Carrapatos da espécie Rhipicephalus (Boophilus) microplus causam enormes prejuízos à saúde e à produção animal. Sendo um ectoparasita hematófago, o carrapato espolia seu hospedeiro e transmite doenças. Seu parasitismo é mediado por sua saliva, que inibe as reações homeostáticas do hospedeiro à injúria local causada por sua picada. Seus hospedeiros montam respostas imunes contra esse parasita, incluindo a resposta imune mediada por anticorpos, indicando que o controle imunobiológico é possível. Contudo, o complexo farmacológico da saliva do parasita é composto por proteínas solúveis que são sabidamente pouco ou nada imunogênicos se não forem introduzidos no hospedeiro com adjuvante ou na foram agregada. Assim, dificilmente induziriam imunidade nos hospedeiros. Bovinos apresentam fenótipos contrastantes e herdáveis quanto à intensidade de infestações com carrapatos. Carrapatos alimentados em bovinos resistentes não completam a refeição de sangue, apresentando menor eficiência reprodutiva. É possível que esse desfecho seja devido à capacidade do hospedeiro resistente, mas não do suscetível, de produzir anticorpos que neutralizam componentes salivares do carrapato cruciais para realize a hematofagia. É necessário, portanto, examinar essa possibilidade. Os resultados obtidos também podem ajudar a identificar antígenos úteis para formular uma vacina anti-carrapato. Para estabelecer quais componentes salivares são reconhecidos pelos dois fenótipos de hospedeiros empregamos uma soroteca composta por soros obtidos de bovinos resistentes e suscetíveis ao carrapato em diferentes estágios do ciclo do parasito (larva, ninfa e adulto) e após uma, duas ou três ciclos de infestações. Os soros foram empregados individualmente e em forma de pools para imunodetecção por western blot de proteínas presentes em extrato de larvas não-alimentadas, saliva e glândulas salivares de fêmeas de R. microplus e separadas em uma e duas dimensões. Os resultados obtidos nos western blots 1D de saliva e de extrato de larvas não alimentadas mostraram que houve um reconhecimento diferencial dos antígenos parasitários pelos soros dos animais resistentes e suscetíveis. Os soros dos animais resistentes quando ainda eram livres de infestações (i.e., naïve) ou quando infestados com a forma larval reconheceram com maior freqüência e/ou exclusivamente certas bandas de proteínas. Resultados semelhantes foram vistos nos western blots de géis 2D de saliva e glândulas salivares de fêmeas, onde os soros dos animais resistentes ainda não infestados (i.e., naïve) reconheceram vários spots presentes nessas amostras e soros de animais resistentes infestados reconhecerem spots de forma exclusiva. Também foi observado que, apesar dos hospedeiros suscetíveis estarem expostos a grande quantidade de saliva, os soros desses animais não reconhecem um número maior de spots que os hospedeiros infestados resistentes. Por outro lado, a maioria das proteínas salivares não é reconhecida pelos hospedeiros infestados, sejam resistentes ou suscetíveis. Esses resultados indicam que os hospedeiros bovinos resistentes reconhecem de forma mais precoce que os bovinos suscetíveis certos componentes parasitários. Essa capacidade pode estar relacionada ao fenótipo de resistência ao carrapato / The cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus, causes enormous losses to animal health and production. Since it is a hematophagous parasite the tick expoliates its hosts and transmits diseases. Parasitism by the tick is mediated by its saliva, which inhibits the hosts local homeostatic reactions to its bite. Hosts mount immune responses against this parasite, including antibody-mediated responses, indicating that the immunobiological control of ticks is possible. However, the pharmacological complex of saliva is composed of soluble proteins, which are known to be incapable of eliciting antibody responses if they are not introduced into the host with adjuvant or in aggregated form. Thus, salivary proteins may not be able to induce immunity in hosts. Bovines present contrasting, heritable phenotypes for tick infestations. Ticks fed on resistant hosts are unable to complete a blood meal and present a decrease in reproductive immunity. It is possible that this outcome is caused by an ability of the resistant host to produce antibodies that neutralize salivary components that are crucial to blood feeding. It is necessary, therefore, to examine this possibility. The results will also assist in the identification of protective antigens to formulate an anti-tick vaccine. In order to establish which salivary components are recognized by the two types of host phenotypes, a collection of sera derived from resistant and susceptible bovines infested one, two and three times with different developmental stages of the parasite (larvae, nymphs and adults) was employed to detect which proteins were recognized in western blots of saliva and extracts of salivary glands and unfed larvae. Western blots of tick proteins (saliva and extracts of unfed larvae) separated in one dimension showed that antigens were differentially recognized by resistant and susceptible bovines. Sera from resistant bovines still naïve or infested with larvae recognized certain protein bands exclusively or more frequently than similar sera from susceptible bovines. Similar results were seen in western blots of proteins from saliva and extracts of salivary glands separated in two dimensions, where sera from naïve, resistant bovines recognized several spots and sera from infested, resistant bovines recognized several spots exclusively. In spite of the fac that susceptible hosts are exposed to greater amounts of tick saliva, sera from these animals did not recognize a greater amount of spots than those from resistant bovines. On the other hand, the great majority of spots is not recognized by any of the different sera, be they from resistant or susceptible hosts. These results indicate that resistant bovines are able to recognize parasitic proteins earlier than susceptible bovines. This ability may, in turn, affect expression of salivary components that are crucial for the tick and may explain the phenotypes of tick infestations in bovines.

Nesse trabalho, foram sintetizados seletivamente, a partir do óxido do limoneno em oposição a diversas aminas primárias e secundárias, onze b-aminoálcoois derivados do limoneno através de aquecimento convencional e sob irradiação com microondas, fornecendo produtos com moderados a bons rendimentos. O limoneno e nove destes aminoálcoois foram testados contra ovos e larvas de carrapatos da espécie de Rhipicephalus (Boophilus) microplusn no intervalo de concentração de 0,150-10mg/mL. Os resultados revelaram que em doses entre 10 μl/ml - 2.5 μl/ml todos os compostos testados foram letais às larvas. Frente ao teste ovicida os compostos 2, 6, 8, 9 e 10 foram os mais ativos, impedindo a eclosão total ou quase total dos ovos na menor dose utilizada (0,150 μg/ml). Este é o primeiro relato da atividade carrapaticida de limoneno, óxido de limoneno e dos b- aminoálcoois do limoneno para a espécie de carrapato Rhipichephalus (Boophilus) microplus. O limoneno e sete β-aminoálcoois foram testatdos in vitro contra forma promastigota de Leishmania (Vianna) braziliensis. Os resultados dos testes mostraram que, dentre os sete β-aminoálcoois testados dois deles foram mais ativos que o padrão pentamidina (48,5 ± 28,7 μM) e cinco foram mais ativos que o limoneno 1. Destes, dois deles (compostos 7 e 9) apresentaram alta atividade frente a formas promastigotas do ciclo parasitário numa concentração de 0,156mg/mL. O Limoneno 1 nesse teste se mostrou inativo (876,2 ± 216 μM) demonstrando que este terpeno isolado não é um bom antiparasitário contra formas promastigotas de Leishmania (Vianna) braziliensis. Este é o primeiro relato de atividade contra leishmania para amino-álcoois derivados do limoneno. / In this work, a series of seven limonene β-amino alcohols derivatives have been regioselectively synthesized from moderate to good yields. The eleven β-amino alcohols Limonene derivatives were synthesized through aminólisis of Limonene oxide, using several primary and secondary amines by both conventional heating and under microwave irradiation. Limonene, Limonene oxide and nine ß-amino alcohol derivatives were investigated for the effect on egg hatchability and mortality rates of newly hatched larvae of cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. At the doses between 10 μl/ml to 2.5 μl/ml all compounds were highly lethal to the larvae and at lower concentrations some of them (2, 6, 8, 9 and 10) showed activity. The effect on hatchbility of the eggs was observed in all treatments. This is the first report of carrapicide activity for Limonene, Limonene oxide and nine ß-amino alcohol derivatives against cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The leishmanicidal activity was performed and according to the results two of these compounds were more powerful against in vitro cultures of Leishmania (Vianna) braziliensis promastigote form in a range of μM. The activities observed for 3b and 3f were about 100 folds more potent than the drug standard Pentamidine, while the limonene hasn’t shown any activity in the same test. This is the first report of antileishmanial activity of Limonene β-amino alcohol derivatives.

Espécies de Hypericum (Guttiferae) são mundialmente reconhecidas por seus efeitos farmacológicos, destacando-se H. perforatum pela atividade antidepressiva. O estudo com espécies brasileiras vem apresentando resultados promissores. Hypericum polyanthemum e H. caprifoliatum mostraram efeito antinociceptivo, enquanto H. caprifoliatum mostrou atividade do tipo antidepressiva. Além disso, verificou-se atividade de H. polyanthemum sobre o carrapato Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Para essas espécies, é descrita a presença de benzopiranos, derivados de floroglucinol e flavonóides. Objetivos: Isolar compostos fenólicos lipofílicos de H. polyanthemum e o flavonóide hiperosídeo de H. caprifoliatum, assim como avaliar atividades biológicas de algumas dessas substâncias. Materiais e Métodos: Realizou-se a análise química através de técnicas cromatográficas (CC, CCD) e espectroscópicas (1H e 13C RMN). Hiperosídeo foi avaliado nos seguintes modelos comportamentais: potenciação do sono barbitúrico, atividade locomotora espontânea, placa quente, contorções induzidas por ácido acético e natação forçada. O efeito antinociceptivo de isobutiril-5,7-dimetóxi-2,2-dimetilbenzopirano (HP1), 7-hidróxi-6-isobutiril-5-metóxi-2,2-dimetil-benzopirano (HP2) e 5-hidróxi-6-isobutiril-7-metóxi-2,2-dimetil-benzopirano (HP3), foi investigado, assim como sua atividade acaricida através do teste de imersão de larvas. Resultados e Conclusões: Além dos benzopiranos HP1, HP2 e HP3, dois compostos não relatados para a espécie H. polyanthemum, a xantona 6- desoxijacareubina e um benzopirano de estrutura similar ao ácido eriostemóico, foram isolados de extrato obtido por fluido supercrítico. Hiperosídeo mostrou efeito depressor sobre o SNC, e efeito antiimobilidade, que parece ser mediado pelo sistema dopaminérgico, em ratos. HP1 apresentou efeito antinociceptivo mediado pela neurotransmissão opióide. Nos experimentos para investigação da atividade acaricida, os benzopiranos mostraram ser, pelo menos em parte, responsáveis pela toxicidade dos extratos sobre os ácaros. / The pharmacological effects of some Hypericum species are worldwide recognized, mostly by the comproved efficacy of H. perforatum as antidepressant. The south Brazilian species have been showing promissing results. Hypericum polyanthemum and H. caprifoliatum presented antinociceptive effect, while an antidepressant-like activity of H. caprifoliatum was reported. In addition, extracts from H. polyanthemum showed to be highly toxic to Rhipicephalus (Boophilus) microplus cattle tick. The chemical characterization reveals that these species are rich in benzopyrans, flavonoids and phloroglucinol derivatives. Objectives: To isolate lipophilic compounds from H. polyanthemum and the flavonoid hyperoside from H. caprifoliatum, as well as to carry out a biological evaluation of some of the isolated substances. Material and Methods: Chromatography and NMR spectroscopy techniques were performed for isolation and structure elucidation. Hyperoside was applied on behavior models, as the open field, pentobarbital sleeping potentiation, hot plate, acetic acid-induced writhing and the forced swimming test. The antinociceptive effect and the acaricide potential of 6-isobutyryl-5,7-dimethoxy- 2,2-dimethyl-benzopyran (HP1), 7-hydroxy-6-isobutyryl-5-methoxy-2,2-dimethylbenzopyran (HP2) and 5-hydroxy-6-isobutyryl-7-methoxy-2,2-dimethylbenzopyran (HP3) were also investigated. Results and conclusions: A benzopyran similar to the eriostemoic acid and the xanthone 6-deoxyjacareubin were isolated from the extract obtained by supercritical fluid. Hyperoside showed a central depressor effect and no toxicity signs. The present study provides evidences for the involvement of D2-like dopaminergic neurotransmission on the mechanism of hyperoside antidepressant-like action in rats. HP1 presented opioid-mediated antinociceptive effect. On larvae immersion test, the benzopyrans showed to account for the acaricide properties of H. polyanthemum extracts.

Foi determinada a frequência de anticorpos para Babesia bovis e Babesia bigemina em bovinos de 6-11 meses em 6 propriedades rurais da região de Encruzilhada do Sul, RS, Brasil e sua correlação com a infecção da hemolinfa de teleóginas de Boophilus microplus. A pesquisa dos anticorpos foi realizada através da técnica de Imunofluorescência Indireta e o exame nas teleóginas através de esfregaço de hemolinfa corado com Giemsa. Ambas técnicas foram efetuadas no Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). Das 379 amostras de soros bovinos, 179 (47,23%) foram positivas para B. bovis e/ou B. bigemina. O trabalho foi realizado num total de 6 propriedades de Encruzilhada do Sul, entre as quais a propriedade 5 obteve mais animais positivos, enquanto que a propriedade 1 obteve o maior número de animais negativos.Nos esfregaços de hemolinfa nenhum resultado positivo foi encontrado, assim sendo, não houve correlação entre a sorologia e a infecção da hemolinfa das teleóginas por vermículos de Babesia spp. Na análise estatística, comparou-se os resultados obtidos nas diferentes propriedades. Com base nestes resultados, pode-se concluir que a frequência de anticorpos para Babesia spp detectada neste trabalho foi de 47,23%, ficando abaixo do índice que caracteriza uma zona de instabilidade enzoótica para Tristeza Parasitária Bovina (TPB). / Was determined the frequency of antibodies for Babesia bovis and Babesia bigemina in cattle between 6-11 months of age in six farms of Encruzilhada do Sul, RS, Brazil and its correlation with the female ticks Boophilus microplus hemolymph infection. All laboratory thecniques were done at Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor (IPVDF). From the 379 cattle analysed samples, 179 (47,23%) were positive for B. bovis and/or B. bigemina. In hemolymph tests, all samples were negative. Based on those results, did not heve any correlation between sorologic results and hemolymph infection and the frequency of antibodies for Babesia spp. detected at this work was 47,23%, caracterizing a instability zone for Tristeza Parasitária Bovina (TPB).

Orientador: Angelo Pires do Prado / Tese(doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-09T08:57:16Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barci_LeilaAparecidaGardiman_D.pdf: 32026366 bytes, checksum: 02c031128906719534741a0aa1ce434a (MD5) Previous issue date: 2007 / Resumo: o presente trabalho teve por objetivo avaliar a patogenicidade e a virulência do isolado IBCB66 de Beauveria bassiana, sobre larvas de B. microplus, com a finalidade de se utilizar esta cepa como padrão em estudos de seleção de isolados deste fungo e testar a compatibilidade da(s) melhor(es) estirpes(s) selecionada(s) com carrapaticidas comerciais. Seis suspensões (5x1O6,107,5x1O7,108,5x1O8and 1O9conidios/mL)do isolado IBCB66 foram testadas sobre larvas para avaliar a porcentagem de mortalidade e os resultados foram submetidos à análise de Probit. As observações foram realizadas até o 18° dia quando houve mortalidade total das larvas do grupo que recebeu 109 conídios/mL de suspenssão de B. bassiana...Observação: O resumo na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Abstract: The objective of this research was to evaluate the pathogenicity and the virulence of the IBCB66 isolate of B. bassiana on infected larvae of B. microplus. The IBCB66 fungus strain was used as standard in screening thirty isolates of B. bassiana against Boophilus microplus larvae . The compatibility of IBCB66 and IBCB21 isolates of the fungus with several chemical acaricides was also assessed. The larval bioassay tests using the IBCB66 isolate were carried out to determine the LC 50, LC90, LT50 and LT90 doses. The IBCB66 fungus strain was tested at six different concentrations (5x1O6,107,5xl07, 108,5xlO8and 109 conidia/rnL), to determine the percentage of larval mortality. In addition, a Probit analysis was also performed. Total larval mortality was observed eighteen days after the beginning ofthe test in the group treated with 5xl09 conidia/mL...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations / Doutorado / Doutor em Parasitologia

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-02-16T18:15:18Z No. of bitstreams: 1 valeriademello.pdf: 1398962 bytes, checksum: 8f98bff81bd61634bb2f3b2081f6a2db (MD5) / Approved for entry into archive by Adriana Oliveira (adriana.oliveira@ufjf.edu.br) on 2016-02-26T12:40:49Z (GMT) No. of bitstreams: 1 valeriademello.pdf: 1398962 bytes, checksum: 8f98bff81bd61634bb2f3b2081f6a2db (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T12:40:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 valeriademello.pdf: 1398962 bytes, checksum: 8f98bff81bd61634bb2f3b2081f6a2db (MD5) Previous issue date: 2014-07-21 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O carrapato dos bovinos, Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini 1887) é responsável por sérios prejuízos à pecuária brasileira, considerando-se os custos do controle, perda de receita devido a menor produção de leite e carne, danos ao couro, além da transmissão de doenças. A utilização de plantas medicinais é considerada uma alternativa a resistência recorrente aos produtos químicos. Diante da necessidade de alternativas eficazes e com menores impactos ambientais o objetivo desse estudo foi desenvolver formulações de contato contendo os óleos essenciais das plantas Citronela-de-Java (Cymbopogon winterianus), Cravo-da-índia (Syzygium aromaticum) e Alecrim-da-horta (Rosmarinus officinalis) e avaliar in vitro os efeitos acaricidas em diferentes etapas do ciclo do carrapato. Para tanto foram utilizadas concentrações que variaram de 0,5 – 15,0% dos óleos essenciais incorporados nas formulações. Os carrapatos provenientes de diferentes regiões geográficas foram tratados com as formulações e avaliados os efeitos das mesmas sobre o índice de produção de ovos, a eclosão larval e a eficácia carrapaticida. Os resultados obtidos foram comparados com produtos acaricidas comerciais. Após o 20º dia do tratamento as formulações contendo o óleo essencial de citronela tiveram eficácia acaricida entre 2,09 – 55,51%, com o óleo essencial de cravo-da-índia, 92,47 - 100% e 26,44 - 40,78% com o óleo essencial de alecrim. Na associação dos óleos essenciais obteve-se eficiência de 84,68 – 90,73% para a associação do cravo-da-índia com o óleo essencial de citronela e 30,54 – 64,25% na associação de citronela com o alecrim. Os resultados demonstraram a atividade carrapaticida das formulações testadas, quando comparadas com os produtos químicos utilizados pelos produtores. Estudos in vivo necessitam ser realizados para validar a eficiência das formulações em condições de campo, visando a utilização desses produtos como uma alternativa para o controle do carrapato bovino. / The cattle tick, Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini 1887) is responsible for serious losses to Brazilian cattle, considering the costs of control, loss of revenue due to lower production of milk and meat, leather damage, beyond the transmission of diseases. The use of medicinal plants is considered an alternative to the applicant chemical resistance. Facing the necessity to effective alternatives with lower environmental impacts, the objective of this study was to develop contacts´ formulations containing essential oils of Citronella (Cymbopogon winterianus), Clove (Syzygium aromaticum) and Rosemary (Rosmarinus officinalis) plants and evaluate in vitro acaricidal effects on different stages of the cycle of the tick. For this purpose, concentrations were used ranging from 0.5 - 15.0% of essential oils incorporated into the formulations. Ticks from different geographic regions were treated with the formulations and their effects on the rate of egg production, larval hatching and its efficiency on ticks were evaluated. The results were compared with chemistry acaricidal products. After the 20th day of treatment formulations containing the citronella´s essential oil had acaricidal efficacy between 2.09 to 55.51 %, with the clove´s essential clove, 92.47 to 100% and 26.44 to 40,78 % with rosemary´s essential oil. The association of clove essential oil with citronella essential oil obtained efficiency from 84.68 to 90.73% and for the association of citronella oil with rosemary oil, was 30.54 to 64.25%. The results showed the acaricidal activity of the tested formulations when compared to the chemicals acaricidal products. In vivo studies need to be conducted to validate the efficiency of the formulations under field conditions in order to use these products as an alternative for the control of cattle tick.

L’Afrique de l’Ouest subit l'invasion rapide de la tique du bétail associée aux plus fortes pertes économiques au monde : Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Cette tique a été accidentellement introduite au Bénin et en Côte d’Ivoire en 2006. En 2011, des éleveurs burkinabés se plaignent de l’impossibilité de contrôler de très fortes infestations de leurs troupeaux par des tiques (entrainant morbidité et perte de poids du bétail) : il s’agit de R. microplus. Cette thèse poursuit deux objectifs clefs pour la détermination de mesures de protection de la santé du bétail. Le premier consiste à comprendre les mécanismes mis en jeu dans cette invasion par les outils de génétique des populations (e.g. tests de l’existence de couloirs d’invasions privilégiés; structure génétique des populations de tiques, estimations de tailles de populations entre zones d’introduction et front d’invasion ; distance de flux géniques par génération de tique). Le couplage de ces informations avec celles des niveaux de résistances aux acaricides utilisables en élevage permettront d’évaluer les stratégies de contrôles les plus à mêmes d’enrayer cette invasion. Le second consiste à anticiper l’impact de cette invasion sur l’épidémiologie de pathogènes vectorisés par les tiques du bétail. Il s’agira d’abord ici d’évaluer l’impact de la présence/absence de R. microplus (vectrice entre autres de Babesia bovis, B. bigemina ou Anaplasma marginale) sur la communauté autochtone de tiques du bétail. / West Africa is undergoing fast spread of the cattle tick associated with highest economic losses worldwide: Rhipicephalus (Boophilus) microplus, which was accidentally introduced in Benin and Côte d'Ivoire in early 2000s. In 2011, Burkinabe farmers complain about the impossibility of controlling very large infestations of their cattle by ticks (causing morbidity and loss of livestock weight): results of R. microplus infestation. This thesis has two key objectives for the determination of animal health protection measures. The first is to understand the mechanisms involved in this invasion by population genetic tools (e.g. tests of the existence of privileged invasions corridors, genetic structure of tick populations, population size estimates between introduction areas and invasion front, distance of gene flow by tick generation). Coupling these informations with those of resistance to the common acaricides used in farming will allow assessing of the most control strategies to stop current invasion. The second is to anticipate the impact of the invasion on the epidemiology of pathogens vectored by cattle ticks. It will be here first to assess the impact of the presence / absence of R. microplus (vector of Babesia bovis, B. bigemina and Anaplasma marginale) on the native cattle ticks’ communities.

O carrapato bovino Rhipicephalus (Boophilus) microplus é o principal vetor da riquétsia Anaplasma marginale, o agente etiológico da anaplasmose, uma doença que acomete os rebanhos e causa sérios prejuízos econômicos à pecuária no Brasil. Estabelecemos em nosso laboratório o cultivo da linhagem de células BME26 que são originárias do R. (B.) microplus e também a infecção dessas células por A. marginale, um patógeno que é naturalmente transmitido pelo carrapato. Detectamos que a expressão gênica da defensina e da ixodidina nas células é aumentada frente à infecção por A. marginale, embora nenhuma alteração da expressão gênica da microplusina foi constatada. As células foram expostas a microorganismos inativados por calor e LPS, sendo que a expressão gênica da microplusina é aumentada frente a todos os estímulos. Na exposição das células BME26 com a bactéria Microccocus luteus, a expressão gênica da defensina e da ixodidina não foi alterada e no estimulo com leveduras a expressão gênica da ixodidina foi reprimida. Frente à infecção por A. marginale detectamos, aumento expressão da defensina e ixodidina. Os genes da microplusina e defensina foram silenciadas por RNAi em células infectadas por A. marginale, mas não houve alteração no número de riquétsias / The cattle tick Rhipicephalus (Boophilus) microplus is the main vector of the rickettsia Anaplasma marginale, the etiological agent of anaplasmosis, a disease that affects cattle and causes serious economic losses to the Brazilian cattle industry. We established in our laboratory the embryonic cell culture line BME26 from R. (B.) microplus and infection by A. marginale, a pathogen naturally transmitted by R. (B.) microplus. We verified that defensin and ixodidin gene expression increased in these cells after an infection by A. marginale and no alteration in microplusin gene expression was detected. The BME26 cells were exposed to heat-inactivated microorganims or to LPS, microplusin gene expression increased after all stimuli. After exposure of BME26 cells to Micrococcus luteus, expression levels of defensin and ixodidin did not change and ixodidin gene expression reduced after exposure of these cells to yeast. In the infection by A. marginale we detected defensin and ixodidin gene expression. Also, microplusin and defensin genes were silenced by RNA interference (RNAi) in A. marginale-infected BME26 cells, but we did not observe alteration in the number of MSP4 rickettsias

No Brasil, carrapatos do gênero Rhipicephalus são representados pelas espécies Rhipicephalus sanguineuss.l. (Latreille) e Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini), sendo que a primeira espécie possui especificidade com cães domésticos e a segunda com bovinos. Para o cão, R. sanguineus s.l. é o principal vetor de agentes causadores da babesiose canina e da erliquiose, enquanto que nos bovinos, R. microplus é responsável, principalmente, pela transmissão de agentes causadores da babesiose e anaplasmose. Alguns dos patógenos causadores dessas doenças são difíceis de serem cultivados in vitro, e não crescem em meios artificiais, especialmente Anaplasma spp. Assim, muitas linhagens celulares de carrapatos foram desenvolvidas nos últimos 40 anos e têm sido amplamente utilizadas para isolamento e propagação de microrganismos patogênicos. Cultivos celulares obtidos de células embrionárias de carrapatos oferecem um sistema de vetor in vitro, que é útil principalmente para estudos de agentes intracelulares. Dessa forma, a obtenção de culturas de células embrionárias de R. sanguineus (origens tropical e temperada) e de R. (B.) microplus, bem como, sua infecção com Ehrlichia canis e Anaplasma marginale, respectivamente, são objetivos do presente estudo. Os cultivos celulares dessas espécies de carrapatos foram preparados com massas de ovos de diferentes idades e mantidos à 30 °C em meio de cultura L15-B, suplementado com 10% de Triptose Fosfato e 20% de Soro Fetal Bovino. Subcultivos foram realizados após a formação da monocamada celular confluente. As identidades celulares foram confirmadas pela PCR e sequenciamento, utilizando um fragmento do gene mitocondrial 16S rDNA. As sequências das culturas de células de R. sanguineus (tropical e temperada) e de R. microplus foram depositadas no GenBank. Essas culturas de células foram infectadas com E. canis e A. marginale (cepas Jaboticabal), respectivamente, e mantidas em meio L-15B (Vitrocell) suplementado com Soro Fetal Bovino enriquecido com ferro (Hyclone) nas concentrações de 2% e 5%. As células infectadas foram mantidas em propagações sucessivas até a terceira passagem, para novas culturas de células não infectadas, sendo então criopreservadas. O DNA extraído das células infectadas e não infectadas de R. sanguineus (de ambas as origens) e de R. microplus, foi analisado pela PCR quantitativa em tempo real (qPCR), utilizando os genes E. canis-dsb e msp1β, respectivamente. Propagações de células de carrapatos infectadas para as novas culturas de R. sanguineus (origem tropical) e R. (B) microplus, foram bem sucedidas. Por outro lado, as células de R. sanguineus (origem temperada) não se tornaram infectadas no presente estudo. / In Brazil, ticks of the genus Rhipicephalus are represented by the species Rhipicephalus sanguineus s.l. (Latreille) and Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Canestrini), being that the first one has specificity with domestic dogs and the second with cattle. For dogs, R. sanguineus s.l. is the main vector of causative agents of canine babesiosis and ehrlichiosis, whereas in cattle, R. microplus is responsible, mainly, for the transmission of agents that cause babesiosis and anaplasmosis. Some of the pathogens that cause these diseases are difficult to grow in vitro, and do not grow on artificial media, especially Anaplasma spp. Therefore, many tick cell lines were developed in the last 40 years and have been used for the isolation and propagation of pathogenic microorganisms. Cell cultures obtained from embryonic tick cells offer an in vitro vector system, which is mainly useful for studies of intracellular agents. The aim of the present study was to obtain cultures of R. sanguineus (tropical and temperate lineages) and R. microplus embryonic cells and their infection with Ehrlichia canis and Anaplasma marginale. Cell cultures from the tick species were prepared with egg masses of different ages and kept at 30 ° C in L15-B culture medium supplemented with 10% Tryptose Broth and 20% Fetal Bovine Serum. Subcultures were done after confluent cell monolayer formation. Cellular identities were confirmed by PCR and sequencing using a 16S rDNA mitochondrial gene fragment. Sequences of R. sanguineus (tropical and temperate) and R. microplus cell cultures were deposited on GenBank. These cell cultures were infected with E. canis and A. marginale (Jaboticabal strains), respectively, and maintained in L-15B medium and Fetal Bovine Serum with iron (Hyclone) supplemented at 2% and 5% concentrations. The infected cells were maintained in successive propagations until the third passage, to new cultures of uninfected cells, and then were cryopreserved. DNA extracted from infected and uninfected R. sanguineus (both origin) and R. microplus cells was analyzed by quantitative real-time PCR (qPCR) using the E. canis-dsb and msp1β genes, respectively. Propagations of infected tick cells to the new cultures of R. sanguineus (tropical origin) and R. microplus, were successful. On the other hand, the R. sanguineus cells (temperate origin) did become infected in the present study.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:29:46Z (GMT). No. of bitstreams: 1 GLADSTONE SANTOS DE SOUZA.pdf: 1638209 bytes, checksum: 55969fd3f801a5d3226ae0a527951dc1 (MD5) Previous issue date: 2009-05-11 / The bovine tick is the ectoparasite that causes the greatest prejudice to Brazilian farming and cattle raising, and its control is realized basically through chemical products, which are losing effectiveness over time. This work aimed to evaluate the efficacy of a transdermal formulation, developed by the laboratory Clarion Biociências Ltd. It contains the medicine novaluron, against the tick Boophilus microplus in naturally infested animals. Animals used in the experiment were kept in a pasture with Brachiaria brizantha ascendancy, water; animal food and mineral salt were supplied ad libitum. The formulation containing novaluron was tested in five different dosages: 5.0; 2.5; 1.66; 1.25 and 1.0mg/kg of live weight in a single dose compared to a placebo group and control. The weight of the animals of the experiment varied from 290 to 339kg. Only the dosages of 5.0 and 2.5mg/kg attended the least requisites. The evaluation of the plasmatic profiles of the dosages of 2.50 and 5.00mg/kg of novaluron, presented the following results respectively: concentration peak (Cmax) was 378 and 396ng/mL; the time for obtainment of the concentration peak (Tmax) was 4 days for both dosages and the area on the plasmatic concentration curve(ASC) > 100ng was 28 and 42 days. Based on the results of efficacy and analysis of the plasmatic profile it was concluded that the 2.5mg/kg dosage presented a better relation cost/ benefit. Afterwards it was realized the efficacy of the formulation of novaluron 5% in the dosage of 2.5mg/kg live weight in a single dose comparatively to the commercial product fluazuron, formulation containing 2.5% of fluazuron in the dosage of 2.5mg/kg in a single dose compared to the group control. The results for the two products were alike. It was concluded that a formulation containing 5% of novaluron in the 2.5mg/kg dosage owns the safety requisites, efficacy and economic which make feasible complementary studies for register and commercialization. / O carrapato bovino é o ectoparasita que causa o maior prejuízo à agropecuária brasileira, e o seu controle é realizado basicamente através de produtos químicos, os quais vêm perdendo eficácia com o passar do tempo. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia de uma formulação transdérmica, desenvolvida pelo laboratório Clarion Biociências Ltda. contendo o fármaco novaluron, frente ao carrapato Boophilus microplus em animais naturalmente infestados. Os animais utilizados no experimento foram mantidos a pasto com predomínio de Brachiaria brizantha, água, ração e sal mineral foram fornecidos ad libitum. A formulação contendo novaluron foi testada em cinco posologias diferentes: 5,0; 2,5; 1,66; 1,25 e 1,0mg/kg de peso vivo, em dose única comparativamente a um grupo placebo e controle. O peso dos animais do experimento variou de 290 a 339kg. Somente as posologias de 5,0 e 2,5mg/kg atenderam os requisitos mínimos. A avaliação dos perfis plasmáticos das posologias de 2,5 e 5,0mg/kg de novaluron, apresentaram os seguintes resultados respectivamente: pico de concentração (Cmax) foi de 378 e 396ng/mL; o tempo para obtenção do pico de concentração (Tmax) foi de 4 dias para ambas as posologias e a área sobre a curva de concentração plasmática (ASC) > 100ng foi de 28 e 42 dias. Com base nos resultados de eficácia e análise do perfil plasmático, concluiu-se que a posologia de 2,5mg/kg apresentou uma melhor relação custo/benefício. Posteriormente foi realizada eficácia da formulação de novaluron 5% na posologia de 2,5mg/kg de peso vivo em dose única comparativamente ao produto comercial fluazuron, formulação contendo 2,5% de fluazuron na posologia de 2,5mg/kg em dose única comparadas ao grupo controle. Os resultados para os dois produtos foram semelhantes. Concluiu-se que formulação contendo 5% de novaluron na posologia de 2,5mg/kg possui os requisitos de segurança, eficácia e econômicos que viabilizam estudos complementares para registro e comercialização.