O objetivo do presente trabalho foi avaliar a influência de variedades comerciais de citros e de murta no desenvolvimento de Diaphorina citri Kuwayama, 1908 e a preferência do parasitoide Tamarixia radiata (Waterson, 1922) sobre o referido psilídeo, criado em diferentes variedades cítricas e na murta, por meio de estudos biológicos e comportamentais, para definir estratégias de controle da praga em programas de MIP em citros. Foram realizados testes de livre escolha e confinamento (sem chance de escolha) para avaliar o efeito de variedades de citros sobre a alimentação e fertilidade de D. citri, bem como a biologia da referida espécie de psilídeo em diferentes hospedeiros. Avaliou-se ainda o efeito da variedade de citros sobre o parasitismo de T. radiata, bem como sua biologia em D. citri criado em diferentes hospedeiros. Pode-se concluir que: D. citri preferiu ovipositar e se alimentar, em teste de livre escolha, em \'Natal\', sendo que no teste de confinamento (sem chance de escolha) a oviposição foi semelhante em \'Natal\', \'Valência\' e \'Pêra\'. Em ambos os tipos de teste, \'Hamlin\' foi a menos adequada para D. citri. Com base nos demais parâmetros biológicos avaliados, a análise de agrupamento separou os hospedeiros em três grupos distintos, sendo \'Valência\' e murta os hospedeiros mais adequados ao desenvolvimento de D. citri. No segundo grupo (\'Natal\', \'Pêra\' e \'Ponkan\') concentraram-se as variedades que proporcionaram um desenvolvimento intermediário ao psilídeo, sendo \'Hamlin\' a menos adequada ao desenvolvimento do inseto. Com base na tabela de vida de fertilidade, a taxa líquida de reprodução (Ro) de D. citri foi 2,5 vezes maior quando criado em \'Valência\' em relação a \'Hamlin\'. Os demais parâmetros (T, λ e rm) também favoreceram o inseto quando criado em \'Valência\'. Os hospedeiros estudados não afetaram o parasitismo e desenvolvimento de T. radiata sobre D. citri. Os resultados obtidos poderão fornecer subsídios ao planejamento do plantio de variedades de citros em pomares novos com vistas à incidência e manejo do HLB. / This research\'s aim was to evaluate the influence of commercial citrus varieties and orange jessamine on the development of Diaphorina citri Kuwayama, 1908 and the parasitoid Tamarixia radiata (Waterson, 1922) preference on the Asian Citrus Psyllid (ACP), reared on different citrus varieties and on orange jessamine, by the means of biological and behavioral studies, in order to establish strategies of pest control in Integrated Pest Management (IPM) citrus programs. Free-choice and nochoice tests were carried out to evaluate the citrus varieties effects on the feeding and fertility of D. citri, as well as the biology of this psyllid species on different hosts. It was evaluated the citrus variety effect on the T. radiata parasitization, as well as its biology with D. citri reared on different hosts. It can be concluded that: D. citri preferred laying eggs and feeding, in free-choice tests, on \'Natal\', while in the nochoice test, the laying-eggs behavior was the same on \'Natal\', \'Valência\' and \'Pêra\'. In the both tests, \'Hamlin\' was the least suitable for D. citri. According to the other biological characteristics evaluated, the grouping analysis identified 3 different groups, being \'Valência\' and orange jessamine the best hosts for D. citri development. In the second group (\'Natal\', \'Pêra\' e \'Ponkan\') are the varieties that provided a reasonable development to the psyllid, being \'Hamlin\' the least suitable for the insect development. According to the fertility life table, the reproduction net rate (Ro) of D. citri was 2,5 times bigger if reared on \'Valência\' compared to \'Hamlin\'. The other life table parameters (T, λ e rm) also supported the results when it was reared on \'Valência\'. The studied hosts did not affect the parasitization and the development of T. radiata on D. citri. The results obtained will provide information for planting planning of citrus varieties in new groves considering the HLB incidence and management.

Clorose Variegada dos Citros (CVC), causada pela bactéria Xylella fastidiosa Wells et al., tem causado grandes perdas na citricultura do estado de São Paulo, afetando cerca de 40% das plantas de laranja doce. A bactéria é transmitida por 12 espécies de cigarrinhas sugadoras de xilema (Hemiptera: Cicadellidae) da subfamília Cicadellinae. O manejo da CVC é baseado no plantio de mudas sadias, poda ou eliminação de árvores infectadas no campo, assim como o controle químico dos vetores. No entanto, as cigarrinhas vetoras possuem hábitats e hospedeiros alternativos que servem como refúgio, particularmente na vegetação adjacente aos pomares cítricos. Esta característica ecológica explica a rápida reinfestação dos pomares de laranja pelas cigarrinhas após a aplicação de inseticidas. O uso de plantas hospedeiras atrativas às cigarrinhas em uma estratégia de plantio-isca poderia reduzir a imigração de vetores da vegetação adjacente. O objetivo deste trabalho foi selecionar plantas hospedeiras adequadas para serem usadas neste tipo de estratégia, assim como testar a eficácia do plantio-isca em reduzir a população de cigarrinhas em um pomar de laranja. Experimentos de livre escolha foram conduzidos sob condições de casa-de-vegetação para avaliar a preferência de dois importantes vetores, Bucephalogonia xanthophis (Berg.) e Oncometopia facialis (Signoret) por plantas hospedeiras alternativas em relação à Citrus sinensis (L.) Osbeck (laranja doce). As espécies vegetais preferidas por B. xanthophis foram Baccharis dracunculifolia DC., Duranta repens L., Eupatorium maximiliani Shrad., E. laevigatum Lam. e Vernonia condensata Baker, enquanto que O. facialis apresentou preferência por D. repens e Lantana camara L. Um segundo estudo em casa-de-vegetação foi conduzido para avaliar o efeito da fertilização com níveis variados de nitrogênio sobre a preferência de B. xanthophis por uma das plantas hospedeiras selecionadas, V. condensata. Maiores porcentagens de adultos de B. xanthophis selecionaram plantas que haviam sido tratadas com doses mais elevadas de nitrogênio, até um limiar máximo. Em condições de campo (Fazenda Oxford, Gavião Peixoto, SP), 14 espécies de hospedeiros alternativos de cigarrinhas, incluindo plantas preferidas nos testes de livre escolha, foram avaliadas com respeito ao desenvolvimento vegetativo e incidência natural de cigarrinhas. Essas espécies foram plantadas em cinco linhas de 50 m (com espaçamento de 1 m entre linhas e 1 m entre plantas) entre um pomar de laranja doce e uma área de brejo (fonte de vetores) de maneira a formar um plantio-isca. Para avaliar o efeito do plantio-isca na migração de cigarrinhas de cigarrinhas da área de brejo, a população de vetores foi monitorada por armadilhas adesivas amarelas no interior de dois subtalhões no mesmo pomar de laranja, um separado do brejo pelo plantio-isca e outro sem esta barreira. Este monitoramento foi conduzido por vários meses antes e depois que o plantio-isca foi tratado com inseticidas sistêmicos. A população de vetores foi significantemente reduzida no subtalhão adjacente ao plantio-isca, após as plantas hospedeiras serem tratadas com inseticidas. Durante o período de amostragem antes do tratamento com inseticidas, observou-se uma queda na população de cigarrinhas da borda para o interior do subtalhão vizinho ao plantio-isca. Aloysia virgata (Ruiz & Pav.) Juss., Croton urucurana Baill., L. camara, e V. condensata foram consideradas as espécies mais adequadas para uso em plantio-isca porque são plantas atrativas às cigarrinhas e possuem rápido desenvolvimento e emissão de brotos após plantio ou poda. / Citrus variegated chlorosis (CVC), caused by Xylella fastidiosa Wells et al. has caused great losses in the citriculture of São Paulo State, affecting over 40% of the citrus plants. The bacterium is transmitted by 12 species of xylem-feeding leafhoppers (Hemiptera: Cicadellidae) in the subfamily Cicadellinae, commonly known as sharpshooters. CVC management is based on planting of healthy nursery trees, pruning or roguing of infected trees in the field as well as vector control. However, the sharpshooter vectors have alternative hosts and habitats that serve as refuge, particularly woody vegetation adjacent to the citrus groves. This ecological characteristic explains the rapid reinfestation of citrus groves by vectors after insecticide applications. The use of attractive alternative hosts plants of sharpshooters in a dead-end trap cropping strategy could reduce immigration of vectors from adjacent vegetation. The goal of this research was to select adequate host plants to be used in such strategy, as well as to test the efficacy of trap cropping for reducing sharpshooter populations in a citrus grove. Choice experiments were carried out under greenhouse conditions to evaluate the preference of two important vectors, Bucephalogonia xanthophis (Berg.) and Oncometopia facialis (Signoret), for alternative host plants in relation to Citrus sinensis (L.) Osbeck (sweet orange). Preferred plant species by B. xanthophis were Baccharis dracunculifolia DC., Duranta repens L., Eupatorium maximiliani Shrad., E. laevigatum Lam. and Vernonia condensata Baker, whereas O. facialis showed strong preference for D. repens e Lantana camara L. A second greenhouse study was conducted to evaluate the effect of fertilization with variable nitrogen levels on the preference of B. xanthophis for one of the selected host plants, V. condensata. Higher percentages of B. xanthophis adults selected plants that had been treated with higher doses of nitrogen, up to a threshold. Under field conditions (Fazenda Oxford, Gavião Peixoto, SP), 14 alternative hosts of the sharpshooters, including preferred host plants in the choice experiments, were evaluated with respect to vegetative growth and natural incidence of sharpshooters. These species were planted in five rows of 50 m (spaced 1 m in a row and 1 m between plants) between a sweet orange grove and a swamp (source of vectors), in order to form a trap crop. In order to assess the effect of the trap crop against immigration of sharpshooters from the swamp area, vector population was monitored by yellow sticky cards inside two adjacent plots in the same citrus grove, one separated from the swamp by the trap crop and the other without this barrier. Populations in the two citrus plots were monitored for several months before and after the trap crop was treated with a insecticide. Vector population was significantly reduced in the citrus plot adjacent the trap crop, after the alternative host plants were treated with insecticide. During the period of sampling before the insecticide treatments, a pattern of lower vector populations in rows of citrus trees closer to the trap crop was observed. Aloysia virgata (Ruiz & Pav.) Juss., Croton urucurana Baill., L. camara, and V. condensata were considered the most adequate species for trap cropping because of their attractiveness to the sharpshooters and rapid flushing and growth after planting or pruning.

O trabalho teve por objetivo avaliar a capacidade de infecção e multiplicação de estirpes de Xylella fastidiosa de citros [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e de cafeeiro (Coffea arabica L.) em inoculações cruzadas, para investigar a possibilidade de disseminação deste patógeno de pomares cítricos infectados para cafezais ou vice versa. As inoculações foram realizadas mecanicamente com um isolado (CCT6570) de X. fastidiosa proveniente de árvore cítrica com clorose variegada dos citros (CVC) e um isolado (CCT6756) de planta de café com sintomas de atrofia dos ramos do cafeeiro (ARC). Quatro concentrações de células de cada isolado, variando de 10 3 a 10 9 unidades formadoras de colônias (UFC) por mL, foram inoculadas por agulha em citros e cafeeiro, para determinação de curvas de titulação e doses efetivas para infecção em cada combinação estirpe/hospedeiro. As plantas foram avaliadas por “polymerase chain reaction” (PCR) e isolamento em meio de cultura quanto à infecção por X. fastidiosa e população bacteriana, após 0,5; 2; 4 e 8 meses da inoculação. A estirpe de cafeeiro (ARC) de X. fastidiosa não colonizou citros nas concentrações de inóculo testadas. A inoculação da estirpe de citros (CVC) em cafeeiro resultou em baixas taxas de infecção, exigindo uma concentração de inóculo cerca de 10 vezes mais alta do que a necessária para a mesma taxa de infecção (25%) em citros. A dose efetiva para infecção de 25% das plantas (DE25) foi de 0,29 x 10 6 e 0,35 x 10 7 UFC/mL para as combinações (estirpe/hospedeiro) ARC/cafeeiro e CVC/citros, respectivamente. Já para a combinação heteróloga CVC/cafeeiro, a DE25 foi de 0,85 x 10 8 UFC/mL, evidenciando a dificuldade de colonização de plantas de café pela estirpe de citros. A população bacteriana da estirpe de citros foi mais elevada em citros que em cafeeiro em todas as épocas de avaliação, embora a diferença tenha sido significativa apenas aos 2 meses após a inoculação. Um teste preliminar demonstrou que o método de isolamento primário envolvendo maceração de pecíolo foliar de cafeeiro infectado não inibe o crescimento de X. fastidiosa em meio de cultura, propiciando assim, uma estimativa confiável da população de células cultiváveis da bactéria em cafeeiro. Em caráter complementar, realizou-se um estudo de comparação morfológica de seis isolados de X. fastidiosa de citros com CVC e de seis isolados de cafeeiro com ARC, provenientes de diferentes localidades dos Estados de São Paulo e Minas Gerais. Não houve relação entre período de incubação ou diâmetro médio das colônias e o hospedeiro de origem dos isolados. Entretanto, as colônias dos isolados de cafeeiro apresentaram coloração opalescente e margens lisas, enquanto que as de citros mostraram-se mais convexas e escuras, com o centro áspero e margens onduladas, apresentando numerosos filamentos semelhantes a exopolissacarídeos. / The goal of this research was to evaluate infection efficiency and multiplication of citrus [Citrus sinensis (L.) Osbeck] and coffee (Coffea arabica L.) strains of Xylella fastidiosa after cross inoculations, in order to assess the potential for spread of this pathogen from infected citrus groves to coffee plantations and vice versa. Mechanical inoculations were carried out with a X. fastidiosa isolate (CCT6570) from a citrus tree showing citrus variegated chlorosis (CVC) and an isolate (CCT6756) from a coffee tree with coffee stem atrophy (CSA). Four cell concentrations of each isolate, ranging between 10 3 a 10 9 colony forming units (CFU) per mL, were needle-inoculated in citrus and coffee plants, in order to determine titration curves and effective doses for infection in each strain/host combination. The rate of infected plants and the viable bacterial population were determined by polymerase chain reaction (PCR) and primary isolation in culture at 0.5, 2, 4 and 8 months after inoculation. The coffee (CSA) strain of X. fastidiosa did not colonize citrus in any of the inoculum concentrations tested. Cross inoculation of the citrus (CVC) strain in coffee resulted in low rates of infection and required an inoculum concentration 10 times higher than that necessary to obtain a similar (25%) rate of infection in citrus. The effective dose for 25% infection (ED25) was 0,29 x 10 6 and 0,35 x 10 7 CFU/mL for the homologous strain/host combinations, CSA/coffee and CVC/citrus, respectively. For the heterologous CVC/coffee combination, ED25 was higher (0,85 x 10 8 CFU/mL), showing the difficulty of colonizatin of coffee plants by the citrus strain. Bacterial population of the citrus strain was higher in citrus than in coffee plants at all evaluation dates, although statistical differences were found only at 2 months after inoculation. A preliminary test showed that the primary isolation method used, which includes maceration of infected coffee leaf petioles, does not inhibit bacterial grow in culture, thus allowing reliable estimates of X. fastidiosa populations in coffee. Another study was carried out to compare colony morphology of six isolates of X. fastidiosa from citrus with CVC and six isolates from coffee with CSA, obtained from different localities in the States of São Paulo and Minas Gerais. There was no relationship between incubation period or average colony diameter and the original host of the isolates. However, colonies of the coffee isolates showed opalescent colour and flat margins, whereas the colonies of all citrus isolates were darker and more convex, with rugous center and ondulated margins presenting numerous filaments.

O Huanglongbing (HLB) é a doença dos citros mais importante em todo mundo, por afetar todas as variedades cítricas cultivadas e ser de difícil controle. No Brasil, onde afeta as principais regiões produtoras de citros, a doença vem se espalhando e causando enormes prejuízos à atividade. O manejo do HLB depende da utilização de ações integradas, dentre elas o controle do inseto vetor, o psilídeo-asiátco-dos-citros, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Para controlar de forma eficiente esse inseto vetor é necessário que se conheça, por meio de amostragens eficazes, suas características de dinâmica tanto temporal quanto espacial, identificando regiões mais propensas à infestações e épocas do ano em que o inseto se desenvolve melhor. Por isso, o presente estudo teve como objetivos: a) avaliar a dinâmica temporal do psilídeo D. citri em pomares do Estado de São Paulo, examinando o efeito de diferentes regiões, épocas do ano e idade dos plantios; b) verificar a existência de diferenças no número de insetos amostrados em diferentes alturas da planta cítrica, comparando diferentes métodos de amostragem; e c) investigar o padrão de distribuição espacial do inseto em pomares de diferentes idades. Para isso foram realizados levantamentos ao longo de dois anos em seis localidades, representativas de três regiões do parque citrícola paulista, com pomares de diferentes idades, sendo amostradas todas as fases de vida de D. citri e brotações cítricas. Para a avaliação da amostragem de psilídeos em diferentes alturas, foram estudados dois pomares com plantas de diferentes idades, com avaliação da densidade de psilídeos e brotos cítricos em vários estratos da planta, comparando-se dois tipos de amostragem de insetos adultos. Para o estudo da distribuição espacial de D. citri foram feitos levantamentos em pomares de dois municípios da região citrícola central, analisando-se os dados com geoestatística. Foram constatados efeitos de região, idade dos plantios e épocas do ano sobre a população de D. citri. As maiores populações do inseto estão presentes na região central, onde o inseto ocorre com maior frequência ao longo do ano, seguida da região noroeste e sul. Mais ninfas ocorreram em pomares mais jovens, mas a população de adultos não necessariamente ocorre em maiores números nestes locais. A primavera foi a estação do ano na qual ocorreram as maiores populações de insetos, mas elevações populacionais podem ocorrer em qualquer época desde que haja brotações presentes e que o clima seja favorável. A altura de amostragem influenciou o número de adultos de D. citri detectados no pomar mais velho e de todas as fases de vida do inseto no pomar mais novo, bem como o número de brotações cítricas. Amostras mais precisas foram geradas pela amostragem com armadilhas adesivas do que visualmente, sendo recomendada a amostragem de D. citri com armadilhas em pontos mais elevados da planta para melhor precisão. D. citri apresentou distribuição agregada e forte dependência espacial na maioria das datas de amostragem e em pomares de diferentes idades. Focos foram identificados nos pomares, com área de 1.257 m², em média. / Huanglongbing (HLB) is the most important citrus disease in the world, affecting all cultivated citrus varieties, and it is very difficult to control. In Brazil, HLB is spreading in the major citrus producing areas and causing huge losses to the citriculture. Disease management depends on integration of different methods, including control of the insect vector, the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). In order to effectively monitor and control this vector, it is necessary to understand his population dynamics in citrus orchards, identifying regions and seasons where the insect develops higher populations. This study was designed to investigate the temporal and spatial dynamics of D. citri in citrus orchards of Sao Paulo State, examining the effect of different regions, seasons and plant age. Surveys of psyllid populations and citrus shoots were carried out over two years in six locations, representing three growing regions of São Paulo State, in citrus orchards of different ages, where all life stages of D. citri and citrus shoots were sampled. The spatial distribution of D. citri was analyzed by geostatistics in orchards of two municipalities of the central region of São Paulo State. The efficacy of sampling methods (yellow sticky cards vs. visual inspections) and sampling height on the tree canopy for estimating psyllid populations and number of citrus shoots was investigated as well; this particular study was conducted in two orchards of different ages, in the central region. Significant effects of region, orchard age and seasons of the year on the population of D. citri were observed. The highest insect populations are present in the central region, where the insect occurs more frequently throughout the year, followed by the northwestern and southern regions of São Paulo State. More nymphs occurred in younger orchards, but the adult population does not necessarily occur in higher numbers in the younger orchards. Spring was the season of highest populations of D. citri, but population increases can occur at any time if there are shoots present and the weather is favorable. The sampling height influenced the number of D. citri adults trapped by yellow sticky cards in the older orchard, and the numbers of psyllid eggs, nymphs and adults, as well as of citrus shoots, visualized on the younger orchard. More accurate sampling data were generated by using yellow sticky traps compared with visual inspections. Yellow sticky traps should be placed closer to the top of the citrus tree for better accuracy. D. citri showed aggregated pattern and strong spatial dependence in most sampling dates and in orchards of different ages. Foci were identified in the orchards, with a mean area of aggregation of 1,257 m².

Huanglongbing é considerado como o principal obstáculo da indústria produtora de sucos de laranja do mundo. No Brasil, a doença está associada predominantemente às bactérias \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) e \'Ca. L. asiaticus\' (Las), as quais são transmitidas pelo psilídeo Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Levantamentos mostram um aumento expressivo na incidência de plantas doentes nos pomares brasileiros e esse incremento se deve, em grande parte, à disseminação pelo inseto vetor. Informações na literatura da influência de fatores ambientais e da condição da planta na mobilidade de D. citri são escassos ou inexistentes, assim como o efeito de Lam em parâmetros biológicos e comportamentais do inseto. O conhecimento desses fatores pode auxiliar no entendimento da epidemiologia da doença e no desenvolvimento de táticas de controle mais eficientes. Diante disso, os objetivos do presente estudo foram (1) determinar o efeito de fatores ambientais no processo de decolagem de D. citri; (2) verificar o efeito da condição da planta no processo de decolagem do inseto; e (3) estudar a possível influência de Lam e Las na biologia, voo e preferência ao pouso de D. citri. No estudo em que foi determinado o efeito de fatores ambientais, adultos sadios de D. citri foram avaliados quanto à periodicidade diária de voo e ao limiar de temperatura para decolagem. Além disso, verificou-se o efeito de diferentes regimes de fotoperíodo e temperatura e temperaturas constantes na fase inicial de voo a partir da coleta de indivíduos que decolavam de seedlings de laranjeira doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck] e entravam em tubos de 50 mL acoplados na tampa de gaiolas de garrafa plástica. Usando a mesma metodologia, verificou-se o efeito da condição da planta como estresse hídrico, adubação, brotações e densidade de insetos. Para estudar o efeito das bactérias em parâmetros biológicos e comportamentais, avaliaram-se a duração, viabilidade, longevidade de adultos, razão sexual, período de pré-oviposição, fecundidade e decolagem de adultos que se desenvolveram em plantas infectadas por Lam, Las e plantas sadias. Com os dados de biologia calculou-se uma tabela de vida de fertilidade. Além disso, verificou-se a preferência ao pouso de adultos sadios de D. citri em plantas infectadas por Lam, Las e sadias (controle). Os resultados mostraram que uma pequena parcela da população tende a decolar de plantas cítricas e esse comportamento é mais frequente no período da tarde (14:00 e 16:00 h). Insetos que se desenvolveram em regime de temperatura baixa (18 °C) e curto período de luz (10h) apresentaram menor propensão ao voo. Em contraste, após o desenvolvimento em temperatura constante de 27° C, os insetos apresentaram uma maior tendência de decolagem das plantas. Coincidentemente, estimou-se a temperatura limiar de voo de D. citri em 27,1° C. Ao serem submetidos a plantas com estresse hídrico, adultos foram menos propensos ao voo quando comparados com insetos confinados em plantas com 70 e 100 % de capacidade de campo. Ninfas desenvolvidas em plantas com baixa qualidade nutricional geraram adultos mais propensos ao voo. O mesmo foi observado após o desenvolvimento em plantas com alta densidade populacional de ninfas. Após o desenvolvimento de imaturos de D. citri em plantas infectadas e sadias, observaram-se efeitos negativos induzidos por Lam e Las na viabilidade de ninfas, viabilidade do ciclo total, longevidade de fêmeas e parâmetros reprodutivos. Apesar de estatisticamente semelhante à Las, o efeito negativo de Lam na viabilidade do inseto aparentou ser mais pronunciado. Machos e fêmeas apresentam maior propensão ao voo após o desenvolvimento em plantas Lam. Não foram encontrados efeitos de plantas infectadas no pouso do inseto. Os resultados do presente estudo indicam que o comportamento em voo de D. citri pode ser modulado por fatores ambientais e da planta, os quais podem fornecer bases para o desenvolvimento de novas táticas de controle e ajudar a compreender a epidemiologia do HLB dos citros. Além disso, Lam parece afetar com mais intensidade parâmetros biológicos do inseto, o que poderia ser um fator determinando a baixa incidência de Las nos pomares brasileiros. / Huanglongbing (HLB) is considered the major obstacle to the orange juice industry worldwide. In Brazil, the disease is associated mainly to the bacteria \'Candidatus Liberibacter americanus\' (Lam) and \'Ca. L. asiaticus\' (Las), which are transmitted by the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Liviidae). Surveys show a significant increase of diseased plants in Brazilian citrus orchards and this increase is mainly due to the movement of the insect vector by flight. Literature information about the influence of environmental and plant condition factors on D. citri take-off are incipient or absent, as well as the effect of Lam on biological and behavioral parameters of the insect. Knowledge of these factors could help to understand HLB epidemiology and to develop effective control tactics. Therefore, the objectives of the current study were (1) to determine the effect of environmental factors on D. citri take-off; (2) to verify the effect of plant condition on D. citri take-off; and (3) to study the possible influence of Lam and Las on the biology, flight propensity and alighting preferences of D. citri. In the study in which the effects of environmental factors were tested, healthy adults of D. citri were evaluated in relation to the diel flight periodicity and the temperature threshold for flight. Furthermore, the effect of different photoperiod and temperature regimes and constant temperatures on D. citri take-off were evaluated considering the number of insects which took off from sweet orange citrus seedlings [Citrus sinensis (L.) Osbeck] and entered inside 50 mL tubes located on the cap of plastic bottle cages. Using the same methodology, the effect of water stress, fertilization, shoots of citrus plants and density of insects were evaluated. To study the effect of bacteria on biological and behavioral parameters, we evaluated some life traits, including development time, survival, adult longevity, sex ratio, preoviposition time, female fecundity and take-off from adults that developed on Lam-infected, Las-infected and healthy plants. A fertility life table was calculated with life-trait data. In addition, the alighting and settling preference of healthy adults on infected and healthy plants was evaluated. The results showed that a small portion of tested population tends to take off from citrus plants and this behavior is more prevalent in the afternoon (14:00-16:00 h). Adults that were submitted to lower temperatures (18° C) and short light periods (10h) showed less propensity to flight. In contrast, at constant 27° C the insects were more prone to fly. Coincidently, the threshold of temperature for flight was 27.1º C. When subjected to water-stressed plants, adults were less prone to fly compared with insects confined on plants with 70 and 100% of field capacity. Nymphs developed on plants with poor nutritional quality generated adults more prone to fly. The same was observed after the development on plants with high population density of nymphs. Negative effects of Lam and Las infections were observed on nymph survival, egg to adult survival, adult longevity and reproductive parameters. Although statistically similar to Las, the negative effect of Lam on viability appeared to be more pronounced than that of Las on D. citri populations. Male and female of D. citri showed more propensity for flight after development on Lam-infected plants, with the Las treatment showing intermediate behavior between Lam and control plants. There was no effect of infected plants on alighting and settling preferences. Results from current study suggest that the flight behavior of D. citri is modulated by environmental and plant conditions factors, which could provide a basis for further development of efficient control tactics and understanding HLB epidemiology. Furthermore, Lam seems to have a more pronounced negative effect on biological parameters of D. citri, which could be a factor determining the low incidence of this bacterium in Brazilian orchards.

Xylella fastidiosa é uma bactéria limitada ao xilema de plantas, sendo transmitida principalmente por cigarrinhas da subfamília Cicadellinae (Hemiptera: Cicadellidae). No Brasil, é o agente causal da Clorose variegada dos citros (CVC), doença que afeta laranja-doce [Citrus sinensis (L.) Osbeck]. O objetivo deste trabalho foi caracterizar o comportamento alimentar da cicadelíneo vetor Bucephalogonia xanthophis (Berg) em citros e correlacionar suas atividades estiletares com a transmissão de X. fastidiosa. Inicialmente, testes de escolha e análises de excreção de honeydew foram realizadas para determinar os locais e períodos preferidos para alimentação em mudas de citros. B. xanthophis preferiu a haste dos ramos novos, na parte superior da muda. Esta cigarrinha ingeriu seiva do xilema e apresentou maior volume médio de excreção e maior percentual de indivíduos que excretaram durante a fotofase. Assim, estudou-se a penetração estiletar do vetor na haste de brotações cítricas, durante a fotofase, pela técnica de \"Electrical Penetration Graph\" (EPG, sistema DC). Os principais padrões de EPG foram correlacionados com análises histológicas e de \"honeydew\" para determinação da posição exata dos estiletes no tecido vegetal e atividades envolvidas. Seis padrões foram descritos: (S) secreção de bainha salivar e caminhamento dos estiletes através de células da epiderme ou parênquima; (R) estiletes inseridos na planta, porém sem nenhuma atividade aparente; (X) contato dos estiletes com os vasos do xilema; (Xi) ingestão ativa no xilema; (I) breve interrupção durante X ou Xi; (W) retirada dos estiletes da planta. Durante uma prova, a seqüência de eventos com maior probabilidade de ocorrência foi penetração estiletar através da epiderme e parênquima (S) (100% dos insetos), seguida de contato com o xilema (X) (67,6%). Entre os indivíduos que exibem o padrão X, 88,3% passam para Xi. Os vasos do xilema foram localizados pelo inseto após uma média de 2,2 provas. O tempo médio para atingir o xilema (X) e iniciar ingestão (Xi) após o início da primeira prova foi 27.8 min e 34,2 min, respectivamente. Entretanto, verificou-se ingestão prolongada no xilema (Xi > 5 min) somente após 39,8 min, em média. Em um outro estudo, investigou-se a relação dos padrões S, X e Xi com os processos de aquisição e inoculação de X. fastidiosa em citros. B. xanthophis adquiriu X. fastidiosa somente no padrão Xi. Após 1 h de ingestão no xilema, esta cigarrinha transmitiu a bactéria para plantas-teste com uma eficiência de 7,7%. A inoculação ocorreu durante os padrões S, S+X e S+X+Xi, com eficiência de 3,5; 7,1 e 7,4%, respectivamente. Um fato intrigante foi a ocorrência de inoculação de X. fastidiosa pelo inseto antes de atingir os vasos do xilema, durante o padrão S. Contudo, as maiores taxas de transmissão ocorreram após o contato com o xilema (S+X ou S+X+Xi). Por fim, estudou-se o efeito da infecção sintomática e assintomática por X. fastidiosa em plantas cítricas sobre a penetração estiletar de B. xanthophis. O comportamento alimentar foi semelhante em plantas sadias e infectadas sem sintomas. A infecção sintomática não afetou a capacidade de B. xanthophis localizar os vasos do xilema, mas reduziu o tempo gasto por este inseto ingerindo seiva dos mesmos. Estes resultados sugerem que a aquisição de X. fastidiosa pode ser mais eficiente em plantas infectadas assintomáticas do que em plantas com sintomas severos de CVC. As informações sobre penetração estiletar do vetor B. xanthophis em citros são importantes para estudos mais avançados de mecanismos de transmissão de X. fastidiosa, bem como para estabelecer estratégias que visem interferir neste processo. / Xylella fastidiosa is a xylem-limited bacterium transmitted mainly by leafhoppers (Hemiptera: Cicadellidae) in the subfamily Cicadellinae. In Brazil, it is the causal agent of Citrus variegated chlorosis, a disease that affects sweet orange [Citrus sinensis (L.) Osbeck]. The goal of this research was to characterize the feeding behavior of the cicadeline vector Bucephalogonia xanthophis (Berg) in citrus and correlate its feeding activities with transmission of X. fastidiosa. Initially, choice tests and honeydew excretion analyses were carried out to determine preferred feeding sites and periods on citrus nursery trees. B. xanthophis preferred the stems of young shoots, in the upper part of the plant. This species ingested sap from the xylem vessels and showed larger excretion volume and higher proportion of excreting individuals during the day. Thus, vector stylet penetration was studied on the stem of citrus shoots in the photophase, by using the Electrical Penetration Graph (EPG, DC system) technique. The main EPG waveforms were correlated with histological and honeydew excretion analyses to determine the precise stylet position in the plant tissue and feeding activities. Six waveforms and proposed activities are described: (S) secretion of salivary sheath and intracellular pathway; (R) stylets inserted into the plant, without any apparent activity; (X) contact of stylets with xylem vessels; (Xi) active xylem ingestion; (I) interruption between X and Xi; and (W) stylet withdrawal from the plant. During a probe, the most likely sequence of events is stylet pathway (S) through epidermal and parenchymal cells (all individuals), followed by contact with xylem (X) (67.6% of all individuals) and then active ingestion (Xi) (88.3% of those that exhibit waveform X). The xylem was reached after an average of 2.2 probes. The mean time to contact the xylem (X) and initiate ingestion (Xi) after onset of the first probe was 27.8 and 34.2 min, respectively. However, sustained xylem ingestion (Xi > 5 min) was established only after 39.8 min, on average. In a second study, the waveforms S, X and Xi were correlated with X. fastidiosa acquisition and inoculation in citrus. Acquisition of X. fastidiosa from infected plants occurred only after onset of the pathogen to 7.7% of test plants. In healthy plants, inoculation took place during waveform Xi (xylem ingestion); but with just 1 h in Xi, B. xanthophis subsequently transmitted waveforms S (salivary sheath formation and stylet pathway), S+X (X= first xylem contact by stylets) and S+X+X1, with efficiencies of 3.5, 7.1 and 7.4%, respectively. Although higher transmission rates were recorded after the first contact with xylem (S+X and S+X+Xi), it is intriguing the fact that inoculation of this xylem-limited bacterium also occurred before that (during S). Finally, the effect of X. fastidiosa infection on the feeding behavior of B. xanthophis was studied by comparing stylet penetration on: a) healthy citrus; b) symptomless infected citrus; c) infected citrus with CVC symptoms. Based on the analysis of 26 EPG parameters, no significant differences were found in stylet penetration on healthy versus asymptomatic infected citrus. Symptomatic infection did not affect the ability of B. xanthophis to locate xylem vessels, but reduced the time spend by this vector ingesting xylem sap. These results suggest that X. fastidiosa acquisition may be more efficient on symptomless infected plants than on citrus with severe CVC symptoms. Information on vector feeding behavior is basic for future studies on transmission mechanisms of X. fastidiosa and to establish control strategies aimed to interfere with this process.

Made available in DSpace on 2015-04-20T12:22:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Marcia Reis Pena.pdf: 2837421 bytes, checksum: 54ea1752ee25554e075d681ef83f0ff5 (MD5) Previous issue date: 2012-03-20 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Brazil is the world s largest orange producer. As of the 1980s Brazil also became the top orange juice producer. Citrus growing faces a series of agricultural problems, especially in the form of pests and diseases, placing citrus among the crops with the highest losses due to insects, mites and pathogens. Currently, the citrus blackfly (Aleurocanthus woglumi) is one of the main pests, causing a reduction of fruit production as high as 80% and fruit losses of 20-80%. This study evaluates the effectiveness of insecticidal plant extracts (aqueous and organic), both native and exotic, in the control of Aleurocanthus woglumi, in laboratory conditions (29,10±0,15°C; 68,44±0,75% RH). We screened for the most promissing plants, selected the best extractor from those plants, conducted bioassays of translaminar, systemic, and topical action, and conducted chemical analyses of the most promissing extracts. The extracts or fractions were applied using an aerógrafo specific to second stage nymphs or eggs of A. woglumi. After seven or eight days of extract applications, we examined nymph mortality and egg viability. Initially, we determined CL50 with the use of aqueous almond (Azadirachta indica) extracts; subsequently we screened 14 plant species containing possible insecticides with different structures. We selected the three most promissing plant species and from these the best extractors (hexane, dichloromethane and methanol) and fractions (methanol extraction of hexane extract, liquid-liquid extraction and chromatographic fractioning); also bioassays based on mode of action (translaminar, systemic, or topical) and pretests of ovicidal and nymphicidal activity. Extracts were analyzed with joint gas chromatography mass spectrometry (GC-MS) and with high-performance liquid chromatography (HPLC). Bioassay results were analyzed with ANOVA or its non-parametric equivalent, Kruskal-Wallis. Differences were considered significant at p < 0.05. Among the aqueous extracts tested, the most promissing in the control of the citrus blackfly came from roots of ecotype C of the plant timbó (Derris floribunda), followed by almond A. indica extract and leaf extracts from Melia azedarach. In comparisons among solvents of different polarities, greatest bioactivity for the three plant species cited was obtained using the most apolar solvent (hexane). Among timbós (D. floribunda), ecotype C presented elevated toxicity to the blackfly, as much with aqueous extraction as with extraction solvents with successively increasing polarity, especially in the hexane-soluble partition. HPLC indicated that in isolation the rotenoids in timbó extracts do not cause high mortality in A. woglumi, suggesting that the toxic effect may be related to the presence of other secondary metabolites or the synergy among them. GC-MS analyses detected the presence of fatty acids, which are important in bioactivity, but whose mechanism with respect to the blackfly is not clear. Methanol-based extracts of nuts of A. indica, those of roots of D. floribunda and of leaves of M. azedarach, although lacking both translaminar and systemic action, present topical action on A. woglumi. / O Brasil é o maior produtor mundial de laranja. A partir da década de 1980 consolidouse também como o maior produtor mundial de suco dessa fruta. A citricultura é afetada por inúmeros problemas fitossanitários, representados pelas pragas e doenças, estando entre os cultivos com mais perdas em vista do ataque de insetos, ácaros e patógenos. Atualmente, a mosca-negra-dos-citros é uma das principais pragas dessa cultura e pode levar à redução da frutificação em até 80% e perdas de 20 a 80% na produção. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de extratos (aquosos e orgânicos) de plantas inseticidas, nativas e exóticas, no controle da mosca-negra-dos-citros, Aleurocanthus woglumi, em condições de laboratório (29,10±0,15°C; 68,44±0,75%UR). Para isso, buscou selecionar as plantas inseticidas mais promissoras (screening); selecionar o melhor extrator dentro de cada planta promissora; realizar bioensaios de ação translaminar, sistêmica e tópica e realizar a análise química dos extratos promissores. Os extratos ou frações foram aplicados com auxílio de um aerógrafo de precisão sobre ninfas de segundo estádio ou ovos de A. woglumi. Após sete ou oito dias da aplicação do extrato, foram avaliadas as mortalidades ninfais e inviabilidade dos ovos, respectivamente. Inicialmente, foi determinada a CL50 com o uso de extratos aquosos de amêndoas de Azadirachta indica, em seguida foi realizado um screening com quatorze espécies de plantas com potencial inseticida, incluindo diferentes estruturas. Foram selecionadas as três espécies de plantas inseticidas mais promissoras. Dessas espécies foram selecionados os melhores extratores (hexano, diclorometano e metanol) e frações (extração com metanol do extrato hexano, extração líquido-líquido e fracionamento cromatográfico); além de bioensaios referentes aos modos de ação (traslaminar, sistêmico e tópico) e pré-testes de atividade ovicida e ninficida. Foram realizadas análises químicas dos extratos em Cromatografia Gasosa de Alta Resolução Acoplada a Espectrômetro de Massa (CGAR-EM) e Cromatografia Líquida de Alta Eficiência Acoplada a Detector de Arranjo de Diodos CLAE/DAD. Os dados dos bioensaios foram submetidos à ANOVA ou seu equivalente não-paramétrico Kruskal-Wallis. As diferenças foram consideradas significativas ao nível de probabilidade p < 0,05. Entre os extratos aquosos testados, o mais promissor no controle da mosca-negra-dos-citros foi o obtido a partir das raízes do ecótipo C do timbó Derris floribunda seguindo-se os extratos de amêndoas de A. indica e de folhas de Melia azedarach. Na comparação entre os solventes hexano, diclorometano e metanol, de diferentes polaridades, a maior bioatividade para as três espécies de plantas citadas é obtida com o uso do solvente mais apolar (hexano). Entre os timbós, em especial, o ecótipo C (D. floribunda) apresenta elevada toxicidade sobre a mosca-negra tanto com o uso de extratos aquosos quanto com o extrato obtido por meio de extrações sucessivas com solventes em ordem crescente de polaridade, e principalmente na partição hexano solúvel. As análises em CLAE-DAD indicam que, isoladamente, as substâncias da classe dos rotenoides nos extratos dos timbós, não provocam elevada mortalidade de A. woglumi, sugerindo que o efeito tóxico pode estar relacionado à presença de outros metabólitos secundários, além do sinergismo entre eles. As análises por CGAR-EM registram a presença de ácidos graxos, que são importantes no mecanismo da bioatividade, porém, o mecanismo de ação sobre a mosca-negra não está elucidado. Os extratos em metanol de amêndoas de A. indica, de raízes do ecótipo C do timbó D. floribunda e de folhas de M. azedarach embora não tenham ação translaminar e nem sistêmica, apresentam ação tópica sobre A.

Submitted by Erika Demachki (erikademachki@gmail.com) on 2017-05-15T19:41:16Z No. of bitstreams: 2 Tese - Lilian Rosana Silva Rabelo - 2015.pdf: 1454721 bytes, checksum: c59a6c6722bdc9563eb632b7040fd681 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2017-05-16T12:07:47Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Tese - Lilian Rosana Silva Rabelo - 2015.pdf: 1454721 bytes, checksum: c59a6c6722bdc9563eb632b7040fd681 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) / Made available in DSpace on 2017-05-16T12:07:47Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Tese - Lilian Rosana Silva Rabelo - 2015.pdf: 1454721 bytes, checksum: c59a6c6722bdc9563eb632b7040fd681 (MD5) license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Previous issue date: 2015-03-30 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás - FAPEG / The Asian citrus psilliyd, Diaphorina citri is the vector of bacteria Candidatus Liberibacter spp. Is associated to the presently most important disease of citrus, Huanglongbing (HLB), and has negatively affected citrus production in countries around the world, including Brazil. D. citri took the key pest status in the nation citrus industry because it is the principal vector of Huanglongbing (HLB), disease recorded in Brazil in 2004, and for its high ability to transmit other bacteria associated to it. There are reports of the incidence of Asian citrus psillid D. citri in six states: São Paulo, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro, Bahia, Rio Grande do Sul and Roraima. However the presence of the disease Huanglongbening (HLB), transmitted by D. citri, was detected in three states, only: São Paulo, Minas Gerais and Paraná. The present work was to study the occurrence of D. citri in citrus orchards of Goiás State, analyzing the population dynamics and verify the presence of Candidatus Liberibacter spp. through its detection in the vector, to improve strategies related to its management. To this end, surveys were conducted through sticky traps and visual inspections in commercial citrus orchards, located in Goiás mesoregions: south, central, east and northeast, from February 2012 to April 2014. The adults captured were analyzed by PCR for detcção Ca. Liberibacter spp. and was also carried out the study of population fluctuation of D. citri. Join the occurrence of Diaphorina citri in Goiás in the municipalities of Agua Fria de Goiás, meso northeast, Pirenópolis, mesoregion east, and Santa Izabel, central region, in low density. The hosts where there was detection of the psyllid were ponkan mandarin (Citrus reticulata Blanco), orange-pear (Citrus sinensis L. Osbeck), orange-natal (Citrus sinensis L. Osbeck) and Tahiti lime (Citrus x limon). There was no detection of Candidatus Liberibacter, therefore, keep the state as harmless area Huanglongbing (HLB). The population peak of adults and / or nymphs of D. citri occur in mid-spring and early summer, with population peak in October 2012 and 2013 and February 2013, being directly influenced by the issue of the growing flow of citrus plants and by climatic precipitation and temperature parameters. / O psilídeo-asiático-dos-citros, Diaphorina citri, por ser o vetor da bactéria Candidatus Liberibacter spp., está associado a mais importante doença da cultura cítrica da atualidade, o Huanglongbing (HLB), e tem impactado negativamente na produção de citros em vários países no mundo, inclusive no Brasil. D. citri assumiu o status de praga-chave da citricultura nacional por ser o principal vetor da Huanglongbing (HLB) – doença registrada no Brasil no ano de 2004 –, e por possuir alta capacidade de transmitir bactérias a ela associadas. Há registro da incidência do psilídio-asiático-dos-citros, D. citri, em seis Estados brasileiros: São Paulo, Minas Gerais, Paraná, Rio de Janeiro, Bahia, Rio Grande do Sul e Roraima. No entanto, a presença da doença Huanglongbening (HLB), transmitida pelo D. citri, foi detectada em apenas três destes Estados: São Paulo, Minas Gerais e Paraná. Nesse contexto, o presente trabalho teve como objetivo estudar a ocorrência de D. citri em áreas citrícolas do Estado de Goiás, analisar a flutuação populacional e verificar a presença de Candidatus Liberibacter spp. por meio de sua detecção no vetor, visando melhorar as estratégias relacionadas ao seu manejo. Para tanto, foram realizados levantamentos, por meio de armadilhas adesivas e inspeções visuais, em pomares citrícolas comerciais, situados nas mesorregiões goianas: sul, centro, leste e nordeste, de fevereiro de 2012 a abril de 2014. Os adultos capturados foram analisados por meio de PCR para detcção de Ca. Liberibacter spp. e também foi realizado o estudo da flutuação populacional de D. citri. Registra-se a ocorrência de Diaphorina citri em Goiás nos municípios de Água Fria de Goiás, mesorregião nordeste, Pirenópolis, mesorregião leste, e Santa Izabel, mesorregião centro, em baixa densidade. Os hospedeiros em que houve detecção do psilídeo foram: tangerina Ponkan (Citrus reticulata Blanco), laranja-pera (Citrus sinensis L. Osbeck), laranja-natal (Citrus sinensis L. Osbeck) e limão Tahiti (Citrus x limon). Não houve detecção de Candidatus Liberibacter, sendo assim, mantêm-se o Estado como área indene de Huanglongbing (HLB). O pico populacional de adultos e/ou ninfas de D. citri ocorrem em meados da primavera e início do verão, com pico populacional em outubro de 2012 e 2013 e fevereiro de 2013, sendo influenciada diretamente pela emissão do fluxo vegetativo das plantas de citrus e pelos componentes climáticos precipitação e temperatura.

Buscou-se produzir híbridos somáticos entre laranjas doces (Citrus sinensis) com tangerinas, mexericas (C. reticulata, C. reshni, C. sunki, C. deliciosa), tangores (C reticulata x C. sinensis) ou tangelo ‘Orlando’ (C. reticulata x C. paradisi), além da avaliação da resistência do híbrido somático laranja ‘Hamlin’ (C. sinensis) + mexerica ‘Montenegina’ (C. deliciosa) a Xanthomonas axonopodis cv. citri e Xylella fastidiosa. Foram utilizados como fonte de protoplastos calos embriogênicos e folhas coletadas de plântulas germinadas in vitro e de plantas cultivadas em casa-de-vegetação. Após o isolamento, protoplastos provenientes de calos e/ou suspensões embriogênicas foram fundidos quimicamente por polietilenoglicol (PEG) com protoplastos não embriogênicos oriundos de mesofilo foliar. Os calos provenientes da fusão foram induzidos a formação de embriões somáticos para posterior germinação e regeneração de plantas. As plantas regeneradas foram individualizadas, enraizadas ou microenxertadas e aclimatizadas em casa-de-vegetação. A confirmação da hibridação somática foi feita por análise morfológica, análise do DNA com marcadores moleculares do tipo RAPD, determinação da ploidia com a contagem do número de cromossomos e/ou citometria de fluxo. Foram obtidos dois híbridos somáticos do genitor embriogênico laranja ‘Hamlin’ com os genitores não embriogênicos mexerica ‘Montenegrina’ e tangerina ‘Dancy’. Ambos híbridos somáticos obtidos podem apresentar características complementares dos genitores, podendo ser utilizados diretamente como copa e em programas de melhoramento de copa de citros. O híbrido somático laranja ‘Hamlin’ com mexerica ‘Montenegrina’ foi avaliado mostrando resistência a Xanthomonas axonopodis cv. citri e a Xylella fastidiosa. / This research aimed to produce new somatic hybrid combinations between sweet orange (Citrus sinensis) with mandarins (C. reticulata, C. reshni, C. Sunki, C. deliciosa), tangors (C reticulata x C. sinensis) or ‘Orlando’ tangelo (C. reticulata x C. paradisi), and also evaluate the somatic hybrid ‘Hamlin’ sweet orange (Citrus sinensis) + ‘Montenegrina’ mandarin (Citrus deliciosa) for resistance to Xanthomonas axonopodis pv. citri and Xylella fastidiosa. Protoplast sources included embryogenic calli or suspension-culture derived calli, and leaves collected from plants cultivated in vitro or in screenhouses. After protoplast isolation, embryogenic protoplasts were chemically fused by polyethylene glycol (PEG) with mesophyll-derived non-embriogenic protoplasts. Fusion-derived calli were further cultured to embryo induction, germination, and plant regeneration. Regenerated plants were individually rooted or micrografted, and further acclimated in screenhouse. Somatic hybridization was confirmed by analysis of leaf morphology, molecular analysis by RAPD markers, ploidy determination by chromosome counting or flow cytometry. The producion of the somatic hybrids ‘Hamlin’ sweet orange + ‘Montenegrina’ mandarin and ‘Hamlin’ sweet orange + ‘Dancy’ mandarin was confirmed. These hybrids may have complementary traits from both progenitor and be used directly as scion cultivars or as parental lines in scion improvement programs. ‘Hamlin’ sweet orange + ‘Montenegrina’ mandarin somatic hybrid was resistant to Xanthomonas axonopodis pv. citri and Xylella fastidiosa.

Embora a citricultura seja uma importante atividade econômica no Brasil, nos últimos anos houve uma redução significativa da produção nacional. A baixa rentabilidade que o setor citrícola vem enfrentando, devido ao alto custo de produção, é decorrente principalmente dos problemas fitossanitários, com destaque para as doenças, que afetam diretamente a produtividade dos pomares. Atualmente, o huanglongbing (HLB) é a doença mais grave que afeta a citricultura mundial, sendo que os danos são severos em todas as variedades de citros. Diante desse fato, a transformação genética de plantas é uma alternativa para a obtenção de plantas transgênicas, com genes que estimulem o sistema de defesa das plantas, tornando-as resistentes a doenças. Apesar da eficácia dos protocolos existentes para a transformação genética de citros, uma desvantagem característica de plantas perenes é o ciclo reprodutivo lento, tornando difícil e demorado a validação de novos genes de interesse. Por isso, uma importante estratégia é o uso de plantas modelos, como o tomateiro, que possui ciclo curto e boa eficiência de transformação genética. Assim, o objetivo deste trabalho foi obter plantas transgênicas de Solanum lycopersicum cv. \'Micro-Tom\' e Citrus sinensis, contendo a construção gênica com o gene Csd1 (superóxido dismutase do cobre e do zinco), isolado de Poncirus trifoliata. A proteína codificada pelo gene Csd1, também conhecido como Sod1 (superoxide dismutase 1), é o mais potente antioxidante na natureza e é um importante constituinte de defesa celular contra o estresse oxidativo causado pela infecção bacteriana. O tomateiro Micro-tom foi utilizado como modelo de patogenicidade para validação do gene. Porém, devido a sua baixa eficiência de transformação genética, os experimentos de inoculação com o patógeno não foram realizados. Posteriormente, a caracterização da função do gene Csd1 em relação ao HLB será realizada com as plantas transgênicas de citros. A identificação de plantas transgênicas, de tomate e de laranja doce, foi realizada por meio da análise de PCR, utilizando primers para a detecção do gene Csd1. As plantas PCR+ foram aclimatizadas e transferidas para casa-de-vegetação. A eficiência de transformação genética do tomateiro \'Micro-Tom\' e das cultivares de laranja doce, \'Hamlin\' e \'Pineapple\', foram respectivamente: 0,34%, 4,74% e 3,65%. A caracterização molecular pelas análises de Southern blot e RT-qPCR foi realizada apenas em plantas de citros. Foi possível confirmar a integração do transgene em 32 eventos obtidos. O número de eventos de inserção variou de 1 - 5, sendo a presença do gene endógeno Csd1, localizada em 3 locais distintos no genoma das plantas. O nível de mRNA do transgene foi verificada em 21 plantas que tiveram apenas uma única inserção do transgene no genoma. Os resultados obtidos mostram que houve transcrição do gene Csd1 nas plantas transgênicas, assim como, na testemunha não transgênica. A relação do nível de transcrição do transgene com a resistência das plantas ao patógeno será definida após a inoculação com Candidadus Liberibacter. / Although the citrus industry is an important economic activity in Brazil, in recent years there has been a significant reduction in the national citrus production. The low profitability of the citrus sector has faced due to the high production cost is mainly attributed to phytosanitary problems, particularly diseases that directly affect productivity of orchards. Currently, huanglongbing (HLB) is the most serious disease that affects the global citrus industry and the damage is severe in all citrus varieties. Genetic transformation of plants is an alternative to obtain transgenic plants with genes that stimulate the plant defense system, making it resistant to diseases. Despite the effectiveness of protocols for genetic transformation of citrus, a characteristic disadvantage of perennial plants is the slow reproductive cycle, hindering validation of new genes of interest. Therefore, an important strategy is the use of model plants, such as the tomato, which has a short cycle and good genetic transformation efficiency. The objective of this study was to obtain transgenic plants of Solanum lycopersicum cv. \"Micro-Tom \'and Citrus sinensis, containing the gene construct with Csd1 gene (copper/zinc superoxide dismutase), isolated of Poncirus trifoliata. The protein encoded by the gene Csd1, also known as SOD1 (superoxide dismutase 1), is the most powerful antioxidant in nature and is important constituent of cellular defense against oxidative stress caused by bacterial infection. \'Micro-tom\' tomato was used as a model for pathogenic gene validation. However, due to its low efficiency of genetic transformation, the inoculation experiments with the pathogen were not realized. Posteriorly, the characterization of gene function Csd1 in relation to the HLB disease will be realize with citrus transgenic plants. The objective of this study was to obtain transgenic plants of Solanum lycopersicum cv. \'Micro-Tom\' and of Citrus sinensis, containing the gene construction with Csd1 gene (copper/zinc superoxide dismutase), isolated of Poncirus trifoliata, for validation and for future study of this gene for resistance to HLB. Proteins encoded by the Csd1 gene, also known as SOD1 (superoxide dismutase 1), are the most powerful antioxidants in nature and are important constituents of cellular defense against oxidative stress caused by bacterial infection. The identification of transgenic plants of tomato and sweet orange was performed by the PCR analysis using primers for the detection of Csd1 gene. The PCR+ plants were acclimatized and transferred to a greenhouse. The genetic transformation efficiency of tomato \'Micro-Tom\' and sweet orange cultivars, \'Hamlin\' and \'Pineapple\', were 0.34%, 4.74% and 3.65%, respectively. The molecular characterization with the Southern blot and RT-qPCR analyses was performed only in citrus plants. The transgene integration was confirmed in 32 plants. The number of insertion events ranged from 1-5 and the presence of Csd1 endogenous gene is found in three distinct locations in the plants genome. The mRNA level of the transgene was verified in 21 plants that had only a single transgene insertion into the plant genome. The results show that there was transcription of Csd1 gene in transgenic plants as well as in non-transgenic plants. The relation between the transgene transcript level with the resistance of plants to pathogens is set after inoculation with Candidadus Liberibacter.