Orientadora: Lucia Maria Carareto Alves / Banca: Tiago Santana Balbuena / Banca: Mariana Carina Frigieri / Resumo: Os micro-organismos representam uma importante fonte de produtos naturais bioativos diversos. Esses organismos produzem enzimas que exercem papel importante em processos industriais com alto valor econômico agregado ou ambientalmente desejado. Apresentam uma série de vantagens em seu uso e produção. No presente trabalho foram utilizados consórcios degradadores de resíduos da biomassa lignocelulolítica, visando o isolamento e identificação de micro-organismos de interesse biotecnológico. De acordo com os resultados obtidos é possível verificar que apesar dos consórcios produzirem celulase, nenhum isolado produziu esse tipo de enzima. Foram isoladas bactérias produtoras de amilase, protease, lipase e solubilizam fosfato. Utilizando o sequenciamento do 16s rRNA foi identificado isolados pertencentes aos gêneros Burkholderia, Pandoraea, Pseudomonas, Bacillus, Asticcacaulis. / Abstract: Microorganisms represent an important source of many bioactive natural products. These organisms produce enzymes that are important in industrial processes with high value aggregate economic or environmentally desired. The use of enzymes of microbial origin has been widely explored due to a series of industrial and environmental advantagens.In this present work, a degrading consortium of lignocellulose biomass residues was used aiming the isolation and identification of the bacteria that produce enzymes with biotechnological interest. According to the observed results it can be said that although the consortia produces cellulose, isolated bacteria do not then produced no such enzyme. Bacteria isolated produced amylase, protease, lipase and phosphatase. With the sequencing of the 16S rRNA it was possible to determine that the isolates belong to the genus Burkholderia, Pandoraea, Pseudomonas, Bacillus, Asticcacaulis. / Mestre

Orientador: Maria Célia Bertolini / Banca: Flávio Henrique da Silva / Banca: Nilce Maria Martinez Rossi / Banca: Maria Isabel Nogueira Cano / Banca: Nádia Monesi / Resumo: As células eucarióticas são capazes de responder e de se adaptar a diferentes condições ambientais estressantes tais como o choque térmico, modulando sua atividade metabólica. Na levedura Saccharomyces cerevisiae o choque térmico é conhecido por induzir múltiplos genes relacionados a esta forma de estresse, através dos elementos transativadores Hsf1p (Heat Shock Protein) e Msn2/4p, os quais se ligam, respectivamente, às seqüências consensos HSE e STRE, ativando a transcrição. A seqüência nucleotídica do gene da glicogênio sintase (gsn) de Neurospora crassa foi previamente isolada em nosso laboratório e uma análise da expressão gênica mostrou que a transcrição do gene foi diminuída na situação de choque térmico (30 para 45ºC). Uma análise da região 5' flanqueadora revelou a presença dos elementos de DNA CRE, HSE e STRE tanto na região promotora do gene quanto na 5'-UTR. Neste trabalho, nós investigamos o envolvimento destes elementos de DNA na regulação da transcrição na condição de choque térmico, através de ensaios de mobilidade em gel (EMSA) usando como sondas, fragmentos de DNA contendo os elementos transcricionais citados anteriormente. Para isto, foram utilizados como fonte de proteínas extratos nucleares brutos ou fracionados em coluna de Heparina-Sepharose, preparados a partir de micélios coletados antes e após choque térmico (amostras HS30). Os resultados obtidos mostraram a presença de proteínas capazes de reconhecer e ligar aos elementos de DNA testados sob a condição estressante analisada. A especificidade das bandas de mobilidade reduzida foi confirmada por diferentes ensaios de competição, tais como 1) adição prévia de sondas de DNA não marcadas antes da reação de ligação, 2) adição de oligonucleotídeo de DNA dupla fita contendo o elemento STRE do promotor gsn como competidor específico, 3) utilização...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Eukaryotic cells respond and adapt to environmental stressing conditions such as heat shock, by modulating metabolic responses to counteract them. In the yeast Saccharomyces cerevisiae heat shock activates multiple stressing related genes by the trans acting elements Hsfp (Heat shock factors) and Msn2/4p, which bind to the cis regulatory elements HSE (Heat Shock Element) and STRE (Stress Responsive Element), respectively, and activates the gene transcription. We have previously isolated the gene encoding the Neurospora crassa glycogen synthase (gsn) and demonstrated that the gene transcription was decreased under heat shock (30 to 45ºC). An analysis of the gsn 5' flanking region showed the presence of the DNA elements CRE, HSE, and STRE, in the promoter region and in the 5'-untranslated region. In this work we investigated the involvement of these DNA elements in gene transcription regulation under heat shock condition by performing electrophoretic mobility shift assays (EMSA) using, as probes, DNA fragments containing the regulatory elements, and crude or Heparin-Sepharose fractionated nuclear extracts prepared from mycelia collected before and after 30 min of heat shock (HS30 sample). Ours results showed the presence of nuclear proteins capable to recognize and bind to the DNA regulatory elements under heat stress. The specificity of the DNA shifts were confirmed by using 1) unlabelled DNA probes as specific competitor, 2) the gsn promoter STRE double-stranded oligonucleotide as specific competitor, 3) a mutated gsn promoter STRE probe, and 4) the HSE unlabelled probe in a cross-reaction competition assay with the gsn promoter STRE probe. The involvement of the regulatory CRE elements in the modulation of the gsn gene transcription was investigated by using EMSA in the wild type strain, and also in two N. crassa mutant strains defective in the cAMP-signaling pathway: one having hyperactive...(Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Resumo: O estabelecimento de condições para a realização de fermentações em meio sintético em escala de laboratório é uma pesquisa relevante que permite estudar alterações metabólicas e genéticas das leveduras durante os ciclos sucessivos de fermentação. A composição da matéria-prima industrial apresenta alterações constantes e os dados industriais são obtidos sem a precisão e reprodutibilidade dos dados obtidos em pesquisas científicas. Em uma seqüência longa de bateladas repetidas com o reuso de células, a recuperação das células mortas ou a simples perda celular da viabilidade, causadas por morte celular, ou a simples perda de viabilidade causada pelas condições do processo não podem ser ignoradas. Um excesso de biomassa no final do processo indica que a população de leveduras passou por renovação celular. Fermentações descontínuas alimentadas por pulsos decrescentes de sacarose foram utilizadas no presente trabalho. Como o inóculo usado foi muito alto, o crescimento celular foi menor durante a fermentação. O volume final de trabalho dentro do reator, contendo inicialmente todos os componentes exceto sacarose e leite de levedura, atingiu um aumento de 25% no seu depois de 4 horas de alimentação. Devido aos inóculos altos utilizados, um tratamento para recuperação do leite de levedura foi necessário entre os ciclos de fermentação a fim de minimizar as perdas em biomassa e viabilidade. Dados obtidos mostraram que uma redução no tamanho do inóculo levou a perdas em viabilidade. Depois da adição de cada pulso de sacarose, um reajuste do pH do meio para 4,5 foi necessário. Uma solução de água contendo sacarose e extrato de levedo nos permitiu revitalizar o leite de levedura com ganhos em biomassa e viabilidade durante 15 horas de incubação à 30ºC antes do ciclo de fermentação seguinte. Entre os ciclos de fermentação, perdas dramáticas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The establishment of conditions to carry out fermentations in synthetic medium at laboratory scale is a very relevant research that will allow us to study metabolic and genetic alterations during the successive cycles of fermentation. The composition of the raw industrial materials show constant alterations and the industrial data are generally obtained without the precision and reproducibility of the data obtained in scientific research. In a long sequence of repeated batch processes with cell reuse, the recuperation of dead cells or the simple loss of viability caused programmed cell death or simply loss of viability caused by process conditions can not be ignored. Biomass excess at the end of the process indicates that the yeast population went through a cell renewal. Discontinuous fermentations fed by decreasing pulses of sucrose were used in the present work. As inoculum was very high, the growth was low during the fermentation. The volume inside the reactor, containing initially all medium components except sucrose and yeast cream, reached a 25% increase in its working volume after 5 hours feeding. Due to high inoculums used, a treatment for the yeast cream recuperation was required between the fermentation cycles in order to minimize the losses in biomass and viability. Data obtained showed that a decrease in the inoculums size leads to drops in viability. After the addition of each sucrose pulse, a pH readjustment to 4.5 was required. A water solution containing sucrose and yeast extract allowed us to revitalize the yeast cream with gains in biomass and viability during 15 hour incubation at 30ºC before the next fermentation cycle. Between the fermentation cycles, dramatic drops in viability were observed when an amount of 200 g.L-1 sucrose was added in relation to the final volume of medium inside the reactor, but only discrete variations were observed when 156 g.L-1 sucrose... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Cecília Laluce / Coorientador: Reinaldo Marchetto / Banca: Maria Lúcia Gonsales da Costa Araujo / Banca: Daniel Ibraim Pires Atala / Mestre

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-28Bitstream added on 2014-06-13T20:35:41Z : No. of bitstreams: 1 pretti_ts_me_araiq.pdf: 459776 bytes, checksum: 4075a8c966b016a5d917d0ff63c38633 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Devido ao crescente interesse na produção de substâncias ativas a partir de fontes naturais, os fungos vêm sendo considerados um grupo importante de microrganismos em função do seu enorme potencial de exploração, representando uma fonte inesgotável para a obtenção de vários produtos biotecnológicos industriais. Dentre estes produtos, o pigmento melanina produzido pelo fungo Aspergillus nidulans tem considerável potencial biotecnológico para ser usado em formulações cosméticas, principalmente pelas suas atividades antioxidante, antiinflamatória e fotoprotetora. No entanto, para uma possível aplicação prática desta substância é necessário estabelecer as condições ótimas de cultivo do fungo para a produção em larga escala com um custo menor comparado à melanina sintética. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a influência do volume de meio de cultura, do tempo de incubação e da utilização de resíduos industriais (água de maceração de milho, bagaço de cana de açúcar e melaço) como fontes de nutrientes no crescimento e produção de pigmento pelas linhagens MEL1 e MEL2 de Aspergillus nidulans. Os resultados mostraram que na presença de 2% de água de maceração de milho o crescimento celular foi maior enquanto que na concentração de 0,2% houve um aumento na produção de pigmento pelas linhagens em estudo. Quando melaço (1% e 10%) foi usado como fonte de carbono, a produção de pigmento foi inibida em ambas as concentrações, enquanto um alto rendimento de biomassa foi obtido com 10% de melaço. A suplementação do meio com hidrolisado do bagaço da cana-de-açúcar não teve um efeito positivo na produção de pigmento, embora tenha proporcionado um aumento no crescimento das linhagens. Também foi observado que a morfologia do fungo (tamanho do “pellet”) influencia a produção de pigmento, sendo que na cultura... / Due to an increasing interest in the production of actives substances from natural sources, fungi has been considered an important group of microorganisms in function of its enormous potential for exploitation, representing an inexhaustible source to obtain several industrials biotechnology products. Among these products, the melanin pigment produced by fungi Aspergillus nidulans has considerable biotechnological potential to be used in cosmetic formulations, mainly for its antioxidant, anti-inflammatory and photoprotetor activities. However, for a possible practical application of this substance, is necessary to establish the optimal conditions of the fungal culture for large scale production with low cost compared to synthetic melanin. In this context, the objective of this work was to evaluate the influence of volume of culture medium, period of incubation and the use of by-products industrial (corn steep liquor, sugar cane bagasse and molasses) as nutritional source on growth and pigment production by strains MEL 1 and MEL 2 from Aspergillus nidulans. The results showed that, in the presence of 2% corn steep liquor, the cell growth was high while at concentration of 0,2% occurred an increase in the pigment production. When molasses (1 or 10%) was used as carbon sources, the pigment production was inhibited in both concentrations while a high yield of biomass was obtained with 10% molasses. The supplementation of medium with sugar cane bagasse hydrolysate didn´t has a positive effect on pigment production but it provided an increase in the fungal growth. Also was observed that the fungal morphology (pellet size) influenced the production of pigment, being the smaller pellets more suitable for maximum production of the pigment. Thus, the results obtained suggest that corn steep liquor contain substances that stimulate the synthesis of pigment and thus the cultivation with... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:21Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-10Bitstream added on 2014-06-13T20:16:33Z : No. of bitstreams: 1 000737304.pdf: 599788 bytes, checksum: 3c0e4ba9cbd16debc1aaf8235e004268 (MD5) / Os micro-organismos representam uma importante fonte de produtos naturais bioativos diversos. Esses organismos produzem enzimas que exercem papel importante em processos industriais com alto valor econômico agregado ou ambientalmente desejado. Apresentam uma série de vantagens em seu uso e produção. No presente trabalho foram utilizados consórcios degradadores de resíduos da biomassa lignocelulolítica, visando o isolamento e identificação de micro-organismos de interesse biotecnológico. De acordo com os resultados obtidos é possível verificar que apesar dos consórcios produzirem celulase, nenhum isolado produziu esse tipo de enzima. Foram isoladas bactérias produtoras de amilase, protease, lipase e solubilizam fosfato. Utilizando o sequenciamento do 16s rRNA foi identificado isolados pertencentes aos gêneros Burkholderia, Pandoraea, Pseudomonas, Bacillus, Asticcacaulis. / Microorganisms represent an important source of many bioactive natural products. These organisms produce enzymes that are important in industrial processes with high value aggregate economic or environmentally desired. The use of enzymes of microbial origin has been widely explored due to a series of industrial and environmental advantagens.In this present work, a degrading consortium of lignocellulose biomass residues was used aiming the isolation and identification of the bacteria that produce enzymes with biotechnological interest. According to the observed results it can be said that although the consortia produces cellulose, isolated bacteria do not then produced no such enzyme. Bacteria isolated produced amylase, protease, lipase and phosphatase. With the sequencing of the 16S rRNA it was possible to determine that the isolates belong to the genus Burkholderia, Pandoraea, Pseudomonas, Bacillus, Asticcacaulis.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-04-30Bitstream added on 2014-06-13T20:35:53Z : No. of bitstreams: 1 rosa_h_me_rcla.pdf: 518038 bytes, checksum: 7164c25e5c6edcbdfe45e7d510c0cc68 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Durante a de fermentação alcoólica industrial, contaminações são comuns no meio fermentativo, causadas por bactérias e/ou leveduras selvagens. Um dos principais problemas devido a contaminações microbianas é a floculação das leveduras, responsável por dificuldades operacionais na indústria e implicações econômicas. A floculação pode ser resolvida por um tratamento enzimático à base de proteases, que agem na parede celular da levedura, substituindo o tratamento convencional, que emprega ácido sulfúrico. No entanto, o tratamento enzimático é economicamente inviável para a aplicação industrial. Para reduzir esses custos, o presente trabalho estudou duas técnicas para reutilizar a atividade catalítica da papaína. A primeira foi baseada na recuperação da enzima livre pela centrifugação da suspensão de leveduras. A segunda foi a imobilização da enzima nos suportes quitina e bagaço de cana (celulose). A enzima foi imobilizada em quitina tratada ou não com glutaraldeído, empregando diferentes concentrações de polietilenoimina, perfazendo 6 diferentes protocolos de imobilização em quitina. A imobilização em bagaço de cana foi efetuada pela ativação da celulose com ácido periódico. A quantidade de proteína imobilizada e os rendimentos da atividade da enzima imobilizada foram muito baixos nas técnicas de imobilização. A atividade específica da enzima imobilizada, no entanto, foi satisfatória em algumas imobilizações, com exceção daquelas que utilizaram suporte tratado com glutaraldeído, mostrando o efeito negativo desse reagente sobre a papaína e a importância do aprimoramento dessa técnica. A suspensão de leveduras tratada com papaína livre foi centrifugada e esse processo foi realizado 14 vezes, usando a mesma papaína recuperada. O uso de SDS nesse processo para potencializar a desfloculação celular... / During the industrial alcoholic fermentation contaminations are common due to bacterium and/or wild yeasts in the wort. One of the principal problems due to microbial contaminations is the yeasts flocculation, responsible by industrial operational difficulties and economic implications. The flocculation can be solved by protease enzymatic treatment, which acts on the yeast cellular wall, changing the conventional treatment, which employs sulfuric acid. However, the enzymatic treatment is economically impracticable for industrial application. In order to reduce these costs, this work studied two techniques to reuse the catalytic activity of papain. The first one was based on the free enzyme recuperation by yeast suspension centrifugation. The second one was the enzyme immobilization on chitin and sugar cane bagasse (cellulose) supports. The enzyme was immobilized on treated or nontreated chitin with glutaraldehyde, using different concentrations of polyethylenimine, resulting in 6 different immobilization techniques on chitin. The immobilization on cane bagasse was made by cellulose activation with periodic acid. The quantity of immobilized protein and its activity yields were very low in the immobilization techniques. Nevertheless, the specific activity of the immobilized enzyme was satisfactory in several immobilizations, except those which have used treated-support with glutaraldehyde, showing the negative effect of this reagent on papain and the importance of improvement of this technique. The yeast suspension treated with free papain in solution was centrifuged and this process was done 14 times, using the same recovered papain. The use of SDS in this process to improve the cell deflocculation wasn’t efficient. The yeast cell suspension centrifugation after free-enzyme treatment must be studied to industrial purposes.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-02-25Bitstream added on 2014-06-13T19:36:14Z : No. of bitstreams: 1 arenasvelasquez_am_me_araiq.pdf: 997352 bytes, checksum: 9599053b27f7ec5bce201d3d5079009a (MD5) / Trypanosoma brucei é o agente etiológico da tripanossomíase africana ou doença do sono, transmitida por dípteros do gênero Glossina, conhecidos como moscas tsé-tsé. O diagnóstico e tratamento da doença não são satisfatórios, uma vez que para o tratamento está disponível um número de drogas altamente tóxicas e com um efeito limitado, pois dependem da fase da doença, das condições fisiológicas do hospedeiro, da suscetibilidade e variabilidade genética da cepa. Além do alto custo, o tratamento é potencialmente perigoso e está limitado ao surgimento de resistência generalizada aos fármacos utilizados. O diagnóstico é limitado à associação dos sintomas com a doença, muitas vezes é confundido com outras doenças pelo que o paciente não recebe o tratamento adequado. Por isso, tem-se a necessidade de buscar novos fármacos com melhor atividade tripanocida. Neste trabalho, avaliou-se a atividade tripanocida de 38 compostos diferentes e inéditos, como N1,N2-dibenziletano-1,2-diamina (cloridratos de benzil diaminas), N1-benzil,N2-metilferroceniletano-1,2-diamina (cloridratos de diaminas de ferroceno), 2-metoxi/hidroxi-3-(1-alquenil)-1,4-naftoquinonas e seus derivados 2-amina-1,4-naftoquinonas contra as cepas 427 e 29-13 de T. brucei. A eficácia dos compostos foi avaliada pelo método colorimétrico do MTT [brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazoliom]. Os resultados encontrados foram similares aos das atividades metabólicas das células (parasitas e/ou células HepG2 - linhagem de células de hepatoma, usada como modelo para simular funções hepáticas humanas in vitro), sendo o IC50 (metade da concentração inibitória máxima) calculado por regressão linear para cada composto. Da série anterior, o composto cloridrato de... / Trypanosoma brucei is the etiologic agent of sleeping sickness (Human African Trypanosomiasis [HAT]), transmitted by flies of Glossina genus, known as tsetse flies. The diagnostic and treatment of this disease are not satisfactory, since the treatment uses many toxicity drugs with limited effects, because depend on the stage of the disease, morphological diversity, heterogeneous biological behaviour, different clinical courses and the virulence appears to be an intrinsic property of each strain and high genetic variability. Besides the high cost, the treatment is potentially dangerous and limited the emergence of widespread drug resistance. The diagnosis is limited to the association of symptoms with the disease, is often confused with other diseases so the patient does not receive adequate treatment. Thus, the development of new research is necessary in order to generate new drugs with trypanocidal activity. In this work, we evaluated the trypanocidal activity of 38 inedited compounds of N1,N2-dibenzylethane-1,2-diamine hydrochlorides, N1-benzyl,N2-methyferrocenylethane-1,2-diamine hydrochlorides, 2-metoxy/hydroxy-3-(1-alquenyl)-1,4-naphtoquinones and amine derivatives of this compounds (2-amine-1,4-naphtoquinones) against 427 and 29-13 T. brucei parasite strains. The efficacy of these compounds was also measured using the reduction of MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]. The results were similar to the metabolic activity of cells (parasites and/or HepG2 - hepatoma cell line used as a model to simulate human hepatic functions in vitro), being the IC50 (half of the maximum inhibitory concentration) calculated by linear regression for each sample. The compounds N-(ferrocenylmetyl)-N’-(4-metoxybenzyl)ethane-1,2-diamine) hydrochlorides and 2-metoxy-3-(2-phenylethenyl)-1,4-naphtoquinone... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:04Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2011-03-14Bitstream added on 2014-06-13T19:08:51Z : No. of bitstreams: 1 delfino_db_me_araiq.pdf: 1550804 bytes, checksum: e3a406c927290ba804d64ea65eb89c6c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Este trabalho descreve a síntese de peptídeos em fase sólida (SPFS) derivados de toxinas bacterianas, tais como CcdB e ParE, e a produção de sistemas nanoestruturados como lipossomas e microemulsões. As toxinas intracelulares, produzidas por sistemas de morte pós-segregacional (PSK) em bactérias são exemplos recentes de agentes inibidores de enzimas fundamentais para a reprodução do microrganismo. Resultados promissores foram obtidos em relação a inibição da atividade da DNA girase, por derivados peptídicos destas duas proteínas. In vitro, os valores de concentração inibitória têm sido abaixo de 5 μmol.L-1, porém ensaios in vivo não demonstraram reprodutibilidade, basicamente devido à baixa permeabilidade da membrana bacteriana a estes derivados. Desta forma, foram produzidos lipossomas e microemulsões com o objetivo de promover o acesso de moléculas peptídicas sintéticas, derivadas do CcdB e ParE, ao meio intracelular e, conseqüentemente, aos seus alvos: DNA girase ou topoisomerase IV. Lipossomas do tipo SUV (small unilamellar vesicles) foram preparados por extrusão a partir de fosfatidilcolina de soja e estearilamina e mostraram uma eficiência de encapsulação de 77% e inibiram o crescimento tanto de bactéria Gram positiva quanto Gram negativa em 58 e 75%, respectivamente. Sistemas microemulsionados a base de fosfatidilcolina de soja, Tween 20, etanol e ácido oléico apresentaram uma incorporação do peptídeo acima de 90% e a formulação com 15% de ácido oléico e CcdBET2 a 4 μmol.L-1 apresentou uma inibição do crescimento de bactéria Gram negativa de 75,5%. O diâmetro dos lipossomas foi medido por espalhamento dinâmico de luz e as microemulsões foram caracterizadas por microscopia de luz polarizada e sua viscosidade determinada por reologia. Portanto, lipossomas e microemulsões podem ser utilizados como sistemas de drug delivery para análogos peptídicos derivados do CcdB e do ParE / This work describes the synthesis of peptides derived from bacterial toxins, such as CcdB and ParE, by solid phase peptide synthesis (SPPS) and the production of nanostructured systems such as liposomes and microemulsions. Intracellular toxins produced by systems of killer post-segregational (PSK) in bacteria are recent examples of inhibitors of key enzymes for the reproduction of the microorganism. Promising results were obtained for the inhibition of DNA gyrase activity by peptide derivatives of these proteins. In vitro, the IC100 values have been below 5 μmol.L-1, but not demonstrated in vivo reproducibility, mainly due to the low permeability of the bacterial cell to these derivatives. Thus, the aim with this work was develop of liposomes and microemulsions to promote access of synthetic peptide molecules derived from the CcdB and ParE, to the intracellular medium and consequently to their targets: DNA gyrase and topoisomerase IV. Liposomes SUV type (small unilamellar vesicles) were prepared by extrusion from soybean phosphatidylcholine and estearilamina and showed an encapsulation efficiency of 77% and inhibited the growth of both Gram positive and Gram negative in 58 and 75% respectively. Microemulsion systems based soybean phosphatidylcholine, Tween 20, ethanol and oleic acid showed an incorporation of the peptide above 90% and the specific formulation with 15% oleic acid and the 4 μmol.L-1 CcdBET2 incorporate showed a growth inhibition of Gram negative of 75.5%. The diameter of liposomes was measured by dynamic light scattering and microemulsions were characterized by polarized light microscopy and its viscosity determined by rheology. Therefore, liposomes and microemulsions may be used as drug delivery systems for peptide analogues derived from the CcdB and ParE

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-03-11Bitstream added on 2014-06-13T20:29:35Z : No. of bitstreams: 1 martins_ap_me_araiq_parcial.pdf: 803021 bytes, checksum: 804ec0f53b60292a8f9532a0179cf5e2 (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-30T11:22:10Z: martins_ap_me_araiq_parcial.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-30T11:23:06Z : No. of bitstreams: 1 000719251_20171231.pdf: 670436 bytes, checksum: 5568579de711dae552f537b78e54f563 (MD5) Bitstreams deleted on 2018-01-02T17:04:40Z: 000719251_20171231.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2018-01-02T17:05:46Z : No. of bitstreams: 1 000719251.pdf: 1345177 bytes, checksum: f8b7d8e1b6f813b3d43740594a3e7002 (MD5) / O maracujá amarelo azedo (Passiflora edulis f. flavicarpa Degener) pode ser consumido in natura ou industrializado. Sua importância é dada pelo valor medicinal, popularmente usado no tratamento da ansiedade, insônia e irritabilidade; alimentício, na forma de polpa congelada e suco, doces, geleia e sorvete; e nutracêutico ou alimento funcional, apresentando elevados teores de íons fosfato e potássio, vitamina A, B1 (tiamina), B2 (riboflavina) e C (ácido ascórbico). Algumas alterações podem ocorrer durante o processamento e armazenamento do suco interferindo na cor e sabor do produto final, o que pode implicar em não aceitação por parte dos consumidores. Isso pode ocorrer principalmente devido a reações bioquímicas de escurecimento e alterações bioquímicas moleculares que resultam em flavors indesejáveis e perda de nutrientes. Por esse motivo o controle desses efeitos indesejáveis durante o processamento de frutos é muito importante para a preservação da aparência natural dos mesmos. Deste modo as enzimas Pectinametilesterase (PME; EC: 3.1.1.11), Peroxidase (POD; EC: 1.11.1.7), Polifenoloxidase (PPO; EC: 1.10.3.1) e Ascorbato Oxidase (AO; EC: 1.10.3.3) podem ser responsáveis pelo escurecimento enzimático e outras reações que alteram o produto durante e ao final do processamento. Visto isso, com o objetivo de agregar valores nutricionais e mercadológicos ao maracujá vem sendo desenvolvida e usada a cultura híbrida, que, em síntese, significa o uso de sementes modificadas e com manejo adequado, com vistas à racionalização do uso de defensivos agrícolas e aumento de produtividade. O objetivo desse trabalho é estudar o comportamento cinético das enzimas já citadas e avaliar os teores de compostos bioativos como vitamina C, compostos fenólicos, flavonóides, e atividade antioxidante em cinco... / The yellow passion fruit (Passiflora edulis f. flavicarpa Degener) can be eaten in natura or industrialized. Its importance is given by medicinal value, commonly used for treating anxiety, insomnia and irritability; food in the form of frozen pulp and juice, candy, jelly and ice cream, and nutraceutical or functional food, with high levels of potassium and phosphate ions, Vitamin A, B1 (thiamine), B2 (riboflavin) and C (ascorbic acid). Some changes may occur during processing and storage of the juice interfere the color and flavor of the final product, which can result in non-acceptance by the consumers. This can occur mainly due to biochemical browning and reactions molecular biochemical changes that result in undesirable flavors and nutrient loss. Therefore the control of these undesirable effects during processing of fruits is very important for preserving the natural appearance. Thus, enzymes pectinmethilesterase (PME, EC: 3.1.1.11), peroxidase (POD, EC: 1.11.1.7), Polyphenoloxidase (PPO, EC: 1.10.3.1) and ascorbate oxidase (AO, EC: 1.10.3.3) can be responsible for enzymatic browning and other reactions that alter the product during and after processing. Seen it, with the goal of adding nutritional value and market the passion fruit has been developed and used a hybrid culture, which, in summary, means the use of modified seeds and with appropriate management, with a view to rationalizing the use of pesticides and increase productivity. The aim of this work is to study the kinetic behavior of the enzymes already mentioned and evaluate the contents of bioactive compounds such as vitamin C, phenolic compounds, flavonoids and antioxidant activity of five hybrid the yellow passion fruit tart cultivar. The main results of this study was to visualize distinct kinetic behaviors of the same enzyme in hybrids studied and higher levels... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:23:05Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-10Bitstream added on 2014-06-13T20:29:48Z : No. of bitstreams: 1 santos_ma_me_araiq.pdf: 1654932 bytes, checksum: 6a8607912411fc8812340494300f0501 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os organismos pertencentes ao reino dos fungos têm exercido um papel fundamental no avanço da compreensão dos mecanismos moleculares de organismos eucariotos devido as suas facilidades de manipulação e o conhecimento das características genéticas e bioquímicas envolvidas em seu ciclo de vida. Neurospora crassa é um fungo cujos mecanismos genéticos e bioquímicos básicos são bem definidos, e por isso tem sido muito usado como um sistema modelo em pesquisas que visam à elucidação de processos celulares complexos. Em trabalhos anteriores desenvolvidos em nosso laboratório foram identificadas algumas proteínas que se ligam à região promotora do gene gsn que codifica a enzima glicogênio sintase, regulatória no processo de síntese de glicogênio. O presente trabalho teve como objetivo estudar algumas dessas proteínas, anotadas como hipotéticas, numa tentativa de entender melhor as suas participações no mecanismo de regulação. Para isto linhagens mutantes nos genes que codificam as referidas proteínas foram adquiridas junto ao Fungal Genetics Stock Center. Análises de determinação do conteúdo de glicogênio nas linhagens mutantes foram realizadas tanto em condições normais de crescimento (30º C) como em situações de choque térmico (45º C). Todas as linhagens mutantes avaliadas apresentaram um perfil de acúmulo de glicogênio semelhante ao da linhagem selvagem, isto é, todas apresentaram uma queda nas quantidades de glicogênio após o choque térmico. Entretanto a linhagem mutante na ORF NCU06679 apresentou o conteúdo de glicogênio mais reduzido, em ambas as situações ambientais (antes e depois do choque térmico). Com o objetivo de verificar o envolvimento das proteínas estudadas na expressão do gene gsn, experimentos de Northern blot foram realizados e revelaram que na situação de estresse térmico, os níveis do transcrito gsn diminuem semelhantemente... / The organisms belonging to the kingdom of fungi have played a key role in advancing the understanding of the molecular mechanisms of eukaryotic organisms due to their easy handling and the genetic and biochemical mechanisms involved in their life cycle. Neurospora crassa is a fungus whose basic biochemical and genetic mechanisms are well defined, and therefore has been widely used as a model system in studies aimed to elucidate complex cellular processes. In a previous work developed in our laboratory we identified some proteins that bind to the promoter region of the gsn gene that encodes glycogen synthase, the regulatory enzyme in the glycogen synthesis. This work aimed to start studying these proteins, annotated as hypothetical proteins, in an attempt to better understand their roles in the regulation of glycogen metabolism. For this, mutant strains in genes encoding the proteins were purchased from the Fungal Genetics Stock Center. Analysis of glycogen determination were performed in the mutant strains both under normal growth (30º C) and under heat shock condition (45º C). All mutant strains showed a glycogen content profile similar to the wild type strain, that is, all showed a decrease in the amounts of glycogen after heat shock. However the mutant strain in the ORF NCU06679 presented lower glycogen content compared to the wild type strain, in both environmental condition (before and after heat shock). To verify the participation of the proteins in the gsn gene expression, Northern blot experiments were performed and showed that under heat stress the gsn transcript levels decreased similarly to that observed in the wild type strain. However the reduction in the gene expression was higher in the mutant strain containing the ORF NCUO6679 knocked out