INTRODUÇÃO: O adenocarcinoma de pâncreas apresenta um mau prognóstico. A utilização de modelos experimentais é necessária para a compreensão do comportamento biológico tumoral, principalmente das lesões precoces (neoplasias intra-epiteliais pancreáticas - NIPan) e para o desenvolvimento de opções terapêuticas. OBJETIVO: Avaliar a carcinogênese pancreática induzida por 7,12-dimetilbenzantraceno (DMBA), em camundongos, aplicando a classificação das neoplasias intra-epiteliais pancreáticas. MÉTODOS: 90 camundongos machos, mus musculus, da cepa CF1, foram submetidos à laparotomia mediana e 1 mg de DMBA foi implantado na porção cefálica do pâncreas. Os animais foram divididos em dois grupos, com eutanásia em 30 e 60 dias. Em seguida, o pâncreas foi retirado, fixado em formalina e foram confeccionadas lâminas coradas com hematoxilina eosina. Os cortes histológicos foram avaliados por dois patologistas de acordo com os seguintes critérios: pâncreas normal, hiperplasia reacional, NIPan 1A, NIPan 1B, NIPan 2, NIPan 3 e carcinoma. As alterações inflamatórias também foram analisadas. RESULTADOS: A avaliação patológica evidenciou, no grupo de 30 dias: 4 (16,7%) animais com hiperplasia reativa, 16 (66,6%) com NIPan e 4 (16,7%) com adenocarcinoma. No grupo de 60 dias: 10 (27,1%) animais com hiperplasia reativa, 13 (35,1%) com NIPan e 14 (37,8%) com adenocarcinoma. A diferença entre os grupos apresentou significância estatistística (P < 0,05 – teste exato de Fisher). A prevalência de alterações inflamatórias em 30 dias foi: pancreatite aguda (n=11), pancreatite crônica (n=5) e inflamação dependente da bolsa (n=8). No grupo de 60 dias 11 espécimes apresentavam pancreatite aguda e 26 pancreatite crônica. CONCLUSÕES: O modelo experimental com DMBA em camundongos, induz neoplasia intra-epitelial pancreática e adenocarcinoma ductal histologicamente semelhantes ao carcinoma pancreático em humanos. Este modelo pode ser utilizado na investigação da carcinogênese com enfoque na progressão molecular das lesões precursoras até o adenocarcinoma. / BACKGROUND: Pancreatic adenocarcinoma has a dismal long-term prognosis. Experimental models are necessary to understand its biological behavior mainly the early pancreatic lesions termed pancreatic intraepithelial neoplasia (PanIN) and to develop new treatments. OBJECTIVE: The aim of this study is to evaluate pancreatic carcinogenesis induced by DMBA implantation in mice according to PanIN classification system. METHODS: 90 male, mus musculus, CF1 mice were submitted to a median laparotomy and 1 mg of DMBA was implanted in the head of the pancreas holded with a purse-string suture. Euthanasia was done after 30 and 60 days. After, the excised pancreata were fixed in formalin, embedded in paraffin and stained with haematoxylin and eosin for histology. The specimens were evaluated by two pathologists according to the following criteria: normal ducts, reactive hyperplasia, PanIN 1A, PanIN 1B, PanIN 2, PanIN 3 and carcinoma. The inflammatory changes were also analyzed. RESULTS: The pathologic evaluation showed for 30 days group 4 (16.7%) reactive hyperplasia, 16 (66.6%) PanIN and 4 (16.7%) adenocarcinomas. In the 60 days group there were 10 (27.1%) specimens with reactive hyperplasia, 13 (35.1%) with PanIN lesions and 14 (37.8%) with adenocarcinomas. The difference between groups was statistically significant (P < 0,05; Fisher exact test). The prevalence of inflammatory changes in 30 days groups were: acute pancreatitis (n=11), chronic pancreatitis (n=5) and DMBA pocket dependent (n=8). In the 60 days groups, 11 had acute pancreatitis and 26 had chronic pancreatitis. CONCLUSIONS: DMBA experimental model in mice induces characteristic pancreatic intraepithelial neoplasia and ductal adenocarcinoma histologically similar to human pancreatic cancer. This model is useful for the study of pancreatic carcinogenesis emphasizing the molecular progression of early pancreatic lesions.

Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-12T14:30:00Z No. of bitstreams: 2 TESE Eryvelton de Souza Franco.pdf: 3532725 bytes, checksum: c93ccfb86752dddc797669a008066c87 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-12T14:30:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 TESE Eryvelton de Souza Franco.pdf: 3532725 bytes, checksum: c93ccfb86752dddc797669a008066c87 (MD5) license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Previous issue date: 2014 / Chresta martii (Asteraceae) espécie encontrada na região do Xingó (semiárido do nordeste brasileiro), utilizada localmente no tratamento de disfunções gástricas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a toxicidade aguda e genotóxicidade (in vivo), a citotóxicidade (in vitro) e atividade gastroprotetora de extratos e de frações semipurificas de Chresta martii e identificar seu composto majoritário. Três extratos orgânicos foram obtidos a partir das partes aéreas secas de C. martii utilizando como solvente (ciclohexano - ECCm, acetato de etila - EACm e etanol - EECm); o EACm foi fracionado em coluna de sílica gel 60 eluido com clorofórmio [F1; rendimento (10%)], clorofórmio/ acetato de etila (1/1); [F2; rendimento 6%)], acetato de etila [F3; rendimento (8%)] e acetato de etila/metanol (1/1) [F4; rendimento (5%)]. A caracterização fitoquímica dos extratos foi determinada por HPLC, enquanto as frações semipurificadas foram avaliadas por CCD e os compostos isolados oriundos do refracionamento foram identificados por Espectroscopia de Ressonância Nuclear Magnética 1H-RMN e 13C-RMN. Os extratos foram avaliados quanto a toxicidade aguda em camundongos Swiss webster (CSW) (2000 – 50 mg/kg; i.p. ou v.o.), citotoxicidade in vitro (50 μg/mL) frente à linhagens de células cancerígena (HL-60, NCI-H292 e MCF-7) humana e genotoxicidade em CSW (50 mg/kg; i.p.), através da técnica de micronúcleo em células de medula óssea. Os três extratos foram avaliados quanto a atividade gastroprotetora (50, 100 ou 200 mg/kg; v.o.) frente a lesões gástricas induzidas por indometacina (40 mg/kg, s.c.) ou etanol (0,2 mL/animal; v.o.) em CSW machos (25–30 g). As frações semipurificadas F1, F2, F3, F4 (50 mg/kg; v.o.) ou F1 (12,5, 25 ou 50 mg/kg; v.o.) foram avaliadas quanto a gastroproteção frente ao modelo de úlcera induzida por etanol. Os grupos controles positivos foram tratados com ranitidina (80 mg/kg, v.o.) ou omeprazol (30 mg/kg; v.o.) ou salina 0,9% (5 mL/kg; v.o.) controle negativo. O ECCm (2000 mg/kg; v.o. ou i.p.) não apresentou nenhum indício de toxicidade aguda ou registro de óbito. A DL50 estimada para (EACm e EECm) foi de 500 mg/kg; v.o. e 200 mg/kg; i.p.. O EACm (50 μg/mL) inibiu o crescimento das células tumorais HL60 (96,54% ± 0,22%), NCIH292 (73,43% ± 1,07%) e MCF-7 (15% ± 3,59%). A fração F1 foi capaz de induzir a formação de micronúcleo nos eritrócitos policromáticos (66,67% ± 4,32%) de CSW. Dentre os extratos avaliados, o EACm exibiu significante (p<0.05) atividade gastroprotetora nos modelos utilizados. A F1 (25 mg/kg; v.o.) revelou atividade gastroprotetora superior (p<0.05) aquela exibida pela ranitidina (80 mg/kg; v.o.) no modelo de úlcera induzida por etanol. O refracionamento da F1 originou 23 subfrações e dessas foram obtidos, por recristalização, dois compostos de cor amarela, amorfo, Rf: 0,46 e 0,31 (acetato de etila: clorofórmio 5:5). Os composto isolados foram identificados como flavonas: Chrisoeriol (rendimento – 0,43%) e o 3’,4’-Dimetoxiluteolina (rendimento – 0,58%). Os extratos (EACm e EECm) e a fração (F1) de Chresta martii apresentaram potencial citotóxico (in vitro) e genotóxico (in vivo), além de exibir toxicidade aguda classificada como de leve a moderada. A identifição do composto majoritário (3’,4’-Dimetoxiluteolina) presente na Chresta martii fornece provável suporte racional para a propalada utilização da espécie no tratamento de distúrbios gastrointestinal, conforme informações etnofarmacológica e experimentais em camundongos.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-06T14:27:11Z No. of bitstreams: 1 Thiago Augusto Pereira de Moraes.pdf: 3389646 bytes, checksum: 73f2adc7c0ff85b24e1d8fd67ee82fd7 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T14:29:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Thiago Augusto Pereira de Moraes.pdf: 3389646 bytes, checksum: 73f2adc7c0ff85b24e1d8fd67ee82fd7 (MD5) Previous issue date: 2013-06-06 / Cytotoxicity of 10 Amino-naphthoquinone (ANQ) was evaluated in cell lines MDA-MB-435 (melanoma), SF-295 (brain) and HCT-8 (colon), all human strains. Among the amino-naphthoquinones tested, five (2a, 9a, 6a, 5a and 7a) have cytotoxicity in cell lines tested. Among these, the sample was the seventh most active, showing IC50 values of 1.84 mg / mL for HCT-8, 1:33 / mL for MDA-MB-435 and 1.80 g / ml in strain SF-295. The same compound produced inhibition of cellular 99.51%, 100.11% and 99.50% for HCT-8, MDA-MB-435 and SF-295, respectively. In the following experiment aimed to determine the toxic effects and the safety threshold of synthetic amino-naphthoquinone ETHYL 2 - (1,4-dioxo-1,4-DIHYDRONAPHTHALEN-2-ylamino) ACETATE, administered in a single dose and different concentrations. For this purpose twenty-four mice (Mus musculus, Swiss albinos) males were divided according to dosage: Group I (treated with the 100μg/Kg aminoquinone (n = 6)), Group II (treated with 200μg/Kg of aminoquinona (n = 6)), Group III (300μg/Kg of aminoquinone treated (n = 6)), Group IV (treated with 600μg/Kg of aminoquinona (n = 6)). The animals were food fasted 6 hours and then treated intraperitoneally with the amino-naphthoquinone according to the prescribed dose. After administration of the doses experimental animals were evaluated for 180 minutes uninterrupted, and then every 24 hours in order to characterize the behavior of the animals through clinical signs for 72 hours. After toxicological evaluation of aminoquinona ETHYL 2 - (1,4-dioxo-1,4-DIHYDRONAPHTHALEN-2-ylamino) ACETATE through analysis of spontaneous activity was found depressing effect on the CNS in a dose-response relationship directly. The calculation of the LD50 test substance showed low levels of toxicity at doses less than 244.1125 ± 23.2883 mg.Kg-1. In subsequent experiments, eighteen mice with solid Ehrlich carcinoma were divided into control group (n = 6) and treated with methotrexate (n = 6; 71.7mg.kg-1) and treated with ethyl 2 - (1,4-dioxo-1,4-dihidronaphthalen-2-ylamino) acetate (n = 6; 20mg.kg-1). Four days after the cells of Ehrlich ascites tumor were implanted subcutaneously and the mice receiving methotrexate amino-naphthoquinone in a single dose. On the 8th day, methotrexate and amino-naphthoquinone 67% inhibited tumor growth by 58% and 67%, respectively compared to the control group. No substantial change in the biochemical and histopathologic findings were observed in the liver and kidneys of animals treated with amino-naphthoquinone. The amino-naphthoquinone ethyl 2 - (1,4-dioxo-1 ,4-dihidronaphthalen-2-ylamino) acetate can be considered a promising drug in cancer therapy. However, future studies should be performed to determine the mechanism of action of this substance. / A citotoxicidade de 10 Amino-naftoquinonas (ANQ) foi avaliada nas linhagens celulares MDA-MB-435 (melanoma), SF-295 (cérebro) e HCT-8 (cólon), todas linhagens humanas. Dentre as amino-naftoquinonas testadas, cinco (2a, 9a, 6a, 5a e 7a) tiveram citotoxicidade nas linhagens celulares testadas. Dentre estas, a amostra 7a foi a mais ativa, evidenciando valores de IC50 de 1.84 μg/mL para HCT-8, 1.33 μg/mL para MDA-MB-435 e 1.80 μg/mL na linhagem SF-295. O mesmo composto produziu inibição celular de 99.51 %, 100 % e 99.50 % para HCT-8, MDA-MB-435 e SF-295, respectivamente. No experimento seguinte objetivou-se determinar os efeitos tóxicos e o limiar de segurança da amino-naftoquinona sintética ETHYL 2-(1,4-DIOXO-1,4-DIHYDRONAPHTHALEN-2-YLAMINO) ACETATE, administrada em dose única e diferentes concentrações. Com este propósito, 24 camundongos (Mus musculus, albinus Swiss) machos foram divididos de acordo com a dosagem: Grupo I (tratados com 100μg/Kg da aminoquinona (n = 6)); Grupo II (tratados com 200μg/Kg de aminoquinona (n = 6)); Grupo III (tratados com 300μg/Kg de aminoquinona (n = 6)); Grupo IV (tratados com 600μg/Kg de aminoquinona (n = 6)). Os animais foram mantidos em jejum alimentar de 6 horas e posteriormente tratados por via intraperitoneal com a amino-naftoquinona, de acordo com as doses estipuladas. Após administração das doses experimentais, os animais foram avaliados por 180 minutos ininterruptos, e posteriormente a cada 24 horas, afim de caracterizar o comportamento dos animais através dos sinais clínicos por 72 horas. Após avaliação toxicológica da aminoquinona ETHYL 2-(1,4-DIOXO-1,4-DIHYDRONAPHTHALEN-2-YLAMINO) ACETATE através da análise de atividade espontânea constatou-se efeito depressor sobre o SNC numa relação dose-resposta direta. O cálculo da DL50 para substância teste demonstrou baixos níveis de toxicidade em dosagens inferiores a 244,1125 ± 23,2883 mg.Kg-1. No experimento subsequente, 18 camundongos com carcinoma sólidos de Ehrlich foram divididos em grupo controle (n=6); tratado com metotrexato (n=6; 71.7mg.kg-1) e tratado com ethyl 2-(1,4-dioxo-1,4-dihidronaphthalen-2-ylamino) acetate (n=6; 20mg.kg-1). Quatro dias após as células do tumor ascítico de Erlich serem implantadas subcutaneamente os camundongos receberam metotrexato e a amino-naftoquinona em dose unica. No 8º dia, o metotrexato e a amino-naftoquinona inibiram 67% o crescimento do tumor em 58% e 67%, respectivamente em relação ao grupo controle. Nenhuma mudança substancial de parâmetros bioquímicos e achados histopatológicos foi observada no fígado e nos rins dos animais tratados com amino-naftoquinona. A amino-naftoquinona ethyl 2-(1,4-dioxo-1,4-dihidronaphthalen-2-ylamino) acetato pode ser considerada uma droga promissora na terapia contra o câncer. Contudo, estudos futuros devem ser realizados na determinação do mecanismo de ação desta substancia.

Submitted by MARCOS LEANDRO TEIXEIRA DE OLIVEIRA (marcosteixeira@ufv.br) on 2018-10-08T12:38:35Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1787653 bytes, checksum: d47fa7116143fe4f93ee855509e5e86a (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-08T12:38:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1787653 bytes, checksum: d47fa7116143fe4f93ee855509e5e86a (MD5) Previous issue date: 2018-08-27 / O objetivo do presente estudo foi investigar os efeitos do exercício aeróbico continuo de intensidade moderada (EACM) sobre as propriedades mecanicas e funcionais de cardiomiócitos de camundongos knockout (KO) para receptores para os receptores β2 -adrenérgicos. Camundongos FVB/N e KO com 4 meses de idade foram inicialmente separados aleatoriamente em 4 grupos: selvagem controle (FVBc; n = 11), selvagem treinado (FVBt; n = 11), KO β2 controle (KO 2 c; n = 12) e KO treinado (KO 2 t; n = 12). Os animais dos grupos treinados (FVBt e KO 2 t) foram submetidos a um protocolo de treinamento aeróbico de 8 semanas, 5 dias por semana, 1 hora por dia, com intensidade de 60% da velocidade máxima de corrida. Após a eutanásia, os cardiomiócitos do ventriculo esquerdo foram isolados por dispersão enzimática. A função cardíaca, os parametros contráteis e o transiente de [Ca 2+ ] i dos cardiomiócitos do ventrículo esquerdo foram mensurados. P ≤ 0,05 foi considerado significativo em todas as comparações. Os resultados mostram que o EACM aumentou a capacidade de corrida em camundongos KO e FVB, embora a fração de encurtamento e a fração de ejeção não tenha sido alterada em camundongos KO 2 . Camundongos KO 2 t também apresentaram menor amplitude de contração, menor tempo para o pico de contração e menor tempo para 50% de relaxamento do que os camundongos FVBt. Além disso, camundongos KO 2 t apresentaram menor amplitude Ca 2+ e menor tempo para 50% de decaimento comparado com camundongos FVBt. Em conclusão, o EACM reduziu a amplitude de contração, o tempo para pico de contração e a aplitude do Ca 2+ nos cardiomiócitos de camundongos KO 2 / The aim of this study was to investigate the effects of Moderate Continuous Aerobic Exercise (MCAE) on the mechanical and functional properties in cardiomyocytes from β adrenergic receptor knockout mice (KO). Four-month-old FVB/N and KO mice were initially randomly divided into 4 groups: control wild (FVBc; n= 11), trained wild (FVBt; n= 11), control KO (KO 2 c; n= 12) e trained KO 2 t) 2 (KO 2 t; n= 12). The animals of the trained groups (FVBt, KO were submitted to a protocol of aerobic training 8 weeks, 5 days/week, 1 hour/day, intensity of 60% of maximal speed. At sacrifice, the heart was removed and left ventricular myocytes were enzymatically dispersed. Cardiac function, contractile parameters, and [Ca 2+ ] i transient of left ventricular cardiomyocytes were measured. P ≤ 0.05 was considered significant in all comparisons. The results showed that the MCAE increased the running capacity in KO FVB mice, although the shortening fraction and the ejection fraction were not altered in 2 e KO mice. KO 2 t mice also showed lower contraction amplitude and shorter times to peak and to 50% relaxation than FVBt mice. In addition, KO 2 t mice showed lower Ca 2+ transient amplitude and shorter time to 50% decay of the Ca 2+ transient than WT mice. In conclusion, MCAE reduced the contraction amplitude, time to peak and Ca 2+ transient amplitude in cardiomyocytes from KO mice.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Obesity is characterized by excessive accumulation of fat in the body. The anatomical location of the tissue, more specifically its abdominal (visceral) distribution, plays a major role in the development of insulin resistance, which acts as a key point linking obesity to the development of several other chronicle diseases. Thus, research on new therapies that may positively affect the development and treatment of obesity and its co morbidities are needed. This study aimed at investigating the potential of aqueous extract of Chrysobalanus icaco leaves (EACI) on the loss of weight and adipose tissue, and assessing its effects on insulin sensitivity in obese mice. Therefore, we used 34 Swiss mice divided into four groups which received a standard diet (SD), standard diet plus EACI (DPE), high-fat diet (HFD) and high-fat diet plus EACI (DHE), which was mixed to the drinking water of animals during the last 4 weeks of a total of 14weeks in which they received their diets. At the end of the experiment consumption, body weight, weight of fat pads, blood glucose, serum lipids, insulin sensitivity and glucose tolerance were evaluated. The results showed that the HC group had significant higher body mass (p < 0,001), fat pads (p < 0,0001), feed efficiency (p < 0,0001) and blood glucose levels (p< 0,05), besides higher area under curve (p < 0,05) on the insulin tolerance test. After the 4th week of treatment, in the HAD group, the EACI promoted less weight gain (p < 0,05), blood glucose (p <0.05) and insulin sensitivity (p <0.05) normalization, despite the high-fat diet intake. Regarding the adipose tissue there was little effect caused by the extract and no effect on the serum lipids and glucose tolerance. Thus, the data indicates that a model of high-fat induced obesity associated with insulin resistance was validated and that the extract was capable of normalizing the blood glucose levels and insulin sensitivity and still prevented the weight gain in the obese animals. / A obesidade é caracterizada pelo acúmulo excessivo de tecido adiposo no organismo. A localização anatômica desse tecido, mais especificamente sua distribuição abdominal (visceral), tem papel primordial no desenvolvimento da resistência à insulina, que atua como um ponto chave ligando a obesidade ao desenvolvimento de diversas outras doenças crônico-degenerativas. Dessa forma, pesquisas acerca de novas terapêuticas que possam promover benefícios sobre o desenvolvimento e tratamento da obesidade e de suas comorbidades se fazem necessárias. Este estudo teve como propósito verificar o potencial do extrato aquoso das folhas do Chrysobalanus icaco (EACI) sobre a redução de peso e tecido adiposo, bem como avaliar seu efeito sobre a sensibilidade à insulina em camundongos obesos. Para tanto, foram utilizados 34 camundongos Swiss divididos em 4 grupos que receberam dieta padrão (DP), dieta padrão e EACI (DPE), dieta hiperlipídica (DH) e dieta hiperlipídica associada ao EACI (DHE), o qual foi colocado na água de beber dos animais durante as 4 últimas semanas de um período total de 14 semanas em que eles receberam as respectivas dietas. Ao final do experimento foram avaliados consumo, peso corporal, peso dos coxins adiposos, glicemia, lipídios séricos, sensibilidade à insulina e tolerância à glicose. Os resultados obtidos mostram que o grupo DH apresentou aumento significativo de massa corpórea (p < 0,001), dos coxins adiposos (P < 0 0001), da eficiência energética (p < 0,0001) e da glicemia (p < 0,05), além de maior área sob a curva obtido no teste de tolerância à insulina (p < 0,05). Após tratamento por 4 semanas, no grupo DHE, o EACI possibilitou menor ganho de peso (p < 0,05), normalização da glicemia (p < 0,05) e da sensibilidade à insulina (p < 0,05), apesar do consumo de dieta hiperlipídica. Com relação ao tecido adiposo houve pouca influência do extrato e nenhum efeito sobre os lipídios séricos e tolerância à glicose. Dessa forma, os dados indicam que foi validado um modelo de obesidade induzido por dieta hiperlipídica associado à resistência insulínica e que o extrato foi capaz de normalizar a glicemia, sensibilidade à insulina e ainda promover menor ganho de peso nos animais obesos.

Submitted by Fabio Sobreira Campos da Costa (fabio.sobreira@ufpe.br) on 2016-07-28T13:34:21Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - Gabriela Calixto - Versão digital.pdf: 1903341 bytes, checksum: 0172917edb1a1f8a1512d8519caed260 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-28T13:34:21Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - Gabriela Calixto - Versão digital.pdf: 1903341 bytes, checksum: 0172917edb1a1f8a1512d8519caed260 (MD5) Previous issue date: 2016-02-26 / CNPq / Infecções maternas por Schistosoma mansoni modulam a imunidade de descendentes adultos em infecções pós-natais. Avaliou-se separadamente o efeito da amamentação ou gestação neste fenômeno através do grau de fibrose hepática, produção de citocinas Th1, Th2 e regulatórias, frequência de macrófagos produtores de NO e IL-10 e linfócitos T regulatórios em camundongos adultos, descendentes de mães esquistossomóticas, quando submetidos a infecção pós-natal. Para isto, fêmeas Swiss webster foram submetidas a infecção com S. mansoni (20 cercárias), sincronização do estro e acasalamento. Após nascimento, foi realizada a amamentação adotiva, em que descendentes de mães infectadas mamaram nas mães não infectadas (MI) e filhotes de mães não infectadas foram amamentados pelas mães infectadas (AI). Outro grupo de animais nascidos de mães esquistossomóticas permaneceu amamentando nas próprias mães (MIAI). Para grupo CONTROLE utilizou-se animais nascidos e amamentados em mães não infectadas. Descendentes adultos (machos) foram infectados (80 cercárias) e 60 dias pós-infecção, os animais tiveram os esplenócitos cultivados apenas com meio de cultura ou acrescentado de SWAP (12,5 μg/mL) ou ConA (5 μg/ml). Após 24 h e 72 h os sobrenadantes foram dosados para IL-4; IL-5; IL-10; IFN-γ, TGF-β; NO e as células usadas para imunofenotipagem, com anticorpos monoclonais ligados a fluorocromos para CD4+FoxP3, CD16/CD32+NOS2, CD14+IL-10+. O tecido hepático dos animais foi submetido a histomorfometria. Em relação ao Controle, o grupo MI apresentou frequênciaaumentada de CD16/CD32+NOS2+, maior produção de NO, IL-5 e IL-10, com diminuição de IFN- e, em comparação ao grupo MIAI, maior número e tamanho dos granulomas. O grupo AI, em relação ao Controle, obteve maior frequência de CD16/CD32+NOS2+, maiores níveis de TGF-β, menos IL-5, NO e IFN-. Em relação ao MIAI, tamanho maior de granuloma. O grupo MIAI apresentou menor número e tamanho de granulomas com menor produção de IFN- e NO, maior de IL-10 e TGF-β, além de maior frequência de células CD4+/FoxP3+. Não houve diferença nos níveis de células CD14+/IL-10+. Em conclusão, a gestação seguida da amamentação em mães esquistossomóticas proporcionou uma diminuição da reação granulomatosa e, além da produção da IL-10 (dependente da gestação) e de TGF-β (dependente da amamentação), as células T com fenótipo regulatório são requeridas para este fenômeno. / Maternal infections by Schistosoma mansoni modulate adult offspring immunity in postnatal infections. Here, was evaluated separately the effect of breastfeeding and pregnancy in this phenomenon by the degree of hepatic fibrosis, the production of Th1, Th2 and regulatory cytokines, the expression of macrophages producing NO and IL-10, and regulatory T lymphocytes in adult offspring from schistosomotic mothers when subjected to post-natal infection.Swiss webster females were subjected to infection with S. mansoni (20 cercariae), synchronization of estrus and mating. After birth, adoptive breastfeeding was held in which offspring of infected mothers breastfed in uninfected mothers (BIM) and offspring of uninfected mothers were breastfed by infected mothers (SIM). Another group of animals born in schistosomotic mothers breastfeeding remained in their mothers (BSIM). To control group was used animals born and breastfed in uninfected mothers. Male offsprings were infected when adults (80 cercariae) and 60 days post-infection animals splenocytes were cultured with medium alone or added with SWAP (12.5 μg/ml) and ConA (5 μg/ml). After 24 h and 72 h the supernatants were assayed for IL-4; IL-5; IL-10; INF-γ; TGF-β; NO and the cells used for immunophenotyping with monoclonal antibodies bound to fluorochromes for CD4+FoxP3+, CD16/CD32+NOS2+, CD14+IL-10+. The liver tissue were subjected to histomorphometry. Compared to control, the BIM group showed increased frequency of CD16/CD32+NOS2+, increased production of NO, IL-5 and IL-10, a reduction of IFN- and compared to BSIM group, the greater number and size of granulomas. The SIM group compared control, had a higher frequency of CD16/CD32+NOS2+, higher TGF-β levels, less IL-5, NO and IFN-. Regarding BSIM, greater granuloma size. The BSIM group showed smaller number and size of granulomas with lower production of IFN- and NO, increased IL-10 and TGF-β, as well as higher frequency of CD4+/FoxP3+ cells. There was no difference in the levels of CD14+/IL-10+ cells. In conclusion, gestation followed by breastfeeding in schistosomotic mothers provided a reduction in granulomatous reaction, and besides the production of IL-10 (dependent on gestation) and TGF-β (dependent breast feeding) T cells with regulatory phenotype are required to this phenomenon.

Orientador: Elaine Minatel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T07:43:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pinto_RafaeldeSenziMoraes_M.pdf: 2983578 bytes, checksum: b55e02c59ba61404fd155a3c6e731521 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: Estudos recentes demonstram o envolvimento do estresse oxidativo nas distrofinopatias. Neste trabalho, verificamos se o uso do antioxidante N-acetilcisteína (NAC) no período que antecede a mionecrose diminui a degeneração muscular em camundongos mdx, modelo experimental da distrofia muscular de Duchenne. Quinze camundongos mdx com 14 dias de vida receberam por via intraperitoneal 150mg/kg de NAC diluído em salina por 14 dias. Quinze camundongos mdx receberam salina pela mesma via e período. Os músculos tibial anterior (TA), esternomastóide (STN) e diafragma (DIA) foram utilizados para quantificar (1) fibras em degeneração muscular (fibras positivas ao azul de Evans), (2) fibras regeneradas (fibras com núcleo central), (3) áreas de Inflamação/Regeneração e Regeneração, (4) conteúdo de fator de necrose tumoral-alfa (TNF-?) e do 4-hidroxinonenal (4-HNE), através da técnica de immunoblotting. Amostras de sangue foram utilizadas para quantificar o conteúdo da enzima creatina quinase (CK). NAC promoveu diminuição significativa na porcentagem de fibras em degeneração (marcadas pelo azul de Evans) em todos os músculos analisados, redução significativa de fibras com núcleo central no músculo TA e diminuição significativa na área de Inflamação/Regeneração nos músculos STN e DIA (p<0,05; Teste t de Student). Na análise por immunoblotting, observamos diminuição significativa do TNF-? no músculo DIA e do 4-HNE nos músculos STN e DIA dos camundongos mdx tratados com NAC (p<0,05; Teste t de Student). Diminuição significativa dos níveis de CK foi observada nos animais tratados com NAC (p<0,05; Teste t de Student). Em conjunto, estes resultados demonstram que o antioxidante NAC possa ser potencialmente útil para o tratamento farmacológico da distrofia muscular / Abstract: Recent studies strongly support the involvement of oxidative stress in dystrophinopathies. In the present study, we verified whether N-acetylcysteine (NAC) treatment before the cycles of muscle degeneration-regeneration decreases muscular degeneration in mdx mice. Mdx mice at 14 days of age received intraperitoneal injection of NAC (150mg/kg diluted with saline) daily, for 14 days. Control mdx mice received saline by the same via and for the same period of time. The tibialis anterior (TA), sternomastoid (STN) and diaphragm (DIA) muscles were used for the quantification of (1) necrotic fibers (labeled with Evans blue dye), (2) regenerated fibers with central nuclei, (3) inflammation/regeneration area, (4) tumor necrosis factor-alpha (TNF-?) and 4-hydroxynonenal (4-HNE) levels (immunoblotting analysis). The blood of these animals was drawn to evaluate serum CK activity by spectrophotometry. NAC-treated muscle showed a significant decrease in the percentage of Evans blue dye-positive fibers (p<0,05; Student's t Test). The number of fibers with central nuclei decreased in the TA muscle (p<0,05; Student's t Test). The area of inflammation-regeneration decreased in the STN and DIA muscles in the NAC treated group. Immunoblots showed a significant decrease in the levels of TNF-? levels in DIA muscle and of 4-HNE levels in STN e DIA muscles in NAC-treated mice (p<0.05; Student's ttest). NAC significantly decreased the blood levels of creatine kinase in NAC-treated mice (p<0.05; Student's t-test). These results suggest that antioxidants such as NAC could have therapeutic potential for dystrophinopathies / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Humberto Santo Neto / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-16T20:39:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Boni_RobsonAparecidodosSantos_M.pdf: 2053465 bytes, checksum: ae91ac2421ee67ae72964df4c510de03 (MD5) Previous issue date: 2010 / Resumo: A distrofina é uma proteína de membrana ligada ao citoesqueleto da matriz extracelular das fibras musculares (esqueléticas e cardíacas) e nervosas. Enquanto que o papel da distrofina e os efeitos de sua ausência são bem conhecidos nos camundongos mdx (modelo animal da distrofia muscular de Duchenne), sabe-se pouco sobre sua função em nervos periféricos. A distrofina parece ser importante para o crescimento axonal, no sistema trigeminal a sua falta leva a defasciculação do sistema olfatório de camundongos. Em casos de ausência de distrofina a eliminação sináptica ocorre precocemente à expressão de moléculas pré-sinapticas é reduzida e a habilidade das células de Schwann terminais de guiarem as fibras para reinervação muscular fica comprometida. Estes achados sugerem que a distrofina possui papel essencial na regeneração nervosa periférica. Para testar esta hipótese nós examinamos a regeneração nervosa em camundongos mdx. Foram utilizados camundongos adultos machos da linhagem mdx e camundongos da linhagem C57BL/10 como controle, eles foram anestesiados com mistura de cloridrato de cetamina e cloridrato de xilazina. O nervo isquiático direito foi exposto e esmagado com uso de uma pinça fina sem ranhuras. Após o evento cirúrgico e cessado o efeito do anestésico os animais foram acondicionados em gaiolas e submetidos a regime hídrico e alimentar "ad libitum" com ciclo fotoperiódico claro/escuro de 12 horas. Destes, um grupo foi tratado com injeções intraperitoneais de L-arginina (6mg/kg) diluído em água bidestilada. Seis e 21 dias após o esmagamento os animais foram anestesiados e perfundidos por via intracardíaca com solução de Karnovsky. O nervo isquiático foi removido e imerso em fixador por 24 horas e pós-fixado em tetróxido de ósmio 1% por 2 horas. Posteriormente foram inclusos em blocos e feitos cortes semifinos que foram corados com azul de toluidina 0,5%. As secções foram analisadas em fotomicroscópio NIKON ECLIPSE E-400 (NIKON, Inc.). A densidade dos axônios com mielina (6dias) e axônios em regeneração (21 dias) foram contados. Nossos resultados demonstraram que a densidade de axônios com mielina foi significantemente maior no mdx em comparação ao C57BL/10 (312±10,2/mm2 versus 213,8±4,6/mm2). A densidade de macrófagos e células de Schwann com restos de mielina foram respectivamente 77,6±5,6/mm2 e 148±2,4/mm2. Após 21 dias, todos os parâmetros (diâmetro do axônio, espessura da bainha de mielina e número de axônios regenerados) foram significantemente menores nos camundongos mdx. Nos camundongos tratados com L-arginina os parâmetros foram semelhantes ao controle não havendo diferença estatística. Os resultados mostraram que o papel da distrofina e do óxido nítrico são de fundamental importância na regeneração nervosa periférica. / Abstract: Dystrophin is a membrane protein that links the cytoskeleton to the extracellular matrix in skeletal and cardiac muscle fibers and in the nervous system. While the role of dystrophin is well established and the effects of dystrophin loss, as it occurs in the mdx mice model of Duchenne muscular dystrophy, have been widely examined in muscle fibers, less is known about dystrophin function in peripheral nerves. It seems to be important for axonal outgrowth in the trigeminal system and the lack of dystrophin leads to nerve defasciculation in the mouse olfactory system. In the absence of dystrophin, synapse elimination occurs earlier, expression of presynaptic molecules is reduced and the ability of terminal Schwann cells to guide reinnervation of muscle fibers is impaired. These findings suggest a potential role of dystrophin in the regeneration of peripheral nerves. To test this hypothesis we examined nerve regeneration in mdx mice. Adult male mdx and control C57Bl/10 mice were anesthetized with a mixture of ketamine hydrochloride and thyazine hydrochloride. Right sciatic nerve was exposed at mid thigh and crushed with a fine forceps. The wound was closed and mice were kept with food and water ad libitum in a light-dark cycle of 12hs. One group was treated with L-arginine (6mg/kg) in drinking water. Six and 21 days after nerve crush mice were anesthetized and perfused intracardiacally with Karnovsky solution. Sciatic nerves were excised and fragments were immersed in the same fixative for 24 hours and post-fixed in 1% osmium tetroxide for 2 hours. They were conventionally processed for electron microscopy. Transverse semithin sections were stained with 0.5% toluidine blue. Sections were viewed under a Nikon Eclipse E-400 (Nikon, Inc.) microscope. The density of axons with myelin breakdown, of Schwann cells/macrophages filled with myelin debris (6 days) and of myelinated regenerating axons (3 weeks) were directly counted. Our results demonstrated that the density of axons displaying myelin breakdown was significantly higher in mdx than in crushed C57Bl/10 (312±10,2/mm2 versus 213,8±4,6/mm2) the density of macrophages and Schwann cells with myelin debris were respectively 77,6±5,6/mm2 and 148±2,4/mm2. After 21 days, all parameters (axonal diameter, myelin sheath thickness, number of regenerating axons) were significantly lower in mdx mice. When mdx was treated with L-arginine such parameters were not significantly different from control. These results demonstrated that dystrophin plays a role on nerve regeneration and that nitric oxide may be an important factor in that. / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Elaine Minatel / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-13T07:56:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tonon_Erika_M.pdf: 1677236 bytes, checksum: e065259ff1028e91f63695538acbe0e8 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: A peroxidação lípidica causada pelo aumento de espécies reativas de oxigênio (EROs) no período que antecede o início da degeneração muscular no camundongo mdx, sugere que o estresse oxidativo pode ser um dos mecanismos primários da degeneração muscular distrófica, ao invés de ser um efeito secundário deste processo. No presente trabalho verificamos se o tratamento com ácido ascórbico antes que se iniciem os ciclos de degeneração/regeneração diminui a degeneração muscular em camundongos mdx. Camundongos mdx com 14 dias de vida pós-natal receberam por gavagem doses diárias de 0,1mg/kg de Ácido Ascórbico diluído em água por 7 (grupo mdx T7) e 14 dias (grupo mdx T14) e/ou dose de 200mg/kg por 14 dias (grupo mdx T14AA). Animais mdx controle receberam solução salina. Após este período, os músculos tibial anterior (TA), esternomastóide (STN) e diafragma (DIA) foram retirados. Na análise histológica, o ácido ascórbico diminuiu a degeneração muscular nos músculos TA do grupo mdx T7 e no DIA do grupo mdx T14AA (P<0,05, Student's t Test) quando comparados ao controle. Não houve diferença significativa nos níveis séricos de creatina quinase entre os grupos analisados (P>0,05, Student's t Test). Aumento significativo no conteúdo de TNF-", pela técnica de Western Blotting, foi observado nos músculos dos camundongos mdx tratados com ácido ascórbico. Os resultados indicam que o tratamento precoce de camundongos mdx com o ácido ascórbico diminuiu significativamente a mionecrose nos músculos tibial anterior e diafragma. O presente trabalho também sugere que o aumento do TNF-" não está necessariamente correlacionado ao aumento da mionecrose. / Abstract: Increased production of reactive oxygen species (ROS) can cause lipid peroxidation in the period preceding muscle necrosis in the mdx mice. This suggests that ROS may be involved as a primary, rather than secondary, cause of degeneration. In the present study, we verified whether ascorbic acid treatment before the cycles of muscle degeneration-regeneration decreases muscular degeneration in mdx mice. Mdx mice at 14 days of age received 0.1mg/kg of acid ascorbic daily in the water for 7 (group mdx T7) or 14 days (group mdx T14) and/or 200mg/kg for 14 days (group mdx T14AA). Control mdx mice received saline. After this period the tibialis anterior (TA), sternomastoid (STN) and diaphragm (DIA) muscles were removed. Hislogical analysis showed that ascorbic acid significantly decreased muscle degeneration in the TA of mdx T7 group and in the DIA of mdx T14AA group (P<0,05, Student's t Test) compared to control. There were no changes in serum CK activity in the ascorbic acid-treated mice compared to control (P>0,05, Student's t Test). Immunoblots showed a significant increase in the content of TNF-" in the muscles of the treated mdx mice. The present results indicate that ascorbic acid treatment before the cycles of muscle fiber degeneration-regeneration significantly decreases myonecrosis in TA and DIA dystrophic muscles. The present findings also sugest that increase TNF-" not necessarily correlates with increased myonecrosis. / Mestrado / Anatomia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Anibal Eugenio Vercesi, Helena Coutinho Franco Oliveira / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-08T02:32:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alberici_LucianeCarla_D.pdf: 5846392 bytes, checksum: a41c4e31bbe1d1fa3a670c7a9956806e (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Alterações no metabolismo energético mitocondrial promovidas por proteínas desacopladoras (UCPs) são frequentemente encontradas em desordens metabólicas. Recentemente demonstramos que camundongos hipertrigliceridêmicos (HTG) apresentam uma respiração mitocondrial de repouso elevada, não relacionada a UCPs. Neste trabalho, nós elucidamos o mecanismo responsável por esta elevação da respiração de repouso e demonstramos algumas conseqüências dessa resposta mitocondrial à hiperlipidemia no fígado e no metabolismo corporal total. Resultados: Mitocôndrias isoladas de fígados e de células mononucleares de baço de camundongos HTG apresentaram velocidades respiratórias elevadas comparadas aos camundongos controles. Mudanças no consumo de oxigênio em mitocôndrias de fígados de camundongos HTG foram sensíveis a ATP, diazóxido e ácido 5-hidroxidecanóico (5-HD) indicando que o consumo pode ser atribuído à atividade dos canais de K+ sensíveis a ATP (mitoKATP). Do mesmo modo, as mitocôndrias HTG apresentaram um maior inchamento na presença de íons K+, sensível aos agonistas e antagonistas do mitoKATP. Além disso, a ligação de glibenclamida marcada às mitocôndrias indica que os camundongos HTG expressaram maiores quantidades de receptores de sulfoniluréias, um componente os mitoKATP. Aumento da velocidade de metabolismo foi evidenciado por um aumento no consumo de oxigênio no fígado (sensível ao tratamento agudo in vivo pela administração de 5-HD), elevada temperatura retal e maior produção corporal de CO2 nesses camundongos. De acordo com a velocidade metabólica elevada, a ingestão alimentar foi significantemente maior em camundongos HTG, sem concomitante aumento de peso. Assim como verificado em camundongos HTG, mitocôndrias de fígados de animais submetidos à dietas ricas em substratos energéticos apresentaram também elevação da respiração mitocondrial de repouso. Conclusões: Esses resultados demonstram que a hiperlipidemia primária leva ao aumento da atividade dos mitoKATP em fígados, o que pode representar uma adaptação regulada para oxidar o excesso de ácidos graxos em camundongos HTG. Além disso, nossos resultados indicam que os mitoKATP, além das UCPs, podem estar envolvidos no controle do metabolismo energético e do peso corporal / Abstract: Changes in mitochondrial energy metabolism promoted by uncoupling proteins (UCPs) are often found in metabolic disorders. We have recently shown that hypertriglyceridemic (HTG) mice present higher mitochondrial resting respiration unrelated to UCPs. Here, we disclose the underlying mechanism and consequences, in tissue and whole body metabolism, of this mitochondrial response to hyperlipidemia. Results: As observed in HTG mice, liver mitochondria from animals submitted to the rich energy diets presented high resting respiration. Mitochondria isolated from the livers and spleen mononuclear cells of HTG mice presented enhanced respiratory rates compared to those from wild-type mice. Changes in oxygen consumption of liver mitochondria from HTG mice were sensitive to ATP, diazoxide and 5-hydroxydecanoate (5-HD), indicating they can be attributable to mitochondrial ATP-sensitive K+ channel (mitoKATP) activity. Indeed, mitochondria from HTG mice presented enhanced swelling in the presence of K+ ions, sensitive to mitoKATP agonists and antagonists. Furthermore, mitochondrial binding to fluorescent glibenclamide indicates that HTG mice expressed higher quantities of sulfonylurea receptors, a component of mitoKATP. An overall faster metabolic state was evidenced by increased liver oxygen consumption (sensitive to acute in vivo 5-HD administration), higher body CO2 release and temperature in these mice. In agreement with higher metabolic rates, food ingestion was significantly larger in HTG mice, without enhanced weight gain. Liver mitochondria isolated from rats fed glucose rich diet or from mice fed fat rich diet also presented higher resting respiration rates. Conclusions: These results demonstrate that primary hyperlipidemia leads to an elevation in liver mitoKATP activity, which may represent a regulated adaptation to oxidize excess fatty acids in HTG mice. Furthermore, our data indicate that mitoKATP, in addition to UCPs, may be involved in the control of energy metabolism and body weight / Doutorado / Ciencias Biomedicas / Doutor em Ciências Médicas