Made available in DSpace on 2014-12-17T15:32:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 BrunaAA_TESE.pdf: 3866204 bytes, checksum: 7934d035171f609056bc3ea2c84219b1 (MD5) Previous issue date: 2011-02-16 / Periodontal disease is an infection initiated by oral periodontal pathogens that trigger an immune response culminating in tissue destruction. This destruction is mediated by the host by inducing the production and activation of lytic enzymes, cytokines and the stimulation of osteoclastogenesis. The aim of this study was to compare the immunohistochemical expression of factors involved in bone resorption, RANKL (Ligand Receptor Activator of Nuclear Factor kappa B), OPG (Osteoprotegerin) and TNF-&#945; (tumor necrosis factor alpha) between the gingival healthy, gingivitis and chronic periodontitis and correlate them with clinical parameters. The sample consisted of 83 cases and 12 clinically healthy gums, 42 gingivitis and 29 periodontitis, from 74 adolescent and adult patients with a mean age of 35 years, without systemic changes and non-smokers, predominantly female and race brown. There was no statistically significant difference for the expression of anti-RANKL (p = 0.581) and RANKL / OPG ratio (p = 0.334) when comparing the three conditions, but the anti-OPG and anti-TNF-&#945; showed statistically significant between the types of injury (p = 0.001 and p <0.001, respectively), showing greatest expression in periodontitis. In cases of periodontitis, the variable clinical attachment loss (PIC) was statistically significant and positive correlation, respectively, with immunostaining of anti-RANKL (p = 0.002, p = 0.001 and r = 0.642), anti-OPG (p = 0.018, p = 0.014 and r = 0.451), anti-TNF-&#945; (p = 0.032, p = 0.014 and r = 0.453) and the percentage ratio of RANKL / OPG (p = 0.018, p = 0.002 and r = 0.544). The tooth mobility (MB) showed a statistically significant difference only with immunohistochemical anti-RANKL (p = 0.026), and probing depth (PD) was positively correlated with anti-RANKL (p = 0.028 and r = 0.409), both in cases of periodontitis. Only in cases of gingivitis TNF-&#945; was positively correlated with RANKL (p = 0.012 and r = 0.384) and the RANKL / OPG ratio (p = 0.027 and r = 0.341). Given these results, we conclude that the greatest expression of TNF-&#945; in periodontitis demonstrates a relationship with the progression and severity of periodontal disease and the correlation between all antibodies and clinical attachment loss demonstrates their involvement in periodontal bone resorption / A doen?a periodontal ? uma infec??o oral iniciada por periodontopat?genos que desencadeiam a resposta imune culminando com a destrui??o tecidual. Essa destrui??o ? mediada pelo hospedeiro atrav?s da indu??o da produ??o e ativa??o de enzimas l?ticas, citocinas e da estimula??o da osteoclastog?nese. O objetivo deste estudo foi comparar a express?o imuno-histoqu?mica dos fatores envolvidos na reabsor??o ?ssea, RANKL (Ligante do Receptor Ativador do Fator Nuclear kappa B), OPG (Osteoprotegerina) e TNF-&#945; (Fator de Necrose Tumoral Alfa) entre a gengiva clinicamente saud?vel, a gengivite e a periodontite cr?nica, correlacionando-os com os par?metros cl?nicos periodontais. A amostra consistiu de 83 casos, sendo 12 de gengivas clinicamente saud?veis, 42 de gengivite e 29 de periodontite, oriundos de 74 pacientes adolescentes e adultos com idade m?dia de 35 anos, sem altera??es sist?micas e n?o fumantes, predominantemente do sexo feminino e da ra?a parda. N?o houve diferen?a estatisticamente significativa para express?o do anticorpo anti-RANKL (p=0,581) e da raz?o RANKL/OPG (p=0,334) quando se comparou as tr?s condi??es cl?nicas, mas o anti- OPG e anti-TNF-&#945; mostraram diferen?as estatisticamente significativas entre os tipos de les?o (p=0,001 e p<0,001, respectivamente), revelando maior imunoexpress?o na periodontite. Nos casos de periodontite, a vari?vel perda de inser??o cl?nica (PIC) mostrou diferen?a estatisticamente significativa e correla??o positiva, respectivamente, com a imunomarca??o dos anticorpos anti-RANKL (p=0,002; p=0,001 e r=0,642), anti-OPG (p=0,018; p=0,014 e r=0,451), anti-TNF-&#945; (p=0,032; p=0,014 e r=0,453) e com a raz?o percentual de RANKL/OPG (p=0,018; p=0,002 e r=0,544). A mobilidade dent?ria (MB) apresentou diferen?a estatisticamente significativa somente com a imunoexpress?o do anti-RANKL (p=0,026), e a profundidade de sondagem (PS) apresentou correla??o positiva com o anti- RANKL (p=0,028 e r=0,409), ambos nos casos de periodontite. Somente nos casos de gengivite o TNF-&#945; apresentou correla??o positiva com o RANKL (p=0,012 e r=0,384) e com a raz?o RANKL/OPG (p=0,027 e r=0,341). Diante desses resultados, conclui-se que a maior imunoexpress?o do TNF-&#945; na periodontite demonstra uma rela??o com a progress?o e severidade da doen?a periodontal e a correla??o entre todos os anticorpos e a perda de inser??o cl?nica demonstra o envolvimento destes na reabsor??o ?ssea periodontal

A reabsorção radicular é um evento fisiológico para os dentes decíduos. Porém, há casos em que esses dentes são mantidos à cavidade bucal além do tempo de esfoliação normal, mesmo quando os dentes permanentes sucessores estão presentes. Como são escassos os dados disponíveis sobre a real causa da retenção prolongada dos dentes decíduos, as razões exatas merecem ser investigadas. O objetivo desta pesquisa foi analisar se fatores locais (RANKL, RANK, OPG, MCP-1, RUNX2) ou sistêmicos (vitamina D, PTH, IGF-I) poderiam estar relacionados à biologia óssea e radicular em casos de retenção prolongada de dentes decíduos, com presença dos dentes permanentes correspondentes in situ, a fim de se buscar compreender possíveis etiologias do quadro. Para isso, foram selecionados pacientes com dentes decíduos em retenções prolongadas (n=14, grupo R) e pacientes sem dentes decíduos retidos (n=14, grupo C), mas com indicações ortodônticas de exodontias. Após as extrações dentais, foram coletados remanescentes do ligamento periodontal em torno das raízes dentais e amostras de sangue dos pacientes, que foram avaliados por qPCR e quimioluminescência, respectivamente. Houve diferença estatisticamente significante para RANKL (p=0,023) entre os grupos C e R, com menor expressão gênica de RANKL no grupo R. Da mesma forma, foi observada uma menor expressão de RANK no grupo R, comparado ao grupo C; contudo, essa diferença não foi significativamente diferente. Houve também um resultado próximo do valor de significância para vitamina D (p=0,0572), com níveis séricos reduzidos dessa vitamina no grupo R. Não houve diferenças estatisticamente significantes entre os grupos para os outros fatores estudados. Com base nos dados deste estudo, pode-se sugerir que menores expressões de RANKL e RANK possam estar envolvidas na retenção prolongada de dentes decíduos e que baixos níveis séricos de vitamina D também possam estar associados com o retardo na esfoliação radicular decídua. / Root resorption is a physiological event for primary teeth. However, there are cases where these teeth are maintained beyond the normal exfoliation time, even when the corresponding permanent teeth is present. Since there are few data concerning the real cause of prolonged retention of primary teeth, the exact reasons must be investigated. The aim of this study was to assess if local factors like RANKL, RANK, OPG, MCP-1, RUNX2, or systemic factors such as vitamin D, PTH and IGF-I could to be involve in the bone and root biology, in cases of persistent primary teeth, with the corresponding permanent teeth in situ. Patients with persistent primary teeth (n=14, group R) and patients without persistent primary teeth (n=14, group C), but with orthodontic indication of tooth extraction, were selected. After the teeth extractions, remaining periodontal ligament around the roots and blood samples were collected and assessed by qPCR and chemiluminescence, respectively. The present study found significant lower level of RANKL in the group R compared to group C (p=0,023). Although it was not significantly different, the level of RANK was also reduced in group R compared to group C. The expression of others local factors was similar between group R and C. Concernig systemic factors, the serum level of vitamin D were reduced in the group R compared to group C (p=0,0572) although it was not statistically significant. There were no significant differences between both groups for the others systemic studied factors. It is possible that a lower RANKL and RANK expression is involved in prolonged retention of primary teeth and our data also suggest that low serum levels of vitamin D could also be involved in the etiology of the retention.

A periodontite à um processo inflamatÃrio crÃnico que acomete os tecidos de sustentaÃÃo dos dentes caracterizados por extensa reabsorÃÃo Ãssea alveolar. Cimicifuga racemosa à uma planta herbÃcea, pertencente à famÃlia Ranunculaceae, originÃria do Canadà e da costa atlÃntica dos Estados Unidos, sendo comumente usada na medicina tradicional como agente analgÃsico, anti-inflamatÃrio e para o tratamento dos sintomas da menopausa. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficÃcia de Cr na perda Ãssea alveolar em ratas, investigando o envolvimento de citocinas (TNF-&#945;), e a seguranÃa desse tratamento. A periodontite (PE) foi induzida atravÃs da colocaÃÃo de um fio de nÃilon (3.0) nos molares superiores de ratas Wistar (180-200 g). Os animais foram pesados e tratados (per os) diariamente, durante 11 dias, com Cimicifuga racemosa (0,1; 1 ou 10 mg/ kg). O grupo controle foi submetido à induÃÃo de periodontite e tratado (per os) diariamente, durante 11 dias, com o veÃculo (salina). Foram analisados os seguintes parÃmetros: perda Ãssea alveolar, anÃlise imunohistoquÃmica para TNF-&#945;, dosagem de citocina e avaliaÃÃo da seguranÃa da Cimicifuga racemosa. Cimicifuga racemosa (0,1; 1 ou 10 mg/kg) reduziu (p< 0,05) a perda Ãssea alveolar (1,99Â0,46, 1,55Â0,31 e 1,64Â0,57, respectivamente), em relaÃÃo ao grupo controle (3,60Â0,31); Cimicifuga racemosa (1 mg/ kg) diminuiu a marcaÃÃo da citocina prÃ- inflamatÃria TNF-&#945; quando comparados ao grupo que recebeu apenas salina. NÃo se observou diferenÃa (p> 0,05) entre os nÃveis sÃricos de ALT/ AST, creatinina e fosfatase alcalina total entre grupos tratados e controle. Os animais tratados com Cimicifuga racemosa (1mg/kg) nÃo tiveram alteraÃÃes na mucosa gÃstrica quando comparados aos animais tratados apenas com salina. Nossos resultados sugerem que Cimicifuga racemosa possui efeito protetor na periodontite atravÃs da inibiÃÃo de citocinas (TNF- &#945;), alÃm de representar uma opÃÃo terapÃutica segura no ensaio prÃ-clÃnico de periodontite em ratas. Considerando que Cimicifuga racemosa à um fitomedicamento que jà està no mercado brasileiro com indicaÃÃo para alÃvio dos sinais/sintomas da menopausa, a possibilidade de uma nova indicaÃÃo terapÃutica para um fitomedicamento jà disponÃvel nas prateleiras poderà determinar uma considerÃvel reduÃÃo no tempo necessÃrio para o desenvolvimento de novos medicamentos. / Periodontitis is a chronic inflammatory process that affects the supporting tissues of teeth characterized by extensive alveolar bone resorption. Cimicifuga racemosa is a herbaceous plant belonging to the family Ranunculaceae, native to Canada and the Atlantic coast of the United States, and is commonly used in traditional medicine as an analgesic, anti-inflammatory and for the treatment of menopause symptom. This study aimed to evaluate the effectiveness of Cr on alveolar bone loss in rats, investigating the involvement of cytokines (TNF-&#945;), and the safety of this treatment. Periodontitis (PE) was induced by placing a nylon thread (3.0) in the upper molars of Wistar rats (180-200 g). Animals were weighed and treated (per os) daily for 11 days with Cimicifuga racemosa (0.1, 1 or 10 mg / kg). The control group underwent induction of periodontitis and was treated (per os) daily for 11 days with vehicle (saline). We analyzed the following parameters: alveolar bone loss, immunohistochemical analysis for TNF-&#945;, cytokine dosage and safety assessment of Cimicifuga racemosa. Cimicifuga racemosa (0.1, 1 or 10 mg / kg) reduced (p <0.05) bone loss (1.99  0.46, 1.55  0.31 and 1.64  0.57 respectively) compared to the control group (3.60  0.31); Cimicifuga racemosa (1 mg / kg) decreased the marking of the proinflammatory cytokine TNF-&#945; when compared to the group that received only saline. There was no difference (p> 0.05) between serum ALT / AST, creatinine and total alkaline phosphatase between treated and control groups. The animals treated with Cimicifuga racemosa (1mg/kg) had no changes in the gastric mucosa when compared to animals treated with saline. Our results suggest that Cimicifuga racemosa has a protective effect on periodontitis by inhibiting cytokine (TNF-&#945;), and represent a safe therapeutic option in preclinical testing of periodontitis in rats. Considering that Cimicifuga racemosa is a phytomedication already in the market indicated for relief of the signs / symptoms of menopause, the possibility of a new therapeutic indication for phytomedication now available on the shelves may determine a considerable reduction in the time required to develop new drugs.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / A periodontite à um processo inflamatÃrio crÃnico que acomete os tecidos de sustentaÃÃo dos dentes caracterizados por extensa reabsorÃÃo Ãssea alveolar. A Tocoyena sellowiana (Ts) à uma Ãrvore de pequeno porte, pertencente à famÃlia Rubiaceae, conhecida popularmente como genipapo bravo, tÃpica do Cerrado, cuja casca do caule à utilizada na medicina popular como agente anti-inflamatÃrio. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficÃcia e seguranÃa do extrato etanÃlico da casca do caule de Tocoyena sellowiana em um ensaio prÃ-clÃnico de periodontite. A periodontite (PE) foi induzida atravÃs da colocaÃÃo de um fio de nÃilon (3.0) nos molares superiores de ratas Wistar (200-220 g). Os animais foram pesados e tratados (per os) diariamente, durante 11 dias, com Ts (0,1; 1 ou 10 mg/kg). O grupo nÃo tratado foi submetido à induÃÃo de periodontite e tratado (per os) diariamente, durante 11 dias, com o veÃculo (salina). Foram analisados os seguintes parÃmetros: perda Ãssea alveolar, dosagem de fosfatase alcalina Ãssea (FAO), PGE2, IL-1&#946;, mieloperoxidase (MPO), anÃlise imunohistoquÃmica para COX-2, e avaliaÃÃo da seguranÃa da Ts. A Ts (0,1; 1 ou 10 mg/kg) reduziu (p<0,05) a perda Ãssea alveolar (4,96  0,39, 3,89  0,13 e 1,74  0,15, respectivamente), em relaÃÃo ao grupo controle (7,09  0,43); os animais tratados com Ts (10 mg/kg), tiveram um aumento significativo (p< 0,05) da variaÃÃo da FAO (6,99  65,3) em relaÃÃo ao grupo e nÃo tratado (6,91  33,6). Ts (10 mg/kg) diminuiu (p<0,05) os nÃveis de PGE2 em amostras gengivais (212,3  2,26), em comparaÃÃo com o grupo nÃo tratado (355,7  4,33). Ts (10 mg/kg) diminuiu (p<0,05) os nÃveis de IL-1&#946; em amostras gengivais (237,4  0,86), em comparaÃÃo com o grupo nÃo tratado (868,1  1,99). Ts (10 mg/kg) diminuiu a marcaÃÃo de COX-2 quando comparados ao grupo nÃo tratado. Ts (10 mg/kg) diminuiu (p<0,05) os nÃveis de MPO na 6 hora em amostras gengivais (0,77  7,38), em comparaÃÃo com o grupo nÃo tratado (1,54  21,1). NÃo se observou diferenÃa (p>0,05) entre os nÃveis sÃricos de ALT/ AST, creatinina e fosfatase alcalina total entre grupos tratados com Ts e nÃo tratado. Os animais tratados com Ts (10 mg/kg) nÃo tiveram alteraÃÃes no parÃnquima hepÃtico, renal, no tecido cardÃaco e na mucosa gÃstrica quando comparados aos animais do grupo nÃo tratado. Nossos resultados sugerem que Ts possui efeito protetor na periodontite atravÃs da inibiÃÃo PGE2, IL-1&#946;, MPO e aumento de FAO, alÃm de representar uma opÃÃo terapÃutica segura no ensaio prÃ-clÃnico de periodontite em ratas. / Periodontitis is a chronic inflammatory process that affects the supporting tissues of the teeth characterized by extensive alveolar bone resorption. The Tocoyena sellowiana (Ts) is a small tree belonging to Rubiaceae family, popularly known as typical angry genipapo, Cerrado, whose stem bark is used in folk medicine as anti - inflammatory agent. This study aimed to evaluate the efficacy and safety of the ethanol extract of the stem bark of Tocoyena sellowiana in a pre-clinical trial of periodontitis. Periodontitis (PE) was induced by placing a nylon thread (3.0) on the upper molars of Wistar rats (200-220 g). Animals were weighed and treated (per os) daily for 11 days, with Ts (0.1, 1 or 10 mg/kg). The untreated group underwent induction of periodontitis and treated (per os) daily for 11 days with vehicle (saline). Alveolar bone loss, serum bone alkaline phosphatase (FAO), PGE2, IL-1&#946;, myeloperoxidase (MPO), immunohistochemical analysis for COX-2, and safety assessment of Ts: the following parameters were analyzed. The Ts (0.1, 1 or 10 mg / kg ) reduced (p< 0.05) bone loss (4.96  0.39, 3.89  0.13 and 1.74  0.15 respectively) , compared to the control group (7.09  0.43), animals treated with Ts (10 mg/kg) had a significant increase (p< 0.05) of the variation of the FAO (6.99  65.3) compared to the untreated group and (33.6  6.91) . Ts (10 mg/kg) decreased (p<0.05) levels in gingival samples of PGE2 (212.3  2.26), compared with the untreated group (355.7  4.33). Ts (10 mg/kg) decreased (p <0.05) levels of IL-1&#946; in gingival samples (237.4  0.86), compared with the untreated group (868.1  1.99). Ts (10 mg/kg) decreased marking COX-2 when compared with the untreated group. Ts (10 mg/kg) decreased (p<0.05) levels of MPO in the gingival 6 hour samples (0.77  7.38) compared with the untreated group (1.54  21.1). No difference (p>0.05) between the serum levels of ALT/AST, creatinine and total alkaline phosphatase between treated groups and untreated Ts was observed. The animals treated with ST (10 mg/kg) had no change in hepatic, renal tissue, cardiac tissue and gastric mucosa as compared with animals in the untreated group. Our results suggest that Tocoyena sellowiana has protective effect on periodontitis by inhibiting PGE2, IL-1&#946;, and MPO increased FAO, and represents a safe therapeutic option in the pre-clinical trial of periodontitis in rats.

A preservação da arquitetura óssea alveolar, durante o processo de reparo do alvéolo dentário após exodontias, é um grande desafio clínico. É esperado que 40 a 60% do volume ósseo alveolar inicial sejam perdidos nos primeiros seis meses. O OsteoScaf é um novo substituto ósseo, desenvolvido pela Universidade de Toronto e representa uma alternativa promissora para a manutenção da integridade óssea alveolar nesse cenário. Esse material é uma matriz tridimensional trifásica reabsorvível e osteocondutiva, composta por ácido polilático-co-glicólico e duas fases de fosfato de cálcio reabsorvível. Com o objetivo de avaliar se o OsteoScaf poderia reduzir a perda óssea durante a fase de reparação/remodelação alveolar após a exodontia, quando comparado com o controle (apenas coágulo sanguíneo), foram implantados cilindros desse material (com duas porosidades diferentes - poros grandes e poros pequenos) em alvéolos de dentes anteriores superiores humanos, imediatamente após a exodontia. Dez pacientes (32 alvéolos) fizeram parte deste estudo, onde 16 alveólos receberam o implante de OsteoScaf e 16 foram usados como controle. Foram feitas tomografias computadorizadas de feixe cônico (TCFC) imediatamente após a exodontia e também aos 120 dias pós-operatóro, quando foram realizadas biópsias ósseas analisadas por microtomografia computadorizada (microTC) e microscopia. A análise quantitativa das microTCs mostraram mais trabéculas ósseas e menor espaço entre elas, com OsteoScaf de poros menores. A análise quantitativa das TCFC indicou menor perda óssea no grupo experimental, principalmente o OsteoScafTM de poros maiores. A avaliação qualitativa dos cortes histológicos mostrou neoformação óssea justaposta ao material, demonstrando sua natureza osteocondutiva. Nossas observações mostraram que o OsteoScaf (de poros pequenos ou grandes) reduziu a perda óssea alveolar durante o processo de reparação/remodelação óssea pós-exodôntica, aos 120 dias de pós-operatório, em humanos. Essa pesquisa recebeu apoio financeiro da CAPES (Brasil) e TRT (Canadá). / Preserving alveolar bone architecture during socket healing is a significant clinical challenge. It is expected that 40% to 60% of the initial alveolar bone volume will be lost up to 6 months after tooth extraction. OsteoScaf is a novel bone substitute material developed at the University of Toronto and represents a promising alternative for maintaining alveolar bone integrity in this clinical scenario. It is a resorbable, osteoconductive, 3-phase composite scaffold comprising poly(lactide-co-glycolide) and 2 osteoclast-resorbable calcium phosphate phases. Our hypothesis was that OsteoScaf lithomorphs (10x3mm cylinders), placed in fresh extraction sockets, would reduce post-extraction bone loss compared to sockets with coagulum alone (control). Thus, we placed OsteoScaf (of two different porosities small and large pores) in fresh extraction sockets of maxillary anterior teeth in humans. A total of 10 patients (32 sockets) were included in the study, of which 16 sockets were grafted with OsteoScaf and 16 were used as control. Cone Beam Computer Tomography (CBCT) was performed both immediately following extraction and also at 120 days postoperatively, at which time biopsy samples were also harvested for micro computer tomography (µCT) and histological analyses. Quantitative analysis of the µCT showed more bone trabeculae and smaller trabecular separation in the experimental group than control, specifically with small pore scaffolds. In addition, quantitative analysis of CBCT showed less bone resorption in the OsteoScafTM groups, especially with the large pore scaffolds. Qualitative histological analysis showed new bone tissue in direct apposition to the scaffold demonstrating its osteoconductive nature. Our observations showed that the OsteoScafTM groups (small and large pores) reduced alveolar bone loss after 120 days of socket healing in humans. Grants: CAPES (Brazil) and TRT (Canada).

Orientadores: Pedro Luiz Rosalen, Gilson Cesar Nobre Franco / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-17T12:39:43Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Almeida_LucianaSallesBrancode_D.pdf: 18183834 bytes, checksum: 7e68ca8a08aa330701eecf3a55349a69 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: A fluoxetina é um droga inibidora seletiva da recaptação de serotonina que apresenta propriedades imunomoduladoras e antiinflamatórias. O objetivo desse estudo foi avaliar os efeitos da fluoxetina sobre a resposta imuno-inflamatória relacionada à doença periodontal (DP). In vitro, avaliou-se a influência da fluoxetina sobre a capacidade das células dendríticas (DCs) em apresentar antígeno aos linfócitos T. As DCs foram obtidas da medula óssea de camundongos C57BL/6 e diferenciadas utilizando-se GM-CSF (20 ng/mL). As DCs foram tratadas com a fluoxetina (concentrações: 0,01, 0,1 ou 1 ?M) para análise da produção de citocinas e quimiocinas, bem como da expressão de MHC-II e moléculas co-estimuladoras (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) aos linfócitos T, utilizando-se ensaios de ELISA e citometria de fluxo respectivamente. Culturas de DCs e linfócitos T reativos ao Aggregatibacter actinomycetemcomitans (×Aa-T) foram utilizadas para avaliação de proliferação/ativação de linfócitos T. A desipramina, um inibidor seletivo da recaptação de norepinefrina, também foi incluída nos ensaios in vitro para comparação. In vivo, avaliou-se os efeitos da fluoxetina sobre a resposta inflamatória e a destruição tecidual utilizando-se modelo de DP induzida por ligadura. Ratos Wistar machos (SPF) foram submetidos à colocação de ligadura em torno dos primeiros molares inferiores e divididos em 3 grupos experimentais (n=10 animais/grupo): 1) ratos sem ligadura e sem tratamento (grupo controle); 2) ratos com ligadura e tratados com solução salina (grupo ligadura); 3) ratos com ligadura e tratados com a fluoxetina (20 mg/kg/dia, grupo ligadura + fluoxetina). Análises de reabsorção óssea na região de furca (lâminas coradas com H&E) e de colágeno no tecido conjuntivo da mesial dos primeiros molares (coloração de picrosirius) foram realizadas nos ratos submetidos a 15 dias de indução da DP. Tecidos gengivais de ratos submetidos a 3 dias de indução da DP foram submetidos às seguintes análises: expressão de IL-1?, COX-2, MMP-9 e iNOS utilizando-se RT-PCR e atividade da MMP-9 utilizando-se zimografia. Como resultados, a fluoxetina diminuiu a produção de IL-12, IL-1?, TNF-?, RANTES e MIP-1??pelas DCs estimuladas com LPS (P < 0,05, ANOVA, teste t de Student), bem como diminuiu significativamente a expressão de ICOSL. Além disso, reduziu a proliferação de ×Aa-T estimulados com Aa pelas DCs. A serotonina (5- HT) aumentou a proliferação de ×Aa-T, indicando que os efeitos da fluoxetina são independentes da 5-HT. A desipramina apresentou perfil semelhante à fluoxetina nos ensaios in vitro. No estudo in vivo, a fluoxetina reduziu a perda óssea em região de furca quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05 ANOVA, teste t de Student) e manteve a porcentagem de fibras colágenas com níveis similares ao grupo controle (P > 0,05). Ainda, a fluoxetina reduziu a expressão de IL-1??e COX-2 e a atividade da MMP-9 quando comparada ao grupo ligadura (P < 0,05). Em conjunto, os dados demonstram que a fluoxetina diminuiu a capacidade de apresentação de antígeno das DCs, bem como a resposta inflamatória, a reabsorção óssea e a perda de colágeno na DP, indicando que ela pode constituir uma abordagem terapêutica promissora como moduladora da resposta do hospedeiro na DP / Abstract: Fluoxetine is a selective serotonin reuptake inhibitor presenting immunomodulatory and anti-inflammatory properties. The aim of this study was to evaluate the fluoxetine effects on immunoinflammatory response associated with periodontal disease (PD). The in vitro study evaluated the effects of fluoxetine on antigen-presentation capacity of dendritic cells (DCs). Bone marrow DCs obtained from C57BL/6 wild type mice were differentiated using GM-CSF (20 ng/mL). DCs were treated with fluoxetine (concentrations of 0.01, 0.1 or 1 ?M) for subsequent cytokine/chemokine assays (ELISA) and analysis of expression of MHC-class II and co-stimulatory molecules (CD80, CD86, PD-L1, ICOS-L) to T cell activation using flow cytometry. Fluoxetine was also applied to cultures with both DCs and Aggregatibacter actinomycetemcomitans (Aa)-reactive T cells (×Aa-T), which were used for analysis of T cells proliferation/activation using thymidine and ELISA assays. Desipramine, a selective norepinephrine reuptake inhibitor, was also tested in vitro for comparison to fluoxetine. In vivo, male Wistar rats received ligature placement around mandibular first molars and were randomly assigned into three experimental groups (n=10/group): 1) Control rats (without ligature); 2) rats with ligature + placebo (saline; oral gavage); 3) rats with ligature + fluoxetine (20 mg/kg/day in saline; oral gavage). Histometric and histological analyses were performed for measurement of loss of bone in furcation region (H&E stain) and collagen fibers (picrosirius red stain) in the connective tissue of rats submitted to 15 days of PD induction. Gingival tissues were collected from animals submitted to 3 days of PD induction for analyses of mRNA expression of IL-1?, COX-2, MMP-9 and iNOS using RT-PCR, measurement of total protein concentration and MMP-9 activity using zymogram. Fluoxetine suppressed IL 12, IL-1?, TNF-?, RANTES and MIP-1??production by LPS-stimulated DCs (P < 0.05, ANOVA, Student's t test), as well as significantly reduced the expression of ICOS-L. Fluoxetine suppressed the proliferation of ×Aa-T stimulated with Aa-antigen presentation by DCs from co-cultures. When applied to ×Aa-T/DCs co-cultures, serotonin (5-HT) increased T cell proliferation, indicating that fluoxetine effects are independent of 5-HT. Desipramine effects were similar to those of fluoxetine. In the in vivo study, fluoxetine reduced alveolar bone loss as compared to ligature group (P < 0.05, ANOVA, Student's t test) and maintained collagen fibers levels similarly to control group (P > 0.05). Fluoxetine reduced IL-1??and COX-2 expression, as well as MMP-9 activity, from gingival tissues when compared to ligature group (P < 0.05). Altogether, data showed that fluoxetine can modulate the antigenpresentation capacity of DCs and reduce inflammatory response and loss of bone and collagen associated with PD. In conclusion, fluoxetine can modulate both immune and inflammatory responses on PD, suggesting that it may constitute a new therapeutic approach for modulation of host response in periodontal therapy / Doutorado / Farmacologia, Anestesiologia e Terapeutica / Doutor em Odontologia

Orientador: Reginaldo Bruno Gonçalves / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-05T08:24:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Napimoga_MarceloHenrique_D.pdf: 980827 bytes, checksum: d6e89bf1b359918d8c502f0a7367d2c1 (MD5) Previous issue date: 2005 / Resumo: Porphyromonas gingivalis (Pg) sintetiza diversas classes de fosfolipídeos. Entretanto, pouco se sabe sobre os efeitos biológicos que estes lipídeos exercem sobre a reabsorção óssea. Células precursoras de osteoclastos de camundongos, incluindo RAW264.7 e células da medula óssea, foram estimuladas com um lipídeo recém caracterizado isolado de Pg (F24), LPS de Pg, RANKL e um isômero estrutural isolado de mamíferos (DMPE), seguida de coloração das células por fosfatase ácida (TRAP) para detecção de osteoclastos. A formação de lacunas de reabsorção em discos de dentina foi realizados para identificar a presença de osteoclastos maduros. Proteínas de células precursoras RAW264.7 com afinidade a F24 foram identificadas como sendo nucleolin através de espectometria de massa, e confirmada sua presença através de ensaio em microscopia confocal. Utilizando Western-blot e RNAi, a sinalização intracelular desencadeada pela F24 durante a osteoclastogênese foi analisada. A F24 mas não o LPS ou DMPE induziu números significantemente maiores de células multinucleadas TRAP+ quando comparado ao RANKL, assim como a formação de lacunas de desmineralização em discos de dentina, o qual não foi inibida pelo repressor do RANKL, a OPG. LPS de Pg, mas não a F24, induziu a produção de TNF-a, IL-1ß e IL-6 pelas células RAW264.7. Microscopia confocal mostrou que a F24 está co-localizada com este receptor na superfície de células RAW264.7. A F24 induziu a fosforilação de maior intensidade do p38 e JNK comparado ao RANKL. Este novo fosfolipídeo isolado de P. gingivalis, distinto do LPS, mostrou-se capaz de induzir osteoclastogênese utilizando nucleolin como a molécula receptora através de uma via independente do RANK / Abstract: Porphyromonas gingivalis (Pg) synthesizes several classes of complex phospholipids in addition to LPS. However, little is known about the biological effects of these phospholipids on bone resorption. Mouse osteoclast precursors cells including, RAW264.7 and bone marrow cells, were stimulated with phospholipids isolated from Pg (F24), Pg LPS, RANKL and a mammalian structural isomer (DMPE). Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) staining and a dentine-pit formation assay were used for the identification of activated mature osteoclasts. F24¿s counter-ligand expressed on RAW264.7 cells were identified by affinity purification and mass-spectrometry based proteomics, and counter-examined by a confocal microscopy. Using Western-blot, signaling pathways triggered by F24 during osteoclastogenesis were examined with RNAi technology. F24, but not LPS or DMPE, induced significantly higher number of TRAP+ multinuclear cells from osteoclast precursors than RANKL, along with dentine-pit formation, which was not inhibited by RANKL decoy receptor OPG. Pg LPS, but not F24, induced TNF-a, IL-1ß and IL-6 by RAW264.7 cells. Proteomics analyses identified nucleolin as a ligand for F24. Confocal microscopy revealed the co-localization of F24 and its ligand on the surface of RAW264.7 cells. F24 induced stronger phosphorylation of p38 MAP kinase than RANKL. A novel P. gingivalis phospholipid that is distinct from LPS represents a new class of RANK-independent osteoclast differentiation factor / Doutorado / Microbiologia e Imunologia / Doutor em Biologia Buco-Dental

O receptor NLRP12 é um receptor intracelular que está envolvido no reconhecimento de PAMPs e DAMPs durante uma infecção. Foi visto que durante a osteoclastogênese, há uma diminuição da transcrição de NLRP12, e que este receptor inibe a reabsorção óssea através da supressão da via alternativa de NF-&kappa;B, exercendo um papel protetor sobre o tecido ósseo. Além disso, foi observado que a deficiência de NLRP12 em monócitos sob o estímulo de RANKL levou a maior estabilização de NIK e maior translocação de RelB para o núcleo, aumentando a formação dos osteoclastos in vitro. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar o papel de NLRP12 no desenvolvimento e progressão da lesão periapical induzida em camundongos. Para isso, foi induzida a lesão periapical dos primeiros molares inferiores dos camundongos fêmeas C57/Bl6 (WT) e camundongos deficientes para o receptor NLRP12 (Nlrp12-/-). Após 14 e 21 dias, as amostras de mandíbula foram submetidas às análises: determinação da área de lesão periapical em cortes histológicos; expressão gênica de marcadores osteoclastogênicos por qPCR; contagem de osteoclastos submetidos ao ensaio de histoenzimologia (TRAP); avaliação enzimática das MMPs por Zimografia. Os linfonodos cervicais foram submetidos à análise da expressão dos fatores de transcrição T-bet, ROR&gamma;t, GATA-3 e Foxp-3 por qPCR. Aos 14 dias, na análise histomorfométrica os animais Nlrp12-/- apresentaram uma maior lesão periapical quando comparados aos animais WT, associado com o aumento da expressão de Trap, Catepsina K e MMP-9 em amostras de hemi-mandíbulas com lesão. Além disso, o número de células TRAP positivas foi significantemente maior em Nlrp12-/- com lesão quando comparado com seu controle, enquanto no grupo WT com e sem lesão foram semelhantes. Assim como foi observado o maior aumento dos osteoclastos presentes no local da lesão dos animais Nlrp12-/-, estes também se mostraram com maior atividade gelatinolítica de MMP-9 e MMP-2 em relação ao seu controle, diferente dos animais WT que não apresentaram diferença entre os grupos controle e com lesão. Ainda nesse período, foi observado nas amostras de linfonodos cervicais que, no grupo Nlrp12-/- houve uma tendência à maior expressão de ROR&gamma;t, seguidos de menor expressão de T-bet quando comparados com o grupo WT. Aos 21 dias, os animais WT e Nlrp12-/- apresentaram lesões periapicais de tamanhos semelhantes. Além disso, somente o grupo Nlrp12-/- com lesão apresentou um aumento significativo da expressão de Trap em relação ao seu controle e a expressão de Catepsina K foi semelhante em ambos os grupos. Neste período houve um aumento na quantidade de células TRAP positivas em ambos os grupos com lesão quando comparados com seus respectivos controles, entretanto também não houve diferença entre os animais WT e Nlrp12-/-. A atividade de MMP-9 e MMP-2 foram semelhantes entre os animais WT e Nlrp12-/- e entre seus respectivos controles aos 21 dias. Nossos dados sugerem que a deficiência de NLRP12 levou a uma maior perda óssea aos 14 dias de lesão periapical e que isso ocorre via modulação da formação e atividade dos osteoclastos. Portanto, o NLRP12 inibe a osteoclastogênese e a atividade dos osteoclastos durante a fase inicial da lesão periapical, retardando o desenvolvimento da doença. / NLRP12 is an intracellular sensor that recongnizes PAMPS and DAMPs during infeccion. It was seen that NLRP12 transcription is down-regulated during osteoclastogenesis, and NLRP12 protect bone via suppression of alternative NF-&kappa;B-induced osteoclastogenesis. It has been shown that NLRP12 deficiency in monocytes under RANKL stimuli exhibited more stabilization of NIK and nuclear translocation of RelB, increasing osteoclasts formation in vitro. Therefore, the aim of this study was to evaluate the role of NLRP12 in the development and progression of experimentally induced periapical lesions in mice. Periapical lesions were induced in first molars of WT and NLRP12 knockout (KO) mice. Samples were collected at 14 and 21 days of the lesion for the analyses. Jaw samples with lesion and control area were subjected to periapical lesions area determination by histological sections; osteoclastogenic markers expression by q-PCR; count of osteoclasts submitted to the enzyme assay for TRAP; evaluation of MMPs activity by Zymography. The expression of T cells markers´ transcription factors was evaluated in lymph nodes by q-PCR. Fourteen days after periapical lesion induction, histological analysis revealed that NLRP12KO mice exhibited higher area of periapical lesion compared to WT group, which was associated with up-regulated mRNA expression of Trap, Cathepsin K and MMP-9 in the jaw samples. Moreover, the number of multinuclear TRAP-stained cells was significantly higher in the NLRP12KO with lesion group when compared to it control, whereas in the WT the number between the lesion and control groups were similar. Still, NLRP12KO showed higher MMP-9 and -2 gelatinolytic activity than it control, unlike WT mice that showed no difference between control and lesion group. In this period, NLRP12KO mice lymph nodes showed more ROR&gamma;t expression than WT mice and less T-bet expression. At 21 days, WT and NLRP12KO presented periapical lesions of similar sizes. In addition, NLRP12KO group with lesion showed a significant increase in Trap expression when compared with their control, but the increase in Trap e Cathepsin K was similar in both groups. Additionally, there was an increase of multinuclear TRAP-stained cells in both lesion groups when compared with their respective controls; however, there was also no difference between WT and NLRP12KO mice. MMP-9 and -2 activity was similar between WT and NLRP12KO and with their respective controls at 21 days. Our results suggest that NLRP12 deficiency led to increased bone loss at 14 days of periapical lesion and it occurs due to increased osteoclasts formation and activity. Therefore, NLRP12 inhibits osteoclastogenesis and osteoclasts activity during the early stages of periapical lesion, slowing the development of the disease.

O objetivo do presente estudo foi comparar a eficácia da implantação de biomateriais porosos na neoformação óssea e reparo de defeitos cervicais mandibulares em cães, com ou sem a técnica de regeneração óssea guiada (ROG). Bio-Oss Block® (BB), Bio-Oss Collagen® (BC), Bio-Oss® em grânulos (BG), osso autógeno (Ab) e coágulo (Cg) foram utilizados nas mesmas situações experimentais. Para o grupo com membrana foi utilizado o BioGide®. Doze cães foram submetidos a extrações dos pré-molares e primeiros molares mandibulares bilateralmente. Quatro meses após cinco defeitos ósseos (6 mm de diâmetro/4 mm de profundidade) foram confeccionados em um lado. Implantes de 3,3 x 10 mm foram instalados na mesial de cada defeito, proporcionando um \"gap\" distal de 2,7 mm. Os defeitos foram aleatoriamente preenchidos com Ab, Cg, BB, BC e BG. Os mesmos procedimentos foram executados no lado oposto após oito semanas. A membrana foi utilizada para recobrir os defeitos em metade dos lados. Os animais foram sacrificados após oito semanas. A estabilidade dos implantes foi aferida pelo Osstell Mentor®, na instalação do implante e no sacrifício. Os espécimes (n=60, sendo 3 de cada grupo) foram escaneados em micro-tomógrafo Skyscan® 1172. Após aquisição das imagens, o volume de interesse de 3,0 x 6,0 x 4,0 mm foi estabelecido e os parâmetros relativos à formação óssea foram avaliados. Todos os biomateriais foram escaneados in vitro para avaliação da porosidade. Utilizando a técnica de cortes por desgaste, lâminas histológicas foram confeccionadas para a avaliação histológica e histométrica de cada espécimen. As análises histométricas revelaram que o BC apresentou formação óssea semelhante ao Ab em 8 semanas sem BGd. O Cg mostrou a maior formação óssea entre os tratamentos testados em 16 semanas com BGd, e foi superior ao BB e BG em 8 semanas sem BGd (p<0,05). O BB exibiu pior formação óssea entre os tratamentos (8 e 16 semanas, com ou sem membrana). O BC obteve o melhor desempenho dentre os biomateriais. Todos os biomateriais foram parcialmente reabsorvidos de 8 a 16 semanas, no entanto, o BB foi encontrado em maior quantidade em comparação com os demais biomateriais (p<0,05). Em relação à análise da crista alveolar, o BB apresentou a menor reabsorção entre os tratamentos, com e sem BGd a 8 e 16 semanas (p<0,05). A aplicação da BGd proporcionou maior ISQ em 16 semanas, independentemente do material testado (p<0,05). A análise micro-tomográfica mostrou que quando a BGd não foi utilizada, o BG proporcionou a maior quantidade de osso no interior do defeito, seguido pelo BC (p<0,05). Quando o defeito foi coberto com BGd, o Ab rendeu superior formação óssea (p>0,05). A análise de superfície óssea mostrou valores aumentados em sítios tratados com BG, seguido por BC em 8 semanas sem BGd, e Ab em 8 semanas com BGd (p<0,05). O BC apresentou superfície/volume ósseo superior a 8 (com e sem BGd) e 16 semanas com BGd (p<0,05). O BB apresentou os menores valores em 16 semanas (sem BGd). O Cg em 16 semanas (com BGd) foi o pior entre os tratamentos aplicados (p<0,05). Em relação à espessura trabecular, Ab e BB apresentaram respectivamente valores maior e menor (p<0,05), independente do tempo experimental avaliado ou uso de membrana. A análise da porosidade dos biomateriais revelou que o BG apresentou maiores números, volume e superfície de poros fechados. O BB apresentou maiores valores de volume de poros abertos, porosidade aberta e porosidade total em comparação com os outros materiais. Conclui-se que a implantação de bloco de alta porosidade (BB) falhou em proporcionar maior reparo ósseo no interior do defeito e foi o tratamento que mais reduziu a reabsorção da crista óssea alveolar distal. Biomateriais com menor porosidade (BC e BG) apresentaram superior ou semelhante formação óssea e estabilidade dos implantes em comparação ao osso autógeno. A utilização da técnica de ROG melhorou o padrão de formação óssea em todos os tratamentos e períodos testados e reduziu a presença de tecido mole no interior do defeito. Uma relação inversa entre a porosidade dos biomateriais e a formação óssea in vivo foi observada no modelo experimental adotado. / The aim of this study was to compare the effectiveness of porous biomaterials in bone formation and repair of cervical mandibular defects in dogs, with or without Guided Bone Regeneration (GBR) technique. Bio-Oss Block® (BB), Bio-Oss Collagen® (BC), Bio-Oss® in granules (BG), autogenous bone (Ab) and coagulum (Cg) were used under the same experimental conditions. For the membrane group, BioGide® was used. Twelve dogs underwent bilateral extractions of mandibular premolars and first molars. After four months five bone defects (6 mm long / 4 mm deep) were prepared at one side. Implants of 3.3 x 10 mm were installed on each of mesial defect, providing a distal gap of 2.7 mm. The defects were randomly filled with Ab, Cg, BB, BC and BG. The same procedures were performed in the opposite side after eight weeks. A membrane was used to cover the defects in half of the sides. Animals were sacrificed after eight weeks. Implant stability was measured by Osstell Mentor®, at implant installation and sacrifice. The specimens (n=60, 3 in each group) were scanned in Skyscan® 1172 micro-CT scanner. A volume of interest of 3.0 x 6.0 x 4.0 mm was established and the parameters related to bone formation were evaluated. All used biomaterials were also scanned for in vitro porosity evaluation. Using Exakt® system, ground section of each specimen were prepared for histological and histometric assessment. Histometric analysis revealed that BC presented similar bone formation to Ab in 8 weeks without BGd. Cg showed greater bone formation between treatments at 16 weeks with BGd, and was superior to BG and BB at 8 weeks without BGd (p<0.05). BB exhibited worse bone formation within treatments (8 and 16 weeks, with or without membrane). BC had the best performance among biomaterials. All biomaterials were partially resorbed from 8 to 16 weeks. However, BB was found in greater amounts in comparison with other biomaterials (p<0.05). Regarding the alveolar crest analysis, BB had the lowest resorption between treatments with and without BGd at 8 and 16 weeks (p<0,05). The BGd use promoted higher final ISQ values at 16 weeks, regardless the tested treatment (p<0.05). Micro-CT analysis showed that when BGd was not used, BG yielded the highest amount of bone within the defect, followed by BC (p<0.05). When the defect was covered with BGd, Ab yielded higher bone formation (p>0.05). Bone surface area analysis showed that increased values in sites treated with BG, followed by BC without BGd at 8 weeks, and Ab at 8 weeks with BGd (p<0.05). The BC presented greater Bone Surface Area/Bone volume at 8 (with and without BGd) and 16 weeks with BGd (p<0.05). BB had the lowest values at 16 weeks (without BGd). Cg presented the worst performance among treatments at 16 weeks (with BGd) (p<0.05). Regarding the Trabecular Thickness, Ab and BB showed the highest and lowest values, respectively (p<0.05), regardless of the time point or membrane use. In biomaterials porosity analysis, BG showed higher numbers, volume, and surface area of closed pores. BB had the highest volume of open pores, open porosity and total porosity compared with the other treatments. It can be concluded the use of a high porosity block (BB) failed to provide greater bone formation within the defect area and it was the treatment that better reduced distal alveolar crest resorption. Biomaterials with lower porosity (BC and BG) showed higher or similar bone formation and implant stability if compared to autogenous bone. The appliance of BGd improved bone formation in all treatments and tested periods and reduced soft tissue presence within the defect. An inverse relationship between biomaterials\' in vitro porosity and in vivo bone formation was observed in the experimental model used.

Na gravidez, a deficiência de cálcio tem sido associada a complicações como pré-eclâmpsia, hiperparatireoidismo, osteoporose e desnutrição, o que aumenta a frequência de crianças pré-termo, de baixo peso e pequenas para a idade gestacional (PIG). Este estudo teve como objetivo avaliar o estado nutricional de cálcio em gestantes no terceiro trimestre gestacional, utilizando como parâmetros a ingestão dietética, o cálcio urinário e o telepeptídio carboxiterminal do colágeno (CTx) no plasma. Cinquenta e duas gestantes foram selecionadas no Serviço de Obstetrícia do HU-USP. As participantes responderam um registro alimentar (3 dias) e um recordatório de 24h. Para a análise dos alimentos consumidos foi utilizado o software Nutriquanti (GALANTE & COLLI, 2007). Verificou-se a distribuição normal da ingestão de cálcio e ajustaram-se os dados pela energia de acordo com o método do nutriente residual, posteriormente corrigidos pela variabilidade intrapessoal e interpessoal. Só uma gestante teve ingestão maior do que a AI (1.000 mg/d), sendo, portanto, a única que teve ingestão de Ca adequada, segundo a referência AI. Por outro lado, considerando o CTx (não aumentado em relação ao Intervalo de Referência), e considerando que 60% das gestantes apresentam hipercalciuria, supõe-se que o equilíbrio de Ca se deu pela absorção intestinal e a reabsorção renal e não pela reabsorção óssea, indicando ingestão de Ca adequada (612 ±187 mgCa/d). / During pregnancy, calcium deficiency has been associated with complications such as pre-eclampsia, hyperparathyroidism, osteoporosis and malnutrition, which increase the frequency of preterm babies, low-weighed and small for their gestational age (SGA). This study aimed to evaluate calcium nutritional status of pregnant women in the last third of pregnancy, using diet intake, urinary calcium and plasma colagen carboxy-terminus telepeptide (CTx) as parameters. Fifty-two pregnant women were selected in the Obstetrics Service of the University Hospital (HU-USP). The subjects completed a food-consumption record (3 days) e a 24-h record. For the consumed-food analysis, Nutriquanti software (GALANTE & COLLI, 2007) was used. A normal distribution of calcium intake was observed when the data were adjusted for energy according to the residual-nutrient method and corrected to consider intrapersonal and interpersonal variability afterwards. Only one pregnant woman showed a higher intake than the AI (1.000 mg/day), and therefore only this one is considered to present an adequate Ca intake when the reference is the AI. On the other hand, considering that CTx was not increased in relation to the Reference Interval and that 60% of the pregnant women presented hypercalciuria, we can say that Ca balance was due to intestinal absorption and renal resorption rather than bone resorption, thus indicating an adequate Ca intake (612 ±187 mgCa/day).