As junções GAP são canais intercelulares responsáveis pela comunicação de células vizinhas, por onde passam pequenas moléculas e íons que mantêm a homeostasia celular. A junção GAP é formada seis proteínas, as conexinas. Na célula endotelial encontram-se as conexinas 37, 40 e 43. Nesse estudo, estimulamos a angiogênese em córnea de camundongos, através da cauterização com cristal de nitrato de prata. Foram utilizados camundongos heterozigotos para o gene da conexina 43 (Cx43+/-) e camundongos selvagens (Cx43+/+). As córneas foram analisadas 2 e 6 dias após a cauterização atravéspor meio da morfologia vascular, detecção das Cx37, Cx40, Cx43, PCNA por meio de Western Blot e avaliação ultraestrutural das células endoteliais. Como resultado obtivemos uma menor área de preenchimento vascular nos animais Cx43+/- em 2 e 6 dias após a lesão corneal, porém, em relação a extensão dos vasos não foi observado diferenças entre os grupos. Uma menor proliferação celular foi verificada através da detecção do PCNA, nos animais heterozigotos, somente após 2 dias da lesão corneal. Não houve alteração da Cx37 e Cx40 entres os grupos. A Cx43 parece ser uma conexina importante para a célula endotelial durante o processo de angiogênese. / The GAP junctions are intercellular streams responsible for the communication between close cells, which allow small molecules and ions to pass through them maintaining the cellular homeostasis. The GAP junction is formed of six proteins, the connexin. In the endothelial cell, there are the connexin 37, 40 and 43. In this study, we stimulated the angiogenesis in the mice\'s cornea through its cauterization using silver\'s crystal glass. It was used heterozygote mice to the gene of connexin 43 (Cx43+/-) and wild mice (Cx43+/+). The corneas were analyzed 2 and 6 days after the cauterization through the vascular morphology, detection of Cx37, Cx40, Cx43, PCNA through Western Blot and ultrastructural evaluation of the endothelial cells. As a result, we obtained a smaller area of vascular fillness in the animals Cx43+/- with 2 and 6 days of corneal injury, however, in regard to the extensions of the vessels, it wasn\'t observed any changes between the groups. A smaller proliferation of cells was verified, through the detection of PCNA, in the heterozygote animals only 2 days after the corneal injury. There wasn\'t any modification of the Cx37 and Cx40 between groups. The Cx43 seems to be an important connexin to the endothelial cell during the process of angiogenesis.

O desenvolvimento da doença periodontal (DP) é influenciado pela resposta imunológica do hospedeiro frente ao desafio bacteriano. Apesar da função protetora de tal resposta frente à infecção, a mesma leva à destruição dos tecidos periodontais. Neste estudo, analisamos o papel de MIP-1 na imunomodulação da DP experimental em camundongos. Camundongos C57Bl/6 (WT) infectados com A. actinomycetemcomitans desenvolveram uma intensa reação inflamatória e severa reabsorção óssea alveolar, associada a uma alta expressão de MIP-1 e uma intensa migração de células CCR5+ e CCR1+ para os tecidos periodontais. Além disso, verificamos que uma intensa expressão de citocinas inflamatórias (TNF-) e do tipo Th1 (IFN-), RANKL e MMPs estava associada à progressão da doença. Entretanto, camundongos geneticamente modificados para não expressar MIP-1 (MIP-1KO), quando infectados com A. actinomycetemcomitans, apresentaram um padrão de resposta muito semelhante aos animais WT. De fato, a ausência de MIP-1 não interferiu na migração de células inflamatórias para os tecidos periodontais e na reabsorção óssea alveolar nos camundongos infectados. Semelhantemente, a expressão de citocinas (TNF-, IFN- e IL-10), dos fatores osteoclastogênicos (RANKL e OPG) e das MMPs e seus inibidores (MMP-1, MMP-2, MMP-3, TIMP-1 e TIMP-3) foram similares entre os camundogos das linhagens WT e MIP-1KO. Além disso, a ausência de MIP-1 não interferiu no controle da infecção por A. actinomycetemcomitans como demonstrado pela similaridade na quantidade de carga bacteriana presente nos tecidos e nos níveis de MPO e iNOS. Os resultados obtidos podem ser explicados pela relativa redundância no sistema quimiocinas/receptores de quimiocinas, onde mais de uma quimiocina pode ligar-se ao mesmo receptor. De fato quimiocinas como MIP-1 e RANTES, que utilizam os mesmos receptores de MIP-1 (CCR5 e CCR1), apresentaram-se intensamente expressas nos tecidos periodontais dos camundongos infectados com A. actinomycetemcomitans, independentemente da ausência de MIP-1. De fato, camundongos tratados com Met-RANTES, um antagonista específico dos CCR5 e CCR1, resultou em uma redução significativa no influxo de células inflamatórias e perda óssea alveolar quando comparados com os camundongos não tratados. Nossos resultados demonstraram que a ausência de MIP-1 não afeta o desenvolvimento da doença periodontal experimental em camundongos, provavelmente pela presença de quimiocinas homólogas que suprem sua ausência. / Periodontal disease (PD) development is highly influenced by the host immune response to the bacterial challenge. Despite the protective role of this response against infectious agents it leads to periodontal tissues destruction. In this study, we analyzed the role of chemokine MIP-1 on the immunomodulation of experimental PD in mice. C57Bl/6 (WT) mice infected with A. actinomycetemcomitans developed an intense inflammatory reaction and severe alveolar bone resorption, associated with a high expression of MIP-1 and the migration of CCR5+ and CCR1+ cells to the periodontal tissues. In addition, an intense expression of Th1 (IFN-) and inflammatory (TNF-) cytokines, RANKL and MMPs are associated with the disease progression. However, mice genetically deficient of MIP-1 (MIP-1KO), when infected with A. actinomycetemcomitans, developed a very similar response pattern to that observed for WT strain. Indeed, the absence of MIP-1 does not interfere in inflammatory cells migration to periodontal tissues and alveolar bone resorption in response to A. actinomycetemcomitans infection. Similarly, the expression of cytokines (TNF-, IFN- and IL-10), osteoclastogenic factors (RANKL and OPG) and MMPs and its inhibitors (MMP-1, MMP-2, MMP-3, TIMP-1 and TIMP-3) was similar between WT and MIP-1KO strains. Furthermore, the lack of MIP-1 does not interfere in the control of A. actinomycetemcomitans infection as demonstrated by the similar bacterial load, and similar levels of the antimicrobial MPO and iNOS. Such results can be explained by the relative redundancy of chemokine system, where more than one chemokine can bind to the same receptor. Indeed, chemokines, such as MIP-1 and RANTES, which use the same receptors used by MIP-1 (CCR1 and CCR5), are intensely expressed in periodontal tissues of mice infected with A. actinomycetemcomitans, regardless of the absence of MIP-1. In accordance, the treatment of mice with Met-RANTES, a specific antagonist of the receptors CCR5 and CCR1, resulted in a significant reduction in the influx of inflammatory cells and alveolar bone loss when compared with untreated mice. Our results demonstrate that the absence of MIP-1 does not affect the development of experimental periodontitis in mice, probably due to the presence of homologous chemokines that overcome the absence of this chemokine.

A sensibilização comportamental é caracterizada por aumento no efeito comportamental de uma droga após administrações repetidas. Este fenômeno é intensamente aplicado em estudos com modelos animais que enfocam a dependência de drogas. A maioria destas drogas promove adaptações em sistemas de neurotransmissão, (ex. sistema dopaminérgico), como é o caso da anfetamina, morfina e etanol. No entanto, estudos que avaliam os efeitos de drogas administradas durante a abstinência e posterior expressão de sensibilização comportamental são escassos. Neste trabalho avaliou-se as influências de um inibidor seletivo da monoamino-oxidase tipo-B (selegilina, 10mg/Kg) na sensibilização comportamental para anfetamina (2mg/Kg) observada em camundongos. Os resultados mostraram que o tratamento crônico com anfetamina promoveu sensibilização comportamental, efeito também observado no tratamento com selegilina, o qual resultou em sensibilização prévia para a anfetamina, além de potencializar os efeitos desta. Evidenciou-se também que a sensibilização comportamental não é um processo dependente dos níveis de corticosterona. O tratamento agudo com selegilina reduziu a atividade locomotora observada em campo aberto devido a hipotensão e bradicardia causadas pela mesma. Além disso, a selegilina agudamente também causou diminuição nos níveis de coticosterona motivo pelo qual é utilizada em clínica veterinária para o tratamento da Síndrome de Cushing. O tratamento agudo com anfetamina promoveu aumento no parâmetro comportamental, evidenciando seu efeito estimulante, mas não causou hipertensão. / The behavior sensitization is defined by a progressive enhancement of the behavioral response after repeated treatments. This phenomenon is intensely applied in studies with animal models that focus drug addiction. The majority of these drugs promote adaptations in neurotransmission (ex. dopaminergic system) as is the case of amphetamine, morphine and ethanol. However, studies which evaluate the drugs effects during abstinence and the induction of behavioral sensitization are scarce. In the present study we evaluated the influences of a selective inhibitor monoamine oxidase type-B (selegiline, 10mg/Kg) in the behavioral sensitization for amphetamine (2mg/Kg) in mice. The results shown that the chronic treatment with amphetamine promoted behavioral sensitization, like selegiline treatment that results in previous sensitization for amphetamine therefore potentiate the effects of this drug. Showed up that behavioral sensitization is not dependent process of the levels of corticosterone. The acute treatment with selegiline reduced the locomotor activity in open field test because of hypotension and decrease in heart rate. Another important acute effect of selegiline is the decrease in corticosterone levels; this is the cause that this drug is using in treatment of Cushing syndrome in veterinary. The acute treatment with amphetamine promoted increase in the locomotor activity, showing this stimulant effect but did not show effects in the blood pressure.

Poteínas recombinantes simples, como a insulina e o hormônio de crescimento humano, podem ser produzidas em microorganismos como bactérias Entretanto, para a produção de proteínas que precisam de modificações pós-traducionais, que não se consegue em microorganismos, torna-se importante o uso de biorreatores com culturas de células eucarióticas. Este sistema de produção é caro e a quantidade de proteína produzida é pequena. Como alternativa surgiu o uso de animais transgênicos para reduzir os custos de produção. A Eritropoietina humana é uma proteina glicosilada e representa um dos maiores gastos para tratamento de doenças humanas. Já foi produzida em camundongos, coelhos e suínos transgênicos, com problemas na glicosilação ou alteração da higidez do animal pela falha da região promotora do vetor de transgene em limitar a expressão para a glâmdula mamária. Este estudo teve como objetivo a produção de (rhEPO) no leite de camundongas transgênicas sob ação de dois diferentes vetores, nunca utilizados na sua produção. Os vetores com os promotores da alfa-lactalbumina e beta-lactoglobulina bovinos tiveram o gene da eritropoietina humana inserido entre as regiões promotora e codificadora do leite, num processo trabalhoso e pouco eficiente. Não foi possível inserir os vetores serão nas células tronco-embrionárias (CTE) de camundongos (USP-1) por eleroporação, mas as condições (390V por 80µs) foram testadas com vetor de fluorescência. Futuramente as CTE transgênicas serão agregadas aos embriões colhidos de camundongas superovuladas e após 24 horas de cultivo in vitro serão transferidos para camundongas pseudo-gestantes. Os animais nascidos (quimeras) serão acasalados e seus descendentes terão o DNA analisado para verificar a presença do gene da eritropoietina humana. Os animais positivos (fundadores) serão acasalados e as fêmeas positivas nascidas serão acompanhadas quanto à produção da eritropoietina humana no leite. Será purificada do leite, quantificada e avaliada quanto a glicosilação por Western Blottin. / Recombinant proteins such as insulin and human growth hormone can be produced by microorganisms. Although, to produce proteins that need pos-traductional modifications that can not be done by microorganisms, and a eucariotic cell bioreactor is needed. This production system is expensive and the amount of protein produced is low. As an alternative, the transgenic animal technology came up to reduce production fees. The human eritropoetin is a glicosilated protein and it is one of the most expensive to human treatment. It was already produced in transgenic mice, rabbit and swine but with glicosilation problems or health alterations by transgene vectors promoter region failure that limits the expression on mammary gland. This study aimed to produce recombinant human erythropoetin (rhEPO) in transgenic mice milk by two different vectors, never had been used to produce it before. Vectors with bovine alpha-lactalbumin and beta-lactoglobulin promoters had the human erythropoetin gene inserted between promoter and milk coding regions by a hard working and low efficiency technique. It was not possible to insert our vectors on mice embryonic stem cells (ESC) (USP-1) by electroporation but its conditions (390V, 80µs) were tested with fluorescent vector. In the future, transgenic ESC will be aggregated into mice embryos and after 24 hours of in vitro culture will be transferred to pseudo-pregnant mices. The new borns (chimera) will be mated and its offspring will have their DNA evaluated to verify the human eritropoetin gene occurrence. The founder animals will be also mated and the positive female borned will be evaluated for human erythrpoetin production on milk. It will be purified, quantified and evaluated for glicosilation by western blottin techinique.

A artrite reumatoide (AR) é uma doença crônica autoimune que afeta as articulações e causa uma persistente inflamação sinovial e destruição da cartilagem e osso. A artrite induzida por pristane (PIA) em camundongos é um modelo experimental utilizado em muitos trabalhos, pois se assemelha à artrite reumatoide. MicroRNAs (miRNA) têm sido bastante estudados por sua participação no desenvolvimento da artrite. As linhagens de camundongos AIRmax e AIRmin, diferem quanto a susceptibilidade/resistência à PIA. Nós analisamos o perfil de expressão gênica de mRNA e miRNAs das células peritneais dessas linhagens e avaliamos sua participação no desenvolvimento da PIA. A linhagem AIRmax mostrou uma maior modulação de genes (2025) com relação aos AIRmin (1043) no início dos sintomas. Os miRNAs 132-3p/212-3p e 130b-3p foram, os miRNAs mais significativamente modulados nos animais sensíveis e mostraram correlações negativas com alguns de seus genes alvos preditos. Nosso estudo mostrou que a expressão de mRNAs e miRNAs é modificada nas linhagens AIRmax e AIRmin durante a PIA. / Rheumatoid arthritis is a chronic autoimmune disease that affects joints and it is characterized by synovial inflammation and articular cartilage and bone destruction. Pristane-induced arthritis (PIA) in mice is an experimental model that has been used in many studies, since it resembles rheumatoid arthritis. MiRNAs has been extensively studied in the development of arthritis. AIRmax and AIRmin lines, differ in their susceptibility/resistance to PIA. We analyzed the miRNA and gene expression profile of mRNA in peritoneal cells of these lines in order to evaluate their involvement in PIA development. AIRmax mice showed a high gene modulation (2025) than AIRmin mice (1043) at the onset of disease symptoms. The 132-3p/212-3p and 130b-3p miRNAs were the most significant in susceptible animals showing negative correlations with some of their predicted target genes. Our study showed that the global gene and miRNA expressions are modified in the peritoneal cells of AIRmax and AIRmin lines during pristane-induced arthritis.

O Óxido Nítrico inalatório (iNO) é uitlizado para tratamento de várias doenças pulmonares, porém algumas evidências apóiam que esses efeitos farmacológicos do iNO podem alcançar outros leitos vasculares. Desse modo, esse estudo tem como objetivo investigar o possível efeito anti-inflamatório do iNO no modelo de edema de pata induzido por carragenina em camundongos e identificar por qual via ele desempenha essa resposta. Concluimos que o iNO foi eficaz na redução de sinais inflamatórios e houve indícios que o NO desempenha seus efeitos pela via do GMPc, pelo fato de ter aparecido um efeito potencializador na redução do edema quando associoado ao sildenafil e não com o rolipram. Esses resultados indicam que a terapia com iNO vai além dos efeitos vasculares pulmonares inicialmente descritos. / Inhaled Nitric Oxide (iNO) is useful to treat many lung diseases, but some evidences support that these pharmacological effects of iNO can reach other vasculature, beyond the pulmonary vasculature. Thus, this study aimed to investigate the possible antiinflammatory effect of inhaled nitric oxide on the mice paw edema induced by carrageenan and investigate for which way iNO is acting. We conclude that iNO was effective in reducing inflammatory signs and there are some traces that this responses occurred by cGMP way. These results indicate that the beneficial effect of inhaled nitric oxide therapy goes beyond the initially described pulmonar vascular effects.

A dor é um dos sintomas que mais comprometem a produtividade, o bem estar e a qualidade de vida das pessoas, sobretudo dos idosos. Com o crescimento da utilização de Terapias Complementares para o seu tratamento surge a necessidade da realização de pesquisas que forneçam evidências sobre sua indicação e efetividade. Considerando a ampla utilização do Toque Terapêutico (TT) no tratamento complementar da dor decorrente de diversas condições clínicas e as críticas metodológicas aos resultados encontrados pelos autores, esta pesquisa buscou responder ao seguinte questionamento: Quais os efeitos do Toque Terapêutico sobre a dor inflamatória? Para tanto foi realizado um experimento utilizando o modelo de edema de pata induzido por Adjuvante Completo de Freund (CFA) em camundongos machos. A ação anti-inflamatória do TT foi verificada por meio de variação na dor, edema e migração de neutrófilos, antes e após a intervenção, aplicada durante 15 minutos, uma vez ao dia, por quatro dias. Os resultados apontaram aumento significativo no limiar nociceptivo mecânico e aumento na área do edema nas patas dos animais tratados com TT, no segundo dia de aplicação (p ? 0,05). A redução observada na migração de neutrófilos não foi estatisticamente significativa. Concluímos que a redução na dor corrobora os dados obtidos em estudos com seres humanos, com controle do efeito placebo. O modelo de edema de pata induzido por CFA é adequado à investigação experimental dos efeitos do TT sobre a dor inflamatória. Sugerimos a realização de novos experimentos para a elucidação dos mecanismos fisiológicos de ação envolvidos nos achados, sobretudo em decorrência do aumento do edema no grupo tratado com TT. / Pain is one of the symptoms that most endanger productivity, welfare and life quality of people, especially the elderly. With the increasing use of Complementary Therapies for its treatment there is the need to conduct studies that provide evidence about its indication and effectiveness. Considering the wide use of Therapeutic Touch (TT) in the adjunctive treatment of pain as a result of various clinical conditions and the methodological criticisms of the authors\' results, this research seeks to answer the following question: What are the effects of the Therapeutic Touch on inflammatory pain? For such, it was conducted an experiment using the model of paw edema induced by Freund\'s Complete Adjuvant (FCA) in male mice. The anti-inflammatory action of TT was verified by means of variation in pain, edema and neutrophilic migration, before and after the intervention, it was applied for 15 minutes once a day for four days. The results showed a significant increase in mechanical nociceptive threshold and an increase in the edema area in the paws of animals treated with TT, in the second day of treatment (p < 0.05). The observed reduction of neutrophilic migration was not statistically significant. It was concluded that the reduction in pain corroborates the data obtained in human studies, with control of the placebo effect. The model of paw edema induced by FCA is suitable for experimental investigation of the effects of TT on inflammatory pain. It is suggested further experiments to elucidate the physiological mechanisms of action underlying the findings, mainly due to the increase of edema in the group treated with TT.

Estudamos a impostação de mãos sobre camundongos, avaliando parâmetros hematológicos e imunológicos. Nossos resultados demonstraram nos animais que receberam a impostação de mãos uma diminuição significativa do número de plaquetas, elevação do número de monócitos na leucometria específica, elevação da atividade citotóxica de células não-aderentes com atividade NK e LAK. Os grupos controle e placebo não mostraram qualquer alteração Os resultados encontrados nos levam a concluir que há uma alteração fisiológica decorrente à impostação de mãos e que há que se estudar por que ela ocorre / It has been investigated whether the hands imposition on male mice, produces physiological effects through hematological and immunological parameters. The results demonstrated that animals receiving hands imposition have presented a reduction of the platelet count, increase in monocytes count in specific white blood cells counts, increase in cytotoxic activity of non-adherent cell with NK and LAK activities.Control and placebo groups presented no response. The results found lead us to the conclusion that there is a physiological alteration due to the hands imposition and it should be investigated how it does occur

O gene Slc11a1 regula a resistência contra S. entérica, L. donovani e M. tuberculosis. Sublinhagens de camundongos AIRmax e AIRmin homozigotas para os alelos R e S do gene Slc11a1 (AIRmax,RR, AIRmaxSS, AIRminRR e AIRminSS) foram utilizadas para avaliar o efeito destes alelos na ativação de macrófagos peritoneais (M<font face=\"Symbol\">F), induzida pelo tioglicolato (TIO) ou infecção por M. bovis BCG.O TIO induz baixa ativação celular, a estimulação com LPS aumentou a ativação nos macrófagos dos animais AIRmaxRR e AIRmaxSS. Assim, na inflamação com TIO, a ativação do M<font face=\"Symbol\">F foi dependente do fundo genético selecionado nos animais AIRmax, independente do alelo do gene Slc11a1. Na infecção com BCG, a sublinhagem AIRmaxRR foi a única capaz de controlar a proliferação da bactéria, secretando altos níveis de IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-12, TNF<font face=\"Symbol\">a e IL-6 que ativam o macrófago. Por outro lado, os AIRminSS susceptíveis à infecção produziram maiores concentrações de NO, H2O2 e IL-10, mostrando o fundo genético para alta ou baixa resposta inflamatória, e os alelos do gene Slc11a1 interferem na resistência à infecção. / The Slc11a1 gene regulates resistance against S. enterica, L. donovani and M. tuberculosis. AIRmax and AIRmin mouse sublines, homozygous for Slc11a1 R and S alleles (AIRmaxRR, AIRmaxSS, AIRminRR and AIRminSS) were used in this work to evaluate the effect of this gene in peritoneal macrophage (M<font face=\"Symbol\">F) activation induced by thioglycollate (TIO) or M. bovis BCG infection. TIO induced weak cellular activation, LPS stimulation increased AIRmaxRR and AIRmaxSS macrophages activation. These results indicate that inflammation and M<font face=\"Symbol\">F activation induced by TIO were dependent on the genetic background for acute inflammatory response, while Slc11a1 alleles have little effect on this phenotype. In BCG infection only AIRmaxRR mice were capable of controlling bacterial proliferation, which was accompanied with high levels of IL-1<font face=\"Symbol\">b, IL-12, TNF and IL-6 produced by activated macrophages. On the other hand, susceptible AIRminSS mice produced higher amounts of NO, H2O2 and IL-10 suggesting that both inflammatory background and Slc11a1 alleles interfere on resistance to BCG infection.

O uso de drogas de abuso pode levar a alterações neuroplásticas duradouras no encéfalo, entre elas a sensibilização comportamental (SC), um fenômeno relacionado à dependência. O enriquecimento ambiental (EA) permite estudar a influência do ambiente na resposta a diversas manipulações, entre elas o tratamento com drogas de abuso. O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito do EA sobre a SC ao etanol, e sobre a expressão de proteínas envolvidas nas respostas às drogas de abuso: BDNF, TrkB e Egr-1. Para tanto, camundongos foram expostos ao EA, e então tratados repetidamente com uma dose baixa (1,8 g/kg) de etanol. Outros grupos foram submetidos ao protocolo de SC e posteriormente expostos ao EA. O EA protegeu os animais de desenvolverem a SC ao etanol, bem como promoveu sua reversão. O EA diminuiu os níveis de BDNF no córtex pré-frontal e de TrkB no hipocampo, e aumentou a expressão de Egr-1 no córtex insular. O EA pode ser considerado uma estratégia útil para a reversão dos efeitos da SC, que está associada à fissura e a episódios de recaídas na dependência. / The use of addiction drugs can lead to long-term neuroplastic changes on the brain, such as behavioral sensitization (BS), a phenomenon related to addiction. Environmental enrichment (EE) is a strategy used to study the environmental influence on the response to several manipulations, including the treatment with addiction drugs. The aim of this work was to evaluate the effects of EE on the BS to ethanol and on the expression of proteins related to the response to drugs of abuse, as BDNF, TrkB and Egr-1. Thus, mice were exposed to EE and then repeatedly treated with a low dose (1.8 g/kg) of ethanol. Other group of mice was first submitted to the BS protocol and then exposed to EE. EE protected the mice from developing the BS to ethanol, and promoted its reversion. EE decreased BDNF levels in the prefrontal cortex and TrkB in the hippocampus, and increased Egr-1 expression in the insular cortex. EE can be considered and useful strategy to block BS effects, a phenomenon related to craving and relapse.