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Detecção de genes codificadores de enterotoxinas e resistência aos antimicrobianos fenotípica e genotípica, mecA e vanA e expressão gênica em estafilococos SCP e SCN isolados de mastite bovina /

Guimarães, Felipe de Freitas. January 2015 (has links)
Orientador: Hélio Langoni / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: José Carlos de Figueiredo Pantoja / Banca: Nilson Benites / Banca: Acácia Orieth Elias / Resumo: Foram estudados 300 estafilococos isolados de casos de mastite bovina de diferentes propriedades do estado de São Paulo: 150 Staphylococcus coagulase positiva (SCP) e 150 Staphylococcus coagulase negativa (SCN). A presença de genes para produção de enterotoxinas foi detectada pela Reação da Polimerase em Cadeia (PCR) e a expressão gênica pela PCR transcriptase reversa (RT-PCR). Os isolados foram submetidos ao perfil de sensibilidade correlacionada com a detecção dos genes mecA e vanA, pela técnica de PCR. Os 150 SCN isolados foram identificados como sendo: 48 (32%) S. warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2,7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auriculares, 1(0,7%) S. saprophyticus subsp. bovis e 1(0,7%) S. capitis. Entre os SCP foram isolados: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%), S. intermedius e 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. A concordância entre a identificação fenotípica e genotípica do total de linhagens de SCN e SCP foi de 96,7% e 98,7%, respectivamente. Foram detectados genes codificadores para enterotoxinas clássicas (sea, seb, sec, sed) e outras enterotoxinas (see, seg, seh, sei, sej, sek, sel, sem, sen, seo, sep, seq) em 175 (58%) dos 300 Staphylococcus spp. pesquisados. Estes genes foram detectados em 109 (73%) dos SCN isolados, resultado significantemente maior que entre SCP 66 (44%), P<0,0001. Entre os 109 SCN foram detectados genes codificadores de enterotoxinas nas seguintes espécies: 37(33,9%) S. warneri, 17(15,6%) S. epidermidis, 16(14,7%) S. hyicus, 5(4,6%) S. xylosus, 5(4,6%) S. haemolyticus, 4(3,7%) S. simulans, 4(3,7%) S. schleiferi subsp schleiferi, 4(3,7%) S. homini, 4(3,7%) S. pasteuri, 3(2,7%) S. saprophyticus... / Abstract: A total of 300 isolates of bovine mastitis cases from several Brazilian dairy herds were studied, respectively: 150 CPS and 150 CNS strains. The isolates were analyzed to enterotoxins codifying genes by Polymerase Chain Reaction (PCR). Gene expression was evaluated by reverse transcription PCR (RT-PCR). The isolates were subjected to sensitivity profile correlated with the detection of mecA and vanA gene by PCR. Among the CNS the following species were identified: 48 (32%) S. warneri, 22(15%) S. epidermidis, 20(13%) S. hyicus, 10(7%) S. xylosus, 7(5%) S. haemolyticus, 6(4%) S. simulans, 6(4%) S. schleiferi subsp schleiferi, 6(4%) S. hominis, 5(3%) S. pasteuri, 4(2.7%) S. cohnii, 3(2%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus 3(2%) S. chromogenes 3(2%) S. sciuri, 2(1%) S. saccharolyticus, 2(1%) S. lugdunensi, 1(0,7%) S. auriculares, 1(70%) S. saprophyticus subsp. bovis and 1(0.7%) S. capitis. Among the 150 CPS: 105 (70%) S. aureus, 21(14%), S. hyicus, 19(13%), S. intermedius and 5(3%) S. schleiferi subsp coagulans. The identification by phenotypic and genotypic tests showed a concordance of 96.7% in the CNS isolates, and 98.7% in the CPS. The codifying genes to enterotoxins production were detected to classical and enterotoxin-like in 175 (58%) out of 300 staphylococci isolates. These genes were detected significantly higher among the CNS (73%) in relation to CPS (44%), P<0.0001. In 109 CNS codifying genes to enterotoxins were detected in the following species: 37(33.9%) S. warneri, 17(15.6%) S. epidermidis, 16(14.7%) S. hyicus, 5(4.6%) S. xylosus, 5(4.6%) S. haemolyticus, 4(3.7%) S. simulans, 4(3.7%) S. schleiferi subsp schleiferi, 4(3.7%) S. homini, 4(3.7%) S. pasteuri, 3(2.7%) S. saprophyticus subsp. saprophyticus, 3(2.7%) S. cohnii, 3(2.7%) S. chromogenes, 2(1.8%) S. sciuri, 1(0.9%) S. lugdunensis and 1(0.9%) S. capitis. Among the 66 CPS, the enterotoxin genes were observed in the following species: 48(73 %) S. aureus, 10(15%) S. hyicus, ... / Doutor
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Avaliação dos patótipos de Escherichia coli circulantes no rebanho bovino e identificação das cepas de STEC isoladas no estado de São Paulo

Spina, Thiago Luiz Belém. January 2015 (has links)
Orientador: José Paes de Almeida Nogueira Pinto / Banca: Márcio Garcia Ribeiro / Banca: Vera Lúcia Mores Rall / Resumo: A carne bovina pode ser um importante veículo de vários patógenos para os humanos, com destaque à Escherichia coli produtora de Shiga-toxina (STEC), associada com diarreia em animais e humanos. Neste estudo, investigou-se em bovinos abatidos no estado de São Paulo, a prevalência dos diferentes patótipos de E. coli diarreiogênica e o perfil de virulência dos isolados de STEC. De um total de 431 animais, STEC foi identificada em 116 (26,9%) amostras de fezes, das quais 111 (25,8%) STEC eae- e 5 (1,2%) STEC eae+. O patótipo EPEC foi detectado em 20 (4,6%) amostras de fezes dos animais testados. Os demais patótipos de E. coli diarreiogênica não foram identificados. Dos 95 isolados de STEC analisados quanto ao perfil de virulência, todos albergavam stx2, enquanto que 28 (29,5%) continham stx1. Os genes iha e saa, que codificam adesinas, foram encontrados em 93,7% (89/95) e 66,3% (63/95), respectivamente. O gene espP, que codifica uma protease que auxilia na colonização intestinal, foi detectado em 61,1% (58/95) e a hemolisina ehxA em 54,7% (52/95). Também foram identificados em menores frequências os genes subAB, nleE e nleB. STEC está amplamente disseminada nos rebanhos bovinos de São Paulo, carreando genes comumente isolados de patógenos humanos, o que reforça a importância da inspeção e fiscalização nos abatedouros / Abstract: Beef can be an important vehicle for various pathogens to humans, especially Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC), associated to human and animal diarrhea. In this study, the prevalence of different pathotypes of diarrheagenic E. coli, and virulence profiles of STEC were investigated among feces of cattle slaughtered in São Paulo state, southeast of Brazil. From a total of 431 animals, STEC was identified from 116 (26,9%) samples, being 111 (25,8%) STEC eae- and 5 (1,1%) STEC eae+. EPEC pathotype was detected among 20 (4,6%) of animals. The other pathotypes of diarrheagenic E. coli were not identified. Of the 95 STEC isolates assessed for virulence profile, all harbored stx2, while 28 (29,5%) contained stx1. Iha and saa, genes encoding adhesins, were found at 93,7% (89/95) and 66,3% (63/95), respectively. EspP, gene which encoding a protease related with intestinal colonization, was detected in 61,1% (58/95) and ehxA hemolysin was present in 54,7% (52/95). SubAB, nleE and nleB genes were also detected in lower rates. STEC is widespread in cattle herds of São Paulo, containing commonly isolated genes from human pathogens, which reinforces the importance of inspection and surveillance in the slaughterhouses / Mestre
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Avaliação de extratos vegetais para obtenção de sabonetes com atividade antimicrobiana / Evaluation of plant extracts for obtainment of soaps with antimicrobial activity

Maia, Thalita de Faria 25 June 2015 (has links)
Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2015-11-04T14:15:06Z No. of bitstreams: 2 texto completo.pdf: 1907070 bytes, checksum: 8892f2a7eb1255d8968c5ecd81510f0a (MD5) anexo.pdf: 415893 bytes, checksum: a1281648c00b7042de6227db351dea66 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-04T14:15:06Z (GMT). No. of bitstreams: 2 texto completo.pdf: 1907070 bytes, checksum: 8892f2a7eb1255d8968c5ecd81510f0a (MD5) anexo.pdf: 415893 bytes, checksum: a1281648c00b7042de6227db351dea66 (MD5) Previous issue date: 2015-06-25 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / O anúncio de novas linhagens resistentes a antibióticos sempre preocuparam a comunidade científica. O estudo de produtos naturais ativos representa uma alternativa para a diminuição de infecções bacterianas através da busca por novas moléculas capazes de inibir o crescimento bacteriano. Neste trabalho foi testado e comparado o efeito antibacteriano de extratos vegetais sobre três cepas de Staphylococcus aureus, um dos principais agentes etiológicos causadores da mastite bovina. A atividade de seis extratos vegetais (Salvia officinalis, Psychotria vellosiana, Baccharis dracunculifolia, Alternanthera brasiliana, Senna macranthera, Miconia latecrenata) foi testada sobre as cepas 3828, 4125 e 4158 de S. aureus. As melhores atividades de inibição do crescimento bacteriano nas condições apresentadas foram dos extratos de Senna macranthera, Salvia officinalis e Psychotria vellosiana Benth. Posteriormente, esses extratos foram submetidos às inferências de Concentração Inibitória Mínima (CIM), Ensaio de Redução de Viabilidade Celular e determinação da Concentração Inibitória Mínima de Biofilme. A partir daí, foram produzidos sabonetes contendo os extratos vegetais para teste de campo. Foram realizados também testes em campo na Divisão de Gado de Leite da Universidade Federal de Viçosa com as luvas contaminadas de ordenhadores, que manipularam animais com mastite. Os sabonetes produzidos com os extratos de S. macranthera, P. vellosiana Benth e S. officinalis tiveram grande impacto sobre a microbiota da luva, já que não foi possível visualizar crescimento bacteriano após a lavagem da mesma com os sabonetes. Os resultados deste estudo sugerem a utilização dos sabonetes contendo os extratos de S. macranthera e S. officinalis no controle da população bacteriana para reduzir agentes causadores de mastite bovina. / The study of active natural products is an alternative to the reduction of bacterial infections through the search for new molecules able to inhibit bacterial growth. This study assayed and compared the antibacterial effect of vegetal extracts on three Staphylococcus aureus strains, one of the main etiological agent’s responsible for the bovine mastitis. The activity of six plant extracts (Salvia officinalis, vellosiana Psychotria, Baccharis dracunculifolia, Alternanthera brasiliana, Senna macranthera, Miconia latecrenata) was tested on strains 3828, 4125 and 4158 of S. aureus. The best inhibition activity of bacterial growth in the presented conditions was from Senna macranthera, Salvia officinalis and Psychotria vellosiana Benth extracts. Subsequently, these statements were submitted to inferences of Minimal Inhibitory Concentration (MIC), cell viability and determination of the MIC of Biofilm. Soaps were produced containing plant extracts for field testing. Field tests were also conducted in the Divisão de Gado de Leite of Universidade Federal de Viçosa with the gloves contaminated by animals with mastitis manipulated by milkers. The soaps made from extracts of S. macranthera, P. vellosiana Benth and S. officinalis had great impact on the microbiota sleeve, since it was not possible to see bacterial growth after washing the same with the soaps. The results of this study suggest the use of soaps containing the S. macranthera and S. officinalis extracts in controlling the bacterial population to reduce etiological agents of bovine mastitis.
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Efeito dos óleos essenciais de Syzygium aromaticum e Cinnamomum zeylanicume e seus compostos majoritários na produçao de biofilme em cepas de Staphylococcus aureus, isolados de leite de vacas com mastite subclínica /

Budri, Paulo Eduardo. January 2014 (has links)
Orientador: Vera Lúcia Mores Rall / Banca: Ary Fernandes Júnior / Banca: Carlos Henrique Camargo / Resumo: A mastite bovina é uma inflamação da glândula mamária das vacas, causando perdas econômicas na bovino-cultura leiteira e Staphylococcus aureus é um dos micro-organismos mais comumente isolado nesse tipo de doença. A produção de biofilmes por S. aureus constitui um importante fator de virulência e contaminação desse micro-organismo, envolvendo a adesão da bactéria em superfícies sólidas. Neste trabalho foram testados os óleos essenciais de Syzygium aromaticum (OESA) e Cinnamomum zeylanicum (OECZ) e seus compostos majoritários, eugenol e cinamaldeído, quanto à atividade sobre a formação de biofilmes em cepas de S. aureus, em diferentes superfícies. Os resultados demonstraram inibição significativa (p<0,05) da produção de biofilme pelo OESA em superfície de poliestireno e aço inox (69,4% e 63,6%, respectivamente). Entretanto, seu composto majoritário, o eugenol, não apresentou a mesma eficácia, reduzindo a formação em apenas 52,8% em poliestireno e 19,6% em aço inox (p>0,05). Por outro lado, o OECZ e seu composto majoritário, cinamaldeído, reduziram significativamente a capacidade de produção de biofilme, tanto em superfícies de poliestireno (74,7% e 69,6%, respectivamente) quanto em superfície de aço inox (45,3% e 44,9%, respectivamente). Pela significante redução da produção de biofilme por OESA, OECZ e cinamaldeído, em baixa concentração, estas substâncias podem ser consideradas, como princípio ativo, na produção de sanitizantes na indústria de alimentos / Abstract: Bovine Mastitis is an inflammation of the mammary gland of cows causing economic losses in dairy cattle and Staphylococcus aureus is one of the microorganisms most commonly isolated in this kind of disease. The production of biofilms by S. aureus is an important virulence factor and spreed of this microorganism, involving the adhesion of bacteria on solid surfaces. In this work we tested the essential oils of Syzygium aromaticum (OESA) and Cinnamomum zeylanicum (OECZ) and their major compounds, eugenol and cinnamaldehyde, as the activity on biofilm formation in strains of S. aureus on different surfaces. The results showed a significant inhibition (p <0.05) for the biofilm production on the by OESA on polystyrene and stainless steel surface (69.4% and 63.6 %, respectively). However, its major compound, eugenol, did not show the same effectiveness, reducing in only 52.8 % and 19.6 % in polystyrene stainless steel (p > 0.05). On the other hand, OECZ and its major compound, cinnamaldehyde, reduced significantly the capacity of biofilm production, both in polystyrene (74.7% and 69.6%, respectively) and on the of stainless steel surfaces (45.3% and 44.9%, respectively). Due to the significant reduction of biofilm production by OESA, OECZ and cinnamaldehyde, at low concentration, these substances may be considered as active ingredient, in the production of sanitizers in the food industry / Mestre
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Expressão diferencial de mRNA em células de cultivo infectadas ple herpesvírus bovino 5 /

Cagnini, Didier Quevedo. January 2014 (has links)
Orientador: Alexandre Secorun Borges / Banca: João Pessoa Araújo Junior / Banca: Paulo Eduardo Martins Ribolla / Banca: Eduardo Furtado Flores / Banca: Marcelo Mendes Brandão / Resumo: Herpesvirus bovino (BoHV-5) é um alfaherpesvirus que causa meningoencefalite não-supurativa preferencialmente em bovinos jovens. Esta enfermidade ocorre naturalmente em surtos ou casos isolados, apresentando baixa morbidade e alta letalidade. A epidemiologia, as características anatomopatológicas e o diagnóstico do BoHV-5 são bem conhecido. No entanto, as interações moleculares entre a células hospedeiras e o BoHV-5 são pobremente compreendidas. Técnicas moleculares como a PCR quantitativa e o sequenciamento de RNA (RNA-seq) são importantes ferramentas para o estudo de interações entre vírus e células hospedeiras. Neste estudo células MDBK foram infectadas pelo BoHV-5, cepa SV507-99 e o mRNA extraído em 0, 6, 12, 18, e 24 horas após a infecção (pi) foi utilizado para avaliar a expressão de genes do vírus e da célula hospedeira por qPCR e o mRNA de 1h, 6h e 24h pi foram utilizado no estudo por RNA-seq. Células MDBK não infectadas foram usadas como controle. A qPCR demonstrou que os três genes do BoHV-5 estudados (bICP0, UL9 e US4) apresentaram perfil de expressão semelhante nos diferentes momentos após infecção e que o gene bovino GAPDH teve sua expressão diminuída pela infecção viral. Ao menos 900 genes foram diferencialmente expressos para cada momento de infecção na análise por RNA-seq. Estes genes estavam principalmente relacionados a vias celulares de controle de ciclo celular, produção de interleucinas, quimiotaxia para células inflamatórias, reparo e dano ao DNA, resposta a vírus, apoptose, processo oxidativo, e ubiquitização de moléculas. Estes resultados representam novos conhecimentos sobre a interação entre o BoHV-5 e as células bovinas e podem representar um ponto de partida para novas pesquisas e melhor compreensão da patogenia deste vírus / Abstract: Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an Alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis mainly in young cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Besides BoHV-5 epidemiology, pathological findings and diagnosis were well known, the molecular interactions between host cell and BoHV-5 are poorly understood. Molecular biology techniques such as quantitative PCR (qPCR) and RNA sequencing (RNA-seq) are important tools to study virus and host cell interactions. In this study we infected MDBK cells and use the extracted mRNA at 0, 6, 12, 18 and 24h post infection (pi) to analyse BoHV-5 (bICP0, UL9 e US4) and host cell gene (GAPDH) expression using qPCR and 1h, 6h and 24h pi in the RNA-seq study. Mock-infected cells were used to control purpouse. The qPCR releveled that the three BoHV-5 genes showed the same expression behavior during the infection and the GAPDH gene were down-regulated in the infected group. At least 900 genes were differentially expressed during BoHV-5 in each moment analysed by RNA-seq. These genes were up- or down-regulated and mainly associated with cell cycle, interleukin production, inflammatory cells chemotaxis, DNA damage and repair, response to virus, apoptosis, oxidation-reduction process, and ubiquitination pathways. The results demonstrate new insights about BoHV-5 and bovine cells interactions and could be a starting point to new researches and to better understand the pathology of this virus / Doutor
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Análise espacial da favorabilidade de ocorrência de cisticercose bovina no Estado do Espírito Santo / Spatial Analysis of risk occurrence of Bovine Cysticercosis in the Espírito Santo State

Avelar, Barbara Rauta de 30 July 2013 (has links)
Made available in DSpace on 2016-12-23T13:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Barbara Rauta de Avelar.pdf: 1448240 bytes, checksum: de26cbfc0a4f53c8d98d90e464a20d01 (MD5) Previous issue date: 2013-07-30 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The bovine cysticercosis is a zoonotic parasitic disease with economic importance, caused by the larval stage of Taenia saginata,Cysticercus bovis. The objective of this work was to criate a risk map of the bovine cysticercosis occurrence in the Espírito Santo State . Through a literature review raised the following variables as important for the occurrence of there is parasitosis: sanitary sewage inappropriate (SSI), cattle population by municipality (CPM), use and occupation of the ground (UOG) and flood risk (FR). The database was criate using the data provided by IBGE for SSI and CPM. The data mapping was carried out in the program ArcGIS/ArcInfo 10.1., in which a mathematical model was develop involving the selected variables resulting map risk for the occurrence of bovine cysticercosis in the state. The map showed that the state of Espírito Santo predominate areas medium risk for the occurrence of the parasite, while areas of high and very high risk does not reach 12% of the study area and are mainly located in the northern region in the state. The use of GIS helped in the elucidation of the sites risk of bovine cysticercosis in the Espírito Santo State, and with it, more severe measures of control and prevention of bovine cysticercosis should be directed in the countries of the State with areas of high and very high risk / A cisticercose bovina é uma enfermidade parasitaria de caráter zoonótico, com importância econômica, causada pela fase larval da Taenia saginata, o Cysticercus bovis. Objetivou-se com esse trabalho gerar um mapa de favorabilidade de ocorrência da cisticercose bovina no Estado do Espírito Santo. Levantou-se as seguintes variáveis como importantes para a ocorrência da parasitose, por meio de revisão de literatura: esgotamento sanitário inadequado (ESI), população de bovino por município (PBM), uso e ocupação da terra (UOT) e risco de inundação (RI). O banco de dados foi gerado com os dados fornecidos pelo IBGE para o ESI e a PBM. O tratamento dos dados cartográficos foi realizado no programa ArcGIS/ArcINFO 10.1., no qual se gerou um modelo matemático envolvendo as variáveis selecionadas que resultou no mapa de favorabilidade para a ocorrência de cisticercose bovina no Estado. O mapa mostrou que no Estado do Espírito Santo predominam áreas de média favorabilidade para a ocorrência da parasitose, enquanto que as áreas de alta e muito alta favorabilidade não chegam a 12% da área estudada e localizam-se principalmente na região norte no Estado. O uso do SIG auxiliou na identificação dos locais de risco da cisticercose bovina no Estado do Espírito Santo e com isso, medidas mais severas de controle e prevenção da cisticercose bovina devem ser direcionadas nos municípios com áreas de alta e muito alta favorabilidade
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Expressão diferencial de mRNA em células de cultivo infectadas ple herpesvírus bovino 5 / In vitro mRNA differential expressionin bovine herpevirus 5 infection

Cagnini, Didier Quevedo [UNESP] 12 December 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2015-10-06T13:02:50Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-12. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:19:26Z : No. of bitstreams: 1 000847194.pdf: 1197011 bytes, checksum: 7209fde66f8374f6f0f630a8a112ded9 (MD5) / Herpesvirus bovino (BoHV-5) é um alfaherpesvirus que causa meningoencefalite não-supurativa preferencialmente em bovinos jovens. Esta enfermidade ocorre naturalmente em surtos ou casos isolados, apresentando baixa morbidade e alta letalidade. A epidemiologia, as características anatomopatológicas e o diagnóstico do BoHV-5 são bem conhecido. No entanto, as interações moleculares entre a células hospedeiras e o BoHV-5 são pobremente compreendidas. Técnicas moleculares como a PCR quantitativa e o sequenciamento de RNA (RNA-seq) são importantes ferramentas para o estudo de interações entre vírus e células hospedeiras. Neste estudo células MDBK foram infectadas pelo BoHV-5, cepa SV507-99 e o mRNA extraído em 0, 6, 12, 18, e 24 horas após a infecção (pi) foi utilizado para avaliar a expressão de genes do vírus e da célula hospedeira por qPCR e o mRNA de 1h, 6h e 24h pi foram utilizado no estudo por RNA-seq. Células MDBK não infectadas foram usadas como controle. A qPCR demonstrou que os três genes do BoHV-5 estudados (bICP0, UL9 e US4) apresentaram perfil de expressão semelhante nos diferentes momentos após infecção e que o gene bovino GAPDH teve sua expressão diminuída pela infecção viral. Ao menos 900 genes foram diferencialmente expressos para cada momento de infecção na análise por RNA-seq. Estes genes estavam principalmente relacionados a vias celulares de controle de ciclo celular, produção de interleucinas, quimiotaxia para células inflamatórias, reparo e dano ao DNA, resposta a vírus, apoptose, processo oxidativo, e ubiquitização de moléculas. Estes resultados representam novos conhecimentos sobre a interação entre o BoHV-5 e as células bovinas e podem representar um ponto de partida para novas pesquisas e melhor compreensão da patogenia deste vírus / Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) is an Alphaherpesvirus that causes nonsuppurative meningoencephalitis mainly in young cattle. This disease occurs naturally in either outbreaks or isolated cases, and exhibits low morbidity and high lethality. Besides BoHV-5 epidemiology, pathological findings and diagnosis were well known, the molecular interactions between host cell and BoHV-5 are poorly understood. Molecular biology techniques such as quantitative PCR (qPCR) and RNA sequencing (RNA-seq) are important tools to study virus and host cell interactions. In this study we infected MDBK cells and use the extracted mRNA at 0, 6, 12, 18 and 24h post infection (pi) to analyse BoHV-5 (bICP0, UL9 e US4) and host cell gene (GAPDH) expression using qPCR and 1h, 6h and 24h pi in the RNA-seq study. Mock-infected cells were used to control purpouse. The qPCR releveled that the three BoHV-5 genes showed the same expression behavior during the infection and the GAPDH gene were down-regulated in the infected group. At least 900 genes were differentially expressed during BoHV-5 in each moment analysed by RNA-seq. These genes were up- or down-regulated and mainly associated with cell cycle, interleukin production, inflammatory cells chemotaxis, DNA damage and repair, response to virus, apoptosis, oxidation-reduction process, and ubiquitination pathways. The results demonstrate new insights about BoHV-5 and bovine cells interactions and could be a starting point to new researches and to better understand the pathology of this virus
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Determinação do teor de zinco no casco e soro sangüíneo, da produção de leite e contagem de células somáticas em bovinos leiteiros suplementados com Saccharomyces cerevisiae

Cunha Filho, Luiz Fernando Coelho da [UNESP] 14 July 2006 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:24Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-14Bitstream added on 2014-06-13T20:22:05Z : No. of bitstreams: 1 cunhafilho_lfc_dr_botfmvz.pdf: 521692 bytes, checksum: b6875819c221eba1ce2138816b6019bd (MD5) / Universidade Estadual Paulista (UNESP) / Com o objetivo de determinar as concentrações de zinco no soro e na sola do casco de bovinos com e sem lesões podais, suplementados ou não com Saccharomyces cerevisiae, como fonte de zinco orgânico, por 180 dias, foram selecionadas e examinadas 45 vacas holandesas preto e branco, escolhidas em um rebanho de 189 vacas em lactação. Os animais foram distribuídos em três grupos aleatoriamente, sendo grupo 1 (G1) composto por 20 vacas com claudicação e suplementadas, grupo 2 (G2) 10 animais sem claudicação e com suplementação, e grupo 3 (G3) 15 animais com claudicação e sem suplementação. Amostras de soro e de sola de cada dígito, foram coletadas no momento inicial (dia zero), 90 e 180 dias após início do experimento, sendo as concentrações de zinco determinadas por espectrofotometria de absorção atômica. Foram analisadas a produção de leite, a contagem de células somáticas (CCS), e o número de lesões podais. A suplementação de zinco orgânico não promoveu diferença significativa para a concentração de zinco sérico e na sola do casco, contudo, houve uma tendência de aumento sérico. Os dígitos com lesões podais apresentaram maior concentração do elemento zinco na sola do casco, e devido à variabilidade recomenda-se realizar as análises individualmente em cada dígito. A suplementação manteve baixa a CCS, e não alterou a produção de leite. O número de lesões podais apresentou variabilidade entre dígitos e entre membros torácico e pélvico, sendo que os suplementados apresentaram um número significativamente menor de lesões por dígito. Os resultados sugerem que a suplementação de zinco melhora a qualidade do leite e proporciona maior período de permanência dos animais no free stall. / In objective of the determination of zinc concentration in serum and hoof sole in bovine with and without hoof lesions, supplemented or not with Saccharomyces cerevisae as a source of organic zinc for 180 days, 45 Holstein cows were selected and examined, randomly chosen from a flock of 189 lactating cows. The animals were distributed in three groups, namely group 1 (G1) which 20 cows with lameness and supplemented, group 2 (G2) with 10 animals without lameness and with supplementation, and group 3 (G3), with 15 animals with lameness and without supplementation. Serum and hoof sole samples were collected from each foot, in the initial moment (day zero), 90 and 180 days after the beginning of the experiment. Serum and hoof sole zinc concentration was determined by atomic absorption spectrophotometry. During the experiment, information about milk yield, somatic cell count (SCC) and foot lesions were obtained. Organic zinc supplementation did not promote any significant difference neither in serum, nor in hoof sole zinc concentration. However, there was a tendency for serum rising. The lesioned foot showed a higher hoof sole zinc concentration, and due to the variability it is recommended having each foot analyzed individually. Supplementation kept a low SCC, and it didn't affect milk production. The number of hoof lesions showed variability among feet and between thoracic and pelvic limbs. Animals that received supplementation, showed a significantly lower number of lesions in hoof. The results suggest that the supplementation of zinc improves the quality of milk and provides a larger permanence of the animals free stall.
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Parâmetros clínicos, alterações sorológicas e qualidade do sêmen de touros jovens infectados experimentalmente com herpesvírus bovino tipo 1

Souza, Wesley José de [UNESP] 05 July 2013 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:51Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-07-05Bitstream added on 2014-06-13T19:22:37Z : No. of bitstreams: 1 souza_wj_dr_jabo.pdf: 513241 bytes, checksum: 3c1539fc3f14169cf4056ce94931dea2 (MD5) / Este trabalho teve como objetivo analisar parâmetros clínicos, alterações sorológicas e qualidade do sêmen de touros jovens infectados experimentalmente com o herpesvírus bovino tipo 1 (BoHV-1) entre os dias 0 e 49 pós-inoculação (PI), com o intuito de caracterizar as manisfestações que direcionam o diagnóstico, nas diversas fases de infecção. Neste experimento foram utilizados 12 touros com aproximadamente 30 meses de idade. Seis animais foram inoculados com a amostra padrão Nebraska do BoHV-1 pelas vias intranasal e intraprepucial com 10 mL de suspensão viral (107,0TCID50/mL) repartidos 5 mL em cada via. Os outros seis animais ficaram como grupo controle. Todos os touros inoculados com o BoHV-1 apresentaram edema e hiperemia no prepúcio entre o terceiro e o décimo sexto dia pi, dos quais dois também apresentaram exsudato nasal, detectado entre o terceiro e o oitavo dia PI. Nenhum dos animais do grupo controle manifestou sinais clínicos da doença. Por meio da técnica de virusneutralização (VN) foram detectados títulos de anticorpos com valores entre 4 e 512 em todos os animais inoculados, no período entre 14º e 49º dia PI. Em todos os animais inoculados foi constatada a presença de material genético do BoHV-1 nas amostras de sêmen analisadas por meio da técnica da reação em cadeia pela polimerase (PCR). Em quatro desses animais foi detectado o material genético viral aos 7,14 e 21 dias PI e em dois animais o material genético do vírus foi identificado por mais uma semana, ou seja, até o 28º dia PI. Todos os animais do grupo controle apresentaram resultados negativos nas técnicas de VN e PCR. Em relação à qualidade do sêmen, não foram observadas diferenças estatísticas (p≥0,05) entre o grupo de touros controle e o grupo de touros inoculados experimentalmente com o BoHV-1, por meio das... / This study aimed to analyze clinical parameters, serological alterations and quality from the semen of young bulls experimentally infected with type 1 bovine herpes virus (BoHV-1) between days 0 and 49 post-inoculation (P. I.), in order to characterize the manifestations that orientate diagnosis, in several phases of infection. Twelve bulls were used in this experiment, all being approximately 30 months old. Six animals were inoculated with the Nebraska standard sample of BoHV-1 through intranasal and intrapreputial routes, each with 10 ml of the viral suspension (total dosage of 107.0TCID50/ml) divided in 5 ml for each route. The other six animals were used as a control group. All bulls inoculated with BoHV-1 presented edema and hyperemia on the foreskin between the third and sixteenth days after the inoculation, from which two animals also presented nasal exudate, detected between the third and eighth days P. I. No animals from the control group manifested any clinical signs characteristic of the infection caused by BoHV-1. By means of the viral neutralization (VN) technique, antibody titers with values ranging from 4 to 512 were detected in all inoculated animals between days 14 and 49 after the inoculation. In all inoculated animals, genetic material of BoHV-1 was present in semen samples analyzed by means of the polymerase chain reaction (PCR) technique. In four of these animals, viral genetic material was detected on days 7, 14 and 21 P. I. and in two animals the genetic material of the virus was identified for one more week, until day 28 after the infection. All animals in the control group showed negative results for the previously mentioned VN and PCR techniques. Considering the quality of semen samples from experimental bulls, no statistical differences were observed (p ≥ 0.05) between the control group and the group... (Complete abstract click electronic access below)
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Efeito dos óleos essenciais de Syzygium aromaticum e Cinnamomum zeylanicume e seus compostos majoritários na produçao de biofilme em cepas de Staphylococcus aureus, isolados de leite de vacas com mastite subclínica

Budri, Paulo Eduardo [UNESP] 24 February 2014 (has links) (PDF)
Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:40Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-02-24Bitstream added on 2014-11-10T11:58:49Z : No. of bitstreams: 1 000790031.pdf: 1194347 bytes, checksum: 7d9cc0fd0dc5c7ba742f356f3e698452 (MD5) / A mastite bovina é uma inflamação da glândula mamária das vacas, causando perdas econômicas na bovino-cultura leiteira e Staphylococcus aureus é um dos micro-organismos mais comumente isolado nesse tipo de doença. A produção de biofilmes por S. aureus constitui um importante fator de virulência e contaminação desse micro-organismo, envolvendo a adesão da bactéria em superfícies sólidas. Neste trabalho foram testados os óleos essenciais de Syzygium aromaticum (OESA) e Cinnamomum zeylanicum (OECZ) e seus compostos majoritários, eugenol e cinamaldeído, quanto à atividade sobre a formação de biofilmes em cepas de S. aureus, em diferentes superfícies. Os resultados demonstraram inibição significativa (p<0,05) da produção de biofilme pelo OESA em superfície de poliestireno e aço inox (69,4% e 63,6%, respectivamente). Entretanto, seu composto majoritário, o eugenol, não apresentou a mesma eficácia, reduzindo a formação em apenas 52,8% em poliestireno e 19,6% em aço inox (p>0,05). Por outro lado, o OECZ e seu composto majoritário, cinamaldeído, reduziram significativamente a capacidade de produção de biofilme, tanto em superfícies de poliestireno (74,7% e 69,6%, respectivamente) quanto em superfície de aço inox (45,3% e 44,9%, respectivamente). Pela significante redução da produção de biofilme por OESA, OECZ e cinamaldeído, em baixa concentração, estas substâncias podem ser consideradas, como princípio ativo, na produção de sanitizantes na indústria de alimentos / Bovine Mastitis is an inflammation of the mammary gland of cows causing economic losses in dairy cattle and Staphylococcus aureus is one of the microorganisms most commonly isolated in this kind of disease. The production of biofilms by S. aureus is an important virulence factor and spreed of this microorganism, involving the adhesion of bacteria on solid surfaces. In this work we tested the essential oils of Syzygium aromaticum (OESA) and Cinnamomum zeylanicum (OECZ) and their major compounds, eugenol and cinnamaldehyde, as the activity on biofilm formation in strains of S. aureus on different surfaces. The results showed a significant inhibition (p <0.05) for the biofilm production on the by OESA on polystyrene and stainless steel surface (69.4% and 63.6 %, respectively). However, its major compound, eugenol, did not show the same effectiveness, reducing in only 52.8 % and 19.6 % in polystyrene stainless steel (p > 0.05). On the other hand, OECZ and its major compound, cinnamaldehyde, reduced significantly the capacity of biofilm production, both in polystyrene (74.7% and 69.6%, respectively) and on the of stainless steel surfaces (45.3% and 44.9%, respectively). Due to the significant reduction of biofilm production by OESA, OECZ and cinnamaldehyde, at low concentration, these substances may be considered as active ingredient, in the production of sanitizers in the food industry

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