Embora a importância do controle dos níveis de amônia em biotérios seja reconhecida há muitos anos e várias consequências da exposição por inalação em espécies convencionais de laboratório sobre o trato respiratório tenham sido descritas na literatura, existem poucos estudos que avaliaram os efeitos sistêmicos e subclínicos nos animais. O presente trabalho teve por objetivo avaliar o perfil hematológico e bioquímico em ratos Wistar alojados sob condições ambientais adversas (ammonia build-up) com tempo de permanência de 5 (Grupo 1, n=20), 10 (Grupo 2, n=20) ou 15 dias (Grupo 3, n=20). A elevação dos níveis de poluentes no ambiente de alojamento experimental foi obtida através da redução da taxa de ventilação e da colocação de maravalha servida, de forma a alcançar-se uma concentração média aproximada de 90 ppm de amônia, variando de 76 a 106 ppm. A análise hematológica revelou que os animais do Grupo 1 apresentaram valores de hemoglobina e hematócrito significativamente maiores em relação todos os outros grupos. Com relação aos parâmetros bioquímicos, novamente observou-se que o Grupo 1 diferiu estatisticamente do Grupo Controle, do Grupo 2 e do Grupo 3 para creatinina e para gama-glutamiltransferase. Diferenças entre o Grupo 1 e os demais grupos experimentais foram encontradas para fosfatase alcalina, alanina aminotranferase, amilase e glicose. Os demais parâmetros apresentaram resultados variáveis e aparentemente inconclusivos. Concluindo, a análise dos resultados indica que a maioria das alterações no perfil hematológico e bioquímico de animais expostos ocorre entre o dia 0 e o dia 5 e posteriormente retorna aos valores basais, devido a uma possível resposta adaptativa ao aumento da concentração de amônia atmosférica no ambiente de alojamento. / Although the importance of controlling the levels of ammonia in animal facilities has been acknowledged for many years now, and several consequences of exposure by inhalation in conventional laboratory species on the respiratory tract have been described in the literature, there are few studies assessing the systemic and subclinical effects on animals. This study aimed at assessing the hematological and biochemical profile in Wistar rats housed under adverse environmental conditions (ammonia build-up) with stay time of 5 (Group 1, n=20), 10 (Group 2, n=20) or 15 days (Group 3, n=20). The increase in the levels of pollutants in the experimental environment housing was achieved by reducing the rate of ventilation and the placement of soiled bedding served, in order to achieve an average concentration of ammonia of approximately 90 ppm, ranging from 76 to 106 ppm. The hematological analysis revealed that animals in Group 1 had hemoglobin and hematocrit values significantly higher than all other groups. Concerning the biochemical parameters, once again it was observed that Group 1 differed statically from the Control Group, Group 2 and Group 3 regarding creatinine and gamma-glutamyltransferase. Differences between Group 1 and the other experimental groups were found regarding alkaline phosphatase, alanine aminotransferase, amylase and glucose. The other parameters showed variable results, apparently inconclusive. In conclusion, the analysis of the results indicates that most changes in the hematological and biochemical profile of the animals exposed occur between day 0 and day 5, and then return to baseline, in reason of a possible adaptive response to the increase of atmospheric ammonia concentration in the environment housing.

Os mecanismos envolvidos nas atividades toxicológicas e/ou farmacológicas dos compostos orgânicos de selênio são pouco conhecidos. Os compostos orgânicos de selênio (disseleneto de difenila e ebselen) e organotelúrio (ditelureto de difenila) foram alvo dos trabalhos realizados“in vitro”, neste estudo. Os compostos organocalcogênios apresentaram efeitos diversos sobre o influxo de 45Ca2+ medido em sinaptossomas de cérebro de rato, dependendo das condições e agentes despolarizantes usados. Ebselen, (PhSe)2 e (PhTe)2 alteram a captação de 45Ca2+ de maneira distinta quando expostos a aminopiridina ou KCl. Enquanto (PhTe)2 inibe a captação de cálcio em todas as condições experimentadas, (PhSe)2, apresenta este efeito apenas quando incubado em condições basais ou sob a ação de aminopiridina. Ebselen, por sua vez, aumenta a captação de cálcio em altas concentrações em condições basais e sob a ação de aminopiridina, porém, apresenta efeito inverso quando os sinaptossomas são despolarizados por KCl. Ebselen evitou a inibição da captação de 45Ca2+ “in vitro” provocada por cloreto de mercúrio(HgCl) em sinaptossomas de cérebro de rato em condições basais do ensaio, no entanto, ebselen não afetou a inibição da captação de glutamato “in vitro” por HgCl, indicando que ebselen pode atuar dependendo das proteínas-alvo consideradas.Os compostos de mercúrio, MeHg e HgCl, inibiram a captação de glutamato em córtex cerebral de ratos de 17 dias e ebselen reverteu somente o efeito do MeHg porém, não, o do HgCl. Disseleneto de difenila não alterou os parâmetros avaliados na exposição de ambos os compostos de mercúrio.Os compostos de mercúrio estudados provocaram a morte celular das fatias de córtex, porém, ebselen protegeu as fatias dos efeitos lesivos provocados por MeHg e não pelo HgCl.

Given the concern for environmental preservation, by cause of human activities and its profound impacts, research works have led to a shift from conventional said agriculture using agrochemicals and fertilizers to agriculture that pursues ways less harmful to the environment management. The objective was to prospect and also isolate the bacteria with proper characteristics for growth benefits from the rhizosphere sugarcane soil and its subsequent use in production of microbial inoculants. As to reach this purpose, 24 soil samples from sugarcane mills in the state of Alagoas were collected and isolated for qualification and quantification of soluble phosphorus, production of exopolysaccharides (EPS), verification of biofilm formation, production of indole acetic acid (IAA), cytokinins and gibberellins production, rooting induction and sugarcane budding. The used methodology for phosphate solubilization was performed according to the recommendations of the authors referenced in the bibliography. According to the results obtained for phosphate solubilizing growth medium (Nbrip) showed that 17% had high capacity and inorganic phosphate solubilizing growth medium capacity Reached 67%. The others results stayed between low or absence of solubilization. Of the isolates tested, 75 % Were able to grow in medium with low water activity Aw 0919 at 30 °C and the appearance of colonies was Observed five days after inoculation. Results for EPS production at room temperature showed that 4% of the isolates surveyed achieved a hight production, followed by 42% which has achieved average production and the remaining 54% of low production. Analysing biofilm production capacity in TSB medium in absorbance of 540 nm were observed that 4% of the isolates had a higher frequency for biofilm formation, 83% achieved average production and 13% of isolates with low frequency output. Larger quantity for production of IAA in the presence precursor L-tryptophan was observed at the end of 72 hours despite significant differences among the isolates, except for isolate 7 which was considered high 51.62194 μg.mL-1 and isolated 6 to lower production 14.98113 μg.mL-1, all other isolates were classified as high producers. Among the isolates tested 25% were able to synthesize cytokines and 83.33% synthesized gibberellin compared to the control. All isolates, compared in control, increased in size which suggested the action of one or both hormones in question at the same time. The sprouting of inoculated buds compared in control to those without inoculation, the RB72454 variety of sugarcane, in end of the evaluation, in the presence of isolated samples 4, 16, 21 and 24 demonstrated that only 25% of the buds had sprouted and grew roots, not differing significantly from the control. As the result inoculation significantly increased a sprouting rate up to 83.33% of the isolates, and the best results obtained were in samples 7, 12, 19 and 20 (94.5, 100, 95 and 94.5% respectively) in both the number of sprouted buds as for speed emission of shoots and roots. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Tendo em vista a preocupação com a preservação ambiental, devido à constatação de que as atividades antrópicas podem causar profundos impactos, os trabalhos de pesquisa têm levado a uma mudança da agricultura dita convencional, que utiliza produtos agroquímicos e fertilizantes, para uma agricultura que busca formas de manejo menos nocivos ao ambiente. Objetivou-se a prospecção e o isolamento de bactérias com a características para promoção de crescimento a partir do solo rizosfera de cana – de – açúcar para serem utilizados na produção de inoculantes microbianos. Foram coletadas 24 amostras de solos provenientes de usinas sucroalcooleiras do Estado de Alagoas, de onde foram retirados os isolados para qualificação e quantificação de fósforo solúvel, produção de Exopolissacarídeos (EPS) e a verificação da formação de biofilme, produção de ácido indolacético (AIA), Produção de citocininas e giberelinas, Indução de enraizamento e brotação de gemas de cana-de-açúcar. A metodologia utilizada para solubilização de fosfato foi realizada de acordo com as recomendações dos autores. Os resultados obtidos para solubilização de fosfato em meio Nbrip demonstraram que 17% apresentaram alta capacidade de solubilização de fosfato inorgânico e 67% alcançaram média capacidade. Os demais estão entre baixa e ausência de solubilização. Dos isolados testados, 75% foram capazes de crescer em meio com atividade de água reduzida 0,919 Aw, a 30°C, o aparecimento de colônias foi observado cinco dias após a inoculação.Os resultados para produção de EPS em temperatura ambiente demonstraram que 4% dos isolados pesquisados atingiram uma ótima produção, seguido de 42% que obtiveram média produção e os demais, 54%. Quanto à capacidade de produção de biofilme em meio TSB em absorbância de 540 nm, 4% dos isolados obtiveram maior freqüência para formação de biofilme, 83% atingiram média produção e 13% dos isolados com baixa frequência de produção. As maiores quantidades para produção de AIA, na presença do precursor L-triptofano foi evidenciada ao final de 72 horas, apesar das diferenças significativas entre os isolados estudados, exceto o isolado sete que foi considerado elevado 51,62194 μg.mL-1 e o isolado seis com a produção mais baixa 14,98113 μg.mL-1, os demais isolados foram classificados altos produtores. Dentre os isolados testados 25% foram capazes de sintetizar citocininas e 83,33% sintetizaram giberelinas comparados ao controle. Todos os isolados, comparados a testemunha, aumentaram em tamanho, sugerindo a ação de um ou dos dois hormônios em questão. Na brotação das gemas inoculadas comparados ao controle sem inoculação da variedade RB72454 de cana-de-açúcar, ao final da avaliação, na presença dos isolados 4, 16, 21 e 24, apenas 25% das gemas haviam brotado e emitido raízes, não diferindo significativamente do controle. A inoculação aumentou significativamente a velocidade de brotação para 83,33% dos isolados, sendo os melhores resultados obtidos para 7, 12, 19 e 20 (94.5, 100, 95 e 94.5% respectivamente) tanto para o número de gemas brotadas como para velocidade de emissão de brotos e raizes.

The intimal hyperplasia remains as a challenge to vascular interventions because it causes vessel lumen reduction with weaken blood flow to the tissues, leading to cardiovascular complications such as myocardial infarction, stroke and limb amputations. Moringa oleifera has shown efficiency to reduce serum cholesterol by 52% and 86% of atherosclerotic plaque in the carotid arteries of rabbits with hypercholesterolemic regimen, showing thus considerable potential to prevent cardiovascular diseases and myointimal hyperplasia. The Moringa oleifera has a powerful antioxidant activity, effects: anti-inflammatory, hipolipidemic, hypocholesterolemic, anti-hypertensive, anti-tumor and anti-diabetes responses, resulting from its polyphenol components. These effects may converge for inhibiting myointimal hyperplasia. The sample consisted of rabbits with atherosclerosis induced by egg yolk and endothelial denudation of the right external iliac artery by balloon. The Group “Cz” was treated with cilostazol 50 mg/day. Group “Mo” treated with 200 mg/kg body weight daily of Moringa and Group “SF” was treated with 10 ml/day, all orally treated for five weeks. Primary variable was the mean difference of myointimal hyperplasia. The secondary variables were the average vessel wall thickness in each group, the means of total cholesterol, triglycerides, HDL, LDL, VLDL and immunohistochemistry: the average area of C4d and monoclonal HHF35. The sample was estimated in 30 rabbits divided in three groups of ten animals. As results, the average difference of myointimal hyperplasia assessed by ANOVA analysis of variance (one way) resulted in a statistically significant difference between groups (p<0.0001), with higher average reduction of myointimal wall thickness in the group “Cz”, what shows a better response to treatment with cilostazol. The evaluation of the initial and final average of total cholesterol by analysis of variance; ANOVA (two way) between the groups showed statistically significant results (p=0.0043), also presenting greater reduction by treatment with cilostazol. HDL initial and final means in each group evaluated by analysis of variance; ANOVA (two-way) between the groups, showed a statistically significant difference (p=0.0044), reflecting higher average or increased HDL by treatment with Moringa. As conclusion, the average difference of myointimal hyperplasia in the iliac artery of rabbits with arteriosclerosis, treated with Moringa oleifera compared to cilostazol, presented a greater reduction in cilostazol treatment group. / A hiperplasia da íntima permanece um desafio às intervenções vasculares por provocar redução da luz dos vasos com diminuição do fluxo sanguíneo aos tecidos, levando a complicações cardiovasculares como infarto do miocárdio, acidente vascular cerebral e amputação de membros. A Moringa oleifera tem mostrado reduzir o colesterol sérico em 52% e a placa aterosclerótica em 86% nas carótidas de coelhos em dieta hipercolesterolêmica, mostrando assim, potencial considerável para prevenir doenças cardiovasculares e a hiperplasia miointimal. A Moringa oleifera apresenta potente ação antioxidante, efeitos: anti-inflamatório, hipolipemiante, hipocolesterolemiante, anti-hipertensivo, antitumoral e antidiabético, resultantes de seus componentes polifenóicos. Esses efeitos podem convergir para a inibição da hiperplasia miointimal. A amostra foi constituída de coelhos com aterosclerose induzida pela gema de ovo e desnudação endotelial da artéria ilíaca externa direita por balão. O Grupo (Cz) foi tratado com Cilostazol 50 mg/dia, o Grupo (Mo) tratado com 200 mg/kg de peso corporal de moringa ao dia e o Grupo (SF) tratado com 10 mL/dia, todos tratados por via oral durante cinco semanas. A variável primária foi a diferença de média de hiperplasia miointimal. As variáveis secundárias foram a média de espessura da parede em cada grupo, as médias de Colesterol total, Triglicerídeos, HDL, LDL, VLDL e na imuno-histoquímica: a média de área de C4d e de HHF35 monoclonal. A amostra foi estimada em 30 coelhos, divididos em três grupos de dez animais. Nos resultados, a diferença de média de hiperplasia miointimal avaliada por análise de variância ANOVA (one way) resultou em diferença estatísticamente significante entre os grupos (p<0,0001), com maior redução de média de espessura de parede miointimal no grupo (Cz), mostrando melhor resposta ao tratamento com o cilostazol. A avaliação da média inicial e final do colesterol total pela análise de variância; ANOVA (two way) entre os grupos, apresentou resultados estatísticamente significativos (p=0,0043), mostrando também, maior redução pelo tratamento com o cilostazol. A média inicial e final do HDL em cada grupo, avaliados pela análise de variância; ANOVA (two-way), entre os grupos, apresentou diferença estatisticamente significantes (p=0,0044), evidenciando maior média ou aumento de HDL pelo tratamento com a Moringa oleifera. Em conclusão, a diferença de média de hiperplasia miointimal na artéria ilíaca de coelhos com aterosclerose, tratados com Moringa oleifera, comparado com cilostazol, apresentou maior redução no grupo tratado com cilostazol.

Context: miointimal thickening is a early vascular changes, above the sign ateromatosa. Such thickening corresponds to an early stage of atherosclerosis, which can be viewed through the B mode ultrasound; having this thickening prognostic value well demonstrated as a predictor of future vascular events. The grayscale ultrasound was used until recently as a non-invasive method pattern to identify and discriminate the composition of atherosclerotic plaque. An innovative approach of analysis of radio signals emitted by B-mode ultrasound, made possible the development of an ultrasound technique called color ultrasound tissue characterization (CATUS), this is promising in atherosclerotic vulnerable plaque detection and evaluation of his natural history; soon, prospective studies using the analysis provided by this instrument can corroborate the distinction of boards susceptible to rupture and, consequently assist in prevention of cardiovascular events. Objective: To determine the difference of ultrasound tissue characterization (CATUS) compared to B-mode ultrasonography in myointimal hyperplasia. Hypothesis: There is difference in ultrasound tissue characterization compared to B-mode ultrasonography in myointimal hyperplasia. Type of study: experimental, cross-sectional comparative study. Sample: The sample was probabilistic, for convenience, in aortas of 10 albino rabbits of the genus Oryctolagus cuniculus, belonging to New Zeland. Variable: The difference of ultrasound tissue characterization (CATUS) compared to B-mode ultrasound in myointimal hyperplasia. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Contexto: O espessamento miointimal é uma alteração vascular precoce, que precede a placa ateromatosa. Tal espessamento corresponde a um estágio inicial da aterosclerose, que pode ser visualizado por meio da ultrassonografia modo B; tendo este espessamento valor prognóstico bem demostrado como preditor de eventos vasculares futuros. O ultrassom em escala de cinza foi utilizado, até recentemente, como método não invasivo padrão para identificar e discriminar a composição da placa aterosclerótica. Uma abordagem inovadora da análise dos sinais de radiofrequência emitidos pelo ultrassom modo B, tornou possível o desenvolvimento de uma técnica ultrassonográfica em cores denominada caracterização tecidual ultrassonográfica (CATUS), esta é promissora na detecção de placas ateroscleróticas vulneráveis e na avaliação da sua história natural; logo, estudos prospectivos utilizando as análises fornecidas por esse instrumento podem corroborar na distinção de placas susceptíveis à ruptura e, como consequência auxiliar na prevenção de eventos cardiovasculares. Objetivo: Determinar a diferença da caracterização tecidual ultrassonográfica (CATUS) comparada à ultrassonografia modo B na hiperplasia miointimal. Hipótese: Existe diferença na caracterização tecidual ultrassonográfica comparada à ultrassonografia modo B na hiperplasia miointimal. Tipo de estudo: Estudo experimental, transversal e comparativo. Amostra: A amostra foi probabilística, por conveniência, em 10 aortas de coelhos albinos do gênero Oryctolagus cuniculus, pertencendo à raça Nova Zelândia. Variável: A diferença da caracterização tecidual ultrassonográfica (CATUS) comparada ao ultrassom modo B na hiperplasia miointimal.

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This case-control study aimed to analyze the genotypic profiles of the deletion polymorphism of GSTM1 and GSTT1 genes by molecular assays (conventional PCR and qPCR) to associate these polymorphisms with DM2 risk, considering that studies with this approach have not been conducted in Brazil. Data of clinical, laboratorial and demographic variables of 120 patients and 147 controls were obtained through interviews and information from medical charts (patients) or results of recent clinical and laboratory exams (controls). It was found that diabetic patients had a higher frequency of GSTT1-null genotype (29.2%) than non-diabetic subjects (12.2%), and those with the risk genotype have an increased predisposition to diabetes from approximately 3.2 times (p = 0.0004). However, there was no association of GSTM1-null with DM2 susceptibility. The analysis of the influence of GSTT1 deletion on clinical and biochemical changes in the case group showed that the risk genotype may contribute to the development of DM2 complications related to dyslipidemia, due to the association of GSTT1-null with significantly higher levels of triglycerides (p = 0.0242) and VLDL-cholesterol levels (p = 0.0252) compared to patients without the risk genotype. Additionally, GSTM1-null was associated with elevated levels of fasting glucose, glycated hemoglobin and blood pressure. We emphasized a necessity for applying log-linear analysis in order to explore an interaction between these polymorphisms properly. These results suggest that GSTT1 polymorphism may play an important role in the pathogenesis of DM2 in Brazilian population. Then, this gene could be added to a set of genetic markers to identify individuals at increased risk for developing DM2. Although there was no association of GSTM1 deletion polymorphism with susceptibility to DM2, it was verified the influence of this polymorphism on important clinical parameters related to glycemia and blood pressure levels. This finding suggests that GSTM1-null, GSTT1-null as well, may contribute to the clinical course of diabetic patients. / Na patogênese do diabetes mellitus tipo 2 (DM2), observa-se que o estresse oxidativo aumentado pode contribuir na diminuição da produção de insulina e destruição das células β pancreáticas. Indivíduos que apresentam ausência de atividade das isoformas GSTM1 e GSTT1 podem apresentar uma susceptibilidade aumentada aos danos causados por espécies reativas às células β pancreáticas, uma vez que estas células expressam baixos níveis de enzimas antioxidantes. O presente estudo caso-controle visou analisar os perfis genotípicos do polimorfismo de deleção dos genes GSTM1 e GSTT1 por ensaios moleculares (PCR convencional e qPCR) para associar tais polimorfismos com o risco ao DM2, considerando que ainda não foram realizados estudos com este enfoque no Brasil. Dados clínicolaboratoriais e demográficos de 120 pacientes e 147 controles foram obtidos por meio de entrevistas e consulta a prontuários (pacientes) e a resultados de exames recentes (controles). Foi verificado que os pacientes diabéticos apresentaram uma frequência mais elevada de genótipo GSTT1-nulo (29,2%) do que indivíduos não-diabéticos (12,2%), e que aqueles que apresentam o genótipo de risco possuem uma predisposição aumentada a diabetes de aproximadamente 3,2 vezes (p = 0,0004). No entanto, não houve associação de GSTM1-nulo com a susceptibilidade ao DM2. A análise da influência da deleção de GSTT1 sobre alterações bioquímicas e clínicas no grupo caso demonstrou que o genótipo de risco pode contribuir para o desenvolvimento de complicações do DM2 relacionadas à dislipidemia, em função da associação de GSTT1-nulo com níveis significativamente mais elevados de triglicérides (p = 0,0242) e VLDL-colesterol (p = 0,0252) em comparação aos pacientes sem o genótipo de risco. Adicionalmente, GSTM1-nulo teve associação com níveis elevados de glicemia de jejum, hemoglobina glicada e pressão sanguínea. Foi enfatizada a necessidade de aplicação da análise log-linear para investigar a interação entre os polimorfismos apropriadamente. Os resultados obtidos sugerem que o polimorfismo de deleção de GSTT1 pode desempenhar um importante papel na patogênese do DM2 na população brasileira. Portanto, este gene poderia ser adicionado a um painel de marcadores genéticos para identificação de indivíduos com alto risco ao desenvolvimento do DM2. Embora não tenha ocorrido associação do polimorfismo de deleção de GSTM1 com a susceptibilidade ao DM2, foi verificada a influência deste polimorfismo sobre importantes parâmetros relacionados ao controle glicêmico e pressórico. Estes achados sugerem que GSTM1-nulo, assim como GSTT1-nulo, podem contribuir para a evolução clínica dos pacientes diabéticos.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / In search for a better understanding of the biology of tumors, molecular markers related to proliferation, resistance and apoptosis have been intensively studied in the different types of cancer. These markers can help on the elucidation of more specific therapeutic targets for the treatment of various tumors. It was observed that stomach cancer is the second most frequent cause of death in the world. In Brazil, this tumor is among the five major causes of death by cancer and the adenocarcinomas are held responsible for about 95% of all cases. For that matter, the expression of KI-67, PCNA, p53, bcl-2 and c-myc were evaluated independently and in a combined form in stomach adenocarcinomas. Thus, KI-67 and PCNA were confronted in order to determine which one would pose as a better cellular proliferation marker. Finally, a DNA extraction tecnique using CTAB was implemented on tumor tissue as well as the molecular analysis of the p53 gene by SSCP. The positive results were compared with those obtained by the imonohistochemistry analysis. The tumors were collected in surgical procedure, processed and classified histopathologically. The markers were detected by the imunohistochemical method SABP. The DNA was extracted by the CTAB method and the exons 5, 7 and 8/9 of the p53 gene analyzed by SABP. Some of the samples were obtained from biopsy arquives. The age range of the patients was between 61 and 70 years, with 48,1% of the tumors presenting an intestinal origin, 40,7% were diffuse and the other 11,2% were mixed. According to the location, 50% of the tumors were found to be proximal. 41,1% of the tumors were found to be in a low stage (I â IIIA), 44,8% in a high stage (IIIB â IV) and 13,8% were not staged. The imunohistochemical results indicated that KI-67 is the best marker to estimate cellular proliferation in stomach adenocarcinomas. In an independent manner, the tumors showed an 89,3% positivity for KI-67, 62,5% for PCNA, 50% for p53, 60,7% for bcl-2 e 66,7% for c-myc. According to the staging, the difference was significant only to p53 (p = 0,02), with a 66,7% positivity to the tumors in low stage and 16,7% for the ones on a high stage. When evaluated in a combined form, the associations of KI-67+/p53- (p=0,012) (66,67%) and c-myc+/p53- (p=0,02) (63,64%) both for the high stage tumors, were found to be significant. The DNA extraction technique applied to the tumor tissue was found to be satisfactory. For the SSCP analyses, five patients had mutation on the exon 5 (3) and on the exon 7 (2). Based on that, we may conclude that KI-67 is the best marker to access the proliferation of the stomach adenocarcinomas and that there are two proliferation activation pathways: one being dependent and the other independent of the p53 gene. / Na busca de um melhor entendimento da biologia dos tumores, marcadores moleculares relacionados à proliferaÃÃo, resistÃncia e apoptose tÃm sido intensamente pesquisados nos diferentes tipos de cÃncer. Estes marcadores podem auxiliar no estudo de alvos terapÃuticos mais especÃficos para cada tipo de tumor. O cÃncer de estÃmago à a segunda causa de Ãbito mais observado no mundo. No Brasil, este tumor està entre as cinco localizaÃÃes primÃrias mais comuns de Ãbitos por cÃncer, sendo os adenocarcinomas responsÃveis por 95% dos casos. Dessa forma, foi avaliada a expressÃo dos marcadores KI-67, PCNA, p53, bcl-2 e c-myc de forma independente e combinada em adenocarcinomas gÃstricos. TambÃm foi avaliado qual dos marcadores, KI-67 ou PCNA, era mais indicado para acessar a proliferaÃÃo celular. AlÃm disso, foi implantada a tÃcnica de extraÃÃo de DNA de tecido tumoral com CTAB e anÃlise molecular pelo SSCP do gene p53, sendo os resultados positivos comparados com os resultados da imunohistoquÃmica. Os tumores foram coletados em cirurgia, processados e classificados histopatologicamente. Os marcadores foram detectados pelo mÃtodo de imunohistoquÃmica SABP. Foi realizada a extraÃÃo de DNA pelo mÃtodo do CTAB, sendo os Ãxons 5, 7 e 8/9 do gene p53 analisados por SSCP. Algumas amostras foram obtidas de arquivo de biopsia. A faixa etÃria dos pacientes encontrava-se entre 61 e 70 anos de idade, com 48,1% dos tumores do tipo intestinal, 40,7% difusos e 11,2% mistos e com 50% localizados no sÃtio proximal. Em relaÃÃo ao estadiamento, 41,4% dos tumores apresentavam-se no grau baixo (I â IIIA), 44,8% no altorisco (IIIB â IV) e 13,8% sem estadiamento. De acordo com os achados imunohistoquÃmicos, os resultados sugerem que o marcador mais indicado para estimar a proliferaÃÃo celular nos adenocarcinomas gÃstricos à o KI-67. De forma independente os tumores apresentaram positividade em 89,3% para KI-67, 62,5% para PCNA, 50% para p53, 60,7% para bcl-2 e 66,7% e para c-myc. De acordo com o estadiamento, a diferenÃa foi significativa apenas para p53 (p = 0,02), com positividade de 66,7% nos tumores de baixo risco (I â IIIA) e 16,7% nos de altorisco. Quando avaliadas de forma combinada, as associaÃÃes significativas foram entre KI-67+/p53- (p=0,012) nos tumores de alto risco (66,67%) e c-myc+/p53- (p=0,02) tambÃm nos tumores de altorisco (63,64%). A tÃcnica aplicada para a extraÃÃo do DNA do tecido tumoral foi satisfatÃria. Para o SSCP, cinco pacientes apresentaram mutaÃÃo para o Ãxon 5 (3) e Ãxon 7 (2). Com isso, concluÃmos que o marcador mais indicado para acessar a proliferaÃÃo à o KI-67 e que existem duas vias de ativaÃÃo da proliferaÃÃo nos adenocarcinomas gÃstricos: uma dependente de p53 e outra independente de p53.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O lÃtex da planta lactÃfera Calotropis procera (Ait.) R. Br. à um composto biologicamente ativo importante que apresenta propriedades relevantes como as atividades antiinflamatÃria e antidiarrÃica, embora jà tenha sido previamente mostrado que esse lÃtex produz efeitos tÃxicos considerÃveis em animais. Um outro fato à que nÃo à sabido, ainda, se as proteÃnas do lÃtex de C. procera produzem efeitos alergÃnicos, assim como as proteÃnas do lÃtex de Hevea brasiliensis. O potencial do lÃtex como um fÃrmaco, por essa razÃo, depende da separaÃÃo das propriedades curativas das propriedades tÃxicas e alergÃnicas, mas nÃo existe investigaÃÃo cientÃfica nessa Ãrea. O presente estudo teve como objetivo investigar aspectos bioquÃmicos, toxicolÃgicos e alergÃnicos do lÃtex da planta C. procera, atravÃs do estudo da digestibilidade in vitro e in vivo, avaliaÃÃo da toxicidade subcrÃnica e aguda por via oral e anÃlise da induÃÃo de resposta imune pelas vias subcutÃnea e oral das suas fraÃÃes. O lÃtex foi fracionado em trÃs fraÃÃes distintas de acordo com a sua solubilidade em Ãgua e tamanho molecular. As fraÃÃes foram assim denominadas: proteÃnas do lÃtex (PL), correspondendo Ãs principais proteÃnas do lÃtex; proteÃnas da diÃlise (PD), representando as substÃncias de baixa massa molecular; e borracha do lÃtex (BL) que à altamente insolÃvel em Ãgua. A fraÃÃo PL foi investigada, com relaÃÃo a alguns aspectos bioquÃmicos, como seu perfil protÃico por PAGE-SDS e anÃlise da composiÃÃo de seus aminoÃcidos. As proteÃnas do lÃtex tambÃm foram submetidas à digestÃo in vitro com as enzimas proteolÃticas pepsina, tripsina, quimiotripsina e protease de Streptomyces griseus e a digestibilidade in vitro foi avaliada por cromatografia de filtraÃÃo em gel ou PAGE-SDS. A digestibilidade in vivo de PL foi analisada quando animais experimentais ingeriram essa fraÃÃo por 35 dias. O volume de PL consumido foi registrado diariamente e amostras das fezes dos animais coletadas, tratadas e submetidas à PAGE-SDS e ensaios de imunodifusÃo radial dupla de Ouchterlony, com anticorpos policlonais contra PL. Com relaÃÃo aos aspectos toxicolÃgicos, a fraÃÃo PL foi oralmente administrada a animais experimentais por 35 dias, para a avaliaÃÃo da toxicidade subcrÃnica. Aumentos na massa corpÃrea foram registrados e amostras sangÃÃneas foram analisadas semanalmente. ApÃs o perÃodo experimental, os animais foram sacrificados e um nÃmero de parÃmetros bioquÃmicos e fisiolÃgicos foram determinados. Esses incluÃram determinaÃÃes sÃricas de glicose sangÃÃnea, colesterol total, HDL-colesterol, triglicerÃdeos, testes da funÃÃo hepÃtica (proteÃnas totais, albumina, alanina aminotransferase â ALT e aspartato aminotransferase â AST), testes da funÃÃo renal (urÃia e creatinina), contagens total e diferencial de leucÃcitos sangÃÃneos e do fluido peritonial e anÃlise das proteÃnas sÃricas por PAGE-SDS. Os animais tiveram seus ÃrgÃos vitais (fÃgado, rins, baÃo, intestino delgado, intestino grosso, pÃncreas e estÃmago) dissecados e as massas frescas relativas foram determinadas. Na avaliaÃÃo da toxicidade aguda, a fraÃÃo PL foi administrada por via oral a animais experimentais e a monitoraÃÃo de alteraÃÃes comportamentais desses animais tambÃm foi realizada. Quanto aos aspectos alergÃnicos, respostas imunolÃgicas do lÃtex de C. procera foram investigadas pelas vias oral e subcutÃnea em camundongos. Anti-soros contra as fraÃÃes PL, PD e BL foram analisados quanto a IgG e IgA por ELISA, enquanto IgE e IgG1 foram monitoradas por anafilaxia cutÃnea passiva (PCA) em ratos e camundongos, respectivamente. Os perfis protÃicos das fraÃÃes PL e BL foram analisados por PAGE-SDS. Com relaÃÃo aos resultados dos aspectos bioquÃmicos, a fraÃÃo PL possui uma quantidade apreciÃvel de proteÃnas, baixo conteÃdo de aminoÃcidos sulfurados (metionina e cisteÃna) e um nÃmero considerÃvel de aminoÃcidos (arginina, lisina, fenilalanina e tirosina) que representam sÃtios de clivagem para as enzimas proteolÃticas animais usadas. A fraÃÃo PL foi digerida pela aÃÃo da pepsina, tripsina e quimiotripsina como revelado por anÃlises de filtraÃÃo em gel e PAGE-SDS. A digestÃo completa das proteÃnas do lÃtex foi facilmente obtida pelo tratamento com a protease de S. griseus. Anticorpos policlonais de coelho produzidos contra PL nÃo apresentaram reaÃÃo cruzada com as molÃculas presentes nas fezes dos ratos experimentais. PadrÃes semelhantes de eletroforese foram observados para as quantidades desprezÃveis de proteÃna observadas nos materiais fecais dos animais controle e experimentais. Quanto aos resultados da avaliaÃÃo da toxicidade subcrÃnica, nenhuma morte foi observada durante o experimento. Animais controle e experimentais apresentaram taxa de crescimento semelhante e os ÃrgÃos vitais exibiram massas frescas relativas similares. As funÃÃes hepÃtica e renal, parÃmetros glicÃmicos e lipidÃmicos sÃricos situaram-se em nÃveis normais. Os padrÃes protÃicos eletroforÃticos dos soros dos animais controle e experimental exibiram perfis muito similares. A fraÃÃo PL nÃo induziu inflamaÃÃo aguda na cavidade peritonial dos ratos, como determinado pelas contagens total e diferencial de leucÃcitos. O resultado mais relevante detectado foi um aparente efeito proliferativo das proteÃnas do lÃtex sobre os linfÃcitos sangÃÃneos que tenderam a aumentar, enquanto os neutrÃfilos permaneceram em nÃvel normal. Deve ser enfatizado que os animais experimentais exibiram comportamento, aspectos morfolÃgicos e bioquÃmicos normais, indicando ser improvÃvel que os mesmos estivessem sob qualquer condiÃÃo patolÃgica ou infecciosa. Portanto, o incremento da populaÃÃo de linfÃcitos no soro sangÃÃneo deve ser atribuÃdo a um efeito notÃvel das proteÃnas do lÃtex e nÃo a qualquer evento prejudicial. A fraÃÃo PL foi incapaz de induzir toxicidade aguda, pois nenhuma mudanÃa comportamental foi observada nos animais experimentais. Com relaÃÃo aos resultados dos aspectos alergÃnicos, nenhuma das fraÃÃes induziu aumentos nos nÃveis de anticorpos, quando os camundongos receberam as fraÃÃes do lÃtex por via oral e, portanto, nÃo desenvolveram alergia. Entretanto, anti-soros de camundongos sensibilizados com PL e BL por administraÃÃo subcutÃnea apresentaram resposta imunolÃgica considerÃvel, e PD nÃo induziu sÃntese de anticorpos. O nÃvel de IgG aumentou consistentemente contra PL e BL, enquanto a resposta de IgA foi detectada unicamente contra PL. PL e BL induziram reaÃÃes de PCA muito fortes, sugerindo que ambas as fraÃÃes contÃm substÃncias do lÃtex envolvidas na alergenicidade. AlÃm disso, a anÃlise protÃica de PL e BL sugere que BL ainda retÃm proteÃnas residuais, co-precipitadas com a borracha, abundantemente encontradas na fraÃÃo PL, que poderiam explicar as alergenicidades semelhantes. Nenhuma reaÃÃo de IgG1 foi detectada em quaisquer dos anti-soros testados. Conclui-se que as proteÃnas do lÃtex foram parcialmente susceptÃveis à proteÃlise em ensaios in vitro e, ou foram digeridas e absorvidas, ou foram absorvidas Ãntegras, quando ingeridas em ensaios in vivo. Eventos tÃxicos ou letalidade associados ao lÃtex, como descritos na literatura, nÃo estÃo relacionados com a fraÃÃo PL. A fraÃÃo PL produziu efeito proliferativo parcial sobre as cÃlulas mononucleadas, principalmente linfÃcitos e nÃo induziu resposta inflamatÃria aguda, quando administrada pela via oral. Efeitos alergÃnicos puderam ser detectados, por via subcutÃnea, com as fraÃÃes PL e BL, e nÃo foram observados por via oral. EvidÃncias para uma possÃvel tolerÃncia sistÃmica Ãs proteÃnas do lÃtex por via oral foram fornecidas. As proteÃnas do lÃtex podem atuar como imunoestimulantes. As proteÃnas do lÃtex permanecem uma fonte interessante de molÃculas biologicamente ativas que devem ser estudadas em detalhe quanto Ãs suas propriedades estruturais, funcionais e aplicativas. / The latex of the lactiferous plant Calotropis procera (Ait.) R. Br. is an important biologically active compound that displays relevant properties like antiinflammatory and antidiarrhea activities, although the latex has previously been shown to produce considerable toxic effects on animals. Another question is that it is not known yet whether the latex proteins from C. procera induce allergenic effects, just like the latex proteins from Hevea brasiliensis. The potential of the latex as a pharmaceutical, therefore, depends on separating the curative properties from the toxic and allergenic properties, but there has been a lack of scientific investigation in this area. The objective of the present study was to investigate biochemical, toxicological and allergenic aspects of the latex from the plant C. procera, through the study of in vitro and in vivo digestibility, evaluation of acute and subchronic toxicity by oral route, and analysis of immune response induction by subcutaneous and oral route of its fractions. The latex was fractionated into three distinct fractions according to their water solubility and molecular size. The fractions were named as: latex proteins (LP), corresponding to the major latex proteins; dialysis proteins (DP), representing low molecular size substances; and rubber latex (RL), which was highly insoluble in water. LP fraction was investigated in some biochemical aspects, like its protein profile by SDS-PAGE analysis and its amino acid composition determination. Latex proteins were also subjected to in vitro digestion with trypsin, chemotrypsin, pepsin and Streptomyces griseus protease and in vitro digestibility was evaluated by gel filtration and SDS-PAGE analysis. The in vivo digestibility of LP was analyzed when experimental animals ingested this fraction for 35 days. The volume uptake of LP was recorded daily and samples of fecal material from animals were collected, treated and submitted to SDS-PAGE analysis and radial double immunodifusion assays, with polyclonal antibodies raised against LP. In relation to toxicological aspects, LP fraction was orally administered to experimental animals for 35 days, to allow subchronic toxicity evaluation. Increases in body mass were recorded and blood samples were analyzed weekly. After the test period, the animals were sacrificed and a number of biochemical and physiological parameters determined. These included sera determinations of blood glucose, total cholesterol, HDL-cholesterol, triglycerides, hepatic function tests (total proteins, albumin, alanine aminotransferase â ALT and aspartate aminotransferase â AST), renal function tests (urea and creatinin), total and differential leukocyte counts in blood and peritoneal fluid and analysis of sera proteins by SDS-PAGE. Animals had internal key organs (liver, kidneys, spleen, small intestine, large intestine, pancreas and stomach) dissected and the relative fresh masses were determined. In the acute toxicity evaluation, LP fraction was administered by oral route to experimental animals and behavioral changes in animals were also monitored. With reference to allergenic aspects, immunological responses of latex from C. procera were investigated by oral and subcutaneous routes in mice. Anti-sera against LP, DP and RL fractions were assayed for IgG and IgA titration by ELISA, while IgE and IgG1 were accessed by passive cutaneous anaphylaxis (PCA) in rats and mice, respectively. Protein profiles of LP and RL fractions were analyzed by SDS-PAGE. Concerning biochemical aspects results, LP fraction possesses appreciable amount of protein, low content of sulphurated amino acids (methionine and cysteine) and a considerable number of amino acids (arginine, lysine, phenylalanine and tyrosine) that represent cleavage sites to animal proteolytic enzymes studied. LP fraction was digested by the action of pepsin, trypsin and chemotrypsin as revealed by gel filtration and SDS-PAGE analyses. The full LP digestion was easily achieved by S. griseus protease treatment. Rabbit polyclonal antibodies raised against LP failed to detect cross-reactive molecules in faeces of experimental rats. Similar patterns of electrophoresis were observed for the negligible amounts of protein observed in the fecal materials of control and test animals. With relation to subchronic toxicity evaluation results, no death was observed during the experiment. Experimental and control animals presented similar growth rate and key organs exhibited similar relative fresh masses. Hepatic and renal functions, sera glycemic and lipidemic parameters were determined to be at normal levels. Likewise, the electrophoretic protein patterns of sera from untreated and treated animals exhibited quite similar profiles. Uptake of latex proteins did not induce acute inflammation into peritoneal cavity of rats as determined by the total and differential leukocytes counts. The most relevant result discovered was an apparent proliferative effect of the latex proteins upon blood lymphocytes that tended to increase, whilst neutrophils remained at normal level. It should be emphasized that the experimental rats were normal in their behavior, morphological and biochemical aspects, indicating that it is unlikely that they were under any pathological or infectious condition. Therefore, the increment of lymphocytes population in the blood serum should be attributed to the staking effect of the latex proteins rather than any harmful event. LP fraction was unable of presenting acute toxicity in experimental animals, because no behavioral changes in animals were observed. Concerning allergenic aspects results, none of the fractions induced antibodies level increases when mice received latex fractions by oral route and thus, did not develop allergy. Nonetheless, anti-sera of mice sensitized with LP and RL by subcutaneous administration displayed considerable immunological response, while DP did not induce antibodies synthesis. IgG level augmented consistently against LP and RL, while IgA response was detected to LP solely. LP and RL induced very strong PCA reactions suggesting that both fractions would contain latex substances involved in allergenicity. Furthermore, protein analysis of LP and RL suggests that RL still retain residual proteins, co-precipitated with rubber, abundantly found in LP, that could explain its similar allergenicity. No IgG1 reaction was detected in any of the anti-sera tested. It can be concluded that latex proteins were partially susceptible to digestive proteolysis when accessed by in vitro assays, and were digested and absorbed, or were absorbed in its intact form, when ingested and analyzed by in vivo tests. Toxic events or lethality associated with latex, as described in the literature, are not related to LP fraction. Latex proteins produced partial proliferative effect upon mononuclear cells, mainly lymphocytes and did not induce an acute inflammatory response, when administered by oral route. Allergenic effects could be detected, by subcutaneous route, with LP and RL fractions, and were not observed by oral route. Evidences for an inducible tolerance acquired to latex proteins by oral route were provided. Latex proteins may act as immune stimulants. The proteins from the latex remain an interesting source of biologically active molecules that should be studied in detail for their structural, functional and applicative properties.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:27Z (GMT). No. of bitstreams: 1 dissertacao andrei.pdf: 2548450 bytes, checksum: dedf19335cba3686a528075fb5da8300 (MD5) Previous issue date: 2010-02-26 / Species of Trichoderma are commercially applied as biological control agents against plant fungal pathogens. Their action is based on a set of events, such as the production of antifungal metabolites, competition for space and nutrients and mycoparasitism. However the biocontrol mechanism of the interaction between Trichoderma harzianum and Fusarium solani is not yet understanded at the transcriptome level. This study aimed to initiate the preliminary development of an expressed sequence tag (EST) database for Trichoderma harzianum and thereby gain potentially useful information on Trichoderma gene sequences in order to elucidate the integrated biocontrol mechanism. Partial sequencing of anonymous cDNA clones is a widely used technique for gene identification. A directional cDNA library has been constructed from mycelium of Trichoderma harzianum grown on cell wall isolated from Fusarium solani. 3984 clones have been randomly selected, subjected to single-pass sequencing from the 5 end of the vector, and identified by sequence similarity searches against gene sequences in GenBank fungal database. Of the 3984 mycelium clones, 40.8% exhibit similarity to known genes. Analysis of the identified clones indicated sequence similarity to a broad diversity of genes encoding proteins such as enzymes, structural proteins, and regulatory factors. A significant proportion of genes identified were involved in processes related to mycoparasitism (3,81%), as would be expected in biocontrol fungus. These results present the successful application of EST analysis in the interaction of Trichoderma harzianum and Fusarium solani to provide a preliminary indication of gene expression. / Espécies do gênero Trichoderma são comercialmente aplicadas como agentes de controle biológico contra fungos patógenos de plantas. Sua ação é baseada em diferentes mecanismos como a produção de antibióticos voláteis e não-voláteis, competição por espaço e nutrientes e micoparasitismo. O mecanismo de biocontrole da interação entre Trichoderma harzianum e Fusarium solani ainda não foi explorado ao nível de transcriptoma. Este estudo buscou iniciar o desenvolvimento de uma base de dados de EST (Expressed Sequence Tags) para assim obter informações úteis nas sequências de Trichoderma harzianum e entender melhor as vias integradas do mecanismo de biocontrole. Uma biblioteca direcional de cDNA foi construída a partir do micélio de Trichoderma harzianum crescido em parede celular isolada de Fusarium solani. 3984 clones foram selecionados aleatoriamente, submetidos ao seqüenciamento da região 5 do vetor e identificados por similaridade contra a base de dados de seqüências de fungos GenBank. Dentre os 3984 clones, 40,8% mostraram similaridade com genes conhecidos e descritos na literatura. Análises dos genes identificados indicam similaridade com uma grande diversidade de genes que codificam para enzimas, proteínas estruturais e fatores de regulação. Uma proporção significante dos genes identificados está envolvida com processos relacionados ao icoparasitismo (3,81%), como esperado para um fungo envolvido no controle biológico. Estes resultados mostram uma aplicação bem sucedida da análise de ESTs na interação entre Trichoderma harzianum e Fusarium solani e dar uma sugetão da expressão gênica.

Made available in DSpace on 2014-07-29T15:16:28Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacvao Silvio R C Barbosa 2008.pdf: 717228 bytes, checksum: d0896c3b0c9fa5a05f9d7107c2e59def (MD5) Previous issue date: 2008-05-30 / The fungus Sclerotinia sclerotiorum can interact with a great range of vegetable species as well as to obey to the discharge especificity and patogenic specialization . It is capable to digest the cellular wall of host plants using for such a series of biochemical mechanisms and morfogenetics that optimize the invasion. Several enzymes are produced during the interaction plant-host and among them they stand out the family of the poligalacturonases (PGs) and them beta glucanases. PGs catalyze the hydrolysis of the connection glycosídic bond - 1,4 and them beta glucanases liberate glucans and oligossacarídeos during the hydrolysis. Our work tried to characterize, besides the pH, the action of these enzymes, as well as the gene expression during the interaction with bean (Phaseolus vulgaris) and under different cultivation means, pectin 1%, wall extract 1% and glucose 1%. The activities were measured by the method DNS where the amount was measured of you sugar reducers in the middle and the gene expression through electrophoretic profiles analyzed after the technique of RT-PCR. The results showed variation of the activity of PGs in the interaction being the middle with pectin with larger expression of them. Them beta 1,3 and beta 1,4 glucanases were expressed in both culture means proposed, however there was larger production of beta 1,3 during the invasion. The variation of the expression of such enzymes in different culture means suggests complexity of specific biochemical roles for your production raising new approaches for the recognition of the roads that they promote the development of the disease / O fungo Sclerotinia sclerotiorum, pode interagir com uma grande gama de espécies vegetais bem como obedecer à alta especificidade e especialização patogênica. Ele é capaz de digerir a parede celular de plantas hospedeiras utilizando para tal uma série de mecanismos bioquímicos e morfogenéticos que otimizam a invasão. Várias enzimas são produzidas durante a interação planta-hospedeiro e dentre elas se destacam a família das poligalacturonases (PGs) e as beta glucanases. As PGs catalisam a hidrólise da ligação glicosídica &#945;- 1-4 e as beta glucanases liberam glucanas e oligossacarídeos durante a hidrólise. Nosso trabalho procurou caracterizar, além do monitoramento do pH, a ação destas enzimas, bem como a expressão gênica durante a interação com feijão ( Phaseolus vulgaris ) e sob diferentes meios de cultivo, pectina a 1%, extrato de parede celular de plantas de feijoeiro a 1% e glicose 1%. As atividades foram medidas pelo método DNS onde mediu-se a quantidade de açucares redutores no meio e a expressão gênica através de perfis eletroforéticos analisados após a técnica de RT-PCR. Os resultados mostraram variação da atividade das PGs na interação sendo o meio com pectina com maior expressão delas. As beta 1,3 e beta 1,4 glucanases foram expressas em ambos os meios de cultura propostos, contudo houve maior produção de beta 1,3 durante a invasão. A variação da expressão de tais enzimas em diferentes meios de cultura sugerem complexidade de rotas bioquímicas específicas para sua produção suscitando novas abordagens para o reconhecimento dos caminhos que promovem o desenvolvimento da doença.