Os resultados sobre o tempo adequado da exclusão vascular total do fígado(EVTF) para a realização de hepatectomias continuam sendo discutidos. Dados favoráveis têm sido descritos, quando se associa a EVTF com a perfusão de solução hipotérmica, porém a comparação entre estas técnicas ainda não foi descrita. Este estudo tem como objetivo comparar os resultados da ressecção hepática com EVTF, realizada sob hipotermia(solução de preservação hipotérmica in situ), com aqueles obtidos quando se realiza esta ressecção com EVTF com tempo de isquemia menor que 60 minutos, e naqueles com tempo de isquemia maior ou igual a 60 minutos. Para tanto, foram analisados, como parâmetros, a função renal e hepática, morbidade, e mortalidade pós-operatórias nos três grupos mencionados,buscando-se determinar valores preditivos para indicação das técnicas. PACIENTES E MÉTODO. Foram estudados 81 pacientes submetidos à ressecção hepática. Estes pacientes foram divididos em três grupos. Trinta e quatro pacientes com EVTF menor do que 60 minutos (EVTF < 60’), 19 pacientes com EVTF maior ou igual a 60 minutos (EVTF &#8805; 60’), e 28 pacientes nos quais a perfusão hipotérmica in situ (EVTFHIPOT) foi realizada. Os valores das transaminases hepáticas (ASAT e ALAT), Bilirrubinas totais, creatinina, e tempo de protrombina foram registrados. Também foram verificados os índices de morbidade e de mortalidade pós-operatórias nos três grupos. RESULTADOS. O valor máximo no pós-operatório das enzimas hepáticas - ASAT e ALAT foram significativamente menores (p < 0.05) no grupo EVTFHIPOT (535 + 361 U/L e 436 + 427 U/L), quando comparados aos outros grupos - EVTF<60’(988 + 798 U/L; 844 + 733 U/L), EVTF>60’ (1583 + 984 U/L; 1082 + 842 U/L). No grupo EVTFHIPOT, os valores máximos das bilirrubinas (6,5 + 2,5 mg/dl),creatinina (1,2 + 0,7 mg/dl), e o número de complicações por paciente (1,2 + 1) foram semelhantes aos do grupo EVTF<60’’ (5,5 + 7,8; 1,3 + 1; e 0,7 + 1 respectivamente), e significativamente menores que os do grupo EVTF > 60’(12,8 + 11,8; 2,3 + 2,3, e 2,3 + 1,2). A mortalidade hospitalar foi de 1/34, 2/19 e 2/28 nos grupos EVTF < 60’, EVTF > 60’, e EVTFHIPOT, respectivamente,sem diferença estatística. CONCLUSÕES. Quando comparadas as técnicas clássicas de exclusão vascular do fígado,de qualquer duração, com aquela na qual se realizou a perfusão hipotérmica do fígado, conclui-se que, nesta última, os pacientes toleraram melhor a isquemia. Deve-se enfatizar que, na EVTF com hipotermia, existe melhor preservação da função hepática, melhor preservação da função renal, e menores índices de morbidade, quando comparada com a EVTF>60’’ sem hipotermia. Os fatores preditivos de EVTF por mais de 60 minutos auxiliam na adoção da opção pelo resfriamento hepático. / OBJECTIVE. To compare the results of liver resection performed under in situ hypothermic perfusion vs standard total vascular exclusion (TVE) of the liver < 60 minutes and &#8805; 60 minutes in terms of liver tolerance, liver and renal functions, postoperative morbidity and mortality. SUMMARY BACGROUND DATA. The safe duration of TVE is still debated. Promising results have been reported following TVE associated with hypothermic perfusion of the liver with durations of up to several hours. The two techniques have not been compared so far. PATIENTS AND METHODS.The study population includes 81 consecutive liver resections under TVE < 60 minutes (group TVE < 60’ , 34 patients), &#8805; 60 minutes (group TVE &#8805; 60’, 19 patients) and in situ hypothermic perfusion (group TVEHYPOTH , 28 patients). Liver tolerance (peaks of transaminases), liver and kidney function (peak of bilirubin, minimum prothrombin time and peak of creatinine), morbidity and inhospital mortality were compared within the 3 groups. RESULTS. The postoperative peaks of ASAT and ALAT were significantly lower (p < 0.05) in group TVE HYPOTH (535 + 361 U/L and 436 + 427 U/L) compared to the groups TVE<60’ (988 + 798 U/L; 844 + 733 U/L) and TVE&#8805;60’ (1583 + 984 U/L; 1082 + 842 U/L). In the group TVE HYPOTH , the peaks of bilirubin (6,5 + 2,5 mg/dl), creatinine (1,2 + 0,7 mg/dl), and the number of complications per patient (1,2 + 1) were comparable to those of the group TVE<60’ (5,5 + 7,8; 1,3 + 1; e 0,7 + 1 respectively) and significantly lower to those of the group TVE&#8805;60’ (12,8 + 11,8; 2,3 + 2,3, e 2,3 + 1,2). In hospital mortality rates were 1/34, 2/19 and 2/28 for the groups TVE < 60’ , TVE &#8805; 60’ , and TVEHYPOTH respectively and were comparable. On multivariate analysis, the size of the tumor, portal vein embolization and a planned vascular reconstruction werem significantly predictive of TVE &#8805; 60 minutes. CONCLUSIONS. Compared to standard TVE of any duration, hypothermic perfusion of the liver is associated with a better tolerance to ischemia. In addition, compared to TVE &#8805; 60 minutes, it is associated with better postoperative liver and renal functions, and a lower morbidity. Predictive factors for TVE &#8805; 60 minutes may help to indicate hypothermic perfusion of the liver.

A criopreservação de sêmen humano tem sido amplamente utilizada como método de preservação da fertilidade. A fim de reduzir os danos causados pelo processo de congelamento, diversos estudos utilizaram substâncias antioxidantes e estimulantes, porém, sua eficácia, bem como seu papel no controle funcional dos espermatozoides, não está bem estabelecida na literatura. Assim, o objetivo do estudo foi avaliar o efeito da suplementação de melatonina e cafeína nas características estruturais e funcionais de espermatozoides pré-criopreservação e pós-descongelamento. Para isso, este estudo prospectivo utilizou 30 amostras seminais de pacientes entre 19 e 45 anos de idade da rotina do Laboratório Androscience entre maio de 2013 e maio de 2017. Todas as amostras foram classificadas como normozoospérmicas, segundo análise seminal inicial de acordo com os critérios da Organização Mundial da Saúde (OMS). Em seguida, as amostras foram criopreservadas com Human Tubal Fluid modificado sem suplemento ou com 2mM de melatonina. Após o descongelamento, as amostras foram analisadas ou suplementadas com 2 mM de cafeína, incubadas por 15 minutos. Ao final dos experimentos, obtivemos 4 grupos: Amostras pós-descongelamento sem suplementação (CONT), amostras suplementadas com cafeína (CAF), melatonina (MEL) e cafeína + melatonina (CM). Parâmetros seminais de contagem, motilidade e cinética, analisados pelos critérios da OMS e pelo software SCA®, a atividade mitocondrial, pela coloração por diaminobenzidina, avaliação da taxa de fragmentação de DNA, pelo método SCSA® e a dosagem dos níveis de radicais livres de oxigênio (ROS), pelo método de luminescência, foram realizados pré-criopreservação e pós-descongelamento com ou sem suplementação. Os dados foram analisados pelo teste T de Student pareado e pela análise de variâncias de uma via com medidas repetidas, seguida pelo pós-teste de Holm-Sidak, e adotado um alfa de 5%. Observamos redução significativa concentração espermática (p < 0,001), motilidade total (p < 0,001) e progressiva (p < 0,001), parâmetros cinéticos (p < 0,009) e atividade mitocondrial (p < 0,001) e aumento das taxas de fragmentação de DNA (p=0,046) e ROS (p=0,052) nas amostras CONT quando comparadas com as amostras a fresco. Quando suplementadas com cafeína e melatonina, observamos aumento da motilidade progressiva nos grupos CAF (p=0,005) e CM (p=0,048) e aumento da atividade mitocondrial no grupo CM (p < 0,05). Podemos concluir que a associação da suplementação com cafeína e melatonina nas amostras pré-criopreservação e pós-descongelamento demonstrou ser uma ferramenta importante para ser aplicada em amostras criopreservadas para atuarem como substâncias estimuladoras de motilidade espermática / Human semen cryopreservation has been widely used as a method of preserving fertility. In order to reduce the damages caused by the freezing process, several studies used antioxidant and stimulant substances, however, their efficiency as well as their role in the functional control of spermatozoa have not been well established in literature. Thus, the goal of this study was to investigate the effect of melatonin and caffeine supplementation on the structural and functional characteristics of pre-cryopreservation and post-thaw spermatozoa. For this, this prospective study used 30 seminal samples from patients aged from 19 to 45 years in the routine of the Androscience Laboratory between May 2013 and May 2017. All samples were classified as normozoospermic, according to the initial seminal analysis following criteria of the World Health Organization (WHO). Then, the samples were cryopreserved with modified Human Tubal Fluid without supplement or with 2 mM of melatonin. After thawing, the samples were analyzed or supplemented with 2 mM of caffeine, and incubated for 15 minutes. At the end of the experiments, we obtained 4 groups: Post-thaw samples without supplementation (CONT), samples supplemented with caffeine (CAF), melatonin (MEL) and caffeine + melatonin (CM). Seminal parameters for count, motility and kinetics, analyzed by WHO criteria and by the SCA® software, mitochondrial activity, by diaminobenzidine staining, evaluation of DNA fragmentation rate, by the SCSA® method, and dosage of radical oxygen species (ROS) levels, by the luminescence method, pre-cryopreservation and post-thaw were carried out with or without supplementation. The data were analyzed by the paired Student\'s t-test and by one-way analysis of variance with repeated measurements, followed by the Holm-Sidak post-test, adopting an alpha of 5%. We observed a significant reduction in sperm concentration (p < 0.001), total (p < 0.001) and progressive (p < 0.001) motility, kinetic parameters (p < 0.009) and mitochondrial activity (p < 0.001), and increased rates of DNA fragmentation (p=0.046) and ROS (p=0.052) production in the CONT samples when compared with fresh sample. When supplemented with caffeine and melatonin, we observed an increase in progressive motility in the CAF (p=0.005) and CM (p=0.048) groups, and an increase in mitochondrial activity in CM group (p < 0.05). We can conclude that that the combination of caffeine and melatonin supplementation in pre-cryopreservation and post-thaw samples proved to be an important tool to be applied in cryopreserved samples to act as substances that stimulate sperm motility

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:27:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 AnaLPS_DISSERT.pdf: 2906365 bytes, checksum: 9332744a34f68778b08f8668337ce882 (MD5) Previous issue date: 2015-02-10 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The present thesis had as objective optimized peccaries semen cryopreservation protocols (Pecari tajacu). Therefore, adult animals were used originated from the Multiplication Center of Wild Animals (CEMAS) of the Federal Rural University of the Semi-Arid (UFERSA), which semen was collected by electroejaculation and immediately evaluated. The first experiment aimed at evaluating the effect of low-density lipoprotein (LDL) purified in relation to egg yolk (G) and defines the ideal concentration (20%, 10% and 5%) for semen cryopreservation in peccaries. After the data analysis it was found that LDL (20%) can be used to replace egg yolk having been verified 36.4 ± 5.3 and 21.8 ± 6.9% of the total sperm motility after thawing, respectively. The second experiment evaluated the action of Aloe vera gel (AV) both refrigeration and in the peccaries of semen freezing in different concentrations (20%, 10%, 5%) or associated with egg yolk (10%:10%). It was found that Aloe vera gel (20%) proved to be efficient cooling at 5 ° C, maintaining the longevity of sperm for up to 48 hours of total motility assessment having a 54.2 ± 21.3%; as the cryopreservation process, it was found that the use of Aloe vera 20% can replace egg yolk, but its association with gem promoted better preservation of viability (32.7 ± 2.3%), osmotic response (37.8 ± 4.2%) and membrane integrity (40.2 ± 3.1). In the third experiment evaluated the addition of the action (0.5% and 1.0%) of base detergent sodium dodecyl sulfate (SDS), Equex ® STM, the peccaries of semen. However, it was observed that, at any concentration proposal was effective in increasing the longevity of sperm cell peccaries over 15 minutes as previously described for the species. The experiments have been sufficient to answer the hypotheses and are useful for the improvement of semen cryopreservation protocols of collared peccary (Pecari tajacu) / A presente tese teve como objetivo aperfeiçoar protocolos de criopreservação de sêmen de catetos (Pecari tajacu). Para tanto, foram utilizados animais adultos oriundos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS) da Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA), cujo sêmen foi coletado por eletroejaculação e imediatamente avaliado. O primeiro experimento objetivou avaliar o efeito da lipoproteína de baixa densidade (LDL) purificada, em relação à gema de ovo (G) e determinar a concentração ideal (20%, 10% e 5%) para criopreservação de sêmen em catetos. Após a análise dos dados verificou-se que a LDL (20%) pode ser utilizada em substituição à gema de ovo, tendo sido verificados 36.4±5.3% e 21.8±6.9 de motilidade espermática total após a descongelação, respectivamente. No segundo experimento, avaliou-se a ação do gel de Aloe vera (AV) tanto na refrigeração quanto na congelação do sêmen de catetos, em diferentes concentrações (20%, 10%, 5%) ou associado à gema de ovo (10%:10%). Verificou-se que o gel de Aloe vera (20%) se mostrou eficiente para a refrigeração a 5°C, mantendo a longevidade espermática por até 48 horas de avaliação apresentando uma motilidade total de 54.2±21.3%; quanto ao processo de criopreservação, verificou-se que o uso de Aloe vera a 20% pode substituir a gema de ovo, porém a associação desta com a gema promoveram a melhor preservação da viabilidade (32.7±2.3%), resposta osmótica (37.8±4.2%) e integridade de membrana (40.2±3.1). No terceiro experimento verificou-se a ação da adição (0,5% e 1,0%) do detergente a base de dodecil sulfato de sódio (SDS), Equex ® STM, no sêmen de catetos. Entretanto, observou-se que este, em nenhuma concentração proposta, foi eficiente em aumentar a longevidade da célula espérmática de catetos além dos 15 minutos, conforme previamente descrito para a espécie. Os experimentos realizados foram suficientes a responder as hipóteses propostas, sendo úteis para o aperfeiçoamento de protocolos de criopreservação de sêmen de catetos (Pecari tajacu). Palavra Chave: Cateto, Criopreservação de sêmen, Lipoproteína de baixa Densidade, Dodecil Sulfato de Sódio, Gel de Aloe vera

Made available in DSpace on 2016-08-15T20:31:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 ThiberioSC_DISSERT.pdf: 700205 bytes, checksum: 7a5563445307116480b9ce4be88608c4 (MD5) Previous issue date: 2010-03-05 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / We evaluated the effect of centrifugation and the use of Tris-based extender supplemented with different sugars as well as different rates of thawing on the kinematic pattern of motility and other characteristics of frozen-thawed semen from captive collared peccaries. Semen from 13 collared were collected by electroejaculation and evaluated subjectively for motility, vigor and by computer analysis (CASA). Other features such as sperm viability, membrane integrity and morphology of spermatozoa were also evaluated. Semen was divided into four portions: two were subjected to centrifugation and then diluted in a tris plus fructose and the other in tris supplemented with glucose, the other two forms were immediately diluted in the same way. Egg yolk (20%) and glycerol (6%) were added to all groups. The samples were frozen in liquid nitrogen and thawed using two thawing rates (37ºC/1min and 55°C/7s). The results showed a reduction in total motility immediately after the dilution using both extenders and interference in some kinematic parameters such as BCF, LIN and STR for the samples centrifuged, , in addition, an increase in the number of total and secondary morphological defects were observed in centrifuged samples, independent to the sugar used (P <0.05). No significant differences among the extenders supplemented with fructose or glucose were verified at any time (P> 0.05). Furthermore, no interaction between the supplementation of sugar and thawing rates were observed for any semen parameter evaluated (P> 0.05). In conclusion, it is not necessary to centrifuge the semen from collared prior to the procedure of freezing and thawing, which can be achieved through a Tris-based extender supplemented with either fructose or glucose, as well as using different thawing rates (37ºC/1min and 55°C/7s). / Avaliou-se o efeito da centrifugação e da utilização de diluentes a base Tris suplementados com diferentes açúcares além de diferentes taxas de descongelação sobre os padrões cinemáticos de motilidade e outras características do sêmen congeladodescongelado de catetos em cativeiro. O sêmen de 13 catetos foi coletado por eletroejaculação e avaliados subjetivamente e através de análise computadorizada (CASA) para motilidade, vigor. Outras características como viabilidade espermática, integridade da membrana e morfologia dos espermatozóides também foram avaliadas. O sêmen foi dividido em quatro alíquotas: duas foram submetidas à centrifugação e em seguida diluídas, uma em tris acrescido de frutose e a outra em tris acrescido de glicose, as outras duas forma imediatamente diluídas da mesma forma. Gema de ovo (20%) e glicerol (6%) foram adicionados para todos os grupos. As amostras foram congeladas em nitrogênio líquido e descongeladas usando duas taxas de descongelação (37ºC/1min e 55ºC/7s). Os resultados demonstraram uma redução na motilidade total imediatamente após a diluição em ambos diluentes para as amostras centrifugadas, bem como em alguns parâmetros cinemáticos como BCF, LIN e STR além do aumento no número de alterações morfológicas totais e secundarias independente do açúcar utilizado (P<0,05), tendo em vista não ter apresentado diferenças entre os diluentes suplementados com frutose ou glicose em nenhum momento (P> 0,05). Além disso, nenhuma interação entre a suplementação de açúcar e as taxas de descongelação foi observada para qualquer parâmetro seminal avaliado (P> 0,05). Em conclusão, não é necessário centrifugar o ejaculado de catetos antes dos procedimentos de congelação e descongelação, para os quais pode-se utilizar um diluente a base de Tris suplementado tanto com frutose ou glicose, bem como utilizando taxas de descongelação diferentes (37ºC/1min e 55ºC/7s).

O objetivo do experimento foi avaliar o efeito da suplementação de touros adultos com sabões cálcicos de ácidos graxos poli-insaturados (PUFA) sobre as características qualitativas do sêmen pré e pós-descogelação. Foram utilizados vinte touros com idades entre 4 e 10 anos, das raças Angus, Braford, Brangus e Hereford distribuídos aleatoriamente em dois grupos com dez touros cada um. Os tratamentos avaliados foram: sabões cálcicos ou suplementação energética. Os touros foram mantidos em piquetes individuais e alimentados durante 77 dias com dietas isoenergéticas elaboradas com: forragem verde, concentrado comercial, sal mineral e sabões cálcicos ou suplemento energético. Os touros recebendo o tratamento com sabões cálcicos (SF) receberam 200 g/dia de Megalac-E® e os do tratamento com suplemento energético (SE) receberam 750 g/dia de raspa de mandioca (Manihot esculenta, Crantz). A coleta do sêmen foi realizada a cada 15 dias utilizando vagina artificial e as amostras de sêmen avaliadas quanto ao volume, concentração, motilidade, morfologia, avaliação da integridade do acrossoma e diferenciação de espermatozóides vivos de mortos por meio de coloração tripa azul/giemsa, avaliação da integridade da membrana da cauda por meio de teste hipoosmóstico (HO) e longevidade dos espermatozóides por meio de teste de termorresistência (TTR). Também foram coletadas amostras de sangue para avaliação das concentrações de testosterona. O tipo de suplemento energético não afetou o volume e a concentração de espermatozóides, nem a concentração de testosterona no sangue. O sêmen de touros suplementados com sabões cálcicos de PUFA apresentou valores superiores quanto à motilidade espermática (83.3% vs. 75.3%), percentagem de espermatozóides vivos (94,8% vs. 91,8%) e número de espermatozóides com acrossoma íntegro (98,0% vs. 96,6%). Interações significativas foram encontradas entre tratamento e coleta para percentagens de espermatozóides normais (p = 0.0344) e percentagens de espermatozóides positivos ao HO (p = 0.0168). Não foi encontrada diferença significativa entre os grupos para percentagens de motilidade dos espermatozóides pós-congelação, nem motilidade após o teste de termorresistência (TTR) aos 30 minutos e aos 60 minutos. Os resultados do HO do grupo recebendo suplemento funcional não foi diferente do grupo com suplemento energético. Durante o período de suplementação o grupo com suplemento funcional teve percentagens maiores de espermatozóides vivos (51,5% vs. 42,2%) e com acrossoma íntegro (48,0% vs. 39,2%) quando comparado com o grupo que recebeu suplemento energético. A suplementação com sabões cálcicos de PUFA em touros pode influenciar positivamente nas características qualitativas do ejaculado conferindo maior resistência aos espermatozóides submetidos a processos de criopreservação. / The aim of this experiment was evaluate of the effect of the supplementation of adult bulls with calcium soaps of polyunsaturated fatty acids (PUFA) on the qualitative characteristics of the semen subjected to cryopreservation and thawing. Twenty adult bulls Angus, Hereford, Brangus and Braford were randomly assigned into two groups; they were subjected to two types of treatment: (SF) calcium soap; (SE) and energy source. The bulls were kept in individual pens and, during 77 days, they were fed on isoenergetic diets prepared with green grass, commercial concentrate, mineral salt, and calcium soaps of PUFA or energy supplement. The treatment supplemented with calcium soaps of PUFA received 200 g/d of Megalac-E®; and the treatment supplemented with other energy source received 750 g/d from cassava meal (Manihot esculenta, Crantz). During the period of the experiment, five collections of semen were performed with artificial vagina; the semen samples were evaluated considering the following variables: seminal volume, sperm concentration, sperm motility, morphology, evaluation of acrosome intact and differentiation of live and dead spermatozoa by staining tripan blue/giemsa, evaluation of the integrity membrane sperm through hypoosmotic swelling test (HO) and evaluation of longevity of sperm using the heat resistance tests (TTR). Two blood samplings were performed for assessing the concentration of blood testosterone. The results regarding the volume, sperm concentration and blood testosterone concentrations did not differ significantly between treatments during the experimental period. The group supplemented with calcium soaps of PUFA presented improvements in the percentages of sperm motility (83.3% vs. 75.3%). The percentages of live sperm (94,8% vs. 91,8%) and those with intact acrosome (98,0% vs. 96,6%) were higher compared with the group that received energy supplement. No significant differences were found between treatments in the percentages of the post-freezing motility and the motility of sperm subjected to TTR after 30 minutes and after 60 minutes showed no significant differences between treatments. The results of HO were not different between the groups with functional and energy supplement. During the supplementation period, the group with functional supplement presented higher percentages of live sperm (51,5% vs. 42,2%) and sperms with intact acrosome (48,0% vs. 39,2%) when compared with the group that received energy supplement. Supplementation with calcium soaps of PUFA can provide better features and higher resistance to sperm when submitted to the process of cryopreservation and thawing.

TEIXEIRA, Erivânia Gomes. Caracterização, resfriamento e criopreservação de sêmen de tilápia-do-nilo cultivada no estado do Ceará. 2013. 92 f. : Tese (doutorado) - Universidade Federal do Ceará, Centro de Ciências Agrárias, Departamento de Engenharia de Pesca, Fortaleza-CE, 20113 / Submitted by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-26T12:26:41Z No. of bitstreams: 1 2013_tese_egteixeira.pdf: 1255411 bytes, checksum: 260b5caf7b5bf38819e087108c82096e (MD5) / Approved for entry into archive by Nádja Goes (nmoraissoares@gmail.com) on 2016-07-26T12:26:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_tese_egteixeira.pdf: 1255411 bytes, checksum: 260b5caf7b5bf38819e087108c82096e (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-26T12:26:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_tese_egteixeira.pdf: 1255411 bytes, checksum: 260b5caf7b5bf38819e087108c82096e (MD5) Previous issue date: 2013 / The present study deals with anesthetic induction, characterization of sperm fluid, cooling and freezing of sperm of the Nile tilapia Oreochromis niloticus. In the first chapter the natural anesthetics menthol and eugenol were tested in adult specimens aiming to determine the ideal concentration for handling the Nile tilapia. In the second chapter the sperm fluid of the Nile tilapia was characterized according to the following parameters: collected volume, which showed the feasibility of collect in sufficient volume without the need of sacrificing the fish; sperm concentration, which showed significant variation between specimens; pH and osmolarity, which confirm the information of the literature; sperm motility time, which proved that the spermatozoa of tilapia are differentiated concerning accumulated energy when compared to other freshwater species; and sperm head morphometry, characterized by size (length, width, perimeter and area) and head shape (ellipticity, rugosity, elongation and regularity). In the third chapter we evaluated the feasibility of preservation of tilapia sperm using different extenders and cooled at 4°C. The sperm motility rate was evaluated with the aid of the Computer-assisted Sperm Analyzer (CASA) System. In this, the ACP-104, media based on powdered coconut water, showed best sperm motility rate for up to 72 hours after storage. In the fourth chapter was evaluated the effects of different cryoprotectants on the post-thaw Nile tilapia sperm, using the software Sperm Class Analyzer (SCA). The results of the sperm motility rate and sperm velocity parameters revealed that ACP-104 in combination with dimethylsulfoxide is a promising cryodiluent for Nile tilapia sperm in long-term conservation. / O estudo trata da indução anestésica, caracterização do líquido seminal, refrigeração e congelação do sêmen de tilápia-do-Nilo, Oreochromis niloticus. No primeiro capítulo foram testados os anestésicos naturais mentol e eugenol em espécimes adultos objetivando determinar a concentração ideal para manejo de tilápia-do-Nilo. No segundo capítulo, o líquido seminal da tilápia-do-Nilo foi caracterizado de acordo com os seguintes parâmetros: volume coletado, que revelou a viabilidade de coleta em volumes suficientes, sem a necessidade de sacrificar o peixe; concentração espermática, que mostrou relevante variação entre espécimes; pH e osmolaridade, que ratificam as informações presentes na literatura; tempo de motilidade, que comprovou ser o espermatozoide de tilápia diferenciado quanto à energia acumulada quando comparado a outras espécies de água doce; e morfometria da cabeça do espermatozoide por meio das seguintes medidas: comprimento, largura, perímetro e área. Também foram registrados quatro parâmetros derivados do formato da cabeça: elipticidade, rugosidade, elongação e regularidade. No terceiro capítulo foi avaliada a viabilidade do sêmen de tilápia-do-Nilo submetido a diferentes diluentes e refrigerado a 4°C. A avaliação foi realizada por meio da taxa de motilidade espermática determinada pelo sistema CASA (Computer Assisted Sperm Analysis). Neste, o ACP-104, diluente à base de água de coco em pó, ofereceu melhor taxa de motilidade dos espermatozoides por até 72 horas de estocagem. Esta resposta mostrou que o ACP-104 é um diluente promissor para o sêmen da referida espécie. No quarto capítulo foi avaliado o efeito de diferentes criodiluentes sobre do sêmen de tilápia-do-Nilo pós-descongelação, utilizando o software (Sperm Class Analyser, SCA). Os resultados de motilidade espermática e de parâmetros de velocidade do espermatozoide revelaram que o ACP-104 combinado ao dimetilsulfóxido apresenta-se como um criodiluente promissor para a criopreservação do sêmen de tilápia-do-Nilo em longo prazo.

O plasma rico em plaquetas (PRP) é utilizado na medicina equina para o tratamento de lesões ósseas, articulares, tendíneas e ligamentares. No entanto o PRP deve ser preparado no momento de cada aplicação, pois seu tempo máximo de utilização após o preparo é de apenas oito horas. O objetivo deste estudo foi avaliar o resfriamento e criopreservação como métodos de armazenamento do PRP equino utilizando dois crioprotetores: dimetil sulfóxido (DMSO) e trealose, na tentativa de manter a viabilidade plaquetária após o armazenamento a baixas temperaturas. Duas amostras de PRP foram preparadas a partir da centrifugação do sangue de seis pôneis saudáveis e foram destinadas à criopreservação a -196º C ou ao resfriamento a 4º C. Cada amostra de PRP preparada foi dividida em quatro alíquotas: fresca, com DMSO, com trealose ou sem crioprotetor. As amostras frescas foram avaliadas quanto à contagem plaquetária, determinação do volume plaquetário médio (VPM), concentração plaquetária em relação ao sangue total e quantificação do fator de crescimento de transformação beta 1 (TGF-β1). As amostras criopreservadas e resfriadas ficaram armazenadas por 14 dias e foram então submetidas às mesmas análises laboratoriais. O número de plaquetas e concentração plaquetária foram similares entre as amostras frescas e resfriadas com ou sem crioprotetor, mas foram superiores nas amostras frescas em relação às amostras criopreservadas. Observou-se aumento do VPM em todas as amostras armazenadas, indicando que as plaquetas sofreram lesões durante o armazenamento. A liberação de TGF-β1 foi superior no PRP fresco em relação ao PRP resfriado ou criopreservado, não havendo diferença entre as amostras que continham ou não crioprotetores. A adição dos crioprotetores DMSO e trealose não impediu as lesões plaquetárias de armazenamento. Por outro lado, tanto as amostras resfriadas quanto as criopreservadas liberaram quantidades significativas de TGF-β1. / Platelet rich plasma (PRP) is used in equine medicine for treatment of bone, joint, tendon and ligament injuries. However the PRP must be prepared at the time of each application, since its maximum time of use after the preparation is only eight hours. The objective of this study was to evaluate cooling and cryopreservation of equine PRP as storage methods using two cryoprotectants: dimethyl sulfoxide (DMSO) and trehalose, in an attempt to maintain platelet viability after storage at low temperatures. Two PRP samples were prepared from the blood centrifugation of six healthy ponies and were intended for cryopreservation at -196 ° C or cooling at 4 ° C. Each prepared PRP sample was divided into four aliquots: fresh, DMSO, trehalose or without cryoprotectant. The fresh samples were evaluated for platelet count, determination of mean platelet volume (MVP), platelet concentration in relation to whole blood and quantification of transforming growth factor beta 1 (TGF-β1). The cryopreserved and cooled samples were stored for 14 days and then submitted to the same laboratory tests. The number of platelets and platelet concentrations were similar between fresh and cooled samples with or without cryoprotectant, but were higher in fresh samples than in cryopreserved samples. An increase in MPV was observed in all stored samples, indicating that platelets suffered lesions during storage. The release of TGF-β1 was higher in fresh PRP than in cold or cryopreserved PRP, with no difference between samples containing or not cryoprotectants. The addition of DMSO and trehalose cryoprotectants did not prevent platelet storage lesions. On the other hand, both the cooled and cryopreserved samples released significant amounts of TGF-β1.

Embriões bovinos produzidos in vitro (PIV) apresentam diferenças quando comparados aos produzidos in vivo. Esta particularidade reduz as taxas de viabilidade in vitro e in vivo após a criopreservação, limitando o emprego comercial da preservação dos embriões PIV. Várias estratégias vêm sendo propostas para aumentar a viabilidade e desenvolvimento desses embriões criopreservados. Alguns estudos utilizam a exposição dos embriões a um estresse subletal, como a alta pressão hidrostática (HHP), previamente a procedimentos que reduzem a viabilidade embrionária, o que aumenta a tolerância desses indivíduos à criopreservação. Os objetivos deste experimento foram determinar as taxas de viabilidade de blastocistos bovinos PIV previamente expostos à alta pressão gasosa (HGP) de 27,5 MPa por 120 min e após submetidos à congelação ou vitrificação. A avaliação da viabilidade foi mediante determinação das taxas de re-expansão e eclosão após criopreservação.Oócitos morfologicamente viáveis obtidos a partir de ovários de frigorífico foram maturados in vitro durante 24 h a 38,5 °C, em atmosfera de 5% de CO2 com umidade relativa do ar saturada e fecundados (dia 0) com sêmen criopreservado capacitado in vitro Após 20 h, os presuntivos zigotos foram submetidos a cultivo in vitro em meio SOF condicionado a 38,5 °C, em atmosfera de 5% de CO2, 5% O2 e 90% N2, com umidade relativa do ar saturada. Os blastocistos (dia 7) foram divididos aleatoriamente em 4 grupos: expostos à HGP e congelados, PC; controle congelação, CC; expostos à HGP e vitrificados, PV; controle vitrificação, CV. Os embriões foram expostos ou não à HGP de 27,5 MPa por 120 min e em seguida colocados em cultivo por 120 min. Após esse período os blastocistos foram submetidos à congelação ou à vitrificação. A taxa de re-expansão dos blastocistos avaliada em 24 h do grupo CV (59,6%) foi maior que a dos embriões dos grupos CC (45,2%) e PC (46,3%) (P<0,05), mas não diferiu da taxa de re-expansão dos embriões do grupo PV (48,1%). As taxas de eclosão foram: PC, 21,5%; CC, 24,6%; PV, 35,3%; CV, 30,8%. Os blastocistos do grupo PV apresentaram maiores taxas de eclosão do que os embriões do grupo PC. Em conclusão, o tratamento com HGP não interferiu no desenvolvimento in vitro dos blastocistos que foram submetidos à congelação ou à vitrificação. Levando em consideração os blastocistos eclodidos sobre o total de re-expandidos, o tratamento com HGP incrementou a taxa de eclosão in vitro dos embriões que foram submetidos à vitrificação. / In vitro bovine embryos (IVP) present differences when compared to those produced in vivo. This particularity reduces in vitro and in vivo survival rates after cryopreservation, limiting the commercial use of IVP embryos preservation. Several strategies have been proposed to increase viability and development of these cryopreserved embryos. Some studies use embryo exposure to sublethal stress prior to in vitro procedures, such as high hydrostatic pressure (HHP), which increases tolerance of these individuals to a new stressor, such as cryopreservation. Objectives of this experiment were to determine viability rates of bovine blastocysts produced in vitro previously exposed to high gaseous pressure (HGP) of 27.5 MPa for 120 minutes and after subjected to freezing or vitrification. Morphologically viable oocytes obtained from bovine ovaries were matured in vitro for 24 hours at 38.5°C in 5% CO2 atmosphere with saturated air humidity and in vitro fertilized (day 0) with cryopreserved semen (inseminating dose 1x106 / ml) After 20 hours, presumptive zygotes were cultured in vitro at 38.5°C in an atmosphere of 5% CO2, 5% O2 e 90% N2 with saturated air humidity. Blastocysts obtained on day 7 were divided into 4 groups: exposed to HGP and frozen (FP); freezing control (FC); exposed to HGP and vitrified (VP); vitrification control (VC). These groups were exposed or not to 27.5 MPa HGP for 120 minutes then in vitro cultured for more 120 min. After this period, blastocysts were subjected to freezing or vitrification. Re-expansion rate was higher (P<0.05) for CV (59,6%) compared to CC (45,2%) and CV (46,3%), not differing from PV (48,1%). Blastocysts from group VP presented higher hatching rates than embryos from group FP (P<0.05) (35,3% vs. 21,5%, respectively). In conclusion, exposure of blastocysts to HGP before vitrification or conventional freezing did not interfered on in vitro embryo survival rates. However, considering hatched blastocysts over the total re-expanded, HGP increased hatching rates of vitrified embryos.

O Transplante de Células Tronco Hematopoiéticas (TCTH) baseia-se no princípio de infusão de Células Tronco Hematopoiéticas (CTH) CD34 + num receptor condicionado. Sabe-se que tais células são capazes de gerar uma nova hematopoiese bem como que o benefício do aumento de dose de CD34 + estende-se de aproximadamente 2 x 106 CD34/Kg a 5 x 106 CD34/Kg do receptor. A determinação do número de CD34 baseia-se no número total de CD34, porém sabe-se que apenas uma pequena porção celular do grupo de CD34 está associada à recuperação medular. Uma maneira de refinar a detecção desse grupo de células quando comparado com a quantificação do CD34 total, é a análise citométrica dos padrões de tamanho e granularidade citoplasmática. No contexto do TCTH autólogo e algumas vezes no TCTH alogênico, onde a infusão das células precursoras é feita com intervalo superior a três dias após a sua coleta, o congelamento das CTH CD34 +as faz-se necessário para que as células permaneçam viáveis. O agente crioprotetor mais comumente usado é o Dimetilsulfóxido (DMSO), que em temperaturas extremamente baixas protege as CTH da morte celular, porém em temperatura ambiente torna-se tóxico. As reações adversas do receptor no momento da infusão são atribuídas, em geral, ao DMSO. Portanto existem diferentes protocolos de congelamento de CTH que usam diferentes concentrações desse agente, com o intuito de reduzir as reações adversas e, ao mesmo tempo, evitar a morte celular decorrente de temperaturas baixas. Alguns estudos concluem que a viabilidade das CTH congeladas pode ser mantida com concentrações baixas de DMSO ou com celularidade elevada nos produtos congelados. Além do DMSO, a albumina e o Hidroxetilamido (HES) são usados como adjuvantes na proteção celular ao frio. Alguns protocolos de criopreservação usam apenas o DMSO enquanto outros indicam a necessidade do uso dos três agentes juntos. Não há consenso a respeito do protocolo de criopreservação ideal. Um expressivo número de trabalhos sugere o uso do DMSO 5 a 10% juntamente com a albumina 20% e HES 6% em enxertos com celularidade até 3 x 108 células nucleadas/ml, porém existem sugestões de protocolos diferentes desse padrão que usam o DMSO como agente único assim como concentrações menores de DMSO. Com relação ao efeito tóxico do DMSO, os eventos adversos do paciente no momento da infusão são atribuídos diretamente a ele. Porém evidências recentes apontam outras possíveis causas: citocinas liberadas durante o período de armazenamento e infundidas com o enxerto e micro-agregados leucocitários decorrentes da elevada celularidade do enxerto. O presente estudo pretendeu verificar a viabilidade das CTH através da medida da Anexina-V e 7-AAD pela técnica de citometria de fluxo usando-se diferentes concentrações de DMSO, bem como comparou tal desfecho entre amostras que foram congeladas apenas com DMSO e amostras congeladas com DMSO, HES e albumina. Além disso, foram verificados os níveis de citocinas inflamatórias nos enxertos e sua relação com a concentração de DMSO. / Bone Marrow Transplantation (BMT) is based on the principle of hematopoietic CD34 stem cells infusion in a conditioned recipient. It is known that such cells are capable of generating a new hematopoiesis, as well as known that the benefit of the increase of CD34 dose is goes best when it is between from 2 and to 5 x 106 CD34 by patient’s body weight. The CD34 determination is based on the total CD34 number. However it is known that only a small portion of the CD34 population is related to the marrow repopulating capacity. An alternative way of detecting such cells when compared to total CD34 dose is the cytometric analysis of citoplasmatic granularity and size patterns. In the autologous BMT context and, sometimes in the allogeneic type where the graft infusion occurs more than three days after the graft harvest, the CD34 cells freezing is necessary to keep their viability. The crioprotective agent most commonly used is the DMSO, which at extremely low temperatures this agent protects the CD34 cells from dying. However at temperatures above 30°C it became toxic and causing adverse events in the patient receiving them. The adverse reactions at the infusion moment in general are linked to DMSO, thus there are some different cryopreservative protocols using different DMSO concentrations aiming to reduce the incidence of collateral damage and at the same time avoid the CD34 from dying at low temperatures. Some studies conclude that CD34 viability can be maintained with the use of high mononuclear cellularity in the graft or with low DMSO concentrations. Besides DMSO, albumin and Hydroxietilstarch (HES) are cryoprotectants adjuvants. Some Cryopreservation protocols only use DMSO as cryoprotective agent, while others indicate the three agents together. There is no consensus about the ideal cryopreservation protocol. An important number of studies suggests the use of DMSO 5 to 10% with albumin 20% and HES 6% in grafts with cellularity number of no more than 3 x 108 cells/ml, however there are some new different protocols that use DMSO alone and at lower concentrations. As to adverse events during the infusion moment, it is known that DMSO causes the effects. However, there are evidences that other causes could cause these events: cytokines released during the storage freezing time and infused with the graft and leukocyte micro-clots caused by the high cellularity in the graft. The present study aimed to study the viability of CD34 cells using the Annexin-V and 7-AAD apoptosis reagents through the flow cytometry technique in different DMSO concentrations as well as compared such outcome among the samples only frozen with DMSO and samples frozen with DMSO, HES and albumin. Besides, it was verified the inflammatory cytokine levels and their relationship with the DMSO concentration.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-05-08Bitstream added on 2014-06-13T19:04:45Z : No. of bitstreams: 1 abreu_dca_dr_jabo.pdf: 448924 bytes, checksum: f7327627931aa31f7d9b00e679ba1064 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / É essencial conhecer o comportamento fisiológico das sementes, para que se possa definir a técnica apropriada para o armazenamento seguro. Contudo, um dos principais problemas é a falta de informações precisas sobre esse assunto, para muitas espécies florestais nativas do Brasil. O teor de água das sementes e a temperatura do ambiente de armazenamento são fatores decisivos para a conservação da qualidade fisiológica das sementes. Este trabalho teve como objetivo geral estudar a possibilidade de conservar as sementes de Cariniana legalis a longo prazo, com vistas ao armazenamento em bancos de germoplasma. Os objetivos específicos foram: (a) estudar a tolerância das sementes à desidratação e hidratação com o uso de soluções salinas saturadas; (b) classificar o comportamento fisiológico das sementes em relação ao armazenamento e (c) avaliar a qualidade fisiológica das sementes armazenadas com diferentes teores de água durante 360 dias em freezer (-20°C) e em nitrogênio líquido (-196°C). Concluiu-se que (a) a construção da isoterma de sorção com soluções salinas saturadas foi eficiente para determinar diferentes teores de água de equilíbrio; (b) as sementes toleram a desidratação e suportam temperaturas inferiores a zero, apresentando comportamento ortodoxo; (c) o teor de água mais adequado para o armazenamento das sementes no freezer e no nitrogênio líquido foi de 3,7%; (d) as sementes armazenadas com esse teor de água se conservaram melhor no nitrogênio líquido; (e) a criopreservação das sementes desidratadas evidenciou a possibilidade de armazenar a longo prazo as sementes de C. legalis em bancos de germoplasma. / The understanding of the physiological behavior of seeds is essential to define the appropriated safe storage technique. However, one of the main problems, for many Brazilian native forest species, is the lack of accurate information about this issue. The seeds moisture content and storage temperature are crucial factors for the preservation of the physiological quality of the seeds. The general objective of the present work was to study the possibility of a long term conservation of Cariniana legalis (Mart.) O. Kuntze seeds, in a germplasm bank. The specific objectives were: (a) study the seeds tolerance to dehydration and hydration using saturated saline solutions; (b) classify the physiological behavior of the seeds regarding the storage and (c) evaluate the physiological quality of the seeds with different moisture contents for 360 days in freezer (-20ºC) and liquid nitrogen (-196ºC). The results showed that (a) the construction of the isotherm sorption with saturated saline solutions was efficient to determine different levels of water balance; (b) seeds tolerate dehydration and negative temperature, presenting an orthodox behavior; (c) the most suitable moisture content for seed storage in freezer and liquid nitrogen was of 3,7% (d) the seeds stored with this moisture content were better preserved in liquid nitrogen; (e) the cryopreservation of C. legalis dried seeds showed the possibility of long-term storage in germplasm banks.