Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La hembra canina presenta un ciclo estral con ciertas características únicas si se compara con el de otras especies mamíferas. A lo largo del ciclo estral en la perra, se describe la secreción de hormona luteinizante (LH), la cual cumple variadas funciones en el ámbito reproductivo. Esta gonadotrofina ejerce su efecto a través de su receptor, LHR, el cual corresponde a una glicoproteína de transmembrana perteneciente a la superfamilia de receptores asociados a proteína G (GPCR) y que ha sido localizado en diversos tipos celulares, incluyendo el folículo ovárico; sin embargo, la dinámica de expresión de los receptores para LH durante el ciclo reproductivo no se había descrito en la perra. El objetivo de este trabajo fue estudiar a través de q-PCR la expresión génica (mRNA-LHR) de este receptor como también, mediante western blot, la proteína (LHR) en los folículos ováricos de perras a través del desarrollo folicular en las distintas etapas del ciclo estral mediante lupa estereoscópica, se aislaron en forma mecánica células de la teca y de la granulosa tanto de folículos preantrales como antrales provenientes de ovarios de perras en anestro, proestro/estro y diestro. Los resultados, analizados mediante ANOVA y correlación de Pearson, mostraron que 1os niveles de mRNA-LHR aumentaron a medida que el desarrollo folicular avanzó de anestro a proestro/estro y disminuyendo al pasar a diestro. En el caso de la proteína LHR se identificó una forma de 90 kDa como una de 67 kDa, sin una diferencia significativa entre el volumen de ambas en anestro, pero si presentes en algunos tamaños foliculares de proestro/estro y diestro. El análisis correlativo entre la expresión génica y la proteína presentaron valores positivos muy cercanos a 1 para la forma inmadura del receptor, mientras que, para la forma madura, si bien fueron igualmente positivos, estuvieron más alejados del valor mencionado. Tanto el mRNA del LHR como ambas formas proteicas fueron detectadas desde los folículos preantrales y a lo largo de todo el ciclo folicular. Las proteínas de LHR encontradas corresponderían a la forma madura e inmadura del receptor, siendo esta última la más abundante / The estrous cycle in canines has especial features compared to other mammal species. However, some of the aspects that affect follicular development are still unknown. The secretion of the Luteinizing Hormone (LH) has been described in dogs throughout the entire estrous cycle, playing an important role in reproduction processes. This gonadotrophin exerts its effects through its receptor, LHR, which corresponds to a transmembrane glycoprotein belonging to the G protein couple receptor (GPCR) superfamily that has been localized in many cellular types, including ovarian follicles. However, the expression dynamics of the LH receptors during the reproductive cycle had not been described in the bitch. The objective of this study was to know the gene expression (mRNA-LHR) and also the presence of its encoded protein LHR in the ovarian follicles throughout follicular development over the estrous cycle. Theca and granulosa cells from antral and preantral follicles of ovaries from adult bitches in anestrus, proestrous/estrous and diestrus where isolated mechanically under the stereoscope and evaluated by using q-PCR and western blot analyses. The results were analyzed through ANOVA and Pearson Correlation, using a significance of P < 0.05. Both mRNA LHR and LHR proteins were detected from preantral follicles over the reproductive cycle. During anestrous and proestrous/estrous the levels of the mRNA-LHR increased (P<0,05) but during diestrous the messenger levels decreased (P < 0,05). A 90 kDa and a67 kDa forms of the LHR protein were identified by western blot analyses, these would correspond to the mature and immature form of the receptor respectively. The immature form was the most abundant in all follicle types. The correlation between the gene expression and the presence of the protein was positive (P<0,05) for both mature and immature forms

Made available in DSpace on 2016-03-07T19:21:19Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-12-11. Added 1 bitstream(s) on 2016-03-07T19:25:30Z : No. of bitstreams: 1 000858939.pdf: 982272 bytes, checksum: fb39d575bd6ef650066d639f1b13b44c (MD5) / O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito da concentração de P4 sobre a abundância de RNAm do LHR e enzimas esteroidogênicas em células da granulosa de folículo dominante (FD) em novilhas Nelore. Hipotetizamos que a alta progesterona afetaria negativamente a expressão do LHR e enzimas esteroidogênicas proporcionando menor desenvolvimento folicular. Para tanto, 52 novilhas Nelore foram pré-sincronizadas (D-17: 2mg BE + dispositivo intravaginal de progesterona CIDR®; D-10: 12,5mg PGF2α Lutalyse®; D-8: 0,5 mg ECP® e retirada CIDR®). As novilhas que responderam à présincronização (presença de CL) foram submetidas à ablação folicular e colheita de sangue no D0 e aleatoriamente distribuídas em 6 grupos: G1: Alta P4-D5 (implante de CIDR1 (novo) no D0 e abatidas após 5 dias); G2: Baixa P4-D5 (implante de CIDR3 (previamente utilizado por 18 dias) no D0 e aplicação de 25mg PGF2α no D0 e no D1, abate no D5); G3: Alta P4-D6 (implante de CIDR1 e abatidas após 6 dias); G4: Baixa P4- D6 (implante de CIDR3 no D0 e aplicação de 25mg PGF2α no D0 e no D1, abate no D6); G5: Alta P4 + PE (proestro) (implante de CIDR1 no D0, retirada do CIDR, colheita de sangue e aplicação de 25mg PGF2α no D5 e abatidas no D6); G6: Baixa P4 + PE (implante de CIDR3 no D0 e aplicação de 25mg PGF2α no D0 e no D1, retirada do CIDR, colheita de sangue e aplicação de 25mg PGF2α no D5 e abatidas no D6). Os ovários foram retirados, o FD mensurado e dissecado para obtenção das células da granulosa. As concentrações plasmáticas e intrafoliculares de P4, E2 e IGF-1 livre foram mensuradas. As comparações do efeito da duração (G1 e G2 x G3 e G4), efeito do proestro (G3 e G4 x G5 e G6) e efeito da concentração de P4 e suas interações, sobre os níveis de ... / The aim of this study was to investigate the effect of P4 concentration on the abundance of LHR mRNA and steroidogenic enzymes in granulosa cells of the dominant follicle (DF) in Nellore heifers. High progesterone negatively affects the expression of LHR and steroidogenic enzymes, providing lower follicular development. 52 Nellore heifers were pre-synchronized (D-17: BE + 2 mg intravaginal device CIDR® progesterone; D-10: 12.5 mg PGF2a Lutalyse®; D-8: 0.5 mg ECP® and withdrawal CIDR®). Heifers who responded to the pre-synchronization (presence of CL) underwent follicular ablation and blood collection on D0 and randomly divided into 6 groups: G1: High P4-D5 (implant CIDR1 (new) on D0 and slaughtered after 5 days); G2: Low P4-D5 (implant CIDR3 (previously used for 18 days) on D0 and 25mg PGF2a in D0 and D1, D5 slaughter); G3: High P4-D6 (implant CIDR1 and slaughtered after 6 days); G4: Low P4-D6 (CIDR3 implant in D0 and application of 25mg PGF2a in D0 and D1, slaughter D6); G5: High P4 + PE (proestrus) (CIDR1 implant in D0, CIDR, blood collection and application of 25mg PGF2a in D5 and slaughtered in D6); G6: Low P4 + PE (CIDR3 implant in D0 and application of 25mg PGF2a in D0 and D1, CIDR, blood collection and application of 25mg PGF2a on D5, slaughtered on D6). The ovaries were removed, the DF measured and dissected to obtain the granulosa cells. The plasma concentrations and intrafollicular P4, E2 and free IGF-1 were measured. Comparisons of the effect of lenght (G1 e G2 x G3 e G4), proestrus effect (G3 e G4 x G5 e G6) and the effect of P4 and their interactions on the LHR mRNA levels and steroidogenic enzymes were performed by ANOVA. Granulosa cells from DF exposed to higher concentration of P4 showed lower mRNA abundance of the LHR, aromatase and 3β-HSD (P <0.05). In conclusion, the high concentration of P4 leads to lower expression of LHR and 3β-HSD in granulosa cells independently ...

O núcleo medial da amígdala é uma estrutura sexualmente dimórfica no encéfalo de ratos e está dividida em quatro subnúcleos, um deles é o póstero-dorsal (MePD). O MePD está sob ação epigenética exercida pelos esteróides sexuais em ambos os sexos e, dada sua hodologia, modula diversos comportamentos sociais como é o caso dos reprodutivos. Os espinhos dendríticos representam locais preferenciais para contato sináptico nos neurônios e a plasticidade neural. Não obstante, não está descrito ainda o efeito da lateralidade hemisférica na densidade de espinhos dendríticos no MePD de ambos os sexos. E nem se há diferenças nos espinhos dendríticos dentro deste subnúcleo nas regiões dorsal e ventral em fêmeas, uma vez que existem diferenças quanto à expressão de receptores para estrogênio nesses locais. O presente trabalho teve por objetivos estudar a densidade de espinhos dendríticos no MePD dos lados direito e esquerdo de machos e fêmeas em diestro, e estudar a densidade de espinhos dendríticos nas regiões dorsal e ventral do MePD de ratas na fase de proestro. Foram utilizados ratos Wistar adultos (n = 6 animais em cada grupo) cujos encéfalos foram processados de acordo com variação da técnica de Golgi. Neurônios bem impregnados pela prata e indubitavelmente presentes no MePD foram selecionados para estudo (n = 48 neurônios para cada variável experimental testada, 8 ramos dendríticos diferentes por área/animal). Os espinhos presentes nos primeiros 40 μm dendríticos foram desenhados com auxílio de uma câmara clara acoplada a microscópio óptico (1000 x). Os dados médios da densidade de espinhos dendríticos dos lados direito e esquerdo do MePD de machos e fêmeas em diestro foram submetidos ao teste da análise da variância de duas vias para medidas repetidas e os valores obtidos nas regiões dorsal e ventral de fêmeas em proestro foram comparados pelo teste “t” de Student pareado (em ambos os casos, o nível de significância estatística foi estabelecido em p < 0,05). Não houve diferença estatisticamente significativa quanto ao sexo, à lateralidade ou à interação entre esses fatores entre machos e fêmeas em diestro (valores em torno de 2 espinhos/μm dendrítico; p > 0,2 em todos os casos). Da mesma forma não houve entre as regiões dorsal e ventral das fêmeas em proestro (valores em torno de 1,7 espinhos/μm dendrítico; p = 0,1). Os resultados sugerem que, apesar de dados na literatura indicarem diferenças hemisféricas na ocorrência de potenciais pós-sinápticos excitatórios nos neurônios do MePD de ratos pré-púberes machos e fêmeas, não há diferença no número de espinhos nos dendritos proximais que justifiquem tal achado prévio ou, pelo menos, que não são esses os locais preferenciais para gerar tal achado eletrofisiológico. Adicionalmente, apesar de terem sido descritas expressões diferentes para receptores de tipo α e β nas regiões dorsal e ventral do MePD, isto não gera diferença no número de espinhos dendríticos proximais nessas regiões em fêmeas durante a fase do ciclo ovulatório que apresenta os maiores valores de estradiol em circulação, a saber a fase de proestro. Esses achados complementam os conhecimentos atuais sobre a MePD de ratos e indicam que a densidade de espinhos dendríticos não representa o elemento preferentemente e diretamente correlacionável com outros dados da literatura mencionados, embora seja um local de plasticidade sináptica em outras condições experimentais. / The posterodorsal medial amygdaloid nucleus (MePD) is a sexually dimorphic area in the rat brain and dendritic spines are specialized postsynaptic sites involved with local neural plasticity. Electrophysiological data showed that prepubertal males have more excitatory synapses than females in the left MePD. Besides, dorsal and ventral MePD neurons have a different expression of estrogen in mating-responsive neurons in the adult female rats. Based onβ or αreceptors these previous findings, the “single-section” Golgi method was employed in adult rats (n = 6 in each group) to reveal: (1) the effect of hemispheric laterality in the density of dendritic spines in the MePD of males and diestrus females, and (2) the density of dendritic spines in the MePD dorsal and ventral subregions in proestrus females (mean values from n = 48 neurons for each experimental variable, 8 different dendritic branches per area/animal). There were no statistically significant difference for sex, laterality, and the interaction of these factores between males and diestrous females (p > 0.2), nor for the dorsal and the ventral MePD dendritic spine density in proestrus females (p > 0.1). These findings complement current knowledge about the rat MePD and suggest that the number of proximal dendritic spines is not lateralized at adulthood. In addition, the different expression of estradiol receptors in the dorsal and ventral MePD did not induce a distinct spine number during the peak of circulating ovarian steroids in the proestrus.

Orientador: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: Anthony Cesar de Souza Castilho / Banca: Mario Binelli / Banca: José Luiz Moraes Vasconcelos / Resumo: O objetivo do presente trabalho foi investigar o efeito da concentração de P4 sobre a abundância de RNAm do LHR e enzimas esteroidogênicas em células da granulosa de folículo dominante (FD) em novilhas Nelore. Hipotetizamos que a alta progesterona afetaria negativamente a expressão do LHR e enzimas esteroidogênicas proporcionando menor desenvolvimento folicular. Para tanto, 52 novilhas Nelore foram pré-sincronizadas (D-17: 2mg BE + dispositivo intravaginal de progesterona CIDR®; D-10: 12,5mg PGF2α Lutalyse®; D-8: 0,5 mg ECP® e retirada CIDR®). As novilhas que responderam à présincronização (presença de CL) foram submetidas à ablação folicular e colheita de sangue no D0 e aleatoriamente distribuídas em 6 grupos: G1: Alta P4-D5 (implante de CIDR1 (novo) no D0 e abatidas após 5 dias); G2: Baixa P4-D5 (implante de CIDR3 (previamente utilizado por 18 dias) no D0 e aplicação de 25mg PGF2α no D0 e no D1, abate no D5); G3: Alta P4-D6 (implante de CIDR1 e abatidas após 6 dias); G4: Baixa P4- D6 (implante de CIDR3 no D0 e aplicação de 25mg PGF2α no D0 e no D1, abate no D6); G5: Alta P4 + PE (proestro) (implante de CIDR1 no D0, retirada do CIDR, colheita de sangue e aplicação de 25mg PGF2α no D5 e abatidas no D6); G6: Baixa P4 + PE (implante de CIDR3 no D0 e aplicação de 25mg PGF2α no D0 e no D1, retirada do CIDR, colheita de sangue e aplicação de 25mg PGF2α no D5 e abatidas no D6). Os ovários foram retirados, o FD mensurado e dissecado para obtenção das células da granulosa. As concentrações plasmáticas e intrafoliculares de P4, E2 e IGF-1 livre foram mensuradas. As comparações do efeito da duração (G1 e G2 x G3 e G4), efeito do proestro (G3 e G4 x G5 e G6) e efeito da concentração de P4 e suas interações, sobre os níveis de ... / Abstract: The aim of this study was to investigate the effect of P4 concentration on the abundance of LHR mRNA and steroidogenic enzymes in granulosa cells of the dominant follicle (DF) in Nellore heifers. High progesterone negatively affects the expression of LHR and steroidogenic enzymes, providing lower follicular development. 52 Nellore heifers were pre-synchronized (D-17: BE + 2 mg intravaginal device CIDR® progesterone; D-10: 12.5 mg PGF2a Lutalyse®; D-8: 0.5 mg ECP® and withdrawal CIDR®). Heifers who responded to the pre-synchronization (presence of CL) underwent follicular ablation and blood collection on D0 and randomly divided into 6 groups: G1: High P4-D5 (implant CIDR1 (new) on D0 and slaughtered after 5 days); G2: Low P4-D5 (implant CIDR3 (previously used for 18 days) on D0 and 25mg PGF2a in D0 and D1, D5 slaughter); G3: High P4-D6 (implant CIDR1 and slaughtered after 6 days); G4: Low P4-D6 (CIDR3 implant in D0 and application of 25mg PGF2a in D0 and D1, slaughter D6); G5: High P4 + PE (proestrus) (CIDR1 implant in D0, CIDR, blood collection and application of 25mg PGF2a in D5 and slaughtered in D6); G6: Low P4 + PE (CIDR3 implant in D0 and application of 25mg PGF2a in D0 and D1, CIDR, blood collection and application of 25mg PGF2a on D5, slaughtered on D6). The ovaries were removed, the DF measured and dissected to obtain the granulosa cells. The plasma concentrations and intrafollicular P4, E2 and free IGF-1 were measured. Comparisons of the effect of lenght (G1 e G2 x G3 e G4), proestrus effect (G3 e G4 x G5 e G6) and the effect of P4 and their interactions on the LHR mRNA levels and steroidogenic enzymes were performed by ANOVA. Granulosa cells from DF exposed to higher concentration of P4 showed lower mRNA abundance of the LHR, aromatase and 3β-HSD (P <0.05). In conclusion, the high concentration of P4 leads to lower expression of LHR and 3β-HSD in granulosa cells independently ... / Mestre

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2006. / Submitted by Thaíza da Silva Santos (thaiza28@hotmail.com) on 2009-12-01T18:18:51Z No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO FERNANDO H P UZUELI.pdf: 1460992 bytes, checksum: 6b299b76f6dac35a814f6d3bd1ff51df (MD5) / Approved for entry into archive by Joanita Pereira(joanita) on 2009-12-02T11:01:55Z (GMT) No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO FERNANDO H P UZUELI.pdf: 1460992 bytes, checksum: 6b299b76f6dac35a814f6d3bd1ff51df (MD5) / Made available in DSpace on 2009-12-02T11:01:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DISSERTACAO FERNANDO H P UZUELI.pdf: 1460992 bytes, checksum: 6b299b76f6dac35a814f6d3bd1ff51df (MD5) Previous issue date: 2006 / As variações hormonais durante o ciclo estral trazem modificações morfológicas e funcionais em diferentes órgãos envolvidos no processo reprodutivo, dentre eles o ovário, a adrenal e o útero. A variação de hormônios como o estrogênio (E2) e o hormônio luteinizante (LH), que exercem influência sobre o metabolismo dos radicais livres, demonstram que essas espécies químicas também participam das alterações do ciclo reprodutivo. Assim, nossa investigação procurou identificar alterações no metabolismo dos radicais livres durante o ciclo estral. Utilizando ratas, como modelo experimental para o estudo do ciclo reprodutivo, realizou-se citologia vaginal diária para determinar-se a regularidade e a fase do ciclo em que cada animal se encontrava. Vinte e um dias após o início da análise citológica diária, os animais foram sacrificados e alocados em cada uma das 4 (quatro) fases do ciclo, constituindo-se quatro grupos: proestro (PE), estro (E), diestro I (D I), e diestro II (D II). No útero, ovário e adrenal, foram dosados os danos oxidativos em lipídios pelo método TBARS e alaranjado de xilenol, danos oxidativos em proteínas pelo método de proteína carbonilada, dosagem do antioxidante endógeno glutationa (GSHeq) e da atividade de três enzimas antioxidantes GR, GPx e GST. Nossos resultados, em útero, demonstram um aumento de dano oxidativo em lipídeos e proteína no D II, o que foi acompanhado por um aumento dos níveis de GSHeq e da atividade da GST. No ovário verificou-se um aumento dos níveis de peroxidação lipídica no E, do dano oxidativo em proteínas no D II, juntamente com uma redução na relação GSHeq/GSSG e um aumento da atividade de GPx. Na adrenal não foram observadas mudanças ao longo do ciclo nos níveis de peroxidação lipídica e proteínas carboniladas, mas encontrou-se uma redução na relação GSHeq/GSSG na fase do diestro I. Os resultados obtidos mostram a presença de estresse oxidativo no útero nas fases do D I e D II, o que parece provocar no órgão uma resposta com o aumento da atividade de GST e GSHeq. Esse estresse oxidativo poderia estar relacionado às alterações inflamatórias que ocorrem no endométrio, nesse momento do ciclo estral. A peroxidação lipídica do ovário no estro mostra um dano oxidativo que pode ocorrer em membranas, o que poderia conduzir à ruptura folicular e à presença de estresse oxidativo, nas fases do diestro I e II representado pelos resultados de proteína carbonilada e pelos níveis de glutationa que poderiam estar associados ao fenômeno da luteólise. Na adrenal, a observação de estresse oxidativo ocorreu no D I. Assim, o aumento do estresse oxidativo no ovário, útero e adrenal parece ter um papel fisiológico junto a esses órgãos, nas fases do diestro I e II. __________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The hormones variations during the estral cycle bring morphologic and functional variations to different involved organs in the reproductive process, among them ovary, adrenal and uterus. The hormone variation as the E2 and the LH, that exert influence on the metabolism of the free radicals, also demonstrates that to these chemical species participation of the alterations of the reproductive cycle. Using rats as experimental models for the study of the reproductive cycle, daily vaginal smears was become fullfilled to determine its regularity and the phase of the cycle in each animal if it found, being sacrificed after 21 days, taking the ovary, uterus and adrenal, after the samples were divided in four groups according to the phase where the animals at the moment of the sacrifice met. The oxidative damage in uterus was quantified by the TBARs method and xylenol orange, carbonyl protein and the levels of the endogenous glutatione. Three enzymes of antioxidant system had activities determined by GR, GPx and GST in the three different tissues, adrenal, ovary and uterus. Our results demonstrate that to have an increase of oxidative damage in lipids and proteins in Diestro II, followed for an increase of the levels of GSHeq and the activity of the GST. In the ovary it exists together with an increase of the levels of lipid peroxidation in the Estrus and an increase of the oxidativo damage in proteins in diestro II with a reduction in the GSHeq/GSSG relation and an increase of the activity of GPx. In the adrenal changes throughout the cycle in the levels of lipid peroxidation and proteins it was observed a reduction in the relation of GSHeq/GSSG met in the phase of diestro I. The numbers show the presence of oxidative stress in the uterus in the second half of the reproductive cycle, which seems to provoke in the organ a reply with the increase in the activity of GST and the GSHeq levels, this oxidative stress could be related with the inflammatory alterations that occurs in the endometrium at this moment of the estrous cycle. In the ovary the lipid peroxidation in estrus shows an oxidative damage that can occur in membranes that could lead to a follicular rupture, and the presence of oxidative stress in the diestro I and II represented for the carbonyl protein results and the levels of glutationa could be associated to the phenomenon of luteolise. In the adrenal occurs a oxidative stress in diestro I. Thus an increase of oxidative stress in the ovary, uterus and adrenal seems to have a physiological paper next to these organs.

O núcleo medial da amígdala é uma estrutura sexualmente dimórfica no encéfalo de ratos e está dividida em quatro subnúcleos, um deles é o póstero-dorsal (MePD). O MePD está sob ação epigenética exercida pelos esteróides sexuais em ambos os sexos e, dada sua hodologia, modula diversos comportamentos sociais como é o caso dos reprodutivos. Os espinhos dendríticos representam locais preferenciais para contato sináptico nos neurônios e a plasticidade neural. Não obstante, não está descrito ainda o efeito da lateralidade hemisférica na densidade de espinhos dendríticos no MePD de ambos os sexos. E nem se há diferenças nos espinhos dendríticos dentro deste subnúcleo nas regiões dorsal e ventral em fêmeas, uma vez que existem diferenças quanto à expressão de receptores para estrogênio nesses locais. O presente trabalho teve por objetivos estudar a densidade de espinhos dendríticos no MePD dos lados direito e esquerdo de machos e fêmeas em diestro, e estudar a densidade de espinhos dendríticos nas regiões dorsal e ventral do MePD de ratas na fase de proestro. Foram utilizados ratos Wistar adultos (n = 6 animais em cada grupo) cujos encéfalos foram processados de acordo com variação da técnica de Golgi. Neurônios bem impregnados pela prata e indubitavelmente presentes no MePD foram selecionados para estudo (n = 48 neurônios para cada variável experimental testada, 8 ramos dendríticos diferentes por área/animal). Os espinhos presentes nos primeiros 40 μm dendríticos foram desenhados com auxílio de uma câmara clara acoplada a microscópio óptico (1000 x). Os dados médios da densidade de espinhos dendríticos dos lados direito e esquerdo do MePD de machos e fêmeas em diestro foram submetidos ao teste da análise da variância de duas vias para medidas repetidas e os valores obtidos nas regiões dorsal e ventral de fêmeas em proestro foram comparados pelo teste “t” de Student pareado (em ambos os casos, o nível de significância estatística foi estabelecido em p < 0,05). Não houve diferença estatisticamente significativa quanto ao sexo, à lateralidade ou à interação entre esses fatores entre machos e fêmeas em diestro (valores em torno de 2 espinhos/μm dendrítico; p > 0,2 em todos os casos). Da mesma forma não houve entre as regiões dorsal e ventral das fêmeas em proestro (valores em torno de 1,7 espinhos/μm dendrítico; p = 0,1). Os resultados sugerem que, apesar de dados na literatura indicarem diferenças hemisféricas na ocorrência de potenciais pós-sinápticos excitatórios nos neurônios do MePD de ratos pré-púberes machos e fêmeas, não há diferença no número de espinhos nos dendritos proximais que justifiquem tal achado prévio ou, pelo menos, que não são esses os locais preferenciais para gerar tal achado eletrofisiológico. Adicionalmente, apesar de terem sido descritas expressões diferentes para receptores de tipo α e β nas regiões dorsal e ventral do MePD, isto não gera diferença no número de espinhos dendríticos proximais nessas regiões em fêmeas durante a fase do ciclo ovulatório que apresenta os maiores valores de estradiol em circulação, a saber a fase de proestro. Esses achados complementam os conhecimentos atuais sobre a MePD de ratos e indicam que a densidade de espinhos dendríticos não representa o elemento preferentemente e diretamente correlacionável com outros dados da literatura mencionados, embora seja um local de plasticidade sináptica em outras condições experimentais. / The posterodorsal medial amygdaloid nucleus (MePD) is a sexually dimorphic area in the rat brain and dendritic spines are specialized postsynaptic sites involved with local neural plasticity. Electrophysiological data showed that prepubertal males have more excitatory synapses than females in the left MePD. Besides, dorsal and ventral MePD neurons have a different expression of estrogen in mating-responsive neurons in the adult female rats. Based onβ or αreceptors these previous findings, the “single-section” Golgi method was employed in adult rats (n = 6 in each group) to reveal: (1) the effect of hemispheric laterality in the density of dendritic spines in the MePD of males and diestrus females, and (2) the density of dendritic spines in the MePD dorsal and ventral subregions in proestrus females (mean values from n = 48 neurons for each experimental variable, 8 different dendritic branches per area/animal). There were no statistically significant difference for sex, laterality, and the interaction of these factores between males and diestrous females (p > 0.2), nor for the dorsal and the ventral MePD dendritic spine density in proestrus females (p > 0.1). These findings complement current knowledge about the rat MePD and suggest that the number of proximal dendritic spines is not lateralized at adulthood. In addition, the different expression of estradiol receptors in the dorsal and ventral MePD did not induce a distinct spine number during the peak of circulating ovarian steroids in the proestrus.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-07-12T14:00:31Z No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 662526 bytes, checksum: 34813bb6c01e07fe19986c25306f1cd3 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-12T14:00:31Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.PDF: 662526 bytes, checksum: 34813bb6c01e07fe19986c25306f1cd3 (MD5) Previous issue date: 2001-12-10 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Este trabalho foi realizado com os seguintes objetivos: a) Caracterizar a dinâmica folicular ovariana e o momento de ovulação em vacas das raças Gir e Nelore, durante duas estações do ano (verão e inverno). Este estudo foi feito com 25 vacas da raça Gir (10 no inverno e 15 no verão) e 15 vacas da raça Nelore (7 no inverno e 8 no verão). Os parâmetros foliculares não foram afetados pela estação do ano e não diferiram entre as raças. Houve maior percentagem de ciclos com três (68,0 e 66,7%) e duas ondas foliculares (24,0 e 26,7%) para as raças Gir e Nelore, respectivamente. O momento de ovulação ocorreu, em média, cerca de 23 horas após a identificação do estro, para as duas raças; b) Determinar a área do corpo lúteo e das cavidades luteais, bem como do volume do tecido luteal e das concentrações de progesterona de vacas das raças Gir e Nelore, durante duas estações do ano. A área e o volume dos corpos lúteos e as concentrações de progesterona foram estudadas em 25 vacas da raça Gir e 15 da raça Nelore, durante um ciclo estral completo e duas estações do ano (inverno e verão), e foram verificadas diferenças estacionais na área e volume luteal; c) Estudar a regressão luteal, o desenvolvimento folicular e o momento de ovulação de vacas das raças Gir e Nelore tratadas com prostaglandina F 2α . Foram utilizadas 12 vacas da raça Gir e em 7 da raça Nelore, tratadas com prostaglandina F 2α entre os dias 10 e 12 do ciclo estral. A ovulação do folículo dominante da segunda onda foi verificada em 72,7% na raça Gir, e em todas as vacas Nelore. O diâmetro do folículo ovulatório na raça Nelore foi menor (11,0 ± 0,9mm) ao da raça Gir (13,0 ± 1,7mm) após a sincronização com prostaglandina, e o intervalo da aplicação do luteolítico ao estro foi de 88,7 e 91,6h para as raças Nelore e Gir, respectivamente; d) Estudar a dinâmica folicular no pós-parto, bem como de verificar o efeito do tratamento com GnRH ou hCG no retorno da atividade ovariana de vacas da raça Gir em anestro. O padrão de crescimento folicular no pós-parto foi estudado por meio de ultra-sonografia diária em 15 vacas da raça Gir amamentando, durante os primeiros 50 dias de lactação. Nenhum animal apresentou estro, ovulação ou luteinização folicular durante o período de avaliação e apresentaram de quatro a oito ondas foliculares. No estudo do crescimento folicular após tratamentos hormonais com GnRH e hCG, foram utilizadas 22 vacas da raça Gir em anestro pós- parto. Aos 56 dias no pós-parto 11 vacas foram tratadas com 0,0042 mg de acetato de buserelina e 11 com 3.000UI de hCG. Ovulação, regressão e luteinização folicular foram verificadas nos dois tratamentos, e uma nova onda folicular surgiu dentro de dois a três dias; e) Verificar o efeito do tratamento com o progestágeno associado com a redução na freqüência de amamentação na atividade ovariana de vacas da raça Gir em anestro pós-parto. O estudo foi feito com 40 vacas da raça Gir em anestro no pós-parto, visando estudar o efeito do tratamento com progestágeno, associado ou não à amamentação limitada no retorno à atividade ovariana. Os animais foram distribuídos em quatro tratamentos de 10 animais, aos 42 dias no pós-parto: T1 = duas mamadas/dia (Controle); T2 = Norgestomet + duas mamadas/dia; T3 = uma mamada/dia e T4 = Norgestomet + uma mamada/dia. Nenhum animal de T1 manifestou estro e, para T3, cinco animais tiveram ovula ção silenciosa ou estro durante o período experimental. Oito animais manifestaram estro característico no tratamento T2 e, somente dois no T4. Cinco animais do T2 e dois do T4 ficaram gestantes após os tratamentos com Norgestomet; f) Estudar o perfil metabólico entre o final da gestação e no início da lactação de vacas das raças Gir e Nelore. O perfil metabólico e hormonal foi acompanhado em 10 vacas da raça Gir e 7 da raça Nelore, onde foram analisadas as concentrações de glicose, uréia, colesterol total, albumina, proteínas totais, lipídeos totais, beta-hidroxi-butirato, insulina, triiodotironina (T 3 ), tiroxina (T 4 ) e progesterona. Foram encontradas diferenças entre as raças somente para albumina, beta-hidroxi- butirato, T 4 , T 3 e insulina. Para os dias entre o pré e o pós-parto foram diferentes a uréia, T 3 , T 4 , glicose, colesterol total, progesterona, beta-hidroxi-butirato e insulina. / The objectives of the experiment were: a) To study the follicular dynamic and the ovulation time in Gir and Nelore cows, during two seasons of the year (summer and winter). This experiment was done in 25 Gir cows (winter: 10 and summer: 15) and 15 Nelore cows (winter: 7 and summer: 8). The follicular characteristics did not differ between two the seasons and breeds. The follicular dynamic was characterized by the predominance of three (68.0 and 66.7%) and two follicular waves (24.0 and 26.7%) for Gir and Nelore cows, respectively. On average, Gir and Nelore cows ovulated 23 hours after the onset of estrus; b) To determine the surface area of corpus luteum and luteal cavities, as well as its volume, and plasma progesterone concentration in Gir and Nelore, during two seasons of the year. The area and volumes of corpus luteum, as well as progesterone concentration were evaluated in 25 Gir and 15 Nelore cows, during the estrous cycle on two seasons (winter and summer), and was observed seasonal differences for area and volumes of corpus luteum; c) To study the luteal regression, the follicular development and the ovulation time in Gir and Nelore cows treated with prostaglandin F 2α between day 10 and 12 of estrous cycle. This study was done with 12 Gir and 7 Nelore cows, treated with prostaglandin F 2α , between day 10 and 12 of estrous cycle. The ovulation of second dominant follicle occurred in 72.7% of Gir and all Nelore cows. Ovulatory follicle diameter of the Nelore was lower (11.0 ± 0.9mm) than Gir cows (13.0 ± 1.7mm) after prostaglandin treatment. The average interval from prostaglandin to estrus, was 88.7 and 91.6h for Nelore and Gir cows, respectively; d) To study the postpartum follicular dynamic, as well as to evaluate the effect of GnRH and hCG treatments on return of the ovarian activity of Gir cows in anestrus. The postpartum follicular growth was studied by daily ultra-sonography in 15 suckled Gir cows, during the first 56 days of lactation. No animal showed estrus, ovulation or follicular luteinization during de experimental period, and four to eight follicular waves were found. The study about follicular development after hormonal treatments with GnRH and hCG was done with 22 Gir cows in postpartum anestrus. On day 56 of postpartum period 11 cows were treated with 0.0042mg of buserelin acetate and in 11 cows with 3,000UI of hCG. Ovulation, follicular regression and luteinization were studied for cows from the two treatments, and one new follicular wave emerged within two or three days; e) To evaluate the effect of progestin treatment associated with suckling management on ovarian activity of Gir cows in postpartum anestrus. This experiment was done with 40 anestrus Gir cows to study the effect of progesterone treatment, with or without suckling manipulation, on return of ovarian activity. Animals were assigned to four treatments groups with ten cows each one, forty-two days after parturition: T1 = two-daily suckling (Control); T2 = Norgestomet and = two-daily suckling; T3 = once-daily suckling and T4 = Norgestomet and once-daily suckling. No animal of T1 respond with standing estrus and, for T3 five animals showed silent ovulation or estrus during the experimental period. Eight animals showed standing estrus for treatment T2 and only two for T4. Five animals of T2 and two of T4 became pregnant after Norgestomet treatment; f) To study the metabolite profile between the late pregnancy and early lactation in Gir and Nelore cows. The metabolic and hormonal profiles were performed in 10 Gir and 7 Nelore cows. The following blood components were measured: glucose, urea, total cholesterol, albumin, total proteins, total lipids, beta-hydroxy-butyrate, insulin, triiodothyronine (T 3 ), thyroxin (T 4 ) and progesterone. Differences for breeds were found for albumin, beta-hydroxy-butyr ate, T 4, T 3 and insulin. Differences for the days between pre and postpartum were found for urea, T 3 , T 4 , glucose, total cholesterol, progesterone, beta-hydroxy-butyrate and insulin. / Tese importada do Alexandria

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El ciclo estral de la hembra canina presenta algunas características únicas al ser comparadas con otras especies de mamíferos domésticos. Sin embargo, poco se conoce de las características del desarrollo folicular en relación a otras especies. El Factor de Crecimiento Diferencial 9 (GDF-9) y la Proteína Morfogenética Ósea 15 (BMP-15), son miembros de la superfamilia de Factores de Crecimiento Transformantes Beta (TGF-β), y han demostrado un rol fundamental en el desarrollo folicular en muchas especies. El objetivo de este estudio fue analizar la presencia de ambas proteínas en células foliculares proveniente de folículos antrales del ovario canino mediante citometría de flujo. Se obtuvieron células de la granulosa y del cúmulo a través de aspiración y raspado de folículos antrales de distintos niveles de desarrollo y en distintas etapas del ciclo estral. Las células se fijaron e incubaron con anticuerpo anti GDF-9 humano y anti BMP-15 de ratón (1:100) y anticuerpos secundarios conjugados con FITC y PerCP (1:500), respectivamente. Al análisis por citometría se hizo un Gate discriminatorio por tamaño y complejidad en el Dot plot inicial y adicionalmente se discriminó con marcadores de CD45 para leucocitos y yoduro de propidio (IP) para eritrocitos y debris en los histogramas correspondientes. Los resultados se analizaron con ANOVA y regresión lineal. La expresión de GDF-9 disminuyó (P<0.05) a medida que avanzó el desarrollo folicular en Anestro y Proestro/Estro, pero aumentó (P<0.05) en Diestro. BMP-15 aumentó (P<0.05) su presencia en folículos antrales más desarrollados en la etapa de Anestro, disminuyendo (P<0.05) en Proestro/Estro al alcanzar un mayor nivel de desarrollo. Estas proteínas por tanto, se expresaron en las células foliculares de caninos en distintas etapas del ciclo estral y de manera diferente durante el desarrollo folicular, donde ambas podrían estar relacionadas con las características particulares. / The estrous cycle of the bitch presents unique features when compared to other domestic mammals, however, little is known about the characteristics of the follicular development compared with other species. The Growth Differential Factor 9 (GDF-9) and Bone Morphogenetic Protein 15 (BMP-15) are members of the Transforming Growth Factor (TGF-β) superfamily and have demonstrated an important role during the follicular development of many species. The aim of this study was to analyze the presence of both proteins in the follicular cells from canine ovarian antral follicles by flow cytometry. Granulosa and cumulus cells were obtained by aspiration and scraping of antral follicles from different sizes and stages of the estrous cycle. Cells were fixed and incubated with first antibodies against human GDF-9 and mouse BMP-15 (1:100) and second antibodies conjugated with FITC and PerCP (1:500), respectively. A size and complexity discriminatory gate was used for the cytometryc analysis in the initial dot plot and, additionally, a CD45 marker for leukocyte and Iodum Propide for erythrocyte and debris discrimination in the corresponding histograms. The results were analyzed with ANOVA and lineal regression. GDF-9 expression decreased (P<0,05) during follicular development in Anestrous and Proestrous/Estrous, but increased during Diestrous (P<0,05). BMP-15 expression increased (P<0,05) during follicular development in Anestrous, but decreased in roestrous/Estrous (P<0,05) compared to small and medium sizes. Therefore, these proteins are expressed in canine antral follicle cells during different stages of the estrous cycle and at different levels of develop of the antral follicle, where both may be related to the special features of the bitch. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt No. 1140658

O presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos de diferentes condições nutricionais (suplementação e não suplementação) na atividade cíclica reprodutiva (ACR) em ovelhas das raças Santa Inês (SI), Romney Marsh (RM) e Suffolk (SU) mantidas sob pastejo, e submetidas ao efeito macho, durante época de anestro sazonal sob fotoperíodo natural no Estado de São Paulo. Avaliou-se também os efeitos destes tratamentos nas concentrações plasmáticas de melatonina (MEL) e na duração (horas) da secreção noturna deste hormônio. Todos animais foram mantidos sob pastejo, sendo que metade de cada raça recebeu suplementação e a outra não, caracterizando os tratamentos de suplementação e não suplementação, respectivamente. O tratamento de suplementação forneceu de 100 a 110% dos requerimentos protéicos (PB) e de 130 a 140% dos requerimentos energéticos (NDT), enquanto que o tratamento de não suplementação forneceu de 60 a 70% de PB e 100% de NDT. Os tratamentos nutricionais iniciaram 21 dias antes da introdução dos machos, e continuaram por todo o período de permanência dos mesmos (45 dias). Para o efeito macho, foram utilizados três machos (rufiões), impregnados com tinta na região prepucial para detecção do estro, os quais permaneceram isolados das fêmeas por um período de 60 dias. Colheitas de sangue foram realizadas antes (a cada 3 dias) e após (a cada 2 dias) a introdução dos machos, para dosagem de progesterona plasmática, a fim de monitorar a ACR das fêmeas. Foram também realizadas colheitas de sangue para dosagem de MEL plasmática: antes do início do experimento, antes da introdução dos machos e no final do experimento, em período de 24 horas, a cada 2 (noite) ou 4 (dia) horas. Os parâmetros avaliados foram: ganho de peso, ACR após introdução dos machos nos animais que se encontravam em anestro, dias para retorno da ACR, concentrações plasmáticas de MEL, duração da secreção de MEL. Estes parâmetros foram analisados utilizando o procedimento GLM no SAS, seguido pelo teste de ukey para estabelecer a comparação entre médias. O tratamento nutricional teve efeito no ganho de peso (P<0,001), no número de dias para retorno da ACR (P<0,1), nas concentrações de MEL (P<0,1) e na duração da secreção deste hormônio (P<0,1). Animais suplementados apresentaram em média, maior ganho de peso, maiores concentrações de MEL plasmática, e maior duração da secreção deste hormônio. Diferenças raciais foram encontradas para ganho de peso, retorno da ACR e concentrações plasmáticas de MEL. Fêmeas SI, perderam peso, enquanto que as RM mantiveram e as SU ganharam peso durante todo o período experimental, independente do tratamento nutricional. Todas as fêmeas SI retornaram à ACR em média 5 dias após a introdução dos machos, já as fêmeas SU suplementadas não retornaram à ACR, enquanto que as não suplementadas retornaram em 23 dias. Nenhuma ovelha RM retornou à ACR. Assim, conclui-se que para a raça SI só efeito macho é eficiente em ativar o retorno da ACR, e para a raça SU, deve-se aliar esta prática com um bom manejo nutricional, e para a RM, o efeito macho mesmo associado à nutrição não são capazes de amenizar a estacionalidade da ACR. E por fim, a nutrição afeta a duração da secreção de MEL. / This study evaluated the effects of different nutritional conditions (suplementation and no suplementation) in reproductive cyclic activity (RCA) for Santa Inês (SI), Romney Marsh (RM) and Suffolk (SU) breeds, in pasture, submitted to the male effect, during seasonal anoestrus, under natural photoperiod in São Paulo State. It was also evaluated the effects of nutritional treatments for plasmatic melatonin (MEL) concentration and for the duration of MEL secretion. All ewes were mainted in pasture, receiving food supplementation or not, distinguishing the supplementation or not supplementation treatments. The supplementation treatment supplied 100-110% of protein requeriments (CP) and 130-140% of energy requeriments (TDN). The no supplementation treatment supplied 60-70% CP and 100% TDN requeriments. The nutritional treatments were started 21 days before the rams introduction and lasted throughout the permanence period (45 days). To the male effect, it used three vasectomized rams impregnated with ink at the prepucial area in order to facilitate the estrus verification, isolated from the females for 60 days. Blood samples were collected before (every 3 days) and after (every 2 days) the rams introduction to determine de plasmatic progesterone to follow up the ewes reproductive cyclic activity (RCA). Blood samples were also collected to determine the plasmatic MEL dosage: before the beginning of the experiment, before the rams introduction and in the end of the experiment, during 24 hours, every 2 dark hours or 4 light hours. There was evaluated the following parameters: weight gain, RCA after male introduction for the ewes in anoestrus, days to RCA return, MEL concentration and MEL secretion duration. The parameters were analyzed by analisis of variance using the GLM (General Linear Procedure) of the Statistical System (SAS) software. Tukey test was used to compare means. The nutritional treatment resulted efficient for weight gain (P<0,001), days to return RCA (P<0,1), MEL concentration (P<0,1) and the duration of its hormone secretion (P<0,1). Supplemented ewes showed higher weight gain, higher MEL plasmatic concentration and higher hormone secretion duration in average. There was verified breed differences for weight gain, RCA return and MEL plasmatic concentration. SI ewes lost weight in average, RM ewes maintained it and SU ewes gained weight during the whole experimental period not taking into account the nutritional treatment. SI ewes had, in average, their RCA returned 5 days after the rams introduction not taking into account the nutritional treatment. However, SU ewes presented different behaviours due treatments: the ones that received supplementation did not return the RCA while, the non supplemented ones returned the RCA within 23 days. RM ewes did not return RCA no matter which treatment had received. Therefore, one may conclude that for SI ewes the male effect is enough for the RCA return. For SU breed one should combine this practice to good nutritional management. And for RM neither the male effect nor the nutrition are capable to diminish the RCA seasonally. Finally, one may conclude that the nutrition affects the amount and duration of MEL secretion.

Orientadora: Telma Gonçalves Carneiro Spera de Andrade / Coorientadora: Isabel Cristina Cherici Camargo / Banca: Miriam Mendonça Morato de Andrade / Banca: Rafael Carvalho Almada / Resumo: Deakin e Graeff propuseram que ansiedade e o pânico seriam regulados pela serotonina ou 5-hidroxitriptamina (5-HT), possuindo mais de um mecanismo de controle. Ambos os mecanismos têm sua origem nos núcleos Dorsal da Rafe (NDR) e Mediano da Rafe (NMR). O NDR possui ainda, cinco diferentes subnúcleos ao longo do eixo rostrocaudal: dorsal (DRD), ventral (DRV), lateral/asas laterais (lwDR), caudal (DRC) e interfascicular (DRI), sendo que os subnúcleos DRC, DRD e DRI originam a via modulatória do transtorno de ansiedade generalizada e o subnúcleo lwDR origina a via modulatória do transtorno do pânico. Sabe-se que as mulheres são mais suscetíveis à manifestação dos transtornos de ansiedade e de pânico do que os homens. Estudos com modelos animais de ansiedade mostram que nas fases do ciclo hormonal onde ocorre maior liberação de estrógeno, proestro e estro, é constatada ansiólise. De maneira oposta em animais na fase de metaestro e diestro, nas quais há baixa concentração sérica de estradiol, os comportamentos defensivos observados apontam para o aumento da ansiedade. Receptores para estrógeno, alfa (ERα) e beta (ERβ), foram encontrados em estruturas encefálicas descritas por Deakin e Graeff como relacionadas com a manifestação dos transtornos de ansiedade e co-localizadas em receptores serotonérgicos. Assim, esse estudo teve por objetivo avaliar a expressão de neurônios serotonérgicos e não-serotonérgicos no NMR e nos diferentes subnúcleos do NDR em relação a fase do ciclo... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Deakin and Graeff proposed that anxiety and panic would be regulated by serotonin or 5-hydroxytryptamine (5-HT), having more than one control mechanism. Both mechanisms have their origin in Dorsal Raphe Nucleus (DRN) and Median Raphe Nucleus (MRN). The DRN also has five sub-regions along the rostrocaudal axis: dorsal (DRD), ventral (DRV), lateral / lateral wings (lwDR), caudal (DRC) and interfascicular (DRI), being that the DRC, DRD and DRI subnuclei originate the modulatory pathway of generalized anxiety disorder and the subnucleus lwDR originates the modulatory pathway of panic disorder. It is known that women are more susceptible to the manifestation of anxiety and panic disorders than men. Studies with animal models of anxiety show that in the phases of the hormonal cycle where estrogen release occurs, like proestrus and estrous, anxiolysis is observed. On the other hand, animals in the metaestrus and diestrus phase, in which there is a low concentration of estradiol, the observed defensive behaviors point to an increase in anxiety. Receptors for estrogen, alpha (ERα) and beta (ERβ) were found in structures described by Deakin and Graeff as re lated to a manifestation of anxiety disorders and co-localized in serotonergic receptors. Thus, this study aimed to evaluate the expression of serotonergic and non-serotonergic neurons in the MRN and in the different NDR subnuclei in relation to the phases of estrous cycle of rats and after a bilateral ovariectomy. The females were perfused and the brains were processed in order to perform the double-label immunohistochemistry process for c-Fos protein (cellular activation indirect marker) and tryptophan hydroxylase (TPH - present only in serotonergic neurons). No difference was found when MRN was analyzed. The results showed a... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre