteres ultraestruturais dos espermatozóides de representantes de Auchenipteridae e Ariidae. Os dados obtidos foram testados em análises comparativas segundo as hipóteses vigentes sobre as relações de parentesco: entre os representantes dos Doradidae; entre os Doradidae e os Auchenipteridae... / The order Siluriformes comprises a large and diversify group of fishes, distributed throughout the Tropical regions of the world. Despite the many studies available, the hypotheses about the relationship among the families of Siluriformes are still controversial. The same occurs within the family Doradidae. Doradidae is a monophyletic family of freshwater catfishes endemic of the South America in which the inter-generic relationships are still not well definite. Doradidae are easily externally recognizable by having a single row of bony plates along the sides of the body, and they are often separated in two groups, one with simple and the other with fimbriate maxillary barbels. Doradidae have a sound apparatus shared with some other families of Siluriformes with different levels of relationship. The study of the relationship among the different families of Siluriformes and also among the different genera and species, in general, have based on bony and/or soft characteristics of the body, beside molecular data. It is known that the sexual characteristics of the species, and consequently the type of spermatogenesis and spermiogenesis, and also the sperm morphology, can have phylogenetic traces and can be useful in the cladistic analysis. In the present study were described the spermatogenesis and the spermiogenesis, and also the ultrastructural characteristics of the spermatozoa of representatives of the family Doradidae. The spermatogenesis and the spermiogenesis, and the ultrastructural characteristics of the spermatozoa of representatives of the families Auchenipteridae and Ariidae were also described. The data obtained were utilized in comparative analysis based on the actual hypothesis about relationship: within the representatives of the Doradidae; among the representatives of the Doradidae and the Auchenipteridae, its supposed sister-group; between the Doradoidea... (Complete abstract click electronic access below)

A pesquisa apresentada é caracterizada como um estudo de caso, baseada numa investigação empírica que estuda um fenômeno contemporâneo, da sociedade e em especial no ambiente escolar. Foi elaborada uma disciplina para alunos do Ensino Médio de uma escola pública federal, com formato alternativo ao modelo baseado apenas na sala de aula, de caráter eletivo mas como uma disciplina regular. Os dados foram coletados ao longo de 4 semestre nos anos de 2012 e 2013 As atividades foram propostas e aplicadas buscando-se aprimorar o ensino e a aprendizagem de Ciências. A Análise Textual foi a metodologia empregada para interpretação de parte dos dados coletados nesse trabalho. O referencial teórico utilizado pelos pesquisadores para analisar o discurso presente nas informações coletadas é a Educação pela Pesquisa (Demo, Galiazzi, Ramos, Moraes). Essa é a “teoria a priori” que fundamenta a análise na tese, constituindo assim uma Análise Textual Discursiva que assume pressupostos da Análise do Discurso. Assim, a pesquisa objetivou-se na proposição de um método de trabalho onde a observação de aves seja utilizada como instrumento didático para proporcionar o aprendizado dos conceitos e conteúdos de Biologia preconizados nos Parâmetros Curriculares Nacionais (PCNs), suscitando e valorizando a argumentação, a pesquisa e a interdisciplinaridade. A partir da aplicação dessa proposta de trabalho foi feita a análise e avaliação da atividade desenvolvida questionando a sua validade para o processo de ensino e aprendizagem em Biologia. Os resultados são apresentados na forma de artigos e análise qualitativas. Os instrumentos de coleta de informações foram questionários, atividades descritivas e mapas conceituais. Dessa forma, a pesquisa buscou promover reflexões e discussões acerca da elaboração e aplicação de uma metodologia de trabalho para contribuir para a melhoria dos processos de ensino e aprendizagem de Biologia na educação básica. Em função dos resultados e análises desenvolvidos é possível afirmar que houve melhora nos processos de ensino e aprendizagem. / The present research is characterized as a case study, based on an empirical investigation that studies a contemporary phenomenon of society and especially in the school environment. A discipline was developed for high school students of a federal public school, with an alternative format to the classroom, with elective choice but as a regular discipline. The data were collected during 4 semester in the years of 2012 and 2013. The activities were proposed and applied in order to improve the teaching and learning of Sciences. The Textual Analysis was the methodology used to interpret part of the data collected in this work. The theoretical framework used by the researchers to analyze the discourse present in the information collected is the Education through Research (Demo, Galiazzi, Ramos, Moraes). This is the "priori theory" that underlies the analysis in the thesis, thus constituting a Discursive Textual Analysis that assumes the presuppositions of Discourse´s Analysis . Thus, the research was aimed at proposing a work method in which bird observation is used as a teaching tool to provide the learning of the concepts and contents of Biology recommended by National Curricular Parameters (NCPs), raising and valuing the argumentation, the research and interdisciplinarity. From the application of this work proposal was made the analysis and evaluation of the activity developed questioning its validity for the teaching and learning process in Biology. The results are presented in the form of articles and qualitative analysis. The instruments of information collection were questionnaires, descriptive activities and conceptual maps. Thus, the research sought to promote reflections and discussions about the elaboration and application of a work methodology to contribute to the improvement of the teaching and learning processes of Biology in basic education. Due to the results and analyzes developed it is possible to affirm that there was an improvement in the teaching and learning processes.

Realização de dois Estudos de Caso que focal izam programações curriculares dos cursos da área biológica desenvolvidos, respectivamente, na Universidade Federal do Rio GTande do Sul e na Université Pierre et Marie Curie (Paris VJ). Os estudos abrangem uma dimensão epistemológica e histórica e incluem procedimentos da educação comparada . Através deles, buscou-se identificar as metateorias da Ciência e do Currículo que embasam estas programações, as abordagens que fw1damentam a proposição do conhecimento biológico por elas veiculado e a natureza dos condicionantes que nelas prevalecem. O enfoque metodológico fundamenta-se nas abordagens hennenêutico-dialéticas que objetivam a compreensão dos fenômenos e consideram a possibilidade de alterá-los em ftmção do descortinamento dos interesses dominantes. A Análise de Conteúdo foi o procedimento utilizado para examinar os i11úmeros documentos consultados e as entrevistas realizadas . Tendo em vista que a análise foi realizada tomando por base as programações oficiais, foi importante desenvolver o estudo de " rapports", leis, oficios, atas, programas de exames, resoluções e jomais de circulação intema nas Universidades, para confrontar seu conteúdo com o das programações examinadas. Tal procedimento auxiliou a contextualização das situações e pennitiu o desvelamento das concepções "ocultas" nas programações. Quanto às concepções de Ciência e de Currículo prevalentes nas programações constatou-se a influência do Empirismo-Lógico na situação brasilei ra e do pensamento Hennenêutico-Dialético na situação francesa . O Estudo também mostrou que o desenvolvimento de investigações sobre a natureza do conhecimento biológico têm importância para ftuÍdamentar a reorganização de programações curriculares universitárias, por permitir a reinterpretação dos conteúdos tradicionais e a descoberta de relações conceituais que incluam "outros" conceitos e temáticas relevantes para a compreensão da Biologia Contemporânea. Revelou também a "força" que condicionantes de natureza externa exercem sobre as programações curriculares e a sua importância, notadamente, nos contextos que objetivam a mudança. / Two case studies were performed regarding curricular programs of biology courses taught at Federal University of Rio Grande do Sul and at Université Pierre et Marie Curie (Pa ris VI), respectively. The studies cover an epistemological and historical dimension, and incluse procedures of comparative education . l11ese were used to help identify the metatheories os Science and Curriculum which provide the fow1dation for the proposition of biological knowledge imparted by them, and the nature of prevailing conditions. l11e methodological focus is based on hermeneutic-dialectical approaches whose goal is the understanding of phenomena and consider the possibility of changing them as dominant interests are unveiled. The Analysis of Contents was the procedure used to examine the many documents consulted and the interviews performed. Considering that the analysis was made based on the offícial programs, it proved important to develop the study of reports, laws, offícial letters, minutes, exam programs, official opinions and university house organs, to compare their contents to those of programs which were looked at. This procedure helped contextualize the situations and allowed the unveiling of "hidden" concepts in the programs As to the concepts ·of Science and Curriculum prevailing in the programs, the influence of Logicai-Empiricism was found in the Brazilian situations, and of Hermeneutic-Dialectical thinking in the French situation. l11e study also showed that research on the nature of biological knowledge is important as a foundation for the reorganzation of university curricular programs, since it allows the reinterpretation of the traditional contents and the discovery of conceptual relations which include "other" concepts and themes relevant to the understanding of Contemporary Biology. It also revealed the "strength" of externai conditioning factors in detem1ining curricular programs, and, their importance, especially in the contexts which arre the to be changed .

Introdução: O diabetes mellitus tipo 1 (DM1) é uma doença autoimune crônica e progressiva caracterizada por descompensações metabólicas frequentemente acompanhadas por desidratação e cetoacidose. Os agentes virais parecem ter um papel importante no desencadeamento da destruição autoimune que leva ao desenvolvimento do DM1. Entre as cepas virais estudadas, a família dos enterovírus foi associada ao surgimento da doença em humanos. Um dos mediadores do dano viral é o RNA fita dupla (RNAfd) gerado durante a replicação e transcrição do RNA e DNA viral. O gene TLR3 codifica um receptor endoplasmático pertencente à família dos Pattern- Recognition Receptors (PRR), o qual reconhece o RNAfd, tendo um importante papel na resposta imune inata desencadeada por infecção viral. A ligação do RNAfd ao TLR3 desencadeia a liberação de citocinas proinflamatórias, como interferons, as quais exibem uma potente ação anti-viral; assim, protegendo as células não infectadas e induzindo apoptose naquelas já contaminadas. Dessa forma, esse estudo teve como objetivo investigar a associação entre polimorfismos no gene TLR3 e o DM1. Métodos: As frequências dos polimorfismos rs5743313, rs11721827, rs3775291, rs13126816 e rs7668666 no gene TLR3 foram analisadas em 476 pacientes com DM1 e em 507 indivíduos não-diabéticos saudáveis. Os haplótipos construídos a partir da combinação dos cinco polimorfismos estudados e suas frequências foram inferidos utilizando o programa Phase 2.1, o qual implementa o método estatístico bayesiano. Resultados: Todos os genótipos estão de acordo com o esperado pelo Equilíbrio de Hardy-Weinberg. Os polimorfismos rs3775291 e rs13126816 foram associados com risco para DM1 em diferentes modelos de herança, com a associação mais forte sendo observada para o modelo aditivo [OR= 2,3 (IC 95% 1,3-4,1) e OR= 2,1 (IC 95% I 1,4-3,2); respectivamente]. Os demais polimorfismos estudados não foram associados ao DM1. Interessantemente, a frequência de DM1 aumentou quanto maior o número de alelos mutados dos cinco polimorfismos estudados presente nos haplótipos (p-trend= 0,002). Além disso, em pacientes com DM1, os alelos mais raros dos polimorfismos rs5743313 e rs11721827 foram associados com menor idade de diagnóstico do DM1 e a um pior controle glicêmico. Conclusão: Os polimorfismos rs3775291 e rs13126816 no gene TLR3 estão associados com risco para o DM1 em indivíduos do Sul do Brasil, enquanto os polimorfismos rs5743313 e rs11721827 estão associados com idade de diagnóstico precoce e a um pior controle glicêmico. O número de alelos de risco nos haplótipos formados pelos cinco polimorfismos estudados no gene TLR3 parece influenciar o risco para DM1, sugerindo que esses polimorfismos interagem na suscetibilidade para a doença. / Introduction: Type 1 diabetes mellitus (T1DM) is a chronic, progressive autoimmune disease characterized by metabolic decompensation often leading to dehydration and ketoacidosis. Viral agents seem to have an important role in triggering the autoimmune destruction that leads to the development of T1DM. Among several viral strains investigate so far, the enterovirus family has been consistently associated with the onset of T1DM in humans. One of the mediators of viral damage is the double-stranded RNA (dsRNA) generated during replication and transcription of viral RNA and DNA. The Toll-like receptor 3 (TLR3) gene codes for an endoplasmic receptor of the patternrecognition receptors (PRRs) family that recognizes dsRNA, playing an important role in the innate immune response triggered by viral infection. Binding of dsRNA to the TLR3 triggers the release of proinflammatory cytokines, such as interferons, which exhibit potent antiviral action; thus, protecting uninfected cells and inducing apoptosis of infected ones. Therefore, this study aimed to investigate whether TLR3 polymorphisms were associated with T1DM. Methods: Frequencies of the TLR3 rs5743313, rs11721827, rs3775291, rs13126816 and rs7668666 polymorphisms were analyzed in 476 T1DM patients and in 507 healthy subjects. Haplotypes constructed from the combination of these polymorphisms were inferred using Bayesian statistical method. Results: All genotypes are in agreement with those predicted by the Hardy-Weinberg equilibrium. The rs3775291 and rs13126816 polymorphisms were associated with T1DM in different inheritance models, with the strongest association being observed for the additive model [OR= 2.3 (95% CI 1.3-4.1) and OR= 2.1 (95% CI 1.4-3.2); respectively]. The other three polymorphisms were not significantly associated with T1DM. Interestingly, the prevalence of T1DM was higher as more risk alleles of the five polymorphisms were present (P trend = 0.002). Moreover, in T1DM patients, the minor alleles of the rs5743313 and rs117221827 polymorphisms were associated with an early age at diagnosis and worse glycemic control. Conclusion: The TLR3 rs3775291 and rs13126816 polymorphisms are associated with risk for T1DM in Southern Brazilian subjects, while the rs5743313 and rs11721827 polymorphisms are associated with age at T1DM diagnosis and worst glycemic control. The number of risk alleles of the five TLR3 polymorphisms in the haplotypes seems to influence the risk for T1DM, suggesting that these polymorphisms might interact in the susceptibility for the disease.

As mucopolissacaridoses (MPS) constituem um grupo de doenças lisossômicas caracterizadas pela deficiência de uma das enzimas responsáveis pela degradação das glicosaminoglicanos. A expressão neurológica da doença varia de acordo com cada deficiência enzimática, mas o retardo mental é característico da MPS III e de formas graves das MPS I, II e VII. Vários estudos com ressonância magnética (RM) demonstraram que atrofia cerebral, lesões na substância branca (SB) e hidrocefalia são freqüentemente observados em pacientes com MPS. Entretanto a correlação entre a RM, anormalidades bioquímicas e gravidade do quadro neurológico ainda não foi descrita na literatura. Além disso, a comparação dos achados de espectroscopia de prótons por RM (ERM) com a RM convencional é desconhecida. O objetivo deste trabalho foi analisar a aplicação da RM e da ERM na investigação de pacientes com MPS. Sessenta crianças com MPS tipos I, II, IV e VI foram avaliadas com RM e ERM. Os resultados foram comparados com tempo de doença, anormalidades bioquímicas e disfunção cognitiva. Os exames de RM foram realizados em equipamento de alto campo magnético (1.5 T). Pacientes com maior tempo de doença tiveram mais lesões na SB. A atrofia cerebral e o grau de dilatação ventricular não foram afetados pelo tempo de doença ou idade dos pacientes. Pacientes com MPS II e disfunção cognitiva apresentaram maior atrofia cerebral, hidrocefalia, lesões mais severas na substância branca e aumento da relação mioinositol/creatina na ERM. Estas informações podem ser úteis para o melhor entendimento da fisiopatogenia das MPS e do papel da RM na sua investigação. / The mucopolysaccharidosis are a group of lysosomal diseases characterized by enzymatic deficiency which leads incomplete degradation of glycosaminoglycans. Neurological expression varies according to each enzyme but mental compromise is characteristic of MPS III and the severe forms of MPS I, II and VII. Studies with magnetic resonance imaging (MRI) demonstrated that brain atrophy, white matter (WM) lesions and hydrocephalus are common in MPS patients. However, correlation among MRI, biochemical changes and severity of neurological deficit was not published so far. In addition, comparison between MR spectroscopy (MRS) and MRI is controversial. The purpose of this study was to analyze MRI and MRS findings in MPS patients. Sixty patients with MPS types I, II, IV and VI were evaluated with MRI and MRS. Results were compared with disease duration, biochemical changes and cognitive impairment. MRI exams were performed in high field MRI scanner (1.5 T). Patients with longer disease duration had more WM lesions. Brain atrophy and hydrocephalus were not affected by disease duration or patient´s age. Patients with MPS II and cognitive impairment had more brain atrophy, hydrocephalus, severe WM lesions and elevated myoinositol/creatine at MRS. These results can be useful to better understand the pathogenic process and to increase the applicability of MRI in the disease investigation.