Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / O extrato metanÃlico (MET) e as fraÃÃes hexÃnica (HEX) e clorofÃrmica (CLR) da alga parda Spatoglossum schroederi foram avaliados quanto Ãs atividades antioxidante, antibacteriana e anti-inflamatÃria. A atividade antioxidante foi realizada pelos mÃtodos capacidade antioxidante total, atividade redutora, sequestro de radical DPPH e quelaÃÃo do Ãon ferroso, e seus resultados foram correlacionados com teor de fenÃis e flavonoides. As amostras apresentaram baixo conteÃdo fenÃlico total (6,84 a 14,10 mg EAG/g) e elevado teor de flavonoides totais (215,39 a 279,63 mg EQ/g). TambÃm apresentaram boa atividade antioxidante para capacidade antioxidante total (120 mg EAAsc/g) e atividade redutora (0,414 para HEX, valor mais elevado), resultados que foram fortemente relacionados ao teor de flavonoides totais, R2>0,9. No DPPH as fraÃÃes apresentaram aÃÃo prÃ-oxidante para concentraÃÃo acima de 1,5 mg/mL. NÃo foi detectada atividade para quelaÃÃo do Ãon ferroso. A atividade antibacteriana foi testada pelo mÃtodo de difusÃo em Ãgar contra duas Gram-positivas e trÃs Gram-negativas. Nenhuma das amostras nas concentraÃÃes testadas (50 e 100 mg/mL) apresentou efeito bactericida. A atividade anti-inflamatÃria foi avaliada pelos ensaios de edema de pata induzido por carragenina e dextrana, migraÃÃo de leucÃcitos, atividade de mieloperoxidase e dosagem de citocinas. Todas as amostras apresentaram boa atividade anti-inflamatÃria nos ensaios realizados. No edema de pata, inibiram a atividade anti-inflamatÃria no pico do edema, com melhores resultados de HEX (prÃximo a 100%) para carragenina, e CLR (79%) e HEX (77%) para dextrana. HEX tambÃm apresentou o melhor resultado inibitÃrio na migraÃÃo de leucÃcitos, tanto total (71%) quanto diferencial (74%). CLR apresentou melhor valor na atividade da mieloperoxidase (87%). As amostras apresentaram reduÃÃo de IL-1β muito prÃxima, da ordem de 43%. MET nÃo alterou a produÃÃo de IL-10, porÃm HEX e CLR induziram produÃÃo de IL-10, tendo HEX o melhor valor (80%). Tais resultados podem ser justificados pelo elevado teor de flavonoides. S. schroederi, especialmente a fraÃÃo hexÃnica, apresenta potencial uso farmacolÃgico e como antioxidante. No entanto, novos estudos sÃo necessÃrios para esclarecer com maior profundidade os mecanismos envolvidos e isolar as molÃculas bioativas. / Methanol extract (MET) and hexane (HEX) and chloroform (CLR) fractions of brown seaweed Spatoglossum schroederi were evaluated for antioxidant, antibacterial and anti-inflammatory activities. Antioxidant activity was performed by total antioxidant capacity, reducing power, DPPH radical scavenging activity and ferrous ion chelating assay, which results were correlated with total phenol and flavonoid contents. The samples showed low total phenol content (6.84 to 14.10 mg GAE/g) and high total flavonoid content (215.39 to 279.63 mg QE/g). They also showed good antioxidant activity for total antioxidant capacity (120 mg ascorbic acid equivalent antioxidant capacity / g) and reducing activity (0.414 to HEX, the highest value), which results were strongly associated with their total flavonoid content, R2>0.9. For DPPH radical scavenging activity, fractions showed pro-oxidant action to a concentration above 1.5 mg/mL. No activity was detected for ferrous ion chelating assay. Antibacterial activity was tested by agar diffusion method against two Gram-positive and three Gram-negative bacteria. None of the samples at the concentrations tested (50 and 100 mg/mL) showed bactericidal effect. Anti-inflammatory activity was evaluated by paw edema induced by carrageenan and dextran, leukocyte migration, myeloperoxidase activity and cytokine measurements. All samples showed good anti-inflammatory activity in such tests. In paw edema, anti-inflammatory activity inhibited at the peak edema, with better results for HEX (near 100%) for carrageenan, and for CLR (79%) and HEX (77%) for dextran. HEX also showed the best results in inhibition of leukocyte migration, both total (71%) and differential (74%). CLR showed the best value in myeloperoxidase activity (87%). The samples showed a very close reduction in IL-1β, nearby 43%. MET did not affect production of IL-10, but HEX and CLR induced production of IL-10, HEX having the best value (80%). Such results can be explained by flavonoids high content. S. schroederi, especially hexane fraction, has potential for pharmacologic and antioxidant uses. However, further studies are needed to elucidate the metabolic pathways involved and to isolate the bioactive molecules.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Oxidase Alternativa (AOX) em plantas à codificada por uma pequena famÃlia multigÃnica de origem nuclear (DNA genÃmico). Essa famÃlia multigÃnica foi bem estudada em mono e dicotiledÃneas sendo subdividida em duas subfamÃlias: Aox1 e Aox2. Os genes Aox1 sÃo encontrados em mono e eudicotiledÃneas apresentando expressÃo mais relacionada a condiÃÃes de estresses enquanto que os genes Aox2 sÃo encontrados apenas em eudicotiledÃneas com expressÃo constitutiva. VÃrios genes Aox1 e apenas hum gene Aox2 sÃo encontrados na maioria das eudicotiledÃneas estudadas. Nesse trabalho, caracterizou-se a famÃlia multigÃnica da Aox no gÃnero Medicago (Medicago truncatula e Medicago sativa) pertencente à ordem Fabales. Em Medicago truncatula, a famÃlia multigÃnica da Aox foi carcterizada atravÃs de busca por bioinformÃtica em bancos de dados identificando-se 4 genes Aox (Aox1, Aox2a, Aox2b1 e Aox2b2) no genoma dessa espÃcie revelando pela primeira vez uma duplicaÃÃo do gene Aox2b. OligonucleotÃdeos especÃficos desenhados para cada um dos genes foram usados para amplificaÃÃo por PCR, clonagem e seqÃenciamento parcial dos referidos genes em Medicago sativa. A expressÃo gÃnica foi estudada, atravÃs de RT-PCR semiquantitativa, em sementes durante a germinaÃÃo (0, 24 e 48 horas de apÃs embebiÃÃo) e em raÃzes e folhas de Medicago sativa crescidas em meio hidropÃnico de Hoagland e submetidas a diferentes condiÃÃes de estresse (0, 6, 12 e 24 hs apÃs tratamento): controle, Ãcido salicÃlico (0,5 mM), PEG (100 g/L), H2O2 (10 mM) e cisteÃna (0,5 mM). Os resultados revelaram que todos os 4 genes Aox foram detectados em sementes de Medicago sativa, entretanto os genes Aox1, 2b1 e 2b2 apresentaram aumento da expressÃo durante a germinaÃÃo enquanto que o Aox2a mostrou-se constitutivo. Em folhas os genes Aox1, 2a e 2b1 foram detectados em todas as condiÃÃes testadas jà o Aox2b2 foi detectado mais intensamente apenas nas condiÃÃes de estresse. De maneira semelhante ao observado durante a germinaÃÃo os genes Aox1, 2b1 e 2b2 tiveram expressÃo aumentada em resposta a todas as condiÃÃes de estresse. O Aox2a mostrou-se constitutivo, mas foi intensamente expresso. Em raÃzes, todos os genes foram detectados e um perfil semelhante de induÃÃo dos genes Aox1, 2b1 e 2b2 tambÃm foi observado com exceÃÃo do tratamento com PEG onde apenas Aox1 foi induzido. O Aox2a tambÃm se mostrou constitutivo, mas foi fracamente expresso. Com a finalidade de se compreender melhor a co-expressÃo dos genes Aox1, 2b1 e 2b2 em Medicago sativa os promotores foram clonados e seqÃenciados revelando regiÃes idÃnticas entre eles indicando o envolvimento de elementos cis comuns na regulaÃÃo. Esses resultados corroboram com a co-expressÃo induzida por estresse de Aox1/Aox2b observada anteriormente em feijÃo. Contudo, em Medicago sativa, observamos expressÃo diferencial entre tecidos: no tecido radicular os genes Aox1, Aox2a e 2b1 podem sem induzidos por estresses e/ou mostram uma caracterÃstica de expressÃo. Por outro lado, em folhas o gene Aox2b2 diferenciou por apresentar apenas caracterÃstica de gene induzido em condiÃÃes de estresse. / In plants, Alternative Oxidase (AOX) is enconded by small milti gene family located in genomc DNA. This multi gene family was studied in mono and dicots plants being clusterd in two subfamilies: Aox1 and Aox2. Aox1 gene are found in all angiosperms tÃxon presenting gene expression related to stress situations while Aox2 genes are found in dicots plants only and presenting a houkeeping expression. Many Aox1 genes e just one Aox2 are found in the most of dicots studied. However, in Fabales, as cowpea and soybean, is found a profile with two genes Aox2 (Aox2a , Aox2b) and one Aox1 gene. In this work was characterized a multi gene family of Aox genes in Medicago genus (Medicago truncatula e Medicago sativa) belonging to Fabales Order. Data mining in genBanks characterized four Aox genes (Aox1, Aox2a, Aox2b1 and Aox2b2) in Medicago truncatula genome revealing for first time a duplication of Aox2b genes. Specifics primers designed for each Aox gene and then were used to amplification by PCR, cloning and partial sequencing of these genes in Medicago sativa. Gene expression was carried out by semiquantitative RT-PCR in: germination seeds (0, 24, 48 hours of germination), roots and leaves from Medicago sativa grewth in Hoaglendâs medium and applied to disticts stress conditions (0, 6, 12 e 24 hs after treatment): control, salicylic acid (0,5mM), PEG (100g/L), H2O2 (10mM) e cisteÃne (0,5mM). The results revealed that all four Aox genes were detected in seed of Medicago sativa. However, Aox1, Aox2b1 and Aox2b2 genes presented high expression during germination while Aox2a showed constitutive expression. In leaves, Aox1, Aox2a and Aox2b1 were detected in all conditions tested, but Aox2b2 was observed more strong in stress situations only. Simirily observed in germination, Aox1, Aox2b1 and Aox2b2 increased transcripts levels in response to all stress conditions. Aox2a, one more time, had constitutive, but very strong expression. In roots, all genes were detected and a similar induction profile of Aox1, Aox2b1 and Aox2b2 were confirmed less to PEG treatment where just Aox1 was responsive. Aox2a had constitutive expression too, but it was weakly expressed. In order to understand the co-expresion of Aox1, Aox2b1 and Aox2b2 genes, the promoter regions were cloned and sequenced revealing close motifs among them suggesting th involviment of cis-elements in their regulation. Theses resuls corroborate with co-expression stress-induced of Aox1/Aox2b found in cowpea. However, in Medicago sativa, it was observed tissue-specific exression. Aox1, Aox2a and Aox2b1 with characteristics constitutive and induced in seeds germination and roots tissue while in leaves Aox2b2 differed by present stress-induced expression only.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O melhoramento genÃtico convencional de feijÃo-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp] tem como proposta aperfeiÃoar suas propriedades agronÃmicas. Entretanto, a partir de uma preocupaÃÃo mundial, considerando alÃm das necessidades dos agricultores, empresÃrios e exportadores, tambÃm se busca desenvolver cultivares com maior qualidade nutricional para os consumidores. O objetivo geral deste trabalho foi analisar o efeito do melhoramento genÃtico convencional do feijÃo-caupi sobre os atributos nutricionais e propriedades funcionais de importÃncia industrial. Os atributos nutricionais foram avaliados inicialmente por meio da determinaÃÃo da composiÃÃo proximal e de minerais. As mÃdias (% base seca) dos valores de proteÃnas totais, lipÃdios, cinzas, fibra alimentar total e carboidratos digerÃveis foram 22,95; 1,60; 3,84; 17,80 e 53,87, respectivamente. Jà os teores de ferro e zinco foram em mÃdia 4,62 e 3,21 mg/100g de semente, respectivamente. Os genÃtipos com teor proteico acima de 25% apresentaram uma boa digestibilidade in vitro (cerca de 70%) e perfil de aminoÃcidos, inclusive os sulfurados, estando todos presentes em nÃveis acima do recomendado para crianÃas de 3 a 10 anos. Em comparaÃÃo com a soja, foram encontrados nÃveis baixos ou moderados de fatores tÃxicos e/ou antinutricionais nos genÃtipos com destaque em teor de proteÃna, ferro e zinco. Houve uma variaÃÃo no teor dos Ãcidos fenÃlicos (11,18 a 94,60 mg/g de semente), taninos (1,33 a 3,05 mg/g de semente), inibidores de tripsina (30,15 a 40,47 UI/mg de proteÃna), inibidores de quimotripsina (14,21 a 26,43 UI/mg de proteÃna) e lectinas (20.000 a 80.000 UH/Kg de semente). Ao se construir Ãndices de qualidade nutricional dos genÃtipos de feijÃo-caupi, verificou-se que os teores dos antinutrientes estudados podem modificar a classificaÃÃo dos mesmos. No entanto, quando os genÃtipos de feijÃo-caupi sÃo comparados com a soja, uma leguminosa amplamente consumida, percebe-se que esses fatores nÃo sÃo de grande relevÃncia, pois hà mÃtodos de inativaÃÃo e/ou remoÃÃo dos componentes indesejados. Propriedades funcionais promissoras foram encontradas para os genÃtipos avaliados, tais como capacidade de absorÃÃo de Ãgua e Ãleo, geleificaÃÃo e espumabilidade, as quais apontam para uma possÃvel aplicaÃÃo da farinha de feijÃo-caupi na indÃstria alimentÃcia. Baseando-se nos Ãndices de qualidade nutricional por meio das caracterÃsticas nutricionais e bioquÃmicas, os trÃs genÃtipos sugeridos para serem usados como parentais em programas de melhoramento genÃtico e produÃÃo de sementes sÃo: G17 (MNC02-682F-2-6), G03 (BRS ARACÃ) e G01 (BRS- JURUÃ). / Cowpea [Vigna unguiculata (L.) Walp] conventional breeding aims to improve its agricultural characteristics. However, there is a global concern that besides considering the needs of farmers, entrepreneurs and exporters, it is also necessary to develop cultivars with higher nutritional quality for consumers. The aim of this study was to evaluate the effects of conventional breeding of cowpeas upon their nutritional attributes and functional properties of industrial significance. The nutritional attributes were initially evaluated by determination of proximate and minerals composition. The means (% dry basis) of total proteins, lipids, ashes, total dietary fiber and digestible carbohydrates content were 22.95; 1.60; 3.84; 17.80 and 53.87, respectively. Mean values for iron and zinc contents were 4.62 and 3.21 mg/100g of seeds, respectively. Genotypes with protein content over 25% showed good in vitro digestibility (ca. 70%) and amino acid profile, including sulfur amino acids, all being in higher levels than the requirements for 3-10 years old children. The levels of toxic and/or antinutritional factors in the genotypes with better contents of protein, iron and zinc were low to moderate compared to those of soybeans. There were reasonable variations in phenolic acid contents (11.18 to 94.60 mg/g of seeds), tannin (1.33 to 3.05 mg/g of seeds), trypsin inhibitor (30.15 to 40.47 UI/mg protein), chymotrypsin inhibitor (14.21 to 26.43 UI/mg protein) and lectin (20,000 to 80,000UH/kg seeds). By using nutritional quality indexes of cowpea genotypes it was observed that the contents of antinutrients may change the ranking position. Nevertheless, when cowpea genotypes are compared to soybeans, it is observed that these factors are not so relevant considering that this legume seed is safely consumed by animals and humans since there are methods to inactivate or remove them. Promising functional properties were detected in the analyzed genotypes, such as water and oil absorption capacity, gelation and foaming properties. These properties point to a possible utilization of cowpea flour in the food industry. Based upon the nutritional quality indexes, we conclude that the top three genotypes suggested to be used as parentals in cowpea breeding programs are G17 (MNC02-682F-2-6), G03 (BRS-ARACÃ) and G01 (BRS-JURUÃ).

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Moringa oleifera (moringa) à uma espÃcie pertencente à famÃlia Moringaceae que se caracteriza por ser muito resistente a insetos e fungos. Trabalhos prÃvios realizados por nosso grupo de pesquisa revelaram a presenÃa de proteÃnas ligantes à quitina em sementes de moringa, dentre elas a Mo-CBP3, sugerindo uma correlaÃÃo positiva entre essa proteÃna e a resistÃncia da planta. No inÃcio do desenvolvimento da planta, para que ocorra a germinaÃÃo, deve haver a embebiÃÃo da semente, um processo seguido pela exsudaÃÃo. Na exsudaÃÃo, compostos do metabolismo primÃrio e secundÃrio sÃo externalizados da semente, alguns deles exercendo aÃÃo de defesa da nova planta ao impedirem o ataque de herbÃvoros e/ou patÃgenos. O presente trabalho teve como objetivos caracterizar o exsudato de sementes de moringa quanto à composiÃÃo bioquÃmica e atividade biolÃgica e investigar a presenÃa de Mo-CBP3 no exsudato, visando contribuir para o estabelecimento de seu papel fisiolÃgico. Inicialmente, foram estabelecidas as condiÃÃes de exsudaÃÃo, dando Ãnfase ao tempo e solvente. Uma maior exsudaÃÃo de proteÃnas foi observada em sementes embebidas com Ãgua destilada por 24 horas. Esse exsudato mostrou a presenÃa de atividades inerentes a metabÃlitos primÃrios (protease, β-1,3-glucanase, quitinase, inibidor de tripsina e inibidor de papaÃna) e secundÃrios (saponinas e esteroides). Mo-CBP3 foi tambÃm detectada no exsudato, usando anticorpos policlonais anti-Mo-CBP3. A presenÃa de Mo-CBP3 no exsudato de sementes de moringa foi confirmada apÃs este ter sido submetido à cromatografia em matriz de quitina, procedida pela anÃlise atravÃs de dot bloting e eletroforese em gel de poliacrilamida. Os dados obtidos mostraram que o material retido na matriz de quitina corresponde a 0,26% do total de proteÃnas exsudadas, à reconhecido pelo anticorpo anti-Mo-CBP3 e apresenta perfil eletroforÃtico similar ao da Mo-CBP3 purificada de sementes de moringa. Na avaliaÃÃo da atividade deste exsudato frente à fitopatÃgenos, aÃÃo contra fungos nÃo foi detectada, nas condiÃÃes de ensaio empregadas, exceto para Candida parapsilosis que mostrou uma discreta reduÃÃo na taxa de crescimento. Contrariamente, uma potente atividade contra nematoide foi verificada, tendo sido o exsudato de sementes capaz de causar atà 100% de mortalidade para indivÃduos de Meloidogyne incognita em estÃgio de J2. Quando investigada a presenÃa de Mo-CBP3 em raiz, um ÃrgÃo vegetal que apresenta o fenÃmeno de exsudaÃÃo e, tambÃm, à capaz de interagir diretamente com o nematoide, resultados positivos foram encontrados. De fato, Mo- CBP3 està presente em raÃzes de moringa, jà nos estÃgios iniciais do desenvolvimento, conforme resultados mostrados por ELISA e atravÃs da tÃcnica de RT-PCR. Os dados, em conjunto, sugerem que no fenÃmeno da exsudaÃÃo, proteÃnas devem desempenhar funÃÃes essenciais e que, no caso da moringa, Mo- CBP3 jà participa nos estÃgios iniciais do desenvolvimento dessa planta arbÃrea, papel este que pode estar relacionado com a proteÃÃo contra patÃgenos. / Moringa oleifera (moringa) is a species belonging to the family Moringaceae which is characterized as having high resistance to insects and fungi. Previous work carried out by our research group revealed the presence of chitin-binding proteins in moringa seeds, among them Mo-CBP3, suggesting a positive correlation between this protein and the plant resistance. At the onset of the new plant development, for germination to occur, seed imbibition is required, a process followed by exudation. In exudation process, primary and secondary metabolites are released in the medium outside the seeds, some of them protecting the new plant against herbivores and/or pathogens. This study aimed to characterize the chemical composition and biological activities of moringa seed exudate and to investigate the presence of Mo-CBP3 in the exudate, in order to contribute to the establishment of its physiological role. Initially, the best conditions for exudation were established, emphasizing the time and solvent. A higher exudation of seed proteins was observed in distilled water after 24 hours. This exudate showed the presence of activities related to primary (protease, β-1,3- glucanase, chitinase, trypsin inhibitor and papain inhibitor) and secondary (steroid and saponins) metabolites. Mo-CBP3 was also detected in the exudate, using polyclonal antibodies anti-Mo-CBP3. The presence of Mo-CBP3 in the moringa seed exudate was confirmed after chromatography on chitin matrix and analyses by dot blotting and polyacrylamide gel electrophoresis. The data obtained showed that the retained material on the chitin matrix corresponds to 0.26% of the total protein, it is recognized by anti-Mo-CBP3 and has electrophoretic profile similar to that of Mo- CBP3 which was purified from moringa seeds. In the activity tests to pathogens, the seed exudate showed no antifungal activity, under the conditions used, except for Candida parapsilosis which had a slight reduction in its growth rate. In contrast, a potent activity against nematode was found as the seed exudate was able to cause a mortality rate up to 100% of Meloidogyne incognita in J2 stage. When investigated the presence of Mo-CBP3 in moringa hoots, a plant organ that shows the exudation phenomen and is also able to interact directly with the nematode, positive results were found. In fact, Mo-CBP3 is present in moringa hoots, in the initial stages of the plant development, according to the results shown by ELISA and RT-PCR. The data, taken together, suggest that in the exudation phenomen, proteins must play essential roles. In the case of moringa, Mo-CBP3 already participates in the initial stages of development of this tree species, playing a role that must be related to protection against pathogens.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O caju e a castanha, pseudofruto e fruto do cajueiro (Anacardium occidentale L.), apresentam alto valor nutricional, porÃm menos de 10% do pedÃnculo proveniente do beneficiamento da castanha sÃo aproveitados. Uma alternativa para o aproveitamento do bagaÃo de caju seria seu processamento em farinha, a qual poderia ser adicionada ao suco de caju e assim aumentar suas propriedades nutricionais. O objetivo do trabalho foi avaliar a composiÃÃo fitoquÃmica, o potencial antioxidante total e a atividade imunomoduladora do suco de caju adicionado com farinha do bagaÃo de caju maduro (SFM) e verde (SFV). Para tanto, avaliou-se a capacidade antioxidante do suco e das farinhas de caju (clone CCP-76) por dois mÃtodos, ABTS e DPPH. Os compostos fitoquÃmicos determinados foram os polifenÃis, vitamina C, carotenoides, antocianinas e flavonoides amarelos. Os testes in vivo foram realizados com camundongos Swiss machos, provenientes do BiotÃrio Central da UFC. O protocolo experimental foi aprovado pelo Comità de Ãtica em Pesquisa com Animal da UFC (N 102/2011). Para os ensaios toxicolÃgicos, camundongos foram tratados por 19 dias, por via oral, com diferentes doses de SFM e SFV e os parÃmetros fisiolÃgicos como peso do animal, peso relativo dos ÃrgÃos, peroxidaÃÃo lipÃdica e dosagem das enzimas ALT e AST foram determinados. Para avaliaÃÃo da resposta imune humoral e celular, os animais foram imunizados com hemÃcias de carneiro (HC) para determinar o tÃtulo de anticorpos pelo mÃtodo de hemaglutinaÃÃo e posteriormente desafiados com HC, para avaliar a resposta de hipersensibilidade tardia (DTH). Para verificar as diferenÃas significativas entre as mÃdias dos diferentes grupos, aplicou-se o teste ANOVA seguido de Tukey ou Newman-Keuls, considerando as diferenÃas significativas quando p < 0,05. A farinha verde de bagaÃo de caju apresentou a maior capacidade antioxidante e os maiores teores de polifenÃis, constituinte predominante tambÃm na farinha de caju maduro e no suco. NÃo se constatou alteraÃÃes significativas em nenhum parÃmetro avaliado no ensaio toxicolÃgico. Na resposta humoral, o suco de caju e o SFV na dose de 300 mg/kg apresentaram os maiores tÃtulos de anticorpos com aumento de 120,69 e 100% em relaÃÃo ao controle. Jà na resposta celular, o suco, SFM e SFV (dose de 300 mg/kg) induziram um aumento na DTH de 10,66; 10,66 e 11,11%, respectivamente, em relaÃÃo ao controle. O suco adicionado da farinha do bagaÃo do caju em diferentes estÃdios de maturidade pode ser uma alternativa para melhoria da resposta imunolÃgica. No entanto, sÃo necessÃrios estudos complementares para viabilizar essa suplementaÃÃo do suco com as farinhas. / The cashew apple and cashew nut, pseudo fruit and fruit (Anacardium occidentale L.) have high nutritional value, but less than 10% of the cashew apple from the processing of cashew nut is availed. The cashew apple juice added with bagasse flour could therefore be an alternative for the improvement of its nutritional properties. The aim of this study was to evaluate the phytochemical composition, the total antioxidant potential and immunomodulatory activity of cashew apple juice with added of the flour mature bagasse (CAJM) and immature (CAJIM) of the cashew apple. Therefore, we evaluated the antioxidant capacity of juice and flour of cashew apple (clone CCP-76) by two methods, ABTS and DPPH. The phytochemicals compounds quantified were polyphenols, vitamin C, carotenoids, anthocyanins and flavonoids yellow. In vivo tests were performed with male swiss mice, from the animal colony of UFC, with approval by the Ethics Committee on Animal Research (CEPA) under the UFC protocol No. 102/2011. Toxicity tests were carried out on mice treated for 19 days orally with CAJM and CAJIM at different doses. Physiological parameters such as body weight, relative organ to body weight, lipid peroxidation and dosage of the ALT and AST enzymes were determined. To evaluate the humoral and cellular immune response, the treated animals were immunized with sheep red blood cells (SRBC) to determine the antibody titer by hemagglutination method and later challenged with (SRBC) to evaluate the delayed type hypersensitivity (DTH) reaction. To analyze the significant differences between the means of different groups, we applied the ANOVA followed by Tukey or Newman-Keuls and differences were considered significant at p < 0.05. Flour Cashew green bagasse showed the highest antioxidant capacity and the highest levels of polyphenols, also predominant constituent in flour and ripe cashew juice. The ripe flour showed the highest antioxidant capacity and the highest levels of polyphenols, also predominant constituent in ripe flour and cashew apple juice. There were no significant changes in any parameters evaluated in toxicity test. In the humoral response, the cashew apple juice and CAJIM at dose of 300 mg / kg showed higher antibody titer with an increase of 120.69 and 100.00 % compared to the control group. Already in cellular response, juice, SFM and SFV (300 mg / kg) induced an increase in DTH of 10.66, 10.66 and 11.11% respectively, compared to control. The cashew apple juice added with the flour of cashew bagasse in stages of maturity different can be an alternative for improving the immune system. However, further studies are needed to enable this supplementation of juice with flours.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os genes sintÃticos das lectinas das algas marinhas vermelhas Hypnea musciformis (HML) e Bryothamnion triquetrum (BTL) foram clonados em diferentes vetores e transformados em diferentes cÃlulas bacterianas de expressÃo. As lectinas recombinantes foram obtidas a partir da fraÃÃo solÃvel das culturas bacterianas de Escherichia coli Rosetta-gami 2 (DE3) para rHML e BL21 (DE3) para rBTL. Os testes de hemaglutinaÃÃo mostraram que rHML e rBTL sÃo capazes de aglutinar eritrÃcitos de coelho tratados com diferentes enzimas proteolÃticas. As propriedades hemaglutinantes de rHML e de rBTL confirmam o enovelamento correto e o estado funcional das proteÃnas. A caracterizaÃÃo da especificidade de ligaÃÃo a carboidratos da HML, BTL e da rBTL por glycan array mostrou uma especificidade restrita por oligossacarÃdeos complexos contendo o nÃcleo de fucosilaÃÃo (&#945;1-6), com uma preferÃncia particular por N-glicanos nÃo bisectados, bi e tri-antenados de cadeia curta. A presenÃa de Ãcido siÃlico na extreminada nÃo-redutora dos glicanos favorece o reconhecimento. Essa foi a primeira caracterizaÃÃo de lectinas de algas vermelhas por glycan array. Experimentos de STD-RMN com a BTL mostraram uma interaÃÃo com um octassacarÃdeo contendo o nÃcleo de fucosilaÃÃo (&#945;1-6). A atividade tÃxica das lectinas selvagens e recombinantes foi avaliada contra Artemia sp. e contra cÃlulas de adenocarcinoma de pulmÃo (A549). Nos ensaios de citotoxicidade, HML, rHML, BTL e rBTL nÃo mostraram nenhuma toxicidade contra Artemia sp. e somente HML e rHML mostraram uma baixa toxicidade contra cÃlulas de adenocarcinoma de pulmÃo (A549). O primeiro cristal de rBTL foi obtido a um nÃvel de microescala com a ajuda de um robÃt de cristalizaÃÃo e difratou a 15 Ã de resoluÃÃo. / Synthetic genes from the red marine algae Hypnea musciformis (HML) and Bryothamnion triquetrum (rBTL) were cloned into differents vectors and transformed into several bacterial expression strains. The recombinant lectins were obtained from the soluble fraction of bacterial cultures using Escherichia coli Rosetta-gami 2 (DE3) strain for rHML and E. coli BL21 (DE3) strain for rBTL. Haemagglutination tests showed that rHML and rBTL are able to agglutinate rabbit erythrocytes with strong haemagglutination activity only after treatment with papain and trysine indicating that their ligands are not directly accessible at the cell surface. The haemagglutinating properties of rHML and rBTL confirm the correct folding and functional state of the proteins. A study of the specificity of these lectins by glycan array was conducted. HML, BTL and rBTL showed a restricted specificity for complex N-glycans with core (&#945;1-6) fucose. A more detailed analysis of the specificity of these lectins showed a preference for non bisecting N-glycans, bi- and tri-antennary branching sugars with short chains. Addition of Sialic acid at the non-reducing end of N-glycans favors their recognition by the lectins. This is the first characterization of lectins from red algae by glycan array. An interaction between BTL and a core (&#945;1-6) fucosylated octasaccharides was also observed by STD-NMR. The toxic activity of wild and recombinant lectins were evaluated against Artemia sp. and the human lung adenocarcinoma cell line (A549). In cytotoxicity assays, HML, rHML, BTL and rBTL showed no toxicity against Artemia sp. Only HML and rHML showed a low cytotoxic activity against cell line (A549). The first crystal of rBTL was obtained in micro-scale level using a robot and diffracted at 15 Ã.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A dengue à considerada, hoje, a arbovirose mais importante do mundo, tendo distribuiÃÃo e ressurgÃncia em todos os continentes e aumento das Ãreas de incidÃncia devido Ãs mudanÃas climÃticas. Um dos motivos que a torna tÃo importante à ausÃncia de uma vacina eficaz para os quatro sorotipos do vÃrus. Assim, para o controle dessa doenÃa à necessÃrio que haja o combate ao vetor, o mosquito Aedes aegypti. Os atuais programas de combate ao mosquito dispÃem de inseticidas sintÃticos, contudo o surgimento de populaÃÃes resistentes a esses inseticidas representa um entrave ao combate deste mosquito. Desta forma, torna-se necessÃria a busca por novas molÃculas inseticidas ou capazes de potencializar o efeito tÃxico dos inseticidas atuais. Assim, o presente trabalho teve por objetivo a obtenÃÃo de inibidores de tripsina de sementes de Leucaena leucocephala e avaliaÃÃo do potencial inseticida dessas molÃculas sobre as larvas do mosquito Ae. aegypti. Para isso, as proteÃnas presentes nas sementes de L. leucocephala foram extraÃdas, fracionadas e submetidas à cromatografia de afinidade a anidrotripsina acoplada a sepharose 4B, para a obtenÃÃo de uma fraÃÃo rica em inibidores de tripsina denominada sLlTi, a qual foi caracterizada bioquimicamente e utilizada em concentraÃÃo de 0,3 mg/mL nos ensaios de desenvolvimento das larvas do mosquito. A caracterizaÃÃo bioquÃmica do sLlTi permitiu concluir que os inibidores sÃo termorresistentes (a atividade foi mantida apÃs aquecimento por 30 min. a 100 ÂC), apresentam considerÃvel resistÃncia ao agente redutor (DTT), tendo decaimento da sua atividade inibitÃria frente a tripsina apenas quando incubado com 100 mM de DTT por 120 min, o mesmo, tambÃm, à resistente Ãs variaÃÃes de pH na faixa de 2 a 10. Os zimogramas reversos revelaram a presenÃa de bandas proteicas com massa molecular aparente de 20 kDa. Testes biolÃgicos in vitro mostraram que o sLlTi apresenta atividade inibitÃria superior a 90% frente a tripsina e 70% frente ao homogenato intestinal de larvas de Ae. aegypti. ApÃs a realizaÃÃo de eletroforese bidimensional, foi possÃvel a visualizaÃÃo de isoformas com pI entre 4 e 7, aproximadamente. Esses inibidores sÃo capazes de inibir as proteases de larvas de Ae. aegypti in vivo em 56%, causando retardo no desenvolvimento e cerca de 70% de mortalidade. Assim, o sLlTi possui potencial aÃÃo inseticida contra o mosquito vetor da dengue. / Dengue fever is currently the most important arboviral disease in the world, being widely distributed among the continents and having increased incidence areas due to climate change. One of the reasons that makes it so important is the absence of an effective vaccine against the four virus serotypes. So, to control this disease is necessary to fight the disease vector, the mosquito Aedes aegypti. Nowadays, health programs use synthetic insecticides to control the mosquito populations. However, the emergence of resistant populations to these insecticides is an obstacle to combating this mosquito. Thus, it is necessary to search for new insecticides or molecules capable of enhancing the toxic effect of current insecticides. The present study aimed to obtain trypsin inhibitors from Leucaena leucocephala seeds and evaluate the insecticidal potential of these molecules against Ae. aegypti larvae survival and development. For this, the proteins of L. leucocephala seeds were extracted, fractionated and subjected to anhydrotrypsin affinity chromatography to obtain a trypsin-enriched fraction (called sLlTi), which was biochemically characterized and used at a concentration of 0.3 mg/mL in assays of larvae development. Biochemical characterization of sLlTi concluded that the inhibitors are heat resistant (the activity was retained after heating for 30 min at 100  C), showed considerable resistance to the reducing agent DTT and reduction of their inhibitory activity against trypsin was demonstrated only when incubated with 100 mM DTT for 120 min. The inhibitor is also resistant to pH changes in a range from 2 to 10. The reverse zymograms revealed the presence of protein bands with apparent mass near 20 kDa. Biological testing in vitro showed that the sLlTi showed trypsin inhibitory activity greater than 90% and that sLlTi is also capable to inhibit Ae. aegypti digestive enzymes by 70%. After two-dimensional electrophoresis isoforms with pI ranging from 4 to 7, approximately, were observed. These inhibitors were able to inhibit proteases of Ae. aegypti in vivo by 56%, and was capable to delay the larval development after incubation for 10 days. Thus, sLlTi contains proteins with promising insecticidal action against dengue vector.

A lectina da alga marinha vermelha Amansia multifida, foi investigada com respeito à sua especificidade e afinidade por estruturas de carboidratos complexos. A cinÃtica da interaÃÃo em tempo real da lectina solÃvel com vÃrias glicoproteÃnas imobilizadas, e a inibiÃÃo destas interaÃÃes por oligomanosÃdeos, foram analisadas atravÃs da tecnologia de ressonÃncia plasmÃnica de superfÃcie. A lectina exibiu uma certa preferÃncia pelo monossacarÃdeo manose e a sua interaÃÃo por di-tri e pentamanosÃdeos foi mais expressiva. A lectina de A. multifida interagiu com glicopeptÃdeos Man5 a Man8â asparagina, e a alta afinidade da lectina pelas referidas estruturas, foi evidenciada quando da anÃlise da interaÃÃo com glicoproteÃnas tais como: lactotransferrina bovina e ribonuclease b. De acordo com os resultados obtidos com a coluna de Sepharose6B com lectina de A. multifida imobilizada, o baixo reconhecimento sobre a aglutinina de soja, confirma o nÃo reconhecimento sobre a estrutura Man 9, e descarta a capacidade de associaÃÃo da lectina com uma estrutura que exiba trÃs resÃduos de manose ligados em &#61537;-1,2 na extremidade do glicano. Estudos farmacolÃgicos envolvendo a lectina de A. multifida complementaram este trabalho, quando foram testadas as atividades analgÃsica e antiinflamatÃria em camundongos. Os resultados indicaram que essa proteÃna produziu um efeito analgÃsico nos trÃs tipos de modelo de dor utilizados. Nos testes das contorÃÃes abdominais e de formalina, um efeito dose dependente foi evidenciado. A administraÃÃo por via intraperitoneal e por via oral, apresentou resultados que mostraram ser a primeira via de tratamento a mais efetiva. Com o objetivo de comparar a aÃÃo analgÃsica da lectina de A. multifida com um narcÃtico analgÃsico de aÃÃo central, morfina, foi realizado o teste da placa quente utilizando um tratamento prÃvio com naloxona, um antagonista opiÃide. A lectina de A. multifida, mostrou reduÃÃo no seu efeito antinociceptivo na presenÃa de naloxona, sugerindo portanto, que sua atividade envolve a ativaÃÃo de receptores opiÃides à semelhanÃa da morfina. Um efeito antinociceptivo a nÃvel central, tambÃm foi observado quando a lectina aumentou a duraÃÃo do tempo de sono induzido por barbitÃrico. A aÃÃo antiinflamatÃria da lectina de A. multifida foi comprovada no teste de edema de pata utilizando carragenina e dextrano. A participaÃÃo de lectina nos efeitos analgÃsicos observados, foi avaliada com utilizaÃÃo prÃvia de D-manose e avidina, das quais D-manose suprimiu a nocicepÃÃo satisfatoriamente. A lectina de A. multifida mostrou possuir propriedades analgÃsicas de origem perifÃrica e central, sendo esses efeitos mais evidenciados na dor de origem inflamatÃria. / This study aimed to investigate the specificity for simple sugars or glycoproteins of the lectin from the red seaweed Amansia multifida. The interaction kinetics in real time of the soluble lectin with several immobilized glycoproteins and the inhibition of these interactions by oligomanosides were analyzed through surface plasmon resonance technology. The lectin showed somehow preference to the monosaccharide mannose and its interaction with di-tri and pentamanosides was more expressive. The lectin of A. multifida interacted with glycopeptides Man5 to Man8â asparagine, and the high affinity of the lectin for these structures was shown by analyzing the interaction with glycoproteins such as ribonuclease b and bovine lactotransferrin. The results obtained with Sepharose6B column containing immobilized A. multifida and the low recognition of soybean agglutinin corroborate the non-recognition of Man 9, and discard the capacity of association with a structure showing three residues of mannose linked in a-1,2 at the glycan extremity. The results of the pharmacological studies with three models of pain showed that A. multifida lectin caused analgesia. In the abdominal contorsion and formalin tests a dose-dependent effect was observed. The IP route was more effective than the oral route. In order to compare the analgesic action of A. multifida lectin with that of morfine, a narcotic with central action, the hot plate test was conducted after pre-treatment with the opioid antagonist naloxane. The antinociceptive effect of the lectin was reduced at the presence of naloxane, which suggests that its action involves activation of opioid receptors as occurs with morfine. An antinociceptive effect at central level was also observed when the lectin increased the duration of barbituric-induced sleep. The lectin showed anti-inflammatory action by the paw edema test with carrageenan and dextran. The involvement of the lectin in the observed antinociceptive effects was assessed by pre-treatment with D-mannose and avidin. The antinociceptive effect was suppressed by D-mannose. A. multifida lectin was shown to have antinociceptive properties of both central and peripheral origin, being these effects more evident for pain of inflammatory origin

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As algas marinhas sÃo fontes de compostos bioativos para a indÃstria farmacÃutica e dentre esses compostos destacamos as lectinas. O presente trabalho teve como objetivo investigar os efeitos antinociceptivo e anti-inflamatÃrio da lectina da alga marinha verde Caulerpa cupressoides (LCc) no modelo de artrite induzida por zymosan (Zy) na articulaÃÃo temporomandibular (ATM) de ratos. LCc foi extraÃda com tampÃo Tris-HCl 25 mM, pH 7,5 e isolada por cromatografia de troca iÃnica em coluna de DEAE-celulose. Nos ensaios de artrite induzida por Zy, ratos Wistar machos receberam LCc (0,1; 1 ou 10 mg/kg; i.v.) ou salina estÃril, 30 min antes da injeÃÃo intra-articular (i.art.) de Zy (2 mg/art., 40 ÂL) na ATM esquerda. Grupos controles receberam salina estÃril (40 ÂL; i.art.), indometacina (5 mg/kg; s.c) ou morfina (5 mg/kg, s.c.). Grupos de animais receberam LCc (10 mg/kg, i.v.) associada à mucina (100 mg/kg, i.v.), um aÃÃcar inibidor, e outro grupo recebeu somente mucina antes dos estÃmulos. Para analisar o envolvimento da via da HO-1 na artrite, os animais foram prÃ-tratados (3 mg/kg, s.c.) com um inibidor especÃfico do grupo heme (zinco protoporfirina IX â ZnPP IX). Finalmente, para avaliar se o efeito antinociceptivo de LCc estava envolvido na ativaÃÃo do sistema opioide, grupo de animais receberam uma injeÃÃo i.art. (10 &#956;g/art.;15 ÂL) de um antagonista de receptores opioides (naloxona), 35 min antes da injeÃÃo de Zy. ApÃs 5 min, os animais foram prÃ-tratados com LCc (10 mg/kg). A hipernocicepÃÃo mecÃnica foi medida utilizando o mÃtodo de Von Frey elÃtrico no tempo basal e 4 h apÃs a injeÃÃo de Zy. Na 6a hora, os animais foram eutanasiados e suas ATM lavadas para coleta do lavado sinovial e realizaÃÃo da contagem total de cÃlulas e dosagem de mieloperoxidase (MPO). Posteriormente, as ATM foram removidas para as anÃlises histolÃgicas e imunohistoquÃmica (TNF-&#945;, IL-1&#946; e HO-1), alÃm da dosagem de IL-1&#946; no tecido periarticular e gÃnglio trigeminal. O prÃ-tratamento com LCc (0,1, 1 ou 10 mg/kg; i.v.) reduziu significativamente a hipernocicepÃÃo induzida por Zy (81, 83 e 89,5%, respectivamente) e inibiu o influxo de leucÃcitos (77,3, 80,7 e 98,5%, respectivamente) comparado ao grupo Zy, sendo confirmada pela atividade de MPO. O aÃÃcar inibidor (mucina) nÃo foi capaz de inibir o efeito anti-inflamatÃrio e antinociceptivo de LCc na artrite induzida por Zy. Observamos que durante a anÃlise histolÃgica da ATM, os animais tratados com LCc apresentaram uma reduÃÃo significativa do influxo celular na membrana sinovial. AlÃm disso, LCc reduziu significativamente a produÃÃo de IL-1&#946; no tecido periarticular e a expressÃo de IL-1&#946;, TNF-&#945; e HO-1 na membrana sinovial durante o ensaio de imunohistoquÃmica. O tratamento com ZnPP IX nÃo foi capaz de inibir os efeitos de LCc, mostrando que sua aÃÃo antinociceptiva e anti-inflamatÃria nÃo ocorre pela via da HO-1. AlÃm disso, o tratamento com naloxona nÃo reverteu o efeito de LCc. Portanto, LCc apresentou efeito antinociceptivo e anti-inflamatÃrio no modelo de artrite induzida por Zy, reduzindo a produÃÃo de citocinas primÃrias (TNF-&#945; e IL-1&#946;), porÃm sua aÃÃo antinociceptiva nÃo ocorre pelo mecanismo opioide perifÃrico. / Seaweeds are sources of bioactive compounds for the pharmaceutical industry and among these compounds include the lectins. The present study aimed to investigate the effects antinociceptive and anti-inflammatory of the lectin of the green seaweed Caulerpa cupressoides (CcL) on model of zymosan-induced arthritis in the temporomandibular joint (TMJ) of rats. CcL was extracted with 25 mM Tris-HCl buffer pH 7.5 and isolated by ion exchange chromatography on DEAE-cellulose column. In tests of arthritis induced by Zy, male Wistar rats received CcL (0.1, 1 or 10 mg/kg, i.v.) or sterile saline, 30 min before the intra-articular (i.art.) injection of Zy (2 mg/art.; 40 &#956;L) into the left TMJ. Control groups received saline (40 &#956;L; i.art.), indomethacin (5 mg/kg, s.c.) or morphine (5 mg/kg, s.c.). Groups of animals received CcL (10 mg/kg; i.v.) associated with mucin (8 mg/kg; i.v.), a sugar inhibitor, and another group received only mucin before stimulus. To analyze the involvement of HO-1 pathway in arthritis, animals were pretreated (3 mg/kg, s.c.) with a specific inhibitor of heme (zinc protoporphyrin IX-ZnPP IX). Finally, to evaluate the analgesic effect of CcL in the activation of the opioid system, group of animals received an injection i.art. (10 &#956;g/art.; 15 ÂL) of the opioid receptor antagonist (naloxone), 35 min before injection of Zy. After 5 min, the animals were pretreated with CcL (10 mg/kg). Mechanical hypernociception was recorded before the i.art. injections of Zy or saline and after 4h. After 6 hour, the synovial fluid was collected to perform cell counting and myeloperoxidase (MPO) assay. Also, TMJ tissues were excised to perform histopathological, immunohistochemistry (TNF-&#945;, IL-1&#946; e HO-1) and cytokine assays (IL-1&#946;) in the periarticular tissue and trigeminal ganglion. Pretreatment with CcL (0.1, 1 or 10 mg/kg; i.v.) inhibited (p<0.05) the nociceptive response (81, 83, and 89.5%, respectively) and reduced the influx of leukocytes (77.3, 80.7 and 98.5%, respectively) compared to Zy group, as demonstrated by MPO activity. Sugar inhibitor (mucin) did not inhibit the anti-inflammatory and antinociceptive effect of CcL in arthritis induced by Zy. We observed that during the histological analysis of ATM, animals treated with CcL showed a significant reduction of cell influx in the synovial membrane. Furthermore, CcL significantly reduced the production of IL-1&#946; in the periarticular tissue and expression of IL-1&#946;, TNF-&#945; and HO-1 in the synovial membrane during immunohistochemistry assay. Treatment with ZnPP IX was not able to inhibit the effect CcL, indicating that its antinociceptive and anti-inflammatory action did not occur HO-1 pathway. In addition, treatment with naloxone did not reverse the effect of CcL. Therefore, CcL showed antinociceptive and anti-inflammatory effect on model of Zy-induced arthritis, reducing the production of primary cytokines (TNF-&#945; and IL-1&#946;), however its antinociceptive action did not occur by peripheral opioid mechanism.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A exsudaÃÃo à um mecanismo de defesa apresentado por sementes que consiste na liberaÃÃo de molÃculas para o solo durante o processo de germinaÃÃo. Esses exsudatos, compostos essencialmente de proteÃnas e metabÃlitos secundÃrios, atuam interferindo no desenvolvimento de microrganismos, representando fontes para prospecÃÃo de molÃculas de defesa com potencial biotecnolÃgico, voltadas ao controle de patÃgenos de solo. Nesse contexto, a soja se destaca [Glycine max (L.) Merrill] como sistema ideal ao estudo das interaÃÃes planta-patÃgeno, visto seu grande valor econÃmico e o alto teor de proteÃnas de seus grÃos. Este trabalho teve como objetivos caracterizar a composiÃÃo dos exsudatos de sementes de dois cultivares de soja, com diferentes Ãndices de desempenho em resposta ao nematoide das galhas Meloidogyne incognita, e avaliar seus efeitos in vitro e in vivo sobre este fitopatÃgeno. Exsudatos foram obtidos a partir de sementes de soja (cultivares BRS-Pala: suscetÃvel; BRS-Macota: resistente), embebidas em acetato de sÃdio 0,1 M, pH 5,0, por 18 horas. A anÃlise proteÃmica comparativa livre de gel que permitiu a identificaÃÃo de diversas proteÃnas relacionadas à defesa vegetal, tais como a aglutinina da soja, os inibidores de tripsina do tipo Kunitz e Bowman-Birk e proteÃnas relacionadas à patogÃnese. A anÃlise qualitativa de metabÃlitos secundÃrios nos exsudatos revelou a presenÃa de fenÃis, triterpenÃides, saponinas, flavonas, flavonÃis e xantonas em ambas as cultivares. Posteriormente, estes exsudatos foram dialisados em membranas de diÃlise com exclusÃo de 3,5 kDa e submetidos à dosagem de proteÃnas bioativas. As atividades hemaglutinante (609,52 UH/mgP), inibitÃrias de tripsina (4,81 mg tripsina inibida/mgP) e papaÃna (30,48 UI/mgP), proteolÃtica (1,52 UAPr/mgP.min) e &#946;-1,3-glucanÃsica (58,26 &#951;katGLU/mgP) foram maiores para a cultivar BRS-Pala. Jà a atividade peroxidÃsica (0,218 UAP/mgP.min) predominou na cultivar BRS-Macota, A avaliaÃÃo da atividade nematicida sobre ovos e juvenis de segundo estÃdio (J2), usando exsudatos dialisados, revelou que ambos os exsudatos sÃo capazes de inibir a eclosÃo de M. incognita, bem como a mobilidade dos juvenis desta espÃcie. Esta propriedade nematostÃtica se reflete na infectividade do parasita, reduzida pelo tratamento com proteÃnas exsudadas na concentraÃÃo de 0,13 mg/mL. Os resultados reforÃam a ideia de que a exsudaÃÃo das sementes està relacionada à defesa constitutiva deste ÃrgÃo vegetal, sugerindo que proteÃnas presentes nos exsudatos podem promover proteÃÃo contra nematoides durante o processo germinativo. / Exudation is a defense mechanism presented by seeds, which release molecules to the soil during the germination process. These exudates, mainly composed by proteins and secondary metabolites, act interfering with the development of microorganisms. They represent a source of defense molecules with biotechnological potential to control soil-borne pathogens. In this context, soybean [Glycine max (L.) Merrill] stands as an ideal system in the study of plant-pathogen interaction due to its great economic value and the high content of seed proteins. The experimental activities presented in this thesis aimed to characterize the composition of seed exudates from two different soybean cultivars, which show different levels of performance in response to the root-knot nematode Meloidogyne incognita. Furthermore, the in vitro and in vivo effects of the seed exudates on this pathogen were evaluated. For this purpose, the exudates were obtained from soybean seeds (BRS-Pala:susceptible; BRS-Macota:resistant), soaked in 0.1 M sodium acetate, pH 5.0, during 18 hours. The gel-free proteomic analysis allowed identification of several defense-related proteins such as soybean agglutinin, Kunitz and Bowman-Birk trypsin inhibitors, and pathogenesis-related proteins. The qualitative analysis of secondary metabolites in the exudates also revealed the presence of phenols, triterpenoids, saponins, flavones, flavonols, and xanthones in both cultivars. The above exudates were dialyzed in 3.5 kDa cut-off membranes and assayed for bioactive proteins. The hemagglutinating (609.52 HU/mgP), trypsin (4.81 mg trypsin inhibited/mgP) and papain (30.48 IU/mgP) inhibitor, proteolytic (1.52 UAPr/mgP.min), and &#946;-1, 3-glucanase (58.26 &#951;katGLU/mgP) activities were higher for BRS-Pala. Otherwise, the peroxidase activity (0.218 UAP/mgP.min) predominated in BRS-Macota. The evaluation of anti-nematode activity against eggs and second stage juveniles (J2) revealed that both exudates were able to inhibit the hatching of M. incognita eggs as well as the J2 mobility. This nematostatic property is reflected in the infectivity of the parasite, reduced by the exuded protein at 0.13 mg/mL concentration. The results reinforce the idea that the exudation is related to the constitutive defense of the seeds, suggesting that the proteins present in the exudates can contribute to the protection against nematodes and possibly other plant enemies during the germination process.