CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Anticoagulantes atualmente disponÃveis apresentam limitaÃÃes significativas, o que demonstra a necessidade de agentes alternativos. Os polissacarÃdeos sulfatados de algas marinhas com atividade anticoagulante e/ou antitrombÃtica abrem novas perspectivas no tratamento de distÃrbios tromboembÃlicos. No presente estudo, analisamos a atividade anticoagulante e antitrombÃtica da galactana sulfatada alga marinha vermelha Acanthophora muscoides (AmII). A atividade anticoagulante foi analisada atravÃs dos ensaios de TTPa, TTPa ex vivo e do tempo de recalcificaÃÃo. AlÃm disso, as proteases (IIa ou Xa) e inibidores da coagulaÃÃo (AT ou HCII) foram utilizados para melhor avaliar a atividade anticoagulante. Modelos experimentais de trombose venosa e arterial foram utilizados para investigar o potencial antitrombÃtico da galactana sulfatada. O teste de ativaÃÃo do fator XII tambÃm foi realizado. A investigaÃÃo da interaÃÃo AmII-antitrombina foi realizada atravÃs da medida de emissÃo de fluorescÃncia. AlÃm disso, AmII foi utilizada em ensaios de agregaÃÃo plaquetÃria induzida por ADP ou por colÃgeno. A galactana sulfatada de A. muscoides apresentou baixo potencial anticoagulante no TTPa, TTPa ex vivo e no tempo de recalcificaÃÃo quando comparada à heparina. A galactana sulfatada, somente em altas concentraÃÃes, apresentou um aumento na inibiÃÃo da trombina mediada por AT ou HCII. Em contraste, quando o fator Xa foi utilizado como a protease alvo, a galactana apresentou efeito anticoagulante semelhante à heparina. AlÃm disso, a galactana sulfatada mostrou-se um antitrombÃtico potente em doses baixas (atà 0,5 mg/kg de peso corporal), em modelo trombose venosa, no entanto em doses elevadas, seu efeito antitrombÃtico foi reduzido. Na avaliaÃÃo da trombose arterial, a galactana sulfatada apresentou efeito antitrombÃtico semelhante à heparina em todas as doses testadas. Em contraste com a heparina, a galactana sulfatada ativou fator XII e nÃo apresentou tendÃncia hemorrÃgica. AlÃm disso, AmII nÃo apresentou nenhum efeito sobre a agregaÃÃo plaquetÃria e, em associaÃÃo com antitrombina, nÃo alterou a emissÃo de fluorescÃncia, indicando que esta interaÃÃo pode ocorrer por um mecanismo diferente da interaÃÃo heparina-antitrombina. A galactana sulfatada da alga A. muscoides apresentou baixo potencial anticoagulante e elevado potencial antitrombÃtico. Esses resultados sugerem que esta galactana abre novas perspectivas para um possÃvel desenvolvimento de novos fÃrmacos antitrombÃticos. / Currently available anticoagulants have significant limitations, which demonstrate the necessity of alternative agents. Sulfated polysaccharides from marine algae with anticoagulant and/or antithrombotic activities open new perspectives in the treatment of thromboembolic disorders. In the present study, we analyzed the anticoagulant and the antithrombotic activities of a sulfated galactan from the marine red alga Acanthophora muscoides (AmII). The anticoagulant activity was analyzed using the aPTT, the aPTT ex vivo and the recalcification time assays. In addition, specific proteases (IIa or Xa) and coagulation inhibitors (AT or HCII) were used to further investigate the anticoagulant activity. Experimental models of venous and arterial thrombosis were used to investigate the antithrombotic potential of the sulfated galactan. The factor XII activation assay was also performed. The AmII-antithrombin interaction was analyzed by measures of fluorescence emissions. Furthermore, AmII was used in ADP or collagen-induced platelet aggregation assays. The sulfated galactan from A. muscoides presented a lower anticoagulant activity on aPTT, the aPTT ex vivo and the recalcification time assays when compared with heparin. The sulfated galactan only enhanced the thrombin inhibition mediated by AT or HCII at high concentrations. In contrast, when factor Xa was used as the target protease, the sulfated galactan from A. muscoides presented a potent anticoagulant effect, similar to heparin. In addition, the sulfated galactan was shown to be a very potent antithrombotic agent in low doses (up to 0.5 mg/kg body weight), on venous thrombosis model, but these effects were reduced in higher doses. In the arterial experimental thrombosis, the sulfated galactan had antithrombotic effect similar to heparin at all doses tested. In contrast with heparin, the sulfated galactan activated factor XII, but the sulfated galactan did not present hemorrhagic effect in rats. In addition, AmII had no effect on platelet aggregation, and AmII together with antithrombin did not alter the fluorescence emission, indicating that this interaction might occur by a different mechanism than heparin-antithrombin interaction. The sulfated galactan from alga Acanthophora muscoides presented low anticoagulant potential and potent antithrombotic effect. These results suggest that this sulfated galactan opens new perspectives for a possible development of new antithrombotic drugs.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / As algas marinhas sÃo fontes abundantes de polissacarÃdeos sulfatados com vÃrias atividades biolÃgicas dessa forma suas biomolÃculas sÃo de grande interesse comercial principalmente nas indÃstrias farmacÃutica e alimentÃcia No presente trabalho investigou-se uma fraÃÃo polissacarÃdica sulfatada obtida da alga marinha verde Caulerpa racemosa (CrII) quanto aos seus efeitos na nocicepÃÃo e inflamaÃÃo Inicialmente a CrII (1,0 mg/kg i.v.) foi avaliada quanto a toxicidade em camundongos utilizando um modelo por dose repetida (sete dias) ApÃs o perÃodo experimental a CrII mostrou-se atÃxica A atividade antinociceptiva foi avaliada atravÃs dos ensaios de contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico teste da formalina e da placa quente Camundongos Swiss machos foram tratados com CrII (0,01 0,1 e 1,0 mg/kg i.v.) 30 min antes de receber os estÃmulos de dor (Ãcido acÃtico 0,8% ou formalina 2%) ou exposiÃÃo ao calor Nos ensaios de contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico CrII reduziu significativamente o nÃmero de contorÃÃes abdominais e no teste da formalina CrII tambÃm foi capaz de reduzir o tempo de lambedura da pata na segunda fase do experimento Em relaÃÃo ao estÃmulo tÃrmico CrII nÃo foi capaz de prolongar o tempo de reaÃÃo dos animais. Com relaÃÃo aos efeitos na inflamaÃÃo CrII (0,01 0,1 e 1,0 mg/kg i.v.) foi avaliada quanto seu potencial anti-inflamatÃrio utilizando-se ratos Wistar Foram utilizados ensaios de migraÃÃo celular para a cavidade peritoneal induzida por carragenana (Cg - 700 Âg/cavidade) de edema de pata induzido por Cg (700 Âg/pata) ou dextrana (300 Âg/pata) Com relaÃÃo a migraÃÃo celular para a cavidade peritoneal ocorreu uma reduÃÃo significativa de neutrÃfilos em todos os grupos tratados com a CrII No ensaio de edema de pata induzido por Cg ou dextrana CrII tambÃm foi capaz de reduzir significativamente o edema em todas as doses utilizadas O efeito anti-inflamatÃrio da CrII foi confirmado atravÃs da reduÃÃo dos nÃveis teciduais da mieloperoxidase do tecido das patas nos grupos com Cg AlÃm disso foi realizado um ensaio de inibiÃÃo da enzima Hemo-oxygenase-1 (HO-1) utilizando-se o inibidor ZnPP IX com o intuito de avaliar se o efeito anti-inflamatÃrio da CrII estava relacionado com a expressÃo dessa enzima Os resultados demonstraram que a inibiÃÃo da via HO-1 està associada à inibiÃÃo da resposta anti-inflamatÃria da CrII No intuito de avaliar se CrII tambÃm possui efeito prÃ-inflamatÃrio CrII (0,01 0,1 e 1,0 mg/kg i.pl) foi injetada na pata de ratos Wistar onde o resultado obtido demonstrou um processo inflamatÃrio apenas para animais que receberam a dose de 1,0 mg/kg Portanto os possÃveis mediadores que poderiam estar envolvidos com o processo inflamatÃrio da CrII foram avaliados utilizando-se o ensaio de edema de pata induzido por CrII Os resultados demonstraram que a aÃÃo prÃ-inflamatÃria da CrII pode estar relacionada com a liberaÃÃo de mediadores provindos da via da ciclooxigenase (COX-2 prostaglandinas e tromboxanos) A CrII quando utilizada como agente anti-inflamatÃrio nÃo foi capaz de inibir seu efeito prÃ- inflamatÃrio no ensaio de edema de pata em nenhuma das doses utilizadas (0,01 0,1 e 1,0 mg/kg i.v.) confirmando que sua aÃÃo anti-inflamatÃria està relacionada com a via da HO-1 / Marine algae are abundant sources of sulfated polysaccharides with various biological activities thereby altering its biomolecules are great of commercial interest especially in the pharmaceutical and food industries In this study we investigated a sulfated polysaccharide obtained from the green seaweed Caulerpa racemosa (CrII) as to its effects on nociception and inflammation Initially the CrII (1.0 mg/kg, i.v.) was evaluated for toxicity in mice using a repeated dose model (seven days) After the trial period the CrII proved to be nontoxic The antinociceptive activity was evaluated by the writings of abdominal constrictions induced by acetic acid formalin test and hot plate Swiss male mice were treated with CrII (0.01 0.1 and 1.0 mg/kg i.v.) 30 min before receiving pain stimuli (acetic acid 0.8% or 2% formalin) or heat exposure In trials of abdominal constrictions induced by acetic acid and the formalin test CrII significantly reduced the number of abdominal writhing and paw licking time in the second phase of the experiment respectively In relation to thermal stimulation CrII was unable to prolong the reaction time of animals With respect to effects on inflammation CrII (0.01 0.1 and 1.0 mg/kg i.v.) was evaluated for its potential antiinflammatory using Wistar rats We used assays of cell migration into the peritoneal cavity induced by carrageenan (Cg - 700 mg/cavity) paw edema induced by Cg (700 Âg/paw) or dextran (300 Âg/paw)With respect to cell migration into the peritoneal cavity there was a significant reduction of neutrophils in all groups treated with the CrII In the test paw edema induced by dextran or Cg CrII was also able to significantly reduce the swelling at all doses used The anti-inflammatory effect of CrII was confirmed by reducing the tissue levels of myeloperoxidase in the tissue of the paws Cg groups In addition we performed an enzyme inhibition assay Hemo-oxygenase-1 (HO-1) using the inhibitor ZnPP IX in order to assess whether the anti-inflammatory effect of CrII was related to the expression of this enzyme The results showed that the inhibition of the HO-1 is associated with inhibition of the inflammatory response of CrII In order to assess whether CrII also has pro-inflammatory effect CrII (0.01 0.1 and 1.0 mg/kg i.pl) was injected into the paw of the rats where the result demonstrated a process inflammation only for animals which received the dose of 1.0 mg/kg Therefore the potential mediators that could be involved in the inflammatory process of CrII were evaluated using the test paw edema induced by CrII The results showed that the pro-inflammatory effect of CrII may be related to the release of mediators emanating from the path of cyclooxygenase (COX-2 prostaglandins and thromboxanes) The CrII when used as anti-inflammatory agent was unable to inhibit pro-inflammatory effect in the paw edema test in any of the doses (0.01 0.1 and 1.0 mg/kg i.v.) confirming that its anti-inflammatory effect is related to HO-1

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O esgotamento das reservas de energia nÃo-renovÃvel, como petrÃleo, carvÃo e gÃs natural, tÃm estimulado a busca por fontes alternativas geradoras de energia. Neste contexto, o pinhÃo manso (Jatropha curcas L.) tem recebido especial atenÃÃo por parte dos pesquisadores, devido à presenÃa de grande quantidade de Ãleo em suas sementes, que pode ser convertida em biodiesel. O objetivo deste trabalho foi investigar o comportamento de genes relacionados ao metabolismo de lipÃdios durante os processos de desenvolvimento e germinaÃÃo da semente de pinhÃo manso. Para quantificar com exatidÃo os nÃveis de expressÃo gÃnica por RT-qPCR foi feita uma seleÃÃo entre nove candidatos a genes de referÃncia. Nossos resultados mostraram que na anÃlise de sementes em desenvolvimento, os genes GAPDH, UCP, ACT11, PP2A2 e CICLOF foram os mais estÃveis. Para as sementes em germinaÃÃo, os genes considerados mais estÃveis foram EF1-α, PP2A2, GAPDH, PUB3 e ACT11. Para validar nossos resultados com genes de referÃncia, foi utilizado o padrÃo de expressÃo do gene que codifica a proteÃna oleosina no qual foi observado que o mesmo foi similar aos observados em artigos cientÃficos pesquisados, indicando que os genes de referÃncia estavam apropriados para normalizaÃÃo dos dados de RT-qPCR. ApÃs obtenÃÃo desses dados, efetuou-se um estudo da expressÃo por RT-qPCR de 20 genes envolvidos com o metabolismo de lipÃdios. Nossos resultados revelaram que os genes oleosina, β-cetoacil-ACP Sintase I e II, tioesterase A e triacilglicerol lipase I, bem como outros genes envolvidos na biossÃntese de lipÃdios, alcanÃaram altos nÃveis de expressÃo no desenvolvimento da semente. Os genes acil-CoA sintetase, tiolase e triacilglicerol lipase II, relacionados com a degradaÃÃo de lipÃdios apresentaram altos nÃveis de transcritos na germinaÃÃo da semente. Os dados obtidos neste trabalho contribuem para o entendimento das vias metabÃlicas estudadas, fornecendo subsÃdios para a produÃÃo, via engenharia genÃtica, de variedades melhoradas do pinhÃo manso. / The depletion of non-renewable energy such as oil, coal and natural gas, has stimulated the search for alternative sources of energy generation. In this context, physic nut (Jatropha curcas L.) has received special attention from researchers due to the presence of large amounts of oil in its seeds that can be converted into biodiesel. The objective of this study was to investigate the behavior of genes related to lipid metabolism during the development and germination of physic nut seeds. To accurately quantify the levels of gene expression by RT-qPCR, a selection of nine candidates for reference genes was performed. Our results showed that the GAPDH, UCP, ACT11, PP2A2 and CICLOF were the most stable genes during the development of the seeds. In germinating seeds, EF1-α, PP2A2, GAPDH, PUB3 and ACT11 were considered the most stable genes. To validate our findings with reference genes, we used the expression profile of the gene encoding the oleosin protein in which that was similar to those observed in the literature evaluated, indicating that they were suitable reference genes for data normalization by RT-qPCR. After obtaining these data, we performed a gene expression study by RT-qPCR of 20 genes involved in lipid metabolism. Our results revealed that the oleosin, β-ketoacyl-ACP Synthase I and II, thioesterase A and triacylglycerol lipase I genes, as well as other genes involved in lipid biosynthesis, achieved high expression levels in developing seeds. Acyl-CoA synthetase, thiolase and triacylglycerol lipase II, genes related to the degradation of lipids, showed high transcript levels in germinating seeds. The data obtained in this study contribute to the understanding of the metabolic pathways studied, providing subsidies for production of improved varieties of physic nut via genetic engineering.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Lectinas sÃo proteÃnas que tem a capacidade de se ligar especificamente e reversivelmente a carboidratos e glicoconjugados, sem alterar a estrutura do ligante. Elas sÃo encontradas em organismos tais como vÃrus, bactÃrias, plantas e animais, e tem sido demonstrado que possuem atividades biolÃgicas importantes. Clitoria fairchildiana R. A. Howard à uma espÃcie pertencente à famÃlia Fabaceae, nativa da AmÃrica do Sul. O objetivo deste estudo foi isolar e caracterizar uma lectina presente em sementes de Clitoria fairchildiana, avaliar o potencial fitoterÃpico e farmacolÃgico (antinociceptivo, prà e antiinflamatÃrio, hemolÃtico, antibacteriano e antifÃngico) desta lectina. Os resultados indicaram a presenÃa de uma lectina (CFAL) na fraÃÃo proteica glutelina Ãcida, que aglutina eritrÃcitos de coelho nativos, a qual nÃo foi inibida por monossacarÃdeos e glicoproteÃnas testadas, foi purificada por cromatografia em coluna de troca-iÃnica, DEAE-Sephacel. AnÃlise da lectina em SDS-PAGE indicou duas bandas com massa molecular de aproximadamente 100 e 116 kDa. As anÃlises em DLS apresentam uma amostra monomodal com raio hidrodinÃmico (RH) de 4,5 nm, indicando uma conformaÃÃo dependente de alta concentraÃÃo salina. A CFAL à uma glicoproteÃna PAS (+) capaz de ser inativada pelo tratamento com metaperiodato de sÃdio, porÃm resistente ao efeito de β-mercaptoetanol e urÃia. Esta lectina nÃo apresentou citotoxicidade significativa nÃo alterou a fragilidade osmÃtica, bem como nÃo apresentou efeitos oxidante/antioxidante significativos frente a hemÃcias humanas. A lectina apresentou atividade antiinflamatÃria em modelo de edema da pata induzido por carragenina, com diminuiÃÃo de 71% do edema. Efeitos antinociceptivos dose dependentes foram observados para CFAL no teste de contorÃÃes abdominais induzida por Ãcido acÃtico, com reduÃÃo do nÃmero de contorÃÃes em atà 72%. A lectina de C. fairchildiana foi capaz de reduzir o crescimento de Bacillus subtilis e nÃo afetou o crescimento dos fungos testados. Concluiu-se que a lectina purificada e caracterizada a partir das sementes de Clitoria fairchildiana à uma glicoproteÃna desprovida de pontes dissulfeto com atividade antiinflamatÃria e antinociceptiva e nÃo à citotÃxica para eritrÃcitos humanos. / Lectins are proteins that have the ability to bind specifically and reversibly to carbohydrates and glycoconjugates, without changing the structure of binder. They are found in organisms such as virus, bacterias, plants and humans, and has been shown to possess important biological activities. Clitoria fairchildiana R. A. Howard is a species belonging to the Fabaceae family, native to South America. The purpose of this study was to isolate and to characterize a lectin present in seeds of Clitoria fairchildiana, evaluate the herbal and pharmacological potential (antinociceptive, pro-and antiinflammatory, hemolytic, antibacterial and antifungal) of this lectin. The results indicated the presence of a lectin (CFAL) on protein fraction acid glutelin, CFAL binds native rabbit erythrocytes, was not inhibited by monosaccharides and glycoproteins tested and was purified by ion exchange chromatography, DEAE-Sephacel. Analysis of the lectin in SDS-PAGE showed two bands with molecular mass approximately 100 and 116 kDa. In DLS analyzes have a monomodal sample with hydrodynamic radius (RH) of 4.5 nm, showing a conformation high salt concentration dependent. The CFAL is a glycoprotein PAS (+) capable of being inactivated by treatment with sodium metaperiodate, but resistant to the effect of β-mercaptoethanol and urea. This lectin did not show significant cytotoxicity, did not change the osmotic fragility and not showed oxidant/antioxidant significant effects, compared to human erythrocytes. The lectin showed anti-inflammatory activity in models of paw edema induced by carrageenan, decreasing 71% of edema. Dose dependent antinociceptive effects were observed for CFAL on abdominal writhing test induced by acetic acid, reducing the number of writhes in up to 72%. The C. fairchildiana lectin was able to reduce the growth of Bacillus subtilis and did not affect growth of the fungi tested. It was concluded that the lectin purified and characterized from the seeds of Clitoria fairchildiana is a glycoprotein lacks disulfide bonds with antinociceptive and antiinflammatory activity, and is not cytotoxic to human erythrocytes.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O feijÃo-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp] à uma importante leguminosa devido ao seu potencial nutricional, revelado principalmente pelo alto teor de proteÃnas. As proteÃnas apresentam destaque nas propriedades funcionais (tecnolÃgicas) e o interesse por novas fontes proteicas a custos acessÃveis, leva ao crescente estudo das leguminosas. Assim, o presente trabalho objetivou a obtenÃÃo de isolados proteicos de dois genÃtipos de feijÃo-caupà (Cauamà e Tumucumaque), bem como a caracterizaÃÃo bioquÃmica e funcional destes isolados e de suas sementes. Os resultados mostraram que as sementes dos genÃtipos estudados sÃo boas fontes de proteÃnas (23,19 a 24,02%), fibras (17,75 a 19,78%) e apresentam baixo teor de lipÃdeos (1,67%). Os isolados proteicos obtidos apresentaram elevado teor proteico (> 90%) e rendimento (35,11 e 38,12%, respectivamente Tumucumaque e CauamÃ). Tanto os isolados como as sementes nÃo se mostraram tÃxicos, mas apresentraram inibidores de tripsina (24,2 a 28,2 UI/ Âg de proteÃna), quimiotripsina (26,66 a 32,17 UI/ Âg de proteÃna) e lectina (80.000 a 320.000 UI/ Âg de proteÃna). A digestibilidade dos isolados (63,23 a 63,81%) foi superior a das sementes (50,07 a 54,37%). A fraÃÃo proteica predominante foi a globulina, com maior concentraÃÃo nos isolados. A solubilidade das sementes e isolados apresenta-se em formato de U, com menor solubilidade no ponto isoelÃtrico. Os isolados proteicos apresentaram melhor capacidade de absorÃÃo de Ãgua (2,41 a 2,44 ml/g de amostra), de Ãleo (2,38 a 2,8 1ml/g de amostra) e formaÃÃo de gel (8 a 10%). Jà as sementes apresentaram maior formaÃÃo de espuma (52,66 a 57,89%). Assim, pode-se concluir que os isolados proteicos obtidos desse genÃtipo sÃo promissores para aplicaÃÃo nutricional, por apresentarem elevado teor proteico (> 90%), razoÃvel digestibilidade (>60%) e perfil de aminoÃcidos. Da mesma forma, sÃo promissores para a aplicaÃÃo tecnolÃgica, uma vez que se destacaram nas propriedades de solubilidade, capacidade de absorÃÃo de Ãgua e de Ãleo e formaÃÃo de gel. Assim, os isolados proteicos podem ser utilizados como ingredientes de produtos alimentÃcios, contribuindo com o aumento do valor nutricional dos alimentos e agregando valor aos genÃtipos melhorados do feijÃo-caupi. / The cowpea (Vigna unguiculata (L.) Walp) is an important plant due to their nutritional potential, revealed to mainly high protein content. The highlight proteins present in the functional properties (technological) and interest in new sources of protein at affordable costs leads to increasing interest in studying the legume. Thus, the present study aimed to obtain protein isolates from bean cowpea genotypes, as the biochemical and functional characterization of these isolates and their seeds. The results showed the seeds are good sources of protein (23.19 to 24.02%), fiber (17.75 to 19.78%) and have a low lipid content (1.67%). The protein isolated obtained showed high purity (above 90%) and yield (35.11 and 38.12%). Both isolated as seeds not proved toxic but exhibited trypsin inhibitor (24.2 to 28.2 IU), chymotrypsin (26.66 to 32.17 IU) and lectin (80.000-320.000 IU). The digestibility of isolated (63.23 and 63.81%) was higher than the seeds (50.07 to 54.37%). The predominant proteic fraction was globulin, with the highest concentration in the isolates. The seeds and isolated solubilities presents U-shaped, with lower solubility at the isoelectric point. The isolated protein showed greater capacity for absorb water (2.41 to 2.44 ml/g sample), oil (from 2.38 to 2.81 ml / g sample) and gel concentrations (8-10%). Already seeds showed higher foaming (52.66 to 57.89%).

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / No presente trabalho foi realizado um estudo integrado de fisiologia, bioquÃmica e proteÃmica comparativa em feijÃo de corda, uma cultura de grande valor econÃmico, com o objetivo de entender respostas de aclimataÃÃo das plantas à salinidade. Para tanto, dois experimentos foram conduzidos em casa de vegetaÃÃo, sob condiÃÃes hidropÃnicas, utilizando dois cultivares de feijÃo de corda (Vigna unguiculata) com tolerÃncia diferencial ao estresse salino: PitiÃba (tolerante) e TVu 2331 (sensÃvel). No primeiro experimento foram avaliadas as mudanÃas fisiolÃgicas (crescimento, trocas gasosas, teor relativo de Ãgua, teor de clorofila, fluorescÃncia da clorofila) e bioquÃmicas (acÃmulo de Ãons e solutos orgÃnicos em folhas e raÃzes e padrÃo de expressÃo protÃico foliar) induzidas por concentraÃÃes crescentes de salinidade (NaCl a 50, 75 e 100 mM). Os resultados demonstraram a existÃncia de respostas contrastantes entre os cultivares estudados, especialmente com relaÃÃo à inibiÃÃo do crescimento da parte aÃrea e ao acÃmulo de solutos compatÃveis, os quais foram maiores no TVu. Contudo, a salinidade nÃo alterou os parÃmetros de fluorescÃncia da clorofila em ambos os cultivares. ConcentraÃÃes crescentes de NaCl alteraram de forma diferencial o padrÃo de expressÃo de proteÃnas nas folhas, com maiores alteraÃÃes na dose 100 mM de NaCl. Apesar disso, no segundo experimento, a concentraÃÃo moderada de sal com NaCl a 75 mM foi escolhida como referÃncia para o estudo das mudanÃas no proteoma durante o estresse salino e apÃs um perÃodo pÃs-estresse (recuperaÃÃo). A salinidade modificou a expressÃo de 22 âspotsâ protÃicos no PitiÃba, dos quais 10 (6 que aumentaram e 4 que diminuÃram) tiveram suas identidades determinadas por espectrometria de massas acoplada a cromatografia lÃquida (LC-ESI-MS/MS). No TVu foram observadas mudanÃas em 27 âspotsâ, sendo determinada a identidade de 9 (5 que aumentaram e 4 que diminuÃram). AlÃm destes, 5 âspotsâ que mantiveram suas taxas de expressÃes em condiÃÃes de salinidade no PitiÃba tambÃm foram identificados. A maioria das proteÃnas identificadas està relacionada com o processo de fotossÃntese, realizando funÃÃes enzimÃticas ou participando da constituiÃÃo molecular dos fotossistemas. ProteÃnas com papel protetor contra o estresse, como chaperonas e enzimas do estresse oxidativo (SOD) foram identificadas, assim como a calreticulina, que provavelmente està envolvida em processos de transduÃÃo de sinal. Em adiÃÃo, foi possÃvel observar que durante a recuperaÃÃo das plantas os mecanismos de homeostase Ãs novas condiÃÃes restabeleceram os nÃveis de algumas proteÃnas, o que sugere a participaÃÃo delas no processo de aclimataÃÃo ao estresse salino. No geral, os resultados fornecem informaÃÃes adicionais que podem levar a uma melhor compreensÃo das bases moleculares da tolerÃncia ou sensibilidade de plantas de feijÃo de corda à salinidade. / In the present work, an integrated physiological, biochemical and proteomic analysis on cowpea (an economically important species) was carried out in order to understand the responses of plants to salinity. Two experiments were conducted in a greenhouse under hydroponic conditions, using two cultivars of cowpea (Vigna unguiculata) with differential tolerance to salt stress: Pitiuba (tolerant) and TVu 2331 (sensitive). In the first experiment, we evaluated the physiological (growth, gas exchange, relative water content, chlorophyll content, chlorophyll fluorescence) and biochemical (ions and organic solutes accumulations) changes induced by increasing levels of salinity (50, 75 and 100 mM NaCl), as well as the influences of stress two-dimensional (2D) protein patterns in leaves tissues. The results showed the existence of contrasting responses between the cultivars studied, especially with respect to inhibition of shoot growth and the accumulation of compatible solutes, which were higher in TVu. However, salinity did not alter the fluorescence parameters in both genotypes. The global analysis of 2D protein patterns showed that increasing levels of NaCl differentially alter the expression pattern of proteins in leaves, with larger changes in dose 100 mM NaCl. Nevertheless, in the second experiment, the moderate dose of salt with 75 mM NaCl was chosen as the reference dose for the study of changes in the proteome during salt stress and recovery. Salinity altered the expression of 22 protein spots in Pitiuba. Of these spots, the identities of 10 (6 up-regulated and 4 down-regulated) were determined by liquid chromatography electro-spray ionization tandem mass spectrometry (LC-ESI-MS/MS). In TVU changes were observed in 27 spots being the identity determined for 9 (5 up-regulated and 4 down-regulated). Besides these, 5 spots that kept their rates expressions in salinity conditions in PitiÃba were also identified. The majority of the identified proteins is related to the process of photosynthesis, performing enzymatic functions or participating in the molecular constitution of photosystems. Proteins with protective role against stress such as chaperones and enzymes of oxidative stress (SOD) were identified, as well as calreticulin, which are probably involved in signal transduction network. In addition, during recovery treatments homeostasis mechanisms of plants to new conditions restored the levels of certain proteins, suggesting their participation in the process of acclimation to salt stress. Overall, results provide some additional information that can lead to a better understanding of the molecular basis of salt tolerance or sensitivity in cowpea plants.

Algas marinhas sÃo seres classificados no reino protista, predominantemente aquÃticos e com grande capacidade adaptativa. Encontradas em todas as regiÃes do planeta, as algas desempenham importante papel ecolÃgico e econÃmico, representando um grande potencial de biorrecursos. A alga marinha vermelha Gracilaria birdiae, coletada durante doze meses, foi submetida à extraÃÃo aquosa a 100 ÂC de polissacarÃdeos e apresentou rendimento superior a 50 %, com exceÃÃo nos meses de fevereiro, setembro e novembro de 2007 ( 49,5%, 41,8% e 49,4% respectativamente). O teor de sulfato foi obtido por microanÃlise e nÃo variou significativamente ao longo dos meses analisados, apresentando valor mÃdio de 1,35%. O grau de sulfataÃÃo mÃdio encontrado foi de 0,15. O conteÃdo protÃico nas amostras tambÃm nÃo apresentou variaÃÃo considerÃvel, tendo mÃdia de 0,5%, entretanto, no mÃs de abril o conteÃdo protÃico aumentou cerca de 3 vezes do valor mÃdio encontrado. As doze amostras foram caracterizadas quimicamente por cromatografia de permeaÃÃo em gel (GPC), espectroscopia na regiÃo do infravermelho (FT-IR) e por ressonÃncia magnÃtica nuclear (RMN). Os cromatogramas de GPC das amostras apresentaram semelhanÃas e caracterÃsticas tÃpicas de polissacarÃdeos das algas vermelhas. Em geral, foram observados um pico principal, em aproximadamente 7,58 mL e um ombro em aproximadamente 9,2 mL de volume de eluiÃÃo, com exceÃÃo dos meses de agosto, outubro e novembro de 2007, que apresentaram cromatogramas com pico principal em aproximadamente 8,27 mL de volume de eluiÃÃo, detectados pelo Ãndice de refraÃÃo. Os polissacarÃdeos investigados apresentaram altas massas molares , variando de 0,11 x 104 a 8,51 x 105 g/mol. Os espectros de infravermelho das doze amostras de polissacarÃdeos apresentaram perfis semelhantes, com as bandas caracterÃsticas de agarocolÃides, mais especificamente, do tipo agarana. Espectros de RMN foram empregados para a caracterizaÃÃo estrutural das amostras ao longo do ano e, revelaram que a estrutura do polissacarÃdeo à composta por segmentos de (1→ 3)-β-D-galactopiranosil ligada a (1→4)-α-L-anidrogalactopiranosil. O estudo da variaÃÃo sazonal da composiÃÃo centesimal, em geral, nÃo apresentou variaÃÃo acentuada. Com relaÃÃo à quantidade de proteÃnas solÃveis e a atividade hemaglutinante no extrato protÃico, o estudo da variaÃÃo sazonal revelou uma pequena variaÃÃo no teor de proteÃnas solÃveis, com valor mÃximo (0,94 mgP/mL) em novembro/06 e mÃnimo no mÃs de dezembro/06 (0,39 mgP/mL). Em geral, a atividade hemaglutinante observada em Gracilaria birdiae à fraca, porÃm, ela esteve presente em concentraÃÃes variÃveis ao longo de todo o perÃodo estudado, com exceÃÃo no mÃs de dezembro/06, independente do conteÃdo protÃico total e solÃvel encontrado. / Seaweeds are classified in the kingdom protist, predominantly aquatic and with great adaptive capacity. Found in all regions of the planet, algae play an important role ecological and economic, representing a great potential for bioresources. The red seaweed Gracilaria birdiae, collected during twelves months, was submitted to aqueous extraction of polysaccharides at 100ÂC, showed yield exceeding 50 %, except in February, September and November 2007 (49,5%, 41,8% and 49,4% respectively). The sulfate content was obtained by microanalysis and it not vary significantly over the months examined averaging 1,35%. The sulfate degree was 0.15. The protein content in the samples also showed no considerable variation, with average of 0,5%, howevwr in April, the protein content increased about 3 times the average found. The twelve samples were chemically characterized by Gel Permeation Chromatography (GPC), Infrared (FT-IR) and Nuclear Magnetic Resonance (NMR) spectroscopy. The GPC chromatograms of the samples showed similarity and typical characteristics of polysaccharides from red algae. In general, we observed a main peak, at approximately 9,2 mL volume of eluition, with the exception of August, October and November 2007, which showed chromatograms with main peak at approximately 8,7 mL volume of eluition, detected by a refractive index. The polysaccharides investigated showed hight molecular weight, ranging from 0.11 x 104 and 8.51 x 105 g/mol. The infrared spectra of the twelve samples of polysaccharides presented similar profiles, with bands characteristics of agarocolloids, more specifically agaran-like, with evidence of protein. NMR were employed to the structural characterization of the samples throughout the year and revealed that the structure of polysaccharides is composed by (1→3)-β-D-galactopyranosyl linkage to (1→4)-α-L-anhydrogalactopyranosyl segments. The study of seasonal variation in proximate composition, in general, showed no marked variation. Regarding the amount of soluble protein in the crude extract, the study of seasonal variation showed a small variation in the content of soluble protein, with maximum value (0,94 mgP/mL) in November/06 and minimum (0,39 mgP/mL) in December/06. The hemagglutinating activity during the period of one year, except in December/06.

nÃo hà / O presente trabalho teve por objetivo avaliar o efeito de diferentes doses do Bokashi no crescimento das culturas de coentro, de cebolinha, em alguns atributos quÃmicos do solo e na atividade da biomassa microbiana do solo, para testar as hipÃteses de que a utilizaÃÃo do Bokashi no cultivo de cebolinha e coentro melhora o desenvolvimento das plantas em consequÃncia da melhoria do solo. A conduÃÃo do experimento foi realizada na casa de vegetaÃÃo do setor de horticultura do Departamento de Fitotecnia da Universidade Federal do CearÃ(UFC), situada no Campus do Pici, em Fortaleza, em um perÃodo de 60 dias apÃs o transplantio das mudas de cebolinha, das bandejas para os vasos plÃsticos contendo 4kg de solo e um perÃodo de 40 dias pro cultivo do coentro. O solo utilizado foi oriundo de Ãrea que predomina um Neossolo QuartzarÃnico, da comunidade do Coqueiro do Alagamar, no municÃpio de Pindoretama-CE. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, onde os tratamentos foram: T1- [4 kg Solo + 5g Bokashi + (20g composto orgÃnico = c.o.)]; T2- (4 kg Solo + 10g Bokashi + c.o.); T3-(4 kg Solo + 15g Bokashi + c.o.); T4- (4 kg Solo +20g Bokashi + c.o.); T5- (4 kg S + 20 g Bokashi); T6- (4 kg S + c.o.) e T7- Controle (solo natural). Foram avaliadas a altura e a massa da matÃria seca da parte aÃrea das plantas de cebolinha e do coentro e no solo, o pH, o Carbono orgÃnico total, o NitrogÃnio total e o FÃsforo disponÃvel, a colonizaÃÃo micorrÃzica arbuscular, a respiraÃÃo basal do solo, o quociente metabÃlico e o carbono da biomassa microbiana. Pelos resultados obtidos, o Bokashi, na dose de 20 g, foi o que mais favoreceu o desenvolvimento das plantas. NÃo houve influÃncia nos teores de NitrogÃnio total dos solo cultivados, mas os teores do carbono orgÃnico total e do carbono da biomassa microbiana tiveram um aumento significativo nos tratamentos T4 e T5. A quantidade de esporos de FMA nas amostras de solo analisadas foi menor nos tratamentos com Bokashi e mostrou-se estatisticamente diferente do T7 â Controle, que foi a que apresentou a maior quantidade de esporos. A colonizaÃÃo micorrÃzica arbuscular aumentou nos tratamentos T6 e T7 que nÃo usavam o Bokashi e foi menor nos tratamentos T4 e T5, que receberam a dose de 20g do Bokashi. / This study aimed to evaluate the effect of different doses of Bokashi in crop growth of coriander and chives, in some soil chemical properties and in microbial biomass activity of soil, to test the hypothesis that the use of the Bokashi in the cultivation of coriander and chives improve plant growth, increases the quality of the soil . The conduct of the experiment was accomplished in the greenhouse horticulture sector of the Department of Plant Science of the Federal University of Cearà (UFC), located in the Campus do Pici, Fortaleza, in a period of 60 days after transplanting the chives seedlings, from trays to plastic pots containing 4 kg of soil and for a period of 40 days pro cultivation of coriander. The soil used was from the area that predominates Quartzipsamments Neosol from the community of Coqueiro do Alagamar, in the municipality of Pindoretama-Ce. The experimental design was of completely randomized kind, consisting of seven treatments: T1- [4 kg Soil + 5g Bokashi + (20g organic compound = c.o)], T2-(4 kg soil+ 10g Bokashi + co) , T3-(4 kg soil+ 15g Bokashi + co), T4- (4 kg Solo +20 g Bokashi + co),-T5 (4 kg S + 20 g Bokashi), T6-(4 kg S + co) and T7 - (natural soil)Control. The characteristics evaluated were the height and dry mass of the aerial part of chives and coriander and in the soil, pH, total organic carbon, total nitrogen and available phosphorus, arbuscular mycorrhizal colonization, the soil basal respiration, metabolic quotient and microbial biomass carbon . By the results obtained the Bokashi at a dose of 20 g, was the one that most favored plant development. There was no influence on the levels of total nitrogen of the cultivated soil, but the levels of total organic carbon and microbial biomass carbon had a significant increase in T4 and T5 treatments. The number of AMF spores in the soil samples analyzed was lower in the treatments with Bokashi and was statistically different in T7 - Control, being the highest one. Mycorrhizal root colonization increased in treatments T6 and T7 which were not using the Bokashi and was lower in treatments T4 and T5, which received the dose of 20g of Bokashi.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Alta demanda de energia e mudanÃas climÃticas globais tÃm gerado interesse dos governantes mundiais para investir em pesquisas de fontes alternativas e renovÃveis de combustÃveis. Nessa perspectiva, as macroalgas vÃm ganhando ampla atenÃÃo por parte de pesquisadores do mundo inteiro como fonte alternativa renovÃvel de biomassa para a produÃÃo de bioetanol, o qual à denominado atualmente de combustÃvel de âterceira geraÃÃoâ. A utilizaÃÃo das algas marinhas como matÃria-prima para produÃÃo de bioetanol apresenta vantagens, tais como (1) nÃo competiÃÃo com a produÃÃo de alimentos, (2) alto conteÃdo de carboidratos, (3) baixo conteÃdo de lignina e (4) alta produtividade. O potencial da alga marinha vermelha Hypnea musciformis em fornecer carboidratos fermentescÃveis para a produÃÃo de bioetanol foi avaliado no presente trabalho. A alga foi obtida de cultivo comercial, localizado na praia de Flecheiras, municÃpio de Trairi, Cearà e apÃs lavagem, secagem e trituraÃÃo, 5 g foram adicionados a 100 mL de HCl (0,2; 0,5 e 1,0 M) em erlenmeyers, autoclavados a 121 ÂC (10, 20 e 30 min). Foi observada a presenÃa de galactose (7,4 â 10,8 g.L-1) e glucose (3,4 â 4,7 g.L-1) em todos os hidrolisados e a condiÃÃo de hidrÃlise 0,5/20, apresentando uma concentraÃÃo de glicose + galactose de 14,8 g.L-1, foi selecionada para os ensaios de fermentaÃÃo dos monossacarÃdeos por Saccharomyces cerevisiae a 30ÂC. Os resultados mostraram que a glicose e a galactose, foram consumidas simultaneamente, no entanto esse consumo sà foi iniciado apÃs 7 h de fermentaÃÃo e apÃs 52 h, 82,5 % da glicose e 72% da galactose tinham sido consumidas, com uma produÃÃo mÃxima de 5,3 g.L-1 de bioetanol, representando uma eficiÃncia fermentativa de 50% do teÃrico e evidenciando a habilidade da S. cerevisiae em fermentar a galactose proveniente de matÃria-prima algÃcea com um rendimento de 0,1 g de bioetanol/g de alga seca. Observou-se, na condiÃÃo de hidrÃlise selecionada, uma maior velocidade especÃfica de consumo de substrato acompanhado da velocidade de produÃÃo de etanol. Os rendimentos de etanol baseados no consumo de substrato (glucose + galactose) e biomassa foram 0,315 e 0,08 (g/g), respectivamente. As produtividades de biomassa e etanol foram 0,008 g.L-1.h-1 e 0,100 g.L-1.h-1, respectivamente. Com os dados obtidos pode-se concluir que a alga marinha H. musciformis se mostrou uma potencial fonte renovÃvel de biomassa para a produÃÃo de etanol. No entanto, sÃo necessÃrios mais estudos para otimizar o processo produtivo de bioetanol a partir desses organismos. / High energy demand and global climate changes have generated interest in world leaders to invest in research on alternative and renewable fuels. In this perspective, the macroalgae are gaining wide attention from researchers around the world as an alternative source of renewable biomass for bioethanol production, which is currently called fuel "third generation". The use of seaweed as a feedstock for bioethanol production has advantages such as (1) no competition with food production, (2) high carbohydrates content, (3) low lignin content and (4) high productivity. The potential of the red seaweed Hypnea musciformis to provide fermentable carbohydrates for bioethanol production was evaluated in this study. The algae was obtained from a commercial cultivation, located on the Flecheiras beach, Trairi, Cearà and after washing, drying and grinding 5 g were added to 100 mL HCl (0.2, 0.5 and 1.0 M) in Erlenmeyer flasks, autoclaved at 121 ÂC (10, 20 and 30 min). It was observed the presence of galactose (7.4 to 10.8 g.L-1) and glucose (3.4 to 4.7 g.L-1) in all hydrolyzed and the hydrolysis condition 0.5/20, with a concentration of glucose + galactose 14.8 g.L-1, was selected for testing fermentation of monosaccharides by Saccharomyces cerevisiae at 30  C. The results showed that glucose and galactose were consumed simultaneously, however this consumption only started after 7 h of fermentation and after 52 h, 82.5% of glucose and 72% galactose had been consumed, with a maximum yield of 5.3 g.L-1 of ethanol, it represents a fermentation efficiency of 50% theory and showing the ability of S. cerevisiae ferment galactose from algal feedstock with a yield of 0.1 g ethanol/g dry seaweed. It was observed in the hydrolysis condition selected, a higher specific rate of the substrate consumption accompanied by the rate of ethanol production. The ethanol yields based on consumption of substrates (glucose + galactose) and biomass were 0.315 and 0.08 (g/g) respectively. The biomass and ethanol productivity were 0.008 g.L-1.h-1 and 0.100 g.L-1.h-1, respectively. With the date obtained it can be conclude that the red seaweed H. musciformis showed be a potential renewable source of biomass for the production of bioethanol. However, other studies are needed to optimize the production process of bioethanol from these organisms.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A liberaÃÃo controlada de fÃrmacos atravÃs de sistemas nanoparticulados à uma estratÃgia promissora para contornar os efeitos adversos da quimioterapia convencional do cÃncer. Nesse trabalho, nanopartÃculas produzidas por complexaÃÃo polieletrolÃtica da quitosana e carragenanas (kappa, iota e lambda) foram avaliadas como sistema de liberaÃÃo de 5-Fluorouracil. Inicialmente, os complexos polieletrolÃticos foram produzidos a partir de diversas condiÃÃes experimentais como concentraÃÃo inicial de polieletrÃlitos (0,5, 0,25 e 0,1 mg/mL), razÃo de cargas (10, 1 e 0,1) e ordem de adiÃÃo das soluÃÃes de polieletrÃlitos. Os complexos apresentaram diÃmetro hidrodinÃmico (Dh) entre 217 e 1555 nm, com Ãndices de polidispersÃo (IPD) inferiores a 0,6 e potenciais zeta acima de 30 mV para partÃculas catiÃnicas e abaixo de -30 mV para partÃculas aniÃnicas, indicando que os complexos possuem alta estabilidade coloidal. As nanopartÃculas apresentaram pouca variaÃÃo de tamanho, Ãndice de polidispersÃo e potencial zeta durante 30 dias de armazenamento. A espectroscopia na regiÃo do infravermelho por transformada de Fourrier (FTIR) comprovou a interaÃÃo dos grupos amina da quitosana e sulfato da carragenana na formaÃÃo das nanopartÃculas, bem como a incorporaÃÃo do 5-FU na matriz polimerica. A presenÃa do 5-FU promoveu alteraÃÃes discretas no tamanho, Ãndice de polidispersÃo e potencial zeta das partÃculas. A eficiÃncia de encapsulaÃÃo variou entre 3,5  1,1 a 15,4  0,6% e a capacidade de carga se manteve entre 8,2  0,4 e 38  2,4% e ambos foram influenciados pela concentraÃÃo inicial de 5-FU. Os ensaios de liberaÃÃo in vitro do 5-FU encapsulado apresentaram efeito burst, com parte do fÃrmaco sendo liberado nas primeiras horas, seguido de uma liberaÃÃo lenta e incompleta ao longo de 8 horas do experimento. Os complexos nanopartÃcula/5-FU apresentaram baixo efeito citotÃxico em linhagens de cÃlulas tumorais HL-60 e HCT-116, provavelmente devido ao pH fisiolÃgico do meio de cultura, resultado que viabiliza estudo das nanopartÃculas de quitosana/carragenanas/5-FU em modelos in vivo como sistema de liberaÃÃo sÃtio dirigida sensÃvel ao pH do microambiente tumoral. / The nanoparticle drug delivery systems are a promising strategy to avoid the adverse conventional effects of cancer chemotherapy. In this work, nanoparticles produced by polyelectrolytic complexation of chitosan and κ, ι, λ-carrageenan were evalueted as a release system of 5-Fluorouracil. At first, the polyelectrolyte complexes were produced from several experimental conditions such as initial polyelectrolytes concentration (0.5, 0.25 and 0.1), charge ratio (10, 1 and 0.1) and mixing order of the polyelectrolytes solutions. The complexes presented hydrodynamic diameter (Dh) between 217 and 1,555 nm, with polydispersity indexes (PDI) below 0.6. The complexes showed zeta potential above 30 mV for cationic particles and below -30 mV for anionic particles, indicating that the complexes have high stability. The nanoparticles showed soft size, polydispersity index and zeta potential variation during 30 days of storage. The Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR) proved the interaction of the amine groups of chitosan and sulfate groups of carrageenan in the nanoparticles formation. The 5-FU entrapment in the nanoparticles was also confirmed by FTIR and promoted soft changes on characteristics of the complexes. The encapsulation efficiency ranged from 3.5  1.1 to 15.4  0.6%, the load capacity was maintained between 8.2  0.4 and 38  2.4%, and both were affected by 5-FU initial concentration. The in vitro drug release assay showed a burst effect with much of the drug being released within the first hours, followed by a slow and incomplete release over 8 hours of the experiment. The nanoparticles/5-FU complex showed low cytotoxic effect on tumor cell lines HL-60 and HCT-116, probably due to slightly alkaline pH of the culture medium. This result indicates the need for evaluating in vivo models to study the chitosan/carrageenan/5-FU nanoparticles as a promising tumor targeting delivery system.