Copaifera langsdorffii (Fabaceae, Caesalpinioideae), conhecida popularmente como \"copaíba\", \"copaibeira\" ou \"pau d\'óleo\", é uma árvore de grande porte que se encontra amplamente distribuída pelo Brasil, desde a floresta amazônica até a vegetação do cerrado. A oleorresina, constituída principalmente por sesquiterpenos e diterpenos, é utilizada na medicina popular no tratamento de desordens infecciosas e inflamatórias. Por outro lado, estudos sobre suas folhas, as quais são constituídas majoritariamente por flavonoides e derivados galoilquínicos, são escassos. Assim, foi proposto o isolamento de marcadores químicos, desenvolvimento e validação de método analítico por CLAE-UV-DAD, bem como o estudo sazonal. O extrato bruto obtido das folhas foi particionado com solventes de polaridade crescente: diclorometano, acetato de etila e n-butanol. As frações em n-butanol e aquosa apresentaram, majoritariamente, compostos polares, dentre os quais se destacaram os derivados galoilquínicos. Para isolamento desses compostos utilizaram-se a cromatografia de permeação em gel de Sephadex LH-20 e a cromatografia líquida de alta eficiência preparativa. Nas análises por CLAE-UV-DAD empregou-se coluna analítica Synergi Polar-RP (100 mm x 3,0 mm, 2,5 ?m) e fase móvel composta por ácido fórmico-água (0,1:99,9, solvente A) e isopropanol- metanol-acetonitrila (0,5:4:6, solvente B). O gradiente de eluição foi A:B (90:10 para 85:15) em 8,33 minutos, seguido por A:B (85:15 para 64:36) até 29,17 minutos, utilizando vazão de 0,68 mL/min. Os estudos de sazonalidade foram realizados com 10 acessos de C. langsdorffii cultivados no Sítio Beija-Flor (Cajuru/SP). A partir da fração aquosa foram isolados e identificados 16 derivados galoilquínicos: ácido 5\'-O-metil-3-Ogaloilquínico (AGQ-1), ácido 5\'\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-2), ácido 5\',5\'\'-di-Ometil- 3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-3), ácido 3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-4), ácido 5\'\'-Ometil- 3,5-di-O-galoilquínico (AGQ-5), ácido 5\'-O-metil-3,5-di-O-galoilquínico (AGQ-6), ácido 5\'-O-metil-3,4-di-O-galoilquínico (AGQ-7), ácido 5\',5\'\'-di-O-metil-3,5-di-Ogaloilquínico (AGQ-8), ácido 5\',5\'\'-di-O-metil-4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-9), ácido 3,5-di- O-galoilquínico (AGQ-10), ácido 4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-11), ácido 5\'-O-metil-4,5-di- O-galoilquínico (AGQ-12), ácido 5\'\'-O-metil-4,5-di-O-galoilquínico (AGQ-13), ácido 3,4,5- tri-O-galoilquínico (AGQ-14), ácido 5\'\'-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico (AGQ-15), ácido 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico (AGQ-16). Além disso, por meio das análises realizadas por CLAE-EM foi possível constatar a presença de outros 10 derivados galoilquínicos: ácido 3-O-galoilquínico, ácido 4-O-galoilquínico, ácido 5-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil-4-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil-5-O-galoilquínico, ácido 5\'-O-metil- 3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\'\'\'-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\',5\'\'-di-Ometil- 3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\',5\'\'\'-di-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico, ácido 5\'\',5\'\'\'-di-O-metil-3,4,5-tri-O-galoilquínico. O método analítico mostrou-se adequado para quantificação de nove derivados galoilquínicos (AGQ-1, AGQ-5, AGQ-6, AGQ-7, AGQ-8, AGQ-9, AGQ-10, AGQ-15, AGQ-16) e dois flavonoides, quercitrina e afzelina, frente aos parâmetros seletividade, linearidade, sensibilidade, precisão e exatidão. Por meio de análise estatística multivariada dos estudos sazonais concluiu-se que os acessos apresentaram perfis químicos qualitativos e quantitativos semelhantes nas coletas isoladas e perfis quantitativos diferentes ao longo dos meses. / Copaifera langsdorffii (Fabaceae, Caesalpinioideae), popularly known as \"copaíba\", \"copaibeira\" or \"pau d\'oleo\", is a large tree widely distributed in Brazil, from Amazon rainforest to savannah vegetation. Its oleoresin, composed mainly of sesquiterpenes and diterpenes, is widely used in folk medicine to treat inflammatory and infectious disorders. On the other hand, studies about its leaves, composed mainly of flavonoids and galloylquinic acid derivatives, are scarce. Therefore, it was proposed to isolate leaves major compounds, to develop and validate an analytical method by HPLC-UV-DAD, as well as to udertake seasonal studies. The crude extract of the leaves was partitioned with solvents of increasing polarity: dichloromethane, ethyl acetate and n-buthanol, in sequence. Chemical profiles of n-buthanol and aqueous fractions showed to be composed of polar compounds, especially galloylquinic acid derivatives. These compounds were isolated by gel permeation chromatography using Sephadex LH-20 and preparative high-performance liquid chromatography. The HPLC-UV-DAD analyses were carried out on a Synergi Polar-RP (100 x 3.0 mm, 2.5 ?m) column. The mobile phase was made up of formic acid-water (0.1:99.9, solvent A), and isopropanol-methanol-acetonitrile (0.5:4:6, solvent B). The elution gradient was A:B (90:10 to 85:15) in 8.33 minutes, followed by A:B (85:15 to 64:36) up to 29.17 minutes using a flow rate of 0.68 mL/ min. The seasonal studies were performed from 10 C. langsdorffii accesses grown on Beija-Flor farm (Cajuru/SP). From the aqueous fraction it was isolated and identified 16 galloylquinic acid derivatives: 5\'-O-methyl-3-Ogalloylquinic acid (GQA-1), 5\'\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-2), 5\',5\'\'-di-Omethyl- 3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-3), 3,4-di-O-galloylquinic acid (GQA-4), 5\'\'-Omethyl- 3,5-di-O-galloylquinic acid (AGQ-5), 5\'-O-methyl-3,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-6), 5\'-O-methyl-3,4-di-O-galloylquinic acid (AGQ-7), 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,5-di-Ogalloylquinic acid (GQA-8), 5\',5\'\'-di-O-methyl-4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-9), 3,5-di- O-galloylquinic acid (GQA-10), 4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-11), 5\'-O-methyl-4,5-di- O-galloylquinic acid (GQA-12), 5\'\'-O-methyl-4,5-di-O-galloylquinic acid (GQA-13), 3,4,5- tri-O-galloylquinic acid (GQA-14), 5\'\'-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid (GQA-15), 5\',5\'\',5\'\'\'-tri-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid (GQA-16). Furthermore, through HPLC-MS analysis it was identified additional 10 galloylquinic acid derivatives: 3-Ogalloylquinic acid, 4-O-galloylquinic acid, 5-O-galloylquinic acid, 5\'-O-methyl-4-Ogalloylquinic acid, 5\'-O-methyl-5-O-galloylquinic acid, 5\'-O-methyl-3,4,5-tri-Ogalloylquinic acid, 5\'\'\'-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid, 5\',5\'\'-di-O-methyl-3,4,5-tri- O-galloylquinic acid, 5\',5\'\'\'-di-O-methyl-3,4,5-tri-O-galloylquinic acid, 5\'\',5\'\'\'-di-O-methyl- 3,4,5-tri-O- galloylquinic acid. The HPLC developed method was suitable to quantify nine galloylquinic derivatives (GQA-1, GQA-5, GQA-6, GQA-7, GQA-8, GQA-9, GQA-10, GQA-15, GQA-16) and two flavonoids, quercitrin and afzelin, related to the selectivity, linearity, sensitivity, precision and accuracy parameters. Through multivariate statistical analysis, it was possible to conclude that all ten diferrent populations of C. langsdorffii cultivated displayed similar qualitative and quantitative chemical profiles among isolated months and different quantitative profiles among different months.

Made available in DSpace on 2017-07-24T19:37:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Juliana Aparecida da Silva.pdf: 2399008 bytes, checksum: e786a3c1c65773bda5c870d3130afee1 (MD5) Previous issue date: 2016-09-05 / Caffeine is suggested as a chemical indicator for the presence of domestic wastewater in freshwater systems, although it is not included in quality monitoring programs. Thus, it can be an excellent indicator of contaminant organic residues in urban streams frequently affected by sewage in Brazil. In this sense, the objective of this study was to evaluate the potential of caffeine as an indicator of domestic sewage contamination in surface waters of the Pitangui River Basin, in the city of Ponta Grossa, Paraná, Brazil. In the study, after the validation of the analytical methodology, a relationship was sought between caffeine in surface water and the effluent supply. Eight (8) surface water samples were collected in the Verde River, in the urban area (P1), upstream (P2) and downstream (P3) of the Sewage Treatment Station (STS), and two treated effluent samples of the STS. For the determination of caffeine, High Performance Liquid Chromatography (HPLC) was used after solid phase extraction in C18/18 cartridges with extractor volume of 6ml. The physical-chemical evaluations of the surface samples showed a decline in the water quality after the STS treated effluent input, observed mainly through the concentrations of total phosphorus (PT) and Biochemical Oxygen Demand (BOD) levels, above the established limits by legislation, after the effluent. Caffeine was quantified at points P2 and P3, with mean concentrations of 121,0 e 144,0 μg L-1. The results showed the relationship between the presence of caffeine and impaction by the inflow of raw sewage, or by the treated effluent from the STS. / A cafeína é sugerida como indicador químico para a presença de águas residuais domésticas em sistemas de água doce, embora não esteja incluída em programas de monitoramento da qualidade. Assim, pode ser um excelente indicador de resíduos orgânicos contaminantes em córregos urbanos frequentemente afetados por esgoto no Brasil. Nesse sentido, o presente trabalho teve como objetivo avaliar a potencialidade da utilização da cafeína como indicador de contaminação por esgoto doméstico em águas superficiais da bacia do Bacia do Rio Pitangui, no município de Ponta Grossa, Paraná (Brasil). No estudo, após a validação da metodologia analítica, buscou-se uma relação entre a cafeína em águas superficiais e o aporte de efluente. Foram realizadas 8 (oito) coletas de águas superficiais no Rio Verde, sendo em área urbana (P1), a montante (P2) e a jusante (P3) da Estação de Tratamento de Esgoto (ETE), além de duas coletas de efluente tratado da ETE. Para a determinação da cafeína foi utilizada a Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE), após extração em fase sólida em cartuchos C18/18 com volume extrator de 6ml. As avaliações físico-químicas das amostras superficiais mostraram um declínio da qualidade da água após o aporte do efluente tratado da ETE, observado principalmente através das concentrações de fósforo total (PT) e dos níveis da Demanda Bioquímica de Oxigênio (DBO) acima dos limites estabelecidos pela legislação, após o aporte do efluente. A cafeína foi quantificada nos pontos P2 e P3, com concentrações médias de 121,0 e 144,0 μg L-1, respectivamente. Os resultados demonstraram a relação entre a presença da cafeína e a impactação pelo aporte de esgoto bruto, ou pelo efluente tratado da ETE.

Os peixes são uma importante fonte de proteínas, micronutrientes e ácidos graxos poli-insaturados. As tilápias (Oreochromis niloticus) têm um grande potencial de cultivo e ampla aceitação comercial. A deposição de aflatoxinas nos peixes é residual e cumulativa, no entanto há diferenças de sensibilidade entre as espécies e a legislação brasileira contempla limites apenas para rações de modo geral. O objetivo do trabalho foi avaliar a ocorrência de aflatoxinas em rações e tilápias de pisciculturas do Brasil. Foram coletadas 43 amostras de rações (500 g cada amostra) e 42 amostras de tilápias (500 g de peixe para compor uma amostra) de diferentes propriedades no Brasil. Amostras de ração, fígado e músculo foram avaliadas para aflatoxinas B1, B2, G1 e G2. As amostras foram analisadas por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando colunas de imunoafinidade para a etapa de purificação. Foram encontrados 16,28% e 86,05% de amostras de ração positivas para AFG1 e AFB1, respectivamente. No entanto, todas as amostras de ração mostraram-se dentro dos limites estabelecidos pela legislação brasileira. AFG1 e AFB1 foram detectadas em 7,14% e 85,72% das amostras de fígado, respectivamente, com níveis de 0,152 µg AFG1/kg e variando de 0,150 a 0,866 µg AFB1/kg. A AFB1 foi encontrada em 19,05% das amostras de músculo, com níveis variando de 0,150 a 0,372 µg/kg. Embora os valores encontrados nas rações estejam abaixo dos limites estabelecidos e os níveis em fígado e músculo tenham sido baixos, o monitoramento e os esforços para a diminuição da exposição às aflatoxinas devem ser considerados. / Fish are an important source of proteins, micronutrients and polyunsaturated fatty acids. The Nile Tilapia (Oreochromis niloticus) has a great potential for production and wide commercial acceptance. The deposition of aflatoxins in fish is residual and cumulative; however there are differences in sensitivity among species. The Brazilian legislation contemplates limits only for animal feed in general. The aim of this study was to evaluate the occurrence of aflatoxins in feed and tilapia from fish farms in Brazil. A total of 43 feed samples (500 g each sample) and 42 tilapia samples (500 g of fish to compose a sample) were collected from different properties in Brazil. Samples of feed, fish liver and muscle were evaluated for aflatoxins B1, B2, G1 and G2. The samples were analyzed by high performance liquid chromatography (HPLC) using immunoaffinity columns for the purification step. It were found 16.28% and 86.05% of feed samples positive for AFG1 and AFB1, respectively. However, all feed samples were within the limits established by Brazilian legislation. AFG1 and AFB1 were detected in 7.14% and 85.72% of the liver samples, respectively, with levels of 0.152 µg AFG1/kg and ranging from 0.150 to 0.866 µg AFB1/kg. AFB1 was found in 19.05% of muscle samples, with levels varying from 0.150 to 0.372 µg/kg. Although the values found in feed were below the established limits, and the levels found in liver and muscle samples were low, monitoring and efforts to reduce aflatoxin exposure should be considered.

Copaíbas referem-se às grandes árvores que crescem, principalmente, nos estados do Amazonas, Pará, Ceará e no norte do Brasil. Copaifera langsdorffii pode ser encontrada em praticamente todas as regiões do Brasil. Amostras de óleorresina, especialmente àquelas obtidas da C. langsdorffii, têm sido utilizadas na medicina popular como anti-inflamatório, antiséptico urinário e cicatrizante. Além disso, o extrato hidroalcoólico das folhas desta árvore despertou a atenção do nosso grupo por apresentar propriedades antilitiásicas. Portanto, os objetivos do presente trabalho foram: investigar a composição química de amostras de C. langsdorffii; desenvolver e validar métodos cromatográficos capazes de quantificar os principais componentes presentes nas amostras de C. langsdorffii e avaliar a influência da sazonalidade no perfil químico dos extratos hidroalcoólicos da espécie. Para os estudos fitoquímicos foram utilizados os processos de maceração e percolação para obtenção dos extratos. Extratos brutos e respectivas frações foram analisados e fracionados por técnicas cromatográficas em camada delgada e em colunas de sílica gel. Os compostos promissores foram purificados por CCDP e CLAE na escala semipreparativa. As estruturas químicas destes compostos foram elucidadas por RMN de 1H e 13C. O método analítico para avaliar o extrato hidroalcoólico foi desenvolvido por CLAE/UV-DAD. Neste sentido, foi desenvolvido protocolo para preparação da amostra, no qual envolve agitação, temperatura e a utilização de solução etanólica a 70% como solvente extrator. Na análise sazonal, alíquotas das folhas da espécie foram coletadas mensalmente durante 14 meses. CG/EM e CG-DIC foram utilizadas para identificação e desenvolvimento de método, considerando os principais compostos voláteis presentes no óleo e nas folhas. Para tanto, aparelho tipo Clevenger foi utilizado para obtenção destes voláteis. Na investigação fitoquímica 13 compostos foram isolados e identificados e 12 sesquiterpenos foram identificados. Dentre os voláteis destacam-se -copaeno, -cariofileno, -humuleno e óxido de cariofileno. O ácido caurenóico foi isolado do óleorresina e dos extratos das folhas, flores e frutos da C. langsdorffii. O ácido copálico e seus derivados foram obtidos do fracionamento com o óleorresina. O fracionamento dos extratos obtidos das folhas, flores e frutos também resultou no isolamento dos ácidos ent-labda-7,13-dien-15-óico e 2-hidróxi-ent-labda-7,13-dien-15-óicos. Dois flavonóis, 3-O--ramnopiranosil-quercetina e 3-O--ramnopiranosil-canferol foram isolados dos extratos hidroalcoólicos das folhas da espécie. O éter 2-hidróxifenilvinil etílico foi isolado do extrato dos frutos. A partir da reação de derivatização com algumas amostras obtiveram-se o caurenoato de metila, 2-hidróxi-ent-labda-7,13-dien-15-oato de metila e o 4-metóxi-cinamoato de etila. O método por CLAE permitiu a quantificação de cinco flavonóis: rutina, 3-O--ramnopiranosil-quercetina, 3-O--ramnopiranosil-canferol, quercetina e canferol. Este método apresentou recuperação média de 97%. As análises qualitativas sazonais dos extratos hidroalcoólicos das folhas indicaram a presença de 3-O--ramnopiranosil-quercetina, 3-O--ramnopiranosil-canferol durante todo período de estudo. Nas análises quantitativas, estes dois flavonois apresentaram teores médios de 1,8 e 1,0%, respectivamente. O método desenvolvido por CG-DIC detectou e quantificou -copaeno, -cariofileno, -humuleno em óleo de copaíba e no óleo essencial das folhas. Para ambos os métodos validados, os parâmetros de seletividade, LOD, LOQ, exatidão, precisão e robustez apresentaram resultados satisfatórios. De modo geral, as composições químicas das amostras estudadas são semelhantes. Os métodos validados podem ser utilizados como ferramentas analíticas no controle de qualidade do óleo de copaíba, extratos e derivados. / Copaiba refers to large trees that grow mainly in the states of Amazonas, Pará, Ceará and northern Brazil. Copaifera langsdorffii can be found in almost all regions of Brazil. Samples of its oilrresin, especially one obtained from C. langsdorffii have been used in folk medicine as anti-inflammatory, antiseptic, urinary antiseptic and wound healing. In addition, the hydroalcoholic leaves extract of this tree has drawn the attention of our research group because of its antilitiasic properties. Therefore, the goals of this work were: to investigate the chemical profile of samples of C. langsdorffii; to develop and validate chromatographic methods capable of quantifying the main components present in the samples of C. langsdorffii; to evaluate the influence of seasonality in the chemical profile of the ethanolic extracts of this species. For preparation of the extracts maceration and percolation were used. Crude extracts and fractions were analyzed and fractionated by thin layer chromatography and silica gel column chromatography. Promising compounds were purified by HPLC and preparative TLC. The chemical structures of the isolated compounds were elucidated by 1H NMR and 13C. The method for the analysis of the hydroalcoholic extract was developed by HPLC/UV-DAD. Also, a protocol for sample preparation was also developed, including shaking, temperature and ethanol 70% as solvent extractor. For the seasonal analysis, aliquots from the leaves of trees were collected monthly for 14 months. GC/MS and GC-FID was used to identify and develop the method, considering the main volatile compounds present in the oil and leaves. For both, Clevenger type apparatus was used to obtain these volatiles. The phytochemical study led to the isolation and identification of 13 compounds. Also, 12 sesquiterpenes were identified, including -copaene, -caryophyllene, -humulene and caryophyllene oxide. Kaurenoic acid was isolated from oilrresin and from the extracts of leaves, flowers and fruits of C. langsdorffii. Copalic acid and its derivatives were obtained by fractionation of the oilrresin. Fractionation of extracts from leaves, flowers and fruits also resulted in the isolation of ent-labda-7,13-dien-15-oic acid and 2-hydroxy-ent-labda-7,13-dien-15-oic acid. Two flavonols, 3-O--rhamnopyranosyl-quercetin and 3-O--rhamnopyranosyl-kaempferol were isolated from the hydroalcoholic extracts of the leaves of this species. The 2-hidroxyphenylvinyl ethyl ether was isolated from the extract of the fruits. The some fraction was derivatized furnishing methyl kaurenoate, methyl 2-hydroxy-ent-labda-7,13-dien-15-oate and the 4-methoxy-ethyl cinamoate. The developed HPLC method allowed the quantification of five flavonols: rutin, 3-O--rhamnopyranosyl-quercetin, 3-O--rhamnopyranosyl-kaempferol, quercetin and kaempferol. This method showed average recovery of 97%. The qualitative analysis of seasonal variation in the hydroalcoholic extracts of leaves indicated the presence of 3-O--rhamnopyranosyl-quercetin and 3-O--rhamnopyranosyl-kaempferol throughout the studied period. Regarding the quantitative analysis, these two flavonols showed average levels of 1.8 and 1% respectively. The method developed by GC-FID detected and quantified -copaene, -caryophyllene, -humulene in copaiba oil and leaves essential. For both validated methods, the parameters of selectivity, LOD, LOQ, accuracy, precision and robustness showed satisfactory results. In general, the chemical compositions of the studied samples are similar. The developed validated methods can be used as analytical tools for the quality control of copaiba oil, its extracts and products.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-04-13T13:00:25Z No. of bitstreams: 1 PDF - Rayanne Sales de Araújo Batista.pdf: 2799391 bytes, checksum: bfd7e21254a6a5383f8798d74f80923d (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-06-13T20:27:28Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Rayanne Sales de Araújo Batista.pdf: 2799391 bytes, checksum: bfd7e21254a6a5383f8798d74f80923d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-13T20:28:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Rayanne Sales de Araújo Batista.pdf: 2799391 bytes, checksum: bfd7e21254a6a5383f8798d74f80923d (MD5) Previous issue date: 2015-03-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Retinoic acid (RA), widely used in dermatological and cosmetic products, has low stability in the presence of air and light, with sensitivity to heat and oxidation, so it is particularly important to implement the quality control of its finished products performing tests indicators of stability. Therefore, the objective was to develop an analytical method to evaluate the thermal stability of an RA cream formulation through the correlation of analytical techniques, high performance liquid chromatography with ultraviolet detection efficiency (HPLC-UV), differential scanning calorimetry (DSC) and vibrational absorption spectroscopy in the infrared Fourier transform spectroscopy (FTIR). Previously been established chromatographic conditions for development of the analytical method using HPLC-UV system, which was subjected to analytical tests specified in RE ANVISA Nº 899/2003 for validation. For evaluation of the thermal stability the cream samples were subjected to thermal stress in an oven at temperatures of 60, 70 and 80 °C and subsequently analyzed by HPLC-UV over the period of 0, 24, 48 and 72 h. DSC analyzes and FTIR spectra were carried out from the binary mixture (BM) of the RA and excipients of the cream formulation to investigate possible physical and/or chemical interactions. According to the data obtained it was possible to develop an analytical method by validated HPLC-UV, and based thereon, for analyzing and quantifying the RA content cream formulation, it has been found that from 70 ° C caused a decrease in the content of RA, and 0-order kinetics; and 80 ° C, followed a kinetic order 2 by setting up a reaction of bimolecular type. The analytical techniques DSC and FTIR showed the absence of chemical and physical interaction in most MB among the components of the formulation, except only for the carrier sodium metabisulfite. Thus, we can infer that it has a well-defined thermal behavior and compatibility of its components. / O ácido retinoico (AR), largamente utilizado em produtos dermatológicos e cosméticos, apresenta baixa estabilidade na presença de ar e luz, com sensibilidade ao calor e à oxidação, assim, é particularmente importante implementar o controle de qualidade de seus produtos acabados realizando ensaios indicadores de estabilidade. Logo, objetivou-se desenvolver um método analítico para avaliar a estabilidade térmica de uma formulação creme de AR através da correlação de técnicas analíticas, cromatografia líquida de alta eficiência com detecção ultravioleta (CLAE-UV), calorimetria exploratória diferencial (DSC) e espectroscopia vibracional de absorção na região do infravermelho com transformada de Fourier (FTIR). Previamente foram estabelecidas as condições cromatográficas para desenvolvimento do método analítico utilizando um sistema de CLAE-UV, o qual foi submetido aos testes analíticos especificados na RE ANVISA nº 899/2003 para validação do mesmo. Para avaliação da estabilidade térmica, as amostras do creme foram submetidas a estresse térmico em estufa nas temperaturas de 60, 70 e 80 º C, e posteriormente analisadas por CLAE-UV no período de 0, 24, 48 e 72 h. As análises de DSC e dos espectros de FTIR foram realizadas a partir das misturas binárias (MB) do AR e excipientes da formulação creme a fim de investigar possíveis interações físicas e/ou químicas. De acordo com os dados obtidos foi possível desenvolver um método analítico por CLAE-UV validado, e com base no mesmo, para análise e quantificação do teor de AR em formulação creme, constatou-se que a partir de 70 ° C ocorreu redução no teor de AR, e cinética de ordem 0; a 80 ° C, obedeceu uma cinética de ordem 2, configurando uma reação do tipo bimolecular. As técnicas analíticas DSC e FTIR mostraram a ausência de interação física e química na maioria das MB entre os componentes da formulação, com exceção apenas para o excipiente metabissulfito de sódio. Desta forma, podemos inferir que a mesma apresenta um comportamento térmico bem definido e compatibilidade entre seus componentes.

A ondansetrona (1,2,3,9-tetrahidro-9-metil-3-[(2-metil-1H-imidazol-1-il)metil]-4H-carbazol-ona) é o primeiro fármaco da classe dos antagonistas seletivos dos receptores de serotonina 5-HT3. É utilizada na prevenção de náusea e vômito induzidos por agentes quimioterápicos. O objetivo deste estudo foi avaliar a equivalência terapêutica através da análise da bioequivalência de dois produtos contendo 8 mg de ondansetrona, sendo um sob a forma de comprimidos de liberação convencional e outro sob a forma de comprimidos de desintegração oral, produzidos por laboratórios distintos. O ensaio de bioequivalência entre o produto teste (Vonau® flash) e o produto referência (Zofran®) foi do tipo randomizado, cruzado e aberto. Os produtos foram administrados por via oral aos voluntários em dose única de 8 mg de ondansetrona. Amostras de sangue foram coletadas até 24 horas após a administração e analisadas através de método de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um detector de massas. As curvas médias de decaimento plasmático dos produtos teste (Vonau® flash) e referência (Zofran®) e as médias dos parâmetros farmacocinéticos Cmax (referência: 31,88 ng/mL; teste: 30,42 ng/mL); tmax (referência: 1,99 h; teste: 2,15 h), ASC0-t (referência: 227,66 ng×h/mL; teste: 223,68 ng×h/mL) e ASC0- (referência: 252,76 ng×h/mL; teste: 248,22 ng×h/mL) apresentaram-se semelhantes. O intervalo de confiança 90 % para a razão de Cmax (87,5 % - 103,8 %), ASC0-t (89,3 % - 107,2 %) e ASC0- (89,7 106,0 %) encontram-se entre 80 125 %, dentro dos limites propostos pela ANVISA. Conclui-se que os produtos teste e referência são bioequivalentes, podendo ser administrados de forma intercambiável, sem prejuízo do efeito terapêutico. / Ondansetron (1,2,3,9-tetrahydro-9-methyl-3-[2-methyl-1H-imidazol-1yl)methyl]-4H-carbazol-one is the first drug of the class of antagonists selective receptor 5-HT3. It is used in the prevention of nausea and vomiting caused by chemotherapy agents. The purpose of this study was to evaluate the therapeutic equivalence examining the bioequivalence of two products containing 8 mg ondansetron, one in the conventional release tablet, and other in oral disintegration tablet produced by different laboratories. The bioequivalence assay between the test product (Vonau® flash) and reference product (Zofran®) was randomized, crossover and open study. The medication was administered in a single dose of 8 mg of ondansetron. Blood samples were collected until 24 hours after administration and analyzed using a validated high-performance liquid chromatographic method with mass spectrometer detection. The average plasmatic decay curves obtained for the test product (Vonau® flash) and reference product (Zofran®) and the averages of pharmacokinetics parameters Cmax (reference: 31.88 ng/mL; test: 30.42 ng/mL); tmax (reference: 1.99 h; test: 2.15 h), AUC0-t (reference: 227.66 ng×h/mL; test: 223.68 ng×h/mL) and AUC0- (reference: 252.76 ng×h/mL; test: 248.22 ng×h/mL) has been similar. The 90 % confidence intervals for the ratio of Cmax (87.5 % - 103.8 %), AUC0-t (89.3 % - 107.2%) and AUC0- (89.7 % - 106.0 %) values for the test and reference products are within the 80 125 % interval proposed by ANVISA. It was concluded that the test and reference products are bioequivalent and can be considered interchangeable in medical practice, without prejudice to the therapeutic effect.

Fitoestrógenos são compostos naturais de origem vegetal com atividade estrogênica. Estão sendo amplamente investigados para a prevenção de doenças crônicas, coronarianas, câncer de próstata e mama, na redução de riscos de osteoporose e alívio nos sintomas da menopausa. Entre os fitoestrógenos já utilizados encontram-se a daidzeína, genisteína e gliciteína em matrizes complexas como drogas e extratos vegetais, cápsulas e comprimidos, requerendo desenvolvimento e validação de metodologias para a determinação das isoflavonas. As metodologias propostas foram a cromatografia em camada delgada de alta eficiência (CCDAE) e a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). A fase móvel acetato de etila:hexano (8:2 v/v) foi utilizada para determinação do perfil cromatográfico das isoflavonas agliconas daidzeína, gliciteína e genisteína e a fase móvel acetato de etila:tolueno:ácido fórmico (8: 1: 1 v/v/v) para isoflavonas glicosiladas e não glicosiladas por CCDAE. Para a determinação quantitativa das isoflavonas glicosiladas por CLAE foi proposta uma hidrólise ácida com HCl 3M e aquecimento em banho-maria durante uma hora, como tratamento prévio. A determinação analítica das isoflavonas daidzeína, genisteína, formononetina e biochanina A por CLAE, em modo isocrático foi realizada utilizando coluna cromatográfica monolítica Chromolith® RP-18, 100-4,6mm, fase móvel constituída por água:acetonitrila (6:4 v/v), vazão 0,6mL/min e detecção a 260nm. Os resultados obtidos mostraram linearidade com coeficiente de correlação de 0,9995 para daidzeína, 0,9996 para genisteína, 0,9997 para formononetina e 0.9999 para biochanina A. A precisão e a exatidão apresentaram resultados satisfatórios. Boa resolução e rápida separação dos fármacos em formulações farmacêuticas também foram obtidas. Portanto, pode ser usado nas análises de rotina nos laboratórios de controle de qualidade de fitoterápicos. / Phytoestrogens are natural compounds of plants with estrogenic activity. They are being widely investigated in the prevention of chronic coronary diseases, in prostate and breast cancer, in the reduction of osteoporosis risk and relief of menopause symptoms. Among phytoestrogens already in use are daidzein, genistein and glycitein and they are present in complex matrix such as phytopharmaceuticals, plant extracts, capsules and tablets. These preparations require development and validation of methodologies for quantitative determination of isoflavones. The proposed methodologies include high performance thin layer chromatography (HPTLC) and high performance liquid chromatography (HPLC). The HPTLC coupled with densitometry can be used for quantitative analysis. The mobile phase constituted of ethyl acetate:hexane (8:2 v/v) was used to determine chromatographic profiles of isoflavone aglycones, daidzein, glycitein and genistein. The mobile phase constituted of ethyl acetate:toluene:formic acid (8:1:1 v/v/v) was used for determination of isoflavones glycosides and non-glycosides. For the quantitative determination of isoflavone glycosides with HPLC, an acid hydrolysis with 3M HCl and heating in water-bath for an hour was proposed as sample pretreatment step. The analytic determination of isoflavones daidzein, genistein, formononetin and biochanin A using HPLC was accomplished. The chromatography was carried out in isocratic mode with Chromolith®, a monolithic RP-18 column, (100x4.6mm) with mobile phase constituted of water:acetonitrile (6:4 v/v) operated at a flow rate of 0.6mL/min and detection was made at 260nm. The results showed method linearity with correlation coefficient of 0.9995 to daidzein, 0.9996 for genistein, 0.9997 for formononetin and 0.9999 for biochanin A. The precision and accuracy data presented satisfactory results. Good resolution and faster separation of compounds in pharmaceutical formulations were also obtained. The proposed method can be used in the routine analyses of phytopharmaceuticals in quality control laboratories.

A ciclobenzaprina é um relaxante muscular de ação central estruturalmente similar aos antidepressivos tricíclicos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a bioequivalência de comprimidos contendo 10 mg de cloridrato de ciclobenzaprina em voluntários sadios. O estudo de bioequivalência entre o produto teste (Miosan®) e referência (Flexeril®) foi do tipo randomizado, aberto e cruzado. Os produtos foram administrados por via oral aos voluntários em dose única de 10 mg de cloridrato de ciclobenzaprina. Amostras de sangue foram coletadas até 240 horas após a administração do fármaco e quantificadas por método previamente validado através de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a um detector de massas. As curvas médias de decaimento plasmático dos produtos teste (Miosan®) e referência (Flexeril®) foram semelhantes ASC0-t (teste: 193,00 ngxh/mL; referência: 191,66 ngxh/mL) e ASC0∞ (teste: 211,34 ngxh/mL; referência: 209,35 ngxh/mL). Assim como os parâmetros farmacocinéticos relativos à absorção de ciclobenzaprina, Cmax (teste: 7,16 ng/mL; referência: 6,95 ng/mL), tmax (teste: 4,61 h; referência: 4,48 h), Ka (referência: 0,79; teste: 0,67) e t(1/2)a (referência: 1,79 h; teste: 2,02 h). Os parâmetros farmacocinéticos relativos à eliminação plasmática de ciclobenzaprina Cl (teste: 31,15 L/h; referência: 31,73 L/h), Vd (teste: 1378,54 L e referência (1357,87 L), kß (referência: 0,08; teste: 0,08), t(1/2)ß (referência: 9,43 h; teste: 9,20 h), k&#947 (referência: 0,02; teste: 0,02) e t(1/2)&#947 (referência: 32,92 h; teste: 31,67 h) também apresentaram-se semelhantes entre os dois produtos. A análise multivariada realizada por meio da análise de variância (ANOVA), para a avaliação dos efeitos produto, grupo e período, revelou a ausência destes efeitos, indicando que o delineamento do estudo foi adequado. Os resultados do intervalo de confiança (I.C. 90 %) para a razão de Cmax (93,0 % - 112,0 %), ASC0-t(92,6 % - 111,1 %) e ASC0&#8734 (93,1 % - 110,4 %), encontram-se dentro dos limites estabelecidos pela ANVISA e FDA (80 - 125 %). A análise estatística dos parâmetros Cmax, ASC0-t e ASC0-&#8734 indicam que não há diferenças entre os dois produtos contendo 10 mg de cloridrato de ciclobenzaprina. Com base nos resultados deste estudo, conclui-se que os produtos avaliados são bioequivalentes e podem ser considerados intercambiáveis na terapêutica. / Cyclobenzaprine is a centrally acting muscle relaxant that has similarity with a tricyclic antidepressant. The purpose of this study was to evaluate the bioequivalence of two brands of cyclobenzaprine 10 mg tablets in healthy volunteers. The procedure of bioequivalence between test product (Miosan®) and reference product (Flexeril®) was a randomized, open and crossover study. The products were administered in a single oral dose of 10 mg of cyclobenzaprine hydrochloride to healthy volunteers. Blood samples were collected until 240 hours after administration and quantified by validated method using high-pressure liquid chromatography with mass spectrometric detection. The average plasmatic decay curves of test (Miosan&#174) and reference (Flexeril&#174) products were similar ASC0-t (test: 193,00 ngxh/mL; reference: 191,66 ngxh/mL), in the same way that absorption parameters Cmax (test: 7,16 ng/mL; reference: 6,95 ng/mL), tmax (test: 4,61 h; reference: 4,48 h), Ka (reference: 0,79; test: 0,67) e t(1/2)a (reference: 1,79 h; test: 2,02 h). The elimination parameters Cl (test: 31,15 L/h; reference: 31,73 L/h), Vd (test: 1378,54 L e reference (1357,87 L), k&#914 (reference: 0,08; test: 0,08), t(1/2)&#946 (reference: 9,43 h; test: 9,20 h), k&#947 (reference: 0,02; test: 0,02) e t(1/2)&#947 (reference: 32,92 h; test: 31,67 h) were similar between products too. The multivariate analysis accomplished trough analysis of variance (ANOVA), for assessment of product, group and period effects, revealed the absence of any of these effects in the present study, indicating that the crossover design was properly performed. The 90 % confidence intervals for the ratio of Cmax(93,0 % - 112,0 %), AUC0-t(92,6 % - 111,1 %) and AUC0&#8734 (93,1 % - 110,4 %) values for the test and reference products are within the 80 - 125 % interval proposed by ANVISA e FDA. Statistical analysis of Cmax, AUC0-t e AUC0-&#8734 parameters indicated no significant difference between two brands of 10 mg cyclobenzaprine hydrochloride products. Based in the results of this study, we can conclude that the two products are bioequivalent and can be considered interchangeable in the medical practice.

O fluoroacetato de sódio (FAS), também conhecido como \"composto 1080\", foi um raticida amplamente utilizado no combate de roedores a partir da década de 40, mas que teve seu uso proibido em diversos países, incluindo o Brasil, devido a sua alta toxicidade e ausência de tratamento efetivo nas intoxicações. A despeito deste fato, diversos casos de intoxicação ainda são registrados em seres humanos e animais, em virtude de seu uso ilícito como raticida doméstico ou adição em iscas nas intoxicações criminosas. O FAS, na natureza, pode ser encontrado, também, em algumas plantas tóxicas de grande importância no Brasil, como a Palicourea marcgravii, e possivelmente seja o princípio ativo tóxico de outras plantas de relevância, como a Mascagnia rigida. Neste sentido, este trabalho objetivou o estudo dos aspectos clínicos e anatomopatológicos encontrados nas intoxicações provocadas pelo FAS, em ratos, comparando estes com os encontrados nas intoxicações por extrato aquoso da M. rígida. Também foram comparadas metodologias analíticas para identificação deste agente tóxico utilizando cromatografia em camada delgada (CCD) e cromatografia de alta eficiência (CLAE) com dois tipos de detectores o de UV e o de Condutividade Iônica. Para tanto, quatro grupos contendo seis ratos Wistar, machos, receberam em dose única por via oral 7,0 mg/kg de FAS ou água destilada ou ainda 1,6 ou 3,2 g/kg de extrato aquoso de M. rígida, sendo avaliados os sinais clínicos apresentados por estes animais. Após eutanásia foram coletados fragmentos de cérebro, coração, fígado, rins, pulmão, intestino e baço para exame histopatológico. Tanto os animais que receberam FAS como os que receberam extrato aquoso de M. rígida apresentaram sintomatologia similar com presença de prostração, desconforto respiratório, tremores, pêlos arrepiados, cromodacriorreia, convulsão tônica e tônico-clônica. Na necropsia destes animais não foram observadas alterações macroscópicas, contudo alterações histopatológicas significativas foram encontradas no cérebro, miocárdio, fígado e rins. Os estudos das análise toxicológicas utilizando as três técnicas cromatográficas mostraram que os resultados obtidos na CCD foram adequados para detecção de FAS nas concentrações acima de 1,0 μg do padrão puro e as análises das duas plantas estudadas apresentaram resultados positivos para FAS. As técnicas utilizando CLAE, com dois diferentes detectores, mostraram que quando se utiliza detector de UV o limite de detecção é de 3,75 μg injetado ou de 75 μg/mL e foi possível, também, detectar a presença de FAS nas duas plantas estudadas, porém a técnica não se apresentou adequada para a detecção de intoxicação em tecido animal. O detector de condutividade iônica mostrou limite de detecção de 0,30 μg/mL, isto é, o mais sensível entre os três métodos estudados, e portanto o mais adequado para diagnóstico de intoxicação em tecido animal; no entanto, para identificação do FAS na M. rigida este método não se mostrou adequado devido a interferentes no extrato aquoso e no soro de animais intoxicados. / Sodium fluoroacetate (SFA), also known as \"compound 1080,\" was a rodenticide widely used in the 1940s, but its use was banned in several countries, including Brazil, for its high toxicity and lack of an effective treatment in poisoning. Despite this fact, several cases of poisoning are still registered in humans and animals, because of their misuse as baits, in addition to criminal poisoning. SFA, in the form of natural molecules, can be found in some toxic plants of great importance in Brazil, such as Palicourea marcgravii, and possibly is the active principle of other plants of relevance, such as Mascagnia rigid. Therefore, this study aimed to evaluate the clinical and pathological findings in poisoning caused by the SFA in rats, and compare them with those found in poisoning by the aqueous extract of M. rigid. Moreover, we compared analytical methods for identifying this toxic agent using thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC) employing two types of detectors: ultraviolet (UV) and ionic conductivity. Therefore, four groups containing six male Wistar rats each, received a single oral dose of 7.0 mg / kg of SFA, an equal volume of distilled water, or 1.6 or 3.2 g / kg of an aqueous extract of M. rigid, and the clinical signs displayed by these animals were evaluated. After euthanasia fragments of brain, heart, liver, kidney, lung, intestine and spleen were collected for histological examination. Both the animals that received SFA and those who received the aqueous extract of M. rigid showed similar symptoms, including prostration, respiratory distress, tremors, shivering, and tonic or tonic-clonic seizures. At necropsy, these animals did not display macroscopic changes. Nevertheless, significant histopathological changes were found in the brain, heart, liver and kidneys. Toxicological analysis using the three chromatographic techniques described above showed that the results obtained in the TLC were suitable for detection of SFA at concentrations above 1.0 μg of pure standard, and analysis of the two plants mentioned showed positive results for SFA. The techniques using HPLC with two different detectors showed that when using the UV detector, the detection limit is of 3.75 μg (injected) or 75 μg / mL, and SFA could also be detected by these methods in the two plants studied, but the technique does not seem suitable for the detection of intoxication in animal tissue samples. The ionic conductivity detector showed a detection limit of 0.30 μg/ mL, therefore the most sensitive of the three methods studied, and hence is the most appropriate for diagnosis of poisoning in animal tissue; however, for the identification of SFA in the M. rigid, this method was not appropriate due to a putative interference in the aqueous extract.

Made available in DSpace on 2016-04-28T20:17:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2006- Glenda Ribeiro de Oliveira.pdf: 475801 bytes, checksum: 8ca6884856073fd041daad94f50fca0e (MD5) Previous issue date: 2006-11-24 / The intake of mycotoxin-contamined feeds may lead to nutrient losses and can have adverse effects on animal health and on productivity. The aims of this study were: 1) to determine the mycobiota present in poultry feed samples, obtained from three factories in the region of S?o Jos? do Vale do Rio Preto, RJ, Brazil; 2) to evaluate the natural occurrence of aflatoxin B1 (AFB1), fumonisin B1 (FB1) and zearalenone using the method enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) competitive, commercial kits of Beacon Analytical Systems Inc, USA and 3) to verify the data results by the ELISA to AFB1 and FB1 comparing them with the high precision liquid chromatography methodology (HPLC) Fungal counts were similar between all culture media tested (103 CFU.g-1). Penicillium spp. (41,26%) was the most prevalent genus followed by Aspergillus spp. (33,33%) and Fusarium spp. (20,63%). Aflatoxin B1 was found in 66,27% samples examined by ELISA kits and values ranged between 2 and 21&#956;g.kg-1. Fumonisin B1 was found in 97,87% and levels ranged between 0,3 and 9,1&#956;g.g-1, cooccurring with aflatoxin B1 in 66,7% of the samples. Low concentrations of zearalenone were found (<1 &#956;g.g-1) in 77,1% poultry feed samples. Correlation between the ELISA kits (AFB1 and FB1) and the HPLC analysis was obtained. Values were r2= 0,9922 and r2=0,9823, respectively. In general, the highest mycotoxin levels were found during the hottest month of sampling. The present study shows the simultaneous occurrence of two carcinogenic mycotoxins, aflatoxin B1 and fumonisin B1 together with another Fusarium mycotoxin (zearalenone) in feed intended for poultry consumption. Many samples contained AFB1 levels near the maximum permissible and it could affect young animals. A synergistic toxic response is possible in animals under simultaneous exposure. / A ingest?o de ra??es contaminadas por micotoxinas pode acarretar perdas no seu valor nutritivo e causar efeitos adversos ? sa?de animal e ? produtividade. Os objetivos desse estudo foram: 1)estabelecer a freq??ncia e a preval?ncia da micobiota presente em amostras de ra??es de frangos de corte provenientes de tr?s f?bricas em S?o Jos? do Vale do Rio Preto-RJ, 2)verificar a ocorr?ncia natural de aflatoxina B1 (AFB1), fumonisina B1 (FB1) e zearalenona (ZEA), utilizando a t?cnica biol?gica de imunoensaios-ELISA competitivo, com kits comerciais (Beacon Analytical Systems Inc, USA) e 3)verificar os resultados obtidos pelo m?todo de ELISA, comparando-os com a t?cnica de Cromatografia L?quida de Alta Efici?ncia (CLAE) para AFB1 e FB1. A contagem dos prop?gulos f?ngicos foi similar entre todos os meios de cultura testados (103 UFC g-1). Penicillium spp (41,26%) foi o g?nero de maior preval?ncia seguido por Aspergillus spp (33,33%) e Fusarium spp. (20,63%). Aflatoxina B1 foi encontrada em 66,27% das amostras analisadas pelos kits de ELISA,com valores variando entre 2 e 21&#956;g.kg-1. Fumonisina B1 foi encontrada em 97,87% e os valores variaram entre 0,3 e 9,1&#956;g.g-1, co-ocorrendo com aflatoxinaB1 em 66,7% das amostras. Baixas concentra??es de zearalenona foram encontradas (< 1&#956;g.g-1)em 77,1% das amostras de ra??o. Foi obtida correla??o entre os kits de ELISA (AFB1 e FB1) e as an?lises em CLAE, com valores de r2= 0,9922 e 0,9823, respectivamente. Em geral, os maiores n?veis de micotoxinas foram encontrados durante os meses mais quentes do ano. O presente estudo mostra a ocorr?ncia simult?nea de duas micotoxinas carcinog?nicas, AFB1 e FB1, juntamente com outra Fusarium micotoxina (zearalenona) em ra??es destinadas ao consumo de frangos. Algumas amostras apresentaram n?veis de AFB1 pr?ximos ao m?ximo permitido, o que poderia afetar aves jovens. Uma resposta t?xica sin?rgica ? poss?vel em animais sob exposi??o simult?nea.