CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Sementes de leguminosas constituem uma das principais fontes de proteÃna na alimentaÃÃo humana e animal. Outros interesses tÃm sido despertados para o potencial nutracÃutico inerente a essas proteÃnas vegetais, uma vez que muitas proteÃnas bioativas, atà entÃo referidas apenas como fatores antinutricionais, tÃm exercido efeitos benÃficos no organismo, atuando na cura e/ou prevenÃÃo de vÃrias doenÃas. Dentre esses, destacam-se os inibidores de proteases, os quais desempenham importantes funÃÃes na defesa de plantas e apresentam propriedades biolÃgicas de interesse para aplicaÃÃes biotecnolÃgicas nas Ãreas farmacolÃgica e mÃdica. O objetivo deste trabalho foi avaliar o potencial nutricional e nutracÃutico de sementes de Enterolobium contortisiliquum, enfocando a purificaÃÃo e caracterizaÃÃo parcial de inibidores de quimotripsina e avaliar seu efeito antiproliferativo contra cÃlulas tumorigÃnicas humanas. As sementes de E. contortisiliquum sÃo uma excelente fonte de proteÃnas, apresentando cerca de 50% desse macronutriente em base seca. A presenÃa de inibidores de proteases em quantidades elevadas sugere que essas molÃculas possam vir a ter uma aplicaÃÃo nutracÃutica. Dessa forma, foram purificados trÃs inibidores de quimotripsina, denominados EcCI1, EcCI2 e EcCTI, os quais foram parcialmente caracterizados. As massas moleculares aparentes determinada para os trÃs inibidores à de 17, 17 e 19 kDa, respectivamente. EcCI1 e EcCI2 sÃo inibidores do tipo nÃo competitivo e apresentam ki de 4 x 10-8 e 2,5 x 10-8 M, respectivamente. Em contrapartida, EcCTI inibe a quimotripsina de forma competitiva e apresenta ki de 5 x 10-8 M. Apenas EcCTI foi capaz de inibir a tripsina (98%). EcCI1 e EcCI2 inibiram satisfatoriamente a elastase neutrofÃlica (ca. de 70%), mas nÃo EcCTI (20%). Os trÃs inibidores inibiram sutilmente a elastase pancreÃtica (ca. de 20%) e nenhum foi capaz de inibir a papaÃna. Os trÃs inibidores sÃo altamente estÃveis Ãs condiÃÃes extremas de temperatura (de 37 a 90 ÂC para EcCI2 e de 37 a 100 ÂC para EcCI1 e EcCTI ), pH (2 a 12) e DTT nas concentraÃÃes de 1 a 100 mM para EcCI1 e EcCTI e de 1 a 10 mM para EcCI2. Outros estudos sÃo necessÃrios para melhor caracterizar esses inibidores. Nenhum dos inibidores promoveu efeito antiproliferativo contra as quatro linhagens de cÃlulas tumorigÃnicas testadas / Leguminous seeds are main sources of food proteins for humans and animals. Other interests in these plant proteins concerning their nutraceutical properties have been raised, since many bioactive proteins, previously referred only as anti-nutritional factors, have exerted beneficial effects on health, acting as chemopreventive agents against several diseases. Among these are protease inhibitors, which play important roles in plant defense and have biological properties of interest for biotechnological applications in pharmaceutical and medical areas. This study aimed to evaluate the nutritional and nutraceutical potential of Enterolobium contortisiliquum seeds, focusing on the purification and partial characterization of chymotrypsin inhibitors and assess their antiproliferative effect against human tumor cells. E. contortisiliquum seeds are an excellent protein source, with about 50% of this macronutrient on a dry basis. The presence of protease inhibitors in high quantities suggests that these molecules may exert a nutraceutical application. Three chymotrypsin inhibitors, denominated EcCI1, EcCI2 and EcCTI were purified and partially characterized. EcCI1, EcCI2 and EcCTI show molecular weights of 17, 17 and 19 kDa, respectively. EcCI1 and EcCI2 are non-competitive inhibitors with ki of 4 x 10-8 and 2.5 x 10-8 M, respectively, while EcCTI inhibits chymotrypsin competitively with ki of 5 x 10-8 M. Only EcCTI was able to inhibit trypsin (98%). EcCI1 and EcCI2 successfully inhibited leukocyte elastase (about 70%), but EcCTI (20%). The three inhibitors slightly inhibited pancreatic elastase (about 20%) and none was able to inhibit papain. The three inhibitors have a high thermal stability (37 to 90 ÂC for EcCI2 and 37 to 100 ÂC for EcCI1 and EcCTI), pH (2 to 12) and DTT concentrations ranging from 1 to 100 mM for EcCI1 and EcCTI and from 1 to 10 mM for EcCI2. Further studies are needed to better characterize these inhibitors. None of the inhibitors promoted antiproliferative effect against four tumorigenic cell lines tested

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T10:43:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vanessa Bernardes - 2014.pdf: 2035312 bytes, checksum: 8b960a119417d6138d7c9fbbdf6c6ad0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T10:46:22Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Vanessa Bernardes - 2014.pdf: 2035312 bytes, checksum: 8b960a119417d6138d7c9fbbdf6c6ad0 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-07T10:46:22Z (GMT). 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In the biome Cerrado there are inumerous medicinal and fruit trees that are used in a extractive way, among them are those of the gender Byrsonima sp. popularly known as murici, belonging to the family Malpighiaceae. In Brazil presents about 70 species with wide distribution in the Cerrado. The murici is a multi- potential plant and although not be domesticated, its economic exploitation can be viable. In this context, the objective was to develop a set of microsatellite markers for species Byrsonima cydoniifolia A. JUSS. and test the potential transferability of this set of markers for species Byrsonima crassifolia L. Kunth. The microsatellite regions were isolated using genomic libraries enriched for repetitive regions and then they were used for primer design. Using the primers designed temociclagem conditions were tested and the products were characterized using the DNA of 90 individuals of B. cydoniifolia and 24 indivuduals of B. crassifolia. Of these, 14 loci were polymorphic and 3 monomorphic in three populations of B. cydoniifolia. The number of alleles ranged from 3 to 17, with an average of 10.45 alleles per locus. The observed heterozygosity was similar to the expected heterozygosity, the values ranged from 0.20 to 0.92 and 0.43 to 0.92; respectively. 39 private alleles were identified. This set of markers showed high combined probability of paternity exclusion (Q) equal to 0.999 and combined probability of identity (I) equal to I=7.84x10-1. The global values for the fixation index (FIS) were not significant (P<0.05), whereas the values of FST=0,082 and FIT=0,143 were significant. For Byrsonima crassifolia species, nine pairs of primers produced good patterns of cross amplification in the study population, with a mean of 7.56 alleles per locus. The observed heterozygosity ranged from 0.250 to 0.958, which was higher than the expected heterozygosity ranging from 0.223 to 0.905. The combined probability of paternity exclusion (Q) was equal to 0.99847 and high combined probability of identity equal to 6.42x10-9. The strategy of development of microsatellite markers from the genomic library enriched methodology was efficient to generate a panel with eleven polymorphic microsatellite markers for B. cydoniifolia and nine polymorphic microsatellite markers successfully transferred to B. crassifolia, providing a useful tool for population genetic studies not only for the species B. cydoniifolia and B. crassifolia, but possibly for other related species evolutionarily. / Marcadores moleculares são sequências de DNA identificáveis, encontrados em locais específicos do genoma e transmitidos pelas leis padrão de herança de uma geração para a seguinte. Os marcadores moleculares conhecidos como microssatélites são indicados para análises genético-populacionais, por serem amplamente distribuídos no genoma e apresentarem alto conteúdo de informação polimórfica por loco. Para subsidiar diferentes práticas de manejo, bancos de germoplasma e estudos de conservação é importante realizar a análise da variabilidade genética nas populações naturais das espécies de interesse. No bioma Cerrado encontram-se inúmeras espécies medicinais e frutíferas que são utilizadas de forma extrativista, dentre elas estão as do gênero Byrsonima sp., conhecidas popularmente como murici, que são pertencentes à família Malpighiaceae. No Brasil, existem cerca de 70 espécies com ampla distribuição no Cerrado. O murici é uma planta de múltiplas potencialidades e apesar de não ser domesticada, a sua exploração econômica apresenta potencial. Nesse contexto, o objetivo do trabalho foi desenvolver um conjunto de marcadores microssatélites para a espécie Byrsonima cydoniifolia A. JUSS. e testar o potencial de transferibilidade deste conjunto de marcadores para a espécie Byrsonima crassifolia L. Kunth. As regiões microssatélites foram isoladas utilizando bibliotecas genômicas enriquecida para regiões repetitivas e, posteriormente, as mesmas foram utilizadas para o desenho de primers. A partir dos primers desenvolvidos foram testadas condições de temociclagem e seus produtos foram caracterizados utilizando o DNA de 90 indivíduos de B. cydoniifolia e 24 indivíduos de B. crassifolia. Das 60 sequências obtidas, foi possível identificar 22 regiões microssatélites e desenhar pares de primers para 17. Destes, 14 locos apresentaram polimorfismo e três foram monomórficos em três populações de B. cydoniifolia. O número de alelos variou de 3 a 17, com uma média de 10,45 alelos por loco. A heterozigosidade observada foi semelhante à heterozigosidade esperada, com os valores variando de 0,20 a 0,92 e 0,43 a 0,92, respectivamente. Foram identificados 39 alelos privados. Este conjunto de marcadores apresentou alta probabilidade combinada de exclusão de paternidade (Q) igual a 0,999 e probabilidade de identidade combinada (I) igual a I=7,84x10-1. Os valores globais obtidos para o índice de fixação (FIS) não foram significativos (P<0,05), enquanto que os valores de FST=0,082 e FIT=0,143 foram significativos. Para a espécie Byrsonima crassifolia, nove pares de primers produziram bons padrões de amplificação cruzada na população avaliada, apresentando uma média de 7,56 alelos por loco. A heterozigosidade observada variou de 0,250 a 0,958, maior do que a heterozigosidade esperada, que variou de 0,223 a 0,905. A probabilidade combinada de exclusão de paternidade (Q) foi alta igual a 0,998 e a probabilidade combinada de identidade igual a 6,42x10-9. A estratégia de desenvolvimento de marcadores microssatélites a partir da metodologia de biblioteca genômica enriquecida foi eficiente para gerar um painel com onze marcadores microssatélites polimórficos para B. cydoniifolia e nove marcadores microssatélites polimórficos transferidos com sucesso para B. crassifolia, disponibilizando uma ferramenta útil para estudos genético-populacionais não só para as espécies B. cydoniifolia e B. crassifolia, mas possivelmente para outras espécies próximas evolutivamente.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T11:33:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Macks Wendhell Gonçalves - 2015.pdf: 2230980 bytes, checksum: 89b6fe4e650d5cf40d848556e6b1de0a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-01-07T11:35:20Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Macks Wendhell Gonçalves - 2015.pdf: 2230980 bytes, checksum: 89b6fe4e650d5cf40d848556e6b1de0a (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-01-07T11:35:21Z (GMT). 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Amphibians are particularly sensitive to these variations due to their behavioral and physiological characteristics, such as, permeable skin (cutaneous respiration), low mobility and life cycle with simultaneous dependence of the aquatic and terrestrial environment. In this context, these animals could be used as bioindicators of the environmental quality in genotoxicity and mutagenicity studies. The aim of this study was to analyze the genomic damage in tadpoles of Dendropsophus minutus and Physalaemus cuvieri sampled in perturbed and natural areas, by the comet assay and micronucleus test. We found that the tadpoles of D. minutus and P. cuvieri collected in perturbed areas had the highest extensions of DNA damage compared to the tadpoles of natural areas. Tadpoles sampled in soybean crop areas had higher DNA damage, followed by those sampled in the cornfields. In contrast, the frequency of DNA damage in tadpoles of natural areas were significantly lower in relation to DNA damage suffered by tadpoles of agricultural areas. Thus, we can conclude that tadpoles of D. minutus and P. cuvieri sampled in this study can be considered excellent sentinel organisms, as they were sensitive to environmental changes. In addition, we can highlight the advantages of using the comet assay in environmental genotoxicity studies, such as its speed, high sensitivity in detecting DNA damage in the genome of amphibians, for a relatively low cost. However, it is necessary to invest in the standardization of methodologies for field studies, thus the results could be compared between different laboratories, and make environmental genotoxicity studies, involving aquatic organisms, more informative and applicable as a practical laboratory routine. / Populações de anfíbios tem diminuído em diversas áreas do mundo. Estes declínios têm se agravado nos últimos 25 anos, fazendo com que esses animais sejam agora considerados mais ameaçados do que outros táxons como por exemplo, mamíferos e aves. Numerosos fatores contribuem para esse decréscimo, no entanto, a poluição do meio ambiente tem sido recentemente citada como um dos principais fatores. Estes vertebrados são importantes no controle natural de pragas em áreas naturais e agrícolas, onde estão constantemente expostos a grandes quantidades de pesticidas. Estudos de genotoxicidade com anfíbios anuros se fazem importantes para se detectar espécies indicadoras de mudanças ambientais. Os anfíbios são particularmente sensíveis a essas variações devido às suas características comportamentais e fisiológicas, tais como, pele permeável (respiração cutânea), pouca mobilidade e ciclo de vida com dependência simultânea do ambiente aquático e terrestre. Neste contexto, estes animais podem ser utilizados como bioindicadores da qualidade ambiental em estudos de genotoxicidade e mutagenicidade. O objetivo deste estudo foi analisar os danos genômicos em girinos de Dendropsophus minutus e Physalaemus cuvieri amostrados em áreas antropizadas e naturais, via ensaio cometa e teste do micronúcleo. Os resultados deste estudo detectaram que os girinos de D. minutus e P. cuvieri amostrados em áreas antropizadas apresentaram as maiores extensões de danos genômicos quando comparados com os girinos de áreas naturais. Os girinos coletados nas áreas de lavoura de soja tiveram maiores danos no DNA, seguidos daqueles amostrados nas plantações de milho. Em contrapartida, a frequência de danos genômicos nos girinos de áreas naturais foram significativamente menores em relação aos danos genômicos sofridos pelos girinos das áreas agrícolas. Assim, pode se concluir que os girinos das espécies D. minutus e P. cuvieri amostrados neste estudo podem ser consideradas excelentes bioindicadores, uma vez que se mostraram sensíveis a alterações ambientais. Além disso, podese ressaltar as vantagens de se utilizar o ensaio cometa em estudos de genotoxicidade ambiental, como sua rapidez, alta sensibilidade em detectar danos no DNA no genoma de anfíbios, por um custo relativamente baixo. No entanto faz-se necessário a normatização de uma metodologia para estudos de campo, de forma que, os resultados possam ser comparados entre laboratórios diferentes, tornando assim, os estudos de genotoxicidade ambiental envolvendo organismos aquáticos mais informativos e aplicados como uma prática de rotina.

Submitted by Cláudia Bueno (claudiamoura18@gmail.com) on 2016-02-04T10:23:14Z No. of bitstreams: 2 Tese - Flavio Fernandes Veloso Borges - 2015.pdf: 2110689 bytes, checksum: 595ebd21ecf4f13568b0e3179e801f99 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-02-04T10:43:08Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Flavio Fernandes Veloso Borges - 2015.pdf: 2110689 bytes, checksum: 595ebd21ecf4f13568b0e3179e801f99 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-04T10:43:08Z (GMT). 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Due to the wide biological activities presented by SM and SB, the present study aimed to evaluate their antimutagenic activities using the Ames mutagenicity test in Salmonella typhimurium, their antigenotoxic activities using the mouse bone marrow micronucleous test and the alkaline comet assay, and to assess their effect on the gene expression pattern of some genes associated with the process of carcinogenesis and chemoprevention. To assess antimutagenicity, bacterial suspensions of Salmonella typhimurium (TA98 and TA100 strains) were treated with different concentrations of SM or SB simultaneously with the appropriate positive controls for each strain. To assess antigenotoxicity, Swiss mice were orally treated with different concentrations of SM or SB simultaneously with a single intraperitoneal dose of mitomycin C (MMC) for the micronucleus test, and human blood lymphocytes were cotreated with SM or SB and methyl methanesulfonate (MMS) for the alcaline comet assay. To investigate the role of SM and SB in modulating gene expression, we conducted microarray analysis. The results showed that SM was not significantly effective in reducing the number of frameshift mutations in strain TA98, while SB demonstrated significant protection at higher doses (p < 0.05). Regarding strain TA 100, SM and SB significantly decreased mutagenicity (point mutations) (p < 0.05). The results of the antigenotoxic evaluation demonstrated that SM and SB significantly reduced the frequency of micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) (p < 0.05). The results also indicated that SM and SB significantly attenuated MMC induced cytotoxicity (p < 0.05). In the comet assay, SM and SB significantly reduced the genotoxicity of MMS (p < 0.05), with a stronger antigenotoxic activity exerted by the extract complex (SM) than the one exerted by the isolated main active constituent (SB). The expression array analysis of five genes related to DNA damage, carcinogenesis and/or chemoprevention mechanisms demonstrated an up-regulation of PTEN and BCL2, down-regulation of BAX and ABL1 and no significant change in ETV6 expression levels.In conclusion, our results demonstrated that both SM and SB presented antimutagenic and antigenotoxic actions, as well as modulated the expression levels of genes analysed under the experimental conditions of this study. / A silimarina (SM) é um extrato padronizado obtido a partir das sementes e folhas de Silybum marianum (L.) Gaertn. SM é composta principalmente de flavonóides, sendo a silibinina (SB) seu principal componente ativo. Conhecidas principalmente como antioxidantes e hepatoprotetoras, SM e SB foram consideradas clinicamente eficazes no tratamento de uma variedade de doenças do fígado, incluindo hepatites virais agudas e crônicas, hepatites induzidas por toxinas e/ou drogas e cirrose. Assim, devido à ampla gama de atividades biológicas apresentadas pela SM e SB, o presente estudo teve como objetivo avaliar suas atividades antimutagênicas utilizando o teste de Ames em Salmonella typhimurium, suas atividades antigenotóxicas pelo teste do micronúcleo em medula óssea de camundongos e pelo teste do cometa em linfócitos humanos e avaliar seus efeitos nos perfis de expressão gênica de alguns genes associados ao processo de carcinogênese e quimioprevenção. Para a avaliação da antimutagenicidade, suspensões bacterianas de Salmonella typhimurium (cepas TA98 e TA100) foram co-tratadas com diferentes concentrações de SM ou SB e os controles positivos adequados para cada cepa. Para a avaliação de antigenotoxidade, camundongos Swiss foram tratados oralmente com diferentes concentrações de SM ou SB concomitantemente a uma única dose intraperitoneal de mitomicina C (MMC) para o teste do micronúcleo, e linfócitos humanos foram tratados simultaneamente com SM ou SB e metil-metanossulfonato (MMS) para o ensaio do Cometa. Os resultados mostraram que a SM não foi significativamente efetiva em reduzir o número de mutações com deslocamento de quadro de leitura na cepa TA 98, enquanto que a SB apresentou uma proteção significativa nas doses maiores (p < 0.05). Em relação à cepa TA100, SM e SB reduziram significativamente a mutagenicidade (mudanças de pares de bases) (p < 0.05). Na avaliação de antigenotoxidade, SM e SB reduziram significativamente a frequência de eritrócitos policromáticos micronucleados (EPCMN) (p<0,05). Os resultados também mostraram que a citotoxicidade causada pela MMC foi significativamente atenuada pela SM e SB (p<0,05). No ensaio do cometa, SM e SB reduziram significativamente a genotoxicidade provocada pelo MMS (p<0.05), com uma atividade antigenotóxica maior exercida pelo extrato complexo (SM) do que pelo principal componente ativo isolado (SB). A análise dos níveis de expressão de cinco genes relacionados ao dano no DNA, mecanismos de carcinogênese e/ou quimioprevenção demonstrou um aumento na expressão de PTEN e BCL2, diminuição na expressão de BAX e ABL1 e ausência de mudança significativa nos níveis de expressão do ETV6. Com base nesses resultados, conclui-se que a SM e a SB apresentaram ações antimutagênicas e antigenotóxicas, e também modularam os níveis de expressão dos genes analisados sob as condições experimentais deste estudo.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O interesse nos carboidratos de superfÃcie celular tem aumentado devido ao fato de estarem relacionados a diferenciaÃÃo e maturaÃÃo celular. A transformaÃÃo celular em neoplasias malignas està associado a alteraÃÃes na superfÃcie de membranas celulares, particularmente na composiÃÃo dos glicoconjugados, determinando sua capacidade em relaÃÃo a invasividade e potencial metastÃtico. Lectinas, proteinas amplamente distribuidas nos reinos animal e vegetal, tem a capacidade de ligarem-se a carboidratos de estrutura e configuraÃÃo especÃficas. Tem sido utilizadas como ferramentas em muitas Ãreas de investigaÃÃo diagnÃstica especialmente naquelas relacionadas a mudanÃas na expressÃo de carboidratos no citoplasma e na membrana celulares. O objetivo deste trabalho foi comparar o padrÃo de ligaÃÃo da frutalina, lectina &#945;-galactose ligante de Artocarpus incisa, biotinilada (FTL-B) com os marcadores usuais (CK19, GAL3, HBME-1) e o novo marcador para carcinomas papilares da tireÃide, 373-E1, em vÃrias lesÃes malignas e benignas da tireÃide e em tecido tireoidiano normal. FTL-B foi obtida por cromatografia de afinidade e biotinilada. CK19, GAL3 e HBME-1 foram obtidos de Novocastra Laboratories, Ltd., UK e 373-E1 de Labvision, UK. LesÃes tireoidianas e tecido tireoidiano normal em parafina foram utilizados para a construÃÃo de tissue micro-arrays os quais foram cortados a 2 Âm e marcados com CK19, GAL3, HBME-1 e 373-E1 pelo mÃtodo imuno-histoquÃmico da estreptoavidina-biotina-peroxidase e com FTL-B por mÃtodo lectino-histoquÃmico. As lesÃes incluÃam carcinomas papilares (90 casos), carcinomas foliculares (6 casos), carcinoma de cÃlulas de HÃrthle (2 casos), carcinoma anaplÃsico (4 casos), metÃstases linfonodais de carcinomas papilares (6 casos), adenoma de cÃlulas de HÃrthle (2 casos), adenomas foliculares (3 casos), bÃcio (4 casos) e tireoidite de Hashimoto (3 casos). NÃo houve marcaÃÃo em tecido tireoidiano normal ou nas lesÃes benignas usando FTL-B ou os marcadores usuais. Carcinomas papilares e metÃstases de carcinomas papilares marcaram fortemente a membrana celular com FTL-B. Os marcadores usuais e FTL-B mostraram padrÃes de marcaÃÃo semelhantes, sugerindo que FTL-B poderia ser usada como um marcador tumoral da mesma forma que CK19, GAL3, HBME-1 e 373-E1. / Increased interest has been devoted to cell surface carbohydrates, since they are related to cell differentiation and maturation. Cell transformation in malignant tumors is associated to altered surface membranes, particularly with an abnormal composition of glycoconjugates, determining characteristics of neoplastic cells as invasive behavior and metastasis. Lectins, proteins widely distributed in the plant and animal kingdom, have the distinctive property of binding to carbohydrates of specific structure and configuration. Lectins have been used as tools in many areas of diagnostic investigation especially related to changes in the expression of membrane and cytoplasmatic carbohydrates. The aim of this work was to compare the binding pattern of the biotinilated frutalin, Artocarpus incisa &#945;-galatose binding lectin (FTL-B), with the markers usually available (CK19, HBME-1, GAL3) and the new papillary thyroid carcinoma marker 373-E1 in various thyroid lesions and normal thyroid tissue. FTL-B was obtained by affinity chromatography and biotinilated. CK19, GAL3 and HBME-1 were obtained from Novocastra Laboratories, Ltd., UK and 373-E1 from Labvision, UK. Formalin-fixed, paraffin-embedded thyroid tissues were used to build tissue macro-arrays that were cut at 2 Âm and stained using FTL-B, CK19, GAL3, HBME-1 and 373-E1 by strepABC-HRP method. The cases included papillary carcinoma (90), follicular carcinoma (6), HÃrthle cell carcinoma (2), anaplastic carcinoma (4), nodal metastasis of papillary carcinoma (6), HÃrthle cell adenoma (2), follicular adenoma (3), goiter (4) and Hashimotoâs thyroiditis (3). There was no staining on benign thyroid lesions or normal thyroid tissue using FTL-B or the usual markers. Papillary carcinoma and metastasis from papillary carcinoma showed strong membranar stain using FTL-B. FTL-B and the usual markers showed similar binding pattern suggesting that FTL-B could be used as a thyroid tumoral marker similar to GAL3, CK19, HBME-1 and 373-E1.

Submitted by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-21T11:45:16Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gilberto Reis Agostinho Silva - 2013.pdf: 1917667 bytes, checksum: cdfc0fd8d032692bbf9bdb979e6da2b6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2014-11-21T13:01:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gilberto Reis Agostinho Silva - 2013.pdf: 1917667 bytes, checksum: cdfc0fd8d032692bbf9bdb979e6da2b6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-11-21T13:01:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Gilberto Reis Agostinho Silva - 2013.pdf: 1917667 bytes, checksum: cdfc0fd8d032692bbf9bdb979e6da2b6 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2013-10-07 / To investigate the prevalence of metabolic syndrome and associated pathophysiological aspects in adolescents of the municipal schools in Goiânia. Methodology: This study assessed the prevalence of metabolic syndrome in 200 adolescents, 114 females and 86 males, 10-16 years old, enrolled in the Municipal Education of Goiânia. Metabolic syndrome was identified according to the diagnostic criteria established by the NCEP - ATP III, adapted for children and adolescents. (2003). The variables evaluated were waist circumference, fasting glucose, the concentration of HDL-cholesterol and triglycerides and blood pressure. Results: We estimated a 12% prevalence of metabolic syndrome in adolescents of the Municipal School of Goiania, being higher among boys (15.1%) than in girls (9.6%) It was observed that 32% of adolescents had high abdominal fat, 27.5% hypertriglyceridemia, 2% hyperglycemia, 32% low levels of HDL-cholesterol and 18.5% elevated arterial blood pressure. Also identified was that the chances of developing metabolic syndrome was higher in adolescents with abdominal circumference (AC) high (OR = 35.09), followed by reduced HDL- cholesterol (OR = 21.65), high triglycerides (OR = 8.85) and blood glucose increased (OR = 2,50). Conclusions: We identified high rates of prevalence of metabolic syndrome and associated factors among adolescents from the Municipal Education of Goiânia in Goiania. These findings are relevant and indicate the need for effective public actions to treatment and prevention of metabolic syndrome. / Investigar a prevalência da síndrome metabólica e dos aspectos fisiopatológicos em adolescentes de escolas da rede municipal de Goiânia. Metodologia: O presente estudo avaliou a prevalência da síndrome metabólica em 200 adolescentes, sendo 114 do sexo feminino e 86 do sexo masculino, de 10 a 16 anos de idade, matriculados em escolas da Rede Municipal de Educação (RME) de Goiânia. A síndrome metabólica foi identificada de acordo com os critérios de diagnósticos estabelecidos pelo NCEP – ATP III, adaptados para crianças e adolescentes. As variáveis avaliadas foram circunferência abdominal, glicemia de jejum, concentração do HDL-colesterol e triglicérides do sangue e pressão arterial. Resultados: A partir dos fatores de risco encontrados foi estimada uma prevalência de 12% da síndrome metabólica entre os adolescentes da Rede Municipal de Ensino de Goiânia, sendo maior entre os meninos (15,1%) do que nas meninas (9,6%). Também foi observado que 32% dos adolescentes apresentavam alta concentração de gordura abdominal, 27,5% estavam com hipertrigliceridemia, 2% com hiperglicemia, 32% com baixos níveis de HDL-colesterol e 18,5% com alguma alteração da pressão arterial. A razão dos produtos cruzados indicou maiores chances de desenvolvimento da síndrome metabólica para a circunferência abdominal (CA) elevada (OR=35,09), seguido do HDL-colesterol reduzido (OR=21,65), triglicerídeos elevados (OR=8,85) e glicemia aumentada (OR=2,50). Conclusões: A partir dos resultados identificaram-se índices elevados da prevalência de síndrome metabólica e dos fatores associados, entre os adolescentes da Rede Municipal de Ensino de Goiânia. Esses achados são relevantes e indicam a necessidade de ações públicas efetivas para o tratamento e prevenção da síndrome metabólica.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / As lectinas constituem ferramentas biotecnolÃgicas de fundamental importÃncia em estudos histoquÃmicos e citoquÃmicos para a detecÃÃo de glicoconjugados nos tecidos. Entre estas aplicaÃÃes, destacam-se a identificaÃÃo de receptores de membrana e a detecÃÃo de estruturas caracterÃsticas de neoplasias. A Frutalina, uma lectina &#61537;-D-galactose-ligante encontrada em sementes de Artocarpus incisa, jà foi utilizada na detecÃÃo histoquÃmica de lesÃes malignas de mama e tireÃide. No presente trabalho foi realizada a clonagem e expressÃo do gene da frutalina em cÃlulas de Escherichia coli Origami (DE3) e foi determinada a estrutura tridimensional dessa proteÃna atravÃs da modelagem por homologia. A clonagem do gene da frutalina foi realizada a partir do produto amplificado da RT-PCR de sementes em diferentes estÃgios de maturaÃÃo dos frutos de A. incisa. Foram obtidos 12 clones, dos quais 5 foram seqÃenciados. A lectina recombinante foi expressa como cadeia Ãnica, formada pela cadeia beta com 20 resÃduos, ligada a um peptÃdeo de ligaÃÃo com quatro resÃduos, e a cadeia alfa com 133 resÃduos. A expressÃo da lectina foi indicada pelo aparecimento de uma banda protÃica com massa molecular aparente de 19,2 kDa, superior a da lectina nativa (15 kDa), apÃs a induÃÃo com IPTG 1mM. A lectina recombinante foi mantida exclusivamente em corpos de inclusÃo e foi reconhecida imunologicamente por anticorpos policlonais anti-Frutalina. Os modelos gerados para os clones obtidos indicam que as mutaÃÃes ocorridas nÃo alteram os sÃtios de ligaÃÃo a carboidratos das molÃculas. As mutaÃÃes nos clones obtidos sugerem a ocorrÃncia de isoformas dessa proteÃna. / The lectins constitute biotechnological tools of fundamental importance in hystochemical and cytochemical studies for the detection of tissue glycoconjugates. Among their applications are the identification of membrane receptors and the detection of neoplastic characteristic structures. Frutalin, an &#61537;-D-galactose-binding lectin from Artocarpus incise seeds, has already been used in the hystochemical detection of thyreoid and breast neoplasia. In this work was made a study of the cloning and expression of the frutalin gene in Escherichia coli Origami (DE3) cells and was determined the three-dimensional structure of this protein through homology modeling. The frutalin gene cloning was accomplished from the product on RT-PCR with seeds in distinct stages of development of the Artocarpus incisa fruits. Twelve clones were obtained, from which five were sequenced. The frutalin gene was expressed in E. coli using the pET15b expression vector. A recombinant lectin (rFrutalin) was expressed by growing the bacteria in the presence of isopropyl &#61538;-D-thiogalactopyranoside 1mM. All the recombinant lectin was found in an insoluble aggregated form as inclusion bodies. The recombinant lectin had a higher molecular mass (19,2 kDa) than the native lectin (15 kDa) as estimated by SDS-PAGE and Western blot analyses, showing that the recombinant single chain Frutalin is not processed in E. coli cells. The models generated for the clones obtained indicate that the mutations do not change the molecules active sites. Mutations in the clones obtained suggest the occurrence of isoforms of this protein.

Submitted by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-12-29T19:05:54Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação-Fernando Santiago Pires-2013.pdf: 1915773 bytes, checksum: 124080395d9b5ba7bc8951e1ec35c371 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Silva (jtas29@gmail.com) on 2014-12-29T19:06:19Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação-Fernando Santiago Pires-2013.pdf: 1915773 bytes, checksum: 124080395d9b5ba7bc8951e1ec35c371 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-12-29T19:06:19Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Dissertação-Fernando Santiago Pires-2013.pdf: 1915773 bytes, checksum: 124080395d9b5ba7bc8951e1ec35c371 (MD5) Previous issue date: 2013-02-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Xenobiotics pesticides are widely used in crops or even gardening throughout the world with purpose of a broad spectrum pest control, herbicides with glyphosate (N- phosphonomethyl glycine) as an active ingredient stands out amongst that group. The glyphosate (GLI) participates in a unique metabolic pathway during the synthesis of amino acids in plants, although, in animals it was thought to be harmless. However, literature indicates toxicity from commercial solutions, but few studies done with pure GLI. Moreover, to verify toxic potential of GLI, experiments done using Nuclear Magnetic Resonance (NMR). Furthermore, the test tanks were examined the presence of GLI for a period of 96 hours. It is because the GLI, during the metabolism of prokaryotes, converts to Aminomethylphosphonic acid (AMPA). The results showed the absence of AMPA at 96 hours of exposure, whereas, any changes were attributed to GLI in these animals. Primarily, the dose of CL50-96h for the experimental animal, Poecilia reticulata (guppy), was determined. It estimated at 68.51 ± 2.2 mg/L for males and at 70.56 ± 2.96 mg/L for females. The lethal dose calculated according to the recommended guidelines from the Organisation for Economic Co-operation and Development (OECD). During these tests the animals in the experimental group (EG) exposed at concentrations of 50, 55, 60.5, 66.5 and 73.2 mg/L showed swimming changes (17.5% - lethargy, 11.1 % - irregular swimming and 45.9% - hypoxia). Respiratory changes (8.3% - swam to the tank surface, 1.8% - hypo oxygenated) and changes in color pattern, such as loss of intensity of the hues orange, red, blue, and assuming a dull coloration (14.3%) in all EG. Subsequently, male’s guppy treated with sublethal doses of pure GLI in concentrations of 17.13 mg/L (25% CL50), 34.26 mg/L (50% CL50) and 51.39 mg/L (75% CL50) as per 203 guidelines of the OECD. After euthanasia, by descerebration, the male animals were dissected and the testicles fixed in buffered paraformaldehyde, sectioned in 2.0 μm slices by an ultramicrotome and placed in histoResin®. The sections stained with hematoxylin and toluidine blue/Floxine B, then photographed under light microscope. The program Image-Pro Plus provided the images, which analyzed by the program Statistica 7.0. Consequently, the data reviewed that GLI has toxic potential. It has the potential to: cause testicular regression - morphometric measures decrease, reduce the number of the spermatic compartments, reduce the gonad index (Igs) and promote histopathology which may lead to reduction or loss of function. Thus, characterizing a process of demasculinization, which indicates endocrine disruption. / Agrotóxicos são xenobióticos utilizados largamente nos lavouras ou mesmo em jardinagem em todo mundo para o controle de pragas agrícolas, e entre eles destacam-se os herbicidas a base de Glifosato (N-fosfonometil-glicina). O Glifosato (GLI) participa de uma rota metabólica exclusiva na síntese de aminoácidos nas plantas e foi considerado inofensivo aos animais. Contudo, há relatos na literatura que indicam a toxicidade das soluções comerciais à base de GLI, mas poucos abordam a atividade do GLI puro. Dessa maneira, para se verificar o potencial toxico do GLI, primeiramente, experimentos com Ressonância Magnética Nuclear (RMN) foram realizados para verificar a presença de GLI nos aquários testes pelo tempo de 96h. Isso foi feito porque o GLI pode ser convertido a ácido aminometil fosfônico (AMPA) pelo metabolismo de procariotos. Os resultados demonstraram ausência de AMPA até 96h de exposição e dessa forma foi atribuído ao GLI qualquer alteração presente nos animais testes. Depois foi determinado o valor da CL50-96h para o animal experimental Poecilia reticulata (guarú). Essa foi estimada em 68,51 ± 2,2 mg/L para machos e 70,56 ± 2,96 mg/L para fêmeas. Os testes de toxicidade letal para o cálculo da CL50-96h foram feitos de acordo com as recomendações do guia 203 da Organização para cooperação e desenvolvimento do comércio (OECD). Durante esses testes os animais do grupo experimental (GE) expostos nas concentrações de 50; 55; 60,5; 66,5 e 73,2 mg/L apresentaram alterações comportamentais como distúrbios natatórios (17,5% – letargia; 11,1% – natação irregular e 45,9% – hipoatividade), respiratórios (8,3% – nado na superfície do aquário; 1,8% – hipóxia) e alterações no padrão da coloração (14,3%) como perda da intensidade das matizes laranja, vermelha e azul e dos tons acetinados em todos os GE. Posteriormente guarús machos foram tratados com doses subletais do GLI puro nas concentrações de 17,13 mg/L (25% da CL50), 34,26 mg/L (50% da CL50) e de 51,39 mg/L (75% da CL50) conforme o guia 203 da OECD. Após a eutanásia por descerebração, os animais foram dissecados e os testículos foram fixados em paraformaldeído tamponado, inclusos em historresina e seccionados a 2,0 μm em ultramicrótomo. Os cortes foram corados com Azul de toluidina e hematoxilina/floxina e posteriormente fotografados em fotomicroscópio. As imagens forneceram dados obtidos pelo programa Image Pro-Plus que foram analisados pelo programa Statistica 7.0. Foi demonstrado que o GLI apresenta potencial tóxico para o guarú por causar regressão testicular pela redução das medidas morfométricas, redução do número de compartimentos espermáticos, redução do Índice gonadossomático (Igs) e por promover histopatologias que podem levar a diminuição ou a perda da funcionalidade do testículo. Tal processo caracteriza a desmasculinização, um indicativo de disrupção endócrina.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O trauma tecidual à seguido por uma cascata de eventos celulares e bioquÃmicos que resulta na formaÃÃo da ferida cicatrizada. Este processo pode ser dividido em trÃs fases: inflamaÃÃo, proliferaÃÃo e remodelaÃÃo. Lectinas sÃo (glico) proteÃnas que podem reconhecer e se ligar reversivelmente a carboidratos ou a outras substÃncias derivadas de aÃÃcares. Cratylia floribunda à uma espÃcie de leguminosa, encontrada exclusivamente na AmÃrica do sul da qual foi isolada a lectina de Cratylia floribunda (CFL). O objetivo deste trabalho foi investigar os efeitos do tratamento tÃpico diÃrio com a CFL em um modelo de cicatrizaÃÃo de lesÃes cutÃneas em camundongos. Feridas cirÃrgicas (1cm2) foram produzidas sob condiÃÃes assÃpticas na regiÃo dorsal de camundongos Swiss albinos (27-33g, n= 23/grupo), sendo estes posteriormente randomizados em dois grupo experimentais de acordo com o tipo de tratamento estabelecido: grupo C (soluÃÃo salina) ou grupo CFL (100 Âg/mL). As feridas foram tratadas diariamente com 100 &#956;L de cada soluÃÃo durante todo o perÃodo pÃs-operatÃrio (PO). As lesÃes cutÃneas foram submetidas à avaliaÃÃes clÃnicas diÃrias durante 12 dias, onde investigou-se parÃmetros macroscÃpicos relacionados à fase inflamatÃria e de fibroplasia. Os fragmentos de pele retirados nos dias de biÃpsia (2o, 7o e 12o dias PO) foram processados e analisados histopatologicamente. Paralelamente, verificou-se a capacidade da lectina em induzir a liberaÃÃo de citocinas prÃ-inflamatÃrias (TNF-&#945;) por macrÃfagos in vitro. CFL reduziu a frequÃncia, intensidade e a duraÃÃo dos sinais flogÃsticos edema e hiperemia. No 10 e 11 dias PO a presenÃa de crosta nas feridas do grupo tratado com a lectina foi significativamente menor (p<0,05) que no grupo controle. CFL antecipou a formaÃÃo do tecido de granulaÃÃo, sendo este visualizado em maior percentual das lesÃes cutÃneas. O grupo CFL apresentou um maior percentual de contraÃÃo das Ãreas das lesÃes desde os primeiros dias de tratamento e se manteve atà o 12 dia PO (p<0,05). As maiores diferenÃas entre os percentuais de contraÃÃo das lesÃes entre os grupos ocorreram no 1 dia PO (diferenÃa de 22,5%) e no 5 dia PO (diferenÃa de 20,5%). As Ãreas compreendidas pelas curvas (ASC) de evoluÃÃo em ambos os grupos demonstrou diferenÃa estatÃstica entre os grupos (C - 6,27  0,85; CFL - 4,00  1,28, p<0.05). Em relaÃÃo ao grupo C, CFL apresentou de forma significativa (p<0,05) um maior percentual de animais com feridas cicatrizadas no 10 e 11 dia de PO. O tratamento com a lectina antecipou o surgimento de tecido cicatricial, sendo estatisticamente significante (p<0,05) a frequÃncia com que este foi observado no 6 e 8 dia PO. As anÃlises histopatolÃgicas mostraram que o tratamento com a CFL favoreceu a resoluÃÃo da fase inflamatÃria. AlÃm disso, a fase proliferativa foi antecipada no grupo CFL, sendo este aspecto evidenciado pela presenÃa de um tecido de granulaÃÃo fibroso desde o 7 dia de PO, enquanto que no mesmo perÃodo, as lesÃes do grupo C apresentavam uma formaÃÃo inicial deste tecido. No 12 de PO foi observado uma completa reepitelizaÃÃo das lesÃes tratadas com CFL, enquanto que no grupo C um tecido de granulaÃÃo sendo ainda invadido por fibras colÃgenas. CFL in vitro estimulou a liberaÃÃo de TNF- &#945; em cultura de macrÃfagos peritoneais de camundongos. Esses resultados mostram que a lectina de Cratylia floribunda modula a fase inflamatÃria do processo cicatricial de lesÃes cutÃneas em camundongos. Hipotetizamos que in vivo a lectina estimula cÃlulas residentes (macrÃfagos) a liberaÃÃo de TNF-&#945;. Em conjunto, esses resultados revelam que a CFL favorece o reparo de lesÃes. / The tissue injury evokes a physiological process of complex cellular and biochemical events that results in wound healing. This process can be divided into three phases: inflammation, proliferation and remodeling. Lectins are (glyco)proteins that can recognize and reversibly bind to carbohydrates or other substances derived from sugars. Cratylia floribunda is a leguminous species, found only in South America, from which was isolated Cratylia floribunda lectin (CFL). The aim of this work was to evaluate the topical treatment of cutaneous wounds using CFL at a cicatricial model. Surgical wounds (1cm2) were produced aseptically in the dorsal region of male Swiss mice (27-33g; n=23/group), which were randomized in two experimental groups according to the treatment set: C (150 mM NaCl) or CFL (100 Âg/mL). Wounds were treated topically, daily, with 100 ÂL from each solution throughout all the post-operative period (PO). Clinical evaluation of the skin lesions was performed along 12 days and the parameters investigated were some macroscopic signals of inflammation and fibroplasia. Cutaneous biopsies have been carried out at 2nd, 7th and 12th PO to histopathological analysis. In parallel, the ability of the lectin to induce the in vitro macrophage release of TNF-&#945;, a pro-inflammatory cytokine, was evaluated. CFL reduced the frequency, intensity and duration of some flogistics signals, such as edema and hiperemy. At 10th and 11th PO the wounds treated with CFL had significantly less crust (p <0.05) than the lesions of the C group. CFL anticipated the formation of granulation tissue, being displayed in a greater percentage of skin lesions. The CFL group injuries presented a higher percentage of area contraction at the firsts day of treatment and this effect remained until the 12th PO (p<0,05). The major differences of the area contraction between the groups occurred at 1st PO (22.5%) and 5th PO (20.5%). CFL group showed a statistically lower area under the curve (AUC) of the area measures than the C group (C-6,27Â0,85; CFL- 4,00Â1,28, p<0.05). Compared to control group, CFL group showed a significant (p <0.05) percentual of animals with healed wounds at 10th and 11th PO. Treatment with the lectin anticipated the appearance of the cicatricial tissue, being statistically significant (p <0.05) the frequence that it was observed at 6th and 8th day PO. The histopathological analyses revealed that the treatment with CFL diminished the inflammatory phase of the wound healing. Moreover, the proliferation phase was anticipated in CFL group, since there was a fibrous granulation tissue since 7th PO on the lesions treated with CFL, while, at the same period in the C group lesions, there was an initial formation of the granulation tissue. At 12th PO, it was observed a complete reepithelization of the lesions treated with CFL, while, in C group lesions, there was a few collagen fibers among the granulation tissue. CFL stimulated the in vitro release of TNF-&#945; in peritoneal macrophages culture of mice. Those results show that Cratylia floribunda lectin modulates the inflammatory phase of the cicatricial process from cutaneous lesions in mice. We postulate that in in vivo the lectin stimulates resident cells (macrophages) for liberation of TNF-&#945;. Together, those results reveal that CFL favors the repair of lesions.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / No presente trabalho, foi realizado um estudo preliminar sobre a expressÃo de um gene de quitinase de classe I de feijÃo-de-corda (Vigna unguiculata L.Walp), a clonagem e expressÃo desse gene em cÃlulas de Escherichia coli BL21(&#955;)DE3 e a determinaÃÃo via modelagem por homologia da estrutura tridimensional dessa proteÃna. A expressÃo do gene da quitinase de classe I de feijÃo-de-corda foi obtida a partir de RT-PCR com oligonucleotÃdeos iniciadores especÃficos. Nessas reaÃÃes, foram usadas amostras de RNA total de sementes e vagens em diferentes estÃgios de crescimento (2, 4, 6, 8 , 10, 12, 14, 16 e 18 dias), pertencentes a dois genÃtipos contrastantes quanto a infecÃÃo pelo Callosobruchus maculatus, IT81D-1053 (resistente) e TE97-419-07F (suscetÃvel). A expressÃo foi avaliada tambÃm em folhas, raÃzes, epicÃtilo e hipocÃtilo de dois genÃtipos contrastantes quanto a infecÃÃo pelo nematÃide das galhas Meloidogyne incongnita, CE-31 (resistente) e TE97-411-1F (suscetÃvel). A clonagem do gene VuChiI foi realizada a partir do produto amplificado da RT-PCR de sementes de IT81D-1053, e do produto amplificado a partir do DNA genÃmico de MONTEIRO. Foram obtidos 11 clones confirmados, dos quais 9 foram seqÃenciados. A subclonagem do clone R7 foi realizada em pET15b e a expressÃo da proteÃna recombinante foi induzida na presenÃa de IPTG 1mM. A proteÃna recombinante, com aproximadamente 30 kDa, foi visualizada atravÃs de um SDS-PAGE. A proteÃna purificada atravÃs de uma cromatografia de afinidade em coluna de Sepharose com NÃquel imobilizado nÃo apresentou atividade quitinÃsica significativa. Os modelos gerados para os clones obtidos e para a quitinase nativa, indicam que as mutaÃÃes ocorridas nÃo alteram os sÃtios ativos das molÃculas. Dessa forma, a quitinase de classe I do feijÃo-de-corda parece apresentar expressÃo constitutiva em todas as partes da planta. A quitinase recombinante obtida foi pouco ativa. As mutaÃÃes pontuais nos clones obtidos sugerem a ocorrÃncia de isoformas dessa proteÃna, o que ainda deve ser elucidado no futuro / In this work we have made a preliminary study on the expression of a class I chitinase gene from cowpea (Vigna unguiculata L.Walp), cloning and expression of this gene in Escherichia coli BL21(&#955;)DE3 cells and, through homology modeling, we determined the three dimensional structure of this protein. The expression of the class I quitinase gene from cowpea was performed by RTÂPCR from the total RNA, with specific primers, from seeds and pods in distinct stages of development (2, 4, 6, 8 , 10, 12, 14, 16 and 18 days), belonging to two contrasting genotypes regarding to infection by Callosobruchus maculatus, IT81DÂ1053 (resistant) e TE97Â419Â07F (susceptible). The gene expression in leaves, roots, epicotyls and hipocotyls from two contrasting genotypes considering the infection by the nematoid Meloidogyne incongnita, CEÂ31(resistant) e TE97Â411Â1F (susceptible). The VuChiI gene cloning was accomplished from the amplified product on RTÂPCR with IT81DÂ1053 seeds, and the amplified product from the genomic DNA of MONTEIRO. Eleven clones were obtained, from which nine were sequenced. The cloning of R7 clone was accomplished in pET15b vector and the expression of the recombinant protein was induced in the presence of IPTG 1mM. The protein, with 30 kDa, was visualized through a SDSÂPAGE. The protein purified through an affinity chromatography in Sepharose column with immobilized Nickel did not had a significative hydrolytic activity. The models generated for the clones and for the native chitinase, have indicated that mutations that occurred did not changed the molecule's active sites. Thus, the class I chitinase gene from feijÃo de corda seems to present constitutive expression in all parts of the plant. The recombinant chitinase obtained was inactive. The specific mutations in the resulting clones suggests the occurrence of isoforms of this protein, what should be elucidated in the future.