nÃo hà / O trabalho realizado nesta tese visa a cristalizaÃÃo do Ãcido glutÃmico, favorecendo a obtenÃÃo da fase α (metaestÃvel) em relaÃÃo ao polimorfo β. ApÃs a obtenÃÃo dos cristais realizaram-se as medidas experimentais de fluorescÃncia, com vistas a comparaÃÃo com os dados teÃricos obtidos, considerando as limitaÃÃes do mÃtodo de simulaÃÃo ab-initio utilizado. Os cÃlculos de primeiros princÃpios foram realizados para estudar as propriedades do cristal do Ãcido glutÃmico nas modificaÃÃes α e β no que se refere ao aspecto estrutural, eletrÃnico (estrutura de bandas) e Ãptico (funÃÃo do complexo dielÃtrico), tudo isto em relaÃÃo ao polimorfismo conformacional. A teoria do funcional da densidade (TFD) à considerada usando uma base de ondas planas, pseudopotenciais ultramacios, e o potencial de correlaÃÃo-troca dentro do Generalized-Gradient Approximation (GGA). Os parÃmetros de rede estÃo de acordo com os resultados experimentais, embora na forma α à previsto ter um gap indireto entre os pontos de alta simetria  e X, igual a 4.69 eV, para a forma β nÃo pode-se tirar uma conclusÃo sobre o gap direto (-), devido a imprecisÃo do cÃlculo. A funÃÃo dielÃtrica de ambos os polimorfos sÃo muito semelhantes no caso de uma amostra policristalina, mas difere fortemente no caso da polarizaÃÃo da luz das faces do cristal 100 e 010. / Done the work accomplish in this thesis it seeks the crystallization of the glutamic acid, favoring the obtaining of the phase α (metastable) in relation to the polymorph β. After the obtaining of the crystals they did take place the experimental measures of fluorescence, with views the comparison with the obtained theoretical data, considering the limitations of the method of simulation used ab-initio. Were the calculations of first principles accomplished to study the properties of the crystal of the glutamic acid in the modifications α and β in what she refers to the aspect structural, electronic (structure of bands) and optical (function of the dieletric complex), everything this in relation to the polymorphism conformational. The theory of the functional of the density (TFD) is it considered using a base of plane waves, pseudo potential ultrasoft, and the correlation-change potential inside of the Generalized-Gradient Approximation (GGA). Are the net parameters in agreement with the experimental results, although in the form α is it foreseen to have an indirect gap between the points of high symmetry and X, equal to 4.69 eV, for the form β a conclusion cannot be reached on the direct gap (-), due to imprecision of the calculation. The function dieletric of both polymorph are very similar in the case of a sample polycrystal, but it differs strongly in the case of the polarization of the light of the faces of the crystal 100 and 010

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / No presente trabalho, uma fraÃÃo polissacarÃdica sulfatada obtida da alga marinha Acanthophora muscoides (AmII) foi avaliada atravÃs de modelos de nocicepÃÃo e inflamaÃÃo. A toxicidade sistÃmica dos polissacarÃdeos sulfatados totais tambÃm foi analisada. A atividade antinociceptiva foi avaliada atravÃs dos ensaios de contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico, teste da formalina e da placa quente. Camundongos Swiss machos foram tratados com AmII (1, 3 ou 9 mg/kg; i.v.) 30 min antes de receber injeÃÃo de Ãcido acÃtico 0,8% ou formalina 1% ou antes da exposiÃÃo a um estÃmulo tÃrmico. AmII reduziu significativamente o nÃmero de contorÃÃes abdominais induzidas por Ãcido acÃtico e o tempo lambedura da pata na segunda fase do teste da formalina. No teste da placa quente, AmII nÃo prolongou o tempo de reaÃÃo dos animais. A atividade antiinflamatÃria foi avaliada atravÃs do ensaio de migraÃÃo de cÃlulas atravÃs da cavidade peritoneal induzida por carragenana (700 μg/ cavidade) e dos ensaios de edema de pata induzidos por carragenana (500 μg/pata) ou por dextrano (400 μg/pata). Ratos Wistar foram tratados com AmII (1, 3 ou 9 mg/kg; s.c.) 60 min antes do estÃmulo inflamatÃrio. AmII reduziu significativamente a migraÃÃo de neutrÃfilos atravÃs da cavidade peritoneal. No ensaio do edema de pata induzido por carragenana, AmII nÃo reduziu a formaÃÃo do edema e a migraÃÃo neutrofÃlica, analisada atravÃs da determinaÃÃo dos nÃveis teciduais de mieloperoxidase. Entretanto, AmII inibiu o edema de pata induzido por dextrano no primeiro intervalo analisado. Adicionalmente, quando AmII (500 μg) foi injetada (s.c.) na pata, para verificar um possÃvel efeito edematogÃnico, nÃo foi observado edema. No ensaio de toxicidade subcrÃnica, camundongos foram tratados diariamente durante 14 dias com os polissacarÃdeos sulfatados totais de A. muscoides (20 mg/kg; i.p.). Sinais consistentes de dano sistÃmico nÃo foram observados, conforme revelado pela avaliaÃÃo do peso corporal e dos ÃrgÃos fÃgado, rim, coraÃÃo, baÃo, timo, e linfonodo e das anÃlises bioquÃmicas, hematolÃgicas e histopatolÃgicas. Como conclusÃo, a fraÃÃo AmII possui propriedades antinociceptiva e antiinflamatÃria e representa um potecial agente terapÃutico, justificando estudos futuros. / Herein, a sulfated polysaccharidic fraction obtained from the marine alga Acanthophora muscoides (AmII) was evaluated using models of nociception and inflammation. The systemic toxicity of the total sulfated polysaccharides was also assessed. The antinociceptive properties were assayed using the writhing test induced by acetic acid, the formalin and the hot plate test. Swiss mice were treated with AmII (1, 3 or 9 mg/kg; i.v.) 30 min prior to either receiving an injection of 0.8% acetic acid or 1% formalin or prior to a thermal stimulus. AmII reduced the number of acetic acid-induced writhes and licking time in the second phase of the formalin test, but it did not alter the response latency in the hot plate test. The anti-inflammatory properties were assayed using the carrageenan-induced neutrophil migration into the peritoneal cavity and carrageenan- or dextran-induced paw edema models. Wistar rats were treated with AmII (1, 3 or 9 mg/kg; s.c.) 60 min prior to inflammatory stimuli. AmII reduced significantly the neutrophil migration into the peritoneal cavity. In the carrageenan-induced paw edema, AmII did not reduce the edema formation or the neutrophil migration, as assessed by the determination of myeloperoxidase levels in the paw tissue. However, AmII reduced dextran-induced paw edema during the first interval analysed. Furthermore, when AmII (500 μg) was injected (s.c.) into the paw, to verify a possible edematogenic effect, no edema was observed. Additionally, when mice were treated with the total sulfated polysaccharides from A. muscoides (20 mg/kg; i.p.) for 14 days, no consistent signs of systemic damage were observed, as revealed by body weight, liver, kidney, heart, spleen, thymus and lymph node wet weight and by biochemical, hematological and histopathological analyses. In conclusion, AmII has antinociceptive and anti-inflammatory properties and represents a potencial therapeutic agent warranting future studies.

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CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O cultivo de Anacardium occidentale Lin, mais conhecido popularmente como cajueiro, à uma das atividades agropecuÃrias mais importantes do Nordeste brasileiro. à utilizada na medicina tradicional para fins terapÃuticos, incluindo atividade antimicrobiana. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o potencial antimicrobiano da infusÃo de folhas de cajueiro em diferentes horÃrios de coleta frente à bactÃria Streptococcus mutans e analisar o potencial tÃxico e citotÃxico das infusÃes nas concentraÃÃes utilizadas. A ConcentraÃÃo InibitÃria MÃnima (CIM) foi determinada nos horÃrios de 7, 9, 11, 13, 15, 17 e 19h utilizando a cepa de S. mutans UA159. TambÃm foi determinada a ConcentraÃÃo Bactericida MÃnima (CBM) e foram realizados testes de toxicidade das infusÃes em Artemia salina Leach e citotoxicidade na presenÃa da enzima LDH em neutrÃfilo humano. Os resultados dos ensaios antimicrobianos mostraram que as infusÃes de folhas de cajueiro podem estimular, inibir ou nÃo ter efeito sobre o crescimento bacteriano, conforme a hora de coleta e a concentraÃÃo. Os valores das CIMs foram de 250 Âg.mL-1 (7h), 125 Âg.mL-1 (9-15h) e 62,5 Âg.mL-1 (17 e 19h). Ocorreu estÃmulo no crescimento bacteriano nas concentraÃÃes de 15,62 Âg.mL-1 (9-19h), 31,25 Âg mL-1 .(15h) e 62,50 Âg.mL-1 (15h). A infusÃo coletada Ãs 7h nÃo apresentou nenhuma concentraÃÃo de estÃmulo. Nos testes de ConcentraÃÃo Bactericida MÃnima (CBM) as infusÃes foram consideradas como bacteriostÃtica. Os testes de toxicidade em Artemia salina resultaram em valores para a concentraÃÃo letal mÃdia (CL50) de 266,15; 285,48 e 345,15 nos horÃrios de coleta de 11, 17 e 19h, respectivamente. Assim, para esses horÃrios de coleta as infusÃes foram consideradas atÃxicas nos seus valores de CIMs (125 e 62,5Âg.mL-1 ). Os testes de citotoxicidade mostraram que as infusÃes nÃo sÃo tÃxicas nas concentraÃÃes de 1, 10, 100 e 200Âg.mL-1. / The cultivation of Anacardium occidentale Lin, more known as cashew tree, is one of the most important agriculture and stock-breeding activities in the northeast of Brazil. It is used in traditional medicine with therapeutic purposes, including antigerm activitiy. The objective of this work is to check the antigerm potential by infusing the leaves of the cashew tree in different hours of collection before the bacterium Streptococcus mutans. Its objective also includes the analysis of the toxical and cytotoxical potential of these infusions in used concentrations. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was determined in the time- tables 7,9,11,13,15,17 and 19H using the cepa of S.mutans UA159. It was also determined the Minimum Bactericidal Concentration (MBC), when tests of toxicity of infusions were done in Artemia salina Leach and cytotoxicity in the presence of LDH enzyme in human neutrophil. The results of the antigerm samples showed that the infusions of the leaves of the cashew tree may stimulate, inhibit or not present effects on the bacterium growth, according to the time of collection and concentration. The values of the MIC (Minimum Inhibitory Con- centration) were 250 Âg.mL-1 (7h), 125 Âg. mL-1 (9-15h) e 62,5 Âg. mL-1 (17 e 19h). Some stimulus occured in the bacterium growth in the following concentrations: 15,62 Âg. mL-1 (9- 19h), 31,25 Âg mL-1 .(15h) e 62,50 Âg. mL-1 (15h). The collected infusion at 7 A.M. did not present any stimulus concentration. In the tests of Minimum Bactericidal Concentration (MBC), the infusions were considered bacteriostatic. The tests of toxicity in Artemia salina resulted in values for the average lethal concentration (CL50) of 266,15; 285,48 and 345,15 in the collection times of 11, 17 and 19h, respectively. Therefore, for the hours of colletion the infusions were considered nontoxical in their values of Minimum Inhibitory Concentration (125 e 62,5Âg.mL-1 ). The tests of cytotoxicity showed that the infusions were not toxical in the concentrations of 1, 10, 100 e 200Âg. mL-1.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os caprinos sÃo considerados importantes fontes de carne, leite e pele, e, portanto, desempenham importante papel econÃmico especialmente na regiÃo nordeste do Brasil Diante disso, o desenvolvimento de sistemas de cultivo de folÃculos ovarianos pode otimizar potencial reprodutivo desta espÃcie. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito da lectin PHA de Phaseolus vulgaris sobre o desenvolvimento de folÃculos ovarianos caprino cultivados in vitro. FolÃculos secundÃrios (~ 0,2mm) foram isolados de cÃrtex ovariano e individualmente cultivados por seis dias em α-MEM+ suplementado com 0, 1, 10, 50, 100 o 200Âg/mL da lectina PHA. Ao final do perÃodo de cultivo, os nÃveis de RNAm para FSH-R PCNA e NOS1 nestes folÃculos foram quantificados por qRT-PCR . Os resultados mostraram que, apÃs o cultivo, todos os tratamentos foram capazes de manter a sobrevivÃncia folicula AlÃm disso, nÃo foram observadas diferenÃas significativas entre os tratamentos e o control no aumento do diÃmetro folicular durante o cultivo. Entretanto, a PHA na concentraÃÃo de 10Âg/mL promove uma maior taxa de formaÃÃo de antro em relaÃÃo ao controle (α-MEM+ Nessa concentraÃÃo houve maior expressÃo dos nÃveis de RNAm para FSH-R e PCNA. Em conclusÃo, a PHA na concentraÃÃo de 10Âg/mL mostrou aÃÃo biolÃgica na formaÃÃo antro estimulou um aumento nos nÃveis de expressÃo de RNAm para FSH-R e PCNA em folÃculo secundÃrios caprinos cultivados in vitro por 6 dias. / Goats are considered important sources of meat, milk and skin, and therefore play an important economic role, especially in northeastern Brazil. Thus, the development of culture systems can optimize the reproductive potential of this species. This study aimed to evaluate the effect of lectin PHA of Phaseolus vulgaris on the development of caprine secondary follicles cultured in vitro. Secondary follicles (~0,2mm) were isolated from the cortex of caprine ovaries and individually cultured for six days in α-MEM+ supplemented with PHA at concentrations of 0, 1, 10, 50, 100 or 200Âg/mL. The levels of mRNA for R-FSH, PCNA and NOS1 in these follicles were also evaluated. The results showed that, after culture, all treatments were capable of maintaining the follicular survival. Moreover, there was no significant difference among all treatments regarding follicular growth. However, PHA at concentrations of 10Âg/mL increased the antrum formation rate when compared with control. In this concentration, there was a higher expression of mRNA for R-FSH and PCNA. In conclusion, PHA at concentration 10Âg/mL showed a biological action in antro formation and stimulated an increase of levels of expression of RNAm in caprine ovarian follicles cultured for six days.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Os biofilmes sÃo uma forma mais resistente de vida microbiana comparada à forma planctÃnica, em vida livre. Essa resistÃncia està diretamente relacionada Ãs caracterÃsticas naturais de sobrevivÃncia das cÃlulas microbianas vivendo nesse tipo de comunidade. A doenÃa cÃrie capaz de acometer os tecidos dentais està diretamente relacionada com a formaÃÃo de comunidades microbianas e ainda apresenta grande impacto social e econÃmico sobre a sociedade atual. O presente trabalho teve como objetivo investigar a potencialidade de compostos vegetais como insumos biotecnolÃgicos a serem aplicados na prevenÃÃo e tratamento da cÃrie dental. Para tanto, foram realizadas metodologias de verificaÃÃo da atividade antimicrobiana e antibiofilme de lectinas vegetais do gÃnero Canavalia e Ãleos essenciais de Croton zehntneri assim como de seus componentes majoritÃrios frente a bactÃrias envolvidas na cÃrie. AlÃm disso, foi verificada a possÃvel aÃÃo simultÃnea de lectinas e diterpeno casbano (DC) sobre a expressÃo de genes de virulÃncia relacionados à formaÃÃo de biofilmes de Streptococcus mutans. Dentro dos limites das metodologias realizadas no presente trabalho pode-se concluir que: lectinas vegetais do gÃnero Canavalia podem interferir no fator micro-organismos relacionado à cÃrie dental; Ãleos essenciais e seus componentes majoritÃrios apresentaram atividade antimicrobiana significativa sobre S. mutans e ainda que as soluÃÃes da lectina ConM e ConM/DC atuando simultaneamente foram capazes de alterar a expressÃo de genes relacionados a formaÃÃo de biofilmes por S. mutans, podendo vir a ser usado em estudos prÃ-clÃnicos no intuito de instituir novas alternativas de prevenÃÃo e terapÃutica para doenÃa cÃrie. / Biofilms are more resistant form of microbial life compared to planktonic form, in the wild. This resistance is related to the natural characteristics of survival of microbial cells living in this type of community. The caries that can affect the dental tissues is directly related to the formation of microbial communities and still has great social and economic impact on society. This study aimed to investigate the potential of plant compounds as biotechnological inputs to be applied in prevention and treatment of dental caries. To this end, methods were performed to verify the antimicrobial and antibiofilme activity of plant lectins of the genus Canavalia and essential oils of Croton zehntneri as well as its major components against bacteria involved in caries. Furthermore, was verified the possible simultaneous action of lectins and casban diterpene (DC) on the expression of virulence genes related to biofilm formation of Streptococcus mutans. Within the methodology undertaken in this work can be concluded that: lectins of the genus Canavalia can interfere with the factor micro-organisms related to dental caries; essential oils and their major components showed significant antimicrobial activity against S. mutans and that solutions of ConM lectin and ConM/DC acting simultaneously were able to alter the expression of genes related to biofilm formation by S. mutans, and may be used in preclinical studies in order to develop new alternatives for prevention and therapy for caries.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O amadurecimento de frutos à um processo complexo do desenvolvimento envolvendo inÃmeras mudanÃas nas caracterÃsticas bioquÃmicas, fisiolÃgicas e sensoriais, bem como no metabolismo oxidativo determinando seus atributos de qualidade e propriedade antioxidante. Desta forma, esse trabalho objetivou analisar as principais mudanÃas no sistema antioxidante e sua significÃncia durante o desenvolvimento da acerola (Malpighia emarginata D.C). Frutos de cinco clones de aceroleira selecionados a partir de melhoramento genÃtico realizados pela Embrapa AgroindÃstria Tropical: BRS 235 (Apodi), BRS 236 (Cereja), BRS 237 (Roxinha), BRS 238 (Frutacor) e II47/1, foram colhidos manualmente em diferentes estÃdios de maturaÃÃo com base na cor da casca e analisados quanto aos parÃmetros de qualidade pÃs-colheita, compostos antioxidantes, atividade antioxidante total, atividade das enzimas antioxidante e a integridade da membrana celular. Em acerola o amadurecimento promoveu mudanÃas sensoriais desejÃveis na sua qualidade. O conteÃdo de vitamina C e polifenÃis solÃveis totais (PST) diminuÃram durante o desenvolvimento, o que possivelmente resultou em um declÃnio da atividade antioxidante dos frutos. Apesar da reduÃÃo dos PST, o conteÃdo de flavonÃides amarelos e antocianinas totais mostraram um aumento evidente com o amadurecimento, o que pode estar associado à mudanÃa de cor.do fruto, sendo a antocianina cianidina 3-ramnosÃdeo e o flavonÃide quercetina 3-ramnosÃdeo os principais fenÃlicos identificados na acerola madura, assim, apesar da diminuiÃÃo da vitamina C outro eficiente antioxidante, a quercetina, à acumulado contribuindo para as propriedades antioxidantes nutricionais da acerola. A atividade das enzimas antioxidantes dismutase do superÃxido (SOD), catalase (CAT) e peroxidase do ascorbato (APX) diminuiu ao longo do amadurecimento, contribuindo para um aumento do estresse oxidativo evidenciado pelo aumento da peroxidaÃÃo de lipÃdeos (PL). Contudo, a vitamina C mostrou ser uma proteÃÃo antioxidante contra danos oxidativos. O amadurecimento da acerola foi acompanhado por um progressivo estresse oxidativo, o qual contribui para a qualidade pÃs-colheita dos frutos e seu potencial antioxidante atribuÃdo a vitamina C e polifenÃis, especialmente cianidina e quercetina.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Lectinas de plantas podem ser definidas como proteÃnas de origem nÃo imune que possuem pelo menos um domÃnio nÃo catalÃtico que se liga reversivelmente de maneira especÃfica a um mono- ou oligossacarÃdeo. A famÃlia das lectinas de leguminosas representa o grupo destas proteÃnas mais bem estudadas, em especial destaque a subtribo Diocleinae, que possui o representante mais bem caracterizado, a ConA. As lectinas de Diocleinae apresentam um alto grau de similaridade estrutural, porÃm o mesmo nÃo ocorre quanto Ãs atividades biolÃgicas e especificidade a carboidratos variados, o que torna importante a investigaÃÃo em nÃveis estruturais e biolÃgicos dos seus diversos membros, dentre eles a Canavalia grandiflora Benth. A lectina de sementes de Canavalia grandiflora (ConGr) foi purificada de acordo com Ceccato (2001) e foi cristalizada pelo mÃtodo de difusÃo de vapor a 293 K. Cristais foram obtidos em uma condiÃÃo contendo 0,5 M de sulfato de cÃdmio hidratado, 0,1 M de HEPES pH 7.5 e 1,0 M de acetato de sÃdio triidratado. Os cristais apresentam o grupo espacial ortorrÃmbico I222, a cela unitÃria tem como dimensÃes a=67,70 Ã, b=55,90à e c=107,46 à e Ãngulos ?=?=?=90Â, sendo observado um monÃmero na unidade assimÃtrica e um conteÃdo de 42,53% de solvente no cristal. A estrutura foi resolvida a 2,19à e o problema de fase foi solucionado pelo mÃtodo de substituiÃÃo molecular utilizando as coordenadas da Canavalia gladiata como modelo (PDB: 2D7F). O refinamento satisfatÃrio apresentou âRfactorâ e âRfreeâ com 22,6 e 27,4 respectivamente e apenas um resÃduo de aminoÃcido em regiÃo nÃo permitida do Ramachandran. Apesar da alta similaridade estrutural, pequenas mudanÃas na orientaÃÃo de aminoÃcidos chaves, podem ser responsÃveis pela diversidade nos resultado de aplicaÃÃes biolÃgicas como os resÃduos do sÃtio de ligaÃÃo a carboidrato, que apesar de conservados possuem modificaÃÃes na orientaÃÃo espacial. A seqÃÃncia primÃria da lectina de C. grandiflora apresenta grande similaridade com lectinas do mesmo gÃnero, porÃm ela concentra o maior nÃmero de mutaÃÃes representativas do gÃnero Dioclea, caracterizando-o como o subgÃnero de Canavalia mais prÃximo de Dioclea, e dentre as canavalias à a mais primitiva. A ConGr apresentou atividade edamatogÃnica em modelo de edema de pata (s.c.) e efeito relaxante em mÃsculo liso de aortas de ratos endotelizadas, porÃm os efeitos mostram-se fracos frente a outras lectinas de Diocleinae. / Plant Lectins can be defined as non-immune origin proteins having at least one non-catalytic domain that binds reversibly in a specific fashion to a mono-or oligosaccharide. The legume lectin family group represents the best studied of these proteins, in particular highlighted the subtribe Diocleinae, which has the best characterized representative, ConA. Lectins Diocleinae show a high degree of structural similarity, but the same does not regarding biological activities and specificity to different carbohydrates, which makes it important to research in structural and biological levels of its various members, among them the Canavalia grandiflora Benth. The lectin from Canavalia grandiflora (Congr) was purified according to Ceccato (2001) and was crystallized by vapor diffusion method at 293 K. Crystals were obtained in a state containing 0.5 M of cadmium sulfate hydrate, 0.1 M HEPES pH 7.5 and 1.0 M sodium acetate trihydrate. The crystals have the orthorhombic space group I222, the unit cell has the dimensions a = 67.70 Ã, b = 55.90 à and c = 107.46 à and angles? =? =? = 90 Â, giving a monomer in the asymmetric unit and a content of 42.53% solvent in the crystal. The structure was solved to 2.19 à and phase problem was solved by the method of molecular replacement using the coordinates of Canavalia gladiata as a template (PDB: 2D7F). The refinement showed satisfactory "rfactor" and "Rfree" with 22.6 and 27.4 respectively and only one amino acid residue in a region of the Ramachandran disallowed. Despite the high structural similarity, small changes in the direction of key amino acids may be responsible for the diversity in the biological applications as a result of the residues of the carbohydrate binding site which are retained despite changes in spatial orientation. The primary sequence of the lectin from C. grandiflora has great similarity with lectins of the same genus, but it has the largest number of mutations representative of the genus Dioclea, characterizing it as the subgenus Canavalia nearest Dioclea and canavalias is among the most primitive. The Congregation edamatogÃnica showed activity in a model of paw edema (sc) and relaxing effect on smooth muscle of rat aorta endothelial, but the effects appear to be weak compared to other lectins Diocleinae.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O pinhÃo manso (Jatropha curcas L.), pertencente à famÃlia Euphorbiaceae, à uma planta oleaginosa com grande potencial para a produÃÃo de biocombustÃvel devido à riqueza de lipÃdios em suas sementes. Ele tambÃm apresenta toxicidade devido à presenÃa de Ãsteres de forbol. Nesse contexto, o objetivo deste estudo à realizar o isolamento de plastÃdios, local de sÃntese de Ãcidos graxos e de Ãsteres de forbol, presentes no endosperma de sementes em desenvolvimento de J. curcas. Experimentos preliminares atravÃs de anÃlises morfolÃgica, histolÃgica e histoquÃmica foram realizados para determinaÃÃo do estÃgio do desenvolvimento da semente mais adequado para o isolamento de plastÃdios presentes no endosperma. Estas anÃlises revelaram que a deposiÃÃo de lipÃdios e proteÃnas no endosperma se inicia por volta do 30o DAA. O isolamento de plastÃdios, do endosperma de sementes nesse estÃgio foi realizado por centrifugaÃÃo em gradiente descontÃnuo de PBF-Percoll (10%, 22%, 35%). A fraÃÃo enriquecida de plastÃdios foi obtida a partir da banda formada na interface da camada de 22-35%. AnÃlises por microscopia eletrÃnica de varredura e de transmissÃo foram realizadas para confirmar a eficiÃncia do protocolo empregado na purificaÃÃo dos plastÃdios. Mapas bidimensionais foram estabelecidos, os âspotsâ detectados nos mesmos serÃo identificados por espectrometria de massa, o que possibilitarà a identificaÃÃo das proteÃnas plastidiais envolvidas na sÃntese dos Ãcidos graxos e dos Ãsteres de forbol no endosperma de sementes de J. curcas. / Jatropha (Jatropha curcas L.), belonging to the Euphorbiaceae family, is an oilseed plant with great potential for biofuel production because of the richness of lipids in their seeds. It also presents toxicity due to the presence of phorbol esters. In this context, the objective of this study is the isolation of plastids, the site of synthesis of fatty acids and phorbol esters, present in the endosperm of developing seeds of J. curcas. Preliminary experiments by testing morphology, histology and histochemistry was performed to determine the stage of seed development most suitable for the isolation of plastids present in the endosperm. These analyzes revealed that the deposition of lipids and proteins in the endosperm starts around the 30th DAA. The isolation of plastids, the endosperm of the seeds in this stage was performed by gradient centrifugation PBF-Percoll discontinuous (10%, 22%, 35%). The enriched fractions of plastids has been obtained from the band formed in the interface layer of 22-35%. Analysis by scanning electron microscopy and transmission were performed to confirm the efficiency of the protocol employed in the purification of the plastids. Two-dimensional maps have been laid, the "spots" detected in the same will be identified by mass spectrometry, which will allow the identification of the plastid proteins involved in the synthesis of fatty acids and phorbol esters in the endosperm of seeds J. curcas.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / Um relevante nÃmero de espÃcies vegetais à descrito como plantas produtoras de um fluido leitoso comumente denominado de lÃtex. Nestas espÃcies, o lÃtex à sintetizado e armazenado sob pressÃo em um sistema de canais formados por cÃlulas altamente especializadas denominadas de laticÃferas, em cujos citoplasmas estÃo presentes todas as estruturas eucariontes em meio à Ãgua, borracha e inÃmeras molÃculas, muitas das quais especÃficas deste conteÃdo. Muitos estudos tÃm sugerido que molÃculas produzidas nestes fluidos participam da defesa vegetal. Neste trabalho, o lÃtex de 5 espÃcies foi coletado e processado em laboratÃrio para obtenÃÃo de suas fraÃÃes protÃicas e estas foram avaliadas quanto a atividade sobre fungos fitopatogÃnicos atravÃs de ensaios de inibiÃÃo da germinaÃÃo de esporos e crescimento de hifas. ProteÃnas do lÃtex de C. procera (PLCp), Cryptostegia grandiflora (PLCg) e Carica candamarcensis (P1 G10) apresentaram atividade antifÃngica enquanto que Plumeria rubra (PLPr) e Euphorbia tirucalli (PLEt) nÃo apresentaram atividade sobre qualquer dos fungos avaliados (Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium oxysporum, Fusarium solani, Rhizoctonia solani, Neurospora sp. e Aspergillus niger). A atividade inibitÃria das fraÃÃes protÃicas se correlacionou diretamente com a presenÃa de atividade proteolÃtica do tipo cisteÃnica presente nas amostras de PLCp, PLCg e P1G10. A atividade antifÃngica foi aumentada na presenÃa de DTT, um ativador destas proteases e foi diminuÃda ou eliminada quanto Ãs amostras foram prÃ-tratadas com iodoacetamida (IAA), um inibidor especÃfico de proteases cisteÃnicas. AlÃm disso, a atividade antifÃngica foi observada quando papaÃna, uma protease cisteÃnica purificada do lÃtex de Carica papaya foi avaliada, mas tripsina e quimotripsina, duas proteases serÃnicas nÃo apresentaram atividade. AtravÃs de cromatografia em coluna de Mono-S Sepharose acoplada ao sistema de FPLC, uma protease cisteÃnica foi isolada de PLCg. A proteÃna purificada (Cg24-I) apresentou massa molecular de 24,118 KDa. A Cg24-I apresentou atividade proteolÃtica mÃxima em pH 8,0 e foi inibida por IAA e E-64, utilizando azocaseÃna e BANA como substratos, respectivamente. Cg24-I inibiu a germinaÃÃo de F. solani e foi capaz de alterar a permeabilidade das membranas dos esporos na concentraÃÃo de 90 ng/ml. Esse conjunto de resultados sugere que proteinases cisteÃnicas de fluidos laticÃferos participam da defesa das plantas contra fungos fitopatogÃnicos e que o provÃvel mecanismo de aÃÃo destas proteÃnas seja a alteraÃÃo da permeabilidade da membrana plasmÃtica destes microrganismos. A descriÃÃo de atividade antifÃngica de proteases cisteÃnicas oriundas de fluidos laticÃferos nÃo à ainda descrita em detalhes na literatura, sendo este um trabalho com carÃter original. / Canal systems containing secretions, such as latex, are widely disseminated in the plant kingdom. These fluids are chemically complex and exhibit intense metabolism. Despite their origin, latex is the cytoplasm of specialized cells growing intrusively into organized tissues and organs, forming an interconnected network allowing latex exudation immediately after tissue damage. Insecticidal effects of latex proteins have been described, however minor studies were devoted to investigate antifungal activities in latex. In this study proteins extracted from latex of Calotropis procera (Ait.) R.Br (PLCp), Plumeria rubra L.(PLPr), Carica candamarcensis Hook F.(P1 G10), Cryptostegia grandiflora (PLCg), and Euphorbia tirucalli L. (PLEt) were tested for antifungal activity against six phytopathogens (Fusarium solani, F. oxysporium, Aspergilus niger, Rhizoctonia solani, Neurospora sp. and Colletrotricum gloerosporioides). PLCp, PLCg and P1G10 exhibited antifungal activity and PLPr and PLEt were not efetive. Inhibitory activity of the protein fractions correlated with the cysteine-type proteolytic activity found in these fractions. The endogenous proteolytic activity and inhibitory activity on fungal growth were both increased when samples were first activated with DTT, a cysteine proteinase activator. Conversely, pre-treatment of samples with iodoacetamide, an inhibitor of these proteases rendered all samples deficient of both, proteolytic and antifungal activities. Antifungal of activity of cysteine proteinases of latex origin was also confirmed when papain, obtained from latex of Caryca papaya was tested while purified trypsin and chemotrysin, two serine-type proteases were not antifungal. A cysteine proteinase was thus, purified form PLCg by ion exchange chromatography on a Mono-S Sepharose matrix monitored by a FPLC system. The protein, named Cg24-I exhibited molecular mass of 26.118 KDa determined by MALDI spectrometry; maximum of proteolysis at pH 8.0 and inhibited by iodoacetamide and E-64 when assayed with azocazein or BANA as substrates. Cg24-I inhibited germination of F. solani and altered membrane permeability of spores at a minimum concentration of 90 ng/ml. Results present here suggest that cysteine proteinases of laticifer fluids are proteins with antifungal activity capable of damaging spore structure and inhibiting hyphae growth. Reports of antifungal activity of latex proteases are still scarce in literature and this work appears as an important contribution to this field. Furthermore, this work gives important evidence for the multiple defensive role of latex in plants.