Submitted by Sandra Pereira (srpereira@ufrrj.br) on 2016-08-30T14:26:59Z No. of bitstreams: 1 2010 - Fernanda Peixoto Giori.pdf: 2362278 bytes, checksum: a15d423533272c981b15d7f22b714be1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-30T14:26:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010 - Fernanda Peixoto Giori.pdf: 2362278 bytes, checksum: a15d423533272c981b15d7f22b714be1 (MD5) Previous issue date: 2010-02-23 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior-CAPES / Brazil was adverted by the World Health Organization (WHO) as a sub-clinical area of serious vitamin A deficiency. Thus, the Brazilian Agricultural Research Corporation (EMBRAPA) is selecting and improving varieties of sweet potatoes with higher levels of Beta-carotene, pro-vitamin A. The carotenoids provitamin A amount of in foods does not necessarily correspond the amount that is absorbed and metabolized by the body. For a better determination of these values and knowledge of the mechanisms of its transport and absorption, it is necessary to understand the factors that lead to the food matrix release, until the absorption and the influence on the promotion and maintenance in human health. In order to perform preliminary studies of its absorption, this study aims to determine the efficiency of micellization of Beta -carotene in orange sweet potato (Ipomoea batatas, Lam), by applying a in vitro digestion as a tool for determining the bioaccessibility, which is the first step for bioavailability determination. This approach aims to simulate the oral, gastric and intestinal stages of human. The digestion was performed with 10 g of fresh samples, homozeneided with 5% (w/w) of canola oil. The extraction was performed with acetone and petroleum ether and the micellar fraction with petroleum ether, NaCl 10% (w / v) and NaSO4 2% (w/v) and involves the use of enzymes as -amylase , pepsin, bile, pancreatin, lipase and mucin, and inorganic compounds such as KCl, KSCN, NaH2PO4, Na3PO4, NaOH, NaCl, CaCl2, HCl, NaHCO3. The physiological variations are reproduced by the heating bath shaker with orbital gyrus (37?C) and centrifugation (5000g, 45 min). Quantification and determination of the profile of carotenoids were performed by high performance liquid chromatography (HPLC) with YCM ? C30 Carotenoid S-3 4.6 x 250mm column. Quantification of total carotenoids was performed by UV-VIs. The whole procedure was performed under controlled temperature (25 ? C) and light. The Beta -carotene was present mainly with levels of 86%, 73% and 82% for access 1, 2 and 3 and after digestion, the profile of Beta -carotene has set levels of 96%, 89% and 100%, respectively. The efficiency of micellization was 23.8%, 28% and 25% for 1.2 and 3 hits, indicating Beta -carotene transfer of the food matrix to micelles, corresponding to bioaccessibility of the compound. This methodology proved to be faster and cheaper, since the in vivo studies are costly, complex and require more time. / O Brasil foi classificado pela Organiza??o Mundial da Sa?de (OMS) como ?rea de car?ncia sub-cl?nica grave de vitamina A. Assim, a Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecu?ria (EMBRAPA) v?m selecionando e melhorando variedades de batata-doce com teores maiores de Beta-caroteno, composto pr?-vitamina A. A quantidade de caroten?ides pr?-vitamina A presentes nos alimentos n?o corresponde necessariamente ?quela quantidade absorvida e metabolizada pelo organismo. Para uma melhor determina??o destes valores e conhecimento dos mecanismos de transporte e absor??o deste composto, faz-se necess?rio, o entendimento dos fatores que levam ? sua libera??o da matriz do alimento, at? a extens?o de sua absor??o, bem como a influ?ncia na promo??o e manuten??o da sa?de humana. A fim de realizar estudos preliminares de sua absor??o, este trabalho visa determinar a efici?ncia de miceliza??o de Beta-caroteno de batata-doce de polpa alaranjada (Ipomoea batatas, Lam.), atrav?s da aplica??o de digest?o in vitro, como ferramenta de determina??o da bioacessibilidade, etapa preliminar para a determina??o da biodisponibilidade. Esta metodologia visa simular as etapas de digest?o oral, g?strica e intestinal humana. Foram pesados 10g de amostra in natura e adicionados 5% (p/p) de ?leo de canola. A extra??o do alimento foi realizada com acetona e ?ter de petr?leo e a da fra??o micelar, com ?ter de petr?leo, NaCl 10%(p/v) e NaSO4 2%(p/v) . Enzimas como: a-amilase, pepsina, bile, pancreatina, lipase e mucina, bem como compostos inorg?nicos, tais como KCl, KSCN, NaH2PO4, Na3PO4, NaOH, NaCl, CaCl2, HCl, NaHCO3. As varia??es fisiol?gicas foram reproduzidas pelo banho de aquecimento com giro orbital (37?C) e centrifuga??o (5000g;45 min). A quantifica??o e determina??o do perfil de caroten?ides foi realizada por cromatografia l?quida de alta efici?ncia (CLAE), com coluna YCM? Carotenoid C30 S-3 de 4,6 x 250mm. A quantifica??o de caroten?ides totais foi realizada por espectrofotometria UV-VIs. Todo o procedimento foi executado sob temperatura (25?C) e luz controlada. O Beta-caroteno estava presente majoritariamente, com teores de 86%, 73% e 82%, para as variedades 1, 2 e 3 e ap?s a digest?o, o perfil do Beta-caroteno passou a configurar teores de 96%, 89% e 100%, respectivamente. A efici?ncia de miceliza??o foi de 23,8%, 28% e 28,9% para as variedades 1,2 e 3, indicando a transfer?ncia do - caroteno da matriz do alimento para as micelas, correspondendo a bioacessibilidade deste composto. Esta metodologia demonstrou-se mais r?pida e mais barata, quando comparada aos estudos in vivo, que s?o mais onerosos, complexos e demandam mais tempo.

Submitted by Marcos Anselmo (marcos.anselmo@unipampa.edu.br) on 2016-04-04T17:11:51Z No. of bitstreams: 1 LIARA MERLUGO.pdf: 1163654 bytes, checksum: 112650b0950a34ee9e23411aa8adcab1 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-04-04T17:11:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LIARA MERLUGO.pdf: 1163654 bytes, checksum: 112650b0950a34ee9e23411aa8adcab1 (MD5) Previous issue date: 2015-03-12 / O gênero Erythrina está presente mundialmente nas regiões tropicais e subtropicais. Estudos fitoquímicos utilizando vários órgãos dessas plantas, demostraram a presença de alcaloides, flavonoides, pterocarpanos e triterpenóides. Várias espécies são encontradas no Brasil, dentre elas Erythrina falcata e Erythrina crista-galli, conhecidas popularmente como “corticeira” e utilizadas medicinalmente devido à ação sedativa, ansiolítica, anti-inflamatória e antihipertensiva. Este trabalho objetivou estudar a composição química de extratos vegetais obtidos de folhas de E. falcata e E. crista-galli e ainda, avaliar o potencial hipotensor in vivo de extratos de E. falcata. Inicialmente, após coleta do material, as folhas foram selecionadas, submetidas à secagem e trituradas. Então, foram submetidas à extração por maceração exaustiva utilizando etanol 40% (v/v) e por infusão utilizando água a 100 °C. Para a caracterização em termos de fenólicos totais e conteúdo de flavonoides, os extratos foram quantificados por espectrofotometria. Para o ensaio cromatográfico, os extratos foram analisados por CLAE em sistema de fase reversa, com fase móvel consistindo de acetonitrila:água em eluição por gradiente e fluxo de 1,0 mL/min. Para a análise por CLUEESI- MS, a fase móvel foi composta de mistura de acetonitrila:metanol (4:1) e ácido fórmico pH 3,0, com eluição por gradiente e fluxo de 0,2 mL/min. A detecção por espectrometria de massas foi conduzida a partir das seguintes condições: N2 como nebulizante; energia de colição 4.0 eV; temperatura da fonte do eletrospray e do gás de solvatação 100°C e 120°C, respectivamente; voltagem do capilar 3000V; voltagem do cone 40V. Os espectros de massas foram obtidos na faixa de m/z 200-800. A avaliação dos efeitos hemodinâmicos foi realizadaem ratos wistar normotensos, anestesiados com uretana (1,4 mg/Kg), via canulação da artéria carótida (para a verificação da PAS, PAD e FC) e veia jugular (para administração do extratose drogas). A avaliação do potencial hipotensor da E. falcata foi investigada através da realização de uma curva crescente de administração dos extratos e os possíveis mecanismos de ação envolvidos foram analisados através da administração de diferentes drogas sendo elas: L-NAME (30 mg/kg); losartana (10 mg/Kg); hexametônio (20mg/Kg) e propranolol (5mg/kg). Os teores de fenólicos totais para E. falcata e E. crista-galli estiveram na faixa de 1,3193 – 1,4989 mgEAG/mL para os extratos obtidos por maceração e de 0,8771 – 0,9506 mgEAG/mL para as infusões. Em flavonoides totais, os conteúdos estiveram na faixa de 7,7829 – 8,1976 ER mg/g para os extratos obtidos por maceração e 9,3471 – 10,4765 ER mg/g para as infusões. Na determinação por CLUE-MS, os dados de íon molecular e fragmentos de massa indicaram a composição predominante em alcaloides, sugerindo-se os componentes erythristemine, 11β-methoxyglucoerysodine, erysothiopine, 11β- hydroxyerysodine–glicose e 11-hydroxyerysotinone-ramnosídeo. O extrato aquoso da E. falcata mostrou-se um potente hipotensor dose-dependente, causando uma queda na PAS de 23 a 35% e na PAD de 32 a 49% para ambos os extratos estudados, sem influenciar a FC, podendo este efeito estar relacionado com a via dos receptores β-adrenérgicos. / The genus Erythrina is present worldwide in tropical and subtropical regions. Phytochemical studies using various organs of these plants demonstrated the presence of alkaloids, flavonoids, pterocarpans and triterpenoids. Several species are found in Brazil, among them Erythrina falcata and Erythrina crista-galli, which are popularly known as “corticeira” and. used medicinally due to it action as sedative, anxiolytic, anti-inflammatory and antihypertensive. The present study aimed to investigate the chemical composition of extracts obtained from leaves of E. falcata and E. crista-galli, and still, to evaluate the hypotensive potential in vivo of E. falcata extracts. Initially, after collection of material plant, the leaves were selected, submitted to dryness and powdered. Then, submitted to extration by exhaustive maceration using ethanol 40% (v/v) and by infusion using water at 100 °C. For characterization in terms of phenolics and flavonoid content, the extracts were quantified by spectrophotometry. For chromatographic assay, the extracts were analysed by HPLC in reversed phase system, with a mobile phase consisting of acetonitrile:water in gradient elution and flow rate of 1.0 mL/min. For analysis by UPLC-ESI-MS, the mobile phase consisted in a mixture of acetonitrile:methanol (4:1) and 0.1% formic acid pH 3.0, with a elution by gradient and flow rate of 0.2 mL/min. The MS detection was performed following the conditions: N2 as nebulizing; collision energy 4.0 eV; temperature of electrospray source and desolvation gas 100°C and 120°C, respectively; capillary voltage 3000V; sample cone 40V. Mass spectra were recorded in the range of m/z 200-800. The evaluation of the hemodynamic effects was performed in normotensive Wistar rats, anesthetized with urethane (1.4 mg/kg) by cannulation of the carotid artery (for verification of SBP, DBP and HR) and jugular vein (for administration of the extracts and drugs). The hypotensive potential of E. falcata was investigated by conducting a growing curve administration of the extracts and the possible mechanisms involved were analyzed by administering different drugs such as: L-NAME (30 mg/kg); losartan (10 mg/kg); hexamethonium (20 mg/kg) and propranolol (5 mg/kg). The total phenolics content for E. falcata and E. crista-galli was from 1.3193 to 1.4989 mgGAE/mL for maceration and 0.8771 to 0.9506 mgGAE/mL for infusions. In total flavonoid, the content was from 7.7829 to 8.1976 mg RE/g for maceration and 9.3471 to 10.4765 RE mg/g for infusions. The molecular ions and mass fragments obtained by UPLCMS indicated the predominant composition in alkaloids, suggesting the components erythristemine, 11β-methoxyglucoerysodine, erysothiopine, 11β-hydroxyerysodine-glucose and 11-hydroxyerysotinone-rhamnoside. The aqueous extract of E. falcata showed to be a potent dose-dependent hypotensive, decreasing the SBP in 23 to 35% and DBP in 32 to 49% for both extracts, without influence in HR, and this effect may be due to the route of β- adrenergic receptors.

A fotoestabilidade é uma propriedade das moléculas que, quando utilizada como parâmetro farmacêutico, descreve como um fármaco responde à exposição à luz (solar ou artificial). No presente trabalho, foi avaliada a fotoestabilidade dos fármacos loratadina (LORA) e acetazolamida (ACZ) e de complexos LORA-ciclodextrinas. O estudo de fotoestabilidade de LORA (Capítulo 2) indicou que o fármaco é estável quando no estado sólido, porém, ocorre surgimento de coloração intensa. Por outro lado, quando em solução, observou-se degradação do fármaco, com surgimento de vários fotoprodutos denominados F1 a F15, dentre os quais foi possível identificar cinco compostos: F4 (C13H10N), F10 (C14H10CIN), F8 (C20H18CIN2O), F9 (C19H18CIN2) e F14 (C17H14CIN). A validação do método analítico CLAE, utilizado para quantificação de LORA em especialidades farmacêuticas (comprimidos e xaropes) é descrita no Capítulo 3. Na avaliação da fotodegradação forçada de formulações líquidas contendo LORA, foram degradados até 50% do fármaco. As formulações sólidas apresentaram-se fotoestáveis, observando-se perda de menos de 5% do fármaco. Não foram encontrados produtos de fotodegradação nas formulações, quando analisadas tal qual, obtidas do mercado. Dessa forma, as embalagens primárias garantiram sua estabilidade. A complexação de LORA com ciclodextrinas (Capítulo 4) mostrou-se um recurso bastante interessante para melhorar a fotoestabilidade do fármaco, uma vez que, após 12 horas de irradiação luminosa, é possível recuperar até 99% deste, quando na forma de complexo com γ-CD na proporção 1:1. Finalmente, o Capítulo 5 traz o método CLAE desenvolvido e validado para avaliação da acetazolamida (ACZ), o qual mostrou-se adequado para a quantificação do fármaco, obtendo-se ótima linearidade, precisão, exatidão e seletividade. Segundo as condições do guia Q1B, a ACZ se manteve estável quando submetida à radiação luminosa utilizando meios aquosos e no estado sólido. No entanto, a fotoestabilidade da ACZ foi afetada na presença de metanol, sendo possível quantificar três impurezas. / Photostability is a property of molecules that, when used as a pharmaceutical parameter, can describe how a drug responds to exposure to light (either solar or artificial). In this study, the photostability of the drugs loratadine (LORA) and acetazolamide (ACZ), as well as LORA-cyclodextrin complexes, was evaluated. A study of the photostability of LORA (Chapter 2) indicated that the drug is stable in its solid form, however intense coloring does occur. On the other hand, when in solution form, degradation of the drug was observed, with the appearance of several photoproducts that we labled F1 to F15, among which it was possible to identify five compounds: F4 (C13H10N), F10 (C14H10CIN), F8 (C20H18CIN2O), F9 (C19H18CIN2) and F14 (C17H14CIN). The validation of the analytical method by HPLC, used for the quantification of LORA in pharmaceutical products (tablets and syrups) is detailed in Chapter 3. In the evaluation of forced photodegradation of liquid formulations containing LORA, up to 50% of the drug was degraded. The solid formulations proved to be photostable, with a loss of less than 5% of the drug. No photodegradation products were found in the formulations when they were analyzed \"as is\" (the way they were obtained from the commercial market). Accordingly, their primary packaging protected their stability. The complexation of LORA with cyclodextrins (Chapter 4) proved to be an effective resource for improving the photostability of the drug, since, after 12 hours of luminous radiation, it was possible to recover up to 99% of the drug, when in the complex form with γ-CD, in the proportion 1:1. Finally, Chapter 5 describes the HPLC method developed and validated for the evaluation of acetazolamide (ACZ), which proved to be adequate for the quantification of the drug, with the attainment of optimal linearity, precision, exactness and selectivity. According to the conditions of the Q1B guideline, ACZ was stable when subjected to luminous radiation using aqueous means and in its solid state. However, the photostability of ACZ was affected by the presence of methanol, and we were able to quantify three impurities.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2016-08-31T14:06:01Z No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda_Revisão Final.pdf: 5433077 bytes, checksum: 30cfa44a7a7312cf3778c6606c92d4ff (MD5) / Approved for entry into archive by Vanessa Reis (vanessa.jamile@ufba.br) on 2016-09-02T16:14:00Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda_Revisão Final.pdf: 5433077 bytes, checksum: 30cfa44a7a7312cf3778c6606c92d4ff (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-02T16:14:00Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_Fernanda_Revisão Final.pdf: 5433077 bytes, checksum: 30cfa44a7a7312cf3778c6606c92d4ff (MD5) / Braskem / A nafta e o etanol são matérias-primas importantes da indústria petro e alcoolquímica respectivamente, tendo o eteno e o propeno como seus principais derivados da primeira geração. A eficiência desses processos produtivos pode ser comprometida por traços de compostos carbonílicos e carboxílicos voláteis neles contidos. Tal contaminação pode afetar, por exemplo, a qualidade de embalagens de alimentos, uma vez que tais derivados são compostos precursores para produção dos plásticos utilizados nessas embalagens. No presente trabalho foram desenvolvidos métodos simples para a determinação de compostos carbonílicos e carboxílicos em matrizes líquidas e gasosas derivadas do petróleo por cromatografia em fase gasosa com sistema de detecção por ionização em chama (CG/DIC), cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG/EM) e CG/DIC acoplado a sistema analítico Dean Switch. Para a determinação dos ácidos acético, propanóico, butanóico e pentanóico em matrizes líquidas e gasosas, a cromatografia em fase gasosa com sistema de detecção por ionização em chama por injeção direta utilizando coluna cromatográfica capilar FFAP (for free fatty acids) foi a técnica mais adequada. O desvio padrão relativo (RSD) obtido foi de 5,6% a 6,5% para 2 g.g-1 em n-hexano, 2,1% a 5,8% para 10 g.g-1 em etanol e 4,2 a 7,7% para 10 g.g-1 em propeno. Os limites de detecção encontrados foram de 0,036 - 0,12 g.g-1 em hidrocarbonetos gasosos (eteno e propeno), 0,047 - 0,16 g.g-1 em matrizes puras de hidrocarbonetos líquidos (n-hexano) e 0,08 – 0,18g.g-1 em matriz alcoólica (etanol). Para a determinação do teor de ácidos carboxílicos em matrizes complexas como a nafta, a CLAE foi a técnica utilizada, precedida de extração líquido- Fernanda Seabra Vianna Vieira 11/238 líquido sob condições controladas. O RSD obtido foi de 5,5% a 7,7% para 40 g.g-1 e o limite de detecção médio foi de 4 g.g-1. Para a determinação dos teores dos compostos carbonílicos (aldeídos e cetonas) em matrizes líquidas e gasosas, a cromatografia empregando o sistema analítico comercial Dean Switch mostrou-se como a mais adequada. Valores de RSD da ordem de 2,6% a 3,5% para propeno; 0,9% a 1,4% para n-hexano e 1,6% a 2,6% para a nafta em padrões contendo respectivamente 2 g.g-1, 2 g.g-1 e 10 g.g-1. Os limites de detecção de 0,033 - 0,084 g.g-1 (propeno), 0,021- 0,09 g.g-1 (n-hexano) e 0,049 - 0,26 g.g-1 (nafta) confirmam a eficiência de detecção e quantificação para matrizes de hidrocarbonetos de origem petroquímica tipicamente inferiores a 10 g.g-1. A partir dos resultados obtidos foi feita uma avaliação comparativa entre as técnicas, evidenciando as vantagens e desvantagens de cada método para cada aplicação específica. / Although metals and nitrogen & sulfur compounds have been the main concern in the petroleum industry, issues on the harmful effects on catalysts poisoning and products contamination of other contaminants such as oxygen- containing compounds have been raised. Trace amounts of carbonyl and carboxyl compounds in petroleum products can lead to catalyst poisoning and overall decrease on reactions yield. Furthermore, oxygenates may be present in the polyethylene and polypropylene resins, affecting the quality of the food packagings obtained from these materials. The available literature on C1-C5 aldehydes, ketones and carboxylic acids determination in petroleum products such as naphtha, ethylene and propylene is quite rare. Therefore, in the present work we intend to review the analytical approaches that could be applied to such analytical purpose, present the features of each potential technique and some studies performed on somewhat similar matrices. For acetic, propanoic, butanoic and pentanoic acids determination in liquid and gas matrices, gas chromatography with flame ionization detector and FFAP for free fatty acids capillary column was the most appropriate method. The relative standard deviation (RSD) was 5.6% to 6.5% in the range of 2 g.g-1 in n-hexane, 2.1% to 5.8% in the range of 10 g.g-1 in ethanol and 4.2 to 7.7% in the range of 10 g.g-1 in propylene. The detection limits found were from 0.036 to 0.12 g.g-1 in hydrocarbons gases (ethylene and propylene), 0.047 to 0.16 g.g-1 in pure liquid hydrocarbons (n-hexane) and 0.08 to 0.18 g.g-1 in alcoholic matrices (ethanol). For carboxylic acid determination in complex matrices such as naphtha, the HPLC technique was used, preceded by liquid-liquid extraction under Fernanda Seabra Vianna Vieira 9/238 controlled conditions. The RSD obtained was 5.5% to 7.7% in the range of 40 g.g-1 within the average detection limit was 4 g.g-1. For carbonyl compounds (aldehydes and ketones) determination in gas and liquid matrices, the commercial analytical system Dean Switch proved to be the most appropriate. RSD values of around 2.6% to 3.5% for propylene; 0.9% to 1.4% for n-hexane and 1.6% to 2.6% for naphta in standards containing respectively 2 g.g-1, 2 g.g-1 and 10 g.g-1. The detection limit of 0.033 to 0.084 g.g-1 (propylene), 0.021 to 0.09 g.g-1 (n-hexane) and 0.049 to 0.26 g.g-1 (naphtha) confirm the efficiency of detection and quantification for range of hydrocarbons of petrochemical origin typically less than 10 g.g-1.

Orientador: Marcos Antonio Corrêa / Resumo: O aumento da preocupação com a estética e saúde corporal vem elevando a demanda por produtos cosméticos contendo ativos que previnam o envelhecimento e outras alterações cutâneas. O ácido ursólico (AU), ativo natural extraído de plantas como o alecrim e o manjericão, tem se demonstrado interessante para incorporação em cosméticos por possuir potencial antioxidante, despigmentante, propriedade antimicrobiana, entre outras. Este trabalho teve como objetivo avaliar a possibilidade da utilização do AU como um ativo cosmético multifuncional através da avaliação da eficácia e citotoxicidade in vitro do AU, bem como o preparo e avaliação de uma emulsão contendo o ativo. O potencial antioxidante do AU foi avaliado por meio de métodos de inibição de radicais como o 1,1-difenil-2-picrilhidrazila (DPPH•) e o 2,2 -azino bis-(3-ethylbenzothiazoline)-6-sulfonic acid (ABTS•+), tendo demonstrado atividade antioxidante, com IC50 de 235,61 µg/mL para técnica com DPPH• e 107,17 µg/mL para técnica com ABTS•+. A atividade despigmentante foi verificada através da inibição da enzima tirosinase, utilizando 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine (L-DOPA) como substrato, e apresentando como resultado um IC50 de 338,00 µg/mL. Para a avaliação da atividade antimicrobiana diversas cepas foram testadas a partir da determinação da concentração inibitória mínima (CIM) pela técnica de diluição em microplacas, e da concentração bactericida mínima (CBM) pela replicação em placa de Petri, seguindo suplemento M100-S16 do... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Mestre

Bauhinia forficata, Leguminosae, é conhecida popularmente como pata-devaca e seus principais constituintes químicos são flavonóides. Ë comumente usada como antidiabética, mas existem relatos a respeito de suas atividades antioxidante e antiedematogênica. A fim de avaliar-se o comportamento de seus constituintes químicos frente a variações de temperatura e umidade, realizou-se estudo de estabilidade acelerada (50 ºC ± 2 oC e 90% ± 5% U.R.), onde a substância química majoritária (SQM) serviu como marcador para os devidos cálculos e, portanto, o seu isolamento prévio tornou-se imprescindível. Um método devidamente validado por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) foi utilizado para as análises e através das mesmas pode-se predizer uma reação de segunda ordem e, por conseguinte, um tempo de vida útil de 2,63 dias e um tempo de meia-vida de 23,65 dias. Avaliou-se, ainda, as atividades antioxidante (DPPH), antiedematogênica (edema em pata de ratos induzido pela carragenina) e anticolinesterásica (autobiografia). Para a atividade antioxidante, dos extratos testados, o butanólico foi o que demonstrou maior ação (54,73 µl/ml) sendo, no entanto, inferior ao padrão Ginkgo biloba (42,51 µl/ml). Na avaliação da atividade antiedematogênica, o extrato aquoso testado demonstrou um máximo de inibição de 76,5%. Ao testar-se a atividade anticolinesterásica de produtos isolados obtidos a partir de B. forficata, nenhuma ação significativa foi observada exigindo estudos complementares.

O presente trabalho objetivou estudar as principais variáveis analíticas associadas aos métodos espectrofotométricos de quantificação do teor de taninos utilizando caseína e pó-de-pele, os reagentes de Folin-Denis e Folin-Ciocalteu, bem como a avaliação de diferentes tipos de PVPP (Divergan® F, Divergan® RS, Kollidon® CL e PVPP-P6755) na substituição dos substratos protéicos. Para tanto, dois métodos de análise, um espectrofotométrico e outro por CLAE foram desenvolvidos, utilizando os polifenóis catequina, ácido tânico, ácido gálico e pirogalol como substâncias de referência e rutina como flavonóide modelo. Para maiores inferências uma solução extrativa de folhas secas de Psidium guajava L também foi quantificada. A análise comparativa assinalou o uso vantajoso do reagente de Folin-Ciocalteu, em relação ao reagente de Folin-Denis. Em termos de reprodutibilidade, a caseína grau técnico (GT) mostrou-se superior à caseína purificada, embora essa última possua maior afinidade pelos polifenóis testados. Contudo, as análises por UV-VIS e por CLAE em comprimentos de onda de 280m e 352 nm, demonstraram que tanto a caseína GT quanto o pó-de-pele não são seletivos para complexar taninos, de acordo com as normas do ICH. Tanto o pó-de-pele quanto a caseína GT foram capazes de complexar polifenóis e rutina de maneira inespecífica. Isso foi evidenciado quando misturas de um único polifenol e rutina ou a fração flavonoídica de P. guajava foram testadas. A capacidade de complexação de polifenóis e rutina por parte da PVPP foi avaliada por UV-VIS, DSC e CLAE. Os melhores resultados foram observados para PVPP-P6755, no entanto com restrições. De maneira similar a caseína GT e pó-depele a PVPP-P6755 foram capazes de complexar de maneira inespecífica rutina e outros flavonóides do extrato de P. guajava. Uma validação plena para o caso específico de folhas de P. guajava é questionável. No entanto, o método baseado na utilização de PVPP mostrou-se passível de padronização utilizando 500,0 mg de pó de droga, 2,0 mL de reagente de Folin-Ciocalteu, tempo de leitura 30 min após adição desse reagente e quantificação em 760 nm. Sob essas condições, a análise comparativa demonstrou que 50,0 mg de PVPP foram, em termos analíticos, equivalentes a 100,0 mg de pó-de-pele ou a 750 mg de caseína GT.

Phytochemical studies performed previously under laboratory conditions using the species Annona muricata resulted in the extracion of a mixture of acetogenins, which is a class of substances very difficult to separate, despite its large spectra of biological activities. The insectidal properties of this class of compounds which is exclusive of the Annonaceae family have drive our attention to its use against the mosquito Aedes aegypti. The methodology used to extract acetogenins from Annona muricata and Annona squamosa crude ethanolic extracts was the reversed phase High Performance Liquid Chromatography (HPLC). By means of this technique seven acetogenins, two from seeds of Annona muricata AMS2 (tR=8,5), AMS3 (tR=9,5) and five from seeds of Annona squamosa ASS2A (tR=4,5), ASS2B (tR=5,0), ASS2C (tR=5,5), ASSX (tR=7,5) and ASS3 (tR=8,0) were extracted. Based on the triangle of solvent selectivity an special mobile phase composition was developed for reference compound ASS3 from seeds of A. squamosa a betted ACN/MeOH/THF/H2O 16:66:4:14 v/v. Among the seven acetogenins extracted from the seeds of Annona muricata and Annona squamosa, only two: AMS2 and ASS3 had their chemical structures identifield as such: Anonacina and Squamocina A, also know as Anonine I, with the aid of nuclear magnetic ressonance (1H and 13C) and infrared spectroscopy. The molecular ion of the identifield acetogenins were determined by mass spectrometry using the chemical ionization as a technique. / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Estudos fitoquímicos realizados anteriormente em nossos laboratórios com a Annona muricata resultaram no isolamento de uma mistura de acetogeninas, uma classe de produtos naturais de difícil separação e com potentes e variadas atividades biológicas. As propriedades inseticidas desta classe de compostos até hoje exclusiva da família Annonaceae direcionou nossa atenção para o uso contra o mosquito Aedes aegypti. A Cromatografia Liquida de Alta Eficiência (CLAE/HPLC) no modo reverso de eluição aliada à detecção pelo espectrofotômetro de arranjos de diodos (UV/VIS), foi a técnica empregada no isolamento das acetogeninas presentes nos extratos preparados em etanol das sementes de Annona muricata e Annona squamosa. Foram isoladas sete acetogeninas. Duas das sementes de A. muricata, AMS2 (tR=8,5) e AMS3 (tR=9,5), e cinco das sementes de A. squamosa, ASS2A (tR=4,5), ASS2B (tR=5,0), ASS2C (tR=5,5), ASSX (tR=7,5) e ASS3 (tR=8,0). Baseado no triângulo da seletividade de solventes, uma composição de fase móvel foi desenvolvida especificamente para o composto marcador ASS3 das sementes de A. squamosa: ACN/MeOH/THF/H2O 16:66:4:14 v/v. Dentre as sete acetogeninas extraídas duas tiveram suas estruturas químicas identificadas com o uso da ressonância magnética (1H and 13C) e espectroscopia no infravermelho: AMS2 e ASS3, tratando-se das acetogeninas Anonacina e Esquamocina A também conhecida como Anonina I, respectivamente. O íon molecular foi estabelecido por espectrometria de massas usando a técnica de ionização química.

Submitted by Ana Hilda Fonseca (anahilda@ufba.br) on 2014-09-22T12:56:30Z No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Silvana Vieira Floresta Gomes.pdf: 9388245 bytes, checksum: 467de36ea93f9b00126ef9eea6d68d65 (MD5) / Approved for entry into archive by Fatima Cleômenis Botelho Maria (botelho@ufba.br) on 2014-09-23T13:20:12Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Silvana Vieira Floresta Gomes.pdf: 9388245 bytes, checksum: 467de36ea93f9b00126ef9eea6d68d65 (MD5) / Made available in DSpace on 2014-09-23T13:20:13Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Doutorado Silvana Vieira Floresta Gomes.pdf: 9388245 bytes, checksum: 467de36ea93f9b00126ef9eea6d68d65 (MD5) / CNPq / O presente trabalho descreve a aplicação de planejamento Box-Behnken para otimização de método de extração de flavonoides, usando extração acelerada com solventes (ASE), e o desenvolvimento e validação de um método analítico por CLAE com detecção por arranjo de diodos (DAD), para a quantificação dos principais marcadores químicos nas folhas de Passiflora alata, P. capsularis, P. cincinnata, P. edulis f. flavicarpa, P. edulis f. edulis, P. galbana, P. gibertii, P. maliformis, P. malacophylla, P. morifolia, P. mucronata, P. quadrangularis, P. racemosa, P. setacea, P. suberosa, P. tenuifila e P. vitifolia, cultivadas na Embrapa Mandioca e Fruticultura, Cruz das Almas-BA. A otimização do método de extração no extrator acelerado com solventes (ASE) foi realizada através de um planejamento Box- Behnken de três fatores, proporção da solução hidroetanólica (%), temperatura e nº de ciclos e três níveis experimentais (+1, 0, -1), com o objetivo de se obter as melhores condições para a determinação do teor de fenólicos totais, flavonoides totais e rendimento (%), avaliando simultaneamente as respostas processadas. As condições otimizadas foram a proporção hidroetanólica 64% (v/v), 80 ºC e 5 ciclos de extração. Um método analítico de perfil cromatográfico foi desenvolvido e validado, utilizando CLAE-DAD, para a análise dos extratos hidroetanólico 64% (v/v) das folhas de espécies de Passiflora estudadas. Os perfis cromatográficos das espécies de Passiflora demonstraram ser bastante diferentes entre si, o que possibilitará a sua aplicação no controle de qualidade químico, na identificação e determinação da autenticidade de fitoterápicos produzidos a partir de diferentes espécies de Passiflora de nossa flora. O método cromatográfico validado foi aplicado na quantificação dos flavonoides C-glicosilados, orientina, isoorientina, vitexina, isovitexina e rutina nas diferentes espécies de Passiflora. O teste de atividade antioxidante utilizando a metodologia do radical estável DPPH demonstrou que os extratos de P. capsularis, P. cincinnata, P. edulis f. flavicarpa, P. edulis f. edulis, P. galbana, P. gibertii, P. malacophylla, P. suberosa, P. tenuifila e P. vitifolia possui atividade antioxidante quando comparado ao padrão ácido gálico. No teste de atividade anticolinesterásica, as espécies de Passiflora não apresentaram atividade inibitória da enzima acetilcolinesterase. A atividade citotóxica in vitro utilizando o método de MTT demonstrou que, dos extratos de Passiflora analisados, somente o extrato de P. alata apresentou potencial citotóxico relevante, com percentual de inibição do crescimento tumoral maior que 90%, frente as linhagens de células do ovário – humano, carcinoma do cólon e glioblastoma. / This work describes an application of Box- Behnken experimental planning for the optimization of a method for flavonoid extraction employing accelerated solvent extraction (ASE), and development and validation of an analytical method by HPLC with diode array detection (DAD) for quantification of the major chemical markers in the leaves of Passiflora alata, P. capsularis, P. cincinnata, P. edulis f . flavicarpa, P. edulis f. edulis, P. galbana, P. gibertii, P. maliformis, P. malacophylla, P. morifolia, P. mucronata, P. quadrangularis, P. racemosa, P. setacea, P. suberosa, P. tenuifila and P. vitifolia grown at Embrapa Mandioca e Fruticultura, Cruz das Almas-BA. The optimization of the extraction method on accelerated solvent extractor (ASE) was performed by using a Box- Behnken application of three factors, hydroethanol solution proportion (%), temperature and number of ASE cycles and three experimental levels (+1, 0, - 1), with the purpose to obtain the best conditions for the determination of extract yield (%), total phenolic contentand total flavonoid, while assessing the responses processed. The observed optimized conditions were: proportion hydroethanol 64% (w/w), 80 °C and 5 cycles of extraction. An analytical profile chromatographic method was developed and validated using HPLC-DAD for the analysis of hydroethanolic extract 64% (w/w) of the Passiflora leaves species studied. The chromatographic profiles of the Passiflora species proved to be quite different, which enables its application in the chemical quality control, identification and determination of the authenticity of herbal medicines produced from different Passiflora species from brazilian flora. The validated chromatographic method was applied in the quantification of flavonoid C- glycosides, orientin, isoorientina , vitexin, isovitexin and rutin in different species of Passiflora. The test of antioxidant activity using the methodology of the stable radical DPPH showed that extracts of P. capsularis, P. cincinnata, P. edulis f. flavicarpa, P. edulis f. edulis, P. galbana, P. gibertii, P. malacophylla, P. suberosa, P. tenuifila and P. vitifolia has antioxidant activity when compared to standard gallic acid. In the test of anticholinesterase activity, the Passiflora species showed no inhibitory activity of the enzyme acetylcholinesterase. The in vitro cytotoxic activity using the MTT method showed that extracts of Passiflora analyzed, only the extract from P. alata showed cytotoxic relevant to the percentage of tumor growth inhibition higher than 90% against the ovarian cell line - human colon carcinoma and glioblastoma.

Nowadays the importance and interest for vitamins in human and animal health increased. When vitamin concentration is low in the raw material and is necessary to add multivitamin complexes to the animal diet a representative cost is incorporated to animals nutrition. The proposal of this study was evaluation and validation of a methodology by high performance liquid chromatography to quantify vitamin A in polyvitamin concentrates for animal nutrition. The method developed was adapted for the Micotoxicologic Analysis Laboratory conditions, placed at Universidade Federal de Santa Maria (RS), from a method published at United States Pharmacopoeia . The vitamin A extraction from concentrates was done using hexane as extraction solvent after hydrolysis and saponification. The recovery found for this method was 85.98% with a mean of relative standard deviation (RSD) of 1,52% at the repetition test using premix samples. All analyses were performed using a HPLC system with UV detection at 325 nm, a reversed phase column at 1 mL/min flow rate and 40oC of temperature. The mobile phase used was methanol:water (98:2, v/v) at isocratic mode. The calibration curve was constructed using standard vitamin A (All-trans-retinol) at concentrations varying from 0.475 to 9.50 μg/mL. The correlation coefficient (r2) was 0.9995, the detection limit 0.095 μg/mL and quantification limit of 0.24 μg/mL for Aderex (compound without vitamin A with non uniform particles) fortified samples.Observing the results obtained, in 15 premix samples analyzed, six samples (40 %) of them present values of vitamin A greater than the desired concentration. Four samples (26,67 %) had values bellow the expected and only five (33,33 %) presented values between the minimum and maximum preconized for birds and pig nutrition. In this way, this method was efficient, rapid and precise for routine analysis providing in this way, an important instrument for quality control in animal nutrition area. / Atualmente o interesse por vitaminas tem sido de grande importância na saúde humana e animal. Suas concentrações nos ingredientes são baixas, sendo necessário a adição nas dietas, através da utilização de complexos multivitamínicos, agregando custos à alimentação que por vezes são representativos. No presente estudo buscou-se a validação do método por cromatografia liquida de alta eficiência para determinação de vitamina A em concentrados multivitamínicos para a nutrição animal. A metodologia de análise de vitamina A foi a partir do método publicado na United States Pharmacopeia , adaptado às condições do Laboratório de Análises Micotoxicológicas da Universidade Federal de Santa Maria. A fase móvel utilizada para a determinação da vitamina (All-trans-retinol) foi composta de metanol: água (98:2 v/v). O comprimento de onda ideal para a vitamina A no detector UV, foi de 325 nm. Utilizou-se coluna de fase reversa C18, vazão de 1 mL/min e temperatura da coluna de 40º C. O tempo de análise cromatográfica ocorreu em 8 minutos, sendo que a vitamina A eluiu em 4,2 minutos. O método mostrou-se linear, apresentando um coeficiente de correlação igual a r = 0,9995, nas concentrações de 0,475 9,50 μg/mL. O limite de quantificação encontrado para amostras nas quais o veiculo para adição de vitaminas apresentavam partículas desuniformes (Aderex) foi de 0,24 μg/mL. A vitamina A foi extraída com o emprego de hexano, após processo de hidrólise e saponificação. O coeficiente de recuperação do método foi de 85,98%. Na análise de repetitividade do método em amostras de premixes obteve-se uma média de CV de 1,52%. De acordo com os resultados encontrados, observa-se que 4 (26,67 %) das amostras de premixes analisadas apresentaram valor abaixo do esperado. Entre as 15 amostras analisadas, 6 (40,0 %) dos premixes apresentaram valores de vitamina A acima da concentração desejada. Somente 5 amostras (33,33 %) apresentaram valores de vitamina A dentro dos parâmetros de mínimo e máximo preconizados para alimentação de aves e suínos. O método mostrou-se eficiente, rápido e preciso para análise de rotina, disponibilizando desta forma, uma importante ferramenta para controle de qualidade na alimentação animal.