Cabras leiteiras das raças Saanen e Toggenburg (n=10) mantidas num rebanho particular no Estado de São Paulo tiveram seus níveis séricos de progesterona e estradiol comparados às concentrações fecais, durante o período correspondente a três ciclos estrais. O perfil hormonal foi confrontado com as manifestações comportamentais de estro visando uma contribuição ao conhecimento do ciclo das cabras destas raças em condições brasileiras, que leve a um manejo reprodutivo mais eficiente. As correlações entre níveis séricos e fecais foram calculadas, sugerindo a validade do modelo de dosagem hormonal nas fezes em cervídeos. Foi verificada correlação extremamente significante entre as concentrações séricas de progesterona e as de progestinas fecais, com r=0,83 e p<0,0001. Entre as concentrações séricas de estradiol e as de seus metabólitos nas fezes não foi verificada correlação significante, com r=-0,16 e p<0,3916. A partir da observação dos resultados e sua análise estatística, pode-se concluir que, dentro das condições deste trabalho, as concentrações de progestinas fecais apresentam variação correspondente à da progesterona sérica ao longo do ciclo estral das cabras; por outro lado, diferentemente das observações de outros autores, o mesmo não ocorre com os metabólitos fecais do estradiol em relação ao estradiol sérico. / Saanen e Toggenburg dairy goats (n=10) kept in a private flock in São Paulo State had their serum levels of progesterone and estradiol compared to faecal concentrations of the respective metabolites, through an interval corresponding to 3 estrous cycles. Hormonal profile was checked with behavioural manifestations of estrous searching for a better knowledge of the cycle of these breeds in brazilian environment, leading to a more efficient reproductive management. Correlations between serum and faecal levels were calculated, suggesting that the model of faecal hormone measurements could be valuable in cervidae. It was found an extremely significant correlation between progesterone serum concentration and progestin faecal concentration, with r=0,83 and p<0,0001. Between estradiol serum concentrations and its faecal metabolites? concentrations no significant correlation was found, with r=-0,16 and p<0,3916. Based on results observation and statistical analysis, we can assume that, in the circumstances of this trial, progestin faecal concentrations show a variation profile similar to that one of serum progesterone, through estrous cycle of goats; however, this fact could not be observed for estradiol metabolites, compared to serum estradiol concentrations.

O trabalho teve por objetivo estudar o ciclo ovariano de fêmeas de gato-mourisco (Herpailurus yaguaroundi), mantidas em cativeiro, utilizando técnicas de extração e quantificação de metabólitos fecais de hormônios esteróides sexuais e corticosterona. A mensuração dos metabólitos fecais de estradiol, progesterona e cortisol foi efetuada por meio da técnica de radioimunoensaio (RIE). Foram utilizadas oito exemplares fêmeas, mantidas na Fundação Parque Zoológico de São Paulo, São Paulo. As colheitas foram realizadas cinco vezes por semana durante o período de nove meses. As amostras foram acondicionadas individualmente em sacos plásticos e mantidas em freezer a - 20°C. A mediana da duração do ciclo estral (n=33) de gato-mourisco, definido por dois picos consecutivos de metabólitos fecais de estradiol, encontrada no presente estudo, foi de 24 dias; e a duração média±EPM do estro (n=41) foi de 8,65±0,38 dias. O valor da mediana dos valores basais para os metabólitos de estradiol foi de 4,67ng/g de fezes, e dos valores de pico 87,32ng/g de fezes. Para as progestinas os valores encontrados para mediana foram de 0,75ug/g de fezes e 7,49ug/g de fezes para valores basais e de pico respectivamente. As variações no perfil de progestinas sugeriram não terem ocorrido ovulações espontâneas. Não foi encontrada correlação entre progestinas e corticosterona durante os períodos de gestação, lactação e após a retirada dos filhotes. / The aim of this study was analyze the ovarian cycle of captive jaguarundi (Herpailurus yagouaroundi) trough fecal steroid. Radioimmunoassay (RIA) was used for the measurement of estradiol, progesterone and cortisol metabolites in feces. Fecal samples were collected five days per week from eight females kept at Fundação Parque Zoológico de São Paulo during nine months. These samples were placed into zip-lock bags and stored in freezer at - 20°C. The median of estrous cycle length, defined by two consecutive peaks of fecal estradiol metabolites, found in this study was 24 days (n=33 cycles) and the mean (±SEM) of estrous duration was 8,65±0,38 days (n= 41 cycles). The median concentrations of fecal estradiol metabolites were 4,67ng/g of feces and 87,32ng/g of feces for basal and peak values respectively. Progestins median found was 0,75ug/g of feces for basal and 7,49ug/g of feces for peak values. The fluctuations in progestins profiles suggested that spontaneous ovulation did not occur. No correlations were found between progestins and fecal corticosterone during pregnancy, lactation and kitten removal.

Foram realizados quatro trabalhos visando avaliar a substituição da fibra em detergente neutro (FDN) do feno de &#39:coastcross&#39: (Cynodon sp.) pela FDN da casca de soja (CS) sobre a digestibilidade dos nutrientes em cordeiros e sobre a produção e composição de leite, comportamento ingestivo e atividade ovariana pós-parto de ovelhas Santa Inês. Todas as rações experimentais foram isonitrogenadas, contendo teores semelhantes de FDN e balanceadas de acordo com o NRC (1985). O tratamento controle foi uma ração composta de 70% de feno na matéria seca (MS) da ração (CS0), sendo a FDN proveniente do feno substituída em 33% (CS33), 67% (CS67) e 100% (CS100) pela FDN proveniente da CS. No experimento de digestibilidade, 24 cordeiros Santa Inês (42,5 &#177; 3,6 kg PV e 6 meses de idade) foram arranjados em delineamento blocos completos casualizados definidos pelo peso vivo (PV). No experimento de produção, composição de leite, comportamento ingestivo e retorno da atividade ovariana pós-parto, 56 ovelhas (56 &#177; 0,5 kg PV) foram individualmente alojadas em baias cobertas e distribuídas em delineamento blocos completos casualizados definidos pelo número, tipo e data do parto, além do sexo das crias. As ovelhas foram ordenhadas manualmente, uma vez por semana, da segunda até a oitava semana de lactação (data do desmame). A produção diária foi estimada pelo cálculo do total de gramas obtido durante o intervalo de 3h. As observações de comportamento foram feitas a cada cinco minutos durante 24h. A colheita de sangue foi feita pela veia jugular, duas vezes por semana, da segunda até a décima segunda semana pós-parto. O retorno da atividade ovariana pós-parto foi definido quando a concentração sérica de P4 foi &#8805; 1 ng/mL. As digestibilidades da matéria orgânica (P < 0,05), da FDN (P < 0,05) e da fibra em detergente ácido (P < 0,01) apresentaram efeito quadrático com a inclusão de CS, enquanto a digestibilidade da proteína bruta (PB) apresentou decréscimo linear (P < 0,0001). Efeito quadrático (P < 0,01) foi observado na produção de leite em 3h (142,4; 179,8; 212,6; 202,9 g) e no consumo de MS (2,27; 2,69; 3,25; 3,00 kg/dia). Os teores de gordura (7,59; 7,86; 7,59; 7,74%), de proteína (4,53; 4,43; 4,40; 4,55%) e sólidos totais (18,24; 18,54; 18,39; 18,64%) foram similares (P > 0,10). Houve efeito linear decrescente (P < 0,001) com a inclusão de CS no tempo de ingestão (min/dia, min/g MS e min/g FDN) e no tempo de ruminação e de mastigação (min/g MS e min/g FDN). Não houve diferença (P > 0,10) no número de dias necessários ao retorno da atividade ovariana. Em média, 34,5 dias foram necessários para a primeira ovulação. A CS é um interessante substituto à forragem na ração de ovinos Santa Inês e pode ser usada em altos teores na MS da ração. A utilização de intervalo entre partos menor do que oito meses é viável para ovelhas Santa Inês. / Four trials were conducted to evaluate the effects of replacing coastcross hay neutral detergent fiber (NDF) by soybean hulls (SH) NDF on nutrient digestibility of lambs and milk yield, milk composition, ingestive behavior and postpartum ovarian activity of Santa Inês ewes. Experimental diets were formulated to meet NRC (1985) requirements and to provide a similar amount of NDF and crude protein (CP). Hay NDF from a 70% roughage-based diet (SH0) was replaced with SH NDF by 33% (SH33), 67% (SH67) and 100% (SH100). In the digestibility trial, 24 Santa Inês ram lambs (42.5 &#177; 3.6 kg of BW and 6 months old) assigned in a complete randomized block design defined by body weight (BW) were allotted in suspended metabolism crates. In the milk yield, milk composition, ingestive behavior and postpartum ovarian activity trials, 56 lactating ewes (initial BW 56.0 &#177; 0.5) were penned individually and used in a complete randomized block design according to parity, type of rearing (single or twin), offspring gender and lambing date. Ewes were milked by hand once a week, from second to eighth week of lactation (weaning time). Milk production was recorded in a 3h-interval. Behavior observations were visually recorded in a five-min interval during 24h. Blood samples were collected by venipuncture two times a week, from the first to the twelfth week after lambing. Ovarian activity resumption was defined when P4 concentration was &#8805; 1 ng/mL. Organic matter digestibility showed a quadratic effect (P < 0.05) with SH inclusion while CP digestibility showed a linear decrease (P < 0.0001). Quadratic effect was also observed for NDF digestibility (P < 0.05) and acid detergent fiber digestibility (P < 0.01). A quadratic effect (P < 0.01) for 3-h milk production (142.4, 179.8, 212.6, 202.9 g) and dry matter intake (2.27, 2.69, 3.25, 3.00 kg/day) was observed as SH level increased from 0 to 85%. Milk fat (7.59, 7.86, 7.59 and 7.74%), protein (4.53, 4.43, 4.40 and 4.55%) and total solids (18.24, 18.54, 18.39 and 18.64%) were similar (P > 0.10) for SH0, SH33, SH67 and SH100, respectively. Ingestion time (min/day, min/g DM and min/g NDF) and time expended in rumination and chewing activities (min/g DM and min/g NDF) showed a linear decrease (P < 0.001) with addition of SH in the diets. There was no treatment effect (P > 0.10) on ovarian activity resumption. The mean value for the first ovulation was 34.5 days. SH are an interesting forage replacer for sheep diets and may be used in high levels of inclusion. A lambing interval shorter than eight months is possible for Santa Inês ewes.

O objetivo geral deste trabalho foi caracterizar o perfil protéico da secreção uterina pura, através da eletroforese bi-dimensional, de éguas em diferentes fases do ciclo estral, com diferentes graus de alterações inflamatórias e degenerativas, e com diferente capacidade de resposta à cobertura. Para tanto se realizaram cinco experimentos. O primeiro objetivou caracterizar o perfil protéico da secreção endometrial de éguas e determinar se essas proteínas estão associadas ao ciclo estral. A hipótese a ser testada é que o perfil protéico das secreções endometriais varia entre o estro e o diestro. Conclui-se que a composição protéica da secreção uterina da égua em estro é diferente daquela de éguas em diestro, podendo as diferenças protéicas estarem associadas tanto ao processo de manutenção e desenvolvimento embrionário, como a uma necessidade de eventual resposta inflamatória. O segundo experimento objetivou comparar as taxas de prenhez e morte embrionária em éguas não lactantes cobertas no primeiro, ou em outros ciclos durante a temporada reprodutiva. Foi concluído que: (a) durante a temporada reprodutiva, a fertilidade de éguas solteiras é menor no 1° ciclo que nos ciclos subseqüentes; (b) que uma taxa de morte embrionária maior pode ser esperada em éguas falhadas cobertas no 1° ciclo do que nos demais e (c) que a menor fertilidade observada no 1° ciclo não está relacionada à incidência de endometrite persistente pós-cobertura. O terceiro experimento objetivou comparar o perfil protéico da secreção endometrial e a expressão de receptores para esteróides ovarianos no endométrio de éguas em diestro após a 1ª ovulação e após a 2ª ovulação da temporada. Conclui-se que o ambiente uterino é diferente no primeiro diestro da temporada reprodutiva, comparado aos ciclos subseqüentes. O quarto experimento objetivou comparar o perfil protéico da secreção endometrial de éguas resistentes e susceptíveis à endometrite persistente pós-cobertura, durante o estro.Ahipótese a ser testada é que o ambiente uterino da égua susceptível encontra-se alterado no estro prévio à cobertura. Conclui-se que a composição da secreção endometrial das éguas susceptíveis, antes da cobertura, é diferente daquela observada nas éguas resistentes, estando as proteinas observadas relacionadas ao processo inflamatório e à contratilidade uterina. O quinto experimento objetivou (a) comparar a composição protéica da secreção endometrial de éguas em estro com e sem fibrose e (b) avaliar o efeito da inflamação endometrial sobre o perfil protéico da secreção uterina de éguas em estro e em diestro. A hipótese é que a fibrose e a inflamação alteram a composição protéica do fluído uterino, podendo prejudicar o desempenho reprodutivo da égua. Conclui-se que nas éguas em estro a inflamação e a fibrose endometrial alteram apenas a quantidade de poucas proteínas no ambiente uterino. Durante o diestro, a presença da inflamação alterou o ambiente uterino, havendo maior quantidade de proteínas inflamatórias. Os resultados apresentados neste trabalho requerem a confirmação da identidade das proteínas, através de seqüeciamento ou imuno identificação. No entanto, várias informações puderam ser obtidas e muitas novas perguntas podem ser geradas, em especial a partir dos resultados com as éguas susceptíveis. / The main objective from this study was the characterization of the protein profile by SDS-PAGE, from mares during the estrous cycle and mares with uterine inflammation, fibrosis and susceptibility to persistent post-mating endometritis. Five experiments were performed. The first aimed to evaluate the protein profile of endometrial secretions of mares and to determine if any of these proteins was associated with estrous cycle. It was concluded that protein profile from estrous mares is different from the profile from diestrous mares. This difference can be explained by requirements to support and develop the embryo or to an eventually inflammatory response. The second experiment aimed to compare pregnancy and embryo loss rates in non-lactating mares bred either in the first, or in other estrus cycles during the breeding season. It was concluded that: (a) during the breeding the fertility of non-lactating mares is lower in the 1st than in other estrus cycles season; (b) that a higher embryo loss rate may be expected in barren mares bred in the 1st than in other estrus cycles of the breeding season and (c) that the lower fertility rate observed during the 1st estrus cycle is not related to the incidence of post-breeding endometritis. The third experiment aimed to compare the protein profile of endometrial secretions and the steroid hormone receptor expression of the uterus from diestrous mares in the first, or in other estrous cycles during the breeding season. It was concluded that the uterine environment in the first diestrus of the breeding season is different in relation of the other diestrus. The fourth experiment aimed to compare the protein profile of endometrial secretions from estrous mares resistant or susceptible to persistent post-mating endometritis (PPME). The tested hypothesis was that before the insemination in susceptible mares the uterine environment is disturbed. It was concluded that there is a difference in the uterine environmentbetween resistant and susceptible mares to PPME, probably resulting from the inflammatory response and affecting the uterine contractility. The fifth experiment aimed (a) to compare the protein profile of endometrial secretions from estrous mares with and without fibrosis and (b) to estimate the effect of inflammation in the protein profile of endometrial secretion from mares in estrous and in diestrous. The tested hypothesis was that fibrosis and inflammation disturb the uterine environment modifying the protein profile of the endometrial secretion impairing the reproductive performance. It was concluded that inflammation and fibrosis in estrous influenced the protein profile in a low number of spots. During diestrous, the inflammation affect uterine environment with an expressive number of inflammatory proteins. The protein profile observed in the experiments must be confirmed by sequencing or immunoidentification. However, much information could be obtained but many others must be investigated, principally by the susceptible mare.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La tasa de maduración in vitro de ovocitos (IVM) caninos ha sido tradicionalmente baja. En el presente estudio se propuso evaluar la IVM de ovocitos caninos considerando el desarrollo folicular desde donde provenían los ovocitos y las etapas del ciclo estral. Los ovocitos se obtuvieron de ovarios de perras ovariohisterectomizadas. Mediante las estructuras ováricas y progesterona plasmática se identificaron los estados del ciclo (Anestro, Proestro/Estro y Diestro) y el desarrollo folicular: preantral, antral chico, antral mediano y antral grande. De cada tamaño folicular se recolectaron ovocitos que se incubaron para maduración por 72 h en medio TCM-199 suplementado. El estado nuclear fue clasificado en vesícula germinal (VG), reinicio meiótico (GVBD) y metafase I y II (MI-MII). Los resultados se analizaron por ANOVA evaluando el estado nuclear de acuerdo al desarrollo folicular y ciclo reproductivo. El desarrollo folicular y estado reproductivo influyeron (P <0.05) en el desarrollo meiótico. Los mayores porcentajes de ovocitos en MI-MII correspondieron a perras en Proestro/Estro y Diestro (P <0.05) y de folículos antrales (P < 0.05). En Anestro, se obtuvo el mayor porcentaje de ovocitos en VG (P<0.05), correspondiendo a ovocitos (P <0.05) de folículos preantrales. La etapa del ciclo estral influenció el desarrollo meiótico independiente del tamaño folicular, siendo Proestro/Estro y Diestro las etapas con mayores tasas de MI-MII. Independiente de la etapa del ciclo, los tamaños foliculares con mayor desarrollo meiótico fueron los ovocitos de folículos antrales, principalmente medianos y grandes, indicando que la procedencia de los ovocitos influye en la capacidad de maduración in vitro. / Canine in vitro maturation rate (IVM) has been traditionally low. In the present study evaluated the IVM of canine oocytes, considering the stage of the follicular development and the phases of the estrous cycles. The oocytes were collected from ovaries from ovariohysterectomized bitches according sizes of developing follicles throughout the estrus cycle. The phases of the estrous cycle (anestrus, proestrous/estrus and diestrus) were assessed by evaluating the presence or absence of follicles and corpus luteum on the ovarian surface and by progesterone analysis. The oocytes were incubated for IVM for 72 h in a supplemented TCM-199. The nuclear development was classified in germinal vesicle (GV), meiotic resumption (GVBD) and metaphase I and II (MI-MII). The results were analyzed by ANOVA. The follicular development and reproductive phase influenced the oocyte meiotic development (P<0.05). The highest rates of oocytes in MI-MII were mostly from dogs in Proestrus/Estrus and Diestrus (P<0.05), in antral stage. In Anestrus, the mayor percentage (P<0.05) of oocytes remained at GV, being mainly at preantral follicles stage (P<0.05). The reproductive phases influenced the meiotic development regardless the follicular size. The oocytes from bitches at proestrus/estrus and diestrus phases showed the highest rates of MI-MII. Independently the reproductive phases, the highest advance in meiotic development were observed in oocytes from antral follicles, mostly medium and large, indicating that the source of oocytes influences the ability of in vitro maturation. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1140658.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La perra presenta un alto porcentaje de folículos poliovocíticos (FPOs) con respecto a otras especies; sin embargo, se desconoce la capacidad de maduración de los ovocitos provenientes de estos folículos. Este estudio evaluó la maduración de ovocitos provenientes de FPOs in vitro, de acuerdo al estado de desarrollo folicular y de la etapa del ciclo estral de la perra. Se utilizaron ovarios de 64 perras adultas, identificando la etapa del ciclo estral en: anestro, proestro-estro y diestro. Se clasificaron, bajo lupa estereoscópica, distintos estados de desarrollo folicular en: pre-antrales (<300 µm), antrales pequeños (300-490 µm), antrales medianos (500-790 µm) y antrales grandes (>800 µm), separándolos en folículos mono y poli- ovocíticos. Los ovocitos de cada tipo folicular se extrajeron y se incubaron por 72h en TCM-199 suplementado bajo condiciones de cultivo. Posterior al cultivo se evaluó el desarrollo nuclear de los ovocitos previa fijación y tinción nuclear DAPI mediante microscopía de epifluorescencia. El desarrollo meiótico se clasificó en vesícula germinativa (VG), reinicio meiótico (GVBD) y metafase I y II (MI-MII). Los resultados analizados por ANOVA, indicaron que, aunque los ovocitos de FPOs presentaron en general mayor porcentaje de VG en comparación a los de folículos monovocíticos (P <0,05), no hubo diferencias en los porcentajes de MI-MII alcanzados entre los ovocitos provenientes de ambos tipos foliculares a través del desarrollo folicular y etapas del ciclo estral. Esto sugiere que los FPOs son una característica normal de la perra que no afectaría especialmente la maduración in vitro de los ovocitos. / The female dog presents a high percent of multioocyte follicles (MOFs) compared to other species; however, the maturation capacity of the oocytes from these follicles is unknown. The present study evaluated the in vitro maturation (IVM) of bitch oocytes from MOFs according to follicular development and phases of the estrous cycle. Canine oocytes obtained from 64 adult bitches at different phases of the estrous cycle r.g. anestrus, proestrus/estrus and diestrus were classified under stereomicroscope, according to stages of follicular development: pre-antral (<300 µm), small antral (300-490 µm), medium antral (500-790 µm) and preovulatory (>800 µm) and type of follicles: MOFs and unioocytes follicles (UOFs). The oocytes from each type of follicles were incubated for 72 h in TCM-199 medium supplemented under culture conditions. After fixation and DAPI staining, oocytes meiotic development was evaluated by epifluorescence microscopy. Meiotic developmental was classified into germinal vesicle (GV), germinal vesicle break down (GVBD) and metaphase I/II (MI/MII). The result analyzed by ANOVA indicated that although oocytes from MOFs showed mainly higher percentage of VG compared to those UOFs (P<0,05) there was no difference in the MI/MII rates between MOFs and UOFs follicles throughout development and estrus cycle. This suggests that MOFs might be a normal feature in bitches that this might not affect the in vitro oocytes maturation. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1140658.

Made available in DSpace on 2014-11-10T11:09:55Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-29Bitstream added on 2014-11-10T11:57:43Z : No. of bitstreams: 1 000786360.pdf: 1222171 bytes, checksum: 62128e228f9f36f81eb96b431ec790e9 (MD5) / O objetivo deste estudo foi avaliar a influência das fases de anestro e diestro no diâmetro oocitário, na configuração da cromatina em VG e na competência de oócitos caninos, assim como analisar a cinética da atividade quinase p34cdc2 durante a maturação in vitro de oócitos caninos após 24, 48 e 72 horas de cultivo in vitro. Os ovários foram obtidos de cadelas submetidas à ovário-salpingo-histerectomia eletiva (OSH). Para avaliar o diâmetro e a configuração da cromatina em VG, os complexos cumulus-oócitos (COCs) foram submetidos à solução de hialuronidase 0,2% para a remoção das células do cumulus e corados com Hoechst. A avaliação da configuração nuclear dos oócitos caninos foi realizada após 72h de maturação in vitro. Para a realização do ELISA, foi realizado um extrato de proteínas dos oócitos após 24, 48 e 72 horas de cultivo in vitro. Quanto ao diâmetro médio oocitário, os resultados não demonstraram diferença (p>0,05) entre as fases de anestro e diestro (77,62 μm x 78,64 μm). Comparando-se as fases reprodutivas, maior frequência de oócitos nos estágios de M-I (19,1%) e M-II (14%) foi observada na fase de diestro. Entretanto, essas diferenças não foram significativas (p>0,05). Foram classificados quatro estágios de configuração da cromatina identificados como VG-1, VG-2, VG-3 e VG-4. As alterações observadas na configuração da cromatina foram caracterizadas como, transição de uma cromatina dispersa (VG-1, VG-2) para parcialmente condensada (VG-3) até atingir um estágio totalmente condensado (VG-4). Os resultados evidenciaram diferença (p< 0,05) entre as fases de anestro e diestro, com maior proporção de VG-1 e VG-2 durante o anestro e de VG-3 e VG-4 durante o diestro. A atividade quinase p34cdc2 mostrou-se tempo-dependente, atingindo o pico máximo em 48h de MIV (p<0,01). Após 72h, a atividade demonstrou um decréscimo. Dessa forma, a identificação de fatores ... / The aim of this study was to evaluate the influence of stages of anestrus and diestrus in oocyte diameter, configuration of chromatin in GV stage and competence of canine oocytes, as well as analyze the kinetics of p34cdc2 kinase activity during in vitro maturation of canine oocytes after 24, 48 and 72 hours of in vitro culture. Ovaries were obtained from bitches after elective ovariohysterectomy (OSH). To evaluate the diameter and configuration of chromatin in GV stage, cumulus-oocyte complexes (COCs) were subjected to 0,2% hyaluronidase solution for removal of cumulus cells and stained with Hoechst. The assessment of nuclear configuration of canine oocytes was analysed after 72 hours in vitro maturation. To perform the ELISA was performed an extract of proteins from oocytes after 24, 48 and 72 hours of in vitro culture. For the mean oocyte diameter, the results showed no difference (p> 0.05) between phases of anestrus and diestrus (77,62 μm x 78,64 μm). Comparing the reproductive phases, higher frequency of oocytes in stages of MI (19,1%) and M-II (14%) was observed in the diestrus phase. However, these differences were not significant (p> 0.05). Four stages of chromatin configuration identified as GV-1, GV-2, GV-3 and GV-4 were classified. The observed changes in chromatin configuration been characterized as a transition dispersed chromatin (GV-1, GV-2) for partially condensing (GV-3) until it reaches a fully condensed phase (GV-4). The results showed difference (p<0.05) between phases of anestrus and diestrus, with a higher proportion of GV-1 and GV-2 during anestrus and GV-3 and GV-4 during diestrus. The p34cdc2 kinase activity was shown to be time-dependent, reaching a peak at 48h of IVM (p<0,001). After 72h, the activity showed a decrease. Thus, identification of factors related to the resumption and progression of meiosis in vivo is critical for making appropriate adjustments and improvement of culture conditions

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 218770 bytes, checksum: 9a15de33de9a4b5b4fdd2591fd0a1d8c (MD5) Previous issue date: 2008-09-26 / The objective of this work was to check the exogenous estrogen, in early phase of estrous cycle, on the range of estrus reduction. The experiment was conducted in Campo Experimental Santa Mônica (CESM). Sixteen Holsteinzebu crossbred cows were used, distributed in two groups, according to the used hormone (estradiol). These animals had body score &#8805; 3,0 (scale of 1 to 5), were non-lactating, with average live weight of 458 kg. Animals cycling regularly were selected by gynecological exam (rectal palpation and vaginoscopic examination). The animals without any clinical or reproductive alterations were used in the experiment. The cows were casually included in their treatments. Treatment 1: eight cows received 2,5 mL of estradiol cipionate at the first day of the estrous cycle (considering day 0 the estrus day), intramuscularly (IM) injected into the hip region, with a 25 X 0,7 mm needle. Treatment 2 (control): eight cows without treatment constituted the control group. The expression of estrus was monitored visually during one hour, three times a day. The ultrasound scans were conducted via transrectal. The measurements began at the estrus day and were done daily in the morning by a single operator. The diameters of the biggest and the second biggest follicles in each ovary were registered. The morphologic characteristics of the corpus luteum were evaluated daily during the estrous cycle, measuring the crosssectional area (cm2). The blood collections for the measurements of the levels of progesterone began at the estrus day (0 day) and were conducted once every three days until the next estrus day. All the animals that received estrogen at the first day after the estrus showed the estrus signals (psychics, turgid uterus and abundant mucus) the next day. It was observed that six animals showed these signals for two consecutive days. This reduction of the range of estrus for two days can promote the elimination of uterus bacteria (if present), enhancing, consequently, the reproductive capacity. It s known that some estrus alterations can promote the elimination of in-uterus infections (clinical or sub clinical), and the reduction of the range of estrus is indicated for the treatment of such diseases. Except for the day of the first follicular wave emergence, all the other studied variables (number and wave length, characteristics of dominant and subordinate follicles and the parameters related to the corpus luteum and progesterone production) weren t affected by the application of estrogen the day after the estrus. In this experiment, the follicular dynamic of the crossbred cows (Holstein X Zebu) showed a two or three follicular wave growth pattern, regardless of the treatment with estrogen and was the same to the treated and control groups (37,5% with two wave cycles and 62,5% with three wave cycles). The application of estradiol cipionate in crossbred cows (Holstein X Zebu) the day after the natural estrus promote the emergence of estrus sign (psychic, turgid uterus and abundant mucus) two days after the natural estrus, without affecting the next estrous cycle. / O objetivo do presente trabalho foi verificar o efeito do estrógeno exógeno, em fase precoce do ciclo estral, na redução do intervalo de estros. O experimento foi conduzido no Campo Experimental de Santa Mônica (CESM). Foram utilizadas 16 vacas mestiças holandês-zebu, distribuídas em dois grupos em função do hormônio utilizado (estradiol). Estes animais apresentavam escore corporal &#8805; 3,0 (escala de 1 a 5), não-lactantes, com peso vivo médio de 458 Kg. Animais estavam ciclando regularmente, foram selecionados por meio de exame ginecológico (palpação retal e vaginoscopia), sendo utilizados no experimento aqueles sem qualquer alteração clinica ou reprodutiva. As vacas foram incluídas ao acaso nos respectivos tratamentos. Tratamento 1: oito vacas receberam 2,5 mL de Cipionato de estradiol no 1º dia do ciclo estral, via intramuscular (IM), na região da garupa, com agulha 25 X 0,7 mm, (considerando dia 0 o dia do estro). Tratamento 2 (Testemunha): oito vacas sem tratamento constituíram o grupo controle. A manifestação de estro foi monitorada visualmente durante uma hora por três vezes ao dia. Os exames ultra-sonográficos foram realizados por via transretal. As medições tiveram inicio no dia do estro e foram feitas diariamente pela manhã, por um único operador. Foram registrados o diâmetro máximo do maior e do segundo maior folículo presente em cada ovário. As características morfológicas do corpo lúteo foram avaliadas diariamente ao longo do ciclo estral, medindo-se a área da seção transversal (cm2). As coletas de sangue para as dosagens de progesterona tiveram início no dia do estro (dia 0) e foram realizadas a cada três dias até o próximo estro. Todos os animais que receberam estrógeno no 1o dia após o estro, manifestaram os sinais característicos de estro (psíquicos, útero túrgido e muco abundante) um dia após o tratamento. Verificou-se ainda que seis desses animais apresentaram esses sinais por dois dias consecutivos. Esta redução do intervalo de estro para apenas dois dias pode favorecer a eliminação de bactérias do útero (quando presentes), aumentando, consequentemente, a eficiência reprodutiva. Sabe-se que algumas alterações que ocorrem no estro podem favorecer a eliminação de infecções uterinas (clinícas ou subclínicas), sendo que a redução no intervalo desses é indicada para tratamento destas patologias. Excetuando o dia da emergência da 1a onda folicular, todas as outras variáveis estudadas (número e comprimento de ondas, características dos folículos dominantes e subordinados, assim como os parâmetros relacionados ao corpo lúteo e produção de progesterona) não foram afetadas pela aplicação de estrógeno um dia após o estro. o presente experimento, a dinâmica folicular das vacas mestiças (Holandês X Zebu) apresentou padrão de duas ou três ondas de crescimento folicular, independente do tratamento com estrógeno, sendo a mesma para os animais do grupo tratado e controle (37,5 de ciclos com duas ondas e 62,5% com três). A aplicação de Cipionato de Estradiol em vacas mestiças (Hol X Zebu), um dia após o estro natural promove o aparecimento de sinais de estro (psíquicos, útero túrgido e muco abundante) dois dias após o estro natural, sem afetar o ciclo estral subseqüente.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:29:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2005Bitstream added on 2014-06-13T20:38:44Z : No. of bitstreams: 1 martin_i_me_botfmvz.pdf: 849389 bytes, checksum: 30bbc04c51aeac2ec027c75295df68f4 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (FUNDUNESP) / Thirty Nelore cows were submitted to estrus synchronization using a single administration of lecirelina, at 25 mg dosage and seven days later, D+ Cloprostenol at, 0.15 mg being both administered intra-muscularly. The first 16 cows ovulating were selected and daily evaluation was performed by rectal palpation and ultrasound of the female reproductive tract followed by blood sampling. Endometrial samples were collected by biopsy at days 0, 5, 9, 13 and 19 of the estrous cycle to detect the presence of estrogen and progesterone receptors by immunohistochemistry. The cows were distributed in 3 groups: control (without endometrial sampling, n=8), D0 (sampling initiated at the day of ovulation, n=4) and D13 (sampling initiated at day 13 of the estrous cycle, n=4). The mean inter-estrus interval was 23.80 l 2.70. The progesterone plasma mean concentrations ranged from 0.06 ng/mL to 4.53 ng/mL, decreasing throughout the cycle and reaching the lowest value close to ovulation. The pattern was characterized by increasing values during the luteal phase. The estradiol 17-b mean concentrations ranged from 6.22 pg/mL to 14.10 pg/mL and these values did not change throughout the estrous cycle. The results obtained by the rectal palpation revealed that the uterine tone and thickness were changing throughout the estrous cycle, being elevated during the period close to ovulation, and they were decreased during the progesterone phase. The ultrasound demonstrates that the amount of fluid content on the cranial vaginal compartment and in the uterine horn lumen was modified throughout the cycle. The largest amount of fluid was observed during the closest period to estrus and small fluid accumulation was observed during the progesterone phase. However, cows that were submitted to endometrial sampling presented more fluid during the progesterone phase...

Orientador: Maria Denise Lopes / Banca: Maricy Apparício-Ferreira / Banca: Nereu Carlos Prestes / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar a influência das fases de anestro e diestro no diâmetro oocitário, na configuração da cromatina em VG e na competência de oócitos caninos, assim como analisar a cinética da atividade quinase p34cdc2 durante a maturação in vitro de oócitos caninos após 24, 48 e 72 horas de cultivo in vitro. Os ovários foram obtidos de cadelas submetidas à ovário-salpingo-histerectomia eletiva (OSH). Para avaliar o diâmetro e a configuração da cromatina em VG, os complexos cumulus-oócitos (COCs) foram submetidos à solução de hialuronidase 0,2% para a remoção das células do cumulus e corados com Hoechst. A avaliação da configuração nuclear dos oócitos caninos foi realizada após 72h de maturação in vitro. Para a realização do ELISA, foi realizado um extrato de proteínas dos oócitos após 24, 48 e 72 horas de cultivo in vitro. Quanto ao diâmetro médio oocitário, os resultados não demonstraram diferença (p>0,05) entre as fases de anestro e diestro (77,62 μm x 78,64 μm). Comparando-se as fases reprodutivas, maior frequência de oócitos nos estágios de M-I (19,1%) e M-II (14%) foi observada na fase de diestro. Entretanto, essas diferenças não foram significativas (p>0,05). Foram classificados quatro estágios de configuração da cromatina identificados como VG-1, VG-2, VG-3 e VG-4. As alterações observadas na configuração da cromatina foram caracterizadas como, transição de uma cromatina dispersa (VG-1, VG-2) para parcialmente condensada (VG-3) até atingir um estágio totalmente condensado (VG-4). Os resultados evidenciaram diferença (p< 0,05) entre as fases de anestro e diestro, com maior proporção de VG-1 e VG-2 durante o anestro e de VG-3 e VG-4 durante o diestro. A atividade quinase p34cdc2 mostrou-se tempo-dependente, atingindo o pico máximo em 48h de MIV (p<0,01). Após 72h, a atividade demonstrou um decréscimo. Dessa forma, a identificação de fatores ... / Abstract: The aim of this study was to evaluate the influence of stages of anestrus and diestrus in oocyte diameter, configuration of chromatin in GV stage and competence of canine oocytes, as well as analyze the kinetics of p34cdc2 kinase activity during in vitro maturation of canine oocytes after 24, 48 and 72 hours of in vitro culture. Ovaries were obtained from bitches after elective ovariohysterectomy (OSH). To evaluate the diameter and configuration of chromatin in GV stage, cumulus-oocyte complexes (COCs) were subjected to 0,2% hyaluronidase solution for removal of cumulus cells and stained with Hoechst. The assessment of nuclear configuration of canine oocytes was analysed after 72 hours in vitro maturation. To perform the ELISA was performed an extract of proteins from oocytes after 24, 48 and 72 hours of in vitro culture. For the mean oocyte diameter, the results showed no difference (p> 0.05) between phases of anestrus and diestrus (77,62 μm x 78,64 μm). Comparing the reproductive phases, higher frequency of oocytes in stages of MI (19,1%) and M-II (14%) was observed in the diestrus phase. However, these differences were not significant (p> 0.05). Four stages of chromatin configuration identified as GV-1, GV-2, GV-3 and GV-4 were classified. The observed changes in chromatin configuration been characterized as a transition dispersed chromatin (GV-1, GV-2) for partially condensing (GV-3) until it reaches a fully condensed phase (GV-4). The results showed difference (p<0.05) between phases of anestrus and diestrus, with a higher proportion of GV-1 and GV-2 during anestrus and GV-3 and GV-4 during diestrus. The p34cdc2 kinase activity was shown to be time-dependent, reaching a peak at 48h of IVM (p<0,001). After 72h, the activity showed a decrease. Thus, identification of factors related to the resumption and progression of meiosis in vivo is critical for making appropriate adjustments and improvement of culture conditions / Mestre