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Pesquisa pré-clínica e clínica de um gel termorreversível contendo extrato padronizado de própolis (EPP-AF) para a redução do tempo de cicatrização de lesões em pacientes queimados / Pre-clinical and clinical research of a thermoreversible gel formulation containing standardized propolis extract (EPP-AF) to reduce healing time of lesions in burn victims.

Andresa Aparecida Berretta 12 November 2007 (has links)
O estudo realizado compreendeu a avaliação pré-clínica e clínica de uma forma farmacêutica de liberação sustentada contendo extrato padronizado de própolis EPP-AF para o tratamento de queimaduras. Utilizamos um polímero com características termorreversíveis que possibilitaram a obtenção de um produto que se mantém na forma líquida quando a baixas temperaturas e geleifica in situ. A forma farmacêutica proposta visa maior comodidade e adesão do paciente, obtenção de um tecido epitelial organizado e menor tempo para a cicatrização da área. Neste trabalho, foi avaliada a atividade antimicrobiana in vitro, do extrato de própolis e dos géis obtidos, através da técnica de difusão em agar e também através do método de microdiluição em microplacas contendo caldo de enriquecimento e o revelador trifeniltetrazólio, frente aos microrganismos S. aureus, M. luteus e P. aeruginosa. O potencial mutagênico foi estudado em modelo experimental utilizando micronúcleos de sangue periférico de ratos wistar. A histologia do tecido formado em lesão induzida com a utilização de um punch para biópsia e a eficácia do produto em pacientes queimados também foram objeto deste estudo. As áreas doadoras foram utilizadas como modelos experimentais. Os resultados demonstraram que o extrato de própolis apresentou atividade frente aos microrganismos pesquisados sendo que os géis não se difundiram em disco. Em microdiluição, o modelo utilizado para estudo da atividade antimicrobiana não foi adequado ao microrganismo M. luteus, mas foi possível a obtenção do CIM para S. aureus e P. aeruginosa, que foram respectivamente, 50 ug/mL e 200 ug/mL. O produto não apresentou potencial genotóxico nos tratamentos agudo, sub-agudo e crônico. A pesquisa clínica demonstrou que o gel termorreversível contendo extrato padronizado de própolis 3,6%p/v apresentou tempo de cicatrização semelhante à pomada contendo nitrofurazona (furacin®), tratamento referência utilizado na Unidade de Queimados do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de São Paulo. / The present paper examines the pre-clinical and clinical evaluation of a pharmaceutical form that provides sustained delivery of a formulation containing standardized propolis extract EPP AF to the treatment of burn wounds. There has been used a polymer with thermoreversible characteristics which made possible the obtaintion of a product that maintains its liquid state in low temperatures and provides in situ gelling property. The proposed pharmaceutical form intends to enhance patients comfort and acceptance, to obtain a histological well-organized skin tissue and to reduce wound healing time. This study evaluated in vitro the antimicrobial activity of propolis extract and obtained gels using the agar-diffusion method and also a broth microdilution method with microdillution in microplates containing serially diluted antimicrobial and triphenilthetrazolium agent, against microorganisms S. aureus, M. luteus e P. aeruginosa, the mutagenic potential using micronuclei of peripheral blood Wistar rats experimental models, the histology of neo-formed tissue induced by lesions done with a punch and the effectiveness of the products in burn patients, using skin-grafting donnor sites like experimental models. The results show that propolis extract has activity against the listed microorganisms and that the gels did not spread into agar medium plate. In the microdilution method, the used model for the antimicrobial activity study is not adequate to the microorganism M. luteus, but it was possible for the obtention of CIM to S. aureus e P. aeruginosa, which were, respectively, 50 ug/mL e 200 ug/mL. The product did not show genotoxic potential to acute, subacute and chronic treatments. The clinical research show that the thermoreversible gel formulation containing standardized propolis extract 3,6%p/v presented wound healing time similar to the reference treatment used in the Burn Victims Unity witch is nitrofurazone cream (furacin®).
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Polimorfismo dos genes CD14, TLR2, TLR4, IL6 e sua associação com o infarto do miocárdio em adultos jovens / Polymorphism of the gene CD14, TLR2, TLR4, IL6 and your association with myocardial infarction in young adults

Lídio Gonçalves Lima Neto 20 December 2007 (has links)
O objetivo deste estudo foi avaliar a possível associação entre os polimorfismos -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 com o infarto do miocárdio em adultos jovens. Para isso, foi realizado um estudo caso controle, sendo o grupo de estudo constituído por 102 pacientes que tiveram de infarto do miocárdio (34,5 ± 5 anos) e o grupo controle (35,1±8,7 anos) por 108 indivíduos sem histórico de doenças cardiovasculares. A genotipagem foi realizada pela PCRRFLP. Houve ausência de associação entre a distribuição dos genótipos dos SNPs -260C/T do gene CD14, Arg753Gln do gene TLR2, Asp299Gli e Thr39911e do gene TLR4 e -174G/C do gene IL6 entre os dois grupos estudados (p<0,05). O perfil sérico inflamatório e hematológico relacionou-se com polimorfismo -174G/C IL-6 do grupo IAM. O genótipo GG relacionou com elevação nas concentrações de PAI-1 (p<0,0001), o genótipo GC com maiores quantidades de hemácias (p=0,02) e o genótipo CC com concentrações elevadas de fibrinogênio (p<0,01) e quantidade aumentada de leucócitos (p<0,05). O genótipo CC do polimorfismo -260C/T CD14 também mostrou relação com a elevação nas concentrações de PAI-1 (0,0001) e o genótipo CT com o de fibrinogênio (p<0,01). O genótipo GG do polimorfismo -174G/C IL-6 relacionou com elevação nas concentrações de glicose (p<0,05) e o genótipo CC com diminuição nas concentrações de apoA (p<0,01), HDL (p<0,001) e elevação nas de LDL (p<0,05), colesterol total (p<0,05). O genótipo CT do polimorfismo -260C/T CD14 também relacionou com concentrações elevadas de colesterol total (p<0,0001). Em conclusão, os polimorfismos não estão relacionados com o infarto do miocárdio em jovens, porém os SNPs -260CT CD14 e -174 IL-6 parecem estar relacionados com o perfil sérico inflamatório, hematológico e bioquímico de pacientes enfartados. / The objective of this study was to assess the possible association between the polymorphism - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and - 174G/C of the gene IL6 with myocardial infarction in young adults. For that a case control study was conducted and the case group was formed by 102 patients who had myocardial infarction, and the control group by 108 individuals without history of cardiovascular disease. The genotyping was performed by PCR-RFLP. There was no association between the distribution of genotypes of SNPs - 260C/T of the gene CD14, Arg7S3Gln TLR2, Asp299Gli and Thr399lle TLR4 and -174G/C of the gene IL6 between the two groups studied (p<0.05). The serum inflammatory blood profile was related with polymorphism - 174G/C IL-6 in the group IAM. The GG genotype was linked with elevated PAI-1 concentrations (p<0.0001), the genotype GC with larger quantities of red blood cells (p=0.02) and CC genotype with high concentrations of fibrinogênio (p<0.01) and leucocytes increased quantity (p<0.05). The CC genotype of polymorphism of -260C/T CD14 also showed associated with the elevation in PAI-1 concentrations (p<0.0001) and the CT genotype with elevated fibrinogênio concentrations (p<0.01). The GG genotype of the -174G/C IL-6 polymorphism was related with elevated glucose concentrations (p<0.05) and CC genotype with decrease in the apoA (p <0.01) and HDL (p<0001) concentrations and elevation of the LDL (p <0.05), total cholesterol (p <0.05) concentrations. The CT genotype of -260C / T CD14 polymorphism also was Iinked with high total cholesterol concentrations (p <0.0001). In conclusion, the polymorphism is not associated with myocardial infarction in young patients, but the -260CT CD14 and -174 IL-6 SNPs appear to be related to the serum biochemical, hematological and inflammatory blood profile in patients that had myocardial infarction.
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Neurocisticercose humana: pesquisa de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano / Neurocysticercosis human antigens research in cerebrospinal fluid samples

Pardini, Alessandra Xavier 23 June 2004 (has links)
A detecção de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose (NC) foi realizada empregando-se o teste ELISA com soros policlonais de coelhos imunizados com os antígenos total de Taenia solium (T-Tso), líquido vesicular de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e peptídeos &#60;30kDa de LV-Tcra. Os soros policlonais foram fracionados para a obtenção da fração IgG - IgG anti-Tso, IgG antiTcra e IgG anti-Tcra&#60;30kDa. Também foi empregado o anticorpo monoclonal específico para o antígeno de excreção e secreção de Taenia crassiceps (ES-Tcra). A seleção dos clones foi realizada por ELISA empregando-se os antígenos T-Tso e LV-Tcra. Foram analisados diferentes grupos de amostras divididos em: grupo de pacientes com NC (grupo NC), incluindo pacientes em diferentes fases evolutivas da doença, grupo de pacientes \"suspeito\" de NC (grupo \"suspeito\" NC), grupo controle (grupo C) e grupo de outros patologias (grupo OP). No teste ELISA empregando-se as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e IgG anti-Tcra&#60;30kDa, a sensibilidade obtida foi de 70%, 82,5% e 95,8% e a especificidade de 82,5%, 98% e 100%, respectivamente nas amostras do grupo NC e grupo C. Nas amostras do grupo diferentes fases evolutivas da doença, não houve diferença significativa de reatividade entre as amostras com as frações empregadas. Para as 21 amostras do grupo NC - fase ativa da doença, com a fração IgG anti-Tcra e o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra, respectivamente, 13 e 16 amostras foram positivas para a pesquisa de antígenos. As amostras de LCR do grupo C não apresentaram reatividade com os anticorpos empregados nos ensaios. Também foram ensaiadas 68 amostras de LCR de pacientes com \"suspeita\" de NC. De acordo com as características citoprotéicas além da reatividade para a pesquisa de anticorpos anti-T solium, as amostras de LCR apresentaram, neste grupo, padrão de reatividade para a pesquisa de antígenos que variou também de acordo com a presença de anticorpos, além das alterações de proteína e/ou células, que as amostras apresentavam ou não. Frações de 14 e 18kDa foram identificadas pelo teste imunoblot somente nas amostras de LCR de pacientes com NC utilizando as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra. O anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra mostrou-se eficiente para a pesquisa de antígenos no teste de competição por ELISA nas amostras de LCR de pacientes com NC e o antígeno ES-Tcra. / Antigen detection in cerebrospinal fluid (CSF) samples of patients with neurocysticercosis (NC) was performed through ELISA test using rabbits polyclonal sera immune with total antigens of Taenia solium (T-Tso) cysticercus, vesicular liquid of Taenia crassiceps (VL-Tcra) and vesicular liquid peptides (VLP-Tcra&#60;30kDa) cysticercus. The polyclonal sera were separated obtaining IgG-lgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra&#60;30kDa fractions. A specific monoclonal antibody was also applied for reaching the excretion and secretion antigen of the T. crassiceps (ES-Tcra) larvae culture. Clones selection was performed through Elisa test applying the T-Tso and VL-Tcra antigens. When IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra&#60;30kDa fractions were applied in the ELISA test, the accuracy obtained was 70%, 82,5% and 95,8% and the specificity of 82,5%, 98% and 100%, respectively, in samples of both NC and C groups. In the samples of the group in different stages of the disease there was no significant difference on reactivity between the samples when the fractions were applied. For the 21 samples of the NC group - active stage of the disease with IgG anti-Tcra fraction and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody respectively, 13 and 16 samples were positive for antigen analyses. The CSF samples of the C group did not present reactivity with the antibodies applied in the tests. Tests for 68 CSF samples of \"suspected\" NC group, were also conducted. According to the cytoproteic characteristics besides the reactivity for the anti-T. solium antibody study, the CSF samples of this group showed standard reactivity for antigen detection ranging also in accordance with the presence of antibodies and of the protein and/or cell alterations that the samples would or not present. Fractions of 14 and 18kDa were identified by immunoblot test only in the CSF samples of patients with NC using the IgG anti-Tso IgG anti-Tcra fractions and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody. The anti-ES-Tcra monoclonal antibody has shown to be efficient for analyzing antigens by a comparing method of the ELISA test in CSF samples of patients with NC and the ES-Tcra antigen.
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Neurocisticercose humana: pesquisa de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano / Neurocysticercosis human antigens research in cerebrospinal fluid samples

Alessandra Xavier Pardini 23 June 2004 (has links)
A detecção de antígenos em amostras de líquido cefalorraquiano (LCR) de pacientes com neurocisticercose (NC) foi realizada empregando-se o teste ELISA com soros policlonais de coelhos imunizados com os antígenos total de Taenia solium (T-Tso), líquido vesicular de Taenia crassiceps (LV-Tcra) e peptídeos &#60;30kDa de LV-Tcra. Os soros policlonais foram fracionados para a obtenção da fração IgG - IgG anti-Tso, IgG antiTcra e IgG anti-Tcra&#60;30kDa. Também foi empregado o anticorpo monoclonal específico para o antígeno de excreção e secreção de Taenia crassiceps (ES-Tcra). A seleção dos clones foi realizada por ELISA empregando-se os antígenos T-Tso e LV-Tcra. Foram analisados diferentes grupos de amostras divididos em: grupo de pacientes com NC (grupo NC), incluindo pacientes em diferentes fases evolutivas da doença, grupo de pacientes \"suspeito\" de NC (grupo \"suspeito\" NC), grupo controle (grupo C) e grupo de outros patologias (grupo OP). No teste ELISA empregando-se as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e IgG anti-Tcra&#60;30kDa, a sensibilidade obtida foi de 70%, 82,5% e 95,8% e a especificidade de 82,5%, 98% e 100%, respectivamente nas amostras do grupo NC e grupo C. Nas amostras do grupo diferentes fases evolutivas da doença, não houve diferença significativa de reatividade entre as amostras com as frações empregadas. Para as 21 amostras do grupo NC - fase ativa da doença, com a fração IgG anti-Tcra e o anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra, respectivamente, 13 e 16 amostras foram positivas para a pesquisa de antígenos. As amostras de LCR do grupo C não apresentaram reatividade com os anticorpos empregados nos ensaios. Também foram ensaiadas 68 amostras de LCR de pacientes com \"suspeita\" de NC. De acordo com as características citoprotéicas além da reatividade para a pesquisa de anticorpos anti-T solium, as amostras de LCR apresentaram, neste grupo, padrão de reatividade para a pesquisa de antígenos que variou também de acordo com a presença de anticorpos, além das alterações de proteína e/ou células, que as amostras apresentavam ou não. Frações de 14 e 18kDa foram identificadas pelo teste imunoblot somente nas amostras de LCR de pacientes com NC utilizando as frações IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra e anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra. O anticorpo monoclonal anti-ES-Tcra mostrou-se eficiente para a pesquisa de antígenos no teste de competição por ELISA nas amostras de LCR de pacientes com NC e o antígeno ES-Tcra. / Antigen detection in cerebrospinal fluid (CSF) samples of patients with neurocysticercosis (NC) was performed through ELISA test using rabbits polyclonal sera immune with total antigens of Taenia solium (T-Tso) cysticercus, vesicular liquid of Taenia crassiceps (VL-Tcra) and vesicular liquid peptides (VLP-Tcra&#60;30kDa) cysticercus. The polyclonal sera were separated obtaining IgG-lgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra&#60;30kDa fractions. A specific monoclonal antibody was also applied for reaching the excretion and secretion antigen of the T. crassiceps (ES-Tcra) larvae culture. Clones selection was performed through Elisa test applying the T-Tso and VL-Tcra antigens. When IgG anti-Tso, IgG anti-Tcra and IgG anti-Tcra&#60;30kDa fractions were applied in the ELISA test, the accuracy obtained was 70%, 82,5% and 95,8% and the specificity of 82,5%, 98% and 100%, respectively, in samples of both NC and C groups. In the samples of the group in different stages of the disease there was no significant difference on reactivity between the samples when the fractions were applied. For the 21 samples of the NC group - active stage of the disease with IgG anti-Tcra fraction and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody respectively, 13 and 16 samples were positive for antigen analyses. The CSF samples of the C group did not present reactivity with the antibodies applied in the tests. Tests for 68 CSF samples of \"suspected\" NC group, were also conducted. According to the cytoproteic characteristics besides the reactivity for the anti-T. solium antibody study, the CSF samples of this group showed standard reactivity for antigen detection ranging also in accordance with the presence of antibodies and of the protein and/or cell alterations that the samples would or not present. Fractions of 14 and 18kDa were identified by immunoblot test only in the CSF samples of patients with NC using the IgG anti-Tso IgG anti-Tcra fractions and the anti-ES-Tcra monoclonal antibody. The anti-ES-Tcra monoclonal antibody has shown to be efficient for analyzing antigens by a comparing method of the ELISA test in CSF samples of patients with NC and the ES-Tcra antigen.
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Expressão do Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) de Plasmodium vivax na superfície de células COS-7 transfectadas para uso em estudos funcionais / Expression of Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) Plasmodium vivax on the surface of transfected COS-7 cells for use in functional studies

Barbedo, Mayara de Brito 29 February 2008 (has links)
O Antígeno-1 de Membrana Apical (AMA-1) de merozoítas de Plasmodium é um dos principais candidatos a compor uma vacina contra a malária. A função biológica de AMA-1 não é totalmente conhecida, entretanto, existem evidências que sugerem a participação dessa proteína na ligação a eritrócitos de diferentes espécies de Plasmodium. O objetivo deste estudo foi investigar a participação de AMA-1 de P. vivax (PvAMA-1) na ligação a eritrócitos humanos utilizando células COS-7 transfectadas com plasmídios recombinantes codificando diferentes regiões do ectodomínio de PvAMA-1. Para isso, os genes que codificam os domínios I-II ou III de PvAMA-1 foram inseridos no vetor pDisplay-EGFP, que permite a expressão das proteínas recombinantes em fusão com a porção N-terminal da Proteína Fluorescente Verde (GFP). Em paralelo, utilizamos construções contendo os genes que codificam a região C-terminal de 19 kDa da Proteína 1 de Superfície do Merozoíta (PvMSP119) e a região II da Duffy Binding Protein (PvDBP-RII). As quatro construções foram utilizadas para transfectar células COS-7 na presença de lipofectamina. A eficiência das transfecções transientes foi confirmada por imunofluorescência utilizando anticorpos específicos. Em seguida, estudamos a participação dos diferentes domínios de PvAMA-1 na ligação aos eritrócitos. Nossos resultados mostraram que os domínios contíguos I-II, ao contrário do domínio III, foram capazes de se ligar a eritrócitos in vitro. Essa ligação foi específica, pois soros de indivíduos infectados por P. vivax e soros policlonais de camundongos contendo anticorpos anti-PvAMA-1 foram capazes de inibir essa ligação em 82,0% e 79,8%, respectivamente. Além disso, anticorpos monoclonais dirigidos contra o domínio II dessa proteína foram capazes de inibir parcialmente essa ligação. Após o tratamento de eritrócitos com tripsina ou quimiotripsina, estas células perderam grande parte de sua capacidade de ligação, sugerindo que o receptor para PvAMA-1 tenha constituição predominantemente protéica. Em conjunto, nossos resultados podem servir de base para futuros estudos visando um melhor entendimento da função de anticorpos gerados durante a infecção natural ou induzidos após vacinação com PvAMA-1. / The Apical Membrane Antigen (AMA-1) of Plasmodium merozoites is one of the main candidates to be part of a vaccine against malaria. The biological function of AMA-1 is unknown. However, there are evidences that suggest the participation of this protein in the interaction with erythrocytes (RBC) of different Plasmodium species. Using transfected COS-7 cells with recombinant plasmids encoding different portions of the PvAMA-1 ectodomain, our aim was to identify possible domains of PvAMA-1 able to interact with human RBC. The genes that encoded domains I and II in combination or domain III of PvAMA-1 were cloned into the pDisplay-EGFP vector. This vector allows expression of the protein fused to the N-terminus of enhanced green fluorescent protein (GFP). In parallel, we also used constructions containing the genes that encoded the 19 kDa C-terminal region of Merozoite Surface Protein 1 (PvMSP119) and region II of the Duffy Binding Protein (PvDBP-RII). Constructions were used to transiently transfect COS-7 cells. The efficiency of expression of all constructs was confirmed by immunofluorescence assay using specific antibodies. After that, we studied the participation of the different domains of PvAMA-1 in the binding to human RBC. We found that COS-7 cells expressing domains I-II, but not domain III, bound to human RBC in vitro. This binding was specific, because sera from malaria-infected patients and mouse polyclonal sera containing antibodies to PvAMA-1 were able to block the adhesion by 82.0% and 79.8%, respectively. Moreover, monoclonal antibodies directed against domain II were partially inhibitory in the cytoadherence assays. The receptor recognized on the surface of COS-7 cells expressing the domains I and II was partially removed after human RBC were treated with trypsin or chymotrypsin, suggesting that its composition is predominantly protein. In conclusion, our results can be used as basis for future studies aimed at better understating the function of the antibodies generated during the natural infection or after vaccination with PVAMA-1.
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Expressão do Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) de Plasmodium vivax na superfície de células COS-7 transfectadas para uso em estudos funcionais / Expression of Apical Membrane Antigen 1 (AMA-1) Plasmodium vivax on the surface of transfected COS-7 cells for use in functional studies

Mayara de Brito Barbedo 29 February 2008 (has links)
O Antígeno-1 de Membrana Apical (AMA-1) de merozoítas de Plasmodium é um dos principais candidatos a compor uma vacina contra a malária. A função biológica de AMA-1 não é totalmente conhecida, entretanto, existem evidências que sugerem a participação dessa proteína na ligação a eritrócitos de diferentes espécies de Plasmodium. O objetivo deste estudo foi investigar a participação de AMA-1 de P. vivax (PvAMA-1) na ligação a eritrócitos humanos utilizando células COS-7 transfectadas com plasmídios recombinantes codificando diferentes regiões do ectodomínio de PvAMA-1. Para isso, os genes que codificam os domínios I-II ou III de PvAMA-1 foram inseridos no vetor pDisplay-EGFP, que permite a expressão das proteínas recombinantes em fusão com a porção N-terminal da Proteína Fluorescente Verde (GFP). Em paralelo, utilizamos construções contendo os genes que codificam a região C-terminal de 19 kDa da Proteína 1 de Superfície do Merozoíta (PvMSP119) e a região II da Duffy Binding Protein (PvDBP-RII). As quatro construções foram utilizadas para transfectar células COS-7 na presença de lipofectamina. A eficiência das transfecções transientes foi confirmada por imunofluorescência utilizando anticorpos específicos. Em seguida, estudamos a participação dos diferentes domínios de PvAMA-1 na ligação aos eritrócitos. Nossos resultados mostraram que os domínios contíguos I-II, ao contrário do domínio III, foram capazes de se ligar a eritrócitos in vitro. Essa ligação foi específica, pois soros de indivíduos infectados por P. vivax e soros policlonais de camundongos contendo anticorpos anti-PvAMA-1 foram capazes de inibir essa ligação em 82,0% e 79,8%, respectivamente. Além disso, anticorpos monoclonais dirigidos contra o domínio II dessa proteína foram capazes de inibir parcialmente essa ligação. Após o tratamento de eritrócitos com tripsina ou quimiotripsina, estas células perderam grande parte de sua capacidade de ligação, sugerindo que o receptor para PvAMA-1 tenha constituição predominantemente protéica. Em conjunto, nossos resultados podem servir de base para futuros estudos visando um melhor entendimento da função de anticorpos gerados durante a infecção natural ou induzidos após vacinação com PvAMA-1. / The Apical Membrane Antigen (AMA-1) of Plasmodium merozoites is one of the main candidates to be part of a vaccine against malaria. The biological function of AMA-1 is unknown. However, there are evidences that suggest the participation of this protein in the interaction with erythrocytes (RBC) of different Plasmodium species. Using transfected COS-7 cells with recombinant plasmids encoding different portions of the PvAMA-1 ectodomain, our aim was to identify possible domains of PvAMA-1 able to interact with human RBC. The genes that encoded domains I and II in combination or domain III of PvAMA-1 were cloned into the pDisplay-EGFP vector. This vector allows expression of the protein fused to the N-terminus of enhanced green fluorescent protein (GFP). In parallel, we also used constructions containing the genes that encoded the 19 kDa C-terminal region of Merozoite Surface Protein 1 (PvMSP119) and region II of the Duffy Binding Protein (PvDBP-RII). Constructions were used to transiently transfect COS-7 cells. The efficiency of expression of all constructs was confirmed by immunofluorescence assay using specific antibodies. After that, we studied the participation of the different domains of PvAMA-1 in the binding to human RBC. We found that COS-7 cells expressing domains I-II, but not domain III, bound to human RBC in vitro. This binding was specific, because sera from malaria-infected patients and mouse polyclonal sera containing antibodies to PvAMA-1 were able to block the adhesion by 82.0% and 79.8%, respectively. Moreover, monoclonal antibodies directed against domain II were partially inhibitory in the cytoadherence assays. The receptor recognized on the surface of COS-7 cells expressing the domains I and II was partially removed after human RBC were treated with trypsin or chymotrypsin, suggesting that its composition is predominantly protein. In conclusion, our results can be used as basis for future studies aimed at better understating the function of the antibodies generated during the natural infection or after vaccination with PVAMA-1.
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Momento de construir: a construção do caso clínico em psicanálise / Moment to construct: the construction of the clinical case in psychoanalysis and its effects

Fender, Wilian Donnangelo 28 June 2018 (has links)
O trabalho de análise não se encerra quando se encerra a sessão analítica. Não se encerra nem para o paciente - que segue em análise - nem para o analista que, a partir das sessões, pode seguir o trabalho na direção da construção do caso clínico. No entanto, o relato das sessões não faz o caso. Dessa inferência, surge nossa questão: o que é essa operação de construção realizada pelo analista que viabiliza essa transformação? E, mais ainda, quais os efeitos que essa construção possibilita? Dessa maneira, esta pesquisa tem como objetivo investigar a construção do caso clínico em psicanálise, de maneira a compreender essa operação e seus efeitos. Deste primeiro objetivo, desdobram-se três objetivos específicos, que correspondem aos objetivos de cada capítulo de nossa organização. O método utilizado foi a investigação da bibliografia específica da área. De cada capítulo, que organizam nossos resultados, temos que: 1) a noção de construção em psicanálise é uma noção que embasa a construção dos casos clínicos, 2) a noção de caso clínico em psicanálise corresponde a um depósito de tradições específicas, tornando o caso clínico escrito para publicação um gênero literário e 3) a construção do caso clínico em psicanálise pode ser organizada didaticamente em objetivos, funções e elementos que a compõem. Elaboramos ainda um quarto capítulo em que a experiência clínica é discutida, com base em nossos achados, a fim de elencar alguns efeitos clínicos que as noções investigadas implicam no tratamento e na clínica psicanalítica. Concluímos que, para que um paciente em psicanálise possa ser chamado de caso, é preciso que o material clínico passe pelo trabalho de construção, realizado por um analista, ou seja, um rearranjo dos elementos recolhidos das sessões analíticas e que possibilita a construção do caso. Apesar dos diversos objetivos, elementos e articulações que elencamos, possíveis na construção de um caso clínico, é dado que a maneira de construir é singular e é determinada pela prática de cada um e pelo destinatário da construção. No entanto, concluímos que se há uma construção, é possível um analista comunicar o caso para além de seu relato, trazendo elementos 10 clínicos, noções e conceitos psicanalíticos que formam a essencial dialética entre teoria e prática / The psychoanalytical work does not stop at the end of the psychoanalytical session. It does not end either for the patient - who keeps on going under analysis - nor for the analyst who, from the sessions, can continue the work in the direction of the construction of the clinical case. However, the report of the sessions does not mean the case. From this inference, our question arises: what is this construction operation carried out by the analyst that makes this transformation viable? And, what\'s more, what effects does this construction implies? Thus, this research aims to investigate the construction of the clinical case in psychoanalysis, in order to understand this operation and its effects. From this first objective, three specific objectives are defined, which correspond to the objectives of each chapter of our organization. The method used was the investigation of the specific bibliography of the area. From each chapter, which organizes our results, we have: 1) the notion of construction in psychoanalysis is a notion that bases the construction of clinical cases, 2) the notion of clinical case in psychoanalysis corresponds to a deposit of specific traditions, what makes the clinical case a literary genre and 3) the construction of the clinical case in psychoanalysis can be organized in objectives, functions and elements that compose it. We also elaborated a fourth chapter in which clinical experience is discussed, based on our findings, in order to list some clinical effects that have the construction of the case for the psychoanalytic clinic. We conclude that for a patient in psychoanalysis to be called a case, it is necessary that the clinical material goes through the construction work performed by an analyst, that is, a rearrangement of the elements collected from the analytical sessions and that allows the construction of the case. Despite the stated objectives of building the case, the way of building is unique and is determined by the practice of each and the recipient of the construction. However, if there is a construct, it is possible for an analyst to communicate the case rather than a report, bringing up psychoanalytical clinical elements, notions e concepts that make the constant dialogue and dialectic between theory and practice
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Cuidar de si, cuidar do outro - programa de aprimoramento do raciocínio clínico / Take care of yourself, take care of the other - program of improvement of clinical reasoning

Cerullo, Josinete Aparecida da Silva Bastos 31 March 2009 (has links)
Esta pesquisa teve como finalidade permitir a expressão das características do diagnosticador, a fim de que ele próprio reconhecesse como suas características pessoais influenciam suas decisões clínicas. OBJETIVOS: Testar um programa de formação permanente, baseado em histórias de vida, para o aprimoramento do raciocínio clínico em enfermagem; descrever os temas presentes nos processos cognitivos e metacognitivos dos participantes, desencadeados pelas estratégias do programa; analisar a influência das estratégias do programa sobre o raciocínio clínico dos participantes; descrever as intervenções realizadas pelas pesquisadoras. MÉTODO: Planejamento e execução de pesquisa-formação em três hospitais e uma escola de enfermagem de São Paulo, Brasil. Os dados foram constituídos pelas produções escritas dos participantes e pelas observações das pesquisadoras, anotadas em diário. Esses dados foram interpretados a partir da análise de seus conteúdos, com base em proposições teóricas sobre raciocínio clínico e sobre histórias de vida e formação. RESULTADOS: O programa foi implementado com um grupo de 7 enfermeiras de um hospital geral universitário e com dois grupos (um com 7 e outro com 6) de estudantes de graduação em enfermagem. Nos três grupos houve 8 encontros semanais em que ocorreram análises de textos, avaliações de saúde, estudos de caso de pacientes, escritas e partilhas das histórias de vida e projetos. Os temas recuperados com o programa referiram-se aos domínios afetivo e cognitivo. As participantes realizaram e refletiram sobre a coleta e interpretação de informações, elaboraram julgamentos clínicos, analisaram dilemas ético-morais e significados sobre o cuidado de si e dos outros. CONCLUSÕES: As reflexões sobre o autocuidado e as próprias histórias de vida (cuidado de si) permitiram às participantes reavivarem as múltiplas influências que as formam, e que formam os outros, e dinamizaram conhecimentos, habilidades e atitudes necessárias em suas relações com os usuários do sistema de saúde, colegas de trabalho e profissão (cuidado de outros) / The present study intended to enable the expression of the characteristics of diagnosing professionals, so that they could acknowledge to what extent personal characteristics could influence their clinical decisions. OBJECTIVES: To test a program of permanent training, based on life histories, to improve clinical reasoning in nursing; to describe the topics present in cognitive and metacognitive processes of participants, triggered by program strategies; to analyze the influence of program strategies over clinical reasoning of participants; to describe the interventions used by the researchers. METHOD: Planning and execution of the research program and training in three hospitals and one nursing school in Sao Paulo, Brazil. Data consisted of the writing productions of participants and the observations of the researchers, registered in diaries. Data were interpreted by analyzing the content based on theoretical assumptions about clinical reasoning and life histories and training. RESULTS: The program was implemented in a group of 7 nurses in a general university hospital and in two groups (7 and 6 members, respectively) of undergraduate nursing students. The three groups had 8 weekly meetings where they analyzed texts, healthcare examinations, case studies, written pieces and shared life histories and projects. The topics retrieved by the program comprised the affective and cognitive domains. Participants performed and reflected about the collection and interpretation of information, made clinical judgments, analyzed ethical-moral dilemmas, and the meanings of taking care of others and of themselves. CONCLUSIONS: Reflections about self-care and their own life histories (taking care of themselves) enabled the participants to revive the multiple influences that had formed them and had formed the others. They could maximize knowledge, skills and attitudes required to their relationships with healthcare users, co-workers and the profession (taking care of the others)
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A porta está aberta : aprendizagem colaborativa, prática iniciante, raciocínio clínico e terapia ocupacional

Marcolino, Taís Quevedo 27 February 2009 (has links)
Made available in DSpace on 2016-06-02T19:35:35Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2480.pdf: 4783175 bytes, checksum: 3c593fe679295457361e87367467406c (MD5) Previous issue date: 2009-02-27 / Universidade Federal de Minas Gerais / This action-research tries to reveal the contributions of a mentorship program focused on collaborative learning to improve professional development and clinical reasoning of occupational therapists in the beginning of the career, supported by the epistemology of practical rationality, narrative reasoning and learning community framework. The intervention included the participation on a collaborative group of six beginner occupational therapists, two experienced occupational therapists, and the mentor-researcher, and the writing of reflective journals by the beginner professionals. The information provided by the transcriptions of the group meetings and by the reflective journals was submitted to a threestage study: an analysis of the themes and their development; an analysis of the transformations of the modus operandi of the group in a timeline; and a final analysis of the reflective processes that showed up in the written narratives. The results reveal dynamical aspects of the collaborative work and indicate mutation points characterized by an open and honest treatment of the conflicts and by the building of mutual confidence, allowing the recognition of the doubts and enabling negotiation on the essential tension between being an occupational therapist and the practice of occupational therapy. The negotiations and constructs centered around the first pole involved dilemmas related to the professional competence in the beginning of the carrier, to the work in mental health, to the questions regarding professional identity and to the negotiations with institutional contexts. The production related to the second pole highlighted the construction of an assistance that contrasts with the biomedical model and the appropriation of theoretical concepts that sustain the practice of the occupational therapist regarding the triadic relation therapist-patientactivities. Besides that, the results of the reflexive processes revealed in the journals and viewed as clinical reasoning processes were interpreted differently of the literature, indicating that the procedural reasoning was aiming to the dynamics of the triadic relationship, in an intentional practice of creating therapeutic histories. Moreover, the results also highlighted relations between the situational diagnostic reasoning and the conditional one, reflecting an effort to view the patient in his/her daily life and culturemolded social and emotional conditions. Given this context, it is possible to view this research-action as an investigation embedded in the universe of professional formation and practice, and that gathers results that amplify the discussion of how powerful collaborative processes are in boosting investigative attitudes capable of sustaining the learning that care to the development of the therapist and his/her practice. By placing occupational therapy practice as a study subject and occupational therapists as agents capable of generating knowledge about it, this research revealed results that, besides highlighting constitutive aspects of a client-centered care, also indicates new directions to forthcoming further studies to strength the foundations of occupational therapy practice. / Esta pesquisa-ação procura compreender as contribuições de um programa de mentoria baseado na aprendizagem colaborativa para o desenvolvimento profissional e do raciocínio clínico de terapeutas ocupacionais em início de carreira, sustentada pelo referencial teóricometodológico da epistemologia da prática profissional, do raciocínio narrativo e da comunidade de aprendizagem. A intervenção da pesquisa caracterizou-se pela participação em um grupo de aprendizagem colaborativa, composto por seis terapeutas ocupacionais iniciantes, duas terapeutas ocupacionais experientes, e pela mentora-pesquisadora; além da produção de diários reflexivos pelas profissionais iniciantes. Os dados provenientes das transcrições dos encontros do grupo e das narrativas escritas nos diários foram submetidos a três etapas de análise: uma análise temática e do processo de desenvolvimento dos temas; uma análise das transformações nos modos de trabalhar no grupo em uma linha do tempo; e a análise dos processos reflexivos evidenciados nas narrativas escritas. Os resultados procuram elucidar aspectos relacionados à configuração do trabalho colaborativo ao longo do tempo, indicando momentos-chave de mudanças caracterizados pela elaboração aberta e honesta dos conflitos e pela construção de relações de confiança, permitindo a explicitação do nãosaber e a possibilidade de trabalhar sobre a tensão essencial entre ser terapeuta ocupacional e a assistência em terapia ocupacional. As negociações e elaborações centradas no primeiro pólo abarcaram dilemas relacionados à competência profissional no início da carreira, ao trabalho na saúde mental, às questões de identidade profissional e às negociações com os contextos institucionais. As produções em torno do segundo pólo evidenciaram a construção de uma assistência que se contrapõe ao modelo biomédico, e a apropriação de conceitos teóricos que sustentam a ação do terapeuta ocupacional no manejo da relação terapeuta-paciente-atividades. Além disso, os resultados referentes à análise dos processos reflexivos evidenciados nas narrativas escritas, tomados como processos de raciocínio clínico, suscitaram diferenças em relação à literatura da área, indicando que o raciocínio procedimental esteve voltado para a dinâmica da relação triádica, em um agir intencional para a construção de histórias terapêuticas; além disso, os resultados evidenciaram relações entre o raciocínio de diagnóstico situacional e o raciocínio condicional, no esforço de compreender o paciente em sua vida cotidiana, suas condições sociais e emocionais em uma cultura. Neste sentido, é possível localizar esta pesquisa-ação como uma investigação que transita no universo da formação e da prática profissional, e que congrega resultados voltados para ampliar a discussão sobre como processos colaborativos podem ser meios potentes para disparar atitudes investigativas capazes de sustentar uma aprendizagem voltada para o desenvolvimento do terapeuta e de sua prática. Ao colocar a terapia ocupacional como objeto de estudo e os terapeutas ocupacionais como sujeitos capazes de produzir conhecimentos sobre a prática, esta pesquisa também se deparou com resultados que, além de elucidarem aspectos constitutivos de uma assistência centrada no sujeito-alvo, também oferecem parâmetros para discussões e novas pesquisas interessadas em construir conhecimentos que possibilitem maiores e melhores sustentações para o que fazemos.
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Cuidar de si, cuidar do outro - programa de aprimoramento do raciocínio clínico / Take care of yourself, take care of the other - program of improvement of clinical reasoning

Josinete Aparecida da Silva Bastos Cerullo 31 March 2009 (has links)
Esta pesquisa teve como finalidade permitir a expressão das características do diagnosticador, a fim de que ele próprio reconhecesse como suas características pessoais influenciam suas decisões clínicas. OBJETIVOS: Testar um programa de formação permanente, baseado em histórias de vida, para o aprimoramento do raciocínio clínico em enfermagem; descrever os temas presentes nos processos cognitivos e metacognitivos dos participantes, desencadeados pelas estratégias do programa; analisar a influência das estratégias do programa sobre o raciocínio clínico dos participantes; descrever as intervenções realizadas pelas pesquisadoras. MÉTODO: Planejamento e execução de pesquisa-formação em três hospitais e uma escola de enfermagem de São Paulo, Brasil. Os dados foram constituídos pelas produções escritas dos participantes e pelas observações das pesquisadoras, anotadas em diário. Esses dados foram interpretados a partir da análise de seus conteúdos, com base em proposições teóricas sobre raciocínio clínico e sobre histórias de vida e formação. RESULTADOS: O programa foi implementado com um grupo de 7 enfermeiras de um hospital geral universitário e com dois grupos (um com 7 e outro com 6) de estudantes de graduação em enfermagem. Nos três grupos houve 8 encontros semanais em que ocorreram análises de textos, avaliações de saúde, estudos de caso de pacientes, escritas e partilhas das histórias de vida e projetos. Os temas recuperados com o programa referiram-se aos domínios afetivo e cognitivo. As participantes realizaram e refletiram sobre a coleta e interpretação de informações, elaboraram julgamentos clínicos, analisaram dilemas ético-morais e significados sobre o cuidado de si e dos outros. CONCLUSÕES: As reflexões sobre o autocuidado e as próprias histórias de vida (cuidado de si) permitiram às participantes reavivarem as múltiplas influências que as formam, e que formam os outros, e dinamizaram conhecimentos, habilidades e atitudes necessárias em suas relações com os usuários do sistema de saúde, colegas de trabalho e profissão (cuidado de outros) / The present study intended to enable the expression of the characteristics of diagnosing professionals, so that they could acknowledge to what extent personal characteristics could influence their clinical decisions. OBJECTIVES: To test a program of permanent training, based on life histories, to improve clinical reasoning in nursing; to describe the topics present in cognitive and metacognitive processes of participants, triggered by program strategies; to analyze the influence of program strategies over clinical reasoning of participants; to describe the interventions used by the researchers. METHOD: Planning and execution of the research program and training in three hospitals and one nursing school in Sao Paulo, Brazil. Data consisted of the writing productions of participants and the observations of the researchers, registered in diaries. Data were interpreted by analyzing the content based on theoretical assumptions about clinical reasoning and life histories and training. RESULTS: The program was implemented in a group of 7 nurses in a general university hospital and in two groups (7 and 6 members, respectively) of undergraduate nursing students. The three groups had 8 weekly meetings where they analyzed texts, healthcare examinations, case studies, written pieces and shared life histories and projects. The topics retrieved by the program comprised the affective and cognitive domains. Participants performed and reflected about the collection and interpretation of information, made clinical judgments, analyzed ethical-moral dilemmas, and the meanings of taking care of others and of themselves. CONCLUSIONS: Reflections about self-care and their own life histories (taking care of themselves) enabled the participants to revive the multiple influences that had formed them and had formed the others. They could maximize knowledge, skills and attitudes required to their relationships with healthcare users, co-workers and the profession (taking care of the others)

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