O estômago de ruminantes é um órgão complexo subdividido em quatro compartimentos: o rúmen, o retículo, o omaso e o abomaso, sendo os três primeiros os pré-estômagos ou pró-ventrículos. Cada um possui sua própria característica, responsável por mecanismos de ruminação essenciais. Junções gap são as únicas especializações na membrana celular que permitem a comunicação direta entre células adjacentes, enquanto que as junções de adesão são especializações que mantém a integridade tecidual. Sabe-se que elas contribuem para a homeostase tissular e são compostas por proteínas transmembrânicas chamadas conexinas (junções gap) e caderinas (junções de adesão). Além disso, essas junções estão também envolvidas no controle da proliferação celular, no controle de crescimento e diferenciação, apoptose, e a sincronização de funções eletrotônicas e metabólicas. Assim, o rúmen de bovinos pode ser um modelo para compreender a contribuição das conexinas e caderinas durante a diferenciação do epitélio ruminal a um estado funcional, que o transforma de epitélio de revestimento para um epitélio absortivo com funções de metabolização de substâncias, em especial o ácido lático e ácidos graxos. Dessa maneira, nossa hipótese é que as diferentes conexinas mudem sua dinâmica de expressão quanto ao tipo e localização, com repercussões na morfologia epitelial. Os objetivos do presente estudo foram a avaliação da expressão e localização das Conexinas 26, 32, 40 e 43 e da E-caderina no rúmen de fetos bovinos, bezerros recém-nascidos e bovinos adultos, além da avaliação morfológica do epitélio ruminal de através da microscopia óptica e eletrônica. Também possui como objetivo a avaliação da expressão gênica dessas proteínas no rúmen desses animais. Para isso, foi realizada a coleta de amostras do saco dorsal e do saco ventral do rúmen de fetos bovinos, bezerros recém-nascidos e bovinos adultos. Nos materiais coletados foram realizadas as técnicas de coloração com Hematoxilina-Eosina e morfometria, imunofluorescência, microscopia eletrônica de transmissão, extração de RNA total e sequenciamento genético. Na coleta do material as posições anatômicas observadas foram exatas às já descritas na literatura. O tecido ruminal apresentou diferenças morfométricas em relação às mensurações realizadas no tecido epitelial e na camada basal, nas idades estudadas. Além disso, foram observadas modificações teciduais ao longo do desenvolvimento ruminal na microscopia eletrônica de transmissão e na expressão das conexinas no tecido ruminal na imunofluorescência. A respeito da expressão das conexinas estudadas, ela difere em relação à idade dos animais e à localização no tecido ruminal, tornando evidente a necessidade de cada uma das conexinas em relação à idade, desenvolvimento e manutenção do tecido ruminal. A expressão tecidual da E-caderina apresentou-se semelhante nas idades estudadas. Em relação à expressão gênica e sequenciamento genético dessas proteínas, suas mudanças acompanharam as diferenças observadas na expressão tecidual através da imunofluorescência. Desse modo, pode-se concluir que ocorrem mudanças tanto na expressão tecidual quanto na expressão gênica dessas proteínas durante o desenvolvimento ruminal e sua manutenção enquanto adulto. / The stomach of ruminants is a complex organ subdivided into four compartments: the rumen, the reticulum, the omasum and the abomasum, the first three being the prestomachs or pro-ventricles. Each one has its own characteristic, responsible for essential rumination mechanisms. Gap junctions are the only cell membrane specializations that allow direct communication between adjacent cells, whereas adhesion junctions are specializations that maintain tissue integrity. It is known that they contribute to tissue homeostasis and are composed of transmembrane proteins called connexins (gap junctions) and cadherins (adhesion junctions). In addition, these junctions are also involved in the control of cell proliferation, growth and differentiation, apoptosis, and the synchronization of electrotonomic and metabolic functions. Thus, the bovine rumen may be a model for understanding the contribution of connexins and cadherins during the differentiation of the ruminal epithelium into a functional state, which transforms it from coating epithelium to an absorptive epithelium with metabolizing functions of substances, especially the lactic acid and fatty acids. Therefore, our hypothesis is that the different connexins change their expression dynamics regarding type and location, with repercussions on epithelial morphology. The objective of the present study was to evaluate the expression and location of Connexins 26, 32, 40 and 43 and E-cadherin in the rumen of bovine fetuses, newborn calves and adult bovines, as well as the morphological evaluation of ruminal epithelium through optical and electronic microscopy. It also aims to evaluate the gene expression of these proteins in the rumen of these animals. For that, samples were collected from the dorsal and the ventral sac from the rumen of bovine fetuses, newborn calves and adult bovines. Hematoxylin-Eosin staining techniques and morphometry, immunofluorescence, transmission electron microscopy, total RNA extraction and genetic sequencing were performed in the collected materials. During the collection of the material it was observed that anatomical positions were exact to those already described in the literature. The ruminal tissue presented morphometric differences in relation to the measurements made in the epithelial tissue and the basal layer, in the studied ages. In addition, tissue changes were observed along ruminal development in transmission electron microscopy and in the expression of connexins in ruminal tissue in immunofluorescence. Regarding the expression of the connexins studied, it differs in relation to the age of the animals and the location in the ruminal tissue, making evident the necessity of each of the connexins in relation to the age, development and maintenance of ruminal tissue. The tissue expression of E-cadherin was similar in the studied ages. In relation to the gene expression and genetic sequencing of these proteins, their changes accompanied the observed differences in tissue expression through immunofluorescence. Thus, it can be concluded that changes occur in both the tissue expression and the gene expression of these proteins during ruminal development and its maintenance as an adult.

A doença de Parkinson (DP) caracteriza-se pela perda progressiva de neurônios dopaminérgicos da substância nigra, o que acarreta diversas disfunções motoras. Não há ainda tratamentos capazes de deter ou retardar a degeneração dos neurônios dopaminérgicos, e os medicamentos hoje empregados na clínica apenas amenizam os sintomas, sem alterar a progressão da DP. No presente estudo foi avaliada a atividade neuroprotetora do éster fenetil do ácido cafeico (CAPE), um componente abundante do própolis de abelhas, com atividade anti-inflamatória, antiviral, antioxidante e imunomodulatória. Estudos têm sugerido seus efeitos benéficos contra as doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Parkinson, e alguns mecanismos têm sido propostos; porém muitos dos estudos com CAPE foram feitos apenas em culturas celulares. Este é o primeiro estudo a demonstrar que a administração intraperitoneal do CAPE protege contra a perda neuronal dopaminérgica e a disfunção motora induzidas pela neurotoxina 6-OHDA em ratos, confirmando a capacidade do CAPE de atravessar a barreira hematoencefálica e exercer seus efeitos benéficos no sitema nervoso central (SNC). Adicionalmente foram empregados dois modelos in vitro para o delineamento de possíveis mecanismos de neuroproteção: (i) mitocôndrias isoladas de cérebro de ratos não tratados e (ii) células SH-SY5Y tratadas com 6-OHDA. Os achados in vivo e in vitro sugerem o envolvimento dos seguintes mecanismos: (i) atividade antioxidante (sequestro de ERO, neutralização de radicais livres e quelação de metais); (ii) atividade anti-inflamatória (inibição da ativação do NF-kB, TNF-?, IkK? e Ikk?); (iii) aumento da expressão da conexina 43; (iv) inibição da Transição de Permeabilidade Mitocondrial (TPM); (v) inibição da liberação de citocromo c e (vi) inibição da ativação da caspase-3, executora final da apoptose. Além disso, o estudo também demonstrou que, por si só, o CAPE não interfere nas funções mitocondriais, o que representa uma vantagem com relação a outros inibidores da TPM. Assim, de acordo com nossos achados, o CAPE é um agente neuroprotetor promissor e pode auxiliar em futuras estratégias terapêuticas para as doenças neurodegenerativas, bem como para o melhor entendimento dos mecanismos responsáveis pelo desenvolvimento dessas doenças. / Parkinson\'s disease (PD) is characterized by progressive loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra, which causes various motor dysfunctions. There are no treatments able to delay or stop the degeneration of dopaminergic neurons and the therapy employed nowadays only alleviate the symptoms without altering the progression of PD. In the present study we evaluated the neuroprotective activity of caffeic acid phenethyl ester (CAPE), a compound abundant in honeybees\' propolis, with anti-inflammatory, antiviral, antioxidant and immunomodulatory activities. Its beneficial effects against neurodegenerative diseases, including Parkinson\'s disease, have been suggested and some mechanisms have been proposed; however, many of the studies with CAPE have been performed only in cell cultures. This is the first study to demonstrate that the intraperitoneal administration of CAPE protects against the dopaminergic neuronal loss and the motor dysfunction induced by the neurotoxin 6-OHDA in rats, confirming the ability of CAPE to cross the blood brain barrier and exert its beneficial effects on the central nervous system (CNS). Additionally two in vitro models were used to delineate the possible mechanisms of neuroprotection: (i) mitochondria isolated from the brain of non-treated rats and (ii) cells SH-SY5Y treated with 6-OHDA. The in vivo and in vitro findings suggest the involvement of the following mechanisms: (i) antioxidant activity (scavenger of ROS, free radicals neutralization and metal chelation); (ii) anti-inflammatory activity (inhibition of activation of NF-kB, TNF-?, IkK? and Ikk?); (iii) increased expression of connexin-43; (iv) Inhibition of Mitochondrial Permeability Transition (MPT); (v) inhibition of cytochrome c release (vi) inhibition of the activation of caspase-3, the final executioner of apoptosis. Furthermore, the study also showed that CAPE alone does not interfere with mitochondrial functions, which represents an advantage in relation to other inhibitors of MPT. Therefore, according to our findings, CAPE is a promising neuroprotective agent and may be useful for future therapeutic strategies for neurodegenerative diseases, as well as to better understand the mechanisms responsible for the development of these diseases.

Durante o desenvolvimento pós-natal do hipocampo, as junções comunicantes (JC) formadas por conexinas (Cxs) neuronais participam na maturação da circuitaria hipocampal promovendo a regulação da atividade espontânea sincronizada neuronal. Neste estudo investigamos as duas Cxs neuronais mais abundantes no hipocampo, a Cx36 e Cx45, durante o desenvolvimento pós-natal. Identificamos mudanças nos níveis de transcritos e proteicos da Cx36 e Cx45 ao longo deste período. Nossos resultados revelaram que ambas as Cxs neuronais estão presentes nas sub-regiões do hipocampo e que sua distribuição é modulada em função da progressão do desenvolvimento. Atráves da avaliação dos níveis de atividade neuronal identificamos diferenças exercidas pelo bloqueio das JCs em hipocampo de neonatos e na segunda semana de vida. Nossos resultados mostram que as Cxs neuronais são reguladas durante o desenvolvimento pós-natal do hipocampo, assim como sua ação sobre sua excitabilidade, mostrando que as Cxs podem contribuir de forma distinta em periodo específicos do desenvolvimento hipocampal. / Gap junctions (GJ) composed of neuronal connexins (Cx) play a significant role in the activity-dependent circuitry maturation promoting modulation of coherent spontaneous neuronal activity. Herein, we evaluate two major hippocampal neuronal Cxs, Cx36 and Cx45 during postnatal development. We identified changes in Cx36 and Cx45 transcript and protein levels during these developmental periods. Interestingly, immunofluorescence analyses showed that Cx36 and Cx45 are located in all hippocampal subregions. Also, neuronal Cx distribution in these sub-regions is modulated throughout postnatal development. Using electrophysiological recording, we identified changes imposed by GJ blocker over the hippocampal activity in neonates and two-week-old rats. Our finds demonstrate a regulation of neuronal Cxs and distinct GJ role in activity modulation during postnatal hippocampal development, which might be essential to physiological processes that govern proper hippocampal development.

Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão hipocampal de proteínas e de RNAm das Cx43 e Cx36 no modelo de epilepsia do lobo temporal (ELT) induzido por pilocarpina. Além disso, os efeitos do bloqueador de canais de junções comunicantes (CJC), carbenoxolona (CBX), foram avaliados por eletrofisiologia durante o período de status epilepticus. Os dados referentes à Cx43 demonstraram redução dos níveis proteicos no período latente (p<0,05) e aumento no período crônico do modelo (p<0,01). Os níveis de RNAm de Cx43 não sofreram alterações. Tanto os níveis proteicos quanto os de RNAm de Cx36 não se alteraram. Os dados eletrofisiológicos mostraram redução da potência na banda de frequência entre 15 e 30 Hz no eletrocortigrama, além de redução da amplitude relativa dos potenciais epileptiformes. Foi observado ainda que o grupo tratado com CBX passou a apresentar períodos flat antecipadamente. Os dados deste estudo sugerem um importante papel dos CJC na ELT induzida por pilocarpina, contribuindo para o conhecimento da regulação destes canais na epilepsia. / In this study, the hippocampal protein and mRNA levels of Cx43 and Cx36 were investigated in the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy (TLE). In addition, the effects of a gap junction (GJ) blocker (carbenoxolone-CBX) on pilocarpine-induced status epilepticus (SE) were also evaluated by electrophysiological recordings. Our results on Cx43 showed reduction of protein levels in the latent period (p<0.05) and increase in the chronic period of the model (p<0.01), whereas no changes were observed in the mRNA levels. Both protein and mRNA levels of Cx36 showed no changes. The electrophysiological recordings indicated that CBX promoted a marked reduction of power in the 15-30 Hz electrocorticographic frequency. Decrease in the amplitude of the epileptiform potentials was also seen, in addition to anticipation of occurrence of flat periods in the group treated with CBX. Data obtained from this study suggest an important role for GJ channels in the pilocarpine-induced TLE, contributing to a greater understanding of the regulation of these channels in the epilepsy.

A vida é um processo dinâmico no tempo e no espaço, resultante da interação celular provida pelas junções comunicantes (JCs), canais formados por conexinas (Cxs) que permitem a passagem de moléculas de até 1kDa, e íons. O foco deste trabalho foi caracterizar a modulação de Cxs no desenvolvimento, adaptação visual e após trauma mecânico localizado na retina, através de técnicas como PCR em tempo real, western blot e imuno-histoquímica. No desenvolvimento, a Cx43 apresentou alta expressão no início (255%, P<0.01), a Cx45 teve alta expressão em todos os estágios, as Cx50 e Cx36 são pouco expressas no início (4-9%, P<0.01), mas muito expressas no final e no adulto. Na adaptação ao escuro houve regulação de 115% do RNam da Cx36 após 24h, evidenciando uma plasticidade do acoplamento frente às condições de iluminação. Na neurodegeneração, a expressão da Cx36 não variou nos diferentes tempos pós-lesão, mas a Cx43 aumentou após 7 dias. O papel do acoplamento na degeneração foi estudado utilizando bloqueadores e abridores de JCs combinados com métodos para avaliar a viabilidade celular (TUNEL, FluoroJade e LDH). Finalmente, o bloqueio das JCs diminuiu a morte celular secundária, mas a abertura gerou um efeito inicial pró-apoptótico que depois de 4h foi diluído no tecido. / Life is a dynamic process in time and space, resulting from an interaction provided by gap junctions (GJs), channels composed of connexins (Cxs) that permits the passage of molecules up to 1kDa and ions. The aim of this study was analyze the modulation of Cxs during development, dark adaptation and after local mechanical trauma in the retina using techniques like real time PCR, western blot and imunohistochemistry. In development, Cx43 was highly expressed in the beginning (255%, P<0.01), Cx45 was highly expressed during all development, Cx50 and Cx36 were virtually absent in the beginning (4-9%, P<0.01), but highly expressed in the end of development. In Dark-adaptation, Cx36 was up-regulated after 24h (115%, P < 0.05) suggesting a plasticity of the neuronal coupling in response to light conditions. In neurodegeneration, Cx36 expression didnt ranged in different days after lesion, but the Cx43 increased after 7 days. The coupling was studied by using GJ blockers and openers combined with methods to evaluating cellular viability (TUNEL, FluoroJade and LDH). Finally, blocking the cellular coupling reflects in a decrease of secondary death. GJ openers seems act allowing the spread of death in the beginning, but this effect be diluted after 4h in the tissue.

Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-09-20T15:33:03Z No. of bitstreams: 1 Anael Viana Pinto Alberto.pdf: 4150812 bytes, checksum: 9ce0a5d780533302dcc603ae65f510fe (MD5) / Made available in DSpace on 2013-09-20T15:33:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Anael Viana Pinto Alberto.pdf: 4150812 bytes, checksum: 9ce0a5d780533302dcc603ae65f510fe (MD5) Previous issue date: 2012-10-31 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / ATP e outros nucleotídeos são liberados para o meio extracelular por vias reguladas ou pela perda da integridade de membrana. Uma vez fora da célula, esses compostos podem ativar receptores P2: P2X (receptores ionotrópicos) e P2Y (receptores acoplados a proteínas G). Além disso, O receptor P2X7 é um importante membro da família P2X, já que sua ativação pode levar a abertura de um poro membranar que permite a passagem de moléculas de até 900 Da. Os eosinófilos são as principais células efetoras em respostas alérgicas e estão associados com diversos processos fisiológicos e patológicos. Nesse trabalho investigamos a expressão de receptores P2 e suas funções em eosinófilos. Nesse contexto, nosso primeiro passo foi investigar a expressão e funcionalidade dos receptores P2X por patch clamping. Nossos resultados sugerem a presença de P2X1, de P2X2 e de P2X7. Em seguida, avaliamos por microfluorimetria a funcionalidade dos receptores P2Y, e verificamos com base na ordem de potência a possível presença de P2Y2, de P2Y4, de P2Y6 e de P2Y11. Além disso, confirmamos nossos dados por imunofluorescência. Realizamos também ensaios de migração in vitro e in vivo, para verificar se os nucleotídeos extracelulares poderiam atrair eosinófilos. O ATP foi capaz de induzir a migração dos eosinófilos, enquanto a suramina, um bloqueador P2, aboliu esse efeito, tanto in vitro, utilizando transwell, como in vivo, utilizando um modelo de pleurisia alérgica em ratos. Em seguida, avaliamos o possível papel da panexina-1 como poro associado ao receptor P2X7. Nesse trabalho utilizamos inibidores de hemicanais em experimentos de patch clamp e em ensaios de permeabilização de corante. Os resultados indicam que os inibidores de hemicanais não bloquearam a geração de corrente ou a captação de corante após a ativação do receptor P2X7 em macrófagos de ratos e camundongos. Demonstramos que eosinófilos de rato expressam receptores P2X e P2Y por imunofluorescência. Além disso, demonstramos que a ativação de receptores P2 pode aumentar a migração de eosinófilos in vitro e in vivo. Além disso, foi demonstrado que inibidores de panexina-1 não bloqueiam a captação do corante ou a corrente gerada pela ativação do receptor P2X7. Os nossos resultados demostraram que panexina-1 não é o poro associado ao receptor P2X7 em macrófagos / ATP and other nucleotides are released from cells through regulated pathways or following the loss of plasma membrane integrity. Once outside the cell, these compounds can activate P2 receptors: P2X ionotropic receptors and G protein-coupled P2Y receptors. . Additionally, P2X7 receptor is an important member of the P2X family of ionotropic receptor as its activation opens a non-selective pore allowing the passage of molecules up to 900 Da. Eosinophils represent major effector cells in the allergic inflammatory response and they are, in fact, associated with several physiological and pathological processes. Here we investigate the expression of P2 receptors and roles of those receptors in murine eosinophils. In this context, our first step were to investigate the expression and functionality of the P2X receptors by patch clamping, our results suggest the presence of P2X1, P2X2 and P2X7. Next we evaluate by microfluorimetry the expression of P2Y receptors, our results based in the ranking order of potency suggests the presence of P2Y2, P2Y4, P2Y6 e P2Y11. Moreover, we confirmed our findings by immunofluorescence assays. We also did in vitro and in vivo migration assays to verify whether nucleotides could attract eosinophil. ATP increased migration of eosinophils, while suramin a P2 blocker abolished this effect in both in vitro, using trasnwell, and in vivo, using a model of rat allergic pleurisy. Next, we evaluated the putative role of pannexin-1 as the pore associated to the P2X7 receptor. We used hemichannels inhibitors in patch clamp and dye uptake experiments. The results indicate that they do not interfere with current generation or dye uptake after activation of P2X7R in rat and mouse macrophages. We have demonstrated that rat eosinophils express P2X and P2Y receptors by immunofluorescence. In addition, the activation of P2 receptors can increase migration of eosinophils in vitro and in vivo. Moreover, we demonstrated that specific inhibitors of pannexin-1 did not interfere with the dye uptake or current generated by the P2X7 activation. Our results showed that pannexin-1 is not the pore associated to the P2X7 receptor in macrophages.

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-07-19T17:30:16Z No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) / Made available in DSpace on 2012-07-19T17:30:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fred da Silva Juliao Uso de método de biologia molecular....pdf: 3387831 bytes, checksum: 0efc6396d21a6e8a634b8026665afe7c (MD5) Previous issue date: 2010 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / A surdez genética é heterogênea em sua base molecular, fenótipo e padrão de herança. Apesar desta heterogeneidade, mutações no gene GJB2 são as principais causas de surdez genética, especialmente entre aquelas com padrão autossômico recessivo (MIM #220290). Neste trabalho investigou-se a origem genética da deficiência auditiva (DA) em pacientes do município de Monte Santo-BA. Oitenta e quatro indivíduos com DA, correspondendo a 38 famílias foram avaliados, responderam questionário clínico-epimediológico e forneceram dados individuoais e familiares para análise genealógica. Foram pesquisadas mutações no gene GJB2, as deleções (GJB6-13S1830) e (GJB6-D13S1854), no gene GJB6 e a mutação A1555G, no gene mitocondrial 12S rRNA. A investigação foi iniciada pela mutação c.35delG no gene GJB2, através de PCR-RFLP com a enzima BstNI, as amostras que não apresentaram essa variante foram genotipadas por sequenciamento do éxon 2 do gene GBJ2. Cerca de 55% dos indivíduos foram do sexo masculino, a idade média foi de 32 anos (variando de 2–70 anos), 33,9% dos indivíduos referiram-se como brancos, houve relato de consanguinidade entre os pais em 52,1% dos casos, DA familial foi relatada em 92,8% dos casos, sendo considerada pré-lingual em 90,9% e bilateral em 98,7%. Oito diferentes mutações foram encontradas no gene GJB2. Cerca de 24% dos indivíduos, correspondendo a 8 famílias, foram homozigotos e 1 (1,2%) foi heterozigoto para mutação c.35delG. Em uma família com 9 afetados foi encontrada a mutação p.R75Q no gene GJB2, que causa DA herdada com padrão dominante, em heterozigose, correspondendo a 14,8% dos pacientes analisados. Encontraram-se ainda 4 mutações relatadas como polimorfismo sem efeito patogênico: p.V27I, p.M34T, c.-15C>T e c.*2C>T, a primeira foi encontrada em 5,8% e as três últimas em 1,2% dos indivíduos e as mutações c.-22-12C>T (5,8%) e p.K168R (1,2%) sem patogenicidade estabelecida. As mutações del (GJB6-D13S1830) e del (GJB6-D13S1854) no gene GJB6, A1555G no gene 12S rRNA não foram detectadas nos pacientes estudados nesta amostra. Foi confirmada etiologia genética em 35,8% dos pacientes e foi observada heterogeneidade alélica e do padrão de herança. Provavelmente mutações em outros genes e/ou fatores ambientais são responsáveis pelos outros casos de DA nessa população. / Genetic deafness is heterogeneous in its molecular basis, phenotype and inheritance pattern. Despite this heterogeneity, mutations in GJB2 are the leading causes of genetic deafness, especially among those with autosomal recessive (MIM # 220290). In this study we investigated the origin of genetic hearing loss (HL) patients from Monte Santo, Bahia. Eighty-four patients with HL, representing 38 families were evaluated, patients answered a questionnaire and clinical-epimediológico individuoais provided data for analysis and family pedigree. We investigated mutations in the GJB2 gene deletions (GJB6-13S1830) and (GJB6-D13S1854) in GJB6 gene and the A1555G mutation in mitochondrial 12S rRNA gene. The investigation was initiated by a mutation in the gene GJB2 c.35delG by PCR-RFLP with the enzyme BstNI, samples that showed no such variant was genotyped by sequencing of exon 2 of gene GBJ2. About 55% of subjects were male, mean age was 32 years (range 20-70 years), 33.9% of subjects reported themselves as white, there were reports of consanguinity between parents in 52.1 % of cases, HL familial was reported in 92.8% of cases being considered pre-lingual in 90.9% and bilateral in 98.7%. Eight different mutations were found in the GJB2 gene. About 24% of individuals, representing eight families, were homozygous and 1 (1.2%) was heterozygous for mutation c.35delG. In a family with nine affected the mutation p.R75Q in heterozygous was found in GJB2 gene, which causes HL inherited with a dominant, corresponding to 14.8% of patients analyzed. There were also four mutations reported as a polymorphism without pathogenic effect: p.V27I, p.M34T, c.-15C> T and c. * 2C> T, the first was found in 5.8% and the last three in a 2% of individuals and mutations c.-22-12C> T (5.8%) and p.K168R (1.2%) without established pathogenicity. Mutations del (GJB6-D13S1830) and del (GJB6-D13S1854) in GJB6 gene, A1555G in the 12S rRNA gene were not detected in the patients studied in this sample. Genetic etiology was confirmed in 35.8% of patients and was observed allelic and the pattern of inheritance heterogeneity. Probably mutations in other genes and / or environmental factors are responsible for other cases of AD in this population.

A vida é um processo dinâmico no tempo e no espaço, resultante da interação celular provida pelas junções comunicantes (JCs), canais formados por conexinas (Cxs) que permitem a passagem de moléculas de até 1kDa, e íons. O foco deste trabalho foi caracterizar a modulação de Cxs no desenvolvimento, adaptação visual e após trauma mecânico localizado na retina, através de técnicas como PCR em tempo real, western blot e imuno-histoquímica. No desenvolvimento, a Cx43 apresentou alta expressão no início (255%, P<0.01), a Cx45 teve alta expressão em todos os estágios, as Cx50 e Cx36 são pouco expressas no início (4-9%, P<0.01), mas muito expressas no final e no adulto. Na adaptação ao escuro houve regulação de 115% do RNam da Cx36 após 24h, evidenciando uma plasticidade do acoplamento frente às condições de iluminação. Na neurodegeneração, a expressão da Cx36 não variou nos diferentes tempos pós-lesão, mas a Cx43 aumentou após 7 dias. O papel do acoplamento na degeneração foi estudado utilizando bloqueadores e abridores de JCs combinados com métodos para avaliar a viabilidade celular (TUNEL, FluoroJade e LDH). Finalmente, o bloqueio das JCs diminuiu a morte celular secundária, mas a abertura gerou um efeito inicial pró-apoptótico que depois de 4h foi diluído no tecido. / Life is a dynamic process in time and space, resulting from an interaction provided by gap junctions (GJs), channels composed of connexins (Cxs) that permits the passage of molecules up to 1kDa and ions. The aim of this study was analyze the modulation of Cxs during development, dark adaptation and after local mechanical trauma in the retina using techniques like real time PCR, western blot and imunohistochemistry. In development, Cx43 was highly expressed in the beginning (255%, P<0.01), Cx45 was highly expressed during all development, Cx50 and Cx36 were virtually absent in the beginning (4-9%, P<0.01), but highly expressed in the end of development. In Dark-adaptation, Cx36 was up-regulated after 24h (115%, P < 0.05) suggesting a plasticity of the neuronal coupling in response to light conditions. In neurodegeneration, Cx36 expression didnt ranged in different days after lesion, but the Cx43 increased after 7 days. The coupling was studied by using GJ blockers and openers combined with methods to evaluating cellular viability (TUNEL, FluoroJade and LDH). Finally, blocking the cellular coupling reflects in a decrease of secondary death. GJ openers seems act allowing the spread of death in the beginning, but this effect be diluted after 4h in the tissue.

A doença de Parkinson (DP) caracteriza-se pela perda progressiva de neurônios dopaminérgicos da substância nigra, o que acarreta diversas disfunções motoras. Não há ainda tratamentos capazes de deter ou retardar a degeneração dos neurônios dopaminérgicos, e os medicamentos hoje empregados na clínica apenas amenizam os sintomas, sem alterar a progressão da DP. No presente estudo foi avaliada a atividade neuroprotetora do éster fenetil do ácido cafeico (CAPE), um componente abundante do própolis de abelhas, com atividade anti-inflamatória, antiviral, antioxidante e imunomodulatória. Estudos têm sugerido seus efeitos benéficos contra as doenças neurodegenerativas, incluindo a doença de Parkinson, e alguns mecanismos têm sido propostos; porém muitos dos estudos com CAPE foram feitos apenas em culturas celulares. Este é o primeiro estudo a demonstrar que a administração intraperitoneal do CAPE protege contra a perda neuronal dopaminérgica e a disfunção motora induzidas pela neurotoxina 6-OHDA em ratos, confirmando a capacidade do CAPE de atravessar a barreira hematoencefálica e exercer seus efeitos benéficos no sitema nervoso central (SNC). Adicionalmente foram empregados dois modelos in vitro para o delineamento de possíveis mecanismos de neuroproteção: (i) mitocôndrias isoladas de cérebro de ratos não tratados e (ii) células SH-SY5Y tratadas com 6-OHDA. Os achados in vivo e in vitro sugerem o envolvimento dos seguintes mecanismos: (i) atividade antioxidante (sequestro de ERO, neutralização de radicais livres e quelação de metais); (ii) atividade anti-inflamatória (inibição da ativação do NF-kB, TNF-?, IkK? e Ikk?); (iii) aumento da expressão da conexina 43; (iv) inibição da Transição de Permeabilidade Mitocondrial (TPM); (v) inibição da liberação de citocromo c e (vi) inibição da ativação da caspase-3, executora final da apoptose. Além disso, o estudo também demonstrou que, por si só, o CAPE não interfere nas funções mitocondriais, o que representa uma vantagem com relação a outros inibidores da TPM. Assim, de acordo com nossos achados, o CAPE é um agente neuroprotetor promissor e pode auxiliar em futuras estratégias terapêuticas para as doenças neurodegenerativas, bem como para o melhor entendimento dos mecanismos responsáveis pelo desenvolvimento dessas doenças. / Parkinson\'s disease (PD) is characterized by progressive loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra, which causes various motor dysfunctions. There are no treatments able to delay or stop the degeneration of dopaminergic neurons and the therapy employed nowadays only alleviate the symptoms without altering the progression of PD. In the present study we evaluated the neuroprotective activity of caffeic acid phenethyl ester (CAPE), a compound abundant in honeybees\' propolis, with anti-inflammatory, antiviral, antioxidant and immunomodulatory activities. Its beneficial effects against neurodegenerative diseases, including Parkinson\'s disease, have been suggested and some mechanisms have been proposed; however, many of the studies with CAPE have been performed only in cell cultures. This is the first study to demonstrate that the intraperitoneal administration of CAPE protects against the dopaminergic neuronal loss and the motor dysfunction induced by the neurotoxin 6-OHDA in rats, confirming the ability of CAPE to cross the blood brain barrier and exert its beneficial effects on the central nervous system (CNS). Additionally two in vitro models were used to delineate the possible mechanisms of neuroprotection: (i) mitochondria isolated from the brain of non-treated rats and (ii) cells SH-SY5Y treated with 6-OHDA. The in vivo and in vitro findings suggest the involvement of the following mechanisms: (i) antioxidant activity (scavenger of ROS, free radicals neutralization and metal chelation); (ii) anti-inflammatory activity (inhibition of activation of NF-kB, TNF-?, IkK? and Ikk?); (iii) increased expression of connexin-43; (iv) Inhibition of Mitochondrial Permeability Transition (MPT); (v) inhibition of cytochrome c release (vi) inhibition of the activation of caspase-3, the final executioner of apoptosis. Furthermore, the study also showed that CAPE alone does not interfere with mitochondrial functions, which represents an advantage in relation to other inhibitors of MPT. Therefore, according to our findings, CAPE is a promising neuroprotective agent and may be useful for future therapeutic strategies for neurodegenerative diseases, as well as to better understand the mechanisms responsible for the development of these diseases.

Este estudo teve como objetivo avaliar a expressão hipocampal de proteínas e de RNAm das Cx43 e Cx36 no modelo de epilepsia do lobo temporal (ELT) induzido por pilocarpina. Além disso, os efeitos do bloqueador de canais de junções comunicantes (CJC), carbenoxolona (CBX), foram avaliados por eletrofisiologia durante o período de status epilepticus. Os dados referentes à Cx43 demonstraram redução dos níveis proteicos no período latente (p<0,05) e aumento no período crônico do modelo (p<0,01). Os níveis de RNAm de Cx43 não sofreram alterações. Tanto os níveis proteicos quanto os de RNAm de Cx36 não se alteraram. Os dados eletrofisiológicos mostraram redução da potência na banda de frequência entre 15 e 30 Hz no eletrocortigrama, além de redução da amplitude relativa dos potenciais epileptiformes. Foi observado ainda que o grupo tratado com CBX passou a apresentar períodos flat antecipadamente. Os dados deste estudo sugerem um importante papel dos CJC na ELT induzida por pilocarpina, contribuindo para o conhecimento da regulação destes canais na epilepsia. / In this study, the hippocampal protein and mRNA levels of Cx43 and Cx36 were investigated in the pilocarpine model of temporal lobe epilepsy (TLE). In addition, the effects of a gap junction (GJ) blocker (carbenoxolone-CBX) on pilocarpine-induced status epilepticus (SE) were also evaluated by electrophysiological recordings. Our results on Cx43 showed reduction of protein levels in the latent period (p<0.05) and increase in the chronic period of the model (p<0.01), whereas no changes were observed in the mRNA levels. Both protein and mRNA levels of Cx36 showed no changes. The electrophysiological recordings indicated that CBX promoted a marked reduction of power in the 15-30 Hz electrocorticographic frequency. Decrease in the amplitude of the epileptiform potentials was also seen, in addition to anticipation of occurrence of flat periods in the group treated with CBX. Data obtained from this study suggest an important role for GJ channels in the pilocarpine-induced TLE, contributing to a greater understanding of the regulation of these channels in the epilepsy.